CN109022293B - 一种紫红曲霉菌株及其发酵产品和发酵方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种紫红曲霉菌株及其发酵产品和发酵方法，其中：本发明所述紫红曲霉菌株的菌株号为ZX26，保藏编号为CGMCC NO.15992，具有洛伐他汀产量高、桔霉素合成量低、符合食药安全标准，且遗传稳定性好的优点；所述发酵产品包括通过发酵产生的菌丝体和发酵产物洛伐他汀，具有洛伐他汀含量高，桔霉素含量低，符合食药安全标准，营养保健价值高的优点；所述方法将所述紫红曲霉菌株的种子液接种至发酵培养基中进行振荡发酵培养，所述发酵方法操作简单，成本低，便于规模化生产，进一步地，所述发酵方法经过优化后，能够极大地提所述紫红曲霉菌株生产洛伐他汀的能力。

Description

一种紫红曲霉菌株及其发酵产品和发酵方法
技术领域
本发明涉及发酵领域，具体而言，涉及一种紫红曲霉菌株及其发酵产品和发酵方法。
背景技术
洛伐他汀是3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A(HMG-CoA)还原酶抑制药，属于全面性调脂药，其可通过竞争性抑制内源性胆固醇合成限速酶HMG-CoA还原酶，阻断细胞内羟甲戊酸代谢途径，使细胞内胆固醇合成减少，从而反馈性刺激细胞膜表面低密度脂蛋白(LDL)受体数量和活性增加，使血清胆固醇清除增加、水平降低临床上主要用于降低胆固醇尤其是低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)。因在高血脂、动脉粥样硬化及心脑血管疾病的防治中因使用安全、疗效显著、不良反应少等优点，洛伐他汀已经成为治疗心血管疾病的畅销药品之一。
自从发现红曲霉中也会有洛伐他汀以来，含洛伐他汀的红曲霉的开发便成为研发热点，具有广阔的市场前景。但红曲霉生产洛伐他汀的效率较低使得其生产成本难于降低，同时，红曲霉还会产生桔霉素，对其生产利用造成不良影响。因此寻找高产洛伐他汀的红曲菌株，尤其是高产洛伐他汀、低产桔霉素的红曲菌株具有重要的意义。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种紫红曲霉(Monascus purpureus)菌株，所述紫红曲霉菌株具有洛伐他汀产量高、桔霉素合成量低、符合食药安全标准，且遗传稳定性好的优点。
本发明的第二目的在于提供一种由前述紫红曲霉菌株制成的发酵产品，所述发酵产品包括通过发酵产生的菌丝体和发酵产物洛伐他汀，具有洛伐他汀含量高，桔霉素含量低，符合食药安全标准，营养保健价值高的优点。
本发明的第三目的在于提供前述紫红曲霉菌株的发酵方法，所述发酵方法操作简单，成本低，便于规模化生产；进一步地，所述发酵方法经过优化后，能够极大地提所述紫红曲霉菌株生产洛伐他汀的能力。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
一种紫红曲霉(Monascus purpureus)菌株，所述紫红曲霉菌株的菌株号为ZX26，保藏编号为CGMCC NO.15992。
本发明还涉及：由前述紫红曲霉菌株制成的发酵产品，所述发酵产品包括通过发酵产生的菌丝体和发酵产物洛伐他汀。
本发明还涉及：前述紫红曲霉菌株的发酵方法，所述方法包括：将所述紫红曲霉菌株的种子液接种至发酵培养基中进行振荡发酵培养。
在一些具体的实施方式中，所述种子液的接种量为7～9％(例如，7％，8％或10％)，优选地，所述种子液的接种量为7％。
在一些具体的实施方式中，所述发酵培养的发酵温度为26～30℃(例如26℃、27℃、28℃、29℃或30℃)，优选地，所述发酵温度为30℃。
在一些具体的实施方式中，所述发酵培养的发酵时间为10～14天(例如10天、11天、12天、13天或14天)，优选地，所述发酵时间为10天。
在一些具体的实施方式中，所述种子液的接种量为6.8～7.2％，所述发酵温度为29.5～30.5℃，所述发酵时间为9.5～10.5天，所述发酵培养基的初始pH值为3.8～4.2。
在一些具体的实施方式中，所述种子液的接种量为7％，所述发酵温度为30℃，所述发酵时间为10天，所述发酵培养基的初始pH值为4。
在一些具体的实施方式中，所述震荡培养的转速为140～180r/min，优选为160r/min。
在一些具体的实施方式中，所述发酵培养基包括：葡萄糖，牛肉膏，NaNO3，MgS04·7H20，KH2P04和水。
在一些具体的实施方式中，所述发酵培养基包括：葡萄糖60～80g(优选70g)，牛肉膏10～20g(优选15g)，NaNO3 1～3g(优选2g)，MgS04·7H20 0.3～0.7g(优选0.5g)，KH2P04 1～2g(优选1.5g)，蒸馏水1000mL。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)本发明所述紫红曲霉菌株具有洛伐他汀产量高、桔霉素合成量低、符合食药安全标准，且遗传稳定性好的优点。
(2)本发明所述发酵产品具有洛伐他汀含量高，桔霉素含量低，符合食药安全标准，营养保健价值高的优点。
(3)本发明所述紫红曲霉菌株的发酵方法操作简单，成本低，便于规模化生产，进一步地，所述发酵方法经过优化后，能够极大地提所述紫红曲霉菌株生产洛伐他汀的能力。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为接种量对紫红曲霉菌株ZX26产洛伐他汀能力的影响；
图2为发酵温度对紫红曲霉菌株ZX26产洛伐他汀能力的影响；
图3为发酵时间对紫红曲霉菌株ZX26产洛伐他汀能力的影响；
图4为初始pH对紫红曲霉菌株ZX26产洛伐他汀能力的影响。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购买获得的常规产品。
如无特别说明，下述实施例所述PDA、种子培养基和发酵培养基的配方如下所示：
PDA培养基配方：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH 7.0。
种子培养基配方：米粉30g，葡萄糖20g，蛋白胨15g，NaNO3 2g，MgSO4·7H2O 0.5g，KH2PO4 1.5g，蒸馏水1000mL，pH自然。
发酵培养基配方：葡萄糖70g，牛肉膏15g，NaNO3 2g，MgS04·7H20 0.5g，KH2P041.5g，蒸馏水1000mL，pH自然。
实施例1
本实施例的目的在于从红曲米中分离纯化获得紫红曲霉菌株，用于筛选洛伐他汀产量的高产菌株。具体实验方法如下所示：
(1)将福建地区的红曲米磨碎，以接种环蘸取少量红曲米接种于PDA培养基平板上，28℃培养5d，以紫红曲霉的个体形态和菌落特征(菌落中心与培养皿分离，突起，不裂开，有致密气生菌丝和细密辐射状折皱，背面培养基中有点状红色素分泌)为对照，进行筛选。
(2)菌株分离：取在PDA平板上筛选后且生长良好的紫红曲霉，挑选单个菌落纯化培养于PDA培养基试管斜面，于28℃培养5d，得到斜面培养物保种备用。
实验结果：本实施例共计分离纯化获得30株紫红曲霉菌株，，分别标记菌株代号为ZX1，ZX2…ZX30。
实施例2
本实施例的目的在于，通过高效液相色谱法(HPLC)检测实施例1所述30株紫红曲霉菌株产洛伐他汀的能力。具体实验方法如下所示：
(1)样品制备
取实施例1分离纯化得到的30株紫红曲霉菌株，挑取PDA培养基试管斜面上菌落直径大小为0.5cm的菌块分别接种于种子培养基中，28℃，160r/min振荡培养3d后，按7％的接种量移入发酵培养基中，于相同条件下继续发酵7d。
发酵结束后，取2mL发酵液于50mL的离心管中，加入8mL无水甲醇。混匀放置160r/min摇床中震荡提取3h，5000r/min离心10min取上清,用0.22μm有机滤膜过滤后，即得待测样品，备用。
(2)利用HPLC检测发酵液中洛伐他汀含量
制作标准曲线：准确称取洛伐他汀标准品10.0mg，用无水甲醇定容至100mL，得到标准液，系列稀释得到5，10，20，30，40，50μg/mL，进样，通过HPLC进行测定，根据测定结果，画出洛伐他汀浓度-积分面积标准曲线，并通过Microsoft Excel软件分析处理得到线性方程。
待测样品的测定：取由前述30株紫红曲霉菌株的发酵液制得的待测样品，进样，通过HPLC测定其中洛伐他汀的含量，并计算对应发酵液中洛伐他汀的含量。
所述标准品和待测样品的HPLC检测条件均如下所示：色谱柱:ZORBAX 300SB-C18，柱长150mm,内径4.6mm，粒径5μm；流动相:V(乙腈):V(0.01％磷酸)＝65:35；检测波长237nm；进样体积:20μL；流速:1.0mL/min；柱温：30℃。
(3)回收率试验
精密量取2ml待测样品溶液，置25mL容量瓶中，分别精密加入100μg/mL的标准溶液0.5、1.0、2.0mL，加50％乙醇稀释到刻度，按前述HPLC检测方法进行测定测定，计算所述样品溶液的回收率。
实验结果：(1)标准曲线：结果显示，洛伐他汀在0～50μg/mL浓度范围内与积分面积呈线性关系y＝70.447x-42.772，R2＝0.9999，表明曲线拟合度良好。
(2)前述30株紫红曲霉的发酵产物中洛伐他汀的含量检测结果如表1所示，根据表1所示结果可知，第26号菌株(命名为ZX26)产洛伐他汀的能力最强，高达107.60mg/L。
表1紫红曲霉发酵液中洛伐他汀的检测结果
(3)回收率试验的结果显示，平均回收率为89.79％，表明HPLC法精确度高。
实施例3
本实施例的目的在于，通过高效液相色谱法(HPLC)检测实施例1所述30株紫红曲霉菌株合成桔霉素的能力。具体实验方法如下所示：
(1)样品制备
将实施例1分离纯化后得到的30株紫红曲霉分别以10％接种量接种于种子培养基中，28℃摇床振荡培养3d。之后，按7％的接种量接种到液体培养基，28℃摇床160r/min振荡培养10d。
发酵结束后，取2mL发酵液加入4mL 50％乙醇。混匀放置在60℃恒温水浴45min，冷却至室温，离心取上清，用有机滤膜过滤后，即得待测样品，备用。
(2)利用HPLC检测发酵液中桔霉素含量
制作标准曲线：取桔霉素标准品1.00mg，用无水乙醇溶解定容，配制成100μg/mL的标准溶液，系列稀释得到浓度1，10，20，40，100μg/mL的桔霉素溶液，进样测定，根据测定结果，画出桔霉素浓度-积分面积标准曲线，并通过Microsoft Excel软件分析处理得到线性方程。
待测样品的测定：取由前述30株紫红曲霉菌株的发酵液制得的待测样品，进样，通过HPLC测定其中桔霉素的含量，并计算对应发酵液中桔霉素的含量。
所述标准品和待测样品的HPLC检测条件均如下所示：色谱柱:ZORBAX 300SB-C18，柱长150mm，内径4.6mm，粒径5μm；流动相:V(乙腈):V(0.1％磷酸)＝90:10；检测波长:激发波长350nm，发射波长500nm；进样体积:50μL；流速:0.7mL/min；柱温:30℃。
(3)回收率试验
精密量取2ml待测样品溶液，置25mL容量瓶中，分别精密加入100μg/mL的标准溶液0.5、1.0、2.0mL，加50％乙醇稀释到刻度，按前述HPLC检测方法进行测定测定，计算所述样品溶液的回收率。
实验结果：(1)标准曲线：结果显示，桔霉素在0～100μg/mL浓度范围内与积分面积呈线性关系y＝1848.8x-2156.8，R2＝0.9991，表明曲线拟合度良好。
(2)前述30株紫红曲霉的发酵产物中桔霉素的含量检测结果如表2所示，根据表2所示结果可知，高产洛伐他汀的菌株ZX26桔霉素产量相对较少，产量为1.43ng/mL，符合标准。
表2紫红曲霉发酵液中桔霉素的检测结果
(3)回收率试验的结果显示，平均回收率为89.79％，表明HPLC法精确度高。
实施例4
将紫红曲霉菌株ZX26送至中国科学院微生物研究所进行菌种鉴定、分子测序以及菌株保藏，并对其遗传稳定性进行检测，具体情况如下所示：
1.紫红曲霉菌株ZX26的菌落特征：菌落在PDA上25℃培养7天，直径5cm，紫红色，绒毛状，皱裂，反面紫红色。菌丝具隔膜，多分枝，直径3-6μm。闭囊壳球形，直径25-50μm，橙红色至紫红色。子囊孢子椭圆形，5-6×4-5μm。分生孢子着生于孢梗顶端，单个或成串，近球形或倒梨形，8-11×6-8μm。
2.紫红曲霉菌株ZX26的rRNA基因的ITS1-5.8S-ITS2序列为：
AGGGTTCCTACTGATCCGAGGTCACCTAAGGAAAAAAAGGTTGGAGAGGGCAAAGGCCCCGGCCCGACCTACTGAGCGGGTGACAAAGCCCCATACGCTCGAGGACCGGACGCGGCGCCGCCACTGCCTTTCGGGCCCGTCCCCGTTGCCCGGAGGCGCAGGGGACGGCGGCCCAACACACAAGCCGCGCTTGAGGGGCAGTAATGACGCTCGGACAGGCATGCCCCCCGGAATACCAGGGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCGGAACCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTAACCGATTTGGTATGTTTACTCAGACAGCAATCCTTTTCAAAGACAGCGTTCGAGAAGATGTCTCCGGCGGGCCCCAGGGGGCCGCGCCGAAGCAACAGGAGGTACAATAATCACGGGTGGGAGGTTGGGTCCCACGAAGGGGACCCGCACTCGGTAATGATCCTTCCGCAGGTTCACCTACGGAAACCTTGTTACGACTTTTACTTCCCA(SEQ ID NO:1)。
3.菌株保藏：将紫红曲霉菌株ZX26于2018年7月11日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC；地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；邮编：100101)，其分类命名为紫红曲霉(Monascus purpureus)，保藏编号为CGMCC NO.15992。
4.遗传稳定性：将ZX26菌株传代培养，进行遗传稳定性实验，通过测定每一代发酵液的洛伐他汀量，来判断遗传稳定性，具体检测方法如实施例2所示，具体检测结果参见表3。表3所示结果表明，ZX26菌株传10代后，其洛伐他汀产量仍然处于较高水平，可以基本判断ZX26菌株在洛伐他汀产量方面具有遗传稳定性。
表3ZX26菌株紫红曲霉发酵液中洛伐他汀产量检测结果
实施例5
本实施例对紫红曲霉菌株ZX26的培养条件进行优化，包括单因素优化试验和多因素优化试验。具体试验方法所示：
将紫红曲霉菌株ZX26接种到种子培养基中，于28℃，160r/min振荡培养3d后，之后转接至发酵培养基，并设定初始培养条件为：发酵温度为28℃，初始pH值自然，接种量为7％，发酵时间为7d。对发酵培养的主要影响因素(接种量、发酵温度、发酵时间、初始pH值)进行单因素优化试验，测定不同条件下各发酵液的洛伐他汀产量(测定方法参见实施例2)。在50mL的发酵培养基中，接种量分别设定为6％，7％，8％，9％,10％；酵温度设定为24，26，28，30，32℃；发酵时间分别设定为6，8，10，12，14d；初始pH值设定为3.0，4.0，5.0，6.0，7.0。在此基础上，确定各水平的最佳范围，设计正交试验方案。
单因素优化试验的结果如下所示：(1)接种量对菌株ZX26的影响结果如图1所示，接种量在7～9％时，有利于伐他汀产量的合成，在7％的接种量时酶活力最高为101.62mg/L。当接种量大于9％，酶活力开始下降。分析随着接种量的增加，菌体繁殖速度加快，产洛伐他汀的量也相应增加，当接种量大于9％后，菌体需要的能量大于培养基能提供的能量，由于营养物质匮乏导其生命活力，故洛伐他汀的产量也相应减少。
(2)发酵温度对菌株ZX26的影响结果如图2所示，随着发酵温度的提高，洛伐他汀产量增加，在30℃时洛伐他汀产量达到最大值为111.47mg/L，随后洛伐他汀开始下降。分析由于菌体对温度较为敏感，温度过高或过低都会使其生命活力和洛伐他汀产量降低。
(3)发酵时间对菌株ZX26的影响结果如图3所示，随着发酵时间的增加，洛伐他汀产量也随着增加。在14d时洛伐他汀产量达到峰值为100.30mg/L，但是相对比10d时，洛伐他汀产量仅仅增加了0.63mg/L，结合实际分析，故认为最佳生长时间为10d。推测是因为在发酵初期，培养基内的营养物质充裕，菌体大量繁殖，产生大量洛伐他汀，后期培养基内的营养物质减少，同时菌体处于衰亡期，菌体数量开始减少，产生故洛伐他汀的产量也相应减少。
(4)初始pH值对菌株ZX26的影响结果如图4所示，洛伐他汀产量在初始pH值4-5范围内较为理想。当发酵液的初始pH值为4.0时，酶活力最高为87.5mg/L。当发酵过程中pH值升到6.0时，洛伐他汀产量急剧下降，说明菌株ZX26在酸性条件下，洛伐他汀产量较高。
多因素优化试验的结果如下所示：结合单因素试验的结果，以接种量、发酵温度、发酵时间、初始pH值为单因素，设计四因素三水平正交试验。结果如表4所示，极差R值大小顺序为：RB＞RD＞RA＞RC，说明发酵温度对洛伐他汀产量影响最大，其次是初始pH值、接种量、发酵时间。K值分析结果显示，4个因素的最优组合为A1B1C3D3，即接种量为7％，发酵温度为30℃，发酵时间为10d，初始pH值为4.0。根据此组合进行发酵实验验证(设置3个平行组)，得出最终发酵液中洛伐他汀含量为261.36mg/L，高于正交试验中所有的组合结果，说明该组合确实为最佳发酵条件。
表4L9(34)正交试验结果
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 北京农学院
<120> 一种紫红曲霉菌株及其发酵产品和发酵方法
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 571
<212> DNA
<213> Monascus purpureus
<400> 1
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ggaggttggg tcccacgaag gggacccgca ctcggtaatg atccttccgc aggttcacct 540
acggaaacct tgttacgact tttacttccc a 571

Claims (10)

1.一种紫红曲霉(Monascus purpureus)菌株，其特征在于，所述紫红曲霉菌株的菌株号为ZX26，保藏编号为CGMCC NO.15992。
2.由权利要求1所述紫红曲霉菌株制成的发酵产品，所述发酵产品包括通过发酵产生的菌丝体和发酵产物洛伐他汀。
3.权利要求1所述紫红曲霉菌株的发酵方法，其特征在于，所述方法包括：将所述紫红曲霉菌株的种子液接种至发酵培养基中进行振荡发酵培养。
4.根据权利要求3所述的发酵方法，其特征在于，所述种子液的接种量为7～9％。
5.根据权利要求3所述的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养的发酵温度为26～30℃。
6.根据权利要求3所述的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养的发酵时间为10～14天。
7.根据权利要求3所述的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养基的初始pH值为4-5。
8.根据权利要求3所述的发酵方法，其特征在于，所述种子液的接种量为7％，所述发酵培养的发酵温度为30℃，所述发酵培养的发酵时间为10天，所述发酵培养基的初始pH值为4。
9.根据权利要求3～8任一项所述的方法，其特征在于，所述振荡发酵培养的转速为140～180r/min。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述振荡发酵培养的转速为160r/min。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110016440B (zh) * 2019-05-15 2022-04-15 四川剑南春（集团）有限责任公司 紫红曲霉及其筛选方法与用途
CN111019842B (zh) * 2019-12-31 2022-06-28 光明乳业股份有限公司 一种紫色红曲霉及其用途
CN111117898B (zh) * 2019-12-31 2022-06-28 光明乳业股份有限公司 一种紫色红曲霉及其用途
CN111053195B (zh) * 2020-01-02 2023-09-19 吉林农业大学 基于前发酵紫红曲霉为优势共生菌系的大豆酱及制作方法
CN113151005B (zh) * 2021-03-17 2022-08-23 江南大学 一株高产洛伐他汀的紫色红曲菌w-4及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103224890A (zh) * 2013-02-27 2013-07-31 天津科技大学 高产洛伐他汀和γ-氨基丁酸、低产色素的红曲霉菌及其用途和由该红曲霉菌制备的功能红曲
CN104277985A (zh) * 2014-09-26 2015-01-14 浙江师范大学 红曲霉(Monascus purpureus)M-24菌株及其用于Monacolin K制备中应用
CN104388322A (zh) * 2014-12-09 2015-03-04 北京农学院 一种降脂紫红曲霉Zhang-MP的固态发酵方法
CN104561166A (zh) * 2014-12-01 2015-04-29 山东中惠食品有限公司 一种高产洛伐他汀的生产方法
CN107475125A (zh) * 2017-08-31 2017-12-15 麻城佳成生物科技有限公司 一种高产酸式莫那可林k低产橘霉素的紫红曲霉菌及应用

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103224890A (zh) * 2013-02-27 2013-07-31 天津科技大学 高产洛伐他汀和γ-氨基丁酸、低产色素的红曲霉菌及其用途和由该红曲霉菌制备的功能红曲
CN104277985A (zh) * 2014-09-26 2015-01-14 浙江师范大学 红曲霉(Monascus purpureus)M-24菌株及其用于Monacolin K制备中应用
CN104561166A (zh) * 2014-12-01 2015-04-29 山东中惠食品有限公司 一种高产洛伐他汀的生产方法
CN104388322A (zh) * 2014-12-09 2015-03-04 北京农学院 一种降脂紫红曲霉Zhang-MP的固态发酵方法
CN107475125A (zh) * 2017-08-31 2017-12-15 麻城佳成生物科技有限公司 一种高产酸式莫那可林k低产橘霉素的紫红曲霉菌及应用

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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高产Monacolin K红曲霉菌株选育及发酵条件的优化;夏诗棋等;《中国酿造》;20171231;第36卷(第8期);第62-66页 *

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