CN105273020A - 一种以黑果枸杞为原料制备矮牵牛素-3-o-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-o-葡萄糖苷的方法 - Google Patents
一种以黑果枸杞为原料制备矮牵牛素-3-o-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-o-葡萄糖苷的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105273020A CN105273020A CN201510657121.8A CN201510657121A CN105273020A CN 105273020 A CN105273020 A CN 105273020A CN 201510657121 A CN201510657121 A CN 201510657121A CN 105273020 A CN105273020 A CN 105273020A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- trans
- glucoside
- rutinose
- petunidin
- free radical
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Abstract
本发明涉及一种以黑果枸杞为原料制备矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷的方法。通过乙醇浸提,离心取上清液,真空浓缩,AB-8大孔树脂柱层析纯化,AKTA?Purifier蛋白纯化系统与YMC-Pack?ODS-A柱进一步分离纯化,冷冻干燥即为高纯度(97%以上)的矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷。采用体外清除DPPH自由基、超氧阴离子自由基的方法分析矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷的抗氧化活性,发现其具有显著的抗氧化活性。本发明从黑果枸杞中提取矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷的方法具有提取效率高、重复性好、工艺温和等优点,制备的矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷具有显著的抗氧化活性,因此在食品工业及医药行业具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及从茄科枸杞属黑果枸杞果实中提取相关成分的技术领域,具体涉及一种制备具有显著抗氧化活性矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷的方法。
背景技术
黑果枸杞为茄科枸杞属多年生灌木,主要分布于我国陕西北部黄土高原、宁夏、甘肃、青海、内蒙古、新疆和西藏等地区,中亚、高加索和欧洲等地区亦有分布。其中,我国新疆、甘肃分布较多,且主要分布于新疆塔里木下游地区,属于典型的荒漠植物,而甘肃则主要分布于河西走廊地区、黑河流域沿岸及其湿地地区。《维吾尔药志》记载,黑果枸杞果实具有强肾、润肝、明目、健胃、补脑、抗衰老及通经作用。《晶珠本草》记载,黑果枸杞用于治疗心热病、心脏病、月经不调、停经等且药效显著,民间作为滋补强壮、降压药用。黑果枸杞果实里富含的花青素由于其卓越的保健养生功效,近年来也成为研究的热点。
发明内容
本发明旨在从黑果枸杞中高效、便捷地制备具有强抗氧化活性矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷,实现本发明的具体方案如下:
(1)取黑果枸杞干以1∶40料液比用体积分数80%乙醇(含0.1%甲酸)在50℃条件下水浴浸提3h;
(2)将步骤(1)得到的黑果枸杞粗提液在4000rpm的离心机里离心3min;
(3)将步骤(2)得到的离心上清液加入到旋蒸瓶中旋蒸,旋蒸温度控制在45℃,旋蒸至较浓稠的紫黑色液体;
(4)将步骤(3)的旋蒸液加10mL上样于用AB-8大孔树脂填充的层析柱(5×30cm);
(5)将步骤(4)所得带有颜色的收集液集中到旋蒸瓶中旋蒸,旋蒸温度为40℃,旋至较浓稠的紫黑色液体,用0.1%的TFA溶液稍加稀释;
(6)将步骤(5)得到的旋蒸液过膜,向AKTAPurifier蛋白纯化系统进样1mL,通过配制的流动相(4%甲醇、19%乙腈、1%甲酸的水溶液)和YMC-PackODS-A柱分离纯化样品;
(7)将步骤(6)所分离出的样品旋蒸,冷冻干燥即为高纯度的矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷;
(8)将步骤(7)所得矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷用去离子水分别配制成一系列浓度梯度的样品溶液,测定其对DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除能力;
制备的矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷冷冻干燥后为紫红色粉末,该花色苷对DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除率呈现剂量依赖关系,清除DPPH自由基的IC50=32.5μg/mL,清除超氧阴离子自由基的IC50=106.5μg/mL。
附图说明
图1黑果枸杞花青素粗提物高效液相色谱(HPLC-DAD)分析图
图2矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷的高效液相色谱(HPLC-DAD)分析图
图3矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷一级质谱(MS)分析图
图4矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷二级质谱(MS)分析图
图5矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O葡萄糖苷对DPPH自由基的清除作用分析图
图6矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷对超氧阴离子自由基的清除作用分析图
具体实施方式
下面通过实施例,对本发明作进一步描述。
实施例1:
(1)取黑果枸杞干以1∶40料液比用体积分数80%乙醇(含0.1%甲酸)50℃水浴浸提3h;
(2)将步骤(1)得到的黑果枸杞粗提液离心(4000rpm,3min);
(3)将步骤(2)得到的离心液的上清液倒入旋蒸瓶中旋蒸,旋蒸温度45℃,旋至较浓稠的紫黑色液体;
(4)将步骤(3)所得粗提物上样10mL于AB-8大孔树脂填充的层析柱(5×30cm);
(5)将步骤(4)所得带有颜色的收集液集中到旋蒸瓶中旋蒸,旋蒸温度为40℃,旋至较浓稠的紫黑色液体,用0.1%的TFA溶液稀释;
(6)将步骤(5)所得的稀释液过膜,向AKTAPurifier蛋白纯化系统进样1mL,通过配制的流动相(4%甲醇、19%乙腈、1%甲酸的水溶液)和YMC-PackODS-A柱分离纯化样品;
(7)将步骤(6)所得的样品旋蒸,冷冻干燥即为高纯度的矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷;
(8)将步骤(7)所得矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷用去离子水分别配制成一系列浓度梯度(0.01、0.02、0.05、0.10、0.15、0.20、0.35、0.50mg/mL)的样品溶液,测定其对DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除能力;
制备的矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷冷冻干燥后为紫红色粉末,该花色苷对DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除率呈现剂量依赖关系,清除DPPH自由基的IC50=32.5μg/mL,清除超氧阴离子自由基的IC50=106.5μg/mL。
DPPH·清除率(%)=[A0-(A1-A2)]/A0×100%
A0组是以水代替样品溶液,A2组是以乙醇代替DPPH溶液,A1组是样品实验。
超氧阴离子自由基清除率(%)=[A0-(A1-A2)]/A0×100%
A0组是以水代替样品,A2组是以磷酸盐缓冲液代替NBT溶液,A1组是样品实验。
实施例2:
黑果枸杞中具有抗氧化活性的矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷的结构分析与鉴定
(1)对黑果枸杞花青素粗提物进行高效液相色谱分析
①色谱条件:TSKgelODS-80TSQA色谱柱
②检测条件:波长:530nm、280nm、柱温:35℃、进样体积:20μL
③流动相及洗脱梯度:
A相:含15%甲醇的乙腈溶液B相:1%甲酸、0.1%TFA的水溶液
(2)对黑果枸杞花青素粗提物在AKTAPurifier蛋白纯化系统分离纯化分析
①色谱条件:YMC-PackODS-A柱
②检测条件:波长:280nm、进样体积:1mL、流速:2ml/min、每管收集5mL
③流动相配比:4%甲醇、19%乙腈、1%甲酸的水溶液
④收集第9、10管的纯化物(紫红色)
(3)对纯化产物高效液相色谱分析(条件同步骤1)
(4)质谱分析
质谱条件:Agilent液相色谱-质谱联用仪(包括Agilent1100高效液相色谱仪和AgilentG24450型质谱仪);电喷雾电离源,正离子检测,扫描范围m/z0~1000,雾化气体为氮气,流速为2L/min,电离电压为4.5kV,锥孔电压为25V,离子源温度250℃。
结合一级质谱、二级质谱对样品分析,从图3、图4可分析出,样品分解过程为:MS/MS:934/711/479/317,分析其基本构成为矮牵牛素花色苷,其5位连接一个葡萄糖苷键,其3位连接一个芸香糖苷,芸香糖苷末端反式连接一个香豆酰基,最终鉴定该纯化产物为:矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷。
综上所述仅为本发明的较佳施例而已,并非用来限定本发明的实施范围。即凡依本发明申请专利范围的内容所做的等效变化与修饰都应为本发明的技术范畴。
Claims (1)
1.一种以黑果枸杞为原料制备矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷的方法,其特征在于包括以下操作步骤:
(1)取黑果枸杞干以1∶40料液比用体积分数80%乙醇(含0.1%甲酸)50℃水浴浸提3h;
(2)将步骤(1)得到的黑果枸杞粗提液离心(4000rpm,3min)
(3)将步骤(2)得到的离心液的上清液倒入旋蒸瓶中旋蒸,旋蒸温度为45℃,旋至较浓稠的紫黑色液体。
(4)将步骤(3)所得粗提物上样10mL于AB-8大孔树脂填充的层析柱(5×30cm);
(5)将步骤(4)所得带有颜色的收集液集中到旋蒸瓶中旋蒸,旋蒸温度为40℃,旋至较浓稠的紫黑色液体,用0.1%浓度的TFA溶液稀释。
(6)将步骤(5)所得稀释液过膜后向AKTAPurifier蛋白纯化系统进样1mL,通过配制流动相(4%甲醇、19%乙腈、1%甲酸的水溶液)和YMC-PackODS-A柱分离纯化样品;
(7)将步骤(6)所得的样品旋蒸,冷冻干燥即为高纯度的矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷。
(8)将步骤(7)所得矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷用去离子水配制一系列浓度梯度溶液,测定其对DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除能力。
制备的矮牵牛素-3-O-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-O-葡萄糖苷冷冻干燥后为紫红色粉末,该花色苷对DPPH自由基和超氧阴离子自由基的清除率呈现剂量依赖关系,清除DPPH自由基的IC50=32.5μg/mL,清除超氧阴离子自由基的IC50=106.5μg/mL。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510657121.8A CN105273020A (zh) | 2015-10-10 | 2015-10-10 | 一种以黑果枸杞为原料制备矮牵牛素-3-o-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-o-葡萄糖苷的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201510657121.8A CN105273020A (zh) | 2015-10-10 | 2015-10-10 | 一种以黑果枸杞为原料制备矮牵牛素-3-o-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-o-葡萄糖苷的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN105273020A true CN105273020A (zh) | 2016-01-27 |
Family
ID=55142913
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201510657121.8A Pending CN105273020A (zh) | 2015-10-10 | 2015-10-10 | 一种以黑果枸杞为原料制备矮牵牛素-3-o-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-o-葡萄糖苷的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN105273020A (zh) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107118244A (zh) * | 2017-04-28 | 2017-09-01 | 安徽拜森生物科技有限公司 | 一种花青苷标准品的制备方法 |
CN110028536A (zh) * | 2019-01-28 | 2019-07-19 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 一种黑果枸杞花色苷单体prg的制备方法及其应用 |
CN110372763A (zh) * | 2019-08-29 | 2019-10-25 | 西北农林科技大学 | 一种黑枸杞花色苷稳定化提取及加工方法 |
CN114716493A (zh) * | 2022-04-24 | 2022-07-08 | 宁夏农林科学院枸杞科学研究所 | 一种同时分离制备黑果枸杞中2个矮牵牛素类花色苷的方法 |
CN115417901A (zh) * | 2022-09-30 | 2022-12-02 | 无锡市食品安全检验检测中心 | 酰化矮牵牛素-3-o-芸香糖苷(反-对香豆酰)-5-o-葡萄糖苷制备方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103626814A (zh) * | 2013-12-09 | 2014-03-12 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 一种从黑果枸杞果实中分离制备花色苷单体的方法 |
CN104513218A (zh) * | 2014-10-17 | 2015-04-15 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 一种高速逆流色谱分离黑果枸杞中矮牵牛素的方法 |
-
2015
- 2015-10-10 CN CN201510657121.8A patent/CN105273020A/zh active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103626814A (zh) * | 2013-12-09 | 2014-03-12 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 一种从黑果枸杞果实中分离制备花色苷单体的方法 |
CN104513218A (zh) * | 2014-10-17 | 2015-04-15 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 一种高速逆流色谱分离黑果枸杞中矮牵牛素的方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
余江琴,等: "黑果枸杞色素的研究进展", 《现代中药研究与实践》 * |
李进: "黑果枸杞色素的提取和精制工艺研究", 《天然产物研究与开发》 * |
闫亚美,等: "黑果枸杞与5种果蔬中花色苷组成及体外抗氧化活性比较", 《食品工业科技》 * |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107118244A (zh) * | 2017-04-28 | 2017-09-01 | 安徽拜森生物科技有限公司 | 一种花青苷标准品的制备方法 |
CN107118244B (zh) * | 2017-04-28 | 2019-12-13 | 安徽拜森生物科技有限公司 | 一种花青苷标准品的制备方法 |
CN110028536A (zh) * | 2019-01-28 | 2019-07-19 | 中国科学院西北高原生物研究所 | 一种黑果枸杞花色苷单体prg的制备方法及其应用 |
CN110372763A (zh) * | 2019-08-29 | 2019-10-25 | 西北农林科技大学 | 一种黑枸杞花色苷稳定化提取及加工方法 |
CN114716493A (zh) * | 2022-04-24 | 2022-07-08 | 宁夏农林科学院枸杞科学研究所 | 一种同时分离制备黑果枸杞中2个矮牵牛素类花色苷的方法 |
CN115417901A (zh) * | 2022-09-30 | 2022-12-02 | 无锡市食品安全检验检测中心 | 酰化矮牵牛素-3-o-芸香糖苷(反-对香豆酰)-5-o-葡萄糖苷制备方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105273020A (zh) | 一种以黑果枸杞为原料制备矮牵牛素-3-o-芸香糖(反式-香豆酰基)-5-o-葡萄糖苷的方法 | |
CN103626814B (zh) | 一种从黑果枸杞果实中分离制备花色苷单体的方法 | |
CN105037448B (zh) | 一种快速大量提取分离薏苡仁低聚糖单体的方法 | |
CN105055527A (zh) | 一种橄榄叶提取物的制备方法 | |
Costa et al. | Isolation of C-glycosylflavonoids with α-glucosidase inhibitory activity from Passiflora bogotensis Benth by gradient high-speed counter-current chromatography | |
KR20130093372A (ko) | 항염증, 항노화 기능성 옥시레스베라트롤, 트란스-레스베라트롤 및 모라신이 함유된 뽕나무 가지추출물의 제조방법 | |
Song et al. | Home-made online hyphenation of pressurized liquid extraction, turbulent flow chromatography, and high performance liquid chromatography, Cistanche deserticola as a case study | |
Kula et al. | Two-dimensional liquid chromatography (LC) of phenolic compounds from the shoots of Rubus idaeus ‘Glen Ample’cultivar variety | |
CN104892687A (zh) | 高速逆流色谱分离纯化十大功劳叶中单体化合物的方法 | |
CN102875515A (zh) | 一种蓝莓锦葵色素的提取方法 | |
Shen et al. | Large-scale targetedly isolation of biflavonoids with high purity from industrial waste Ginkgo biloba exocarp using two-dimensional chromatography coupled with macroporous adsorption resin enrichment | |
Wang et al. | DPPH-HPLC-DAD analysis combined HSCCC for screening and identification of radical scavengers in Cynomorium songaricum Rupr. | |
Sun et al. | Preparative separation of five polyphenols from the fruits of Sorbus pohuashanensis Hedl. by high-speed counter-current chromatography | |
Ha et al. | Preparative isolation of six major saponins from Platycodi Radix by high‐speed counter‐current chromatography | |
CN110433190B (zh) | 一种从越橘中分离提取有效成分的方法 | |
CN105503981B (zh) | 从紫甘蓝中提取紫甘蓝花青素的方法 | |
CN106674312A (zh) | 高纯度单体獐牙菜苷系列成分的分离纯化方法 | |
CN108101923B (zh) | 一种光甘草定单体的分离提纯方法 | |
CN103554209B (zh) | 从三七中制备人参皂苷Rg1的方法 | |
CN105434539A (zh) | 一种荷叶黄酮的组合物 | |
Han et al. | Chemical profile of the active fraction of Yi-Gan San by HPLC-DAD-Q-TOF-MS and its neuroprotective effect against glutamate-induced cytotoxicity | |
CN103641867A (zh) | 中药百合中酚酸甘油酯苷化合物的高速逆流色谱分离方法及应用 | |
CN106483226A (zh) | 一种高效液相色谱分离六神丸紫外吸收成分的方法 | |
Sun et al. | Protein extraction from the stem of Panax ginseng CA Meyer: a tissue of lower protein extraction efficiency for proteomic analysis | |
Zou et al. | A novel strategy by combining “magnified” matrix solid phase dispersion extraction with high-speed countercurrent chromatography for the rapid and efficient isolation of flavonoids isomers with anti-inflammatory effect from Lindera aggregata (Sims) Kosterm Leaves |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20160127 |
|
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |