CN109006475B - 一种猕猴桃微嫁接方法以及猕猴桃育苗方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种猕猴桃微嫁接方法以及猕猴桃育苗方法，属于植物嫁接技术领域。本发明以‘红阳’、‘米良1号’猕猴桃两个猕猴桃品种为嫁接对象，建立了两种猕猴桃适合试管内嫁接的快繁体系，通过对用于嫁接的外植体、初代培养基、继代培养基、生根培养基、嫁接方法以及嫁接培养基等方面的系统研究，确定了以‘米良1号’猕猴桃组培苗幼苗作为砧木，以‘红阳’猕猴桃做接穗的试管内快繁嫁接体系，明确了利于提高诱导率、组织增殖、生根数量以及嫁接苗成活率等方面的各个参数，缩短了繁殖时间，延续了两个猕猴桃品种的优良性状，同时由于对嫁接环境参数的控制，嫁接苗成活率大大提高，提高了现有猕猴桃生产体系效率。

Description

一种猕猴桃微嫁接方法以及猕猴桃育苗方法

技术领域

本发明涉及植物嫁接技术领域，具体涉及一种猕猴桃微嫁接方法以及猕猴桃育苗方法。

背景技术

猕猴桃是猕猴桃科猕猴桃属多年生落叶藤本果树，别名茅梨、奇异果、阳桃等，拥有非常突出的营养功能，V_C的含量更是十分丰富。原产我国，主产亚洲，在我国主要分布于暖温带和亚热带的山区，长江流域及其以南为主产区，其中陕、川、豫、鄂、黔等地均有分布。

世界现总猕猴桃品种有66种，中国就有62种，1978年的第一次猕猴桃科研协作会议后，我国猕猴桃产业发展迅速。现今我国猕猴桃生产总面积占世界的53％，达到11万公顷，产量占比达38％，为猕猴桃良种选育提供了充足的材料，但综合品质适宜于栽培生产继而商品化的品种数量不多。主要接穗品种有海沃德、徐香、金艳、红阳等，主要授粉品种有秦雄401(美味猕猴桃)、陶木里(美味猕猴桃)、磨山4号(中华猕猴桃)、岳-3(中华猕猴桃)等。由于猕猴桃雌雄异株，后代性状分离，不利于优良性状的保持。

近年来，猕猴桃市场需求量不断加大，传统的实生苗繁殖方式时间长、性状不稳定、成活率低，不足以满足市场要求。而且，猕猴桃产业大多还保持在利用种子获得实生苗、利用田间嫁接进行无性繁殖保持优良品种的方式上。此外，种子实生繁殖获得砧木苗生长周期长，无法确保保持母本优良性状，所以优化猕猴桃快繁体系，使之真正能做到快速育苗、工厂化育苗很有必要。

发明内容

本发明的目的在于提供一种猕猴桃微嫁接方法以及猕猴桃育苗方法，以解决现有猕猴桃培育繁殖时间长、性状不稳定、成活率低的问题。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

一种猕猴桃微嫁接方法，包括：

(1)获取组培苗:

(11)于4月取‘米良1号’猕猴桃当年生新稍茎段1.5-2.5cm，于3月取‘红阳’猕猴桃当年生新稍茎段1-1.5cm，然后分别进行灭菌处理；

(12)将‘米良1号’猕猴桃茎段于MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+0.5mg/L 2,4-D的初代培养基中进行培养，将‘红阳’猕猴桃茎段于MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA的初代培养基中进行培养，诱导愈伤组织产生进而分化出幼芽；

(13)将经过初代培养的‘米良1号’猕猴桃茎段于MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+0.5mg/L GA₃的继代培养基中进行培养增殖，将经过初代培养的‘红阳’猕猴桃茎段于MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+0.1mg/L GA₃的继代培养基中进行培养增殖；

(14)将经过继代培养的‘米良1号’猕猴桃茎段于1/2MS+0.7mg/L IBA+0.1wt％活性炭的生根培养基中诱导生根，将经过继代培养的‘红阳’猕猴桃茎段于1/2MS+0.7mg/LIBA+0.5wt％活性炭的生根培养基中诱导生根，分别得到‘米良1号’猕猴桃组培苗和‘红阳’猕猴桃组培苗；

(2)嫁接、培育：

(21)选择健壮的‘米良1号’猕猴桃组培苗，切除生长不完全的顶部、基部以及叶片，保留中段1.8-2.2cm作为砧木；选择健壮的‘红阳’猕猴桃组培苗，切除基部和叶片，保留顶端0.8-1.2cm作为接穗，保持底端切口呈楔形斜面，斜面长度为0.4-0.6cm；

(22)采用劈接法，将已经切割好的‘米良1号’砧木，从顶端向下劈切0.5-1.0cm，保持切口长度大于接穗的楔形切口长度，并且保持砧木和接穗的切口均平滑整齐；然后，将接穗插入砧木切口，保持切口严密接触，迅速用锡箔纸包裹切口，将砧木与接穗结合，获得嫁接苗；

(23)将嫁接苗竖直插于1/2MS+1.0mg/L IBA+0.5mg/L GA₃+40wt％蔗糖的嫁接培养基中培育，嫁接培养基的pH为5.8-6.2，然后用双层薄膜或塑料瓶盖将试管或组培瓶密封，置于20-30℃、光照1500-2000Lx、光照时间12-14h/d下培养40天。

本发明以‘红阳’、‘米良1号’猕猴桃两个猕猴桃品种为嫁接对象，建立了两种猕猴桃适合试管内嫁接的快繁体系，通过对用于嫁接的外植体、初代培养基、继代培养基、生根培养基、嫁接方法以及嫁接培养基等方面的系统研究，确定了以‘米良1号’猕猴桃组培苗幼苗作为砧木，以‘红阳’猕猴桃做接穗的试管内快繁嫁接体系，明确了利于提高诱导率、组织增殖、生根数量以及嫁接苗成活率等方面的各个参数，缩短了繁殖时间，延续了‘红阳’和‘米良1号’猕猴桃两个猕猴桃品种的优良性状，同时由于对嫁接环境参数的控制，嫁接苗成活率大大提高，从而大大提高了现有猕猴桃生产体系效率。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，步骤(11)中，‘米良1号’猕猴桃茎段和‘红阳’猕猴桃茎段的灭菌方法为：采用70-80v％酒精溶液处理15-25s后，用0.05-0.15v％升汞溶液处理4-6min。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，采用75v％酒精溶液处理20s后，用0.1v％升汞溶液处理5min。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，步骤(22)中：嫁接培养基的pH为6。

一种猕猴桃育苗方法，包括：

根据上述的猕猴桃微嫁接方法获得猕猴桃嫁接苗；

在炼苗移栽2周前，将装有嫁接苗的试管或组培瓶从组培室中取出，于室温下进行初步炼苗；然后在炼苗移栽1周前，先松开试管或组培瓶的双层薄膜或塑料瓶盖，1-2天后，再将试管管口或组培瓶瓶口部分敞开，然后在3-5天内将试管管口或组培瓶瓶口逐渐敞开直至全部敞开；

炼苗完成后，用流水将嫁接苗根部洗净，然后移栽至土壤中培养；其中，土壤包括质量比为1:2:1的珍珠岩、泥炭土和蛭石。

本发明具有以下有益效果：

本发明以中华猕猴桃‘红阳’、美味猕猴桃‘米良1号’两个猕猴桃品种猕猴桃当年生枝条为材料，探索建立两种猕猴桃适合试管内嫁接的快繁体系，同时以‘米良1号’猕猴桃组培苗幼苗作为砧木，以‘红阳’猕猴桃做接穗进行试管内嫁接体系的建立，摸索砧木和接穗的最适合的取材部位和嫁接方法。通过本发明的试管内嫁接技术，大大提高了现有猕猴桃生产体系效率，在一定程度上实现猕猴桃嫁接苗病毒脱除，减少田间嫁接带来的病害。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1：

本实施例的猕猴桃微嫁接方法，包括：

(1)获取组培苗:

(11)于4月取‘米良1号’猕猴桃当年生新稍茎段1.5cm，于3月取‘红阳’‘红阳’猕猴桃当年生新稍茎段1cm，然后分别进行灭菌处理；灭菌方法为：采用70v％酒精溶液处理25s后，用0.05v％升汞溶液处理6min；

(12)将‘米良1号’猕猴桃茎段于MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+0.5mg/L 2,4-D的初代培养基中进行培养，将‘红阳’猕猴桃茎段于MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA的初代培养基中进行培养，诱导愈伤组织产生进而分化出幼芽；

(13)将经过初代培养的‘米良1号’猕猴桃茎段于MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+0.5mg/L GA₃的继代培养基中进行培养增殖，将经过初代培养的‘红阳’猕猴桃茎段于MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+0.1mg/L GA₃的继代培养基中进行培养增殖；

(14)将经过继代培养的‘米良1号’猕猴桃茎段于1/2MS+0.7mg/L IBA+0.1wt％活性炭的生根培养基中诱导生根，将经过继代培养的‘红阳’猕猴桃茎段于1/2MS+0.7mg/LIBA+0.5wt％活性炭的生根培养基中诱导生根，分别得到‘米良1号’猕猴桃组培苗和‘红阳’猕猴桃组培苗；

(2)嫁接、培育：

(21)选择健壮的‘米良1号’猕猴桃组培苗，切除生长不完全的顶部、基部以及叶片，保留中段1.8cm作为砧木；选择健壮的‘红阳’猕猴桃组培苗，切除基部和叶片，保留顶端0.8cm作为接穗，保持底端切口呈楔形斜面，斜面长度为0.4cm；

(22)采用劈接法，将已经切割好的‘米良1号’砧木，从顶端向下劈切0.5cm，保持切口长度大于接穗的楔形切口长度，并且保持砧木和接穗的切口均平滑整齐；然后，将接穗插入砧木切口，保持切口严密接触，迅速用锡箔纸包裹切口，将砧木与接穗结合，获得嫁接苗；

(23)将嫁接苗竖直插于1/2MS+1.0mg/L IBA+0.5mg/L GA₃+40wt％蔗糖的嫁接培养基中培育，嫁接培养基的pH为5.8，然后用双层薄膜将试管密封，置于20℃、光照2000Lx、光照时间12h/d下培养40天。

本实施例的猕猴桃育苗方法包括：

根据上述的猕猴桃微嫁接方法获得猕猴桃嫁接苗；

在炼苗移栽2周前，将装有嫁接苗的试管或组培瓶从组培室中取出，于室温下进行初步炼苗；然后在炼苗移栽1周前，先松开试管的双层薄膜，2天后，再将试管管口部分敞开，然后在5天内将试管管口逐渐敞开直至全部敞开；

炼苗完成后，用流水将嫁接苗根部洗净，然后移栽至土壤中培养；其中，土壤包括质量比为1:2:1的珍珠岩、泥炭土和蛭石。

实施例2：

本实施例的猕猴桃微嫁接方法，包括：

(1)获取组培苗:

(11)于4月取‘米良1号’猕猴桃当年生新稍茎段2.5cm，于3月取‘红阳’猕猴桃当年生新稍茎段1.5cm，然后分别进行灭菌处理；灭菌方法为：采用80v％酒精溶液处理15s后，用0.15v％升汞溶液处理4min；

(12)将‘米良1号’猕猴桃茎段于MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+0.5mg/L 2,4-D的初代培养基中进行培养，将‘红阳’猕猴桃茎段于MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA的初代培养基中进行培养，诱导愈伤组织产生进而分化出幼芽；

(13)将经过初代培养的‘米良1号’猕猴桃茎段于MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+0.5mg/L GA₃的继代培养基中进行培养增殖，将经过初代培养的‘红阳’猕猴桃茎段于MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+0.1mg/L GA₃的继代培养基中进行培养增殖；

(14)将经过继代培养的‘米良1号’猕猴桃茎段于1/2MS+0.7mg/L IBA+0.1wt％活性炭的生根培养基中诱导生根，将经过继代培养的‘红阳’猕猴桃茎段于1/2MS+0.7mg/LIBA+0.5wt％活性炭的生根培养基中诱导生根，分别得到‘米良1号’猕猴桃组培苗和‘红阳’猕猴桃组培苗；

(2)嫁接、培育：

(21)选择健壮的‘米良1号’猕猴桃组培苗，切除生长不完全的顶部、基部以及叶片，保留中段2.2cm作为砧木；选择健壮的‘红阳’猕猴桃组培苗，切除基部和叶片，保留顶端1.2cm作为接穗，保持底端切口呈楔形斜面，斜面长度为0.6cm；

(22)采用劈接法，将已经切割好的‘米良1号’砧木，从顶端向下劈切1.0cm，保持切口长度大于接穗的楔形切口长度，并且保持砧木和接穗的切口均平滑整齐；然后，将接穗插入砧木切口，保持切口严密接触，迅速用锡箔纸包裹切口，将砧木与接穗结合，获得嫁接苗；

(23)将嫁接苗竖直插于1/2MS+1.0mg/L IBA+0.5mg/L GA₃+40wt％蔗糖的嫁接培养基中培育，嫁接培养基的pH为5.8-6.2，然后用塑料瓶盖将组培瓶密封，置于30℃、光照1500Lx、光照时间14h/d下培养40天。

本实施例的猕猴桃育苗方法包括：

根据上述的猕猴桃微嫁接方法获得猕猴桃嫁接苗；

在炼苗移栽2周前，将装有嫁接苗的试管或组培瓶从组培室中取出，于室温下进行初步炼苗；然后在炼苗移栽1周前，先松开组培瓶的塑料瓶盖，1天后，再将组培瓶瓶口部分敞开，然后在3天内将组培瓶瓶口逐渐敞开直至全部敞开；

炼苗完成后，用流水将嫁接苗根部洗净，然后移栽至土壤中培养；其中，土壤包括质量比为1:2:1的珍珠岩、泥炭土和蛭石。

实施例3：

本实施例的猕猴桃微嫁接方法，包括：

(1)获取组培苗:

(11)于4月取‘米良1号’猕猴桃当年生新稍茎段2cm，于3月取‘红阳’猕猴桃当年生新稍茎段1.2cm，然后分别进行灭菌处理；灭菌方法为：采用75v％酒精溶液处理20s后，用0.1v％升汞溶液处理5min；

(12)将‘米良1号’猕猴桃茎段于MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+0.5mg/L 2,4-D的初代培养基中进行培养，将‘红阳’猕猴桃茎段于MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA的初代培养基中进行培养，诱导愈伤组织产生进而分化出幼芽；

(13)将经过初代培养的‘米良1号’猕猴桃茎段于MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+0.5mg/L GA₃的继代培养基中进行培养增殖，将经过初代培养的‘红阳’猕猴桃茎段于MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+0.1mg/L GA₃的继代培养基中进行培养增殖；

(14)将经过继代培养的‘米良1号’猕猴桃茎段于1/2MS+0.7mg/L IBA+0.1wt％活性炭的生根培养基中诱导生根，将经过继代培养的‘红阳’猕猴桃茎段于1/2MS+0.7mg/LIBA+0.5wt％活性炭的生根培养基中诱导生根，分别得到‘米良1号’猕猴桃组培苗和‘红阳’猕猴桃组培苗；

(2)嫁接、培育：

(21)选择健壮的‘米良1号’猕猴桃组培苗，切除生长不完全的顶部、基部以及叶片，保留中段2cm作为砧木；选择健壮的‘红阳’猕猴桃组培苗，切除基部和叶片，保留顶端1cm作为接穗，保持底端切口呈楔形斜面，斜面长度为0.5cm；

(22)采用劈接法，将已经切割好的‘米良1号’砧木，从顶端向下劈切0.7cm，保持切口长度大于接穗的楔形切口长度，并且保持砧木和接穗的切口均平滑整齐；然后，将接穗插入砧木切口，保持切口严密接触，迅速用锡箔纸包裹切口，将砧木与接穗结合，获得嫁接苗；

(23)将嫁接苗竖直插于1/2MS+1.0mg/L IBA+0.5mg/L GA₃+40wt％蔗糖的嫁接培养基中培育，嫁接培养基的pH为6，然后用塑料瓶盖将组培瓶密封，置于25℃、光照1800Lx、光照时间13h/d下培养40天。

本实施例的猕猴桃育苗方法包括：

根据上述的猕猴桃微嫁接方法获得猕猴桃嫁接苗；

在炼苗移栽2周前，将装有嫁接苗的试管或组培瓶从组培室中取出，于室温下进行初步炼苗；然后在炼苗移栽1周前，先松开组培瓶的塑料瓶盖，1.5天后，再将组培瓶瓶口部分敞开，然后在4天内将组培瓶瓶口逐渐敞开直至全部敞开；

炼苗完成后，用流水将嫁接苗根部洗净，然后移栽至土壤中培养；其中，土壤包括质量比为1:2:1的珍珠岩、泥炭土和蛭石。

试验例1 pH对猕猴桃嫁接苗成活率的影响

选取与本发明实施例3不同pH的培养基作为对照组，其他条件相同。实施例和对照组每个处理接种十个猕猴桃外植体片段，重复三次，共30个外植体片段。20d后观察并统计记录嫁接苗成活数，结果见表1。

表1 pH对猕猴桃嫁接苗成活率的影响

由表1可知，猕猴桃嫁接苗成活率与培养基的pH有关。pH6.0与pH7.0处理的嫁接成活率显著高于其他处理，且其他处理的成活率之间差异显著。这可能是因为pH在植物组培中起到了重要的作用，不同的植物要求不同的酸碱度，过高或者是过低都会影响到植物的正常生长发育；同时，当pH调试不当，也会造成培养基过硬或者是过软的现象，不利于组培苗的正常生长。猕猴桃试管内嫁接的pH可以为本发明实施例设定的6.0左右比较合适，例如5.8、6、6.2。

试验例2封口材料对猕猴桃嫁接苗成活率的影响

选取与本发明实施例1和3不同封口材料的培养基作为对照组，其他条件相同。实施例和对照组每个处理接种十个猕猴桃外植体片段，重复三次，共30个外植体片段。20d后观察并统计记录嫁接苗成活数，结果见表2。

表2封口材料对猕猴桃嫁接苗成活率的影响

由表2可知，不同封口材料对猕猴桃试管内嫁接的影响比较显著。当采用本发明实施例的双层薄膜和塑料瓶盖时的微嫁接成活率显著高于使用单层薄膜的成活率。采用单层薄膜时，培养基内湿度过低，容易造成培养基干枯失水，影响组培苗的营养吸收和正常生长；而湿度过高，由会滋生大量杂菌，造成组培苗的污染，所以，在进行猕猴桃的试管内嫁接时，选用双层薄膜或者是塑料瓶盖，可以比较好的维持组培瓶内的适宜湿度。

试验例3嫁接操作方式对猕猴桃嫁接苗成活率的影响

选取与本发明实施例3不同嫁接操作方式作为对照组，其他条件相同。实施例和对照组每个处理接种十个猕猴桃外植体片段，重复三次，共30个外植体片段。20d后观察并统计记录嫁接苗成活数，结果见表3。

表3嫁接操作方式对猕猴桃嫁接苗成活率的影响

猕猴桃微嫁接采用本发明实施例的劈接法时，嫁接成活率为75.33％，略微高于对照组：倒劈接法处理组成活率。倒劈接法成活率略微低于劈接法可能是由于在实际操作中针对砧木进行取材时，砧木较短的情况下，倒劈接法可能对砧木造成了一定的损伤。

试验例4砧木接穗是否保留叶片对猕猴桃嫁接苗成活率的影响

表4砧木接穗是否保留叶片对猕猴桃嫁接苗成活率的影响

由表4可知，砧木、接穗叶片是否保留对猕猴桃试管内嫁接嫁接苗的成活率高低有显著影响。本发明实施例的处理方式，即砧木、接穗都不保留叶片的情况下，成活率显著高于其他三个处理，说明砧木、接穗保留叶片在一定程度上会造成成活率降低。主要是由于未经过炼苗处理的组培苗容易失水，保留叶片，则加速了蒸腾失水，而前期接口也并未愈合，接穗不能从砧木获取营养。所以认为在猕猴桃的试管内嫁接中应该砧木、接穗不保留叶片。

试验例5是否采用生根砧木对微嫁接的影响

选取与本发明实施例不同砧木作为对照组，其他条件相同。实施例和对照组每个处理接种十个猕猴桃外植体片段，重复三次，共30个外植体片段。20d后观察并统计记录嫁接苗成活数，结果见表5。

表5是否采用生根砧木对猕猴桃嫁接苗成活率的影响

由表5可知，砧木是否生根对猕猴桃试管内嫁接成活率略微产生影响。当砧木为未生根状态时，成活率高于砧木生根的处理。当为未生根的砧木时，成活率为50.00％，主要表现为接穗叶片长势比较强，未出现假活和接穗脱落的现象。当砧木生根时，成活率只有40.00％，主要表现为接穗叶片长势比未生根处理的弱。这可能是因为生根使砧木培养时间过长，茎段木质化程度加深，不易于嫁接口的愈合。切保留根部使嫁接操作难度加大，使接穗砧木皆萎焉失水。

试验例6蔗糖浓度对微嫁接的影响

选取与本发明实施例3不同蔗糖浓度的培养基作为对照组，其他条件相同。实施例和对照组每个处理接种十个猕猴桃外植体片段，重复三次，共30个外植体片段。20d后观察并统计记录嫁接苗成活数，结果见表6。

表6蔗糖浓度对猕猴桃嫁接苗成活率的影响

由表6可知，蔗糖浓度对猕猴桃试管内嫁接成活率的大小有显著影响。其中当蔗糖浓度为40g/L时，成活率达到最大值63.33％，且显著高于其他处理。从整体上看来，当不加入蔗糖时，成活率最低，随着蔗糖浓度的增加，在一定范围内猕猴桃嫁接苗成活率呈现上升的趋势，但当蔗糖浓度过高时，不利于嫁接苗成活。说明蔗糖浓度是影响成活率的关键因素。会出现这种趋势的原因可能是因为蔗糖在组培中作为碳源为细胞提供能量，过低的蔗糖浓度导致猕猴桃嫁接苗营养供应不足，而过高的蔗糖浓度提高了培养基的渗透势，反而无益于能量的获取，进一步导致成活率下降。所以，猕猴桃嫁接苗培养的蔗糖浓度应选用40％为宜。

试验例7基本培养基类别对猕猴桃嫁接苗成活率的影响

选取与本发明实施例3不同类型的培养基作为对照组，其他条件相同。实施例和对照组每个处理接种十个猕猴桃外植体片段，重复三次，共30个外植体片段。20d后观察并统计记录嫁接苗成活数，结果见表7。

表7基本培养基类别对猕猴桃嫁接苗成活率的影响

由表7可知，不同的培养基类型对猕猴桃试管内嫁接苗成活率有一定的影响。1/4MS培养基嫁接成活率为33.33％，显著低于MS组与1/2MS组的处理。虽然1/2MS组与MS组差异不显著，但是也要略高于MS组。主要表现为1/4MS组接穗脱落，MS组砧木底部出现愈伤组织，这可能是优于1/4MS做培养基时无机盐供给不足，不能满足嫁接苗所需，而MS又容易使砧木茎段诱导出现愈伤组织所导致的。所以在进行试管内嫁接时，本发明实施例的1/2MS培养基是最为合适的基本培养基。

试验例8 IBA浓度对猕猴桃嫁接苗成活率的影响

表8 IBA浓度对猕猴桃嫁接苗成活率的影响

由表8可知，不同的IBA浓度对猕猴桃试管内嫁接成活率产生影响。当培养基为主要表现为1/2MS+1.0mg/L IBA时，成活率显著高于其他处理，为76.67％。培养基为MS+0.5mg/L IBA时，成活率只为56.67％，显著低于其他处理。主要表现为当基本培养基一定时，IBA浓度会使成活率明显升高，且不同处理间差异显著说明IBA对于嫁接苗成活率起到重要作用，另外，MS培养基中，基部容易出现大量愈伤组织，影响砧木的生长，导致嫁接成活率偏低。1/2MS促进砧木生根，则无明显的大量愈伤组织积累的现象。所以进行猕猴桃试管内嫁接时选用1/2MS+1.0mg/L IBA的培养基为宜。

试验例9不同激素对猕猴桃嫁接苗成活率的影响

表9不同激素对猕猴桃嫁接苗成活率的影响

通过表9可以知道，除了IBA外，在培养基中加入其它激素也会影响猕猴桃试管内嫁接的嫁接苗成活率。主要表现为：培养基中加入适量的GA3时，能使嫁接苗成活率达到最高；6-BA次之；NAA组成活率最低。这是因为在嫁接苗培养集中加入NAA容易使砧木产生愈伤组织，使砧木缩小，不利于下一步培养，甚至愈伤组织的连续扩大使砧木被包裹，导致接穗脱落，所以不应加入NAA。除此之外，表9说明用生长调节剂浸泡切口相较于直接在培养基中加入激素，均对嫁接苗的成活率产生一定影响。且由此可见，在原定的1/2MS+1.0mg/L IBA培养基中，混合加入0.5mg/L GA3能使猕猴桃嫁接苗成活率最高，不采用切口浸泡法。

试验例10不同土壤基质对炼苗移栽的影响

表10不同基质配比对猕猴桃炼苗移栽成活率的影响

不同的基质在农业生产中起到不同的作用。珍珠岩主要有防止土壤板结的作用；泥炭土质量轻，能够有效保持水分、肥效，同时含有丰富的营养，是良好的栽培基质和土壤调节剂；蛭石主要起到疏松土壤、保持水分透气的作用。良好的配土比例能有效的提高组培苗炼苗移栽的成活率。从表中我们可以看出，按照本发明实施例的处理方法显著性差异明显。当珍珠岩：泥炭土：蛭石比例为1:2:1时，移栽成活率显著高于其他处理；当珍珠岩：泥炭土比例为1：1时，移栽成活率较低。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种猕猴桃微嫁接方法，其特征在于，包括：

(1)获取组培苗:

(11)于4月取‘米良1号’猕猴桃当年生新稍茎段1.5-2.5cm，于3月取‘红阳’猕猴桃当年生新稍茎段1-1.5cm，然后分别进行灭菌处理；

(12)将‘米良1号’猕猴桃茎段于MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+0.5mg/L 2,4-D的初代培养基中进行培养，将‘红阳’猕猴桃茎段于MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA的初代培养基中进行培养，诱导愈伤组织产生进而分化出幼芽；

(13)将经过初代培养的‘米良1号’猕猴桃茎段于MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+0.5mg/L GA₃的继代培养基中进行培养增殖，将经过初代培养的‘红阳’猕猴桃茎段于MS+2.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+0.1mg/L GA₃的继代培养基中进行培养增殖；

(14)将经过继代培养的‘米良1号’猕猴桃茎段于1/2MS+0.7mg/L IBA+0.1wt％活性炭的生根培养基中诱导生根，将经过继代培养的‘红阳’猕猴桃茎段于1/2MS+0.7mg/L IBA+0.5wt％活性炭的生根培养基中诱导生根，分别得到‘米良1号’猕猴桃组培苗和‘红阳’猕猴桃组培苗；

(2)嫁接、培育：

(21)选择健壮的‘米良1号’猕猴桃组培苗，切除生长不完全的顶部、基部以及叶片，保留中段1.8-2.2cm作为砧木；选择健壮的‘红阳’猕猴桃组培苗，切除基部和叶片，保留顶端0.8-1.2cm作为接穗，保持底端切口呈楔形斜面，斜面长度为0.4-0.6cm；

(22)采用劈接法，将已经切割好的‘米良1号’砧木，从顶端向下劈切0.5-1.0cm，保持切口长度大于接穗的楔形切口长度，并且保持砧木和接穗的切口均平滑整齐；然后，将接穗插入砧木切口，保持切口严密接触，迅速用锡箔纸包裹切口，将砧木与接穗结合，获得嫁接苗；

(23)将嫁接苗竖直插于1/2MS+1.0mg/L IBA+0.5mg/L GA₃+40wt％蔗糖的嫁接培养基中培育，嫁接培养基的pH为5.8-6.2，然后用双层薄膜将试管密封或用塑料瓶盖将组培瓶密封，置于20-30℃、光照1500-2000Lx、光照时间12-14h/d下培养40天。

2.根据权利要求1所述的猕猴桃微嫁接方法，其特征在于，步骤(11)中，‘米良1号’猕猴桃茎段和‘红阳’猕猴桃茎段的灭菌方法为：采用70-80v％酒精溶液处理15-25s后，用0.05-0.15v％升汞溶液处理4-6min。

3.根据权利要求2所述的猕猴桃微嫁接方法，其特征在于，采用75v％酒精溶液处理20s后，用0.1v％升汞溶液处理5min。

4.根据权利要求1所述的猕猴桃微嫁接方法，其特征在于，步骤(22)中：嫁接培养基的pH为6。

5.一种猕猴桃育苗方法，其特征在于，包括：

根据权利要求1-4任一项所述的猕猴桃微嫁接方法获得猕猴桃嫁接苗；

在炼苗移栽2周前，将装有嫁接苗的试管或组培瓶从组培室中取出，于室温下进行初步炼苗；然后在炼苗移栽1周前，先松开试管或组培瓶的双层薄膜或塑料瓶盖，1-2天后，再将试管管口或组培瓶瓶口部分敞开，然后在3-5天内将试管管口或组培瓶瓶口逐渐敞开直至全部敞开；

炼苗完成后，用流水将嫁接苗根部洗净，然后移栽至土壤中培养；其中，土壤包括质量比为1:2:1的珍珠岩、泥炭土和蛭石。