CN109006487A - 一种香根鸢尾的组织培养方法 - Google Patents

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邓清
杨燕
刘祥义
曾祥飞
赵露琴
张媛
曾琼
蒋元省
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Yunnan Chechuan Biotechnology Co Ltd
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Abstract

本发明公开了一种香根鸢尾的组织培养方法，包括(1)外植体消毒、(2)丛生芽诱导、(3)增殖培养、(4)生根培养等步骤。本发明的组织培养方法，显著提高了香根鸢尾丛生芽诱导率、增殖系数、生根率。组培效率高，成本低廉，具有大规模应用的价值。

Description

一种香根鸢尾的组织培养方法
技术领域
本发明涉及中药材组培领域，尤其涉及一种香根鸢尾的组织培养方法。
背景技术
香根鸢尾(Iris pallida Lam.)为鸢尾科鸢尾属多年生草本植物，其花大而艳丽，是常见的园林观赏性花卉，为法国国花，我国许多家庭亦将其作为庭院观赏植物。香根鸢尾花亦带有较为清香，亦被部分企业、个人做切花进入市场。同时，香根鸢尾根茎是鸢尾类最为广泛应用的芳香油提取原料，其经2-5年存放后的提取一种类紫罗兰系列的名贵香料——鸢尾浸膏、精油、凝脂等，其被称作鸢尾花奶油，亦较凝香体，广泛应用于化妆品或药品矫味剂和日用化工品调香、定香剂。目前鸢尾提取物售价一公斤10万欧元以上，被誉为香水业中的蓝色黄金。
香根鸢尾原产欧洲，后经引种栽培于我国各地。由于香根鸢尾传统繁殖方式为分株繁殖，一般栽培三年后即可进行分株，一株约可分成2-5株，即三年繁殖率为2-5。近年，由于鸢尾凝香体的高价刺激以及利润空间丰厚，国内各企业亦纷纷开展了凝香体的发酵提取与香根鸢尾的种植，但由于香根鸢尾主要靠根茎分株进行繁殖，繁殖周期长，繁殖率低、病虫害积累严重等因素，目前国内种植规模发展缓慢，国产原料的供应远不足以满足原料的市场需求。同时，香根鸢尾种间品系繁多，品质参差不齐，使得香根鸢尾不管是在其观赏性以及凝香体提取收率上均不稳定。
针对以上问题的不足，本发明利用现代生物技术，发明了一种香根鸢尾的组织培养方法，本发明繁殖周期短，繁殖率高，不受季节及气候限制，最大限度的保持优质亲本的性状，较其他生物技术操作简便，生产成本低，增殖率高。
发明内容
本发明针对现有技术的不足，发明了一种操作简便、培养周期短、增殖率高的香根鸢尾的组织培养方法，能有效降低生产成本，可为规模化种植快速提供优质种苗的繁育方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种香根鸢尾的组织培养方法，其特征在于，包含以下步骤：(1)外植体消毒、(2)丛生芽诱导、(3)增殖培养、(4)生根培养；
优选地，步骤(1)所述的外植体消毒包含以下步骤：取鸢尾带芽鳞茎，依次用3％双氧水浸泡2h，0.1％升汞+2滴吐温-80溶液消毒4～6min，0.2％次氯酸钠溶液消毒20～25min，0.1％升汞溶液消毒10～12min；
优选地，步骤(2)所述的丛生芽诱导包含以下步骤：将消毒好的带芽鳞茎用无菌纸吸去表面水分，切去伤口位置，接种于诱导培养基上，在人工控制的环境下培养；更加优选地，所述的诱导培养基为：B5+NAA 0.2～0.5mg/L+6-BA 3.0～4.0mg/L+GA3 0.2～0.5mg/L；所述的在人工控制的环境下培养包含以下步骤：培养温度为23～27℃，光照强度2000～3000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养；
优选地，步骤(3)所述的增殖培养包含以下步骤：将诱导出的丛生芽去叶并切成带单芽鳞茎，接种在增殖培养基上，在人工控制的环境下培养；更加优选地，所述的增殖培养基为：B5+NAA 0.1～0.3mg/L+6-BA 1.0～2.0mg/L+硫酸腺嘌呤10.0～20.0mg/L；所述的在人工控制的环境下培养包含以下步骤：培养温度为23～27℃，光照强度2000～3000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养；
优选地，步骤(4)所述的生根培养包含以下步骤：将诱导出的丛生芽或增殖的丛生芽切成带单芽的鳞茎，接种在生根培养基上，在人工控制的环境下培养；更加优选地，所述的生根培养基为：1/2MS+NAA 0.2～0.5mg/L+IBA 0.1～0.5mg/L+PAC 0.1～0.3mg/L+活性炭0.5～0.8g/L；所述的在人工控制的环境下培养包含以下步骤：培养温度为23～27℃，光照强度3000～4000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明的香根鸢尾的组织培养方法，仅需少量植株，经过短期(以月为单位增殖)培养后，即可迅速获得大量完整健壮无菌种苗，降低了生产成本，提高了种植效率。
(2)本发明的香根鸢尾的组织培养方法，丛生芽诱导率、增殖系数、生根率显著优于现有技术，具有极高的产业推广价值。
(3)本发明的香根鸢尾的组织培养方法，是一种无性繁殖方法，能最大程度的保持亲本性状，本发明可根据用途筛选花色、花型、花香、根茎发酵后的凝香体提取收率可定向性规模化生产优质种苗。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步的说明，但本发明并不局限于此。
实施例1
1、选取优质品系的香根鸢尾全株，用高压蒸汽灭菌后的泥炭土栽植于实验室内，每隔7天用75％多菌灵粉剂800倍液灌根，50天后取出植株，去出须根及地上部茎叶等，留带芽鳞茎作外植体。
2、将带芽鳞茎用牙刷刷去表层泥土，再用洗洁精溶液涮洗10min，漂洗4次后用自来水冲淋80min。
3、将处理好的外植体，转移至超净工作台，用3％双氧水浸泡2h，无菌水涮洗2次，0.1％升汞+2滴吐温-80溶液消毒4min，无菌水涮洗3次，0.2％次氯酸钠溶液消毒25min，无菌水涮洗3次，0.1％升汞溶液消毒12min，无菌水涮洗8次。
3、将消毒好的带芽鳞茎用无菌纸吸去表面水分，切去伤口位置，接种于B5+NAA0.2mg/L+6-BA 3.0mg/L+GA3 0.5mg/L的丛生芽诱导培养基中，在温度为27℃，以光照强度2000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养50天，记录诱导情况。
4、将诱导出的丛生芽去叶并切成带单芽鳞茎，接种于B5+NAA0.2mg/L+6-BA2.0mg/L+硫酸腺嘌呤20.0mg/L的丛生芽增殖培养基中，在温度为25℃，以光照强度2000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养40天，记录增殖情况。
5、将增殖的丛生芽切成带单芽的鳞茎，接种于1/2MS+NAA0.2mg/L+IBA 0.2mg/L+PAC 0.3mg/L+活性炭0.5g/L，在温度为27℃，以光照强度3000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养25天，记录生根情况。
实施例2
1、选取优质品系的香根鸢尾全株，用消毒后的泥炭土栽植于实验室内，每隔7天用75％多菌灵粉剂800倍液灌根，后取出植株，去出须根及地上部茎叶等，留带芽鳞茎作外植体。
2、将带芽鳞茎用牙刷刷去表层泥土，再用洗洁精溶液涮洗20min，漂洗4次后用自来水冲淋60min。
3、将处理好的外植体，转移至超净工作台，用3％双氧水浸泡2h，无菌水涮洗2次，0.1％升汞+2滴吐温-80溶液消毒5min，无菌水涮洗4次，0.2％次氯酸钠溶液消毒20in，无菌水涮洗3次，0.1％升汞溶液消毒10min，无菌水涮洗8次。
3、将消毒好的带芽鳞茎用无菌纸吸去表面水分，切去伤口位置，接种于B5+NAA0.4mg/L+6-BA4.0mg/L+GA3 0.3mg/L的丛生芽诱导培养基中，在温度为23℃，以光照强度3000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养50天，记录诱导情况。
4、将诱导出的丛生芽去叶并切成带单芽鳞茎，接种于B5+NAA0.1mg/L+6-BA1.5mg/L+硫酸腺嘌呤20.0mg/L的丛生芽增殖培养基中，在温度为25℃，以光照强度3000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养40天，记录增殖情况。
5、将增殖的丛生芽切成带单芽的鳞茎，接种于1/2MS+NAA0.5mg/L+IBA 0.3mg/L+PAC 0.2mg/L+活性炭0.7g/L，在温度为25℃，以光照强度4000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养30天，记录生根情况。
对实施例1-2、对比例1各项数据进行统计分析，结果见下表。
类目 丛生芽诱导率 增值系数 生根率
实施例1 95.9％ 9.1 100％
实施例2 96.2％ 8.9 100％
由此可知，本发明的香根鸢尾组织培养方法，丛生芽诱导率、增值系数、生根率显著高于现有技术，可以有效地降低生产成本、提高效率，具有大规模应用的价值。

Claims (8)

1.一种香根鸢尾的组织培养方法，其特征在于，包含以下步骤：(1)外植体消毒、(2)丛生芽诱导、(3)增殖培养、(4)生根培养。
2.根据权利要求1所述的一种香根鸢尾的组织培养方法，其特征在于，步骤(1)所述的外植体消毒包含以下步骤：取鸢尾带芽鳞茎，依次用3％双氧水浸泡2h，0.1％升汞+2滴吐温-80溶液消毒4～6min，0.2％次氯酸钠溶液消毒20～25min，0.1％升汞溶液消毒10～12min。
3.根据权利要求1所述的一种香根鸢尾的组织培养方法，其特征在于，步骤(2)所述的丛生芽诱导包含以下步骤：将消毒好的带芽鳞茎用无菌纸吸去表面水分，切去伤口位置，接种于诱导培养基上，在人工控制的环境下培养。
4.根据权利要求1所述的一种香根鸢尾的组织培养方法，其特征在于，步骤(3)所述的增殖培养包含以下步骤：将诱导出的丛生芽去叶并切成带单芽鳞茎，接种在增殖培养基上，在人工控制的环境下培养。
5.根据权利要求1所述的一种香根鸢尾的组织培养方法，其特征在于，步骤(4)所述的生根培养包含以下步骤：将诱导出的丛生芽或增殖的丛生芽切成带单芽的鳞茎，接种在生根培养基上，在人工控制的环境下培养。
6.根据权利要求3所述的一种香根鸢尾的组织培养方法，其特征在于，所述的诱导培养基为：B5+NAA 0.2～0.5mg/L+6-BA 3.0～4.0mg/L+GA3 0.2～0.5mg/L；所述的在人工控制的环境下培养包含以下步骤：培养温度为23～27℃，光照强度2000～3000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养。
7.根据权利要求4所述的一种香根鸢尾的组织培养方法，其特征在于，所述的增殖培养基为：B5+NAA 0.1～0.3mg/L+6-BA 1.0～2.0mg/L+硫酸腺嘌呤10.0～20.0mg/L；所述的在人工控制的环境下培养包含以下步骤：培养温度为23～27℃，光照强度2000～3000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养。
8.根据权利要求5所述的一种香根鸢尾的组织培养方法，其特征在于，所述的生根培养基为：1/2MS+NAA 0.2～0.5mg/L+IBA 0.1～0.5mg/L+PAC 0.1～0.3mg/L+活性炭0.5～0.8g/L；所述的在人工控制的环境下培养包含以下步骤：培养温度为23～27℃，光照强度3000～4000lx，单日光照时间12h进行光暗交替培养。
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