CN101961424A - 普洱茶的提取物及其制备 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种中药提取物及其制备，特别涉及普洱茶的提取物及其制备，其中制备方法包括灌组逆流提取，膜过滤和离心等技术手段。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药提取物及其制备，特别涉及普洱茶的提取物及其制备。
背景技术
普洱茶是云南特有的地方名茶。是以云南原产地的大叶种晒青茶及其再加工而成两个系列：直接再加工为成品的生普和经过人工速成发酵后再加工而成的熟普，型制上又分散茶和紧压茶两类；成品后都还持续进行着自然陈化过程，具有越陈越香的独特品质。普洱茶是用优良品种云南大叶种的鲜叶制成，也叫作普洱散茶。其外形条索粗壮肥大，色泽乌润或褐红，俗称象猪肝色。滋味醇厚回甘，具有独特的陈香味儿，有“美容茶”之声誉。
普洱茶是惟一的后发酵型的茶，它的茶碱、茶多酚等对人体有害的物质在长期的发酵过程中被分化掉了，因此品性温和，对人体不刺激，还能够促进新陈代谢，加速身体内脂肪、毒素的消解和转化，现在困扰都市人的肥胖、三脂高等问题，普洱茶都能够起到很好的缓解作用，如排毒、养胃、消炎、降低胆固醇、消脂去腻、美容减肥。
普洱茶提取物属茶制品。为暗红褐色，溶于水，不溶于乙醇、甲醇、及三氯甲烷；普洱茶提取物的主要化学组分，以干基或干物率计为：茶多糖，茶褐素类，蛋白质，其余为极少量的茶叶自身的物质如茶红素、茶黄素及水溶性果胶等。普洱茶提取物营养价值高，生理活性物质丰富。
中国专利200510010871公开了一种普洱茶提取物
制备过程如下
a.称取一定量的普洱茶，粉碎至20目，加入5-10倍体积的温度为80～90℃的蒸馏水，加盖保温浸泡40分钟后过滤；
b.滤渣用3-5倍体积的温度为80～90℃的蒸馏水浸泡30分钟后过滤；
c.滤渣再用3倍体积的温度为80～90℃的蒸馏水浸泡30分钟后过滤；
d.合并三次过滤的滤液，加入无水乙醇至乙醇浓度为50％～90％的范围进行沉淀，静置24小时后进行过滤，收集沉淀物，进行真空低温干燥，真空低温为50～60℃，干燥至水分含量约为5～11％即得普洱茶提取物。普洱茶中含有茶多糖15-45％，茶褐素50-70％，蛋白质4.7-14.0％等。
以上普洱茶提取物制备方法耗醇量大，设备占用大，提取液直接过滤耗能又耗时，本发明人在对普洱茶提取物进行研究过程中，采用新的分离技术，试验出一组新的普洱茶提取物及其制备方法，这些普洱茶提取物具有疗效高，吸收好，质量稳定，同时制备方法分离效果佳，工艺简单，操作方便，成本低廉，适合工业化生产。
发明内容
本发明提供一种普洱茶提取物。
所述提取物含有的主要活性成分为茶多酚，茶多糖，茶褐素，咖啡因。各组分占提取物总重量的重量百分比为：
茶多酚12-50％，茶褐素：15-25％，咖啡因：6-8％，茶多糖：15-40％，其中四者重量百分比之和小于100％。
本发明的普洱茶提取物，制备方法如下：
取普洱茶，灌组逆流循环提取，每组由2-5罐组成；每罐沸腾煎煮提取3-8次，每次加水3-10倍，每次提取时间0.5-1.5h；每罐的第一次提取液进入储液罐，每罐的后续提取液依次作为下一罐的提取溶媒；完成提取的罐添加新的原料后进入循环，开始新的提取，提取液过滤提取液60-300目过滤，滤液自然或换热降温至30-55℃，10-30万分子量膜过滤，得膜过滤液和膜截留液；将膜截留液浓缩至固含量为5-30％的浓缩液，浓缩液一次离心，一次离心液二次离心，将膜过滤液和二次离心液单独或合并浓缩至比重1.01-1.4/55-65℃，浓缩膏干燥。
优选的制备方法如下：
取普洱茶，灌组逆流循环提取，每组由3-4罐组成；每罐沸腾煎煮提取3-5次，每次加水5-10倍，每次提取时间0.5-1.5h；每罐的第一次提取液进入储液罐，每罐的后续提取液依次作为下一罐的提取溶媒；完成提取的罐添加新的原料后进入循环，开始新的提取，提取液过滤提取液60-300目过滤，滤液自然或换热降温至30-55℃，10-30万分子量膜过滤，得膜过滤液和膜截留液；将膜截留液浓缩至固含量为5-30％的浓缩液，浓缩液用三足离心机一次离心，一次离心液用管式离心机二次离心，将膜过滤液和二次离心液单独或合并减压，温度≤70℃浓缩至比重1.01-1.4/55-65℃，浓缩膏用微波干燥、真空带式干燥或喷雾干燥。
本发明最优选的制备方法在本发明实施例中。
本发明还包括用本发明的普洱茶提取物制备的药物组合物，所述药物组合物是用上述普洱茶作为药物活性成分制备成的药物制剂。
本发明的药物组合物，根据需要可以含有药物可接受的载体，其中普洱茶作为药物活性成分，其在制剂中所占重量百分比可以是0.1-99.9％，其余为药物可接受的载体。本发明的药物制剂组合物，以单位剂量形式存在，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片，胶囊的每粒胶囊，口服液的每瓶，颗粒剂每袋，注射剂的每支等。
本发明的药物组合物可以是任何可药用的剂型，这些剂型包括：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。
本发明的药物组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。
适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。
可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。
口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。
对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。
本发明的药物组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。
本发明的药物组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量，可每日服三次，每次1-20剂，如：1-20袋或粒或片，每剂1mg-1000mg。
以下通过实验数据说明本发明的有益效果。
普洱茶降糖、减肥功能考察实验
1、试验材料
1.1试验动物：KKAy小鼠40只，雌性，7-8周龄，级别SPF级，体重33.5±1.9g，由中国医学科学院实验动物所提供。
1.2试剂与药品
普洱茶提取物(简称茶粉)：本发明实施例1，深褐色粉末，溶于水，溶解度好，避光。
阳性药：马来酸罗格列酮片
1.3实验仪器：
BIOSEN5030型血糖/乳酸分析仪
日立7080全自动生化仪
2.1实验方法
2.1空腹血糖测定方法：
所有动物均于商务九点开始禁食，禁食4h后取血，取血前1h各组动物灌胃给药，取血时剪尾取末梢血10ul，用BIOSEN5030型血糖/乳糖分析仪测定空腹血糖。
2.2分组及给药
动物适应性喂养一周后按照2.1方法测定空腹血糖，按照测定的空腹血糖值分层随机分组。40只KKAy按照空腹血糖值分层随机分组，分成4组，模型组，阳性对照组，实验组。
人群使用方案，人群拟使用剂量为3g/人/日，即0.05g/kg/d，使用途径冲泡饮用。
阳性对照组，每日给药1次，给药剂量1.33mg/kg/日，口服灌胃给药。
试验组：动物供试品饮用量达到1.5g/kgBW的剂量要求，并以此浓度的普洱茶代替每日饮用水，连续给予4周。
2.3试验步骤
2.3.1动物体重及进食情况，粪便变化情况：观察动物精神、活动、毛色、进食量、饮水量及体重变化
2.3.2空腹血糖测定：给药前及给药后每周固定时间按照2.1方法测定空腹血糖。
2.3.3糖耐量实验
实验第21天，动物按照2.1方法测定空腹血糖后，灌服葡萄糖2.5g/kg，分别于0.5h，1h、2h采血测定血糖值，计算曲线下面积(AUC)AUC＝0.5×空腹血糖+0.5h血糖+1.5×1h血糖+2h血糖。
2.3.4血清电解质测定
实验第22天时，动物禁食16h后摘眼球取血，分离血清，用XD685电解质分析仪测测定血清K离子、Na离子、Ca离子浓度。
2.3.5甘油三酯、总胆固醇测定；
实验第29天时，动物禁食16h后摘眼球取血，分离血清，用全自动生化仪测定血清甘油三酯、总胆固醇含量。
3、试验结果
3.1动物体重，进食量变化试验结果
实验期间试验动物状态良好，进食量、饮水量稳定。
实验组按照给药量1.5g/kg/日，连续自由饮用两周，进食量及体重均变化不大，各组动物体重，进食量变化结果见表1，表2。
表1动物体重变化情况(g)
| 分组 | 动物只数 | 给药剂量 | 给药前 | 第一周 | 第二周 |
| KKAy模型组 | 10 | 33.1±1.8 | 35.4±2.3 | 35.8±2.7 | |
| 阳性对照组 | 10 | 1.33g/kg/日 | 33.9±2.0 | 34.8±1.7 | 34.9±1.6 |
| 茶粉 | 10 | 1.5g/kg/日 | 32.9±2.1 | 33.2±1.3* | 34.1±1.2 |
注：与模型相比*p＜0.05。
表2各组动物进食量变化情况(g)
| 分组 | 动物只数 | 给药剂量 | 给药前 | 第一周 | 第二周 |
| KKAy模型组 | 10 | 4.5±1.1 | 5.6±1.3 | 5.3±1.6 |
| 阳性对照组 | 10 | 1.33g/kg/日 | 4.0±1.2 | 3.8±0.4 | 4.0±1.3 |
| 茶粉 | 10 | 1.5g/kg/日 | 54.2±1.3 | 4.7±0.4 | 4.4±0.8 |
3.2空腹血糖测定试验结果
结果见表3，实验组试验动物在给药7天后，空腹血糖均明显低于模型组(p＜0.01)，阳性对照组，实验组动物在给药14天后，空腹血糖均明显低于模型组(p＜0.01，p＜0.01)。可见，普洱茶具有明显降血糖作用。
表3普洱茶对空腹血糖(nmol/l)的影响
| 分组 | 给药剂量 | 给药前 | 第一周 | 第二周 |
| KKAy模型组 | 19.86±5.18 | 24.86±6.13 | 21.48±5.28 | |
| 阳性对照组 | 1.33g/kg/日 | 19.57±4.59 | 20.30±4.58** | 13.71±3.45** |
| 茶粉 | 1.5g/kg/日 | 19.67±4.75 | 16.18±2.77** | 13.33±2.31*** |
注：与模型相比**p＜0.01，***p＜0.01。
3.3糖耐量试验结果：
由表4可见，在耐糖量试验中，模型组各时点的血糖值及AUC值均高于对照组，阳性药组各时点的血糖值及AUC均低于模型组，实验组在0h、0.5h、1h及AUC值与模型组有显著差异p＜0.01，p＜0.001.，可见普洱茶提取物能够抑制小鼠口服蔗糖后血糖值的升高。
表4普洱茶提取物对糖耐量的影响
| 分组 | n | 0h | 0.5h | 1h | 2h | AUC |
| KKAy模型组 | 10 | 22.83±2.17 | 30.91±2.17 | 29.87±3.38 | 27.46±4.78 | 114.58±11.86 |
| 阳性对照组 | 10 | 13.03±3.86** | 18.38±5.39*** | 18.43±5.69*** | 13.94±3.82*** | 66.51±18.93*** |
| 茶粉 | 10 | 15.31±5.14*** | 24.37±3.88*** | 24.36±4.07** | 25.24±5.16 | 93.54±15.32** |
注：与模型组相比**p＜0.01，***p＜0.001。
3.4血清电解质测定结果
由表5可见，阳性药组可明显升高糖尿病小鼠K+、Na+、Cl-浓度(p＜0.001)，实验组可明显升高Na+、Cl-浓度(p＜0.01，p＜0.001)
表5普洱茶提取物对血清电解质的影响
| 分组 | n | K+ | Na+ | Cl- | Ca2+ |
| KKAy模型组 | 10 | 6.07±0.61 | 151.38±2.77 | 113.90±1.77 | 1.04±0.11 |
| 阳性对照组 | 10 | 7.02±0.58** | 156.19±2.17*** | 118.48±1.69*** | 1.10±0.09 |
| 茶粉 | 10 | 6.36±0.31 | 155.07±2.34** | 117.38±1.18*** | 1.16±0.06 |
3.6甘油三酯、总胆固醇测定结果
由表6可见，在给药28天时甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHOL)测定结果中，各实验组对总胆固醇含量无影响。阳性药组，普洱茶提取物高剂量组，低剂量组甘油三酯含量与模型组相比有降低作用，且有统计学差异(p＜0.05)。
表6普洱茶提取物甘油三酯、总胆固醇结果
注：与模型组比较＊p＜0.05
与正常组比较△△p＜0.01，△△△p＜0.001
实验结论
通过实验期间对各组动物进食量，饮水量及体重增长的连续观察发现，阳性药和实验组对动物进食量，体重影响不大，数值上不仅比模型组略小，并无统计学意义。从空腹血糖测定试验结果来看，普洱茶提取物都有明显的降低空腹血糖作用。酮尿酸中毒是糖尿病的严重并发症，该类病人由于胰岛素的相对或绝对缺乏，组织利用葡萄糖能力下降，脂肪分解代谢及糖原异生作用增强，肝脏生成酮体增多而造成高血糖及酮症，从而诱发一系列水、电解质及酸碱平衡紊乱。通过血清电解质的测定可以看出普洱茶提取物对糖尿病电解质紊乱有一定的调节作用。
降脂作用的考察实验中，普洱茶提取物显示可以降低甘油三酯含量。
本发明的优点在于：剧烈沸腾有利于有效成分的转化和溶出，灌组逆流提取工艺在进行大批量连续生产时可大大降低提取用水量，减轻后期浓缩成本，降低能源损耗，膜过滤产品可保障成品的冷水溶解后的澄明度，同时将浓度增大后难以继续膜过滤操作的膜截留液进行离心处理，不但线降低了后期离心的工作量还最大程度保留了普洱茶的有效成分和物质基础，常规报道的膜过滤工艺没有对膜截留液进行处理，该工艺路线可实现产业化，质量稳定可控。
有关试验表明，本发明的普洱茶提取物比现有技术疗效高，纯度高，吸收好，质量稳定，用途新颖，同时制备方法工艺简单，操作方便，成本低廉，适合工业化生产。
具体实施方式
下面以具体来说明本发明，实施例是为了便于理解本发明，而不以任何方式限制本发明的权利要求和核心内容。
实施例1普洱茶提取物的制备，其中各组分占提取物总重量的重量百分比为：
茶多酚：50.15％
茶多糖：16.37％
咖啡因：7.60％
茶褐素：23.21％。
取普洱茶，灌组逆流循环提取，每组由3罐组成；每罐沸腾煎煮提取4次，每次加水6倍，每次提取时间1h；每罐的第一次提取液进入储液罐，每罐的后续提取液依次作为下一罐的提取溶媒；完成提取的罐添加新的原料后进入循环，开始新的提取，提取液过滤提取液80目过滤，滤液自然降温至45℃，20万分子量膜过滤，得膜过滤液和膜截留液；将膜截留液在温度≤70℃下减压浓缩，得固含量为10％的浓缩液，浓缩液用三足离心机进行第一次离心，第一次离心液再用管式离心机进行第二次离心，将膜过滤液和第二次离心液在温度≤70℃下合并减压浓缩，浓缩到60℃测定比重1.14，喷雾干燥。
实施例2普洱茶提取物的制备，
取普洱茶，灌组逆流循环提取，每组由2罐组成；每罐沸腾煎煮提取3次，每次加水5倍，每次提取时间0.5h；每罐的第一次提取液进入储液罐，每罐的后续提取液依次作为下一罐的提取溶媒；完成提取的罐添加新的原料后进入循环，开始新的提取。提取液过滤提取液60目过滤，滤液自然降温至30℃，10万分子量膜过滤，得膜过滤液和膜截留液；将膜截留液在温度≤70℃下减压浓缩，得固含量为5％的浓缩液，浓缩液用三足离心机进行第一次离心，第一次离心液再用管式离心机进行第二次离心，将膜过滤液和第二次离心液在温度≤70℃下合并减压浓缩，浓缩到60℃测定比重1.01，喷雾干燥。
其中各组分占提取物总重量的重量百分比为：
茶多酚：24.65％
茶多糖：40.37％
咖啡因：7.56％
茶褐素：18.11％
检验方法如下：
茶多酚含量测定方法
酒石酸铁溶液
称取硫酸亚铁(GB 664)1.0g，酒石酸钾钠(GB 1288)5.0g，加水溶解并定容至IL，
pH7.5的磷酸缓冲液
a液1/15mol/L的磷酸氢二钠溶液：称取磷酸氢二钠(GB 1263)23.877g，加水溶解并稀释至IL。
b液1/15mol/L的磷酸二氢钾溶液：称取经110℃烘干2h的磷酸二氢钾(GB1274)9.078g，加水溶解至IL。
取a液85mL和b液15mL混匀，即得pH7.5的缓汁液。
标准溶液的配制
精确称取没食子酸乙酯250mg，溶于100mL水中作为母液，分别吸取母液2，4，6，8，10mL于10mL容量瓶中，用不定容配制成100mL中含没食子酸乙酯50，100，150，200，250mg五种不同浓度的标准溶液。
标准工作曲线的制作
准确吸取的不同浓度的没食子酸乙酯标准溶液ImL和酒石酸铁试剂5mL，置于一系列25mL的容量瓶中，用pH7.5的缓冲液定容。用水代替没食子酸乙酯作为对照，用1cm的比色杯，在540nm处测定吸光度。所测的吸光度与对应的没食子酸乙酯浓度绘制成标准工作曲线。
供试液的制备与测定
制备：精确称取茶提取物200mg样品，置于100mL烧杯中，加20～30mL90℃以上的沸水溶解，冷却，移入100mL容量瓶中，定容、过滤，弃去最初的滤液约20mL，所剩滤液为供试液。
测定：准确吸取供试液ImL，置25mL容量瓶中，加酒石酸铁溶液5ml，充分混匀，用pH7.5的磷酸缓冲液定容。以试剂空白液作参比，于540nm处测定吸光度。
结果计算
根据标准工作曲线，求出相当于试样吸光度的没食子酸乙酯相应含量；
茶多糖检验方法
供试品溶液的制备
取本品粉末约0.2g(精确至0.001g)，置10ml量瓶中，加水适量，超声20分钟溶解，冷却并加水至刻度，摇匀。精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照品溶液的制备
取D-无水葡萄糖对照品适量，精密称定(精确至0.001g)，加水溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。
标准曲线的绘制
分别精密吸取对照品溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml分别置10ml具塞试管中，分别加水至1.0ml，各精密加入5％的苯酚溶液(称取2.5g重蒸酚，加水溶解并稀释至50ml，摇匀，即得。)1.0ml，振摇混匀，加5.0ml硫酸，用微型漩涡混合仪迅速振摇混匀，室温下放置30分钟，以第1管为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VB)，在487nm波长处测定吸光度(在1小时内测定完毕)。以吸光度(Y)和质量(X)作标准曲线，回归方程为：供试品溶液的测定
精密吸取1ml供试品溶液，按照标准曲线的绘制项下，自“精密加入5％的苯酚溶液1.0ml”起，同法操作，在487nm处分别测定吸光度。
计算含量；
茶黄素、茶红素和茶褐素含量测定方法
供试液制备：准确称取0.05-1g粉末，加入沸水125ml，摇匀后在沸水浴中浸提10分钟，浸提中摇瓶一次，浸提完毕后，取出摇匀，趁热用棉花过滤于干燥的三角烧瓶中(残渣不需用水冲洗)，滤液浸放在冷水中冷至室温后，即可进行萃取和分光光度测定。
萃取：摇匀供试液，吸取25ml放在60ml分液漏斗中，加入25ml醋酸乙酯，以大致每秒钟二次的速度振摇5分钟，静止分层，分别放出水层而将醋酸乙酯层倒入具塞三角瓶中待用(分层后，中间的乳浊层弃去)。
吸取醋酸乙酯层溶液2ml，放在25ml容量瓶中，加入95％乙醇稀释至25ml，摇匀为溶液A。吸取醋酸乙酯层溶液10ml放在30ml分液漏斗中，加入2.5％NaHCO3水溶液10ml，振摇30秒钟。静置分层后，立即放出NaHCO3水层溶液并弃去，小心地把醋酸乙酯层溶液倒入具塞试管中，取该醋酸乙酯层溶液4ml，放在25ml容量瓶中，加95％乙醇稀释至25ml，摇匀为溶液C。
吸取第一次用醋酸乙酯萃取所分出的水层溶液2ml，放在25ml容量瓶中，加入2ml饱和草酸溶液和6ml蒸馏水，并用95％乙醇稀释至25ml，摇匀后溶液D。
吸取茶汤供试液10ml，放在30ml分液漏斗中，加入10ml正丁醇，振摇3分钟，静置慢慢分层后，放出下面的水层。吸取该水层溶液2ml，放在25ml容量瓶中，加入2ml饱和草酸和6ml蒸馏水，并用95％乙醇稀释至25ml，摇匀为溶液B。
比色测定
选择380nm波长，用1cm比色杯，以95％乙醇作空白对照，分别测定A、B、C、D溶液的光密度E。计算含量。
咖啡因含量测定方法：
1)、色谱条件：流动相(甲醇∶水＝30∶70)，检测波长273nm，进样量(对照品10ul，供试品5ul)，柱温(25℃)，流速(1ml/min)
2)、对照品溶液制备：取咖啡因对照品约10mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加甲醇20ml使溶解，加水定容至刻度，过滤，即得。
3)、供试品溶液制备：精密称定提取物为0.5g于100ml锥形瓶中，准确加入纯化水100ml，称重，沸水浴1h，称重，加纯化水补足重量，过滤，即得。
实施例3、普洱茶提取物的制备
取普洱茶，灌组逆流循环提取，每组由5罐组成；每罐沸腾煎煮提取8次，每次加水3倍，每次提取时间1.5h；每罐的第一次提取液进入储液罐，每罐的后续提取液依次作为下一罐的提取溶媒；完成提取的罐添加新的原料后进入循环，开始新的提取。提取液过滤提取液300目过滤，滤液换热降温至55℃，30万分子量膜过滤，得膜过滤液和膜截留液；将膜截留液在温度≤70℃下减压浓缩，得固含量为30％的浓缩液，浓缩液用三足离心机进行第一次离心，第一次离心液再用管式离心机进行第二次离心，将膜过滤液和第二次离心液在温度≤70℃下合并减压浓缩，浓缩到65℃测定比重1.4，浓缩膏微波干燥。
实施例4、普洱茶提取物的制备
取普洱茶，灌组逆流循环提取，每组由4罐组成；每罐沸腾煎煮提取5次，每次加水6倍，每次提取时间1h；每罐的第一次提取液进入储液罐，每罐的后续提取液依次作为下一罐的提取溶媒；完成提取的罐添加新的原料后进入循环，开始新的提取。提取液过滤提取液80目过滤，滤液换热降温至50℃，20万分子量膜过滤，得膜过滤液和膜截留液；将膜截留液在温度≤70℃下减压浓缩，得固含量为20％的浓缩液，浓缩液用三足离心机进行第一次离心，第一次离心液再用管式离心机进行第二次离心，将膜过滤液和第二次离心液在温度≤70℃下合并减压浓缩，浓缩到65℃测定比重1.2，浓缩膏微波干燥。
实施例5、普洱茶提取物的制备
取普洱茶，灌组逆流循环提取，每组由3罐组成；每罐沸腾煎煮提取5次，每次加水7倍，每次提取时间1h；每罐的第一次提取液进入储液罐，每罐的后续提取液依次作为下一罐的提取溶媒；完成提取的罐添加新的原料后进入循环，开始新的提取。提取液过滤提取液100目过滤，滤液换热降温至40℃，20万分子量膜过滤，得膜过滤液和膜截留液；将膜截留液在温度≤70℃下减压浓缩，得固含量为30％的浓缩液，浓缩液用三足离心机进行第一次离心，第一次离心液再用管式离心机进行第二次离心，将膜过滤液和第二次离心液在温度≤70℃下合并减压浓缩，浓缩到65℃测定比重1.13，浓缩膏真空带式干燥。
实施例6、普洱茶提取物的制备
取普洱茶，灌组逆流循环提取，每组由3罐组成；每罐沸腾煎煮提取5次，每次加水8倍，每次提取时间1h；每罐的第一次提取液进入储液罐，每罐的后续提取液依次作为下一罐的提取溶媒；完成提取的罐添加新的原料后进入循环，开始新的提取，提取液过滤提取液150目过滤，滤液换热降温至40℃，10万分子量膜过滤，得膜过滤液和膜截留液；将膜截留液在温度≤70℃下减压浓缩，得固含量为30％的浓缩液，浓缩液用三足离心机进行第一次离心，第一次离心液再用管式离心机进行第二次离心，将膜过滤液和第二次离心液在温度≤70℃下合并减压浓缩，浓缩到55℃测定比重1.15，浓缩膏真空带式干燥。
实施例7、普洱茶提取物的制备
取普洱茶，灌组逆流循环提取，每组由3罐组成；每罐沸腾煎煮提取4次，每次加水10倍，每次提取时间1.5h；每罐的第一次提取液进入储液罐，每罐的后续提取液依次作为下一罐的提取溶媒；完成提取的罐添加新的原料后进入循环，开始新的提取，提取液过滤提取液150目过滤，滤液换热降温至50℃，30万分子量膜过滤，得膜过滤液和膜截留液；将膜截留液在温度≤70℃下减压浓缩，得固含量为30％的浓缩液，浓缩液用三足离心机进行第一次离心，第一次离心液再用管式离心机进行第二次离心，将膜过滤液和第二次离心液在温度≤70℃下合并减压浓缩，浓缩到55℃测定比重1.15，浓缩膏微波干燥。
实施例8、
实施例3的提取物按照实施例2的方法检测
其中各组分占提取物总重量的重量百分比为：
茶多酚：40.36％
茶多糖：16.51％
咖啡因：6.89％
茶褐素：25.23％。
实施例9、
实施例4的提取物按照实施例2的方法检测
其中各组分占提取物总重量的重量百分比为：
茶多酚：34.65％
茶多糖：26.57％
咖啡因：7.77％
茶褐素：24.73％。
实施例10、
实施例5的提取物按照实施例2的方法检测
其中各组分占提取物总重量的重量百分比为：
茶多酚：24.98％
茶多糖：15.52％
咖啡因：6.7％
茶褐素：23.73％。
实施例11、
实施例6的提取物按照实施例2的方法检测
其中各组分占提取物总重量的重量百分比为：
茶多酚：11.95％
茶多糖：38.51％
咖啡因：7.3％
茶褐素：23.46％。
实施例12、普洱茶组合物的制备
用普洱茶提取物作为药物活性成分，根据需要可以含有药物可接受的载体，按照制剂学常规技术制备成片剂、胶囊剂、口服液、颗粒剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、注射剂、栓剂、霜剂、喷雾剂、滴丸剂、贴剂。
实施例13
现有技术中已经上市的普洱茶提取物和本发明最优选的实施例的普洱茶提取物进行含量比较，结果显示本发明的普洱茶提取物茶多酚，茶褐素，咖啡因或茶多糖等成分的组合比例更接近原茶冲泡茶水中各组分的配比，口感更天然、真实。
Claims (10)
1.一种普洱茶提取物，其特征在于，所述提取物含有的主要活性成分为茶多酚，茶多糖，茶褐素，咖啡因，各组分占提取物总重量的重量百分比为：
茶多酚：12-50％，茶褐素：15-25％，咖啡因：6-8％，茶多糖：15-40％，其中四者重量百分比之和小于100％。
2.权利要求1的提取物，其特征在于，制备方法如下：
取普洱茶，灌组逆流循环提取，每组由2-5罐组成；每罐沸腾煎煮提取3-8次，每次加水3-10倍，每次提取时间0.5-1.5h；每罐的第一次提取液进入储液罐，每罐的后续提取液依次作为下一罐的提取溶媒；完成提取的罐添加新的原料后进入循环，开始新的提取，提取液过滤提取液60-300目过滤，滤液自然或换热降温至30-55℃，10-30万分子量膜过滤，得膜过滤液和膜截留液；将膜截留液浓缩至固含量为5-30％的浓缩液，浓缩液一次离心，一次离心液二次离心，将膜过滤液和二次离心液单独或合并浓缩至比重1.01-1.4/55-65℃，浓缩膏干燥。
3.权利要求1的提取物，其特征在于，制备方法如下：
取普洱茶，灌组逆流循环提取，每组由3-4罐组成；每罐沸腾煎煮提取3-5次，每次加水5-10倍，每次提取时间0.5-1.5h；每罐的第一次提取液进入储液罐，每罐的后续提取液依次作为下一罐的提取溶媒；完成提取的罐添加新的原料后进入循环，开始新的提取，提取液过滤提取液60-300目过滤，滤液自然或换热降温至30-55℃，10-30万分子量膜过滤，得膜过滤液和膜截留液；将膜截留液浓缩至固含量为5-30％的浓缩液，浓缩液用三足离心机一次离心，一次离心液用管式离心机二次离心，将膜过滤液和二次离心液单独或合并减压，温度≤70℃浓缩至比重1.01-1.4/55-65℃，浓缩膏用微波干燥、真空带式干燥或喷雾干燥。
4.权利要求1的提取物，其特征在于，制备方法如下：
取普洱茶，灌组逆流循环提取，每组由3罐组成；每罐沸腾煎煮提取4次，每次加水6倍，每次提取时间1h；每罐的第一次提取液进入储液罐，每罐的后续提取液依次作为下一罐的提取溶媒；完成提取的罐添加新的原料后进入循环，开始新的提取，提取液过滤提取液80目过滤，滤液自然降温至45℃，20万分子量膜过滤，得膜过滤液和膜截留液；将膜截留液在温度≤70℃下减压浓缩，得固含量为10％的浓缩液，浓缩液用三足离心机进行第一次离心，第一次离心液再用管式离心机进行第二次离心，将膜过滤液和第二次离心液在温度≤70℃下合并减压浓缩，浓缩到60℃测定比重1.14，喷雾干燥。
5.含有权利要求1的提取物的药物组合物。
6.权利要求5的药物组合物，根据需要可以含有药物可接受的载体，其中普洱茶提取物作为药物活性成分，其在制剂中所占重量百分比可以是0.1-99.9％，其余为药物可接受的载体。
7.权利要求5的药物组合物，是任何可药用的剂型。
8.权利要求1的提取物和权利要求5的组合物在制备治疗糖尿病的和减肥药物中的应用。
9.权利要求1的普洱茶提取物中有效成分的含量测定方法，步骤如下茶多酚含量测定方法
酒石酸铁溶液
称取硫酸亚铁1.0g，酒石酸钾钠5.0g，加水溶解并定容至IL，
pH7.5的磷酸缓冲液
a液1/15mol/L的磷酸氢二钠溶液：称取磷酸氢二钠23.877g，加水溶解并稀释至IL；
b液1/15mol/L的磷酸二氢钾溶液：称取经110℃烘干2h的磷酸二氢钾9.078g，加水溶解至IL；
取a液85mL和b液15mL混匀，即得pH7.5的缓汁液；
标准溶液的配制
精确称取没食子酸乙酯250mg，溶于100mL水中作为母液，分别吸取母液2，4，6，8，10mL于10mL容量瓶中，用不定容配制成100mL中含没食子酸乙酯50，100，150，200，250mg五种不同浓度的标准溶液；
标准工作曲线的制作
准确吸取的不同浓度的没食子酸乙酯标准溶液ImL和酒石酸铁试剂5mL，置于一系列25mL的容量瓶中，用pH7.5的缓冲液定容；用水代替没食子酸乙酯作为对照，用1cm的比色杯，在540nm处测定吸光度；所测的吸光度与对应的没食子酸乙酯浓度绘制成标准工作曲线；
供试液的制备与测定
制备：精确称取茶提取物200mg样品置于100mL烧杯中，加20～30mL90℃以上的沸水溶解，冷却，移入100mL
容量瓶中，定容、过滤，弃去最初的滤液约20mL，所剩滤液为供试液；测定：准确吸取供试液ImL，置25mL容量瓶中，加酒石酸铁溶液5ml，充分混匀，用pH7.5的磷酸缓冲液定容；以试剂空白液作参比，于540nm处测定吸光度；
结果计算：
根据标准工作曲线，求出相当于试样吸光度的没食子酸乙酯相应含量；
茶多糖检验方法
供试品溶液的制备
取本品粉末约0.2g，置10ml量瓶中，加水适量，超声20分钟溶解，冷却并加水至刻度，摇匀；精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
对照品溶液的制备
取D-无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；
标准曲线的绘制
分别精密吸取对照品溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml分别置10ml具塞试管中，分别加水至1.0ml，各精密加入5％的苯酚溶液1.0ml，振摇混匀，加5.0ml硫酸，用微型漩涡混合仪迅速振摇混匀，室温下放置30分钟，以第1管为空白，照紫外-可见分光光度法，在487nm波长处测定吸光度；以吸光度(Y)和质量(X)作标准曲线，回归方程为：
供试品溶液的测定
精密吸取1ml供试品溶液，按照标准曲线的绘制项下，自“精密加入5％的苯酚溶液1.0ml”起，同法操作，在487nm处分别测定吸光度；
计算含量；
茶黄素、茶红素和茶褐素含量测定方法
供试液制备：准确称取0.05-1g粉末，加入沸水125ml，摇匀后在沸水浴中浸提10分钟，浸提中摇瓶一次，浸提完毕后，取出摇匀，趁热用棉花过滤于干燥的三角烧瓶中，滤液浸放在冷水中冷至室温后，即可进行萃取和分光光度测定；萃取：摇匀供试液，吸取25ml放在60ml分液漏斗中，加入25ml醋酸乙酯，以大致每秒钟二次的速度振摇5分钟，静止分层，分别放出水层而将醋酸乙酯层倒入具塞三角瓶中待用；
吸取醋酸乙酯层溶液2ml，放在25ml容量瓶中，加入95％乙醇稀释至25ml，摇匀为溶液A；吸取醋酸乙酯层溶液10ml放在30ml分液漏斗中，加入2.5％NaHCO3水溶液10ml，振摇30秒钟；静置分层后，立即放出NaHCO3水层溶液并弃去，小心地把醋酸乙酯层溶液倒入具塞试管中，取该醋酸乙酯层溶液4ml，放在25ml容量瓶中，加95％乙醇稀释至25ml，摇匀为溶液C；
吸取第一次用醋酸乙酯萃取所分出的水层溶液2ml，放在25ml容量瓶中，加入2ml饱和草酸溶液和6ml蒸馏水，并用95％乙醇稀释至25ml，摇匀后溶液D；
吸取茶汤供试液10ml，放在30ml分液漏斗中，加入10ml正丁醇，振摇3分钟，静置慢慢分层后，放出下面的水层；吸取该水层溶液2ml，放在25ml容量瓶中，加入2ml饱和草酸和6ml蒸馏水，并用95％乙醇稀释至25ml，摇匀为溶液B；
比色测定
选择380nm波长，用1cm比色杯，以95％乙醇作空白对照，分别测定A、B、C、D溶液的光密度E；计算含量。
10.权利要求1的普洱茶提取物的制备方法，步骤如下
取普洱茶，灌组逆流循环提取，每组由3罐组成；每罐沸腾煎煮提取3次，每次加水5倍，每次提取时间0.5h；每罐的第一次提取液进入储液罐，每罐的后续提取液依次作为下一罐的提取溶媒；完成提取的罐添加新的原料后进入循环，开始新的提取。提取液过滤提取液60目过滤，滤液自然降温至30℃，10万分子量膜过滤，得膜过滤液和膜截留液；将膜截留液在温度≤70℃下减压浓缩，得固含量为5％的浓缩液，浓缩液用三足离心机进行第一次离心，第一次离心液再用管式离心机进行第二次离心，将膜过滤液和第二次离心液在温度≤70℃下合并减压浓缩，浓缩到60℃测定比重1.01，喷雾干燥。
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