CN109006479B - 一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法 - Google Patents
一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109006479B CN109006479B CN201810828128.5A CN201810828128A CN109006479B CN 109006479 B CN109006479 B CN 109006479B CN 201810828128 A CN201810828128 A CN 201810828128A CN 109006479 B CN109006479 B CN 109006479B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- seedlings
- regenerated
- culture medium
- culture
- inducing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法，按下列步骤进行：1）幼胚的获得；2）萌发芽生根培养；3）培养苗壮苗培养；4）再生植株移栽。本发明通过在野茭结实初期进行采收，避免了成熟后的种子脱落，对未成熟种子采用幼胚培养的方法处理，诱导获得大量再生植株，通过调节培养基配方，确定最佳培养方案，茭白再生苗获得率高达到96.5%。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法。
背景技术
茭白古称菰，为水生宿根性草本植物。它属于禾本科菰属，是一种营养丰富的水生蔬菜。我们所食用的部位是茭白植株被菰黑粉菌侵染后形成的膨大肉质茎。内生真菌-菰黑粉菌成功侵染茭白植株后，会导致茭白茎部膨大。茭白表型可以分为：正常茭、雄茭及灰茭三种。但在田间发现了会开花的野茭（古称菰），但野茭结的种子却很难萌发，面临的困难主要有两方面：1.成熟的种子易脱落，难采收；2.种子很难萌发，之前我们试过各种方法，放在土里，培养基里，萌发率都很低。已有研究表明，将菰种子浸泡48h，温度34℃/30℃，光照周期比(L:D)16h:8h条件下发芽率可以达到62.9%，但萌发率仍然较低，亟需解决茭白再生苗高效获得的问题。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明涉及的目的在于提供一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法。
本发明通过以下技术方案加以实现：
所述的一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法，其特征在于按下列步骤进行：
1）幼胚的获得
野茭结实中期进行种子采收，将采收回来的种子剥掉外壳后依次用清水、酒精、无菌水、次氯酸钠溶液、无菌水进行清洗及消毒，将清洗过的种子放在灭过菌的滤纸，吸去多余水分，在解剖显微镜下用解剖针挑取无菌种胚为外植体，将种胚接种于诱导培养基中，基本培养基为改良MS,添加浓度为40g·L-1的蔗糖、9.5-10g·L-1的琼脂、0.1g·L-1的L-谷氨酰胺、0.5g·L-1的酪蛋白、1mg·L-1的IAA、2mg·L-1的2，4-D、2mg·L-1的维生素B5；培养条件：光培养，光强3000lux，光周期16/8h，温度25℃，培养两周后，得萌发芽；
2）萌发芽生根培养
将萌发芽接种于生根培养基中，生根培养基的基本培养基为1/2MS，添加浓度为25g·L-1的蔗糖、9.5-10g·L-1的琼脂、0.5g·L-1的水解酪蛋白、0.5mg·L-1的维生素B5、0.5mg·L-1的IBA，培养条件：光培养，光强3000lux，光周期16/8h，温度25℃，培养两周，得培养苗；
3）培养苗壮苗培养
两周以后，将生根的培养苗接种于壮苗培养基中，壮苗培养基的基本培养基为改良MS，添加40g·L-1的蔗糖、9.5-10g·L-1的琼脂、1.0g·L-1的6BA、0.05mg·L-1的NAA，培养条件：光培养，光强3000lux，光周期16/8h，温度25℃，培养两周，得再生植株；
4）再生植株移栽
两周后，将再生植株进行驯化移栽，将其放在驯化室6000lux强光下炼苗一周，然后取出再生植株，用温水洗净根部的培养基，将植株移栽于土中。
所述的一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法，其特征在于步骤1）中野茭结实初期是指种子脱落前成熟度为5-7成的时期，即花蕊脱落12-16天，外稃绿褐色，种皮浅褐色。
所述的一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法，其特征在于步骤1）中清洗及消毒的顺序依次为清水冲洗三次，每次3min， 75%的酒精清洗三次，每次3min，无菌水继续冲洗三次，每次5min，次氯酸钠溶液清洗10分钟，每次3min，最后用无菌水再清洗三次，每次5min。
所述的一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法，其特征在于所述次氯酸钠溶液的浓度为3%。
所述的一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法，其特征在于步骤4）中温水温度为25-30℃。
本发明通过在野茭结实初期进行采收，避免了成熟后的种子脱落，对未成熟种子采用幼胚培养的方法处理，诱导获得大量再生植株，通过调节培养基配方，确定最佳培养方案，茭白种胚萌发率高达到96.5%。
附图说明
图1为茭白幼胚拯救用种子表型；（a）为结实中期未成熟种子，（b）为脱落的成熟种子；
图2为幼胚拯救及幼苗再生图；
图3为再生幼苗生根培养图；
图4为再生苗壮苗培养图；
图5为再生苗移栽图。
具体实施方式
以下结合说明书附图对本发明做进一步详细说明，并给出具体实施方式。
实施例
利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法，按下列步骤进行：
1）幼胚的获得
如图1所示，野茭结实初期进行种子采收，即在种子脱落前，种子成熟度达5-7成熟的时期进行采收，此时，花蕊脱落12-16天，外稃绿褐色，种皮浅褐色。将采收回来的种子剥掉外壳后依次用清水、酒精、无菌水、次氯酸钠溶液、无菌水进行清洗及消毒，具体为：清水冲洗三次，每次3min， 75%的酒精清洗三次，每次3min，无菌水继续冲洗三次，每次5min，3%次氯酸钠溶液清洗10分钟，每次3min，最后用无菌水再清洗三次，每次5min，将清洗过的种子放在灭过菌的滤纸，吸去多余水分，在解剖显微镜下用解剖针挑取无菌种胚为外植体，将种胚接种于诱导培养基中，基本培养基为改良MS,添加浓度为40g·L-1的蔗糖、9.5-10g·L-1的琼脂、0.1g·L-1的L-谷氨酰胺、0.5g·L-1的酪蛋白、1mg·L-1的IAA、2mg·L-1的2，4-D、2mg·L-1的维生素B5；培养条件：光培养，光强3000lux，光周期16/8h，温度25℃，培养两周后，得萌发芽；
2）萌发芽生根培养
将萌发芽接种于生根培养基中，生根培养基的基本培养基为1/2MS，添加浓度为25g·L-1的蔗糖、9.5-10g·L-1的琼脂、0.5g·L-1的水解酪蛋白、0.5mg·L-1的维生素B5、0.5mg·L-1的IBA，培养条件：光培养，光强3000lux，光周期16/8h，温度25℃，培养两周，得培养苗；
3）培养苗壮苗培养
两周以后，将生根的培养苗接种于壮苗培养基中，壮苗培养基的基本培养基为改良MS，添加40g·L-1的蔗糖、9.5-10g·L-1的琼脂、1.0g·L-1的6BA、0.05mg·L-1的NAA，培养条件：光培养，光强3000lux，光周期16/8h，温度25℃，培养两周，得再生植株；
4）再生植株移栽
两周后，将再生植株进行驯化移栽，将其放在驯化室6000lux强光下炼苗一周，然后取出再生植株，用30-40℃温水洗净根部的培养基，将植株移栽于土中。移栽成活率达98%。
试验例1
该试验例1的方法同实施例步骤1）方法相同，不同之处在于种胚接种于诱导培养基的配方为：基本培养基为改良MS,添加浓度为40g·L-1的蔗糖、9.5-10g·L-1的琼脂、0.1g·L-1的L-谷氨酰胺、0.5g·L-1的酪蛋白、2mg·L-1的IAA、2mg·L-1的2，4-D、2mg·L-1的维生素B5；两周后统计实施例和试验例1的发芽率，结果见表1。
表1种胚萌发对比
| 实施例种胚萌发情况 | 试验例1种胚萌发情况 | |
| 胚总数 | 202 | 81 |
| 萌发数 | 195 | 75 |
| 萌发率 | 96.5% | 92.6% |
从表1可知，采用本发明配方的诱导培养基，其在其他条件相同的条件下，种胚萌发率明显高于试验例1的种胚萌发情况。
试验例2
将实施例获得的萌发芽接种到本试验例中的生根培养基中，该试验例生根培养基的基本培养基为1/2MS，添加浓度为25g·L-1的蔗糖、9.5-10g·L-1的琼脂、0.5g·L-1的水解酪蛋白、0.5mg·L-1的NAA,生根情况见图2。图2可知，实施例中的生根培养基中的苗长势良好。
试验例3
将实施例获得的生根的培养苗接种到本试验例中的壮苗培养基中，该试验例壮苗培养基的基本培养基为改良MS，添加40g·L-1的蔗糖、9.5-10g·L-1的琼脂、1mg·L-1的GA3，苗生长情况见图3。图3可知，实施例中的壮苗培养基中的苗长势良好。
本发明中改良MS培养基（不含琼脂和蔗糖）配方（mg/L）：
Potassium Nitrate/硝酸钾 1900
Ammonium Nitrate/硝酸铵 1650
Potassium Phosphate Monobasic/磷酸二氢钾 170
Magnesium Sulfate/硫酸镁 370
Calcium Chloride/氯化钙 440
Potassium Iodide/碘化钾 0.83
Boric Acid/硼酸 6.2
Manganese Sulfate/硫酸锰 22.3
Zinc Sulfate/硫酸锌 8.6
Sodium Molybdate/钼酸钠 0.25
Cupric Sulfate/硫酸铜 0.025
Cobalt Chloride.6H2O/氯化钴 0.025
Na2EDTA/乙二胺四乙酸二钠 37.3
Ferrous Sulfate/硫酸亚铁 27.8
Myo-Inositol/肌醇 100
Glycin/甘氨酸 2
Thiamine.HCl/盐酸硫胺素 0.1
Pyridoxine.HCl/盐酸吡哆醇 0.5
Nicotinic Acid/烟酸 0.5。
1/2MS培养基（不含琼脂和蔗糖）配方（mg/L）：
Potassium Nitrate/硝酸钾 9500
Ammonium Nitrate/硝酸铵 825
Potassium Phosphate Monobasic/磷酸二氢钾 85
Magnesium Sulfate/硫酸镁 185
Calcium Chloride/氯化钙 220
Potassium Iodide/碘化钾 0.83
Boric Acid/硼酸 6.2
Manganese Sulfate/硫酸锰 22.3
Zinc Sulfate/硫酸锌 8.6
Sodium Molybdate/钼酸钠 0.25
Cupric Sulfate/硫酸铜 0.025
Cobalt Chloride.6H2O/氯化钴 0.025
Na2EDTA/乙二胺四乙酸二钠 37.3
Ferrous Sulfate/硫酸亚铁 27.8
Myo-Inositol/肌醇 100
Glycin/甘氨酸 2
Thiamine.HCl/盐酸硫胺素 0.1
Pyridoxine.HCl/盐酸吡哆醇 0.5
Nicotinic Acid/烟酸 0.5。
Claims (4)
1.一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法，其特征在于按下列步骤进行：
1）幼胚的获得
野茭结实中期进行种子采收，将采收回来的种子剥掉外壳后依次用清水、酒精、无菌水、次氯酸钠溶液、无菌水进行清洗及消毒，将清洗过的种子放在灭过菌的滤纸，吸去多余水分，在解剖显微镜下用解剖针挑取无菌种胚为外植体，将种胚接种于诱导培养基中，基本培养基为改良MS,添加浓度为40g·L-1的蔗糖、9.5-10g·L-1的琼脂、0.1g·L-1的L-谷氨酰胺、0.5g·L-1的酪蛋白、1mg·L-1的IAA、2mg·L-1的2，4-D、2mg·L-1的维生素B5；培养条件：暗培养1周后，幼胚分化获得小的幼苗，然后进行光培养，光强3000lux，光周期16/8h，温度25℃，培养两周后，得绿色幼苗；
野茭结实中期是指种子脱落前成熟度程度为5-7成的时期，即花蕊脱落12-16天，外稃绿褐色，种皮浅褐色；
2）萌发芽生根培养
将萌发芽接种于生根培养基中，生根培养基的基本培养基为1/2MS，添加浓度为25g·L-1的蔗糖、9.5-10g·L-1的琼脂、0.5g·L-1的水解酪蛋白、0.5mg·L-1的维生素B5、0.5mg·L-1的IBA，培养条件：光培养，光强3000lux，光周期16/8h，温度25℃，培养两周，得培养苗；
3）培养苗壮苗培养
两周以后，将生根的培养苗接种于壮苗培养基中，壮苗培养基的基本培养基为改良MS，添加40g·L-1的蔗糖、9.5-10g·L-1的琼脂、1.0g·L-1的6BA、0.05mg·L-1的NAA，培养条件：光培养，光强3000lux，光周期16/8h，温度25℃，培养两周，得再生植株；
4）再生植株移栽
两周后，将再生植株进行驯化移栽，将其放在驯化室6000lux强光下炼苗一周，然后取出再生植株，用温水洗净根部的培养基，将植株移栽于土中。
2.如权利要求1所述的一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法，其特征在于步骤1）中清洗及消毒的顺序依次为清水冲洗三次，每次5min， 75%的酒精清洗三次，每次3min，无菌水继续冲洗三次，每次5min，次氯酸钠溶液清洗10分钟，最后用无菌水再清洗三次，每次5min。
3.如权利要求2所述的一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法，其特征在于所述次氯酸钠溶液的浓度为2%-3%。
4.如权利要求1所述的一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法，其特征在于步骤4）中水洗温水温度为25-30℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810828128.5A CN109006479B (zh) | 2018-07-25 | 2018-07-25 | 一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810828128.5A CN109006479B (zh) | 2018-07-25 | 2018-07-25 | 一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109006479A CN109006479A (zh) | 2018-12-18 |
| CN109006479B true CN109006479B (zh) | 2021-10-12 |
Family
ID=64645201
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810828128.5A Active CN109006479B (zh) | 2018-07-25 | 2018-07-25 | 一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109006479B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109691390A (zh) * | 2019-02-28 | 2019-04-30 | 浙江师范大学 | 茭白种子愈伤培养法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100694828B1 (ko) * | 2006-01-02 | 2007-03-13 | 주식회사 시내 & 들 | 염생식물의 염해지 식재방법 |
| CN101044836A (zh) * | 2007-04-28 | 2007-10-03 | 湖北大学 | 同源异源多倍体水稻的选育 |
| CN101142894A (zh) * | 2007-09-26 | 2008-03-19 | 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 | 野生稻远缘杂交高效培养优良后代的方法 |
| CN102943090A (zh) * | 2012-10-19 | 2013-02-27 | 湖北省农业科学院 | 一种籼稻高效再生及遗传转化的方法 |
| CN104871964A (zh) * | 2015-06-12 | 2015-09-02 | 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 | 一种提高野生稻与栽培稻远缘杂交胚挽救育种效率的方法 |
| CN105393916A (zh) * | 2015-10-22 | 2016-03-16 | 广西壮族自治区农业科学院水稻研究所 | 一种疣粒野生稻离体幼胚培养基 |
| CN108522279A (zh) * | 2018-03-21 | 2018-09-14 | 浙江师范大学 | 茭白种子胚直接成苗组织培养法及所用培养基 |
-
2018
- 2018-07-25 CN CN201810828128.5A patent/CN109006479B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100694828B1 (ko) * | 2006-01-02 | 2007-03-13 | 주식회사 시내 & 들 | 염생식물의 염해지 식재방법 |
| CN101044836A (zh) * | 2007-04-28 | 2007-10-03 | 湖北大学 | 同源异源多倍体水稻的选育 |
| CN101142894A (zh) * | 2007-09-26 | 2008-03-19 | 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 | 野生稻远缘杂交高效培养优良后代的方法 |
| CN102943090A (zh) * | 2012-10-19 | 2013-02-27 | 湖北省农业科学院 | 一种籼稻高效再生及遗传转化的方法 |
| CN104871964A (zh) * | 2015-06-12 | 2015-09-02 | 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所 | 一种提高野生稻与栽培稻远缘杂交胚挽救育种效率的方法 |
| CN105393916A (zh) * | 2015-10-22 | 2016-03-16 | 广西壮族自治区农业科学院水稻研究所 | 一种疣粒野生稻离体幼胚培养基 |
| CN108522279A (zh) * | 2018-03-21 | 2018-09-14 | 浙江师范大学 | 茭白种子胚直接成苗组织培养法及所用培养基 |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| EFFECT OF GIBBERELLIC ACID AND 6-BENZYLAMINOPURINE ON LIGNIFICATION OF FRESH-CUT ZIZANIA LATIFOLIA DURING REFRIGERATED (1C) STORAGE;HAIBO LUO et al.;《Journal of Food Processing and Preservation》;20121231;第1-6页 * |
| Somatic Embryogenesis and Plant Regeneration from Inflorescence Callus of Zizania latiioJia Turcz.;TRU-MING JONG et al.;《J. Plant Physiol.》;19871231;第130卷;第67-71页 * |
| Zizania latifolia Turcz. cultivated in China;H.B.Guo et al.;《Genet Resour Crop Evol》;20070103;第54卷;第1211-1217页 * |
| 光敏感雄性不育水稻不同外植体离体培养研究;吴永忠 等;《植物学报》;19911231;第33卷(第7期);第489-494页 * |
| 茭白愈伤组织诱导及基因组多态性分析;李帅 等;《长江蔬菜》;20151231;第22卷;第84-88页 * |
| 茭白的组织培养技术初探;王怀利 等;《种子》;20050930;第24卷(第9期);第90-91页 * |
| 菰(Zizania)离体培养的初步研究;杨福 等;《吉林农业大学学报》;19961231;第18卷(第1期);第15-17页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109006479A (zh) | 2018-12-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6483163B2 (ja) | パフィオペディルム・モーディータイプの種苗の組織培養と迅速増殖の方法 | |
| CN104137772A (zh) | 草莓茎尖组培脱毒的快速繁殖方法 | |
| CN111213588B (zh) | 一种五指毛桃的简易高效组培繁殖方法 | |
| CN115104536B (zh) | 一种暖地杓兰种子萌发及繁育栽培方法 | |
| CN115281081B (zh) | 一种微型试管脱毒种姜的繁育方法 | |
| CN105475137A (zh) | 一种兼顾荷花增殖与生根的组培方法 | |
| Zinnah et al. | In vitro regeneration and screening for salt tolerance in rice (Oryza sativa L.) | |
| CN113951144B (zh) | 一种促进虎斑兜兰种子无菌萌发及成苗的方法 | |
| CN109006479B (zh) | 一种利用茭白幼胚进行再生苗诱导的方法 | |
| CN111134019B (zh) | 一种齿叶冬青体细胞胚胎直接发生和植株再生的方法 | |
| CN105028206A (zh) | 一种海南石斛组织培养繁育方法 | |
| CN112931197B (zh) | 一种菠萝组织培养苗的制备方法 | |
| CN103125398A (zh) | 一种提高结球甘蓝离体再生效率的组织培养方法 | |
| CN110809935A (zh) | 一种提高香蕉种子萌发率的方法 | |
| CN107439211B (zh) | 一种缩短茄子出芽成苗时间的方法 | |
| CN113907005B (zh) | 一种简便快速高效的绿豆直接再生组培方法 | |
| CN115606503A (zh) | 一种紫菀的组织培养方法 | |
| CN113331052B (zh) | 一种利用微冻生物科技培育蓝莓优品的工艺 | |
| CN104396746A (zh) | 一种黄花贝母不定芽诱导增殖方法 | |
| CN110637725B (zh) | 一种组织培养快速繁殖木薯种苗的方法 | |
| CN110574685B (zh) | 一种无忧花的无菌苗诱导方法 | |
| CN108552059B (zh) | 一种促进马铃薯幼苗壮根的植物组织培养方法 | |
| CN103125384A (zh) | 南海杜鹃的组织培养与快速繁殖方法 | |
| CN110558230A (zh) | 一种脱毒太子参块根的组培方法 | |
| CN116235779B (zh) | 一种梳唇石斛外植体原球茎快繁方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |