CN109211805B - 一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法，其步骤为：将类胡萝卜素提取物待测样品和标准品分别用有机溶剂溶解，制成浓度梯度溶液，再测定样品液和标准液的光谱扫描图，并在最大吸收波长下，分别测量吸光度，并绘制样品曲线和标准曲线，最后确定偏差值；其中类胡萝卜素提取物待测样品是将贻贝进行有机浸提后，将浸提液过滤所得滤液浓缩，得到浓缩液后，将浓缩液经柱层析纯化，再将洗脱液浓缩，冷冻干燥即得。本发明提供的贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法简单方便，体系相容性和稳定性好，结果准确度高；贻贝类胡萝卜素提取物的提取方法具有操作温度低、提取效率高、可重复性好的特点。

Description

一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法

技术领域

本发明涉及生物计量领域，尤其是涉及一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法。

技术背景

类胡萝卜素，通常是指C₄₀的碳氢化合物(胡萝卜素)和它们的氧化衍生物(叶黄素)两大类色素的总称，由高等植物、藻类和微生物合成，以色素形式存在于自然界。类胡萝卜素是一类脂溶性的大分子量的有机化合物，它们在结构上都含有一个带有九个双键的异戊二烯链，在链的两端各有一个β-紫萝酮环，环上不同位置的氢原子可被羟基、羰基、环氧基取代，能溶于丙酮、酒精、乙酸乙酯及氯仿等大部分有机试剂，但不溶于水。类胡萝卜素色泽鲜亮、着色力强，已被广泛地应用于着色剂、饲料添加剂；类胡萝卜素具有生物活性，除了作为功能食品外，β-胡萝卜素可降解为两分子的维生素A，还是维生素A的丰富来源；类胡萝卜素有抗氧化的功能，如清除氧自由基抗氧化延缓衰老、猝灭单线态氧防癌抗癌、增加免疫系统中B细胞的活力、增强机体免疫；还可治疗光敏性疾病和防止白内障发生等等。目前，类胡萝卜素的应用领域也从最初的着色功能逐步转向营养食品、保健品及药品三大领域。

中国出产的贻贝有贻贝、厚壳贻贝、翡翠贻贝等好几种。贻贝主要是以藻类和有机碎屑做饵料的，而藻类中富含类胡萝卜素，从而使贻贝肉质中的类胡萝卜素累积富有。迄今为止，在软体动物中已经发现的类胡萝卜素有60多种，从多板纲、腹足纲、双壳纲到头足纲都有类胡萝卜素的存在，主要有β-胡萝卜素、叶黄素、玉米黄质、硅藻黄质、岩藻黄质、异黄素、虾青素、扇贝酮、扇贝醇等，其中，β-胡萝卜素、叶黄素、玉米黄质、岩藻黄质基本存在每个物种中。由于类胡萝卜素的重要商业价值和广阔的应用前景，因此从贻贝中提取类胡萝卜素是提高贻贝附加利用值的重要技术之一。

近年来，随着生命科学及生物产业的迅速发展，生物计量已经作为一个崭新的计量领域被提到日程上来。而实现分析测量有效性的重要措施之一就是努力实现分析测量向国际单位(SI单位)或公认单位的溯源。目前，溯源性已经被越来越多地用于描述测量的可靠性。所谓溯源性是指“通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或测量标准的值能够与规定的参考标准联系起来的特性”，这条不间断的比较链又称为溯源链。因此，分析测量结果的有效性来自于结果的可靠性；结果的可靠性来自于可比性；结果的可比性来自于分析测量的可溯源性。但是由于生物及化学测量的特殊性，量值传递的载体通常不是基(标)准装置，而是具备良好表征的特性量值的标准物质，以标准物质作为量值的载体进行量值的传递。

发明内容

本发明的目的在于提供一种简单方便、体系相容性和稳定性好、结果准确度高的贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法。

本发明针对背景技术中提到的问题，采取的技术方案为：

一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法，其中类胡萝卜素提取物待测样品经有机溶剂溶解，再定容后配制成样品液，然后进行溯源性验证分析。本发明中基于类胡萝卜素提取物待测样品的光化学特性和紫外可见光吸收光谱的基本特点，建立了一种溯源验证分析方法，使类胡萝卜素提取物待测样品与虾青素标准品进行对比验证，偏差值均＜5％，无明显差异，即表明该待测样品赋值准确，确保了测量结果可溯源至参考物质，最终溯源至国家或国际基准，以保证检测结果的准备性、一致性和可溯源性。

作为优选，样品液的配制具体步骤为：准确称取类胡萝卜素提取物待测样品2.0～2.5mg，用有机溶剂溶解并定容至20～25ml后，移取出0.5～3.0ml，再用有机溶剂定容至50ml，配制成1～6μg/ml的浓度梯度样品液即可。

进一步优选，上述有机溶剂是由无水乙醇、衣康酸酐和马来酸组成，其重量比为7～8:0.5～0.8:0.3，有机溶剂在溶解类胡萝卜素提取物后，由于类胡萝卜素待测样品游离态的分子中存在共轭双键和不饱和的酮基，使得溶剂体系中电荷处于比较活泼的状态，加入衣康酸酐和马来酸后，能够利用酐基氧基和羧基等官能团的电子效应，钝化待测样品分子官能团中的电子，使体系中电子达到平衡状态，增加样品液整个体系的稳定性，同时也利用官能团之间的聚集，减小了分散体系中的能阀值，使得类胡萝卜素提取物在溶剂中的分散稳定性增加，扩大了有机溶剂与提取物待测样品的相容性，进而使得待测样品吸光度检测值误差变小，提高了吸光度的准确度。

作为优选，类胡萝卜素提取物待测样品的校准物为虾青素标准品。天然虾青素，分子式为C₄₀H₅₂O₄，是一种类胡萝卜素，属于是世界上最强的天然抗氧化剂之一，有保护皮肤健康、促进毛发生长、抗衰老、缓解运动疲劳、增强活力的功能，在自然界中虾青素是由藻类、细菌和浮游植物产生的，再经过贻贝内的甲壳类动物的食用，然后把色素储存在皮肤和脂肪组织中。

作为优选，虾青素标准品配制标准液的具体步骤为：准确称取虾青素标准品2.0～2.5mg，用有机溶剂溶解并定容至20～25ml后，移取出0.5～3.0ml，再用有机溶剂定容至50ml，配制成1～6μg/ml的浓度梯度标准液。

作为优选，类胡萝卜素提取物样品液和虾青素标准液于400～600nm的波长范围内，使用紫外可见分光光度法分别进行光谱扫描，得到光谱扫描图及最大吸收波长。在最大吸收波长处测定样品吸光度，可以提高测定的灵敏度，减小后续吸光度测定值的误差。

作为优选，类胡萝卜素提取物样品液和虾青素标准液在最大吸收波长下，分别测量吸光度，然后分别绘制样品曲线和标准曲线，最后确定偏差值。将样品液和标准液进行平行试验，同时绘制并比较样品曲线和标准曲线，偏差值均＜5％，无明显差异，即可确定样品的准确性，使测量结果可以通过一条具有规定不确定度的连续比较链与基准联系起来，即可以溯源到国家或国际基准。

作为优选，类胡萝卜素提取物待测样品是将贻贝干燥并压碎后，进行有机浸提，再将浸提液过滤并取滤液浓缩后，得到粗提物浓缩液，然后将浓缩液通过硅胶柱层析进行纯化，再将洗脱液浓缩后，冷冻干燥，即得类胡萝卜素提取物待测样品。

进一步优选，有机浸提步骤为：将贻贝干燥并压碎后，按料液重量比为1:3～5加入有机溶剂，在27～35℃下水浴振荡2～4h后，进行真空抽滤，再将所得滤液在35～45℃条件下浓缩，待除去溶剂后，即得粗提物浓缩液。类胡萝卜素通常不溶于水，但具有良好的脂溶性，易溶于多种有机溶剂，因此可使用有机溶剂提取类胡萝卜素，通常提取后可将溶剂蒸发，从而将类胡萝卜素浓缩，得到浓度较大的类胡萝卜素粗提物，同时溶剂也可回收循环利用。

再进一步优选，有机溶剂为丙酮、异丙醇、无水乙醇、乙酸乙酯、正己烷中的一种或几种。

进一步优选，硅胶柱层析是100～200目的硅胶装柱，加入正己烷进行湿法装柱后，取浓缩液上样，按照100％的正己烷→体积比93:7的正己烷-丙酮→体积比85:15的正己烷-丙酮进行梯度洗脱，最后收集红色组分，并于33～43℃下浓缩除去溶剂，得到类胡萝卜素提取物浓缩液。柱层析是利用固定相和流动相对样品中各成分的吸附性和溶解性的不同而达到分离纯化的目的，而硅胶可以吸附极性和弱极性成分，但不吸附脂肪等非极性组分，因此，从粗提物浓缩液中分离类胡萝卜素提取物选用硅胶作为固定相。

进一步优选，冷冻干燥是将类胡萝卜素提取物浓缩液在-10～-15℃的条件下冷冻并干燥，即得类胡萝卜素提取物待测样品。所得提取物为橙红色至深红色粉末，色泽鲜亮、着色力强，属于天然抗氧化剂之一，能够有效清除细胞内的氧自由基，增强细胞再生能力，尤其是可作为保护眼睛的最好补充剂，其可用于着色剂、饲料添加剂、营养食品、保健品及药品领域。

与现有技术相比，本发明的优点在于：1)本发明中所提供的从贻贝中提取类胡萝卜素提取物的方法，采用有机溶剂充分提取，柱层析分离纯化，整个过程不需要使用会引起类胡萝卜素损失的高温或酸碱性处理，有效降低了类胡萝卜素氧化变质的风险，保证并提高了类胡萝卜素的提取效率；2)本发明中基于类胡萝卜素提取物待测样品的光化学特性和紫外可见光吸收光谱的基本特点，建立了一种溯源验证分析方法，使类胡萝卜素提取物待测样品与虾青素标准品进行对比验证，偏差值均＜5％，无明显差异，即表明该待测样品赋值准确，可将其溯源至参考物质，最终溯源至国家或国际基准；3)本发明中提供的贻贝类胡萝卜素的提取方法，具有操作温度低、提取效率高、可重复性好的优点，所制类胡萝卜素提取物的溯源性的验证分析方法简单方便，体系相容性和稳定性好，结果准确度高，是一条可溯源的验证分析理想途径。

附图说明

图1为类胡萝卜素提取物待测样品与虾青素标准品的光谱扫描图；

图2为实施例2中虾青素标准曲线；

图3为实施例2中类胡萝卜素提取物待测样品拟合曲线；

图4为实施例4中虾青素标准曲线；

图5为实施例4中类胡萝卜素提取物待测样品拟合曲线。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：

实施例1：

一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法，其中类胡萝卜素提取物待测样品经有机溶剂溶解，再定容后配制成样品液，然后进行溯源性验证分析。基于类胡萝卜素提取物待测样品的光化学特性和紫外可见光吸收光谱的基本特点，建立了一种溯源验证分析方法，使类胡萝卜素提取物待测样品与虾青素标准品进行对比验证，偏差值均＜5％，无明显差异，即表明该待测样品赋值准确，确保了测量结果可溯源至参考物质，最终溯源至国家或国际基准，以保证检测结果的准备性、一致性和可溯源性。

样品液的配制具体步骤为：准确称取类胡萝卜素提取物待测样品2.2mg，用有机溶剂溶解并定容至22ml后，分别移取出0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml，再分别用有机溶剂定容至50ml，配制成1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、6μg/ml的浓度梯度样品液。

上述有机溶剂是由无水乙醇、衣康酸酐和马来酸组成，其重量比为7:0.5:0.3，有机溶剂在溶解类胡萝卜素提取物后，由于类胡萝卜素待测样品游离态的分子中存在共轭双键和不饱和的酮基，使得溶剂体系中电荷处于比较活泼的状态，加入衣康酸酐和马来酸后，能够利用酐基氧基和羧基等官能团的电子效应，钝化待测样品分子官能团中的电子，使体系中电子达到平衡状态，增加样品液整个体系的稳定性，同时也利用官能团之间的聚集，减小了分散体系中的能阀值，使得类胡萝卜素提取物在溶剂中的分散稳定性增加，扩大了有机溶剂与提取物待测样品的相容性，进而使得待测样品吸光度检测值误差变小，提高了吸光度的准确度。

类胡萝卜素提取物待测样品的校准物为虾青素标准品。天然虾青素，分子式为C₄₀H₅₂O₄，是一种类胡萝卜素，属于是世界上最强的天然抗氧化剂之一，有保护皮肤健康、促进毛发生长、抗衰老、缓解运动疲劳、增强活力的功能，在自然界中虾青素是由藻类、细菌和浮游植物产生的，再经过贻贝内的甲壳类动物的食用，然后把色素储存在皮肤和脂肪组织中。

虾青素标准品配制标准液的具体步骤为：准确称取虾青素标准品2.2mg，用有机溶剂溶解并定容至22ml后，分别移取出0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml，再分别用有机溶剂定容至50ml，配制成1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、6μg/ml的浓度梯度标准液。

类胡萝卜素提取物样品液和虾青素标准液于400～600nm的波长范围内，使用紫外可见分光光度法分别进行光谱扫描，得到光谱扫描图及最大吸收波长。在最大吸收波长处测定样品吸光度，可以提高测定的灵敏度，减小后续吸光度测定值的误差。

类胡萝卜素提取物样品液和虾青素标准液在最大吸收波长下，分别测量吸光度，然后分别绘制样品曲线和标准曲线，最后确定偏差值。将样品液和标准液进行平行试验，同时绘制并比较样品曲线和标准曲线，偏差值均＜5％，无明显差异，即可确定样品的准确性，使测量结果可以通过一条具有规定不确定度的连续比较链与基准联系起来，即可以溯源到国家或国际基准。

类胡萝卜素提取物待测样品是将贻贝干燥并压碎后，进行有机浸提，再将浸提液过滤并取滤液浓缩后，得到粗提物浓缩液，然后将浓缩液通过硅胶柱层析进行纯化，再将洗脱液浓缩后，冷冻干燥，即得类胡萝卜素提取物待测样品。

有机浸提步骤为：将2Kg贻贝干燥并压碎后，按料液重量比为1:3加入丙酮，在30℃下水浴振荡4h后，进行真空抽滤，再将所得滤液在35℃条件下浓缩，待除去溶剂后，即得粗提物浓缩液。类胡萝卜素通常不溶于水，但具有良好的脂溶性，易溶于多种有机溶剂，因此可使用有机溶剂提取类胡萝卜素，通常提取后可将溶剂蒸发，从而将类胡萝卜素浓缩，得到浓度较大的类胡萝卜素粗提物，同时溶剂也可回收循环利用。

硅胶柱层析是100目的硅胶装柱，加入正己烷进行湿法装柱后，取浓缩液上样，按照100％的正己烷→体积比93:7的正己烷-丙酮→体积比85:15的正己烷-丙酮进行梯度洗脱，最后收集红色组分，并于35℃下浓缩除去溶剂，得到类胡萝卜素提取物浓缩液。柱层析是利用固定相和流动相对样品中各成分的吸附性和溶解性的不同而达到分离纯化的目的，而硅胶可以吸附极性和弱极性成分，但不吸附脂肪等非极性组分，因此，从粗提物浓缩液中分离类胡萝卜素提取物选用硅胶作为固定相。

冷冻干燥是将类胡萝卜素提取物浓缩液在-15℃的条件下冷冻并干燥，即得类胡萝卜素提取物待测样品2.38mg，纯度为96.1％，所得提取物为橙红色粉末，色泽鲜亮、着色力强，属于天然抗氧化剂之一，能够有效清除细胞内的氧自由基，增强细胞再生能力，尤其是可作为保护眼睛的最好补充剂，其可用于着色剂、饲料添加剂、营养食品、保健品及药品领域。

实施例2：

一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法，其中类胡萝卜素提取物待测样品经有机溶剂溶解，再定容后配制成样品液，然后进行溯源性验证分析。

样品液的配制具体步骤为：准确称取类胡萝卜素提取物待测样品2.0mg，用有机溶剂溶解并定容至20ml后，分别移取出0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml，再分别用有机溶剂定容至50ml，配制成1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、6μg/ml的浓度梯度样品液，上述有机溶剂是由无水乙醇、衣康酸酐和马来酸组成，其重量比为7.5:0.7:0.3。

类胡萝卜素提取物待测样品的校准物为虾青素标准品。

虾青素标准品配制标准液的具体步骤为：准确称取虾青素标准品2.0mg，用有机溶剂溶解并定容至20ml后，分别移取出0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml、3.0ml，再分别用有机溶剂定容至50ml，配制成1μg/ml、2μg/ml、3μg/ml、4μg/ml、5μg/ml、6μg/ml的浓度梯度标准液。

类胡萝卜素提取物样品液和虾青素标准液于400～600nm的波长范围内，使用紫外可见分光光度法分别进行光谱扫描，得到光谱扫描图及最大吸收波长。

类胡萝卜素提取物样品液和虾青素标准液在最大吸收波长下，分别测量吸光度，然后分别绘制样品曲线和标准曲线，最后确定偏差值。

类胡萝卜素提取物待测样品是将贻贝干燥并压碎后，进行有机浸提，再将浸提液过滤并取滤液浓缩后，得到粗提物浓缩液，然后将浓缩液通过硅胶柱层析进行纯化，再将洗脱液浓缩后，冷冻干燥，即得类胡萝卜素提取物待测样品。

有机浸提步骤为：将2Kg贻贝干燥并压碎后，按料液重量比为1:4加入丙酮，在33℃下水浴振荡3.5h后，进行真空抽滤，再将所得滤液在40℃条件下浓缩，待除去溶剂后，即得粗提物浓缩液。

硅胶柱层析是200目的硅胶装柱，加入正己烷进行湿法装柱后，取浓缩液上样，按照100％的正己烷→体积比93:7的正己烷-丙酮→体积比85:15的正己烷-丙酮进行梯度洗脱，最后收集红色组分，并于40℃下浓缩除去溶剂，得到类胡萝卜素提取物浓缩液。

冷冻干燥是将类胡萝卜素提取物浓缩液在-10℃的条件下冷冻并干燥，即得类胡萝卜素提取物待测样品2.42mg，纯度为96.5％，所得提取物为橙红色粉末。

实施例3：

一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法，其中类胡萝卜素提取物待测样品的制备步骤中，有机浸提步骤进一步优化为：将2Kg贻贝干燥并压碎后，按料液重量比为1:4加入有机溶剂，在33℃下水浴振荡3.5h后，进行真空抽滤，再将所得滤液在40℃条件下浓缩，待除去溶剂后，即得粗提物浓缩液，上述有机溶剂为丙酮、邻苯基苯酚和羟甲基脲，其重量比为10:0.5:0.5，邻苯基苯酚和羟甲基脲的加入，既可以破坏贻贝粉碎物中分子的表面黏度，加快了丙酮分子向粉碎物中的渗透、扩散，从而提高丙酮对目标提取物的吸附提取，加快有机溶剂提取的速率，又使得提取剂穿透力变强，且溶液表面张力下降，因而目标提取物在提取剂中的溶解和扩散速度加快，提高了目标提取物的分散度，进而使有机溶剂与混合物之间保持较大的浓度差，使得提取一直以较快的速率进行，达到高效提取的目的。

硅胶柱层析是200目的硅胶装柱，加入正己烷进行湿法装柱后，取浓缩液上样，按照100％的正己烷→体积比93:7的正己烷-丙酮→体积比85:15的正己烷-丙酮进行梯度洗脱，最后收集红色组分，并于40℃下浓缩除去溶剂，得到类胡萝卜素提取物浓缩液。

冷冻干燥是将类胡萝卜素提取物浓缩液在-10℃的条件下冷冻并干燥，即得类胡萝卜素提取物待测样品2.47mg，纯度为97.2％，所得提取物为橙红色粉末。

实施例4：

一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法，其中类胡萝卜素提取物待测样品液的配制和虾青素标准液的配制步骤中的有机溶剂仅为无水乙醇，其他步骤与实施例2相同，最终得到光谱扫描图和样品曲线、标准曲线，最后确定偏差值。

实施例5：

贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析

偏差值的确定：

标准曲线的回归方程为：Y＝A₁X±C，样品曲线的回归方程为：Y＝A₂X±C，

偏差值为：

式中Y为吸光值A₄₇₃，X为虾青素或类胡萝卜素提取物的浓度μg/ml，A₁、A₂代表曲线的斜率。

由图1可知，类胡萝卜素提取物待测样品和虾青素标准品在400～600nm波长范围内的光谱特征一致，均在473nm处有最大吸收。

由图2、图3结果可得，实施例2中所制虾青素标准曲线的回归方程为：Y＝0.2154X+0.0193，R²＝0.9991，类胡萝卜素提取物待测样品曲线的回归方程为：Y＝0.2193X+0.0233，R²＝0.999，计算可得偏差值为1.81％；由图4、图5结果可得，实施例4中所制虾青素标准曲线的回归方程为：Y＝0.2281X-0.0057，R²＝0.9901，类胡萝卜素提取物待测样品曲线的回归方程为：Y＝0.2191X-0.0453，R²＝0.9966，计算可得偏差值为3.95％；由上述结果可得，实施例2中标准曲线和样品曲线之间的偏差值较小，且两条曲线的准确度都达到0.999，而实施例4中标准曲线和样品曲线之间的偏差值虽然在5％的范围内，但与实施例2的偏差值比较则偏大，且两条曲线的准确度仅达到0.99，因此，实施例2所得偏差值最终准确度更高。

本发明操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。

以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法，其特征在于：所述类胡萝卜素提取物待测样品经有机溶剂溶解，再定容后配制成样品液，然后进行溯源性验证分析；

所述有机溶剂由无水乙醇、衣康酸酐和马来酸组成，所述无水乙醇、衣康酸酐和马来酸的重量比为7~8:0.5~0.8:0.3；

所述样品液的配制步骤为：准确称取类胡萝卜素提取物待测样品，用有机溶剂溶解并定容后，配制成1~6μg/ml的浓度梯度样品液；

所述类胡萝卜素提取物待测样品提取方法为：将贻贝干燥并压碎后，进行有机浸提，再将浸提液过滤并取滤液浓缩后，得到粗提物浓缩液，然后将浓缩液通过硅胶柱层析进行纯化，再将洗脱液浓缩后，冷冻干燥，即得类胡萝卜素提取物待测样品；

所述有机浸提步骤为：将贻贝干燥并压碎后，按料液重量比为1:3~5加入有机溶剂，在27~35℃下水浴振荡2~4h后，进行真空抽滤，再将所得滤液在35~45℃条件下浓缩，待除去溶剂后，即得粗提物浓缩液。

2.根据权利要求1所述的一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法，其特征在于：所述类胡萝卜素提取物待测样品的校准物为虾青素标准品。

3.根据权利要求2所述的一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法，其特征在于：所述虾青素标准品由有机溶剂溶解并定容后，配制成1~6μg/ml的浓度梯度标准液。

4.根据权利要求1或3所述的一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法，其特征在于：所述类胡萝卜素提取物样品液和虾青素标准液于400~600nm的波长范围内，分别进行光谱扫描，得到光谱扫描图及最大吸收波长。

5.根据权利要求1或3所述的一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法，其特征在于：所述类胡萝卜素提取物样品液和虾青素标准液在最大吸收波长下，分别测量吸光度，然后分别绘制样品曲线和标准曲线，最后确定偏差值。

6.根据权利要求1所述的一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法，其特征在于：所述有机溶剂为丙酮、异丙醇、无水乙醇、乙酸乙酯、正己烷中的一种或几种。

7.根据权利要求1所述的一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法，其特征在于：所述有机浸提步骤的有机溶剂为丙酮、邻苯基苯酚和羟甲基脲，其重量比为10:0.5:0.5。

8.根据权利要求1所述的一种贻贝类胡萝卜素提取物溯源性的验证分析方法，其特征在于：所述硅胶柱层析是100~200目的硅胶装柱，加入正己烷进行湿法装柱后，取浓缩液上样，按照100%的正己烷→体积比93:7的正己烷-丙酮→体积比85:15的正己烷-丙酮进行梯度洗脱，最后收集红色组分，并于33~43℃下浓缩除去溶剂，得到类胡萝卜素提取物浓缩液。

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