CN110151811A - 一种含有火龙果提取物的组合物及其用途 - Google Patents

一种含有火龙果提取物的组合物及其用途 Download PDF

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Abstract

本发明关于一种植物提取物及其用途，特别是关于一种含有火龙果提取物的组合物及其用途，所述组合物包括：火龙果提取物；和荨麻裂环木脂素F，其中，所述火龙果提取物经咪唑类离子液体水溶液提取，具体为：提供一火龙果果皮；获得一火龙果粉末；进行一提取工艺，所述提取工艺包括：混合步骤，提取步骤，冷冻离心步骤，压滤步骤，色谱分离步骤，收集第五馏分浓缩至恒重即得。所述组合物中火龙果提取物富含火龙果总黄酮，其可在荨麻裂环木脂素F的配伍下显著提高免疫期间血清中溶菌酶活力、白蛋白质量浓度、C3质量浓度及超氧化物歧化酶活性，在一定程度上能够促进免疫器官生长发育，显著改善机体免疫功能。

Description

一种含有火龙果提取物的组合物及其用途
技术领域
本发明涉及一种植物提取物及其用途，特别是涉及一种含有火龙果提取物的组合物及其用途。
背景技术
火龙果(学名：Hylocereus undatus'Foo-Lon')是仙人掌科、量天尺属量天尺的栽培品种，攀援肉质灌木，具气根。分枝多数，延伸，叶片棱常翅状，边缘波状或圆齿状，深绿色至淡蓝绿色，骨质；花漏斗状，于夜间开放；鳞片卵状披针形至披针形，萼状花被片黄绿色，线形至线状披针形，瓣状花被片白色，长圆状倒披针形，花丝黄白色，花柱黄白色，浆果红色，长球形，果脐小，果肉白色、红色。种子倒卵形，黑色，种脐小。7～12月开花结果。分布中美洲至南美洲北部，世界各地广泛栽培，藉气根攀援于树干、岩石或墙上，海拔3～300m。该种分枝扦插容易成活，常作嫁接蟹爪属，仙人棒属和多种仙人球的砧木，花可作蔬菜，浆果可食，商品名“火龙果”。
然而人们往往只注重火龙果果实的价值，而忽视了资源十分丰富的火龙果果皮的应用，研究发现火龙果果皮中有较为丰富的黄酮类物质，分析火龙果果皮中黄酮类物质的含量有助于火龙果的开发和利用。
以上背景技术内容的公开仅用于辅助理解本发明的发明构思及技术方案，其并不必然属于本专利申请的现有技术，在没有明确的证据表明上述内容在本专利申请的申请日已经公开的情况下，上述背景技术不应当用于评价本申请的新颖性和创造性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种含有火龙果提取物的组合物及其用途，所述组合物中火龙果提取物富含火龙果总黄酮，其可在荨麻裂环木脂素F的配伍下显著提高免疫期间血清中溶菌酶活力、白蛋白质量浓度、C3质量浓度及超氧化物歧化酶活性，在一定程度上能够促进免疫器官生长发育，显著改善机体免疫功能。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
[1]一种可显著提高机体免疫力的组合物，所述组合物包括：
-火龙果提取物；和
-荨麻裂环木脂素F，
其中，所述火龙果提取物经咪唑类离子液体水溶液提取。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述组合物包括占据所述组合物重量百分比的下述组分：
-0.01～99.99wt％火龙果提取物；和
-0.01～99.99wt％荨麻裂环木脂素F。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述组合物优选地包括占据所述组合物重量百分比的下述组分：
-1.00～99.99wt％火龙果提取物；和
-0.01～99.00wt％荨麻裂环木脂素F。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述组合物更优选地包括占据所述组合物重量百分比的下述组分：
-10.00～99.99wt％火龙果提取物；和
-0.01～90.00wt％荨麻裂环木脂素F。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述组合物最优选地包括占据所述组合物重量百分比的下述组分：
-50.01～99.99wt％火龙果提取物；和
-0.01～49.99wt％荨麻裂环木脂素F。
本发明所述组合物中，火龙果提取物可在荨麻裂环木脂素F的配伍下显著提高免疫期间血清中的溶菌酶活力、白蛋白质量浓度、C3质量浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活性，所述含有火龙果提取物和荨麻裂环木脂素F的组合物在一定程度上能够促进免疫器官生长发育，显著改善机体免疫功能。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述组合物可制成适于通过所需的给药途径对患者给药的剂型，例如注射剂、胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒剂、含片、糖浆、悬浮剂、溶液剂、乳剂、栓剂。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述组合物中的火龙果提取物的制备方法包括下述步骤：
提供一火龙果果皮；
清洗并风干该火龙果果皮，粉碎后进行冷冻干燥处理，粉碎脱水以获得一火龙果粉末；
进行一提取工艺，所述提取工艺包括：
一混合步骤，系将该火龙果粉末与一咪唑类离子液体水溶液混合成一混合物；
一提取步骤，系将该混合物在一微波辅助下制备火龙果粗提物；
一冷冻离心步骤，系将该火龙果粗提物在一冷冻温度、一离心转速下离心一离心时间；
一压滤步骤，系将该冷冻离心步骤获取的下层浑浊物进行针式滤器压滤处理；
一色谱分离步骤，系将该压滤步骤获取的滤液以中压色谱塔进行色谱分离；以及
收集第五馏分浓缩至恒重即得。
一火龙果果皮粉末以能过120～180目筛为佳。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述该一咪唑类离子液体水溶液为含有1-辛基-3-甲基六氟磷酸盐([Omim]PF6)和溴化1-丁基-3-甲基咪唑([Bmim]Br)的水溶液。一方面咪唑类离子液体对TFHF的溶解能力比传统有机溶剂强，另一方面是因为咪唑类离子液体可以溶解植物细胞壁中的纤维素，促使TFHF有效成分释放至细胞外。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述该一咪唑类离子液体水溶液中，所述[Omim]PF6的浓度为0.25～0.3mol/L，优选为0.26～0.28mol/L；所述[Bmim]Br的浓度为0.05～0.06mol/L，优选为0.053～0.057mol/L。合适的溶液浓度不至于产生较高的粘稠度，进而提取剂的黏度、传质阻力不至于太高而达到抑制TFHF溶出。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述该火龙果粉末与该咪唑类离子液体水溶液的料液比为1:20～30，g/mL，优选为1:24～28，g/mL。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述该微波辅助时的微波提取功率为400～600W，提取温度是65～75℃，提取时间是15～20min；为了使提取过程稳定、快速升温，且不破坏黄酮类化合物的结构和活性。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述冷冻离心步骤中，该冷冻温度是0～2℃，优选是1℃；该离心转速是5000～30000r/min，优选是12000～25000r/min；该离心时间是5～30min，优选是10～15min。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述压滤步骤中，该针式滤器是聚四氟乙烯针式滤器(13mm×0.22μm)。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述色谱分离步骤中，所述中压色谱塔色谱分离的工作参数是指装填MCI微孔树脂固定相；中压色谱塔内径为36.0～100.0mm；制备流动相A是水，B是乙醇；分离过程中采用紫外检测器检测，检测波长为254nm；流速为15.0～50.0mL/min。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述色谱分离步骤中，所述步骤e)中的洗脱方式是：0～90min，体积浓度0％→100％B；90～120min，体积浓度100％→100％B。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述色谱分离步骤中，所述浓缩可为真空浓缩，所述真空浓缩的条件是指真空度为0.02～0.05MPa，温度为35～75℃。
以本发明方法制备火龙果提取物安全易得，方法简单易操作，火龙果提取物中的火龙果总黄酮(total flavonoids of Hylocereus undatus'Foo-Lon',TFHF)的提取率可达15.5mg/g以上，火龙果提取物中总黄酮的含量可达99wt％以上，具有较高的经济效益；富含TFHF的火龙果提取物除了具有较高的抗氧化能力、清除自由基能力之外，火龙果提取物还可作为免疫评估分子的辅助剂刺激抗原呈递细胞，增强免疫反应，可诱发保护性免疫反应，并被用作载体从其他病原体中传递抗原；此外，富含TFHF的火龙果提取物还可在荨麻裂环木脂素F的配伍下显著提高免疫期间血清中溶菌酶活力、白蛋白质量浓度、C3质量浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活性，所述含有火龙果提取物和荨麻裂环木脂素F的组合物在一定程度上能够促进免疫器官生长发育，显著改善机体免疫功能。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述组合物中的荨麻裂环木脂素F的结构式如式(1)所示。
为了更详尽地展现本发明，在本申请的发明内容及优选实施方案中，还提供了所述所述组合物中的荨麻裂环木脂素F的制备方法，所述制备方法可为公知常识技术中的任意方法，因此本申请仅列举但不限于下述方法：
a)将滇藏荨麻干燥根粉碎处理后，用质量浓度为95％的工业乙醇回流提取，过滤后减压浓缩；
b)将醇提取物用热水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，各萃取三次；
c)乙酸乙酯提取物经大孔树脂D101分离，采用水、质量浓度分别为30％、50％的乙醇洗脱，收集洗脱液；
d)50％乙醇洗脱液用硅胶柱色谱分离纯化，采用体积比为氯仿:甲醇＝30:1、10:1、5:1、3:1、1:1的梯度洗脱，收集洗脱液；
e)步骤(4)的洗脱液经反相高效液相色谱分离纯化，采用体积比为甲醇:水＝4:6的溶液洗脱，制备得到荨麻裂环木脂素F。
本发明制备原料为纯天然植物根，安全易得，方法简单易操作，不引入有毒物质，成本低廉，荨麻裂环木脂素F的常见作用因其对5α-还原酶活性具有较强抑制作用，可作为抗前列腺增生药物成分；然而本发明的申请人意外地发现，荨麻裂环木脂素F配伍富含TFHF的火龙果提取物还可显著提高免疫期间血清中溶菌酶活力、白蛋白质量浓度、C3质量浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活性，所述含有火龙果提取物和荨麻裂环木脂素F的组合物在一定程度上能够促进免疫器官生长发育，显著改善机体免疫功能，因此本发明所述组合物可以用以制备相关提高机体免疫功能的药物制剂，还可用以改善机体免疫能力，具有较好的现实意义和经济价值。
[2]项[1]所述组合物的用途，所述用途包括但不限于：
-所述组合物在促进机体免疫器官生长发育中的应用；和/或
-所述组合物在制备促进机体免疫器官生长发育的药物制剂中的应用；和/或
-所述组合物在改善机体免疫功能中的应用；和/或
-所述组合物在制备可改善机体免疫功能的药物制剂中的应用；和/或
-所述组合物在增加机体血清白蛋白浓度中的应用；和/或
-所述组合物在制备可增加机体血清白蛋白浓度的药物制剂中的应用。
[3]一种可显著改善机体免疫功能的药物组合物，所述药物组合物中含有药效有效量的项[1]所述组合物。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述药物组合物还可进一步包含或不包括一种或多种可药用赋形剂。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述可药用赋形剂可选自粘合剂、润滑剂、助流剂、崩解剂、成粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、悬浮剂、调味剂中的一种或多种。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述药物组合物可经口服给药、胃肠外给药、吸入喷雾给药、直肠给药、鼻内给药、舌下给药、颊内给药、透皮给药或植入给药。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述药物组合物可制成适于通过所需的给药途径对患者给药的剂型，例如注射剂、胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒剂、含片、糖浆、悬浮剂、溶液剂、乳剂、栓剂。
[4]一种可显著提高机体免疫功能的方法，包括对所需机体施用药效有效量的项[1]所述组合物。
本发明组合物中的麻裂环木脂素F配伍富含TFHF的火龙果提取物可显著提高机体免疫功能，提高免疫期间血清中溶菌酶活力、白蛋白质量浓度、C3质量浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活性，所述组合物在一定程度上能够促进免疫器官生长发育，显著改善机体免疫功能，因此本发明所述组合物可以用以制备相关提高机体免疫功能的药物制剂，还可用以改善机体免疫能力，具有较好的现实意义和经济价值。
本发明的有益效果为：
1)制备火龙果提取物时利用咪唑类离子液体溶液，一方面咪唑类离子液体对TFHF的溶解能力比传统有机溶剂强，另一方面是因为咪唑类离子液体可以溶解植物细胞壁中的纤维素，促使TFHF有效成分释放至细胞外；
2)选择合适的咪唑类离子液体溶液浓度以制备火龙果提取物，合适的溶液浓度不至于产生较高的粘稠度，进而提取剂的黏度、传质阻力不至于太高而达到抑制TFHF溶出；
3)以本发明方法制备火龙果提取物安全易得，方法简单易操作，火龙果提取物中的TFHF的提取率可达15.5mg/g以上，火龙果提取物中总黄酮的含量可达99wt％以上，具有较高的经济效益；
4)富含TFHF的火龙果提取物除了具有较高的抗氧化能力、清除自由基能力之外，火龙果提取物还可作为免疫评估分子的辅助剂刺激抗原呈递细胞，增强免疫反应，可诱发保护性免疫反应，并被用作载体从其他病原体中传递抗原；
5)本发明的组合物中，富含TFHF的火龙果提取物可在荨麻裂环木脂素F的配伍下显著提高免疫期间血清中溶菌酶活力、白蛋白质量浓度、C3质量浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活性，在一定程度上能够促进免疫器官生长发育，显著改善机体免疫功能。
本发明采用了上述技术方案提供范文，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。
附图说明
为让本发明的上述和其他目的、特征、优点与实施例能更明显易懂，所附附图的说明如下：
图1为本发明的荨麻裂环木脂素F的结构式示意图；
图2为本发明的芦丁标准曲线示意图；
图3为本发明火龙果提取物中TFHF的提取率示意图；
图4为本发明火龙果提取物中TFHF的纯度示意图。
具体实施方式
除非另有定义，本文所使用的技术和科学术语，具有本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。本发明使用本文中所描述的方法和材料；但本领域中已知的其他合适的方法和材料也可以被使用。本文中所描述的材料、方法和实例仅是说明性的，并不是用来作为限制。所有出版物、专利申请案、专利案、临时申请案、数据库条目及本文中提及的其它参考文献等，其整体被并入本文中作为参考。若有冲突，以本说明书包括定义为准。
由下面的详述、附图及权利要求，本发明的其它特征和优点将变得很明显。
对于语词“例如”(“for example”)和“如”(“such as”)及其语法等同物，短语“而不限于”(“and without limitation”)应被理解为遵循一般用法，除非另有明确说明。如本文所用，语词“约”(“about”)是指考虑到由于实验误差的变化。除非另有明确说明，本文所述的所有测量，无论是否有明确地使用，都要被理解为被语词“约”一词所修正。如本文所用，单数形式“一”，“一个”，和“该”(“a，”“an，”and“the”)都包括复数用法，除非上下文另有明确规定。
在本说明书中，术语“提取物”或“植物提取物”是指通过用一种或多种提取技术分离或纯化所需活性成分而获得的植物材料的浓缩制剂。提取技术的实例包括但不限于溶剂提取，例如但不限于使用水、乙醇、甲醇、水/乙醇混合物、水/甲醇混合物、乙酸乙酯、色谱法等提取。
在本说明书中，术语“药效有效量”指在技术人员的合理判断范围内，诸如局部施用或全身施用活性物质之类的化合物或组合物的足以显著诱导积极的有益效果(例如治疗免疫力低下)但低至足以避免严重副作用的量，即提供合理的效险比的量。
实施例1：
本实施例提供一种可显著提高机体免疫力的组合物，所述组合物包括占据所述组合物重量百分比的下述组分：
-95.00wt％火龙果提取物；和
-5.00wt％荨麻裂环木脂素F，
其中，所述火龙果提取物经咪唑类离子液体水溶液提取。
本发明所述组合物中，火龙果提取物可在荨麻裂环木脂素F的配伍下显著提高免疫期间血清中的溶菌酶活力、白蛋白质量浓度、C3质量浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活性，所述含有火龙果提取物和荨麻裂环木脂素F的组合物在一定程度上能够促进免疫器官生长发育，显著改善机体免疫功能。
在本优选实施例中，所述组合物中的火龙果提取物的制备方法包括下述步骤：
提供一火龙果果皮；
清洗并风干该火龙果果皮，粉碎后进行冷冻干燥处理，粉碎脱水以获得一火龙果粉末；
进行一提取工艺，所述提取工艺包括：
一混合步骤，系将该火龙果粉末与一咪唑类离子液体水溶液混合成一混合物；
一提取步骤，系将该混合物在一微波辅助下制备火龙果粗提物；
一冷冻离心步骤，系将该火龙果粗提物在一冷冻温度、一离心转速下离心一离心时间；
一压滤步骤，系将该冷冻离心步骤获取的下层浑浊物进行针式滤器压滤处理；
一色谱分离步骤，系将该压滤步骤获取的滤液以中压色谱塔进行色谱分离；以及
收集第五馏分浓缩至恒重即得。
一火龙果果皮粉末以能过160目筛为佳。
在本优选实施例中，所述该一咪唑类离子液体水溶液为含有1-辛基-3-甲基六氟磷酸盐([Omim]PF6)和溴化1-丁基-3-甲基咪唑([Bmim]Br)的水溶液。一方面咪唑类离子液体对TFHF的溶解能力比传统有机溶剂强，另一方面是因为咪唑类离子液体可以溶解植物细胞壁中的纤维素，促使TFHF有效成分释放至细胞外。
在本优选实施例中，所述该一咪唑类离子液体水溶液中，所述[Omim]PF6的浓度为0.27mol/L；所述[Bmim]Br的浓度为0.054mol/L。合适的溶液浓度不至于产生较高的粘稠度，进而提取剂的黏度、传质阻力不至于太高而达到抑制TFHF溶出。
在本优选实施例中，所述该火龙果粉末与该咪唑类离子液体水溶液的料液比为1:25，g/mL。
在本优选实施例中，所述该微波辅助时的微波提取功率为420W，提取温度是70℃，提取时间是15min；为了使提取过程稳定、快速升温，且不破坏黄酮类化合物的结构和活性。
在本优选实施例中，所述冷冻离心步骤中，该冷冻温度是1℃；该离心转速是20000r/min；该离心时间是12min。
在本优选实施例中，所述压滤步骤中，该针式滤器是聚四氟乙烯针式滤器(13mm×0.22μm)。
在本优选实施例中，所述色谱分离步骤中，所述中压色谱塔色谱分离的工作参数是指装填MCI微孔树脂固定相；中压色谱塔内径为50.0mm；制备流动相A是水，B是乙醇；分离过程中采用紫外检测器检测，检测波长为254nm；流速为35.0mL/min。
在本优选实施例中，所述色谱分离步骤中，所述步骤e)中的洗脱方式是：0～90min，体积浓度0％→100％B；90～120min，体积浓度100％→100％B。
在本优选实施例中，所述色谱分离步骤中，所述浓缩可为真空浓缩，所述真空浓缩的条件是指真空度为0.04MPa，温度为40℃。
以本发明方法制备火龙果提取物安全易得，方法简单易操作，火龙果提取物中的火龙果总黄酮(total flavonoids of Hylocereus undatus'Foo-Lon',TFHF)的提取率达15.56mg/g，火龙果提取物中总黄酮的含量达99.3wt％，具有较高的经济效益；富含TFHF的火龙果提取物除了具有较高的抗氧化能力、清除自由基能力之外，火龙果提取物还可作为免疫评估分子的辅助剂刺激抗原呈递细胞，增强免疫反应，可诱发保护性免疫反应，并被用作载体从其他病原体中传递抗原；此外，富含TFHF的火龙果提取物还可在荨麻裂环木脂素F的配伍下显著提高免疫期间血清中溶菌酶活力、白蛋白质量浓度、C3质量浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活性，所述含有火龙果提取物和荨麻裂环木脂素F的组合物在一定程度上能够促进免疫器官生长发育，显著改善机体免疫功能。
为了更详尽地展现本发明，在本优选实施方案中，还提供了所述所述组合物中的荨麻裂环木脂素F的制备方法，所述制备方法可为公知常识技术中的任意方法，因此本申请仅列举但不限于下述方法：
a)将滇藏荨麻干燥根粉碎处理后，用质量浓度为95％的工业乙醇回流提取，过滤后减压浓缩；
b)将醇提取物用热水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，各萃取三次；
c)乙酸乙酯提取物经大孔树脂D101分离，采用水、质量浓度分别为30％、50％的乙醇洗脱，收集洗脱液；
d)50％乙醇洗脱液用硅胶柱色谱分离纯化，采用体积比为氯仿:甲醇＝30:1、10:1、5:1、3:1、1:1的梯度洗脱，收集洗脱液；
e)步骤(4)的洗脱液经反相高效液相色谱分离纯化，采用体积比为甲醇:水＝4:6的溶液洗脱，制备得到荨麻裂环木脂素F。
本发明制备原料为纯天然植物根，安全易得，方法简单易操作，不引入有毒物质，成本低廉，荨麻裂环木脂素F的常见作用因其对5α-还原酶活性具有较强抑制作用，可作为抗前列腺增生药物成分；然而本发明的申请人意外地发现，荨麻裂环木脂素F配伍富含TFHF的火龙果提取物还可显著提高免疫期间血清中溶菌酶活力、白蛋白质量浓度、C3质量浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活性，所述含有火龙果提取物和荨麻裂环木脂素F的组合物在一定程度上能够促进免疫器官生长发育，显著改善机体免疫功能，因此本发明所述组合物可以用以制备相关提高机体免疫功能的药物制剂，还可用以改善机体免疫能力，具有较好的现实意义和经济价值。
本优选实施例还提供上述组合物的用途，所述用途包括但不限于：
-所述组合物在促进机体免疫器官生长发育中的应用；和/或
-所述组合物在制备促进机体免疫器官生长发育的药物制剂中的应用；和/或
-所述组合物在改善机体免疫功能中的应用；和/或
-所述组合物在制备可改善机体免疫功能的药物制剂中的应用；和/或
-所述组合物在增加机体血清白蛋白浓度中的应用；和/或
-所述组合物在制备可增加机体血清白蛋白浓度的药物制剂中的应用。
本优选实施例还提供一种可显著改善机体免疫功能的药物组合物，所述药物组合物中含有药效有效量的上述组合物。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述药物组合物还可进一步包含或不包括一种或多种可药用赋形剂。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述可药用赋形剂可选自粘合剂、润滑剂、助流剂、崩解剂、成粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、悬浮剂、调味剂中的一种或多种。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述药物组合物可经口服给药、胃肠外给药、吸入喷雾给药、直肠给药、鼻内给药、舌下给药、颊内给药、透皮给药或植入给药。
在本发明的发明内容和优选实施例中，所述药物组合物可制成适于通过所需的给药途径对患者给药的剂型，例如注射剂、胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒剂、含片、糖浆、悬浮剂、溶液剂、乳剂、栓剂。
本优选实施例还一种可显著提高机体免疫功能的方法，包括对所需机体施用药效有效量的前述组合物。
本发明组合物中的麻裂环木脂素F配伍富含TFHF的火龙果提取物可显著提高机体免疫功能，提高免疫期间血清中溶菌酶活力、白蛋白质量浓度、C3质量浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活性，所述组合物在一定程度上能够促进免疫器官生长发育，显著改善机体免疫功能，因此本发明所述组合物可以用以制备相关提高机体免疫功能的药物制剂，还可用以改善机体免疫能力，具有较好的现实意义和经济价值。
实施例2：
本优选实施例提供一种所述组合物中的火龙果提取物的制备方法，包括下述步骤：
1)提供一火龙果果皮；
2)清洗并风干该火龙果果皮，粉碎后进行冷冻干燥处理，粉碎脱水以获得一火龙果粉末；
3)进行一提取工艺，所述提取工艺包括：
301)混合步骤，系将该火龙果粉末与一咪唑类离子液体水溶液混合成一混合物；
302)提取步骤，系将该混合物在一微波辅助下制备火龙果粗提物；
303)冷冻离心步骤，系将该火龙果粗提物在一冷冻温度、一离心转速下离心一离心时间；
304)压滤步骤，系将该冷冻离心步骤获取的下层浑浊物进行针式滤器压滤处理；
305)色谱分离步骤，系将该压滤步骤获取的滤液以中压色谱塔进行色谱分离；以及
306)收集第五馏分浓缩至恒重即得，以提取溶液定容至50mL。
在本优选实施例中，所述火龙果果皮粉末能过180目筛。
在本优选实施例中，所述该咪唑类离子液体水溶液中含有[Omim]PF6和[Bmim]Br，其中所述[Omim]PF6的浓度为0.26mol/L；所述[Bmim]Br的浓度0.053mol/L。一方面咪唑类离子液体对TFHF的溶解能力比传统有机溶剂强，另一方面是因为咪唑类离子液体可以溶解植物细胞壁中的纤维素，促使TFHF有效成分释放至细胞外；合适的溶液浓度不至于产生较高的粘稠度，进而提取剂的黏度、传质阻力不至于太高而达到抑制TFHF溶出。
在本优选实施例中，所述该火龙果粉末与该咪唑类离子液体水溶液的料液比为1:24，g/mL，g/mL。
在本优选实施例中，所述该微波辅助时的微波提取功率为400W，提取温度是65℃，提取时间是20min；为了使提取过程稳定、快速升温，且不破坏黄酮类化合物的结构和活性。
在本优选实施例中，所述冷冻离心步骤中，该冷冻温度是2℃；该离心转速是22000r/min；该离心时间是10min。
在本优选实施例中，所述压滤步骤中，该针式滤器是聚四氟乙烯针式滤器(13mm×0.22μm)。
在本优选实施例中，所述色谱分离步骤中，所述中压色谱塔色谱分离的工作参数是指装填MCI微孔树脂固定相；中压色谱塔内径为45mm；制备流动相A是水，B是乙醇；分离过程中采用紫外检测器检测，检测波长为254nm；流速为45mL/min。
在本优选实施例中，所述色谱分离步骤中，所述步骤e)中的洗脱方式是：0～90min，体积浓度0％→100％B；90～120min，体积浓度100％→100％B。
在本优选实施例中，所述色谱分离步骤中，所述浓缩为真空浓缩，所述真空浓缩的条件是指真空度为0.02MPa，温度为40℃。
以本发明方法制备火龙果提取物安全易得，方法简单易操作，火龙果提取物中的火龙果总黄酮(total flavonoids of Hylocereus undatus'Foo-Lon',TFHF)的提取率达15.52mg/g以上，火龙果提取物中总黄酮的含量可达99.2wt％，具有较高的经济效益；富含TFHF的火龙果提取物除了具有较高的抗氧化能力、清除自由基能力之外，火龙果提取物还可作为免疫评估分子的辅助剂刺激抗原呈递细胞，增强免疫反应，可诱发保护性免疫反应，并被用作载体从其他病原体中传递抗原；此外，富含TFHF的火龙果提取物还可在荨麻裂环木脂素F的配伍下显著提高免疫期间血清中溶菌酶活力、白蛋白质量浓度、C3质量浓度及超氧化物歧化酶(SOD)活性，所述含有火龙果提取物和荨麻裂环木脂素F的组合物在一定程度上能够促进免疫器官生长发育，显著改善机体免疫功能。
对比实施例V3：
对比实施例V3与实施例2基本相同，不同之处在于对比实施例V3中，未经冷冻离心步骤和压滤步骤即将提取步骤获得的火龙果提取物进行色谱分离。
对比实施例V4：
对比实施例V4与实施例2基本相同，不同之处在于对比实施例V4中，所述咪唑类离子液体水溶液中仅含有0.26mol/L的[Omim]PF6。
对比实施例V5：
对比实施例V5与实施例2基本相同，不同之处在于对比实施例V5中，所述咪唑类离子液体水溶液中仅含有0.053mol/L的[Bmim]Br。
对比实施例V6：
对比实施例V6与实施例2基本相同，不同之处在于对比实施例V6中，以纯蒸馏水替代咪唑类离子液体水溶液。
对比实施例V7：
对比实施例V7与实施例2基本相同，不同之处在于对比实施例V7中，以25％乙醇溶液替代咪唑类离子液体水溶液。
对比实施例V8：
对比实施例V8与实施例2基本相同，不同之处在于对比实施例V8中，以50％乙醇溶液替代咪唑类离子液体水溶液。
对比实施例V9：
对比实施例V9与实施例2基本相同，不同之处在于对比实施例V9中，以75％乙醇溶液替代咪唑类离子液体水溶液。
对比实施例V10：
对比实施例V10与实施例2基本相同，不同之处在于对比实施例V10中，以75％甲醇溶液替代咪唑类离子液体水溶液。
对比实施例V11：
对比实施例V11与实施例2基本相同，不同之处在于对比实施例V11中，以乙酸乙酯替代咪唑类离子液体水溶液。
实验例1：
A、参照杨润亚等的方法(杨润亚,明永飞,王慧.无花果叶中总黄酮的提取及其抗氧化活性测定[J].食品科学,2010,31(16):78-82)，芦丁标准品的浓度为0.25mg/mL，采用“NaNO2-Al(NO3)3-NaOH”显色体系和紫外可见分光光度计测定芦丁标准曲线(λ＝510nm处有最大吸收峰)，如图2所示，芦丁标准品质量M与吸光度A的回归方程为A＝1.1665M-0.0062(R2＝0.999)，在0.05～0.50mg时可用于TFHF的定量测定。
B、用移液枪移取火龙果提取物待测液2mL，按照A中参考文献中的方法依次加入显色体系所用试剂并摇匀、静置，显色处理完成后在510nm波长处测定其吸光度，代入回归方程求出相应的总黄酮质量m0(mg)；测定过程中以60％乙醇溶液为校准液，经全波长扫描，咪唑类离子液体水溶液及三种有机溶剂在此波长下均无吸收峰，对待测液中黄酮类化合物质量的测定无影响。TFHF提取率计算公式为：YTFHF＝(25×m0)/m1，式中，YTFHF为TFHF的提取率(mg/g)，25是定容待测液体积与转移待测液体积之比，m1为火龙果果皮粉末样品的质量(g)。
经过测定，实施例1～2和对比实施例V3～V11中各火龙果提取物中的TFHF的提取率和火龙果提取物中TFHF的占比分别如图3和图4所示。由图3和图4可知，在本发明的优选实施例1和2中，TFHF的提取率均可达到15.35mg/g以上，火龙果提取物中TFHF的含量可达99wt％以上，明显优于水(V6)、乙醇溶液(V7～V9)、甲醇溶液(V10)和乙酸乙酯(V11)作为提取溶剂，也显著优于单独使用[Omim]PF6水溶液(V4)或[Bmim]Br(V5)，其经济效益较高，可应用于改善机体免疫功能的相关药物制剂中。
实施例12～20：
实施例12～20分别提供一种组合物，所述组合物中的各组分及其占据所述组合物的重量百分比如表1所示。
表1、实施例1与实施例12～20组合物中的各组分
注：“/”表示不存在。
实验例2：
分别对实施例1和实施例12～20中的组合物进行动物实验，详述如下：
A、实验动物及饲养管理：
取7d龄健康雏鸡，经沙门氏菌感染为阴性、健康及体重一致的肉仔鸡，取60只分为12组，每组5只重复，实验设计分别为对照组(PBS组)、后期攻毒实验用纯感染组(S组)和10组相同剂量组合物PBS溶液的样品治疗组均设20μg/(d·只)。饲养首周采用24h光照，室温35℃，从8日龄开始每天降低1℃直到25℃。8日龄起采用23L:1D光照制度，每日19:00～20:00停止光照1h。试验鸡饲喂商品饲料，0～21日龄饲喂前期料，22～26日龄饲喂中期料，营养成分符合NRC(1994)的标准，每日于8:00、14:00和20:00共投料3次，自由饮水。
B、免疫程序：
分别对10组样品治疗组施以实施例1和实施例12～20中的组合物(溶解于PBS溶液中)，从8日龄开始每隔一周进行腹腔注射50μL含有组合物的PBS溶液。每次连续3d，共注射3次，即在8、9、10日龄第1次注射；在15、16、17日龄第2次注射；在22、23、24日龄第3次注射。PBS组和S组按相同方法注射等量PBS溶液；每次注射前实验肉仔鸡禁水禁食2h，注射后1h恢复水食。
C、样品采集与预处理：
实验第29d，随机选定各实验组的5只试验鸡翅静脉采血2mL，以重复作为分析血样；血液37℃静置1h后，4℃放置过夜，低温冷冻离心机1500g离心20mmin，吸取上层血清，-20℃保存，用于血清免疫相关生理指标的测定。
D、血清免疫相关生理指标测定：
测定第3次免疫1周后即试验第29d天采集血清中免疫相关生理指标，本试验样品检测工作由北京华英生物技术研究所完成。溶菌酶活力采用血清溶菌酶活性测定试剂盒测定，C3质量浓度采用免疫透射比浊法试剂盒测定，白蛋白质量浓度采用试剂盒溴甲酚绿比色法测定，超氧化物歧化酶(SOD)活性采用超氧化物歧化酶测定试剂盒进行测定。测定结果如表2所示。
表2、组合物对肉仔鸡血清免疫相关生理指标的影响
组别/实施例 溶菌酶·U/mL 补体C3·g/L 白蛋白·g/L SOD·U/mL
PBS 188.6±22.6 0.38±0.15 14.0±1.2 72.0±8.6
S 268.5±26.8 0.57±0.18 15.5±1.5 104.6±12.9
实施例1 386.4±38.5 0.88±0.20 19.8±1.8 117.9±13.5
实施例12 282.0±28.2 0.55±0.18 15.0±1.6 103.6±12.5
实施例13 326.6±30.6 0.66±0.19 15.9±1.7 104.6±12.8
实施例14 360.4±35.9 0.80±0.20 17.2±1.8 112.6±13.1
实施例15 382.6±40.2 0.84±0.21 19.2±1.9 115.9±13.5
实施例16 345.1±35.6 0.68±0.18 16.8±1.4 108.5±13.0
实施例17 340.6±34.0 0.66±0.17 17.2±1.2 110.2±13.2
实施例18 348.2±30.2 0.75±0.20 16.9±1.6 105.9±10.2
实施例19 350.2±28.9 0.70±0.19 18.1±1.8 102.9±10.5
实施例20 342.0±30.9 0.71±0.15 17.5±1.8 106.5±10.6
由表2可知，单独使用本发明组合物中的某一组分火龙果提取物或者荨麻裂环木脂素F其对肉仔鸡的免疫增强作用均较弱，而且发现利用对比实施例中TFHF含量和提取率较低的火龙果提取物与荨麻裂环木脂素F联用对肉仔鸡的提高机体免疫力的增效亦较微弱，而本发明的优选实施例1中，由重量百分比含量为95wt％的火龙果提取物和5wt％的荨麻裂环木脂素F配伍形成的组合物则可显著提高免疫期间肉仔鸡血清中的溶菌酶活力、白蛋白质量浓度、C3质量浓度及SOD活性，在一定程度上能够促进免疫器官生长发育，显著改善机体免疫功能。
上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。
以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。

Claims (10)

1.一种可显著提高机体免疫力的组合物，所述组合物包括：
-火龙果提取物；和
-荨麻裂环木脂素F，
其中，所述火龙果提取物经咪唑类离子液体水溶液提取。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于：所述组合物中的火龙果提取物的制备方法包括下述步骤：
提供一火龙果果皮；
清洗并风干该火龙果果皮，粉碎后进行冷冻干燥处理，粉碎脱水以获得一火龙果粉末；
进行一提取工艺，所述提取工艺包括：
一混合步骤，系将该火龙果粉末与一咪唑类离子液体水溶液混合成一混合物；
一提取步骤，系将该混合物在一微波辅助下制备火龙果粗提物；
一冷冻离心步骤，系将该火龙果粗提物在一冷冻温度、一离心转速下离心一离心时间；
一压滤步骤，系将该冷冻离心步骤获取的下层浑浊物进行针式滤器压滤处理；
一色谱分离步骤，系将该压滤步骤获取的滤液以中压色谱塔进行色谱分离；以及
收集第五馏分浓缩至恒重即得。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于：所述该一咪唑类离子液体水溶液为含有[Omim]PF6和[Bmim]Br的水溶液。
4.根据权利要求3所述的组合物，其特征在于：所述该一咪唑类离子液体水溶液中，
所述[Omim]PF6的浓度为0.25～0.3mol/L；
所述[Bmim]Br的浓度为0.05～0.06mol/L。
5.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于：所述针式滤器是聚四氟乙烯针式滤器(13mm×0.22μm)。
6.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于：所述中压色谱塔色谱分离的工作参数是指装填MCI微孔树脂固定相；中压色谱塔内径为36.0～100.0mm；制备流动相A是水，B是乙醇；分离过程中采用紫外检测器检测，检测波长为254nm；流速为15.0～50.0mL/min。
7.根据权利要求1～6任一项所述的组合物，其特征在于所述组合物包括占据所述组合物重量百分比的下述组分：
-0.01～99.99wt％火龙果提取物；和
-0.01～99.99wt％荨麻裂环木脂素F。
8.权利要求1～7任一项所述组合物的用途，所述用途包括但不限于：
-所述组合物在促进机体免疫器官生长发育中的应用；和/或
-所述组合物在制备促进机体免疫器官生长发育的药物制剂中的应用；和/或
-所述组合物在改善机体免疫功能中的应用；和/或
-所述组合物在制备可改善机体免疫功能的药物制剂中的应用；和/或
-所述组合物在增加机体血清白蛋白浓度中的应用；和/或
-所述组合物在制备可增加机体血清白蛋白浓度的药物制剂中的应用。
9.一种可显著改善机体免疫功能的药物组合物，其特征在于所述药物组合物中含有药效有效量的权利要求1～7所述组合物。
10.一种可显著提高机体免疫功能的方法，其特征在于包括对所需机体施用药效有效量的权利要求1～7所述组合物。
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