CN101961061B - 一种普洱茶提取物及制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种普洱茶提取物及制备方法和应用。普洱茶提取物有效成分含量高，咖啡因含量低，不但能够显著降低血糖，而且还降低了安全风险；该制备方法能够将有效成分有效的转化和溶出，该工艺路线简单、可操作性强、符合环保要求、成本较低、可产业化、质量稳定可控。

Description

一种普洱茶提取物及制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种茶制品，尤其涉及是一种具有降血糖的普洱茶提取物。

背景技术

近年来，由于人们生产、生活以及环境条件的变化，一方面是整体资源受到破坏、空气、水质受到不同程度的污染，部分蔬菜、水果中残留有农药，部分肉食中的饲料激素未能完全分解，大大加重了人体排毒器官胰腺的工作压力，常此以往，造成体内胰岛素生产量不足；另一方面是社会劳动生产力的大幅提高，为社会带来了极其丰富的物质产品，同时大量减轻人们的体力劳动，减少了体力消耗，体内积存热量增加，导致胰岛素消耗量增加，两方面综合作用的结果是糖尿病、脂肪肝等类疾病的发病率在大幅增加。目前，糖尿病已经成为危害人类健康的仅次于心脑血管疾病、癌，是占有第三位的疾病。据统计，世界上糖尿病的发病率为3～5％，我国的发病率为3.21％，50岁以上人群的发病率为10％。

糖尿病属于内分泌疾病，是由于体内胰岛素分泌不足，导致糖、蛋白质和水电解质代谢紊乱而引起的疾病，它直接破坏心脑、肾、眼及神经组织器官。糖尿病分1型糖尿病(type1 diabetes)和2型糖尿病(type 2 diabetes)和妊娠期糖尿病(gestational diabetes)。其中1型糖尿病多发生于青少年，其胰岛素分泌缺乏，必须依赖胰岛素治疗维持生命。2型糖尿病多见于30岁以后中、老年人，其胰岛素的分泌量并不低甚至还偏高，病因主要是机体对胰岛素不敏感(即胰岛素抵抗)。妊娠期糖尿病(gestational diabetes)是源于细胞的胰岛素抵抗，不过其胰岛素抵抗是由于妊娠期妇女分泌的激素(荷尔蒙)所导致的。妊娠期糖尿病通常在分娩后自愈。

胰岛素是人体胰腺β细胞分泌的身体内惟一的降血糖激素。胰岛素抵抗是指体内周围组织对胰岛素的敏感性降低，组织对胰岛素不敏感，外周组织如肌肉、脂肪对胰岛素促进葡萄糖摄取的作用发生了抵抗。研究发现胰岛素抵抗普遍存在于2型糖尿病中，几乎占90％以上。2型糖尿病患者在确诊之前就已经有慢性并发症发生。据统计，有50％新诊断的2型糖尿病患者已存在一种或一种以上的慢性并发症，有些患者是因为并发症才发现患糖尿病的

现在临床上应用降糖药或胰岛素进行治疗，虽然能够有效的控制血糖，但长期用药的毒副作用及不良反应也威胁到患者的安全和健康，而是这些药物的价格都比较高，患者难以接受，往往半途而废，造成更严重的后果。也有采用中药制剂降糖，俗话说“是药三分毒”，对健康也产生一定的影响，而且由于中药制剂药味极大，服用困难，患者往往坚持不下来而前功尽弃。所以说寻找一个安全有效，并能够使患者自愿长期服用的制剂是迫不及待的。

普洱茶是云南特有的地方名茶。产地气候温和，雨量充沛，云雾缭绕。普洱茶。是以云南原产地的大叶种晒青茶及其再加工而成两个系列：直接再加工为成品的生普和经过人工速成发酵后再加工而成的熟普，型制上又分散茶和紧压茶两类；成品后都还持续进行着自然陈化过程，具有越陈越香的独特品质。

普洱茶是惟一的后发酵型的茶，它的茶碱、茶多酚等对人体有害的物质在长期的发酵过程中被分化掉了，因此品性温和，对人体不刺激，还能够促进新陈代谢，加速身体内脂肪、毒素的消解和转化，现在困扰都市人的肥胖、三脂高等问题，普洱茶都能够起到很好的缓解作用，如排毒、养胃、消炎、降低胆固醇、消脂去腻、美容减肥。普洱茶中还有茶多糖，茶多酚，咖啡因等多种化学成分，其中咖啡因就达到1-4％。虽然咖啡因适度地使用有祛除疲劳、兴奋神经的作用，临床上用于治疗神经衰弱和昏迷复苏。但是，大剂量或长期使用也会对人体造成损害，特别是它也有成瘾性，一旦停用会出现精神萎顿、浑身困乏疲软等各种戒断症状，虽然其成瘾性较弱，戒断症状也不十分严重.但由于药物的耐受性而导致用药量不断增加时，咖啡因就不仅作用于大脑皮层，还能直接兴奋延髓，引起阵发性惊厥和骨骼震颤，损害肝、胃、肾等重要内脏器官，诱发呼吸道炎症、妇女乳腺瘤等疾病，甚至导致吸食者下一代智能低下，肢体畸形。因此也被列入受国家管制的精神药品范围。对于糖尿病和血脂高这些慢性病患者来说，需要长期服用药物，日积月累不仅达不到有效的治疗效果，有可能造成患者失眠，精神状态萎靡。因此，提供一种安全有效的普洱茶提取物是非常重要。

专利200510010871.2公开一种普洱茶提取物及其应用，制备过程如下

a.称取一定量的普洱茶，粉碎至20目，加入5-10倍体积的温度为80～90℃的蒸馏水，加盖保温浸泡40分钟后过滤；

b.滤渣用3-5倍体积的温度为80～90℃的蒸馏水浸泡30分钟后过滤；

c.滤渣再用3倍体积的温度为80～90℃的蒸馏水浸泡30分钟后过滤；

d.合并三次过滤的滤液，加入无水乙醇至乙醇浓度为50％～90％的范围进行沉淀，静置24小时后进行过滤，收集沉淀物，进行真空低温干燥，真空低温为50～60℃，干燥至水分含量约为5～11％即得普洱茶提取物。普洱茶中含有茶多糖15-45％，茶褐素50-70％，蛋白质4.7-14.0％等。

可见该制备工艺为中低温提取，然后将提取液过滤，过滤液减压浓缩，喷雾干燥或减压干燥而成，实行中低温提取，产品有效成分和收率都比较低；滤液直接调节含醇量，耗醇量大，对设备需求占用大。本发明人在对普洱茶提取物研究过程中，采用新的分离技术，试验出一组新的普洱茶提取物及其制备方法，这些普洱茶提取物具有安全有疗，纯度高，吸收好，质量稳定，工艺简单，操作方便，成分低廉，适合产业化生产。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种疗效确切，安全可靠的普洱茶提取物。

本发明一个目的是提供该提取物的组合物及其制剂。

本发明另一个目的是提供该提取物的制备方法。

本发明还有一个目的是提供该提取物和制剂在治疗糖尿病的用途。

本发明的普洱茶提取物含有主要活性成分为茶多酚、茶多糖、茶褐素、咖啡因。

其重量百分含量为：

茶多酚    12-55％

茶褐素    12-33％

咖啡因    0-0.5％

茶多糖    12-55％

其中四种有效成分的重量百分含量之和小于100％。

优选重量百分含量的有效成分：

茶多酚    20-35％

茶褐素    15-25％

咖啡因    0-0.3％

茶多糖    20-40％

其中四种有效成分的重量百分含量之和小于100％。

上述普洱茶提取物中余量为茶红素、茶黄素、果胶和/或蛋白质等。

上述普洱茶提取物，是由下述制备方法得到的：

取普洱茶，加水剧烈沸腾煎煮提取1-5次，煎煮时间0.5-5小时，加水总倍数5-50倍，提取液浓缩离心，离心液再用C_1-5醇提取过滤，滤饼干燥即得提取物。

所述的C_1-5醇为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、正丁醇、戊醇。优选甲醇或乙醇。

上述所述的提取液40-300目过滤(优选40-80目)，滤液浓缩至茶叶(重量)∶浓缩液(体积)＝1∶0.5-1∶3(优选1∶1)，浓缩液离心，离心液加入3-10倍量(优选8倍)甲醇或乙醇搅拌提取1-2次，每次0.5-1h，过滤，滤饼干燥即可。提取物收率为8-20％。

所述的滤液浓缩方法包括但不限于减压浓缩、常压浓缩、旋转薄膜浓缩、卧式离心薄膜浓缩、反渗透浓缩、膜浓缩、单效浓缩、双效浓缩、三效浓缩、球形浓缩等，优选温度≤70℃，减压浓缩。所述的干燥方法包括但不限于微波干燥、真空干燥、热风干燥、真空带式干燥、冷冻干燥、远红外干燥、蒸汽干燥等，优选真空干燥、真空带式干燥或热风干燥。

本发明普洱茶提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)提取：普洱茶，加水剧烈沸腾煎煮提取1-5次，总煎煮时间0.5-5小时，加水总倍数5-50倍，得提取液；

(2)浓缩：提取液40-300目过滤，滤液浓缩至茶叶∶浓缩液＝1∶0.5-1∶3，得浓缩液；

(3)滤饼制备：浓缩液离心，离心液加入C_1-5醇提取1-2次，提取时间0.5-1小时，过滤得滤饼；

(4)提取物：滤饼减压干燥即得。

上述所述的普洱茶经过浓缩干燥后，提取物收率为8-20％。

所述步骤(1)中优选加水总量为18-26倍，煎煮提取2-4次，煎煮时间2-4小时。步骤(2)中优选提取液过40-80目筛，滤液浓缩至茶叶∶浓缩液＝1∶1，得浓缩液。步骤(3)中优选浓缩液用三足离心机离心，离心液加入3-10倍量(优选8倍)甲醇或乙醇搅拌提取1-2次，每次0.5-1h，过滤，滤饼干燥即可。

具体步骤为：普洱茶，加水剧烈沸腾煎煮提取2-4次，煎煮时间2-4小时，加水总倍数18-26倍，提取液40-80目过滤，滤液在温度≤70℃减压浓缩至茶叶(重量)∶浓缩液(体积)＝1∶1，浓缩液三足离心机离心，一次离心液加入3-10倍量甲醇或乙醇搅拌提取1-2次，提取时间0.5-1h，过滤，滤饼干燥即得。

本发明中剧烈沸腾有利于有效成分的转化和溶出，该工艺路线降低了后期离心的工作量，采用离心工艺能够使产品质量稳定，浓缩后调醇降低了乙醇用量。该工艺路线成本较低、可产业化、质量稳定可控。该产品咖啡因含量很低，降低了不良反应的风险。

本发明的普洱茶提取物在食品工业、制药工业、健康保健工业或天然产品生产中的应用。

本发明普洱茶提取物在制药工业上的应用：

本发明普洱茶提取物可以制成含有普洱茶提取物为活性成分的药物组合物。

本发明的组合物，还可以制成药学上可接受的制剂，其中普洱茶提取物在药物制剂中所占重量百分比为0.1～99.9％，其余为药物可接受的载体。

本发明的药物组合物以单位剂量形式存在，所述单位剂量形式是指制剂的单位，如片剂的每片、胶囊的每粒等，

本发明的制剂包括但不限于片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、粉剂、溶液剂、注射剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。

发明的药物组合物，其口服给药的制剂可含有常用的赋形剂，诸如粘合剂、填充剂、稀释剂、压片剂、润滑剂、崩解剂、着色剂、调味剂和湿润剂，必要时可对片剂进行包衣。

适用的填充剂包括纤维素、甘露糖醇、乳糖和其它类似的填充剂。适宜的崩解剂包括淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和淀粉衍生物，例如羟基乙酸淀粉钠。适宜的润滑剂包括，例如硬脂酸镁。适宜的药物可接受的湿润剂包括十二烷基硫酸钠。可通过混合，填充，压片等常用的方法制备固体口服组合物。进行反复混合可使活性物质分布在整个使用大量填充剂的那些组合物中。口服液体制剂的形式例如可以是水性或油性悬浮液、溶液、乳剂、糖浆剂或酏剂，或者可以是一种在使用前可用水或其它适宜的载体复配的干燥产品。这种液体制剂可含有常规的添加剂，诸如悬浮剂，例如山梨醇、糖浆、甲基纤维素、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶或氢化食用脂肪，乳化剂，例如卵磷脂、脱水山梨醇一油酸酯或阿拉伯胶；非水性载体(它们可以包括食用油)，例如杏仁油、分馏椰子油、诸如甘油的酯的油性酯、丙二醇或乙醇；防腐剂，例如对羟基苯甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸，并且如果需要，可含有常规的香味剂或着色剂。

对于注射剂，制备的液体单位剂型含有本发明的活性物质和无菌载体。根据载体和浓度，可以将此化合物悬浮或者溶解。溶液的制备通常是通过将活性物质溶解在一种载体中，在将其装入一种适宜的小瓶或安瓿前过滤消毒，然后密封。辅料例如一种局部麻醉剂、防腐剂和缓冲剂也可以溶解在这种载体中。为了提高其稳定性，可在装入小瓶以后将这种组合物冰冻，并在真空下将水除去。

本发明的药物组合物，在制备成药剂时可选择性的加入适合的药物可接受的载体，所述药物可接受的载体选自：甘露醇、山梨醇、焦亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、盐酸半胱氨酸、巯基乙酸、蛋氨酸、维生素C、EDTA二钠、EDTA钙钠，一价碱金属的碳酸盐、醋酸盐、磷酸盐或其水溶液、盐酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化钠、氯化钾、乳酸钠、木糖醇、麦芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、硅衍生物、纤维素及其衍生物、藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土温80、琼脂、碳酸钙、碳酸氢钙、表面活性剂、聚乙二醇、环糊精、β-环糊精、磷脂类材料、高岭土、滑石粉、硬脂酸钙、硬脂酸镁等。

本发明的药物组合物在使用时根据病人的情况确定用法用量，可每日服三次，每次1-20剂，如：1-20袋或粒或片，每剂1mg-1000mg。

本发明的普洱茶提取物还可以在食品及保健食品上的应用。该提取物可以制成茶饮品、袋泡茶、普洱茶膏、茶饮料等。

本发明的有益效果通过下述试验例进行说明。

试验例一对正常小鼠血糖的影响

1、试验材料

1.1试验动物：KKAy小鼠40只，雌性，7-8周龄，级别SPF级，体重33.5±1.9g，由中国医学科学院实验动物所提供。

1.2试剂与药品

普洱茶提取物：本发明实施例1，深褐色粉末，溶于水，溶解度好，避光。

阳性药：马来酸罗格列酮片

1.3实验仪器：

BIOSEN5030型血糖/乳酸分析仪

日立7080全自动生化仪

2.1实验方法

2.1空腹血糖测定方法：

所有动物均于商务九点开始禁食，禁食4h后取血，取血前1h各组动物灌胃给药，取血时剪尾取末梢血10ul，用BIOSEN5030型血糖/乳糖分析仪测定空腹血糖。

2.2分组及给药

动物适应性喂养一周后按照2.1方法测定空腹血糖，按照测定的空腹血糖值分层随机分组。40只KKAy按照空腹血糖值分层随机分组，分成4组，模型组，阳性对照组，实验组。

人群使用方案，人群拟使用剂量为3g/人/日，即0.05g/kg/d，使用途径冲泡饮用。

阳性对照组，每日给药1次，给药剂量1.33mg/kg/日，口服灌胃给药。

试验组：动物供试品饮用量达到1.5g/kgBW的剂量要求，并以此浓度的普洱茶代替每日饮用水，连续给予4周。

2.3试验步骤

2.3.1动物体重及进食情况，粪便变化情况：观察动物精神、活动、毛色、进食量、饮水量及体重变化

2.3.2空腹血糖测定：给药前及给药后每周固定时间按照2.1方法测定空腹血糖。

2.3.3糖耐量实验

实验第21天，动物按照2.1方法测定空腹血糖后，灌服葡萄糖2.5g/kg，分别于0.5h，1h、2h采血测定血糖值，计算曲线下面积(AUC)AUC＝0.5×空腹血糖+0.5h血糖+1.5×1h血糖+2h血糖。

2.3.4血清电解质测定

实验第22天时，动物禁食16h后摘眼球取血，分离血清，用XD685电解质分析仪测测定血清K离子、Na离子、Ca离子浓度。

2.3.5甘油三酯、总胆固醇测定；

实验第29天时，动物禁食16h后摘眼球取血，分离血清，用全自动生化仪测定血清甘油三酯、总胆固醇含量。

3、试验结果

3.1动物体重，进食量变化试验结果

实验期间试验动物状态良好，进食量、饮水量稳定。

实验组按照给药量1.5g/kg/日，连续自由饮用两周，进食量及体重均变化不大，各组动物体重，进食量变化结果见表1，表2。

表1  动物体重变化情况(g)

分组	动物只数	给药剂量	给药前	第一周	第二周
						KKAy模型组	10		33.1±1.8	35.4±2.4	35.8±2.9
阳性对照组	10	1.33g/kg/日	33.9±2.0	34.8±1.7	34.9±1.5
						实验组	10	1.5g/kg/日	32.9±2.1	33.2±1.3*	34.1±1.2

注：与模型相比^*p＜0.05。

表2  各组动物进食量变化情况(g)

分组	动物只数	给药剂量	给药前	第一周	第二周
						KKAy模型组	10		4.5±1.0	5.2±1.2	5.4±1.5
阳性对照组	10	1.33g/kg/日	4.0±1.1	3.9±0.7	4.0±1.2
						实验组	10	1.5g/kg/日	4.2±1.3	4.7±0.9	4.4±0.8

3.2空腹血糖测定试验结果

结果见表3，实验组试验动物在给药7天后，空腹血糖均明显低于模型组(p＜0.01)，阳性对照组，实验组动物在给药14天后，空腹血糖均明显低于模型组(p＜0.01，p＜0.01)。可见，普洱茶具有明显降血糖作用。

表4  普洱茶对空腹血糖(nmol/l)的影响

分组	给药剂量	给药前	第一周	第二周
					KKAy模型组		19.86±5.18	24.86±6.18	21.48±5.29
阳性对照组	1.33g/kg/日	19.57±4.67	20.30±4.60**	13.91±3.45**
					实验组	1.5g/kg/日	19.60±4.73	16.18±2.76**	13.33±2.00***

注：与模型相比^**p＜0.01，^***p＜0.01。

3.3糖耐量试验结果：

由表4可见，在耐糖量试验中，模型组各时点的血糖值及AUC值均高于对照组，阳性药组各时点的血糖值及AUC均低于模型组，实验组在0h、0.5h、1h及AUC值与模型组有显著差异p＜0.01，p＜0.001.，可见普洱茶提取物能够抑制小鼠口服蔗糖后血糖值的升高。

表4  普洱茶提取物对糖耐量的影响

分组

n

0h

0.5h

1h

2h

AUC

KKAy模型组

10

22.83±2.17

30.91±2.17

29.87±3.27

27.46±4.99

114.58±11.76

阳性对照组

10

13.03±3.86**

18.38±5.29***

18.43±5.63***

13.94±3.82***

66.48±18.93***

试验组

10

15.32±5.39***

24.34±3.88***

24.06±4.07**

25.08±5.14

93.53±15.32**

注：与模型组相比^**p＜0.01，^***p＜0.001。

3.4血清电解质测定结果

由表5可见，阳性药组可明显升高糖尿病小鼠K^+、Na^+、Cl^-浓度(p＜0.001)，实验组可明显升高Na^+、Cl^-浓度(p＜0.01，p＜0.001)

表5  普洱茶提取物对血清电解质的影响

分组	n	K+	Na+	Cl-	Ca2+
						KKAy模型组	10	6.07±0.60	151.38±2.77	113.90±1.77	1.04±0.11
阳性对照组	10	7.02±0.57**	156.19±2.07***	118.48±1.89***	1.10±0.06
						试验组	10	6.36±0.34	155.07±2.14**	117.18±1.28***	1.06±0.08

3.6甘油三酯、总胆固醇测定结果

由表6可见，在给药28天时甘油三酯(TG)、总胆固醇(CHOL)测定结果中，各实验组对总胆固醇含量无影响。阳性药组，普洱茶提取物高剂量组，低剂量组甘油三酯含量与模型组相比有降低作用，且有统计学差异(p＜0.05)。

表6  普洱茶提取物甘油三酯、总胆固醇结果

注：与模型组比较^＊p＜0.05

与正常组比较^△△p＜0.01，^△△△p＜0.001

4、试验结论

通过实验期间对各组动物进食量，饮水量及体重增长的连续观察发现，阳性药和实验组对动物进食量，体重影响不大，数值上不仅比模型组略小，并无统计学意义。从空腹血糖测定试验结果来看，普洱茶提取物都有明显的降低空腹血糖作用。酮尿酸中毒是糖尿病的严重并发症，该类病人由于胰岛素的相对或绝对缺乏，组织利用葡萄糖能力下降，脂肪分解代谢及糖原异生作用增强，肝脏生成酮体增多而造成高血糖及酮症，从而诱发一系列水、电解质及酸碱平衡紊乱。通过血清电解质的测定可以看出普洱茶提取物对糖尿病电解质紊乱有一定的调节作用。

降脂作用的考察实验中，普洱茶提取物显示可以降低甘油三酯含量。

本发明权利要求书保护范围内所有的提取物及具体实施例中的提取物、制备方法都具有上述作用及其效果。

本发明的普洱茶提取物有效成分含量高，能够显著降低血糖，咖啡因含量低，安全性得到了保障。该制备方法能够将有效成分有效的转化和溶出，该工艺路线降低了后期离心的工作量、符合环保要求、成本较低、可产业化、质量稳定可控。

具体实施方式

下面以具体实施例来说明本发明，实施例是为了便于理解本发明，而不是以任何方式限制本发明的权利要求和核心内容。

实施例1、

普洱茶，加水剧烈沸腾煎煮提取3次，煎煮时间3小时，加水总倍数26倍，提取液80目过滤，滤液温度≤70℃减压浓缩至茶叶(重量)∶浓缩液(体积)＝1∶1，浓缩液三足离心机离心，一次离心液加入8倍量乙醇搅拌提取2次，提取时间1h，过滤，滤饼热风干燥即得。其中提取物收率为20％，经过含量测定，普洱茶提取物中含茶多酚29.20％，茶褐素22.70％、咖啡因0.17％、茶多糖39.50％、茶黄素0.17％，蛋白质果胶等杂质8.26％.

实施例2

普洱茶，加水剧烈沸腾煎煮提取4次，煎煮时间2小时，加水总倍数5倍，提取液40目过滤，滤液温度≤70℃减压浓缩至茶叶(重量)∶浓缩液(体积)＝1∶3，浓缩液三足离心机离心，一次离心液加入3倍量甲醇搅拌提取2次，提取时间0.5h，过滤，滤饼真空干燥即得。其中提取物收率为18％。经过含量测定，普洱茶提取物中含茶多酚54.59％，茶褐素12.05％、咖啡因0.3％、茶多糖24.48％、茶黄素0.05％、蛋白质果胶等杂质8.53％。

实施例3

普洱茶，加水剧烈沸腾煎煮提取5次，煎煮时间0.5小时，加水总倍数18倍，提取液80目过滤，滤液温度≤70℃减压浓缩至茶叶(重量)∶浓缩液(体积)＝1∶0.5，浓缩液三足离心机离心，一次离心液加入10倍量丙醇搅拌提取1次，提取时间0.5h，过滤，滤饼真空带式干燥即得。其中提取物收率为17％。经过含量测定，普洱茶提取物中含茶多酚35.46％，茶褐素16.51％、咖啡因0.04％、茶多糖46.05％、茶黄素0.05％。、蛋白质和果胶杂质等1.89％。

实施例4

普洱茶，加水剧烈沸腾煎煮提取1次，煎煮时间5小时，加水总倍数26倍，提取液300目过滤，滤液温度≤70℃减压浓缩至茶叶(重量)∶浓缩液(体积)＝1∶1，浓缩液三足离心机离心，一次离心液加入8倍量正丁醇搅拌提取2次，提取时间0.5h，过滤，滤饼真空带式干燥即得。其中提取物收率为19.7％，经过含量测定，普洱茶提取物中含茶多酚30.95％，茶褐素16.51％、咖啡因0.41％、茶多糖34.73％、茶红素1.91％、蛋白质果胶等杂质15.49％。

实施例5

普洱茶，加水剧烈沸腾煎煮提取3次，煎煮时间3小时，加水总倍数26倍，提取液80目过滤，滤液温度≤70℃减压浓缩至茶叶(重量)∶浓缩液(体积)＝1∶1，浓缩液三足离心机离心，一次离心液加入8倍量戊醇搅拌提取2次，提取时间1h，过滤，滤饼真空干燥即得。其中提取物收率为18％，经过含量测定，普洱茶提取物中含茶多酚20.95％，茶褐素18.28％、咖啡因0.27％、茶多糖50.23％、茶红素1.91％、蛋白质果胶等杂质8.36％。

实施例6茶多糖含量测定方法

A.1仪器与试剂

A.1.1仪器

紫外-可见分光光度计；微型漩涡混合仪；万分之一天平；超声仪。

A.1.2供试品及试剂

供试品：速溶普洱茶

试剂：重蒸酚；硫酸。

对照品：D-无水葡萄糖，中国药品生物制品检定所(供含量测定用)。

A.2试验

A.2.1供试品溶液的制备

取本品提取物粉末约0.2g(精确至0.001g)，置10ml量瓶中，加水适量，超声20分钟溶解，冷却并加水至刻度，摇匀。精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

A.2.2对照品溶液的制备

取D-无水葡萄糖对照品适量，精密称定(精确至0.001g)，加水溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液，作为对照品溶液。

A.2.3标准曲线的绘制

分别精密吸取对照品溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml分别置10ml具塞试管中，分别加水至1.0ml，各精密加入5％的苯酚溶液(称取2.5g重蒸酚，加水溶解并稀释至50ml，摇匀，即得。)1.0ml，振摇混匀，加5.0ml硫酸，用微型漩涡混合仪迅速振摇混匀，室温下放置30分钟，以第1管为空白，照紫外-可见分光光度法(中国药典2005年版一部附录VB)，在487nm波长处测定吸光度(在1小时内测定完毕)。以吸光度(Y)和质量(X)作标准曲线，回归方程为：

Y＝a·X+b

式中：

Y为对照品溶液的吸光度；

X为D-无水葡萄糖的质量(mg)；

a，b为常数。

A.2.4供试品溶液的测定

精密吸取1ml供试品溶液，按照标准曲线的绘制项下，自“精密加入5％的苯酚溶液1.0ml”起，同法操作，在487nm处分别测定吸光度。

A.2.5数据处理

按下式计算含量：

$C=\frac{10(A-b)}{a\×W}\×100\%$

式中：

C为样品中的茶多糖百分含量；

A为样品的吸光度；

W为称样量(g)；

a，b为常数。

实施例7茶多酚含量测定方法

原理：多酚类物质能与亚铁离子生成紫蓝色络合物。用分光光度法测定其含量。虽然各种儿茶素的呈色度不同，但茶多酚中的儿茶素组成范围大致相同，在此范围内，对吸光度的影响不大，故用一条标准曲线即可。此标准曲线与(一)表没食子儿茶素没食子酸酯的标准曲线一致，但因(一)表没食子儿茶素没食子酸酯不易得到，故用没食子酸乙酯。因10mg没食子酸乙酯的吸光度与15mg(一)表没食子儿茶素没食子酸酯的吸光度相等，故规定从没食子酸乙酯的标准曲线得到的量乘以1.5作为茶多酚的换算系数。

注：“(一)表”——表示“左旋顺式”。

5.2.2试剂与溶液

5.2.2.1酒石酸铁溶液

称取硫酸亚铁(GB 664)1.0g，酒石酸钾钠(GB 1288)5.0g，加水溶解并定容至IL，此液可稳定10天。

5.2.2.2pH7.5的磷酸缓冲液

a液1/15mol/L的磷酸氢二钠溶液：称取磷酸氢二钠(GB 1263)23.877g，加水溶解并稀释至IL。

b液1/15mol/L的磷酸二氢钾溶液：称取经110℃烘干2h的磷酸二氢钾(GB1274)9.078g，加水溶解至IL。

取a液85mL和b液15mL混匀，即得pH7.5的缓汁液。

5.2.2.3标准溶液的配制

精确称取没食子酸乙酯(100℃烘干燥th)250mg，溶于100mL水中作为母液，分别吸取母液2，4，6，8，10mL于10mL容量瓶中，用不定容配制成100mL中含没食子酸乙酯50，100，150，200，250mg五种不同浓度的标准溶液。

5.2.3仪器

分光光度计。

5.2.4测定步骤

5.2.4.1标准工作曲线的制作

准确吸取的不同浓度的没食子酸乙酯标准溶液ImL和酒石酸铁试剂5mL，置于一系列25mL的容量瓶中，用pH7.5的缓冲液定容。用水代替没食子酸乙酯作为对照，厢1cm的比色杯，在540nm处测定吸光度。所测的吸光度与对应的没食子酸乙酯浓度绘制成标准工作曲线。

5.2.4.2供试液的制备与测定

制备：精确称取茶提取物200mg，置于100mL烧杯中，加20～30mL90℃以上的沸水溶解，冷却，移入100mL容量瓶中，定容、过滤，弃去最初的滤液约20mL，所剩滤液为供试液。

测定：准确吸取供试液ImL，置25mL容量瓶中，加酒石酸铁溶液5ml，充分混匀，用pH7.5的磷酸缓冲液定容。以试剂空白液作参比，于540nm处测定吸光度。

5.2.4.3结果计算

根据标准工作曲线，求出相当于试样吸光度的没食子酸乙酯相应含量，按式(1)求出茶多酚含量：

茶多酚(％)＝F×1.5×100/m×(1-G)

式中：m-试样质量G-试样水分E-根据试样测得的吸光度，从标准曲线上查得的没食子酸乙酯相应含量，mg/100ml

1.5-茶多酚的换算系数。

实施例8咖啡因成分含量测定方法

(1)、色谱条件：流动相(甲醇∶水＝30∶70)，检测波长273nm，进样量(对照品10ul，供试品5ul)，柱温(25℃)，流速(1ml/min)

(2)、对照品溶液制备：取咖啡因对照品约10mg，精密称定，置100ml容量瓶中，加甲醇20ml使溶解，加水定容至刻度，过滤，即得。

(3)、供试品溶液制备：精密称定提取物为0.5g于100ml锥形瓶中，准确加入纯化水100ml，称重，沸水浴1h，称重，加纯化水补足重量，过滤，即得。

实施例8茶黄素、茶红素和茶褐素含量测定方法

原理：茶黄素、茶红素和茶褐素均溶于热水，存在于茶汤中，用醋酸乙酯可以从茶汤中把茶黄素萃取分离出来，但是有部分茶红素(SI型茶红素)也随之被提出，这部分茶红素可利用其溶于碳酸氢钠溶液进一步分离除去，SII型茶红素留在水层。茶褐素不溶于正丁醇，茶汤用正丁醇萃取后，茶黄素和茶红素都转溶到正丁醇中，茶褐素留在水层。这样各成分分离后，可用分光光度进行比色测定。

主要设备和试剂

1、分液漏斗，分光光度计，水浴，吸管，三角烧瓶，25ml容量瓶等。

2、醋酸乙酯、正丁醇、95％乙醇

3、2.5％碳酸氢钠、2.5g碳酸氢钠加水溶解后，定容至100ml。

4、饱和草酸溶液，气温20℃时，100ml水中可溶解10.2g草酸，可根据温度不同配制饱和溶液。

实验步骤

1、供试液制备：准确称取50-2000mg茶提取物，加入沸水125ml，摇匀后在沸水浴中浸提10分钟，浸提中摇瓶一次，浸提完毕后，取出摇匀，趁热用棉花过滤于干燥的三角烧瓶中(残渣不需用水冲洗)，滤液浸放在冷水中冷至室温后，即可进行萃取和分光光度测定。

2、萃取：摇匀供试液，吸取25ml放在60ml分液漏斗中，加入25ml醋酸乙酯，以大致每秒钟二次的速度振摇5分钟，静止分层，分别放出水层而将醋酸乙酯层倒入具塞三角瓶中待用(分层后，中间的乳浊层弃去)。

吸取醋酸乙酯层溶液2ml，放在25ml容量瓶中，加入95％乙醇稀释至25ml，摇匀为溶液A。吸取醋酸乙酯层溶液10ml放在30ml分液漏斗中，加入2.5％NaHCO3水溶液10ml，振摇30秒钟。静置分层后，立即放出NaHCO3水层溶液并弃去，小心地把醋酸乙酯层溶液倒入具塞试管中，取该醋酸乙酯层溶液4ml，放在25ml容量瓶中，加95％乙醇稀释至25ml，摇匀为溶液C。

吸取第一次用醋酸乙酯萃取所分出的水层溶液2ml，放在25ml容量瓶中，加入2ml饱和草酸溶液和6ml蒸馏水，并用95％乙醇稀释至25ml，摇匀后溶液D。

吸取茶汤供试液10ml，放在30ml分液漏斗中，加入10ml正丁醇，振摇3分钟，静置慢慢分层后，放出下面的水层。吸取该水层溶液2ml，放在25ml容量瓶中，加入2ml饱和草酸和6ml蒸馏水，并用95％乙醇稀释至25ml，摇匀为溶液B。

3、比色测定

选择380nm波长，用1cm比色杯，以95％乙醇作空白对照，分别测定A、B、C、D溶液的光密度E。按以下经验公式计算含量。

实施例10

取普洱茶提取物450g与异麦芽670g、葡萄糖200g、草莓果粉40g、草莓香精10g、交联聚维酮10g、硬脂酸镁10g，以上原料充分混合用适量乙醇溶液制成软材后，制粒，60℃鼓风干燥，制1000粒，整粒，压制成片，即得口腔崩解片。

实施例11

取普洱茶提取物25％，木糖醇48％，麦芽糖6％，14％环糊精，7％乳酸钙按照软胶囊常规工艺制备普洱茶软胶囊。

实施例12

普洱茶提取物5.0g与10g木糖醇，0.8g低聚异麦芽糖，10g赤藓糖醇，0.05阿斯巴甜，其余为水之城普洱茶口服液。

实施例13

取普洱茶提取物99.9％，在其中加入0.1％糊精混合均匀后，制粒，干燥即得普洱茶颗粒剂或冲剂。

实施例14

取普洱茶提取物58g，荷叶29g、罗汉果13g混合均匀制成组合物，分别过16目筛、22目筛，取中间部分分装。加外包装，即得袋泡茶。

实施例15

取普洱茶提取物58g，桑叶28g、枸杞子13g混合均匀制成组合物，分别过16目筛、22目筛，取中间部分分装。加外包装，即得袋泡茶。

Claims (5)

1.一种普洱茶提取物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)提取：普洱茶，加水剧烈沸腾煎煮提取1-5次，总煎煮时间0.5-5小时，加水总倍数5-50倍，得提取液；

(2)浓缩：提取液40-300目过滤，滤液浓缩至茶叶：浓缩液=1：0.5-1：3，得浓缩液；

(3)滤饼制备：浓缩液离心，离心液加入C_1-5醇提取1-2次，提取时间0.5-1小时，过滤得滤饼；

(4)提取物：滤饼减压干燥即得；

所述的普洱茶提取物，其包括下述重量百分含量的有效成分：茶多酚12-55％、茶褐素12-33％、咖啡因0-0.5％、茶多糖12-55％。

2.如权利要求1所述的普洱茶提取物制备方法，其特征在于，所述的提取物包括下述重量百分含量的有效成分：茶多酚20-35％、茶褐素15-25％、咖啡因0-0.3％、茶多糖20-40％其中四种有效成分的重量百分含量之和小于100％。

3.如权利要求权利要求1所述普洱茶提取物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)提取：普洱茶，加水剧烈沸腾煎煮提取2-4次，总煎煮时间2-4小时，加水总倍数18-26倍，得提取液；

(2)浓缩：提取液80目过滤，滤液浓缩至茶叶：浓缩液=1：1，得浓缩液；

(3)滤饼制备：浓缩液用三足离心机离心，离心液加入甲醇或乙醇搅拌提取1-2次，每次0.5-1h，过滤得滤饼；

(4)提取物：滤饼减压干燥，提取物收率为8-20％。

4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述步骤(3)中所述的离心液加入量3-10倍量甲醇或乙醇。

5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述的提取物在制备治疗糖尿病药物上的应用。