PT93446B

PT93446B - Processo para multiplicacao e enraizamento in vitro de actinidia deliciosa

Info

Publication number: PT93446B
Application number: PT9344690A
Authority: PT
Inventors: Maria Salome Soares Pa Antunes; Maraia Cristina Coutinho Ubach; Maria Margarida Moutin Barroso
Original assignee: Inst Nac Inv Cient Ctr Eng Bio
Priority date: 1990-03-15
Filing date: 1990-03-15
Publication date: 1997-10-31
Also published as: PT93446A

Description

MENORIA DESCRITIVA

A invenção refere-se a um processo para a multiplicação e enraizamento in vitro de plantulas de actinidia deliciosa 'Kiwi),, é esssno is. I men te caracterizado por se partir de meristemas auxiliares e apicais, inoculados ern meio de cultura sem reguladores de crescimento.

BNSDOCID: <PT 93446B

A presente invenção refere-se a um processo de propagação vegetativa da frutícula actinidia deliciosa (kiwi) recorrendo a técnicas de cultura in vitro, mais particularmente, a um processo simultâneo de micropropagação e enraizamento de plantuias in vitro, desenvolvido com o fim de reduzir os custos de produção de plantas desta espécie por micropropagação, de aumentar a produção de meristemas/'meristema inoculado e de plantulas enraizadas e aclimatadas/plantula produzida.

A propagação vegetativa de actinidia deliciosa por multiplicação in vitro permitiu eliminar as desvantagens decorrentes da utilização dos métodos tradicionais de propagação vegetativa desta espécie. Como consequência, tem sido propostos vários métodos de micropropagação de actinidia deliciosa considerando-se de todo o interesse o melhoramento dos métodos propostos no sentido da rentabi.1ização do processo de produção de plantas para a sua aplicação à escala industrial.

Como resultado dos estudes efectuados, os inventores da presente invenção descobriram que meristemas inoculados em meio de cultura sem reguladores de crescimento permitem, 5 semanas após o início da cultura, a obtenção de plantulas com um bom desenvolvimento vegetativo e um sistema radicular funcional, aptas a serem transferidas para o solo e, assim, completou-se a presen te in venção.

JNSDOCÍD: <PT 93446B >

SUMARIO DA INVENÇÃO

Um dos objectivos da presente invenção consiste em proporcionar um processo de propagação vegetativa da fruticola actinidia deliciosa mais rápido e económico que os já existentes, e que possa ser directamente aplicado na empresas especializadas na mui tipiicação in vitro de cultivares em larga escala.

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Outros objectivos e vantagens da presente invenção tornar—se-ão evidentes a partir da seguinte descrição.

DESCRICÃO PORMENORIZADA DA INVENÇÃO

A presente invenção é pormenorizada ilustrada seguidamen te.

material vegetal utilizado, consistia em meristemas apicais e axilares de plantulas in vitro'¹ estabelecidas no nosso láboratorio havia dois anos. Os explantes primários foram obtidos a partir de plantas de campo seieccionadas de Actinidia deliciosa, var.Hayward.

Os meristemas apicais e axilares isolados foram inoculados em duas variantes do meio de cultura de Murashiqe e Skooq (MS); meio Hl, meio de cultura MS, com a concentração de macro e micronutrientes reduzida para metade, 5mg/l de citrato ferrico em substituição do sulfato ferrico, 5 mg/1 de ditiotreitol, 1 mg/1 de zeatina (4.56 uM) e 0,05 mg/1 de ácido indol-3-acético (0.29 uM), 3 g/1 de agar, pH 5.7; meio H2, igual a Hl mas sem reguladores de crescimento.

As culturas foram mantidas a 22+2 C, 16 h luz/8 h escuridão (1700 lux) e reoicadas em intervalos de 5, 8 e 16

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Ί

') semanas. Procedeu-se è comaaração de eficiência dos meios de cultura Hl e H2 na micropropagação e enraizamento das plantulas obtidas. As plantulas desenvolvidas no meio de cultura Hl, após remoção do callus basal, foram imersas numa solução de 20 mg/1 de ácido indol-3-butirico durante 24h imediatemente antes de serem transferidas para o solo. As plantulas desenvolvidas no meio H2 foram transferidas directamente para o solo sem qualquer tratamento prévio. As plantulas foram envasadas com 5 ou 9 semanas de idade e premaneceram em estufas de aclimatação durante 4 semanas. Foram utilizados tabuleiros compartimentados de esferovite com misturas de terra: areia (1:1), cobertos com sacos de polietilena. colocados num ambiente com uma humidade relativa de 8Θ%, um fotoperíodo de Í6H luz/8h escuridão e uma intensidade luminosa de 600 lux. As plantas foram transferidas para o campo 45 a 60 dias após o envasamento.

A presente invenção refere-se ao processo de micropropaçação por cultura de meristemas apicais e axilares no meio H2, sem reguladores de crescimento, com formação de plantulas com um sistema radicular funcional 2 a 5 semanas após o início da cultura. As plantulas obtidas, com 5 semanas de idade, transferidas directamente para o solo, são aclimatadas com sucesso em 4 semanas. A presente invenção apresente várias vantagens en relação aos métodos de micropropagação já conhecidos, nomeadamente :

1) A possibilidade de micropropagar A. deliciosa na ausência de reguladores de crescimento;

2) A micropropagação ”in vitro simultaneamente com a formação de um sistema radicular funcional, sem subcultura;

BNSDOCID: <PT S3446B »

3) 0 desenvolvimento vegetativo das plantulas produzidas pelo presente processo ser maior ou igual ao obtido com os processos já conhecidos;

4) A elevada percentagem de sobrevivência final (92.87.1;

5) C aumento do potemcial de enraizamento com as subculturas repetidas assim como o aumento do ritmo de crescimento após o envasamen ta.

6) A formação in vitro de um sitema radicular funcional em simultâneo com a formação de plantulas permite não só a redução dos custos de manipulação e de provação como também a redução do tempo necessário â obtenção de uma planta a partir de um meristema.

A presente invenção é seguidamente ilustrada na presente memória descritiva de maneira concreta por meio de Experiências e Exemplos que nãc, a limitam de qualquer forma.

EXPERIENCIA 1

Procedeu-se à inoculação de meristemas nos meios Hl e H2 e à comparação do desenvolvimento das plantulas obtidas 5 semanas apos o inxcio da cultura.

A eficiência dos meios de cultura de micropropagação, Hl e H2, foi determinada através de ánalise dos parâmetros: taxa de mui tipiicação, peso fresco/plantula (g), ausência ou presença de Ccúlus basal 'peso fresco do callus, g), comprimento do caule (mm), número de raizes/plantula, percentagem de mortes e de malformações (Quadro 2). D desenvolvimento vegetativo das prlantulas H2, em termos de peso fresco, altura e taxa de

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-6multiplicação, foi superior ao registado para as plantulas Hi. As plantulas H2 caracterisavam-se ainda pela ausência de callus basal, presença de 1 a 2 raízes/plantula e ausência de formas aberrantes.

) A Figura 1 permite constatar as diferenças acima referidas.

O aumento do intervalo de subcultura de 5 para Be 16 semanas provocou um aumento da taxa de multiplicação (Fig.2) e um aumento do número de raízes/plantula (Fig.3) nos dois meios testados.

EXPERIENC1A 2

Procedeu-se à transferencia para o solo das plantulas formadas nos meios de cultura Hl e H2, 5 e 8 semanas após inicio da cultura. As plantulas desenvolvidas no meio H2 com sistema radicular formado irt vitro, durante o desenvolvimento da plantula, foram transferidas directamente para as estufas de aclimatação. As plantulas desenvolvidas no meio Hl foram imer— sas. após remoção do callus basal, numa solução de 20 mg/1 de ácido indol-3-butirico, 24h antes de serem transferidas para as estufas de aclimatação. A reacção ao envasamento foi determinada por medição dos parâmetros referidos no Quadro 3, no momento do envasamento, 2 e 4 semanas após o mesmo, para plantulas com 5 e 8 semanas de idade no momento da transferencia para o solo.

A comparação dos resultados obtidos permitiu concluir que o processo de micropropagação no meio de cultura H2 e a transferencia para o solo das plantulas com 5 de idade é mais eficaz do que os restantes processos ensaiados (Quadro 4) e do que processos anteriormente referidos (Quadro 5).

ÚMSDOCID: <PT 934468 >

As Figuras 4, 5 e 6. permitem observar diferentes aspectos do produto obtido pelo processo da presente invenção.

Claims

REIVINDICACBES lâ.- Processo para a produção de plantulas com um sistema radicular funcional caracterizado por se partir de fragmentos de tecido ou célula(s) inoculadas num meio de cultura sem reguladores de crescimento.
2ã.- Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto do intervalo de subcultura ser compreendido entre 2 e 24 semanas, com ou sem mudança de inóculo para meio fresco.
3â.~ Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de o desenvolvimento das plantulas se realizar a uma temperatura compreendida entre os +1Θ e os +35°C, e um fotoperiodo compreendido entre 6h luz/18h escuridão e 24h de luz contínua.
4ã.~ Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de o processa de microprapagação e enraizamento poder ou mão ocorrer en simultâneo, no mesmo meio de cultura, com ou sem transferencia para meio fresco, ou em meios de cultura diferentes, com fonte de carbono reduzida ou ausente, na presença de reguladores de crescimento, ou mesmo cultura em àgua, em meio liquido ou sólido, ou em bio-reactores.
5â.~ Processo de acorda com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de a transferencia para o solo ser efectuada com plantulas com 2 a 24 semanas de idade para solos de

BNSDOCID: <PT 93446B >

-9composição variável, submetida a condições físicas de aclimata ção, entre 30 a 997. de humidade relativa, temperaturas compreen didas entre os 10 e os 35° e intensidade luminosa entre 100 3000 1 u .