CN108977559A - 用于鉴别生药的引物组以及使用该引物组的生药鉴别方法 - Google Patents

用于鉴别生药的引物组以及使用该引物组的生药鉴别方法 Download PDF

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CN108977559A CN201810539204.0A CN201810539204A CN108977559A CN 108977559 A CN108977559 A CN 108977559A CN 201810539204 A CN201810539204 A CN 201810539204A CN 108977559 A CN108977559 A CN 108977559A
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Abstract

本发明的课题在于开发并提供一种能够准确鉴定加工处理后的候选生药的待测植物是否为基原植物,并鉴别该候选生药为目标生药的手段,以及使用该手段的鉴别方法。针对各种生药,设计了能够从加工处理后的待测植物中稳定地获取碱基序列信息,并且在基原植物中能够对具有特异性的碱基序列的基原植物的基因组DNA或叶绿体DNA中的特定区域进行扩增的引物组。本发明提供了该引物组以及使用该引物组的生药鉴别方法。

Description

用于鉴别生药的引物组以及使用该引物组的生药鉴别方法
技术领域
本发明涉及一种能够确认各种生药样品为日本药局方或日本药局方以外的生药标准(以下称“局外生规”)所规定的基原植物的核酸扩增反应引物组以及使用该引物组的生药鉴别方法。
背景技术
关于生药,在第十七修订版的日本药局方或局外生规2015中,规定了基原植物。基原植物是指作为某种生药的原料的植物(原植物),按照每种生药都以种为单位进行了规定。例如,生药“芍药”的基原植物是芍药(Paeonia lactiflora),除此以外的植物种,即使是同属近缘种,原则上也不会认定为“芍药”。但是,生药一般是在对基原植物进行了加热、干燥等各种加工处理的状态下流通。因此,人们往往无法从外观上对以外观与基原植物近似的植物种(近似种)为原料的伪品生药和以基原植物为原料的生药进行区分。很多伪品生药,其生药本来的药效往往无法保障,另外价格也很便宜。所以,准确地确认流通的生药是否是以本来的基原植物为原料是一项重要工作。通常通过提取候选生药的植物中所含有的核酸,确定种特异性的区域的碱基序列,可以鉴定出作为检测对象的待测植物是否为对象生药的基原植物(非专利文献1)。但如前所述,很多生药经过了加工处理,此外长期保存会使它们受到经时变化,因此往往会出现样品中的DNA受损和/或片段化的情况以及来源于霉菌、真菌等菌类的DNA混入的情况。所以,对从生药采集的核酸进行碱基序列确定本身十分困难,到目前为止还无法准确地鉴定原植物。
因此,需要一种通过从经过了加热等加工处理的候选生药的待测植物中稳定且准确地获取碱基序列信息,来准确地鉴定出该待测植物是否为基原植物,确认其为未混入或未替换为异种植物的真正生药的技术。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1:丸山卓郎等,2013年,特产种苗,16:70-76
发明内容
发明所要解决的问题
本发明的课题在于开发并提供一种能够准确地确认加工处理后的候选生药的待测植物是否为目标生药的基原植物,并鉴别该候选生药为目标生药的手段,以及使用该手段的鉴别方法。
解决问题的技术方案
本发明人对各种生药的基原植物中的基因组DNA或叶绿体DNA进行了全面地研究,结果发现:各生药的基原植物中,特异性的碱基序列存在于特定区域;另外,该区域从加工处理后的待测植物中也能够稳定地获取碱基序列信息。根据这些发现,本发明人成功地开发出了能够对所述特定区域进行扩增的引物组,以及能够使用该引物组准确地鉴定出候选生药的待测植物是否为基原植物,并且鉴别出候选生药为目标生药的方法。本说明书提供了基于作为该鉴别手段的引物组以及使用该引物组的生药鉴别方法的以下发明。
(1)一种用于鉴别生药的引物组,其中,所述生药选自于由以下生药组成的组:半夏/天南星、芍药/牡丹皮、桂皮、当归、苍术/白术、柴胡、天门冬、山茱萸、百合、红参、天麻、黄芩、人参、升麻、猪苓、附子、辛夷、丁香、钩藤、香附子、黄连、生姜/干姜、山栀子、黄柏、厚朴、泽泻、吉草根、橡木皮、连翘、良姜、莲肉、红花以及苏木,所述引物组是由以下所示碱基序列组成的多核苷酸:半夏/天南星时,为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2;芍药/牡丹皮时,为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6,或者SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:229;桂皮时,为SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8;当归时,为SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10,或者SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12;苍术/白术时,为SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14;柴胡时,为SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16;天门冬时,为SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18;山茱萸时,为SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20;百合时,为SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22,或者SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24;红参时,为SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26,或者SEQ ID NO:27和SEQ IDNO:28;天麻时,为SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:4,或者SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31;黄芩时,为SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:32,或者SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:33;人参时,为SEQ IDNO:9和SEQ ID NO:34,或者SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36;升麻时,为SEQ ID NO:37和SEQID NO:38、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:40,或者SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:39;猪苓时,为SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43;附子时,为SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:4,或者SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:4;辛夷时,为SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:230和SEQ IDNO:231,或者SEQ ID NO:232和SEQ ID NO:50;丁香时,为SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52;钩藤时,为SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:54,或者SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:56;香附子时,为SEQ ID NO:59和SEQ IDNO:60,或者SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:61;黄连时,为SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63,或者SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65;生姜/干姜时,为SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67;山栀子时,为SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:68;黄柏时,为SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:70;厚朴时,为SEQID NO:71和SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73,或者SEQ ID NO:74和SEQ IDNO:72;泽泻时,为SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78、SEQ IDNO:75和SEQ ID NO:79,或者SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:80;吉草根时,为SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:82;橡木皮时,为SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:85,或者SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87;连翘时,为SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89,或者SEQID NO:90和SEQ ID NO:91;良姜时,为SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93,或者SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:94;莲肉时,为SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:4,或者SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:36;红花时,为SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:4,或者SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:36;苏木时,为SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99。
(2)一种生药鉴别套装,其包含选自于由(1)所述的用于鉴别生药的引物组组成的组中一个以上的引物组。
(3)根据(2)所述的生药鉴别套装,其包含记载有扩增产物碱基序列信息的碱基序列表,所述扩增产物通过以从生药的基原植物中制备的核酸为模板并使用用于鉴别该生药的引物进行核酸扩增反应而得到。
(4)一种半夏/天南星的鉴别方法,包括以下步骤:从候选半夏/天南星的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:100或SEQ ID NO:101所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为半夏/天南星的基原植物,所述候选半夏/天南星被鉴别为半夏/天南星。
(5)一种芍药/牡丹皮的鉴别方法,包括以下步骤:从候选芍药/牡丹皮的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQID NO:6,或者SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:229所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:102或者SEQ ID NO:211所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:103或者SEQ ID NO:221所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:229所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:244或者SEQ ID NO:245所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为芍药或牡丹皮的基原植物,所述候选芍药或牡丹皮被鉴别为芍药或牡丹皮。
(6)一种桂皮的鉴别方法,包括以下步骤:从候选桂皮的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将扩增产物的碱基序列与SEQID NO:104所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为桂皮的基原植物,所述候选桂皮被鉴别为桂皮。
(7)一种当归的鉴别方法,包括以下步骤:从候选当归的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10或者SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:105所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:11和SEQID NO:12所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:106所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为当归的基原植物,所述候选当归被鉴别为当归。
(8)一种苍术/白术的鉴别方法,包括以下步骤:从候选苍术/白术的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:107~SEQ ID NO:110,或者SEQ ID NO:289~SEQ ID NO:291中任一个所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为苍术/白术的基原植物,所述候选苍术/白术被鉴别为苍术/白术。
(9)一种柴胡的鉴别方法,包括以下步骤:从候选柴胡的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:111或者SEQ ID NO:294所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为柴胡的基原植物,所述候选柴胡被鉴别为柴胡。
(10)一种天门冬的鉴别方法,包括以下步骤:从候选天门冬的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:112~SEQ ID NO:115,或者SEQ ID NO:299中任一个所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为天门冬的基原植物,所述候选天门冬被鉴别为天门冬。
(11)一种山茱萸的鉴别方法,包括以下步骤:从候选山茱萸的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:116所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为山茱萸的基原植物,所述候选山茱萸被鉴别为山茱萸。
(12)一种百合的鉴别方法,包括以下步骤:从候选百合的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22或者SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:117,或者SEQ ID NO:311~SEQ ID NO:314所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:118,或者SEQ ID NO:324~SEQ ID NO:326所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为百合的基原植物,所述候选百合被鉴别为百合。
(13)一种红参的鉴别方法,包括以下步骤:从候选红参的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26或者SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:119所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:27和SEQID NO:28所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:120所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为红参的基原植物,所述候选红参被鉴别为红参。
(14)一种天麻的鉴别方法,包括以下步骤:从候选天麻的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:4或者SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:4所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:121所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:30和SEQID NO:31所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:122所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为天麻的基原植物,所述候选天麻被鉴别为天麻。
(15)一种黄芩的鉴别方法,包括以下步骤:从候选黄芩的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:32或者SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:33所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:32所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:123或者SEQ ID NO:391所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:33所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQID NO:124所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为黄芩的基原植物,所述候选黄芩被鉴别为黄芩。
(16)一种人参的鉴别方法,包括以下步骤:从候选人参的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:34或者SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:34所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:125所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:35和SEQID NO:36所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:126所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为人参的基原植物,所述候选人参被鉴别为人参。
(17)一种升麻的鉴别方法,包括以下步骤:从候选升麻的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:40或者SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:39所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ IDNO:37和SEQ ID NO:38所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:127~SEQ ID NO:130,或者SEQ ID NO:401中任一个所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:39所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQID NO:131~SEQ ID NO:134,或者SEQ ID NO:409中任一个所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:40所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:135~SEQ ID NO:138,或者SEQ ID NO:415~SEQ ID NO:416中任一个所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:39所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:139~SEQ ID NO:142中任一个所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为升麻的基原植物,所述候选升麻被鉴别为升麻。
(18)一种猪苓的鉴别方法,包括以下步骤:从候选猪苓的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:143,或者SEQ ID NO:430~SEQ ID NO:432所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为猪苓的基原植物,所述候选猪苓被鉴别为猪苓。
(19)一种附子的鉴别方法,包括以下步骤:从候选附子的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:4或者SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:4所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:36所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:144或145或者SEQ ID NO:433~SEQ ID NO:434所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:4所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:146或SEQ ID NO:147,或者SEQID NO:439~SEQ ID NO:440所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:46和SEQ IDNO:4所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:148或SEQ ID NO:149所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为附子的基原植物,所述候选附子被鉴别为附子。
(20)一种辛夷的鉴别方法,包括以下步骤:从候选辛夷的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:231,或者SEQ ID NO:232和SEQ ID NO:50所示碱基序列组成的引物组,对叶绿体DNA的trnL内含子区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:150,或者SEQ ID NO:678~SEQ ID NO:681所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:151,或者SEQ ID NO:693~SEQ ID NO:696所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:231所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:450~SEQ ID NO:454所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:232和SEQ ID NO:50所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:465~SEQ ID NO:469所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为辛夷的基原植物,所述候选辛夷被鉴别为辛夷。
(21)一种丁香的鉴别方法,包括以下步骤:从候选丁香的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:152所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为丁香的基原植物,所述候选丁香被鉴别为丁香。
(22)一种钩藤的鉴别方法,包括以下步骤:从候选钩藤的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:54或者SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:56所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ IDNO:53和SEQ ID NO:54所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:153所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:154所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:54所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQID NO:155所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:56所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:156所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为钩藤的基原植物,所述候选钩藤被鉴别为钩藤。
(23)一种香附子的鉴别方法,包括以下步骤:从候选香附子的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:60或者SEQ ID NO:41和SEQID NO:61所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:60所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:157所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:61所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:158所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为香附子的基原植物,所述候选香附子被鉴别为香附子。
(24)一种黄连的鉴别方法,包括以下步骤:从候选黄连的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63或者SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65所示碱基序列组成的引物组,对叶绿体DNA的rbcL区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:159~SEQ ID NO:162中任一个所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:163~SEQ ID NO:166中任一个所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为黄连的基原植物,所述候选黄连被鉴别为黄连。
(25)一种生姜/干姜的鉴别方法,包括以下步骤:从候选生姜/干姜的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67所示碱基序列组成的引物组,对叶绿体DNA的matK区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:167所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为生姜/干姜的基原植物,所述候选生姜/干姜被鉴别为生姜/干姜。
(26)一种山栀子的鉴别方法,包括以下步骤:从候选山栀子的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:68所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:168所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为山栀子的基原植物,所述候选山栀子被鉴别为山栀子。
(27)一种黄柏的鉴别方法,包括以下步骤:从候选黄柏的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:70所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:169所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为黄柏的基原植物,所述候选黄柏被鉴别为黄柏。
(28)一种厚朴的鉴别方法,包括以下步骤:从候选厚朴的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73或者SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:72所示碱基序列组成的引物组,对叶绿体DNA的rpl16内含子区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:170~SEQ ID NO:172中任一个所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:173~SEQ ID NO:175中任一个所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:72所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:176~SEQ ID NO:178中任一个所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为厚朴的基原植物,所述候选厚朴被鉴别为厚朴。
(29)一种泽泻的鉴别方法,包括以下步骤:从候选泽泻的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78或者SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:79或者SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:80所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQID NO:75和SEQ ID NO:76所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ IDNO:179或SEQ ID NO:180所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:181或SEQ ID NO:182所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:79所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:183或SEQ ID NO:184所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:80所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:185或SEQ ID NO:186所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为泽泻的基原植物,所述候选泽泻被鉴别为泽泻。
(30)一种吉草根的鉴别方法,包括以下步骤:从候选吉草根的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:82所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:187所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为吉草根的基原植物,所述候选吉草根被鉴别为吉草根。
(31)一种橡木皮的鉴别方法,包括以下步骤:从候选橡木皮的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:83和SEQ IDNO:85或者SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:188~SEQ ID NO:191,或者SEQ ID NO:593~SEQ ID NO:594中任一个所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ IDNO:83和SEQ ID NO:85所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:192~SEQ ID NO:195,或者SEQ ID NO:601~SEQ ID NO:602中任一个所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:196~SEQ ID NO:199,或者SEQ ID NO:609~SEQ ID NO:612中任一个所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为橡木皮的基原植物,所述候选橡木皮被鉴别为橡木皮。
(32)一种连翘的鉴别方法,包括以下步骤:从候选连翘的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89或者SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:91所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:200所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:90和SEQID NO:91所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:201所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为连翘的基原植物,所述候选连翘被鉴别为连翘。
(33)一种良姜的鉴别方法,包括以下步骤:从候选良姜的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93或者SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:94所示碱基序列组成的引物组,对叶绿体DNA的matK区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:202,或者SEQ ID NO:633所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:94所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQID NO:203,或者SEQ ID NO:638所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为良姜的基原植物,所述候选良姜被鉴别为良姜。
(34)一种莲肉的鉴别方法,包括以下步骤:从候选莲肉的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:4或者SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:36所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:4所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:204所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:96和SEQID NO:36所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:205,或者SEQID NO:646所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为莲肉的基原植物,所述候选莲肉被鉴别为莲肉。
(35)一种红花的鉴别方法,包括以下步骤:从候选红花的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:4或者SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:36所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将使用由SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:4所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:206所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:44和SEQID NO:36所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:207所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为红花的基原植物,所述候选红花被鉴别为红花。
(36)一种苏木的鉴别方法,包括以下步骤:从候选苏木的待测植物中提取核酸;以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;确定扩增产物的碱基序列;以及将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:208所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为苏木的基原植物,所述候选苏木被鉴别为苏木。
发明效果
通过使用本发明的用于鉴别生药的引物组进行本发明的生药鉴别方法,即使是经过了生药加工处理的植物,也能够准确地鉴定出该植物是否为日本药局方/局外生规所认可的生药的基原植物,由此能够切实地防止异种植物的混入等。
通过本发明的用于鉴别生药的套装,能够容易地实施本发明的生药鉴别方法,可以简便地鉴别各种生药。
附图说明
图1表示实施例29中使用用于鉴别芍药/牡丹皮的引物组#1进行PCR之后的反应液的电泳图。泳道1表示标记物,泳道2表示来源于芍药Paeonia lactiflora(芍药的基原植物)的DNA,泳道3表示来源于肉桂Cinnamomum cassia(桂皮的基原植物)的DNA,泳道4表示来源于牡丹Paeonia suffruticosa(牡丹皮的基原植物)的DNA,泳道5表示来源于泽泻Alisma orientale(泽泻的基原植物)的DNA,泳道6表示来源于钩藤Uncariarhynchophylla(钩藤的基原植物)的DNA,泳道7表示未添加模板核酸的空白对照(模拟)。
图2表示实施例29中使用用于鉴别桂皮的引物组#2进行PCR之后的反应液的电泳图。各泳道的说明与图1相同。
图3表示实施例29中使用用于鉴别泽泻的引物组#3进行PCR之后的反应液的电泳图。各泳道的说明与图1相同。
图4表示实施例29中使用用于鉴别钩藤的引物组#4进行PCR之后的反应液的电泳图。各泳道的说明与图1相同。
具体实施方式
1.用于鉴别生药的引物组
1-1.概要
本发明的第一实施方式为用于鉴别生药的引物组。本实施方式的引物组由核酸组成,在后述的第二实施方式所述生药鉴别方法中作为用于鉴定待测植物是否为目标生药的基原植物的手段而被使用。
1-2.定义
下面对本说明书中常用的术语进行定义。
本说明书中,“生药”是指可以作为中药(漢方薬)原料,具有药理效果的来源于天然产物的物质,包括动物、植物或全部或部分菌类以及矿物。本说明书中,尤其符合第十七修订版日本药局方(2016年3月7日厚生劳动省告示第64号)、日本药局方外生药标准2015(2015年12月25日药生审查初1225第1号厚生劳动省医药·生活卫生局审查管理课长通知)所规定的来源于植物和菌类的以下生药。具体为:半夏、天南星、芍药、牡丹皮、桂皮、当归、苍术、白术、柴胡、天门冬、山茱萸、百合、红参、天麻、黄芩、人参、升麻、猪苓、附子、辛夷、丁香、钩藤、香附子、黄连、生姜/干姜、山栀子、黄柏、厚朴、泽泻、吉草根、橡木皮、连翘、良姜、莲肉、红花以及苏木。
需要说明的是,虽然在分类学上菌类并不属于植物,但在本说明书中为了方便起见,将菌类包含在植物中。因此,只要没有特别说明,在本说明书中记载为“植物”时,是指“植物和/或菌类”。例如,在本说明书中记载为“基原植物”时,是指“基原植物和/或基原菌类”。
生药的“基原”的术语是指表示作为生药原料的植物、动物或矿物及其使用部位和加工方法。例如,包括作为某种生药原料的植物的种类、用于该生药的植物的部位以及制成生药时的加工方法。其中,将作为生药原料的植物、即生药的原植物称为“基原植物”。“原植物”是指作为原料的植物。基原植物原则上按每种生药而定。例如,关于上述生药,其基原植物分别为:半夏的基原植物为半夏(Pinellia ternata);天南星的基原植物为天南星(Arisaema heterophyllum)、一把伞南星(A.erubescens)、东北南星(A.amurense)或天南星属(Arisaema)的近缘种;芍药的基原植物为芍药(Paeonia lactiflora),而牡丹皮的基原植物为牡丹(Paeonia suffruticosa(Paeonia moutan));桂皮的基原植物为肉桂(Cinnamomum cassia);当归的基原植物为东当归(Angelica acutiloba)或北海当归(A.acutiloba var.sugiyamae);苍术的基原植物为茅苍术(Atractylodes lancea)、北苍术(A.chinensis)或它们的杂交种;白术的基原植物为关苍术(Atractylodes japonica)或白术(A.macrocephala);柴胡的基原植物为三岛柴胡(Bupleurum falcatum);天门冬的基原植物为天门冬(Asparagus cochinchinensis);山茱萸的基原植物为山茱萸(Cornusofficinalis);百合的基原植物为卷丹(Lilium lancifolium)、百合(L.browniivar.colchesteri)、野百合(L.brownii)或细叶百合(L.pumilum);红参的基原植物为人参(Panax ginseng(P.schinseng));天麻的基原植物为天麻(Gastrodia elata);黄芩的基原植物为黄芩(Scutellaria baicalensis);人参的基原植物为人参(Panax ginseng(P.schinseng));升麻的基原植物为单穗升麻(Cimicifuga simplex)、兴安升麻(C.dahurica)、升麻(C.foetida)或大三叶升麻(C.heracleifolia);猪苓的基原植物为猪苓(Polyporus umbellatus);附子的基原植物为乌头(Aconitum carmichaeli)或日本乌头(Aconitum japonicum);辛夷的基原植物为柳叶木兰(Magnolia salicifolia)、皱叶木兰(M.kobus)、望春花(M.biondii)、武当木兰(M.sprengeri)或玉兰(M.heptapeta(M.denudata));丁香的基原植物为丁香(Syzygium aromaticum(Eugeniacaryophyllata));钩藤的基原植物为钩藤(Uncaria rhynchophylla)、华钩藤(U.sinensis)或大叶钩藤(U.macrophylla);香附子的基原植物为香附子(Cyperusrotundus);黄连的基原植物为日本黄连(Coptis japonica)、黄连(C.chinensis)、三角叶黄连(C.deltoidea)或云南黄连(C.teeta);生姜/干姜的基原植物为姜(Zingiberofficinale);山栀子的基原植物为栀子(Gardenia jasminoides);黄柏的基原植物为黄檗(Phellodendron amurense)或川黄檗(P.chinense);厚朴的基原植物为日本厚朴(Magnolia obovata(M.hypoleuca))、厚朴(M.officinalis)或凹叶厚朴(M.officinalisvar.biloba);泽泻的基原植物为东方泽泻(Alisma orientale);吉草根的基原植物为北缬草(Valeriana fauriei);橡木皮的基原植物为麻栎(Quercus acutissima)、枹栎(Q.serrata)、蒙古栎(Q.mongolica var.crispula)或栓皮栎(Q.variabilis);连翘的基原植物为连翘(Forsythia suspensa);良姜的基原植物为高良姜(Alpinia officinarum);莲肉的基原植物为莲(Nelumbo nucifera);红花的基原植物为红花(Carthamustinctorius);苏木的基原植物为苏木(Caesalpinia sappan)。如上所述,各生药的基原植物有时只包含一种,有时包含数个同属近缘种,只要是其中任一种即可。
根据其形态,生药分为全形生药、切断生药或粉末生药。“全形生药”是指对作为其药用的植物体或其一部分进行干燥和/或简单加工而成的生药。这里所说的“简单加工”列举有:切断、(高压)蒸汽处理、加热、溶液中浸泡等。“切断生药”是指将全形生药切成小片或小块或进行破碎而成的生药,或者是粗切、中切或细切而成的生药。“粉末生药”是指将全形或切断生药制成粗粉末、中粉末或微粉末而成的生药。本说明书中的生药可以是其中任一形态。优选为全形生药或切断生药。
如前述的基原定义中所述,当生药是由植物的一部分组成时,生药的基原植物的哪一部分作为其药用的部分按每种生药而定。例如,如果是天南星,则将所述天南星(Arisaema heterophyllum)、一把伞南星(A.erubescens)、东北南星(A.amurense)或天南星属(Arisaema)的近缘种的球茎作为药用部分用于生药;如果是桂皮,则将肉桂(Cinnamomum cassia)的树皮作为药用部分用于生药。各生药作为药用的部分,在本领域中为公知事项,例如,记载于第十七修订版日本药局方(前文所述)中。
本说明书中,“伪品生药”是指在特定的生药中,将基原植物以外的植物种(例如同属近缘种)等作为原料,使用与该特定的生药相同的部位进行相同的加工处理而得到的产物。例如,将与芍药的基原植物芍药(Paeonia lactiflora)同属的川赤芍(P.veitchii)为原料,与芍药(Paeonia lactiflora)同样地对其根部进行干燥而成的产物,就是芍药的伪品生药。在很多情况下,伪品生药由于外观等与生药相似,故难以与生药区别开。但是,如前所述,各生药中以基原植物以外的植物种为原料的产物,其植物种即使是基原植物的近缘种,此外即使具有与生药相同的药理作用,原则上也不能认作是该生药。
本说明书中,“鉴别”是指通过对候选生药的待测植物是否为目标生药的基原植物进行鉴定,来辨别该候选生药是正品生药还是伪品生药,或辨别生药中是否混入有来源于异种植物的伪品生药。
本说明书中,“候选生药”是指生药的外观及加工状态虽与特定的生药相似,但其原植物是否为基原植物尚不清楚。候选生药可以包括正品生药、伪品生药或其混合物。例如,市场上流通的生药中,不能保证来源于其基原植物的生药,就属于本发明的候选生药。
本说明书中,“待测植物”是指候选生药的原植物,即用于后述的第三实施方式所述生药鉴别方法中的待测植物。本说明书中,组成候选生药的植物组织,可以作为第二实施方式所述生药鉴别方法的检测对象。例如列举有:叶、茎、芽、叶鞘、叶柄、球芽、地下茎(包括球茎、鳞茎/球根、根茎、块茎等)、根(包括块根、气根等)、种子、胚轴、果实等。
本说明书中,“核酸(分子)”是指原则上以核苷酸为组成单位,通过磷酸二酯键将这些核苷酸连接而成的生物高分子。通常是由DNA、RNA等天然核酸组成。DNA时,除了基因组DNA、线粒体DNA、叶绿体DNA等能在细胞内存在的所有DNA分子外,还包含从mRNA通过反转录反应制备的cDNA。另外,RNA时,包含mRNA、rRNA、tRNA、snRNA、snoRNA、tmRNA、miRNA等能在细胞内存在的所有RNA分子。此外,也可以像本实施方式的用于鉴别生药的引物那样,在人工合成的核酸分子的情况下,除了天然核酸以外,还可以包含化学修饰核酸及假核酸(擬似核酸)。化学修饰核酸及假核酸,例如列举有:肽核酸(PNA:Peptide Nucleic Acid)、具有磷酸基的肽核酸(PHONA)、交联化核酸(BNA/LNA:桥核酸(Bridged Nucleic Acid)/锁核酸(Locked Nucleic Acid))、吗啉基核酸等。列举有:甲基膦酸酯(methyl phosphonate)型DNA/RNA、磷硫酰(phosphorothioate)型DNA/RNA、亚磷酰胺(phosphoramidite)型DNA/RNA、2'-O-甲基型DNA/RNA等。
1-3.组成
本说明书中,“用于鉴别生药的引物”(本说明书中常简称为“引物”,因此,只要没有特别说明,本说明书中的引物是指用于鉴别生药的引物)是指在后述的生药鉴别方法中使用的用于核酸扩增的引物,由19个碱基~23个碱基组成的核酸分子(寡核苷酸)组成。优选为由天然核酸(DNA和/或RNA)组成。在稳定性高、合成容易且低廉方面,特别优选为由DNA组成的引物。根据需要,组成引物的碱基序列的全部或部分中也可以包含化学修饰核酸及假核酸。另外,引物也可以用标记物质和/或修饰物质来修饰。标记物质没有特别限制。例如,可以利用荧光物质和/或猝灭物质或放射性同位素(例如32P、33P、35S)等。作为荧光物质的具体示例,列举有:FITC、DIG、Texas、Cy3、Cy5、Cy7、Cyanine3、Cyanine5、Cyanine7、FAM、HEX、VIC、荧光胺及其衍生物,以及罗丹明及其衍生物等。另外,作为猝灭物质的具体示例,列举有:TAMRA、DABCYL、BHQ-1、BHQ-2或BHQ-3等。修饰物质也没有特别限制。例如,列举有生物素和抗生物素蛋白、链霉亲和素或中性亲和素或磁珠等的标记物质及修饰物质,这些可以使用各大生产商销售的市售品。
引物碱基序列上的标记物质及修饰物质的修饰位置没有特别限制。使用的标记物质及修饰物质的特性,根据目的适当决定即可。标记物质一般多在5’或3’末端部进行修饰,当然并不限于此。另外,一个引物也可以用一种以上的标记物质及修饰物质来修饰。标记物质及修饰物质对引物的修饰方法使用公知方法进行即可。
本说明书中,“用于鉴别生药的引物组”是指一组由正向引物及反向引物组成的用于鉴别生药的引物。本实施方式的用于鉴别生药的引物组如表1所示,针对各生药设计有一组以上。需要说明的是,半夏与天南星,以及苍术与白术虽然是基原植物各不相同的不同生药,但二者常被混淆,还常被混合使用,因此为了提高在实用上的便利性与通用性,设计为可以分别以一种引物组进行使用。
具体而言,正向引物和反向引物分别是由以下所示碱基序列组成的多核苷酸:半夏/天南星时,为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2;芍药/牡丹皮时,为SEQ ID NO:3和SEQ IDNO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6,或者SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:229;桂皮时,为SEQ IDNO:7和SEQ ID NO:8;当归时,为SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10,或者SEQ ID NO:11和SEQ IDNO:12;苍术/白术时,为SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14;柴胡时,为SEQ ID NO:15和SEQ IDNO:16;天门冬时,为SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18;山茱萸时,为SEQ ID NO:19和SEQ IDNO:20;百合时,为SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22,或者SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24;红参时,为SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26,或者SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28;天麻时,为SEQID NO:29和SEQ ID NO:4,或者SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31;黄芩时,为SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:32,或者SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:33;人参时,为SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:34,或者SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36;升麻时,为SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38、SEQ IDNO:11和SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:40,或者SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:39;猪苓时,为SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43;附子时,为SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:4,或者SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:4;辛夷时,为SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:231,或者SEQ ID NO:232和SEQ ID NO:50;丁香时,为SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52;钩藤时,为SEQID NO:53和SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:54,或者SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:56;香附子时,为SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:60,或者SEQID NO:41和SEQ ID NO:61;黄连时,为SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63,或者SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65;生姜/干姜时,为SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67;山栀子时,为SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:68;黄柏时,为SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:70;厚朴时,为SEQ ID NO:71和SEQID NO:72、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73,或者SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:72;泽泻时,为SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:75和SEQ IDNO:79,或者SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:80;吉草根时,为SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:82;橡木皮时,为SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:85,或者SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87;连翘时,为SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89,或者SEQ ID NO:90和SEQ IDNO:91;良姜时,为SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93,或者SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:94;莲肉时,为SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:4,或者SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:36;红花时,为SEQ IDNO:97和SEQ ID NO:4,或者SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:36;苏木时,为SEQ ID NO:98和SEQID NO:99。
本实施方式的用于鉴别生药的引物组能够通过核酸扩增法对待测植物中特定核酸区域进行扩增。本说明书中,“特定核酸区域”是指在各生药中的基原植物的核酸分子中具有特异性的碱基序列的区域。选为特定核酸区域的区域,必须是组成基原植物的原植物种与不包含在基原植物中的近缘种之间碱基序列不同的区域。但是,一般在近缘种、尤其是同属近缘种内,基因的碱基序列中的一致性往往较高,基原植物中特异性的特定核酸区域受到限制。另一方面,当基原植物特异性高,与近缘种之间碱基序列的差异过大时,引物只能与基原植物杂交,难以进行引物设计。因此,特定核酸区域必须是在基原植物与近缘种间保守的区域,且在二者的碱基序列上具有一定程度差异的区域。这种特定核酸区域,按各生药而定。具体而言,如果是半夏/天南星、芍药/牡丹皮、桂皮、当归、苍术/白术、柴胡、天门冬、山茱萸、百合、红参、天麻、黄芩、人参、升麻、猪苓、附子、丁香、钩藤、香附子、山栀子、黄柏、泽泻、吉草根、橡木皮、连翘、莲肉、红花、苏木,则核基因组中的核糖体DNA的ITS区域属于特定核酸区域;如果是辛夷,则叶绿体DNA的trnL内含子区域属于特定核酸区域;如果是黄连,则叶绿体DNA的rbcL区域属于特定核酸区域;如果是生姜/干姜以及良姜,则叶绿体DNA的matK区域属于特定核酸区域;如果是厚朴,则叶绿体DNA的rpl16内含子区域属于特定核酸区域。
“核糖体DNA”(本说明书中常记作“rDNA”)是指编码参与蛋白质合成的核糖体RNA(本说明书中常记作“rRNA”)的基因。真核生物的rRNA,不限其种类,已知有18S rRNA、5.8SrRNA以及28S rRNA这三种,分别对其进行编码的18S rDNA、5.8S rDNA、28S rDNA在基因组上连续存在,重复有从数百到数万份拷贝的重复序列。“ITS(Intenal TranscribedSpacer,内转录间隔区)”是指存在于18S rDNA与5.8S rDNA之间以及存在于5.8S rDNA与28S rDNA之间的序列,分别称为ITS1及ITS2。rDNA的碱基序列一般广泛地在从酵母到高等植物及哺乳动物的种间保守,但由于ITS1及ITS2会在加工过程中被除去,因此可以期待变异积累。本说明书中,将上述两个ITS和存在于其间的5.8s rDNA一并称为“ITS区域”。
“trnL”是指存在于叶绿体DNA中,编码tRNA(Leu)UAA(transfer RNA-Leucine(UAA))的基因;“trnL内含子区域”是指trnL基因的内含子区域。tRNA的碱基序列一般在生物种间高度保守,但由于内含子区域会在剪接过程中被除去,因此可以期待变异积累。
本说明书中,“rbcL”是指组成核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶(rbc:ribulose1,5-bisphosphate carboxylase)的L亚基(Large subunit,大亚基)。rbc存在于具有还原性磷酸戊糖途径的所有原核及真核光合生物以及化能合成细菌中,在种间高度保守。“rbcL区域”是指存在于叶绿体DNA中,编码rbcL的rbcL基因的部分区域。
“matK”是指存在于叶绿体DNA中,编码参与mRNA剪接的成熟酶(maturase)的基因。“matK区域”是指matK基因的部分区域。
“rpl16”是指编码组成核糖体蛋白质的大亚基(Large subunit)的蛋白质之一的RPL16的基因,存在于叶绿体DNA中。“rpl16内含子区域”是指rpl16基因的内含子区域。与trnL内含子区域相同,核糖体蛋白质基因的碱基序列一般在生物种间高度保守,但由于内含子区域会在剪接过程中被除去,因此可以期待变异积累。
通过用于鉴别各生药的引物组进行扩增的特定核酸区域的碱基序列,将在以生药的基原植物的核酸分子(基因组DNA或叶绿体DNA)为模板时的碱基序列作为其“生药标准序列”。每组引物的生药标准序列数因每种生药而异。这是因为各生药中基原植物的原植物数及特定核酸区域数不同。例如,苍术/白术时,苍术的基原植物列举有茅苍术(Atractylodeslancea)、北苍术(A.chinensis)以及它们的杂交种(A.lancea×A.chinensis);另外,白术的基原植物列举有关苍术(A.japonica)。在此,当使用用于鉴别苍术/白术的引物组(005-1F/1R)来对特定核酸区域进行扩增时,获得的扩增产物的碱基序列,即苍术/白术标准序列因种而异。具体而言,茅苍术(A.lancea)时为SEQ ID NO:107,北苍术(A.chinensis)时为SEQ ID NO:108,它们的杂交种时为SEQ ID NO:109,而关苍术(A.japonica)时为SEQ IDNO:110。因此,苍术/白术时,SEQ ID NO:107~SEQ ID NO:110所示的4个为生药标准序列。另外,钩藤时,特定核酸区域存在4处,因此对于对其分别进行扩增的4组用于鉴别的引物组(019-1F/1R、019-2F/2R、019-3F/1R以及019-4F/2R),存在有SEQ ID NO:153~SEQ ID NO:156所示的4个生药标准序列。用于鉴别各生药的引物组所对应的标准序列的SEQ ID NO示于表2。
具体而言,使用SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示用于鉴别半夏/天南星的引物组时半夏/天南星标准序列为SEQ ID NO:100或SEQ ID NO:101;使用SEQ ID NO:3和SEQ IDNO:4所示用于鉴别芍药/牡丹皮的引物组时芍药/牡丹皮标准序列为SEQ ID NO:102或SEQID NO:211;使用SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示用于鉴别芍药/牡丹皮的引物组时芍药标准序列为SEQ ID NO:103或SEQ ID NO:221;使用SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:229所示用于鉴别芍药/牡丹皮的引物组时芍药/牡丹皮标准序列为SEQ ID NO:244或SEQ ID NO:245;使用SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示用于鉴别桂皮的引物组时桂皮标准序列为SEQ ID NO:104;使用SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示用于鉴别当归的引物组时当归标准序列为SEQID NO:105;使用SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示用于鉴别当归的引物组时当归标准序列为SEQ ID NO:106;使用SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示用于鉴别苍术/白术的引物组时苍术/白术标准序列为SEQ ID NO:107~SEQ ID NO:110,或者SEQ ID NO:289~SEQ IDNO:291;使用SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16所示用于鉴别柴胡的引物组时柴胡标准序列为SEQ ID NO:111或者SEQ ID NO:294;使用SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示用于鉴别天门冬的引物组时天门冬标准序列为SEQ ID NO:112~SEQ ID NO:115,或者SEQ ID NO:299;使用SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20所示用于鉴别山茱萸的引物组时山茱萸标准序列为SEQID NO:116;使用SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22所示用于鉴别百合的引物组时百合标准序列为SEQ ID NO:117,或者SEQ ID NO:311~SEQ ID NO:314;使用SEQ ID NO:23和SEQ IDNO:24所示用于鉴别百合的引物组时百合标准序列为SEQ ID NO:118,或者SEQ ID NO:324~SEQ ID NO:326;使用SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26所示用于鉴别红参的引物组时红参标准序列为SEQ ID NO:119;使用SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示用于鉴别红参的引物组时红参标准序列为SEQ ID NO:120;使用SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:4所示用于鉴别天麻的引物组时天麻标准序列为SEQ ID NO:121;使用SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31所示用于鉴别天麻的引物组时天麻标准序列为SEQ ID NO:122;使用SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:32所示用于鉴别黄芩的引物组时黄芩标准序列为SEQ ID NO:123,或者SEQ ID NO:391;使用SEQID NO:11和SEQ ID NO:33所示用于鉴别黄芩的引物组时黄芩标准序列为SEQ ID NO:124;使用SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:34所示用于鉴别人参的引物组时人参标准序列为SEQ IDNO:125;使用SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示用于鉴别人参的引物组时人参标准序列为SEQ ID NO:126;使用SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38所示用于鉴别升麻的引物组时升麻标准序列为SEQ ID NO:127~SEQ ID NO:130,或者SEQ ID NO:401;使用SEQ ID NO:11和SEQID NO:39所示用于鉴别升麻的引物组时升麻标准序列为SEQ ID NO:131~SEQ ID NO:134,或者SEQ ID NO:409;使用SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:40所示用于鉴别升麻的引物组时升麻标准序列为SEQ ID NO:135~SEQ ID NO:138,或者SEQ ID NO:415~SEQ ID NO:416;使用SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:39所示用于鉴别升麻的引物组时升麻标准序列为SEQ IDNO:139~SEQ ID NO:142;使用SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43所示用于鉴别猪苓的引物组时猪苓标准序列为SEQ ID NO:143,或者SEQ ID NO:430~SEQ ID NO:432;使用SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:36所示用于鉴别附子的引物组时附子标准序列为SEQ ID NO:144或SEQ IDNO:145,或者SEQ ID NO:433~SEQ ID NO:434;使用SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:4所示用于鉴别附子的引物组时附子标准序列为SEQ ID NO:146或SEQ ID NO:147,或者SEQ ID NO:439~SEQ ID NO:440;使用SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:4所示用于鉴别附子的引物组时附子标准序列为SEQ ID NO:148或SEQ ID NO:149;使用SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48所示用于鉴别辛夷的引物组时辛夷标准序列为SEQ ID NO:150,SEQ ID NO:678~SEQ ID NO:681;使用SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50所示用于鉴别辛夷的引物组时辛夷标准序列为SEQ IDNO:151,或者SEQ ID NO:693~SEQ ID NO:696;使用SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:231所示用于鉴别辛夷的引物组时辛夷标准序列为SEQ ID NO:450~SEQ ID NO:454;使用SEQ IDNO:232和SEQ ID NO:50所示用于鉴别辛夷的引物组时辛夷标准序列为SEQ ID NO:465~SEQ ID NO:469;使用SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52所示用于鉴别丁香的引物组时丁香标准序列为SEQ ID NO:152;使用SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54所示用于鉴别钩藤的引物组时钩藤标准序列为SEQ ID NO:153;使用SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56所示用于鉴别钩藤的引物组时钩藤标准序列为SEQ ID NO:154;使用SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:54所示用于鉴别钩藤的引物组时钩藤标准序列为SEQ ID NO:155;使用SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:56所示用于鉴别钩藤的引物组时钩藤标准序列为SEQ ID NO:156;使用SEQ ID NO:59和SEQID NO:60所示用于鉴别香附子的引物组时香附子标准序列为SEQ ID NO:157;使用SEQ IDNO:41和SEQ ID NO:61所示用于鉴别香附子的引物组时香附子标准序列为SEQ ID NO:158;使用SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63所示用于鉴别黄连的引物组时黄连标准序列为SEQ IDNO:159~SEQ ID NO:162;使用SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65所示用于鉴别黄连的引物组时黄连标准序列为SEQ ID NO:163~SEQ ID NO:166;使用SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67所示用于鉴别生姜/干姜的引物组时生姜/干姜标准序列为SEQ ID NO:167;使用SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:68所示用于鉴别山栀子的引物组时山栀子标准序列为SEQ ID NO:168;使用SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:70所示用于鉴别黄柏的引物组时黄柏标准序列为SEQ IDNO:169;使用SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72所示用于鉴别厚朴的引物组时厚朴标准序列为SEQ ID NO:170~SEQ ID NO:172;使用SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73所示用于鉴别厚朴的引物组时厚朴标准序列为SEQ ID NO:173~SEQ ID NO:175;使用SEQ ID NO:74和SEQ IDNO:72所示用于鉴别厚朴的引物组时厚朴标准序列为SEQ ID NO:176~SEQ ID NO:178;使用SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:76所示用于鉴别泽泻的引物组时泽泻标准序列为SEQ IDNO:179或SEQ ID NO:180;使用SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78所示用于鉴别泽泻的引物组时泽泻标准序列为SEQ ID NO:181或SEQ ID NO:182;使用SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:79所示用于鉴别泽泻的引物组时泽泻标准序列为SEQ ID NO:183或SEQ ID NO:184;使用SEQ IDNO:77和SEQ ID NO:80所示用于鉴别泽泻的引物组时泽泻标准序列为SEQ ID NO:185或SEQID NO:186;使用SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:82所示用于鉴别吉草根的引物组时吉草根标准序列为SEQ ID NO:187;使用SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84所示用于鉴别橡木皮的引物组时橡木皮标准序列为SEQ ID NO:188~SEQ ID NO:191,或者SEQ ID NO:593~SEQ IDNO:594;使用SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:85所示用于鉴别橡木皮的引物组时橡木皮标准序列为SEQ ID NO:192~SEQ ID NO:195,或者SEQ ID NO:601~SEQ ID NO:602;使用SEQ IDNO:86和SEQ ID NO:87所示用于鉴别橡木皮的引物组时橡木皮标准序列为SEQ ID NO:196~SEQ ID NO:199,或者SEQ ID NO:609~SEQ ID NO:612;使用SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89所示用于鉴别连翘的引物组时连翘标准序列为SEQ ID NO:200;使用SEQ ID NO:90和SEQID NO:91所示用于鉴别连翘的引物组时连翘标准序列为SEQ ID NO:201;使用SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93所示用于鉴别良姜的引物组时良姜标准序列为SEQ ID NO:202,或者SEQID NO:633;使用SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:94所示用于鉴别良姜的引物组时良姜标准序列为SEQ ID NO:203,或者SEQ ID NO:638;使用SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:4所示用于鉴别莲肉的引物组时莲肉标准序列为SEQ ID NO:204;使用SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:36所示用于鉴别莲肉的引物组时莲肉标准序列为SEQ ID NO:205,或者SEQ ID NO:646;使用SEQID NO:97和SEQ ID NO:4所示用于鉴别红花的引物组时红花标准序列为SEQ ID NO:206;使用SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:36所示用于鉴别红花的引物组时红花标准序列为SEQ IDNO:207;使用SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99所示用于鉴别苏木的引物组时苏木标准序列为SEQ ID NO:208。
根据需要,用于各生药鉴定的引物在5’末端侧可以带有标签序列、条形码序列、接头序列等。
引物优选利用化学合成法进行合成。根据用于上述生药鉴定的引物组中的正向引物和反向引物的碱基序列信息来合成即可。合成也可以利用核酸合成受托服务。
2.生药鉴别套装
2-1.概要
本发明的第二实施方式为生药鉴别套装。本实施方式的生药鉴别套装包含在实施第三实施方式所记载的生药鉴别方法方面所需的要素作为组成要素,该第三实施方式为鉴别待测植物是否为生药的基原植物。本实施方式中使用生药鉴别套装,因此能够简便地进行待测植物的生药鉴别。
2-2.组成
作为必需的组成要素,本实施方式的生药鉴别套装包含第一实施方式所记载的用于鉴别生药的引物组。本实施方式的生药鉴别套装中,用于针对一种生药进行鉴别的引物组可以包含2组以上。例如,用于鉴别芍药的引物组时,可以单独包含SEQ ID NO:3和SEQ IDNO:4的一组引物组,也可以包含SEQ ID NO:3与SEQ ID NO:4,以及SEQ ID NO:5与SEQ IDNO:6的两组引物组。另外,一个套装所包含的生药种类也可以为两种以上。例如,分别用于鉴别辛夷和厚朴生药的引物组可以包含在一个套装中。
作为可选组成要素,生药鉴别套装可以包含各生药的标准序列信息。“各生药的标准序列信息”是指通过以从各生药的基原植物中制备的核酸为模板并使用用于鉴别该生药的引物进行核酸扩增反应而得到的扩增产物的碱基序列信息。例如,使用SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示用于鉴别半夏/天南星的引物组时半夏标准序列为SEQ ID NO:100所示的碱基序列,此外天南星标准序列为SEQ ID NO:101所示的碱基序列。生药鉴别套装中可以以在记录于纸质媒介或CD-ROM等电子媒介等信息传递媒介中的状态,或者作为通过互联网提供信息的URL来包含用于鉴别生药的引物组所对应的标准序列信息。
另外,生药鉴别套装可以包含用于从待测植物中提取核酸分子的试剂(例如氯化苄、表面活性剂等)、使用用于鉴别生药的引物组进行核酸扩增反应所需的试剂(耐热性DNA聚合酶、dNTP、Mg2+等)和/或使用说明书等。
3.生药鉴别方法
3-1.概要
本发明的第三实施方式为生药鉴别方法。本实施方式的生药鉴别方法是通过使用第一实施方式所记载的用于鉴别生药的引物组准确地鉴定候选生药的待测植物是否为目标生药的基原植物,由此鉴别该候选生药是否为目标生药的方法。使用本实施方式的方法,可以简便且准确地鉴别生药。
3-2.方法
作为必须步骤,本实施方式的生药鉴别方法包括核酸提取步骤、核酸扩增步骤、碱基序列确定步骤以及比对鉴别步骤。下面对各步骤进行具体说明。
(1)核酸提取步骤
“核酸提取步骤”是指从候选生药的待测植物中提取核酸分子的步骤。在多数情况下,作为本方法中检测对象的待测植物被施以蒸汽处理、加热、干燥、溶液浸泡等加工处理。因此,选取经过这些加工处理的待测植物的一部分,利用该领域中的常规方法提取核酸分子即可。关于核酸提取方法,根据要提取的核酸分子的种类使用合适的方法即可。例如,提取DNA时,可以使用CTAB(Cetyl trimethyl ammonium bromide,溴代十六烷基三甲胺)法、氯化苄法等。另外列举有AGPC(酸性异硫氰酸胍-苯酚-氯仿)法。关于这些方法的具体步骤等,可参考该领域的操作流程。关于操作流程,例如列举有Green,MR and Sambrook,J,(2012)Molecular Cloning:A Laboratory Manual Fourth Ed.,(《分子克隆实验指南(第4版)》)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York。此外,从植物体中提取各种核酸分子的套装,由QIAGEN公司、Takara Bio Inc.、东洋纺公司、赛默飞世尔科技公司、普洛麦格公司等各生命科学厂商正在销售,也可以利用这些产品。
(2)核酸扩增步骤
“核酸扩增步骤”是指以在所述核酸提取步骤中获得的待测植物的核酸分子为模板,使用第一实施方式所记载的用于生药鉴定的引物组,对特定核酸区域进行扩增的步骤。
本说明书中,“核酸扩增法”是指使用引物,利用聚合酶对目的核酸进行扩增的方法。例如,列举有:PCR法(包括RT-PCR法)、NASBA(Nucleic Acid Sequence-BasedAmplification,依赖核酸序列的扩增)法、ICAN(Isothermal and Chimeric primer-initiated Amplification of Nucleic acids,等温的和嵌合引物起始的核酸扩增)法、LAMP(Loop-Mediated Isothermal Amplification,环介导等温扩增)(注册商标)法(包括RT-LAMP法)等。本发明中使用的核酸扩增法没有限制,优选为PCR法。另外,用作模板的核酸分子为mRNA时,具体为rbcL mRNA或matK mRNA时,核酸扩增步骤使用如NASBA法的RNA扩增法,或者如RT-PCR法及RT-LAMP法的在利用反转录反应将mRNA制备为cDNA后使用DNA扩增法。
本步骤中使用的用于生药鉴定的引物组是针对候选生药作为鉴别对象时的目标生药的基原植物的引物组。例如,如果候选生药作为鉴别对象时的目标生药是半夏,则使用SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的用于鉴别半夏/天南星的引物组。另外,如果候选生药作为鉴别对象时的目标生药是芍药,则使用SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4、和/或SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的用于鉴别芍药的引物组。
关于各核酸扩增方法,参考该领域中已公知的各种操作流程所记载的条件进行即可。作为操作流程集的示例,列举有前述的Green,MR and Sambrook,J,(2012)、DominguesL.(2017)PCR:Methods and Protocols,Methods in Molecular Biology,Humana Press或Park DJ,(2010)PCR Protocols,Methods in Molecular Biology,Third Edition,HumanaPress等。需要说明的是,本步骤中,在模板的互补链合成时,当掺入除了G-C碱基对或A-T碱基对以外的错误时,则在后述的比对鉴别步骤中,在检验碱基序列与标准序列的不同时,会导致错误的比对结果,故鉴别精度会明显降低。因此,在用于核酸扩增反应的聚合酶中,优选使用在互补链合成时错误率低的高保真聚合酶(例如Pfu DNA聚合酶)。
如前所述,用于核酸扩增的套装由各生命科学厂商正在销售,也可以利用这些产品。这种情况下,关于核酸扩增方法的条件等,按照附带或各厂商推荐的操作流程即可。
(3)碱基序列确定步骤
“碱基序列确定步骤”是指对通过所述核酸扩增步骤获得的扩增产物的碱基序列进行确定的步骤。
在核酸扩增步骤之后获得的扩增产物是待测植物中的特定核酸区域。对该扩增产物的碱基序列进行确定。
根据需要,扩增产物也可以在确定碱基序列之前进行纯化和/或克隆。扩增产物的纯化可以利用该领域中公知的各种核酸纯化法。例如,列举有利用凝胶电泳的分离提取方法、使用二氧化硅基质及二氧化硅膜等的吸附纯化方法等。关于核酸的纯化方法,可以参考各种操作流程集所记载的方法。例如,列举有前述的Green,MR and Sambrook,J,(2012)、Domingues L.(2017)或Park DJ,(2010)等。另外,多数的核酸纯化套装也由前述的各生命科学厂商正在销售,也可以利用这些产品。这种情况下,关于核酸纯化方法的具体条件等,按照附带或各厂商推荐的操作流程即可。
扩增产物的克隆可以通过将获得的扩增产物导入质粒等中,再转入到大肠杆菌等宿主内,从而以从其转化体中回收的方式实现。关于扩增产物的克隆法,按照该领域中公知的、前述操作流程集等所记载的方法进行即可。关于该扩增产物的克隆,各生命科学厂商正在销售各种用于克隆的套装。例如,用于扩增产物的克隆的套装列举有Mighty TA-cloningKit(Takara Bio Inc.)等。使用这些市售的套装会很方便。
扩增产物的碱基序列确定法利用该领域中公知的碱基序列确定法实施即可。例如,除了通常的桑格法(双脱氧法)以外,还可列举有:焦磷酸测序法(罗氏公司)、合成测序法(Illumina公司)、连接测序法(赛默飞世尔科技公司)、离子半导体测序法(赛默飞世尔科技公司)等下一代测序法。这些方法除了该领域中公知的、各种操作流程集所记载的以外,也可以参考各公司网页上公开的方法。
本步骤中确定的扩增产物的碱基序列的准确性,从本发明的主旨来看是很重要的。因此,优选如桑格法的序列读取错误率低的碱基序列确定法。
(4)比对鉴别步骤
“比对鉴别步骤”是指将所述碱基序列确定步骤中确定的待测植物中的特定核酸区域的碱基序列与目标生药的基原植物中的标准序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则该待测植物被鉴别为该基原植物,所述候选生药被鉴别为目标生药的步骤。
基原植物的标准序列是在与待测植物相同的条件下,对基原植物进行核酸提取步骤、核酸扩增步骤以及碱基序列确定步骤而获得的特定核酸区域的碱基序列。基原植物中具有特异性的序列,即使是基原植物的同属近缘种及近似种,原则上该标准序列的部分碱基也是不同的。
因此,将待测植物中的特定核酸区域的碱基序列与基原植物的标准序列进行比对,如果该序列完全一致,则可准确地鉴定出待测植物是基原植物。如果待测植物是目标生药的基原植物,则可鉴别出该候选生药是目标生药。另一方面,如果待测植物中的特定核酸区域的碱基序列与目标生药的基原植物的标准序列不一致,则认定待测植物不是基原植物,或混有非基原植物的植物种。因此,可鉴别出候选生药不是目标生药。
下面针对各种生药中,准确地鉴定出待测植物是否为目标生药的基原植物,并根据其结果鉴别生药的具体步骤进行说明。
(半夏/天南星的鉴别方法)
从候选半夏或天南星的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ IDNO:1和SEQ ID NO:2所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将扩增产物的碱基序列与半夏的标准序列即SEQ ID NO:100所示的碱基序列或天南星的标准序列即SEQ ID NO:101所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列均为一致时,则所述待测植物被鉴别为半夏或天南星的基原植物,所述候选半夏或天南星被鉴别为半夏或天南星。例如,当扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:100所示的碱基序列完全一致时,则该候选生药可被鉴别为半夏。
(芍药/牡丹皮的鉴别方法)
从候选芍药或牡丹皮的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ IDNO:3和SEQ ID NO:4,或者SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:3和SEQID NO:4所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与芍药的标准序列即SEQ IDNO:102,或者牡丹皮的标准序列即SEQ ID NO:211所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与芍药的标准序列即SEQ ID NO:103,或者牡丹皮的标准序列即SEQ ID NO:221所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为芍药或牡丹皮的基原植物,所述候选芍药或牡丹皮被鉴别为芍药或牡丹皮。
(桂皮的鉴别方法)
从候选桂皮的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:7和SEQID NO:8所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将扩增产物的碱基序列与桂皮的标准序列即SEQ ID NO:104所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为桂皮的基原植物,所述候选桂皮被鉴别为桂皮。
(当归的鉴别方法)
从候选当归的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:9和SEQID NO:10,或者SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与当归的标准序列即SEQ ID NO:105所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与当归的标准序列即SEQ ID NO:106所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为当归的基原植物,所述候选当归被鉴别为当归。
(苍术/白术的鉴别方法)
从候选苍术或白术的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将扩增产物的碱基序列与苍术的标准序列即SEQ ID NO:107~SEQ ID NO:109中任一个所示的碱基序列进行比对,或与白术的标准序列即SEQ ID NO:110,或者SEQ ID NO:289~SEQ ID NO:291所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列均为一致时,则所述待测植物被鉴别为苍术或白术的基原植物,所述候选苍术或白术被鉴别为苍术或白术。
(柴胡的鉴别方法)
从候选柴胡的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:15和SEQID NO:16所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将扩增产物的碱基序列与柴胡的标准序列即SEQ ID NO:111或者SEQ IDNO:294所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为柴胡的基原植物,所述候选柴胡被鉴别为柴胡。
(天门冬的鉴别方法)
从候选天门冬的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将扩增产物的碱基序列与天门冬的标准序列即SEQ ID NO:112~SEQ ID NO:115,或者SEQ ID NO:299中任一个所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为天门冬的基原植物,所述候选天门冬被鉴别为天门冬。
(山茱萸的鉴别方法)
从候选山茱萸的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将扩增产物的碱基序列与山茱萸的标准序列即SEQ ID NO:116所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为山茱萸的基原植物,所述候选山茱萸被鉴别为山茱萸。
(百合的鉴别方法)
从候选百合的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:21和SEQID NO:22,或者SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:21和SEQ IDNO:22所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与百合的标准序列即SEQ IDNO:117,或者SEQ ID NO:311~SEQ ID NO:314所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQID NO:23和SEQ ID NO:24所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与百合的标准序列即SEQ ID NO:118,或者SEQ ID NO:324~SEQ ID NO:326所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为百合的基原植物,所述候选百合被鉴别为百合。
(红参的鉴别方法)
从候选红参的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:25和SEQID NO:26,或者SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:25和SEQ IDNO:26所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与红参的标准序列即SEQ IDNO:119所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与红参的标准序列即SEQ ID NO:120所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为红参的基原植物,所述候选红参被鉴别为红参。
(天麻的鉴别方法)
从候选天麻的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:29和SEQID NO:4,或者SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:29和SEQ IDNO:4所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与天麻的标准序列即SEQ IDNO:121所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与天麻的标准序列即SEQ ID NO:122所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为天麻的基原植物,所述候选天麻被鉴别为天麻。
(黄芩的鉴别方法)
从候选黄芩的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:9和SEQID NO:32,或者SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:33所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:32所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与黄芩的标准序列即SEQ ID NO:123或者SEQ ID NO:391所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:33所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与黄芩的标准序列即SEQ ID NO:124所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为黄芩的基原植物,所述候选黄芩被鉴别为黄芩。
(人参的鉴别方法)
从候选人参的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:9和SEQID NO:34,或者SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:34所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与人参的标准序列即SEQ ID NO:125所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与人参的标准序列即SEQ ID NO:126所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为人参的基原植物,所述候选人参被鉴别为人参。
(升麻的鉴别方法)
从候选升麻的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:37和SEQID NO:38、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:40,或者SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:39所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与升麻的标准序列即SEQ ID NO:127~SEQ ID NO:130,或者SEQ ID NO:401中任一个所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ ID NO:11和SEQ IDNO:39所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与升麻的标准序列即SEQ IDNO:131~SEQ ID NO:134,或者SEQ ID NO:409中任一个所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:40所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与升麻的标准序列即SEQ ID NO:135~SEQ ID NO:138,或者SEQ ID NO:415~SEQ ID NO:416中任一个所示的碱基序列进行比对,以及将使用由SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:39所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与升麻的标准序列即SEQ ID NO:139~SEQ IDNO:142中任一个所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为升麻的基原植物,所述候选升麻被鉴别为升麻。
(猪苓的鉴别方法)
从候选猪苓的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:42和SEQID NO:43所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将扩增产物的碱基序列与猪苓的标准序列即SEQ ID NO:143所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为猪苓的基原植物,所述候选猪苓被鉴别为猪苓。
(附子的鉴别方法)
从候选附子的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:44和SEQID NO:36、SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:4,或者SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:4所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:36所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与附子的标准序列即SEQ ID NO:144或SEQ ID NO:145所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:4所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与附子的标准序列即SEQ ID NO:146或SEQ ID NO:147所示的碱基序列进行比对,以及将使用由SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:4所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与附子的标准序列即SEQ ID NO:148或SEQ ID NO:149所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为附子的基原植物,所述候选附子被鉴别为附子。
(辛夷的鉴别方法)
从候选辛夷的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:47和SEQID NO:48、SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:231,或者SEQ IDNO:232和SEQ ID NO:50所示碱基序列组成的引物组,对叶绿体DNA的trnL内含子区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与辛夷的标准序列即SEQ ID NO:150,或者SEQID NO:678~SEQ ID NO:681所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ ID NO:49和SEQ IDNO:50所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与辛夷的标准序列即SEQ IDNO:151,或者SEQ ID NO:693~SEQ ID NO:696所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ IDNO:230和SEQ ID NO:231所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与辛夷的标准序列即SEQ ID NO:450~SEQ ID NO:454所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ IDNO:232和SEQ ID NO:50所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与辛夷的标准序列即SEQ ID NO:465~SEQ ID NO:469所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为辛夷的基原植物,所述候选辛夷被鉴别为辛夷。
(丁香的鉴别方法)
从候选丁香的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:51和SEQID NO:52所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将扩增产物的碱基序列与丁香的标准序列即SEQ ID NO:152所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为丁香的基原植物,所述候选丁香被鉴别为丁香。
(钩藤的鉴别方法)
从候选钩藤的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:53和SEQID NO:54、SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:54,或者SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:56所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与钩藤的标准序列即SEQ ID NO:153所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与钩藤的标准序列即SEQ ID NO:154所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ IDNO:57和SEQ ID NO:54所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与钩藤的标准序列即SEQ ID NO:155所示的碱基序列进行比对,以及将使用由SEQ ID NO:58和SEQ IDNO:56所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与钩藤的标准序列即SEQ IDNO:156所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为钩藤的基原植物,所述候选钩藤被鉴别为钩藤。
(香附子的鉴别方法)
从候选香附子的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:60,或者SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:61所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:59和SEQID NO:60所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与香附子的标准序列即SEQID NO:157所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:61所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与香附子的标准序列即SEQ ID NO:158所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为香附子的基原植物,所述候选香附子被鉴别为香附子。
(黄连的鉴别方法)
从候选黄连的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:62和SEQID NO:63,或者SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65所示碱基序列组成的引物组,对叶绿体DNA的rbcL区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:62和SEQ IDNO:63所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与黄连的标准序列即SEQ IDNO:159~SEQ ID NO:162中任一个所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与黄连的标准序列即SEQ ID NO:163~SEQ ID NO:166中任一个所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为黄连的基原植物,所述候选黄连被鉴别为黄连。
(生姜/干姜的鉴别方法)
从候选生姜/干姜的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67所示碱基序列组成的引物组,对叶绿体DNA的matK区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将扩增产物的碱基序列与生姜/干姜的标准序列即SEQ ID NO:167所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为生姜/干姜的基原植物,所述候选生姜/干姜被鉴别为生姜/干姜。
(山栀子的鉴别方法)
从候选山栀子的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:68所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将扩增产物的碱基序列与山栀子的标准序列即SEQ ID NO:168所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为山栀子的基原植物,所述候选山栀子被鉴别为山栀子。
(黄柏的鉴别方法)
从候选黄柏的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:69和SEQID NO:70所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将扩增产物的碱基序列与黄柏的标准序列即SEQ ID NO:169所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为黄柏的基原植物,所述候选黄柏被鉴别为黄柏。
(厚朴的鉴别方法)
从候选厚朴的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:71和SEQID NO:72、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73,或者SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:72所示碱基序列组成的引物组,对叶绿体DNA的rpl16内含子区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与厚朴的标准序列即SEQ ID NO:170~SEQ ID NO:172中任一个所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与厚朴的标准序列即SEQ ID NO:173~SEQ ID NO:175中任一个所示的碱基序列进行比对,以及将使用由SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:72所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与厚朴的标准序列即SEQ ID NO:176~SEQ ID NO:178中任一个所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为厚朴的基原植物,所述候选厚朴被鉴别为厚朴。
(泽泻的鉴别方法)
从候选泽泻的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:75和SEQID NO:76、SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78,或者SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:79,或者SEQ IDNO:77和SEQ ID NO:80所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:76所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与泽泻的标准序列即SEQ ID NO:179或SEQ ID NO:180所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与泽泻的标准序列即SEQ ID NO:181或SEQ ID NO:182所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:79所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与泽泻的标准序列即SEQ ID NO:183或SEQ ID NO:184所示的碱基序列进行比对,以及将使用由SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:80所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与泽泻的标准序列即SEQ ID NO:185或SEQ ID NO:186所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为泽泻的基原植物,所述候选泽泻被鉴别为泽泻。
(吉草根的鉴别方法)
从候选吉草根的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:82所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将扩增产物的碱基序列与吉草根的标准序列即SEQ ID NO:187所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为吉草根的基原植物,所述候选吉草根被鉴别为吉草根。
(橡木皮的鉴别方法)
从候选橡木皮的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:85、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与橡木皮的标准序列即SEQ ID NO:188~SEQ ID NO:191,或者SEQ ID NO:593~SEQ IDNO:594中任一个所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:85所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与橡木皮的标准序列即SEQ ID NO:192~SEQ ID NO:195,或者SEQ ID NO:601~SEQ ID NO:602中任一个所示的碱基序列进行比对,以及将使用由SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与橡木皮的标准序列即SEQ ID NO:196~SEQ ID NO:199,或者SEQ ID NO:609~SEQ ID NO:612中任一个所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为橡木皮的基原植物,所述候选橡木皮被鉴别为橡木皮。
(连翘的鉴别方法)
从候选连翘的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:88和SEQID NO:89,或者SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:91所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:88和SEQ IDNO:89所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与连翘的标准序列即SEQ IDNO:200所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:91所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与连翘的标准序列即SEQ ID NO:201所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为连翘的基原植物,所述候选连翘被鉴别为连翘。
(良姜的鉴别方法)
从候选良姜的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:92和SEQID NO:93,或者SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:94所示碱基序列组成的引物组,对叶绿体DNA的matK区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:92和SEQ IDNO:93所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与良姜的标准序列即SEQ IDNO:202或者SEQ ID NO:633所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:66和SEQ IDNO:94所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与良姜的标准序列即SEQ IDNO:203或者SEQ ID NO:638所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为良姜的基原植物,所述候选良姜被鉴别为良姜。
(莲肉的鉴别方法)
从候选莲肉的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:95和SEQID NO:4,或者SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:36所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:92和SEQ IDNO:4所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与莲肉的标准序列即SEQ IDNO:204所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:36所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与莲肉的标准序列即SEQ ID NO:205或者SEQ IDNO:646所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为莲肉的基原植物,所述候选莲肉被鉴别为莲肉。
(红花的鉴别方法)
从候选红花的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:97和SEQID NO:4,或者SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:36所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将使用由SEQ ID NO:97和SEQ IDNO:4所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与红花的标准序列即SEQ IDNO:206所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:36所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与红花的标准序列即SEQ ID NO:207所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为红花的基原植物,所述候选红花被鉴别为红花。
(苏木的鉴别方法)
从候选苏木的待测植物中提取核酸,以该核酸为模板,使用由SEQ ID NO:98和SEQID NO:99所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增后,确定扩增产物的碱基序列。之后,将扩增产物的碱基序列与苏木的标准序列即SEQ ID NO:208所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列完全一致时,则所述待测植物被鉴别为苏木的基原植物,所述候选苏木被鉴别为苏木。
[实施例]
<实施例1:芍药和牡丹皮的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,芍药的基原植物为芍药(Paeonialactiflora),另外,牡丹皮的基原植物为牡丹(Paeonia suffruticosa)。但是,由于二者近缘且相似,因此可能会彼此混淆,此外,市场和园艺供应的种苗中存在它们的其他近缘种川赤芍(P.veitchii)和芍药(P.officinalis),为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出芍药和牡丹皮的鉴别方法中的一例。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的基原植物芍药(Paeonia lactiflora)和牡丹(P.suffruticosa)的一部分,另外,对于芍药近缘种川赤芍(Paeonia veitchii)、细叶芍药(P.tenuifolia)、新疆芍药(P.sinjiangensis),采集其腊叶标本的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。关于其他近缘种窄叶芍药(P.anomala)、荷兰芍药(P.officinalis ssp.microcarpa)、大叶芍药(P.rhodia)、超群芍药(P.broteri)、羊角芍药(P.arietina)和巴纳特芍药(P.banatica),则从GenBank(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/)获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对特定核酸区域进行扩增。关于核酸扩增反应条件,可以根据每种用于鉴别生药的引物来决定适宜且合适的条件。
(PCR反应液1:用于ITS1扩增#1)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL、gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:002-1F(SEQ ID NO:3)(10pmol/μL)1μL、反向引物:002-1R(White T.J.,et al.1990,Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes forphylogenetics.In:Innis M.A.,Gelfand D.H.,Sninsky J.J.and White T.J.(eds.),PCRProtocols,A Guide to Methods and Applications.pp.315-322.Academic Press,SanDiego所记载的通用引物ITS2:SEQ ID NO:4)(10pmol/μL)1μL、模板DNA1μL;
(PCR反应液2:用于ITS2扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL、gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:002-2F(SEQ ID NO:5)(10pmol/μL)1μL、反向引物:002-2R(SEQ ID NO:6)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液3:用于ITS1扩增#2)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL、gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:002-1F(SEQ ID NO:3)(10pmol/μL)1μL、反向引物:002-3R(SEQ ID NO:229)(10pmol/μL)1μL,模板DNA 1μL。
·PCR循环条件
将上述各模板DNA与PCR反应液1~3一同放入0.2mL微管中,利用步降(Step Down)法,即利用GeneAmp 9700(赛默飞世尔科技公司)等热循环仪并按照以下条件进行PCR:(94℃,4min)×1个循环、(95℃,30sec;70℃,15sec;72℃,15sec)×3个循环、(95℃,30sec;66℃,15sec;72℃,15sec)×3个循环、(95℃,30sec;62℃,15sec;72℃,15sec)×3个循环、(95℃,30sec;58℃,15sec;72℃,15sec)×3个循环、(95℃,30sec;54℃,15sec;72℃,15sec)×3个循环、(95℃,30sec;48℃,1.5min;72℃,2.5min)×20个循环,以及(72℃,7min.)×1个循环。
·通过凝胶电泳确认扩增产物与凝胶提取
在PCR之后,利用凝胶电泳法确认目的特定核酸区域的扩增产物,并将其分离。具体而言,在PCR之后的反应液中添加2μL的BlueJuice凝胶加样缓冲液,制备样本溶液。将总量2%NuSieve+SeaKEM(Takara Bio Inc.)+1×TAE的凝胶浸泡在Mupid EX-U电泳槽(Mupid公司)中填充的1×TAE缓冲液中,将15μL的样品溶液加入孔中之后,在100V×约30分钟的条件下进行了电泳。对于目标PCR产物量,使用波长为500nm的“LED透照仪LB-16BG”(NipponGenetics公司)和凝胶成像装置Printgraph AE-6931FXCF(ATTO公司)进行了确认,并拍摄了图像(未图示)。
接着,使用一次性手术刀从目的扩增产物中切取预期大小的条带,使用illustraGFX PCR纯化套装(GE Healthcare日本公司)提取后,使用同一套装中的Type4缓冲液20μL进行洗脱。
·确定扩增产物的碱基序列
为了循环序列反应的优化,使用Nanodrop 2000C(Biomedical Science公司)测定扩增产物的浓度,用TE缓冲液稀释以达到适宜浓度。将BigDye Terminator v.3.1溶液(赛默飞世尔科技公司)0.8μL、5×缓冲液(赛默飞世尔科技公司)0.4μL、蒸馏水0.8μL、引物(002-2F/2R)(1pmol/μL)1μL、纯化扩增产物1μL进行混合,将其200μL装入96孔板,使用GeneAmp 9700(赛默飞世尔科技公司)按照BigDye Terminator v.3.1手册所指定的条件进行了循环测序。反应后,通过BigDye Terminator v.3.1手册中指定的EDTA乙醇沉淀法,获得纯化扩增产物。在ABI PRISM(注册商标)3500xL遗传分析仪(赛默飞世尔科技公司)中,使用50cm毛细管、POP7并按照该仪器的手册,确定扩增产物的碱基序列。之后,通过VectorNTI9.0for Windows(赛默飞世尔科技公司)中的ContigExpress,将PCR反应液1和PCR反应液2中各自的各扩增产物的正向序列和反向序列进行比对,确定可靠性高的序列。通过BioEditv7.2.5for Windows(Tom Hall 2013),对作为基原植物的芍药或牡丹皮的标准序列与芍药/牡丹皮近缘种的特定核酸区域的碱基序列的差异进行验证。
结果示于表3。
表中,特定核酸区域中的碱基序列的下划线部分对应于正向引物(5’侧)和反向引物的互补链(3’侧)的碱基序列(以下相同)。
可知芍药在特定核酸区域即核糖体DNA的ITS区域中,与验证的10种同属近缘种具有不同的固有碱基序列。因此,通过使用引物组002-1F/002-1R、002-2F/002-2R,或者002-1F/002-3R对核糖体DNA的ITS区域进行扩增并确定其碱基序列,可知能够鉴别候选芍药即经过生药加工处理的待测植物是芍药(P.lactiflora)或者牡丹皮(P.suffruticosa),还是其他的近缘种。
另外,当利用在PCR反应液#3中使用的引物组002-1F/002-3R对核糖体DNA的ITS1区域进行扩增时,第48位为T(胸腺嘧啶)的只有芍药(P.lactiflora),第32位和第61位分别为G(鸟嘌呤)和C(胞嘧啶)的只有牡丹(P.suffruticosa)。因此,根据这两个位点,可以鉴别芍药和牡丹以及其他近缘种。关于第28位、第53位、第67位、第76位、第87位、第117位、第118位,可知虽然不能通过各个碱基序列来鉴别芍药和牡丹以及其他近缘种,但可以通过将多个上述位点的碱基序列信息组合来进行鉴别。
<实施例2:半夏/天南星的鉴别方法>
关于半夏/天南星的基原植物,在第十七修订版的日本药局方中规定,半夏的基原植物为半夏(Pinellia ternata),天南星的基原植物为天南星(Arisaemaheterophyllum)、一把伞南星(A.erubescens)、东北南星(A.amurense)或其他同属的近缘植物(Araceae,天南星科)。但是,市场中有可能会流通近缘种虎掌(P.pedatisecta)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出半夏/天南星的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是从生药或生药加工前的半夏的基原植物半夏(Pinellia ternata),以及天南星的基原植物天南星(Arisaema heterophyllum)、一把伞南星(A.erubescens)、东北南星(A.amurense)及它们的同属近缘植物的一部分提取的。另外,近缘种中,关于鹞落坪半夏(P.yaoluopingensis),从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液:用于ITS扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL、gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:001-1F(SEQ ID NO:1)(10pmol/μL)1μL、反向引物:001-1R(SEQ ID NO:2)(10pmol/μL)1μL,模板DNA 1μL。
结果示于表4。
扩增后的ITS区域的核酸片段中,半夏(P.Breitenbach)中没有固有的碱基序列,但根据扩增后的碱基序列中的不同位点,可以与近缘种进行鉴别。例如,半夏(P.Breitenbach)和最近缘的鹞落坪半夏(P.yaoluopingensis)仅根据第88位碱基便可鉴别。另外,3种天南星基原植物(天南星(A.heterophyllum)、一把伞南星(A.erubescens)、东北南星(A.amurense))中未发现共同的变异,但通过将2种中共同的变异位点进行组合,可以鉴别它们的基原植物和近缘种。因此,通过使用引物组001-1F/001-1R对ITS区域进行扩增并确定其碱基序列,可知能够鉴别待测植物是半夏(P.ternata),或是天南星(A.heterophyllum),抑或是其他近缘种。
<实施例3:桂皮的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,桂皮的基原植物为肉桂(Cinnamomumcassia)。但是,市场中有可能会流通近缘种爪哇肉桂(C.javanicum)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出桂皮的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的桂皮的基原植物肉桂(C.cassia)的一部分,另外,对于桂皮近缘种中的C.sieboldii、阴香(C.burmanii)、锡兰肉桂(C.zeylanicum),分别采集其腊叶标本的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,对于网脉桂(C.reticulatum)、C.insularimontanum和天竺桂(C.japonicum),从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液:用于ITS扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL、gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:003-1F(SEQ ID NO:7)(10pmol/μL)1μL、反向引物:003-1R(SEQ ID NO:8)(10pmol/μL)1μL,模板DNA 1μL。
结果示于表5。
在扩增后的ITS区域的核酸片段中,第8位为C(胞嘧啶)和第93位为A(腺嘌呤)的只有肉桂(C.cassia),可知根据这些位点的碱基可以鉴别肉桂(C.cassia)和其他近缘种。另外,关于扩增后的核酸片段中的第21位、第33位、第36位、第57位、第59位、第65位、第66位、第68位、第72位、第92位、第108位及第109位这12个位点,可知虽然不能根据各位点单独的碱基信息来鉴别肉桂(C.cassia)和近缘种,但通过将选自由这些位点组成的组中2个以上位点的碱基信息的组合,则可以鉴别。
要鉴别肉桂(C.cassia)和近缘种,第8位和第93位的鉴定为必要条件,但为了高精度的鉴别,优选鉴定包括上述12个位点在内的14个位点的碱基。
<实施例4:当归的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,当归的基原植物为东当归(Angelicaacutiloba)或北海当归(A.acutiloba var.sugiyamae)。但是,市场中有可能会流通近缘种当归(A.sinensis)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出当归的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的当归的基原植物东当归(Angelicaacutiloba)和北海当归(A.acutiloba var.sugiyamae)的一部分,另外,对于近缘种中的当归(A.sinensis),采集收集的腊叶标本的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)PlantMini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种中的杭白芷(A.dahurica var.formosana)、重齿毛当归(A.pubescens)、朝鲜当归(A.gigas)、Perissocoeleum barclayae、Niphogeton josei,从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于ITS1扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:004-1F(SEQ ID NO:9;White et al.1990,前文所述)(10pmol/μL)1μL、反向引物:004-1R(SEQ ID NO:10)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液2:用于ITS2扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL,10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:004-2F(SEQ ID NO:11;White et al.1990,前文所述)(10pmol/μL)1μL,反向引物:004-2R(SEQ ID NO:12)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表6。
基原植物当归(A.acutiloba)和北海当归(A.acutiloba var.sugiyamae)中扩增后的ITS1区域为相同序列。因此,下面以当归(A.acutiloba)为基准进行说明。在ITS1区域中,关于第70位、第75位、第83位、第188位及第229位这5个位点,可知虽然根据单独的碱基信息不能鉴别当归(A.acutiloba)和近缘种,但通过组合多个位点的碱基信息,则可以鉴别。
基原植物当归(A.acutiloba)和北海当归(A.acutiloba var.sugiyamae)的ITS2区域也为相同序列。因此,下面以当归(A.acutiloba)为基准进行说明。在ITS2区域中,扩增后的核酸片段的第270位为T(胸腺嘧啶)的只有当归(A.acutiloba),可知根据这些位点的碱基可以鉴别当归和其他近缘种。另外,关于第116位、第133位、第171位、第203位、第248位这5个位点,可知虽然根据各位点单独的碱基信息不能鉴别当归和近缘种,但通过组合多个位点的碱基信息,则可以鉴别。
要鉴别当归(A.acutiloba)和北海当归(A.acutiloba var.sugiyamae)与其近缘种,依靠第270位的鉴定便已足够,但为了高精度的鉴别,优选鉴定包括上述5个位点在内的6个位点的碱基,为了更高精度的鉴别,优选鉴定包括ITS2区域的5个位点的合计11个位点的碱基进行评价。
<实施例5:苍术/白术的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,苍术的基原植物为茅苍术(Atractylodeslancea)、北苍术(A.chinensis)或它们的杂交种(Compositae,菊科),另外,白术的基原植物为关苍术(A.japonica(日本白术))或白术(A.macrocephala(Atractylodes ovata))。但是,市场中有可能会将白术当做苍术流通,或者将苍术当做白术流通,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出苍术/白术的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或苍术以及白术的所有种类的基原植物的腊叶标本的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液:用于ITS扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:005-1F(SEQ ID NO:13)(10pmol/μL)1μL、反向引物:005-1R(SEQ ID NO:14)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表7。
关于在扩增后的ITS区域的核酸片段中检测出的第22位、第24位、第34位、第57位、第70位、第74位、第81位、第94位、第102位、第110位、第123位、第130位、第175位、第179位、第212位及第232位这16个位点,可知虽然不能根据各位点单独的碱基信息来彼此鉴别苍术和白术,但通过选自它们的组中2个以上的组合,则可以鉴别各自的种类。
<实施例6:柴胡的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,柴胡的基原植物为三岛柴胡(Bupleurumfalcatum)。但是,市场中有可能会流通近缘种B.ranunculoides等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出柴胡的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的基原植物三岛柴胡(B.falcatum)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。需要说明的是,三岛柴胡种群内包含多个品系,有染色体数不同的品系(2n=26和2n=20),以及在中国当做其他种类(狭叶柴胡(B.scorzonerifolium)、北柴胡(B.chinense))处理的品系,序列各不相同。另外,关于近缘种B.ranunculoides、锥叶柴胡(B.bicaule)、黑柴胡(B.smithii),从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液:用于ITS扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:006-1F(SEQ ID NO:15)(10pmol/μL)1μL、反向引物:006-1R(SEQ ID NO:16)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表8。
关于在扩增后的ITS区域的核酸片段中检测出的第4位、第20位、第26位、第43位、第48位、第75位、第128位、第146位、第161位、第168位、第181位及第182位这12个位点,可知虽然不能根据各位点单独的碱基信息来鉴别柴胡和近缘种,但通过选自它们的组中2个以上的组合,则可以鉴别柴胡。
<实施例7:天门冬的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,天门冬的基原植物为天门冬(Asparaguscochinchinensis)。但是,市场中有可能会流通近缘种密齿天门冬(A.meioclados)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出天门冬的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的天门冬的基原植物天门冬(A.cochinchinensis)的一部分,另外,对于近缘种中的密齿天门冬(A.meioclados)、短梗天门冬(A.lycopodineus)和石刁柏(A.officinalis),采集腊叶标本的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。关于其他近缘种总序天冬(A.racemosus)和雉隐天冬(A.schoberioides),从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液:用于ITS扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:007-1F(SEQ ID NO:17)(10pmol/μL)1μL、反向引物:007-1R(SEQ ID NO:18)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表9。
天门冬的基原植物天门冬(A.cochinchinensis)中可以看到种群内多型,因此表9中将扩增后的ITS区域分别表示为天门冬1(A.cochinchinensis1)和天门冬2(A.cochinchinensis2)。可知虽然没有确认到可以通过单独的碱基信息鉴别天门冬(A.cochinchinensis)的2个型与近缘种的位点,但通过选自由第5位、第16位、第18位、第24位、第25位、第41位和第45位这7个位点组成的组中2个以上的组合,可以鉴别天门冬。
<实施例8:山茱萸的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,山茱萸的基原植物为山茱萸(Cornusofficinalis)。但是,市场中有可能会流通近缘种欧洲山茱萸(C.mas)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出山茱萸的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的基原植物山茱萸(C.officinalis)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种欧洲山茱萸(C.mas)、C.eydeana、川鄂山茱萸(C.chinensis)和C.stracheyi,从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液:用于ITS扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:008-1F(SEQ ID NO:19)(10pmol/μL)1μL、反向引物:008-1R(SEQ ID NO:20)(10pmol/μL)1μL、模板DNA1μL。
结果示于表10。
关于在扩增后的ITS区域的核酸片段中检测出的第31位、第35位、第77位及第87位这4个位点,可知虽然不能根据各位点单独的碱基信息来鉴别山茱萸(C.officinalis)和近缘种,但通过选自它们的组中2个以上的组合,则可以鉴别山茱萸。
<实施例9:百合的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,百合的基原植物为卷丹(Liliumlancifolium)、百合(L.brownii var.colchesteri)、野百合(L.brownii)或细叶百合(L.pumilum)。但是,市场中有可能会流通近缘种渥丹(L.concolor)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出百合的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的百合的基原植物卷丹(L.lancifolium)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种,从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于ITS1扩增#1)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:009-1F(SEQ ID NO:21)(10pmol/μL)1μL、反向引物:009-1R(SEQ ID NO:22)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液2:用于ITS1扩增#2)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:009-2F(SEQ ID NO:23)(10pmol/μL)1μL、反向引物:009-2R(SEQ ID NO:24)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表11。
关于在ITS区域#1的核酸片段中检测出的第18位、第37位、第50位、第54位、第58位、第90位、第95位、第102位、第124位及第150位这10个位点,可知虽然不能根据各位点单独的碱基信息来鉴别百合的基原植物和近缘种,但通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,则可以鉴别百合。
另外,关于在ITS1区域#2的核酸片段中检测出的第6位、第18位、第20位、第25位、第32位、第42位、第46位、第54位、第107位及第126位这10个位点,可知虽然不能根据各位点单独的碱基信息来鉴别百合的基原植物和近缘种,但通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,则可以鉴别百合。
<实施例10:人参/红参的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,人参/红参的基原植物为人参(Panaxginseng)。但是,市场中有可能会流通近缘种西洋参(P.quinquefolius)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出人参/红参的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的人参/红参的基原植物人参(P.ginseng)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种,从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于ITS1扩增#1)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:013-1F(SEQ ID NO:9;White et al.1990,前文所述)(10pmol/μL)1μL、反向引物:013-1R(SEQ ID NO:34)(10pmol/μL)1μL、模板DNA1μL;
(PCR反应液2:用于ITS2扩增#1)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:013-2F(SEQ ID NO:35)(10pmol/μL)1μL、反向引物:013-2R(SEQ ID NO:36;White etal.1990,前文所述)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液3:用于ITS1扩增#2)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:010-1F(SEQ ID NO:25)(10pmol/μL)1μL、反向引物:010-1R(SEQ ID NO:26)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液4:用于ITS2扩增#2)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:010-2F(SEQ ID NO:27)(10pmol/μL)1μL、反向引物:010-2R(SEQ ID NO:28)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表12。
PCR反应液1和3,以及反应液2和4分别扩增同一鉴别区域,PCR反应液1和3,以及反应液2和4中,扩增的片段长度不同。一般而言,扩增片段越短,扩增成功率越高,但得到的鉴别位点的信息数越少,难以用自动测序仪确定序列。以下,在本说明书的实施例中使用的各引物组中相同。
本方法实施以下二阶段的实验:尝试利用PCR反应液1和2来确定扩增片段的序列,如果确定序列的成功率不够高,则利用PCR反应液3和4再次进行扩增和确定序列。由此,可以降低成本和应对样品的DNA质量的差异。需要说明的是,关于红参,由于利用PCR反应液1和PCR反应液2确定序列的成功率低,因此从一开始使用PCR反应液3和4的试验是有效的。
在ITS1区域中,第147位为A(腺嘌呤)的只有人参(P.ginseng),可知根据该位点的碱基可以鉴别人参和其他近缘种。另外,关于第45位、第73位及第206位这3个位点,可知虽然仅根据各位点单独的碱基信息不能鉴别人参和近缘种,但通过组合多个位点的碱基信息,则可以鉴别。要鉴别人参(P.ginseng)和近缘种,第147位的鉴定就已足够,但为了高精度的鉴别,优选鉴定包括上述3处在内的4个位点的碱基。
在ITS2区域中,第106位为T(胸腺嘧啶)的只有人参(P.ginseng),可知根据该位点的碱基可以鉴别人参和其他近缘种。关于第85位、第97位、第146位、第162位、第203位、第270位及第281位这7个位点,可知虽然仅根据各位点单独的碱基信息不能鉴别人参和近缘种,但通过组合多个位点的碱基信息,则可以鉴别。要鉴别人参(P.ginseng)和近缘种,第106位的鉴定就已足够,但为了高精度的鉴别,优选鉴定包括上述7个位点在内的8个位点的碱基。
在ITS1区域#2中,第80位为A(腺嘌呤)的只有人参(P.ginseng),可知根据该位点的碱基可以鉴别人参和其他近缘种。另外,关于第6位、第21位及第32位这3个位点,可知虽然仅根据各位点单独的碱基信息不能鉴别人参和近缘种,但通过组合多个位点的碱基信息,则可以鉴别。也就是说,要鉴别人参(P.ginseng)和近缘种,第80位的鉴定就已足够,但为了高精度的鉴别,优选鉴定包括上述3个位点在内的4个位点的碱基。
在ITS2区域#2中,第78位为T(胸腺嘧啶)的只有人参(P.ginseng),可知根据该位点的碱基可以鉴别人参和其他近缘种。另外,关于第64位、第75位及第115位这3个位点,可知虽然仅根据各位点单独的碱基信息不能鉴别人参和近缘种,但通过组合多个位点的碱基信息,则可以鉴别。要鉴别人参(P.ginseng)和近缘种,第78位的鉴定就已足够,但为了高精度的鉴别,优选鉴定包括上述3个位点在内的4个位点的碱基。
可以利用PCR反应液1和2进行扩增和确定序列时,以及可以利用PCR反应液3和4进行扩增和确定序列时的上述可以使用的鉴别位点的数量不同。要进行高精度的鉴别,利用具有更多鉴别位点数的PCR反应液1和2的扩增和确定序列是有效的,而PCR反应液3和4也可以满足用于鉴别近缘种的必要要素。
<实施例11:天麻的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,天麻的基原植物为天麻(Gastrodiaelata)。但是,市场中有可能会流通近缘种冬赤箭(G.pubilabiata)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出天麻的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的天麻的基原植物天麻(G.elata)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种,从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于ITS1扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:011-1F(SEQ ID NO:29)(10pmol/μL)1μL、反向引物:011-1R(SEQ ID NO:4)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液2:用于ITS2扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:011-2F(SEQ ID NO:30)(10pmol/μL)1μL、反向引物:011-2R(SEQ ID NO:31)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表13。
在扩增后的ITS1区域的核酸片段中检测出的第38位、第54位及第83位这3个位点分别为G、A和C的只有天麻(G.elata)。因此,可知根据这些位点中的任一位点的碱基信息可以鉴别天麻的基原种天麻和其他近缘种。天麻的鉴别利用上述3个位点中的任一位点的碱基信息就已足够,但高精度的鉴别更优选组合2个以上的碱基信息。
在ITS2区域中,第2位、第20位、第56位、第84位、第91位、第103位、第104位、第122位、第126位这9个位点分别为C、A、C、C、C、C、T、T和A的只有天麻(G.elata)。因此,可知根据这些位点的碱基信息可以鉴别天麻的基原种天麻和其他近缘种。天麻的鉴别利用上述9个位点中的任一位点的碱基信息就已足够,但高精度的鉴别更优选组合2个以上的碱基信息。
<实施例12:黄芩的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,黄芩的基原植物为黄芩(Scutellariabaicalensis)。但是,市场中有可能会流通近缘种滇黄芩(S.amoena)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出黄芩的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的黄芩的基原植物黄芩(S.baicalensis)的一部分,另外,对于近缘种中的滇黄芩(S.amoena),采集收集的腊叶标本的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于其他近缘种韩信草(S.indica)和京黄芩(S.pekinensis),从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于ITS1扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:012-1F(SEQ ID NO:9)(10pmol/μL)1μL、反向引物:012-1R(SEQ ID NO:32)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液2:用于ITS2扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:012-2F(SEQ ID NO:11)(10pmol/μL)1μL、反向引物:012-2R(SEQ ID NO:33)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表14。
关于在扩增后的ITS1区域的核酸片段中检测出的第193位、第137位、第154位、第155位、第162位、第182位、第212位、第241位及第258位这9个位点,可知虽然根据各位点单独的碱基信息不能鉴别黄芩的基原植物黄芩(S.baicalensis)和近缘种,但通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,则可以鉴别黄芩。
另外,在扩增后的ITS2区域中的核酸片段中检测出的第187位为C(胞嘧啶)的只有黄芩(S.baicalensis)。因此,可知根据该位点的碱基信息可以鉴别黄芩的基原植物黄芩和其他近缘种。另一方面,可知虽然根据第93位、第118位、第119位、第168位、第176位及第191位这6个位点中各位点单独的碱基信息不能鉴别黄芩和近缘种,但通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,则可以鉴别黄芩。
黄芩的鉴别利用ITS2区域的第187位的碱基信息就已足够,但对于高精度的鉴别,除此以外,更优选组合选自由ITS1区域的上述9个位点和ITS2区域的上述6个位点合计15个位点组成的组中的碱基信息。
<实施例13:升麻的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,升麻的基原植物为单穗升麻(Cimicifugasimplex)、兴安升麻(C.dahurica)、升麻(C.foetida)或大三叶升麻(C.heracleifolia)。但是,市场中有可能会流通近缘种总状升麻(C.racemosa)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出升麻的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的升麻的基原植物单穗升麻(C.simplex)、兴安升麻(C.dahurica)、升麻(C.foetida)和大三叶升麻(C.heracleifolia)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种总状升麻(Actaea racemosa(=C.racemosa))、小升麻(C.acerina)、日本升麻(A.japonica(=C.japonica)),从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于ITS1扩增#1)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:014-1F(SEQ ID NO:37)(10pmol/μL)1μL、反向引物:014-1R(SEQ ID NO:38)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液2:用于ITS2扩增#1)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:014-2F(SEQ ID NO:11)(10pmol/μL)1μL、反向引物:014-2R(SEQ ID NO:39)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表13。
(PCR反应液3:用于ITS1扩增#2)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:014-1F(SEQ ID NO:37)(10pmol/μL)1μL、反向引物:014-3R(SEQ ID NO:40)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液4:用于ITS2扩增#2)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:014-3F(SEQ ID NO:41)(10pmol/μL)1μL、反向引物:014-2R(SEQ ID NO:39)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表15。
通过PCR反应液1和3得到的ITS1区域中的鉴别区域相同。PCR反应液1和3的区别仅在于扩增片段长度不同。扩增后的ITS1区域的核酸片段中,第100位为T(胸腺嘧啶)的只有兴安升麻(C.dahurica)。因此,可知根据该位点的碱基信息可以鉴别升麻的基原植物之一的兴安升麻(C.dahurica)和其他近缘种。在ITS1区域的核酸片段中,关于第14位、第37位、第59位、第60位、第67位、第69位、第85位、第87位及第111位这9个位点,可知虽然不能根据各位点单独的碱基信息来鉴别兴安升麻(C.dahurica)和近缘种,但通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,则可以鉴别兴安升麻(C.dahurica)。
通过PCR反应液2和4得到的ITS2区域中的鉴别区域相同。PCR反应液2和4的区别仅在于扩增片段长度不同。在扩增后的ITS2区域的核酸片段中,可知虽然不能根据第113位、第117位、第121位、第125位、第136位、第140位及第153位这7个位点中的各位点单独的碱基信息来鉴别兴安升麻(C.dahurica)和近缘种,但通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,则可以鉴别兴安升麻(C.dahurica)。
兴安升麻(C.dahurica)的鉴别利用ITS1区域的第100位的碱基信息就已足够,但对于高精度的鉴别,除此以外,更优选组合选自由ITS1区域的上述9个位点和ITS2区域的上述7个位点组成的组中的碱基信息。
<实施例14:猪苓的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,猪苓的基原植物为猪苓(Polyporusumbellatus)。但是,市场中有可能会流通近缘种木蹄层孔菌(F.fomentarius)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出猪苓的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的猪苓的基原植物猪苓(Polyporusumbellatus)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种木蹄层孔菌(F.fomentarium)和红木色孔菌(Tinctoporellus epimiltinus),从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液:用于ITS扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:015-1F(SEQ ID NO:42)(10pmol/μL)1μL、反向引物:015-1R(SEQ ID NO:43)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表16。
在猪苓(P.umbellatus)中确认到种群内多型。在扩增后的ITS区域的核酸片段中,第15位为C(胞嘧啶)的只有猪苓。因此,可知根据该位点的碱基信息可以鉴别猪苓的基原植物猪苓和其他近缘种。另外,可知虽然根据ITS1区域的第66位、第108位、第119位、第122位、第140位及第150位这6个位点中各位点单独的碱基信息不能鉴别猪苓和近缘种,但通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,则可以鉴别猪苓。为了区别猪苓(Polyporus umbellatus)和其他近缘种,第15位的鉴定就已足够,但对于高精度的鉴别,除此以外,更优选组合选自由ITS1区域的上述6个位点组成的组中的碱基信息。
<实施例15:附子的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,附子的基原植物为乌头(Aconitumcarmichaeli)或日本乌头(A.japonicum)。但是,市场中有可能会流通近缘种瓜叶乌头(A.hemsleyanum)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出附子的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的附子的基原植物乌头(Aconitumcarmichaeli)和日本乌头(A.japonicum)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)PlantMini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种瓜叶乌头(A.hemsleyanum)、弯喙乌头(A.campylorrhynchum)、滇南草乌(A.austroyunnanense)和A.bucovinense,从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS1区域和ITS2区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于ITS2扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:016-1F(SEQ ID NO:44)(10pmol/μL)1μL、反向引物:016-1R(SEQ ID NO:36)(10pmol/μL)1μL、模板DNA1μL;
(PCR反应液2:用于ITS1扩增#1)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:016-2F(SEQ ID NO:45)(10pmol/μL)1μL、反向引物:016-2R(SEQ ID NO:4)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表13。
(PCR反应液3:用于ITS1扩增#2)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:016-3F(SEQ ID NO:46)(10pmol/μL)1μL、反向引物:016-3R(SEQ ID NO:4)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表17。
在通过使用PCR反应液1的PCR而得到的ITS2区域的核酸片段中,关于第111位、第129位、第140位、第175位、第200位及第212位这6个位点,根据各位点单独的碱基信息不能鉴别附子的基原植物乌头(A.carmichaeli)、日本乌头(A.japonicum)与其近缘种。但是,可知通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,可以鉴别乌头(A.carmichaeli)、日本乌头(A.japonicum)和其他近缘种。
通过PCR反应液2和PCR反应液3得到的ITS1区域中的二者的鉴别区域相同。PCR反应液2和3的区别仅在于扩增片段长度不同。
在扩增后的ITS1区域#1的核酸片段中,关于第25位、第83位、第103位、第133位、第154位、第195位、第200位及第218位这8个位点,可知虽然不能仅根据各位点单独的碱基信息来鉴别附子的基原植物乌头(A.carmichaeli)、日本乌头(A.japonicum)与其近缘种,但通过选自由这8个位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,则可以鉴别乌头(A.carmichaeli)和日本乌头(A.japonicum)。
在扩增后的ITS1区域#2的核酸片段中,关于第18位、第59位、第64位及第82位这4个位点,可知虽然不能仅根据各位点单独的碱基信息来鉴别附子的基原植物乌头(A.carmichaeli)、日本乌头(A.japonicum)与其近缘种,但通过选自由这4个位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,则可以鉴别乌头(A.carmichaeli)和日本乌头(A.japonicum)。
在附子的基原植物乌头(A.carmichaeli)和日本乌头(A.japonicum)的鉴别中,对于高精度的鉴别,更优选组合选自由ITS2区域的上述6个位点、ITS1区域#1的上述8个位点和ITS1区域#2的上述4个位点合计18个位点组成的组中2个以上的碱基信息。
<实施例16:辛夷的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,辛夷的基原植物为柳叶木兰(Magnoliasalicifolia)、皱叶木兰(M.kobus)、望春花(M.biondii)、武当木兰(M.sprengeri)或玉兰(M.heptapeta(M.denudata))。但是,市场中有可能会流通近缘种大叶木兰(M.macrophylla)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出辛夷的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的辛夷的基原植物柳叶木兰(Magnoliasalicifolia)、皱叶木兰(M.kobus)、望春花(M.biondii)、武当玉兰(M.sprengeri)或玉兰(M.heptapeta(M.denudata))的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种,从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对叶绿体DNA中的trnL内含子区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于trnL内含子区域#1扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:017-3F(SEQ ID NO:230)(10pmol/μL)1μL、反向引物:017-3R(SEQ ID NO:231)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液2:用于trnL内含子区域#2扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:017-4F(SEQ ID NO:232)(10pmol/μL)1μL、反向引物:017-2R(SEQ ID NO:50)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表18。
在扩增后的trnL内含子区域#1的核酸片段中,第124位为A(腺嘌呤)的只有柳叶木兰(M.salicifolia)、皱叶木兰(M.kobus)、望春花(M.biondii)、武当木兰(M.sprengeri)和玉兰(M.heptapeta)。因此,可知根据该位点的碱基信息可以鉴别辛夷的基原植物柳叶木兰(M.salicifolia)、皱叶木兰(M.kobus)、望春花(M.biondii)、武当木兰(M.sprengeri)、玉兰(M.heptapeta)和其他近缘种。另外,关于在trnL内含子区域#1的核酸片段中检测出的第73位、第115位、第136位、第145位这4个位点,可知虽然不能根据各位点单独的碱基信息来鉴别辛夷的基原植物和近缘种,但通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,则可以鉴别辛夷的基原植物。
在扩增后的trnL内含子区域#2的核酸片段中,第69位和第70位为AA(腺嘌呤、腺嘌呤)的只有上述5种基原植物。因此,可知根据该位点的碱基信息可以鉴别辛夷的5种基原植物和其他近缘种。另外,关于在trnL内含子区域#2的核酸片段中检测出的第15位、第53位及第99位这3个位点,可知虽然不能根据各位点单独的碱基信息来鉴别辛夷的5种基原植物和近缘种,但通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,则可以鉴别辛夷的基原植物。
为了鉴别辛夷的5种基原植物和近缘种,利用trnL内含子区域#1的核酸片段中的第124位或者trnL内含子区域#2的核酸片段中的第69位和第70位中任一位的碱基信息就已足够,但对于高精度的鉴别,则更优选除了上述2个区域中的3个位点以外,组合选自由trnL内含子区域#1的上述4个位点和trnL内含子区域#2的上述3个位点组成的合计7个位点所组成的组中2个以上的碱基信息。
<实施例17:丁香的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,丁香的基原植物为丁香(Syzygiumaromaticum(Eugenia caryophyllata))。但是,市场中有可能会流通近缘种蒲桃(S.jambos)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出丁香(S.aromaticum)的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的基原植物丁香(S.aromaticum)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于其他近缘种,从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液:用于ITS扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:018-1F(SEQ ID NO:51)(10pmol/μL)1μL、反向引物:018-1R(SEQ ID NO:52)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表19。
在扩增后的ITS区域的核酸片段中,第16位为T(胸腺嘧啶)的只有丁香(S.aromaticum)。因此,根据该位点,可以鉴别丁香(S.aromaticum)和其他近缘种。另外,关于ITS区域的核酸片段中检测出的第13位、第32位、第34位及第57位这4个位点,可知虽然不能根据各位点单独的碱基信息来鉴别丁香(S.aromaticum)和近缘种,但通过选自它们的组中2个以上的组合,则可以鉴别丁香(S.aromaticum)。
为了鉴别丁香和其他近缘种,利用ITS区域的第16位的碱基信息就已足够,但为了以更高的精度来鉴别,除了第16位以外,更优选组合选自由ITS区域的上述4个位点组成的组中2个以上的碱基信息。
<实施例18:钩藤的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,钩藤的基原植物为钩藤(Uncariarhynchophylla)、华钩藤(U.sinensis)或大叶钩藤(U.macrophylla)。但是,市场中有可能会流通近缘种攀茎钩藤(U.scandens)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出钩藤的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的钩藤的基原植物钩藤(Uncariarhynchophylla)、华钩藤(U.sinensis)和大叶钩藤(U.macrophylla)的一部分,另外,对于近缘种毛钩藤(U.hirsuta)、白钩藤(U.sessilifructus)、平滑钩藤(U.laevigata),采集腊叶标本的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于其他近缘种攀茎钩藤(U.scandens)和披针叶钩藤(U.lancifolia),从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液:用于ITS扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:019-4F(SEQ ID NO:58)(10pmol/μL)1μL、反向引物:019-4R(SEQ ID NO:56)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表20。
关于在扩增后的ITS区域的核酸片段中检测出的第18位、第19位、第21位、第52位、第53位、第67位、第143位、第160位及第190位这9个位点,根据各位点单独的碱基信息不能鉴别3种基原植物和其他近缘种。但是,可知通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,可以鉴别钩藤的基原植物和其他近缘种。
<实施例19:香附子的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,香附子的基原植物为香附子(Cyperusrotundus)。但是,市场中有可能会流通近缘种C.articulatus等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出香附子的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的香附子的基原植物香附子(C.rotundus)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种C.articulates、C.insularis、C.ustulatus和C.corymbosus,从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于ITS1扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:020-1F(SEQ ID NO:59)(10pmol/μL)1μL、反向引物:020-1R(SEQ ID NO:60)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液2:用于ITS2扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:020-2F(SEQ ID NO:41)(10pmol/μL)1μL、反向引物:020-2R(SEQ ID NO:61)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表21。
可用作香附子的香附子种群内有多种基因类型,皆可使用。
关于在扩增后的ITS1区域的核酸片段中检测出的第36位、第71位、第73位、第87位、第126位、第127位、第133位、第134位、第145位、第146位、第157位及第162位这12个位点,根据各位点单独的碱基信息不能鉴别香附子(C.rotundus)和其他近缘种。但是,可知通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,可以鉴别香附子(C.rotundus)和其他近缘种。
在扩增后的ITS2区域的核酸片段中,第134位为C(胞嘧啶)或第163位为G(鸟嘌呤)的只有香附子(C.rotundus)。因此,根据这些位点的单独的碱基信息,可以鉴别香附子(C.rotundus)和其他近缘种。另外,关于在ITS2区域的核酸片段中检测出的第77位、第109位及第125位这3个位点,可知虽然不能根据各位点单独的碱基信息来鉴别香附子(C.rotundus)和近缘种,但通过选自它们的组中2个以上的组合,则可以鉴别香附子(C.rotundus)。
为了鉴别香附子(C.rotundus)和其他近缘种,利用ITS2区域的第134位或第163位的任一位的碱基信息就已足够,但为了以更高的精度来鉴别,除了这些以外,更优选组合选自由ITS1区域的上述12个位点和ITS2区域的上述3个位点组成的组中2个以上的碱基信息。
<实施例20:黄连的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,黄连的基原植物为日本黄连(Coptisjaponica)、黄连(C.chinensis)、三角叶黄连(C.deltoidea)或云南黄连(C.teeta)。但是,市场中有可能会流通近缘种五裂黄连(C.quinquesecta)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出黄连的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的黄连的基原植物日本黄连(Coptisjaponica)、黄连(C.chinensis)、三角叶黄连(C.deltoidea)或云南黄连(C.teeta)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于其他近缘种峨嵋黄连(C.omeiensis)和五裂黄连(C.quinquesecta),从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对叶绿体DNA中的rbcL区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于rbcL区域1扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:021-1F(SEQ ID NO:62)(10pmol/μL)1μL、反向引物:021-1R(SEQ ID NO:63)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液2:用于rbcL区域2扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:021-2F(SEQ ID NO:64)(10pmol/μL)1μL、反向引物:021-2R(SEQ ID NO:65)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表22。
在扩增后的rbcL区域1的核酸片段中,第97位为G(鸟嘌呤)的只有日本黄连(C.japonica),第127位为A(腺嘌呤)的只有黄连(C.chinensis),第157位为A(腺嘌呤)的只有三角叶黄连(C.deltoidea)。因此,根据这些位点的单独的碱基信息,可以分别鉴别日本黄连(C.japonica)、黄连(C.chinensis)、三角叶黄连(C.deltoidea)和其他近缘种。但是,通过PCR反应液1,不能鉴别云南黄连(C.teeta)和其他近缘种。
另一方面,在扩增后的rbcL区域2的核酸片段中,第158位为T(胸腺嘧啶)的只有云南黄连(C.teeta)。因此,根据该位点的单独的碱基信息,可以鉴别云南黄连(C.teeta)和其他近缘种。
由以上可知,日本黄连(C.japonica)、黄连(C.chinensis)或三角叶黄连(C.deltoidea)的鉴别利用rbcL区域1的核酸片段中的上述各位点的分析即可,云南黄连(C.teeta)的鉴别利用rbcL区域2的核酸片段中的第158位的分析即可。对于更高精度的鉴别,除了上述位点以外,更优选选自在rbcL区域2中不能根据单独的碱基信息鉴别近缘种的第15位、第26位及第53位中的2个以上的组合。
<实施例21:生姜/干姜的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,生姜/干姜的基原植物为姜(Zingiberofficinale)。但是,市场中有可能会流通近缘种Z.montanum等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出生姜/干姜的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的生姜/干姜的基原植物姜(Z.officinale)的一部分,另外,对于近缘种Z.montanum,采集收集的腊叶标本的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。关于其他近缘种多毛姜(Z.densissimum)、圆瓣姜(Z.orbiculatum)、Z.rubens、Z.sulphureum、珊瑚姜(Z.corallinum)、红球姜(Z.zerumbet)和Z.engganoensis,从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对叶绿体DNA中的matK区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液:用于matK区域扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:022-1F(SEQ ID NO:66)(10pmol/μL)1μL、反向引物:022-1R(SEQ ID NO:67)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表23。
在扩增后的matK区域的核酸片段中,第39位为A(腺嘌呤)的只有姜(Z.officinale)。因此,根据该位点的单独的碱基信息,可以鉴别姜(Z.officinale)和其他近缘种。另外,关于在matK区域的核酸片段中检测出的第29位、第32位、第104位及第115位这4个位点,根据各位点单独的碱基信息不能鉴别姜(Z.officinale)和其他近缘种。但是,可知通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,可以鉴别姜(Z.officinale)和其他近缘种。
为了鉴别姜(Z.officinale)和其他近缘种,利用matK区域的第39位的单独的碱基信息就已足够,但为了更高精度的鉴别,除此以外,更优选选自上述4个位点的2个以上的组合。
<实施例22:山栀子的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,山栀子的基原植物为栀子(Gardeniajasminoides)。但是,市场中有可能会流通近缘种南非栀子(G.thunbergia)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出山栀子的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的山栀子的基原植物栀子(G.jasminoides)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种,从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液:用于ITS区域扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:023-1F(SEQ ID NO:11)(10pmol/μL)1μL、反向引物:023-1R(SEQ ID NO:68)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表24。
关于在扩增后的ITS区域的核酸片段中检测出的第33位、第45位、第140位、第167位、第187位、第263位、第269位及第295位这8个位点,可知虽然不能根据各位点单独的碱基信息来鉴别栀子(G.jasminoides)和其他近缘种,但通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,则可以鉴别栀子(G.jasminoides)和其他近缘种。
<实施例23:黄柏的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,黄柏的基原植物为黄檗(Phellodendronamurense)或川黄檗(P.chinense)。但是,市场中有可能会流通近缘种楝叶吴萸(Tetradiumglabrifolium)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出黄柏的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的黄柏的基原植物黄檗(P.amurense)或川黄檗(P.chinense)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种楝叶吴萸(Tetradium glabrifolium)和青花椒(Zanthoxylum schinifolium),从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液:用于ITS区域扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:024-1F(SEQ ID NO:69)(10pmol/μL)1μL、反向引物:024-1R(SEQ ID NO:70)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表25。
在扩增后的ITS区域的核酸片段中,第67位和第88位为C(胞嘧啶)的只有黄檗(P.amurense)和川黄檗(P.chinense)。因此,根据这些位点的单独的碱基信息,可以鉴别黄檗(P.amurense)、川黄檗(P.chinense)和其他近缘种。但是,为了进行高精度的鉴别,更优选组合2个位点。
<实施例24:厚朴的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,厚朴的基原植物为日本厚朴(Magnoliaobovata(M.hypoleuca))、厚朴(M.officinalis)或凹叶厚朴(M.officinalisvar.biloba)。但是,市场中有可能会流通近缘种三瓣木兰(M.tripetala)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出厚朴的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的厚朴的基原植物日本厚朴(M.obovata)、厚朴(M.officinalis)或凹叶厚朴(M.officinalis var.biloba)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于其他近缘种,从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对叶绿体DNA中的rpl16内含子区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于rpl16内含子区域1扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:025-1F(SEQ ID NO:71)(10pmol/μL)1μL、反向引物:025-1R(SEQ ID NO:72)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液2:用于rpl16内含子区域2扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:025-1F(SEQ ID NO:71)(10pmol/μL)1μL、反向引物:025-2R(SEQ ID NO:73)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液3:用于rpl16内含子区域3扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:025-2F(SEQ ID NO:74)(10pmol/μL)1μL、反向引物:025-1R(SEQ ID NO:72)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表26。
通过PCR反应液1、2和3扩增的鉴别区域相同,区别在于扩增片段的长度。本方法是在PCR反应液1中确定序列,当不能鉴别时执行进行PCR反应液2和3的二阶段鉴别方法,由此可以降低成本和应对样品的DNA质量的差异。
关于在扩增后的rpl16内含子区域1的核酸片段中检测出的第32位、第42位、第44位、第85位、第148位及第158位这6个位点,根据各位点单独的碱基信息不能鉴别日本厚朴(M.obovata)、厚朴(M.officinalis)或凹叶厚朴(M.officinalis var.biloba)和其他近缘种。但是,可知通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,可以鉴别日本厚朴(M.obovata)、厚朴(M.officinalis)、凹叶厚朴(M.officinalisvar.biloba)和其他近缘种。
<实施例25:泽泄的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,泽泄的基原植物为东方泽泻(Alismaorientale)。但是,市场中有可能会流通近缘种窄叶泽泻(A.canaliculatum)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出泽泄的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的泽泄的基原植物东方泽泻(A.orientale)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种,从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于ITS1区域#1扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:026-1F(SEQ ID NO:75)(10pmol/μL)1μL、反向引物:026-1R(SEQ ID NO:76)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液2:用于ITS2区域#1扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:026-2F(SEQ ID NO:77)(10pmol/μL)1μL、反向引物:026-2R(SEQ ID NO:78)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液3:用于ITS1区域#2扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:026-1F(SEQ ID NO:75)(10pmol/μL)1μL、反向引物:026-3R(SEQ ID NO:79)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液4:用于ITS2区域#2扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:026-1F(SEQ ID NO:77)(10pmol/μL)1μL、反向引物:026-4R(SEQ ID NO:80)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表27。
PCR反应液3的扩增片段包含在PCR反应液1的扩增片段内部,同样,PCR反应液4的扩增片段包含在PCR反应液2的扩增片段内部。本方法是在PCR反应液1和2中确定序列,当不能鉴别时执行进行PCR反应液3和4的二阶段鉴别方法,由此可以应对样品的DNA质量的差异。
关于在扩增后的ITS1区域#1的核酸片段中检测出的10处鉴别位点即第17位、第22位、第44位、第72位、第89位、第93位、第111位、第118位、第145位及第154位,根据各位点单独的碱基信息不能鉴别东方泽泻(A.orientale)和其他近缘种。但是,可知通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,可以鉴别东方泽泻(A.orientale)和其他近缘种。
关于在扩增后的ITS2区域#1的核酸片段中检测出的8处鉴别位点即第15位、第16位、第48位、第50位、第53位、第77位、第85位及第111位,根据各位点单独的碱基信息不能鉴别东方泽泻(A.orientale)和其他近缘种。但是,可知通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,可以鉴别东方泽泻(A.orientale)和其他近缘种。
关于在扩增后的ITS1区域#2的核酸片段中检测出的8处鉴别位点即第17位、第22位、第28位、第37位、第44位、第49位、第72位及第89位,根据各位点单独的碱基信息不能鉴别东方泽泻(A.orientale)和其他近缘种。但是,可知通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,可以鉴别东方泽泻(A.orientale)和其他近缘种。
关于在扩增后的ITS2区域#2的核酸片段中检测出的7处鉴别位点即第5位、第16位、第48位、第50位、第53位、第77位及第85位,根据各位点单独的碱基信息不能鉴别东方泽泻(A.orientale)和其他近缘种。但是,可知通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,可以鉴别东方泽泻(A.orientale)和其他近缘种。
<实施例26:吉草根的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,吉草根的基原植物为北缬草(Valerianafauriei)。但是,市场中有可能会流通近缘种缬草(V.officinalis)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出吉草根的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的吉草根的基原植物北缬草(V.fauriei)的一部分,另外,对于近缘种中的缬草(V.officinalis)、蜘蛛香(V.jatamansi)、黑水缬草(V.amurensis),采集收集的腊叶标本的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant MiniKit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,近缘种中,关于川缬草(V.sichuanica)、窄裂缬草(V.stenoptera)、小花缬草(V.minutiflora),从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液:用于ITS区域扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:027-1F(SEQ ID NO:81)(10pmol/μL)1μL、反向引物:027-1R(SEQ ID NO:82)(10pmol/μL)1μL、模板DNA1μL。
结果示于表28。
关于在扩增后的ITS区域的核酸片段中检测出的7处鉴别位点即第45位、第54位、第151位、第179位、第199位、第213位及第218位,可知虽然不能根据各位点单独的碱基信息来鉴别北缬草(V.fauriei)和其他近缘种,但通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,则可以鉴别北缬草(V.fauriei)和其他近缘种。
<实施例27:橡木皮的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,橡木皮的基原植物为麻栎(Quercusacutissima)、枹栎(Q.serrata)、蒙古栎(Q.mongolica var.crispula)或栓皮栎(Q.variabilis)。但是,市场中有可能会流通近缘种马其顿栎(Q.trojana)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出橡木皮的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的橡木皮的基原植物麻栎(Quercusacutissima)、枹栎(Q.serrata)、蒙古栎(Q.mongolica var.crispula)或栓皮栎(Q.variabilis)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种马其顿栎(Q.trojana)、圣栎(Q.ilex)和圆叶栎(Q.rotundifolia)、欧洲栓皮栎(Q.suber),从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于ITS1区域#1扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:028-1F(SEQ ID NO:83)(10pmol/μL)1μL、反向引物:028-1R(SEQ ID NO:84)(10pmol/μL)1μL、模板DNA1μL;
(PCR反应液2:用于ITS1区域#2扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:028-1F(SEQ ID NO:83)(10pmol/μL)1μL、反向引物:028-2R(SEQ ID NO:85)(10pmol/μL)1μL、模板DNA1μL;
(PCR反应液3:用于ITS2区域扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:028-2F(SEQ ID NO:86)(10pmol/μL)1μL、反向引物:028-3R(SEQ ID NO:87)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表29。
通过PCR反应液1和2得到的鉴别区域相同。
在扩增后的ITS1区域#1的核酸片段中,第121位为C(胞嘧啶)的只有麻栎(Q.acutissima)、枹栎(Q.serrata)、蒙古栎(Q.mongolica var.crispula)和栓皮栎(Q.variabilis)。因此,根据这些位点的单独的碱基信息,可以鉴别橡木皮的4种基原植物和其他近缘种。另外,关于在ITS1区域#1的核酸片段中检测出的6处鉴别位点即第1位、第16位、第19位、第44位、第61位及第70位,根据各位点单独的碱基信息不能鉴别橡木皮的4种基原植物和其他近缘种。但是,可知通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,可以鉴别橡木皮的4种基原植物和其他近缘种。
关于在扩增后的ITS1区域#2的核酸片段中检测出的6处鉴别位点即第1位、第16位、第19位、第44位、第61位及第70位,根据各位点单独的碱基信息不能鉴别橡木皮的4种基原植物和其他近缘种。但是,可知通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,可以鉴别橡木皮的4种基原植物和其他近缘种。
关于在扩增后的ITS2区域的核酸片段中检测出的13处鉴别位点即第52位、第120位、第121位、第122位、第134位、第144位、第161位、第162位、第163位、第164位、第185位、第193位及第196位,根据各位点单独的碱基信息不能鉴别橡木皮的4种基原植物和其他近缘种。但是,可知通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,可以鉴别橡木皮的基原植物和其他近缘种。
<实施例28:连翘的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,连翘的基原植物为连翘(Forsythiasuspensa)。但是,市场中有可能会流通近缘种金钟花(F.viridissima)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出连翘的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的基原植物连翘(F.suspensa)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种,从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于ITS1区域扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:029-1F(SEQ ID NO:88)(10pmol/μL)1μL、反向引物:029-1R(SEQ ID NO:89)(10pmol/μL)1μL、模板DNA1μL;
(PCR反应液2:用于ITS2区域扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:029-2F(SEQ ID NO:90)(10pmol/μL)1μL、反向引物:029-2R(SEQ ID NO:91)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表30。
通过PCR反应液1和2得到的鉴别区域相同。
在扩增后的ITS1区域的核酸片段中,第2位为T(胸腺嘧啶)、第52位为C(胞嘧啶)的只有连翘(F.suspensa)。因此,根据这些位点的单独的碱基信息,可以鉴别连翘(F.suspensa)和其他近缘种。
另外,在扩增后的ITS2区域的核酸片段中,第55位和第60位为C(胞嘧啶)的只有连翘(F.suspensa)。因此,根据该位点的单独的碱基信息,可以鉴别连翘(F.suspensa)和其他近缘种。
要鉴别连翘(F.suspensa)和其他近缘种,利用上述各位点单独的碱基信息即可,但为了以更高的精度进行鉴别,更优选分析全部4个位点。
<实施例29:良姜的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,良姜的基原植物为高良姜(Alpiniaofficinarum)。但是,市场中有可能会流通近缘种距花山姜(A.calcarata)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出良姜的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的良姜的基原植物高良姜(A.officinarum)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种距花山姜(A.calcarata)、美山姜(A.formosana)、大花山姜(A.uraiensis)和密穗山姜(A.shimadae),从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对叶绿体DNA中的matK区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于matK区域#1扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:030-1F(SEQ ID NO:92)(10pmol/μL)1μL、反向引物:030-1R(SEQ ID NO:93)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液2:用于matK区域#2扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:030-1F(SEQ ID NO:66)(10pmol/μL)1μL、反向引物:030-1R(SEQ ID NO:94)(10pmol/μL)1μL、模板DNA1μL。
结果示于表31。
在扩增后的matK区域#1的核酸片段中,第44位为A(腺嘌呤)的只有高良姜(A.officinarum)。因此,根据该位点的单独的碱基信息,可以鉴别高良姜(A.officinarum)和其他近缘种。
另外,在扩增后的matK区域#2的核酸片段中,第115位为A(腺嘌呤)的只有高良姜(A.officinarum)。因此,根据该位点的单独的碱基信息,可以鉴别高良姜(A.officinarum)和其他近缘种。
良姜和其他近缘种的鉴别通过上述2个matK区域中的2个位点中的任一位点的碱基信息就已足够,但为了更高精度的鉴别,优选分析两个区域。
<实施例30:莲肉的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,莲肉的基原植物为莲(Nelumbonucifera)。但是,市场中有可能会流通近缘种美洲黄莲(N.lutea)等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出莲肉的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的基原植物莲(N.nucifera)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种美洲黄莲(N.lutea)和美国黄莲(N.pentapetala),从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于ITS1区域扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:031-1F(SEQ ID NO:95)(10pmol/μL)1μL、反向引物:031-1R(SEQ ID NO:4)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液2:用于ITS2区域扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:031-2F(SEQ ID NO:96)(10pmol/μL)1μL、反向引物:031-2R(SEQ ID NO:36)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表32。
在扩增后的ITS1区域的核酸片段中,第61位为A(腺嘌呤)和第85位为T(胸腺嘧啶)的只有莲(N.nucifera)。因此,根据这些位点的单独的碱基信息,可以鉴别莲(N.nucifera)和其他近缘种。
另外,在扩增后的ITS2区域的核酸片段中,第69位为C(胞嘧啶)和第111位为G(鸟嘌呤)的只有莲(N.nucifera)。因此,根据该位点的单独的碱基信息,可以鉴别莲(N.nucifera)和其他近缘种。
要鉴别莲(N.nucifera)和其他近缘种,利用上述各位点单独的碱基信息即可,但为了以更高的精度进行鉴别,更优选分析全部4个位点。
<实施例31:红花的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,红花的基原植物为红花(Carthamustinctorius)。但是,市场中有可能会流通近缘种C.glaucus等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出红花的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的基原植物红花(C.tinctorius)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种,从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液1:用于ITS1区域扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:032-1F(SEQ ID NO:97)(10pmol/μL)1μL、反向引物:032-1R(SEQ ID NO:4)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL;
(PCR反应液2:用于ITS2区域扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:032-2F(SEQ ID NO:44)(10pmol/μL)1μL、反向引物:032-2R(SEQ ID NO:36)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表33。
在扩增后的ITS1区域的核酸片段中,第69位为T(胸腺嘧啶),第114位为C(胞嘧啶)和第199位为G(鸟嘌呤)的只有红花(C.tinctorius)。因此,根据这些位点的单独的碱基信息,可以鉴别红花(C.tinctorius)和其他近缘种。另外,关于在扩增后的ITS1区域的核酸片段中检测出的5处鉴别位点即第30位、第47位、第178位、第184位及第235位,根据各位点单独的碱基信息不能鉴别红花(C.tinctorius)和其他近缘种。但是,可知通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,可以鉴别红花(C.tinctorius)和其他近缘种。要鉴别红花(C.tinctorius)和其他近缘种,利用上述3个位点单独的碱基信息即可,但为了以更高的精度进行鉴别,更优选分析后述全部5个位点。
另外,关于在扩增后的ITS2区域的核酸片段中检测出的7处鉴别位点即第79位、第114位、第130位、第167位、第247位、第270位及第315位,根据各位点单独的碱基信息不能鉴别红花(C.tinctorius)和其他近缘种。但是,可知通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,可以鉴别红花(C.tinctorius)和其他近缘种。
<实施例32:苏木的鉴别方法>
在第十七修订版的日本药局方中规定,苏木的基原植物为苏木(Caesalpiniasappan)。但是,市场中有可能会流通近缘种有C.angulate等,为了保证药物的质量,关键在于避免误用和混用它们。
因此,下面示出苏木的鉴别方法中的一例。基本步骤与实施例1所记载的芍药和牡丹皮的鉴别方法相同,因此这里仅记载与实施例1的不同之处。
1.核酸提取方法
模板DNA是采集生药或生药加工前的基原植物苏木(C.sappan)的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)Plant Mini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。另外,关于近缘种,从GenBank获得同源序列。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA,通过PCR对核糖体DNA中的ITS区域进行扩增。用于核酸扩增反应的PCR反应液的组成如下:
(PCR反应液:用于ITS区域扩增)
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物:033-1F(SEQ ID NO:98)(10pmol/μL)1μL、反向引物:033-1R(SEQ ID NO:99)(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
结果示于表34。
在扩增后的ITS1区域的核酸片段中,第21位为G(鸟嘌呤)的只有苏木(C.sappan)。因此,根据该位点的单独的碱基信息,可以鉴别苏木(C.sappan)和其他近缘种。关于在扩增后的ITS区域的核酸片段中检测出的9处鉴别位点即第43位、第47位、第52位、第55位、第100位、第108位、第124位、第227位及第238位,可知虽然不能根据各位点单独的碱基信息来鉴别苏木(C.sappan)和其他近缘种,但通过选自由这些位点组成的组中2个以上的位点中的碱基信息的组合,则可以鉴别苏木(C.sappan)和其他近缘种。
要鉴别苏木(C.sappan)和其他近缘种,利用上述第21位单独的碱基信息即可,但为了以更高的精度进行鉴别,更优选分析后述全部9个位点。
<实施例33:用于鉴别的引物的生药特异性的确认>
(目的)
通过本发明的用于鉴别生药的引物组,确认到只有第十七修订版的日本药局方中规定的生药的基原植物及其近缘种被扩增,远缘的植物种未被扩增。
(方法)
1.核酸提取方法
模板DNA是采集待测对象植物的一部分,使用市售的DNeasy(注册商标)PlantMini Kit(QIAGEN公司),按照附带的操作流程进行提取。
待测对象植物使用芍药的基原植物芍药(Paeonia lactiflora)及其近缘种牡丹皮的基原植物牡丹(P.suffruticosa)、桂皮的基原植物肉桂(Cinnamomum cassia)、泽泻的基原植物东方泽泻(Alisma orientale)、钩藤的基原植物钩藤(Uncaria rhynchophylla)。
2.核酸扩增方法
使用提取的模板DNA进行PCR。使用的PCR反应液的组成如下:
蒸馏水(D.W.)17.02μL、10×gene Taq Buffer(NIPPON GENE公司)2.80μL、dNTPMix(NIPPON GENE公司)2.24μL、DMSO 2.80μL,gene Taq(NIPPON GENE公司)0.14μL、正向引物(10pmol/μL)1μL、反向引物:(10pmol/μL)1μL、模板DNA 1μL。
另外,由正向引物和反向引物组成的引物组使用以下4组。
(引物组#1)002-1F&002-1R:用于芍药的引物组
(引物组#2)003-1F&003-1R:用于桂皮的引物组
(引物组#3)026-1F&026-1R:用于泽泻的引物组
(引物组#4)019-4F&019-2R:用于钩藤的引物组
包含引物组#1~#4的PCR反应液分别作为PCR反应液#1~#4。
3.PCR循环条件
将上述各模板DNA与PCR反应液#1~#4一同放入0.2mL微管中,利用步降(StepDown)法,即利用热循环仪Tprofessional Thermocycler 070-951(Biometra公司)并按照以下条件进行PCR:(95℃,30sec;70℃,15sec;72℃,15sec)×3个循环、(95℃,30sec;66℃,15sec;72℃,15sec)×3个循环、(95℃,30sec;62℃,15sec;72℃,15sec)×3个循环、(95℃,30sec;58℃,15sec;72℃,15sec)×3个循环、(95℃,30sec;54℃,15sec;72℃,15sec)×3个循环、(95℃,30sec;48℃,1.5min;72℃,2.5min)×20个循环,以及(72℃,7min.)×1个循环。
4.通过凝胶电泳确认扩增产物与凝胶提取
PCR之后,将20μL反应液通过凝胶电泳法用2%Ex-Gel iBase(Thermo FisherScientifics公司)和程序7进行电泳,用波长为500nm的LED透照仪LB-16BG(NipponGenetics公司)和凝胶成像装置Printgraph AE-6931 FXCF(ATTO公司)确认目标PCR产物并拍摄图像。
(结果)
结果示于图1~4。图1为含有引物组#1的PCR反应液#1(用于芍药),图2为含有引物组#2的PCR反应液#2(用于桂皮),图3为含有引物组#3的PCR反应液#3(用于泽泻),图4为含有引物组#4的PCR反应液#4(用于钩藤)。
根据图1,在引物组#1中,关于芍药(Paeonia lactiflora)及其近缘种牡丹(P.suffruticosa)确认到了扩增片段,而关于肉桂(Cinnamomum cassia)、东方泽泻(Alisma orientale)和钩藤(Uncaria rhynchophylla)则未确认到扩增片段。
根据图2,在引物组#2中,关于肉桂(Cinnamomum cassia)确认到了扩增片段,而关于芍药(Paeonia lactiflora)及其近缘种牡丹(P.suffruticosa)、东方泽泻(Alismaorientale)和钩藤(Uncaria rhynchophylla)则未确认到扩增片段。
根据图3,在引物组#3中,关于东方泽泻(Alisma orientale)确认到了扩增片段,而关于芍药(Paeonia lactiflora)及其近缘种牡丹(P.suffruticosa)、肉桂(Cinnamomumcassia)和钩藤(Uncaria rhynchophylla)则未确认到扩增片段。
根据图4,在引物组#4中,关于钩藤(Uncaria rhynchophylla)确认到了扩增片段,而关于芍药(Paeonia lactiflora)及其近缘种牡丹(P.suffruticosa)、肉桂(Cinnamomumcassia)和东方泽泻(Alisma orientale)则未确认到扩增片段。
由以上结果可以确认,通过本发明的生药鉴别引物组,只有生药的基原植物及其近缘植物的目的核酸片段被扩增,与对象生药基原植物的远缘植物中核酸片段未被扩增。
另外,通过本发明的生药鉴别引物组,如上所述,基原植物和近缘植物种也和基原植物同样,其核酸片段被扩增,但这些鉴别基于上述实施例所示的鉴别位点进行即可。
序列表
<110> 株式会社津村
<120> 用于鉴别生药的引物组以及使用该引物组的生药鉴别方法
<130> PH-7304-CN
<150> JP 2017-108803
<151> 2017-05-31
<160> 707
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 21
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<400> 70
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<212> DNA
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<220>
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<400> 72
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<400> 74
gaatctgtca tgtaggaatc tg 22
<210> 75
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 75
gtaggtgaac ctgcggaagg 20
<210> 76
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 76
ccggggattt gttttggtgc c 21
<210> 77
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 77
cggtgggctg aaggatgtgg 20
<210> 78
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 78
ggtgttcccg cctgacttgg g 21
<210> 79
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 79
gtggagaggc cgggtgtgag 20
<210> 80
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 80
cgacacaacg acgatgcccg 20
<210> 81
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 81
gaagccatta ggccgaggg 19
<210> 82
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 82
cgcctgacct ggggtcgcgg 20
<210> 83
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 83
cggaacgcgc caaggaaatc 20
<210> 84
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 84
ggcttcgggc gcaacttgcg 20
<210> 85
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 85
cgctgcgttc ttcatcgatg c 21
<210> 86
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 86
gcctgggtgt cacgcatcg 19
<210> 87
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 87
gacctggggt cgcgttggga g 21
<210> 88
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 88
cacgggagga tgacgacgg 19
<210> 89
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 89
ctggggacgg gcaatgttg 19
<210> 90
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 90
gctgagggca cgtctgcctg 20
<210> 91
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 91
cgtgacatgc gtcgatgccg 20
<210> 92
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 92
gcagttcctt ctccacgaat a 21
<210> 93
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 93
cggcacactc caagatgctc ta 22
<210> 94
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 94
caatcctata tggttgagac c 21
<210> 95
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 95
gtctcgtggc ctcctagcta ac 22
<210> 96
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 96
ggtgcggttg gcccaaatg 19
<210> 97
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 97
gtcgaagcct gcacagcaga ac 22
<210> 98
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 98
ccgtaggtga acctgcggaa g 21
<210> 99
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 99
gagccgagat atccgttgcc g 21
<210> 100
<211> 183
<212> DNA
<213> 半夏(Pinellia ternata)
<400> 100
gcacgcctgc ctgggcgtca cgccccacgt cgctccccag tccccccacg cacygcggca 60
cccgtgcgcg cgtggaggga cgggggatgc ggagattggc ccaccgtgca ctcgcgcggc 120
gggctcaaga gctcggccct cccgccgggc gagcaaacgg cgagtggtgg acgacgctca 180
tcg 183
<210> 101
<211> 170
<212> DNA
<213> 一把伞南星(Arisaema erubescens)
<400> 101
gcacgcctgc ctgggcgtca cgccccgcgt cgctccctga cccccccgcc tcacaaagtg 60
tgcgggggtg aggaatgcgg agattggccc accgtgcacg tgcgcggcag gctgaagaac 120
tcggccctcc tgccgggcga ttaacggcga gtggtggacg acgctcatcg 170
<210> 102
<211> 322
<212> DNA
<213> 芍药(Paeonia lactiflora)
<400> 102
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcggga tgacggaagg 60
cgtgagcctt tccttcatcc catgtccggt cgcgccagac gttgagtctc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccaag gttctggtgt gctctcggat ttacaacaac ccccggcgca 180
aaccgcgcca aggaactaaa acgaaagagc atgcccccgt tgccccagct ttgggatgcg 240
cgggaggtaa tgtcttcttt tacatatcaa aacgactctc ggcaacggat atctcggctc 300
tcgcatcgat gaagaacgca gc 322
<210> 103
<211> 177
<212> DNA
<213> 芍药(Paeonia lactiflora)
<400> 103
cgcaagttgc gcccaaagcc tttaggctga gggcacgtct gcctgggcgt cacgtatccc 60
gtcgcacccc caacccgtcc aaactcgggc atgatggctg gtgggagcgg atattggcct 120
cccgtgtact cgcgttacgg ttggtttaaa atcgagcccc gagcgacgaa cgtcacg 177
<210> 104
<211> 147
<212> DNA
<213> 肉桂(Cinnamomum cassia)
<400> 104
accggcgaac cagtcccgcg agaacacgcc gctcgcggcg cgcggcccgg gggacgaccc 60
ggggacgcgc gtcccgtcga gctgcgaaca acaaccctct gggcgcggag agcgccaagg 120
aatcgaagcg gaaagggcgg ccgcctc 147
<210> 105
<211> 302
<212> DNA
<213> 东当归(Angelica acutiloba)
<400> 105
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtttccgta ggtgaacctg cggaaggatc attgtcgaat 60
cctgcaatag cagaatgacc cgctaacacg tcaacatttt gggcgagcgt cggggggsct 120
cggtctcctg tctgcgaatc cctggtaggt ggccactccc gggtggccac tggcctgcaa 180
aatcattcgg gcgcggaatg cgccaaggac cttaaaactg aattgtacgt ccgtatcccg 240
ttagcgggca ccggcgtcat tccaaaacac aacgactctc gacaacggat atctcggctc 300
tc 302
<210> 106
<211> 322
<212> DNA
<213> 东当归(Angelica acutiloba)
<400> 106
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccactag gctgagggca cgcctgcctg 120
ggtgtcacgc atcgtcttgc ccacaaacca ctcacacctg agaagttgtg ccggtttggg 180
gcggaaactg gcctcccgta ccttgtcgtg cggttggcgg aaaaacgagt ctccggcgac 240
ggacgtcgcg acatcggtgg ttgtaaaaga ccctcttgtc ttgtcgtgcg aatcctcgtc 300
atcttagcga gctccaggac cc 322
<210> 107
<211> 304
<212> DNA
<213> 茅苍术(Atractylodes lancea)
<400> 107
cattgtcgaa gcctgcacag cagaacgacc cgcgaacatg taatggcaac cgggcgtcgg 60
ggggaacggg cgcaagcccg ggacctgcgg cgctccgtcg gcgagcgtcc gtggcgtccc 120
tatcggggcc ttgcgggcgt ttcgtcggca cataaacaaa ccccggcaca acacgtgcca 180
aggaaaacaa aacttaagaa aggcgcttct cgtgtcgccc cgttcgcggt gcgggcatgg 240
gtcgtggcct ctctggaaac acaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcacgcatc 300
gatg 304
<210> 108
<211> 304
<212> DNA
<213> 北苍术(Atractylodes chinensis)
<400> 108
cattgtcgaa gcctgcacag cagaacgacc cgcgaacatg taatgacaac cgggcgtcgg 60
ggggaacggg cgcaagcctg ggacctgcgg cactccgtcg gcaagcgtcc gtggcgtccc 120
tattggggcc ttgcgggcgt ttcgtcggca cgtaaacaaa ccccggcaca acacgtgcca 180
aggaaaacaa aacttacgaa aggcgcttct cgtgtcgccc cgttcgcggt gcgcgcatgg 240
gtcgtggcct ctccggaaac acaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcacgcatc 300
gatg 304
<210> 109
<211> 304
<212> DNA
<213> 茅苍术与北苍术的杂交种(Hybrid of Atractylodes lancea & A.chinensis)
<400> 109
cattgtcgaa gcctgcacag cagaacgacc cgcgaacatg taatgrcaac cgggcgtcgg 60
ggggaacggg cgcaagccyg ggacctgcgg crctccgtcg gcragcgtcc gtggcgtccc 120
tatyggggcc ttgcgggcgt ttcgtcggca crtaaacaaa ccccggcaca acacgtgcca 180
aggaaaacaa aacttamgaa aggcgcttct cgtgtcgccc cgttcgcggt gcgsgcatgg 240
gtcgtggcct ctcyggaaac acaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcacgcatc 300
gatg 304
<210> 110
<211> 304
<212> DNA
<213> 关苍术(Atractylodes japonica)
<400> 110
cattgtcgaa gcctgcacag cagaacgacc cgcgaacatg taatgacaac mgggcgtcgg 60
ggggaacggg cgcaagccyg ggacctgcgg crctycgtcg gcragcgtmy gtggcrtccy 120
trtyggggcc ttgcgggcgt ttcgtcggca crtaaacaaa ccccggcaca acacgtgcca 180
aggaaaacaa aacttamgaa aggcgcttct cgtgtcgccc cgttcgcggt gygcgcatgg 240
gtcgtggcct ctctggaaac acaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcacgcatc 300
gatg 304
<210> 111
<211> 333
<212> DNA
<213> 三岛柴胡(Bupleurum falcatum)
<400> 111
ctgaatcgaa gagcgacccg agaacatgtt ttaagacggg gccagcggtc gtcggcctcg 60
gcctgacggc tgcgaaccct aggccggggg gcgcctagtt gtgcccgccg gcccaaaacc 120
taaccgggcg cggaatgcgc caaggaaacc gaaactgaac aggatgtctc cgccccgttt 180
gggggggtcg acatccttct gagaaacaaa cgactctcgg caacggatat cccggctctc 240
gcatcgatga agaacgtagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 300
catcgagttt ttgaacgcaa gttgcgcccg atg 333
<210> 112
<211> 134
<212> DNA
<213> 天门冬(Asparagus cochinchinensis)
<400> 112
ctgggcgtca tgcctcacat cgctccgtgc cccccgcctc ccacagccta gcattggraa 60
gcggcggcgc ggatgcggag attgacctcc cgtgccttgc ggcgcggcgg gttgaaatga 120
tggtcgctgg ccgg 134
<210> 113
<211> 134
<212> DNA
<213> 天门冬(Asparagus cochinchinensis)
<400> 113
ctgggcgtca tgcctcacat cgctccgtgc ccctcgcctc ccacggccta gcattgggaa 60
gcggtggcgc ggatgcggag attgacctcc cgtgccttgc ggcgcggcgg gttgaaatga 120
tggtcgctgg ccgg 134
<210> 114
<211> 136
<212> DNA
<213> 天门冬(Asparagus cochinchinensis)
<400> 114
ctgggcgtca tgcctcacat cgctccgtgc ccccccgcct cccacggcca tagcattggg 60
aagcggcggc gcggatgcgg atattgaccc cccgtgcctt gcggcgcggc gggttgaaat 120
gatggtcgct ggccgg 136
<210> 115
<211> 135
<212> DNA
<213> 天门冬(Asparagus cochinchinensis)
<400> 115
ctgggcgtca tgcctcacat cgctccgcgc cccccgcctc ccacggccat agcattggga 60
agcggcgacg cggatgcgga gattgacctc ccgtgccttg cggcgcggcg ggttgaaatg 120
atggtcgctg gccgg 135
<210> 116
<211> 189
<212> DNA
<213> 山茱萸(Cornus officinalis)
<400> 116
cctgcacagc agaacgaccc gcgaacgtgt tttttacgac ggcggcgggg cgctctcgcg 60
ggtgccccgg cgccatcagg gtgagcgcgt gccgatccct tcgcgggggg aggcgggcgc 120
tttcccctgc aaaaataacg aaccccggcg cgaaccgcgc caaggaacac gaacgaaaga 180
gcgagcccg 189
<210> 117
<211> 198
<212> DNA
<213> 卷丹(Lilium lancifolium)
<400> 117
gcggaaggat cattgtcgag aatcgattga gagaccgcga acctgtaaac ggatgayacc 60
gtgtcgggca ggcgttatgc ccgcccaact cgggacctcg catcgtgtcc gcggctgcct 120
twgagcgttt cgggcacgat ttgyggggga cgaacgaaac cccggcacgg cctgtgccaa 180
ggaacatatg tcaggacg 198
<210> 118
<211> 171
<212> DNA
<213> 卷丹(Lilium lancifolium)
<400> 118
ccaaggaaca tatgtcagga cggacgctcg tcaatgcctc rgtggtgggg cgacgttcgc 60
tctctatcta tacgactctc ggcaacggat atctcggctc tcgcatcgat gaagaacgta 120
gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga accatcgagt c 171
<210> 119
<211> 198
<212> DNA
<213> 人参(Panax ginseng)
<400> 119
cagaacgacc cgcgaacacg ttacaatacc gggtgaggga cgaggggtgc gcaagctccc 60
caagttgcaa acccatggtc ggggaccacc cttgggtgga tctcgtccga acaacgaccc 120
cccggcgcgg aatgcgccaa ggaaatcaaa ctgaactgca cgcgtccccc ccgtttgcgg 180
gcggcggaag cgtctttc 198
<210> 120
<211> 223
<212> DNA
<213> 人参(Panax ginseng)
<400> 120
gcaagttgcg cccgaagcca ttaggccgag ggcacgtctg cctgggcgtc acgcatcgcg 60
tcgcccccca acccatcact cccttgcggg agttgaggcg gaggggcgga taatggcctc 120
ccgtgtctca ccgcgcggtt ggcccaaatg cgagtccttg gcgatggacg tcacgacaag 180
tggtggttgt aaaaagccct cttctcatgt cgtgcggtga ccc 223
<210> 121
<211> 155
<212> DNA
<213> 天麻(Gastrodia elata)
<400> 121
ctgaactcaa accggcgcag cgccgcgcca agggaacgcg ttcgtgcacg atcccgcgag 60
cgggcttcgt gacgtgggcg ccgttgcgcc ccgaaaggac tagcacgact ctcggcaatg 120
gatatctcgg ctctcgcatc gatgaagaac gcagc 155
<210> 122
<211> 180
<212> DNA
<213> 天麻(Gastrodia elata)
<400> 122
gaggccaatc ggccaagggc acgcccgcct gggcgtcaag cattacgtcg ctccgcgccc 60
gagcgcacgc cgccggcacg gacgcgcaga ctggctcctc gcgcccgctg gcgcggcggg 120
ctgaagtgcg agttgcgccg ctctcgccgt ggccgcggcc gacaagggtg ggaggaaacg 180
<210> 123
<211> 328
<212> DNA
<213> 黄芩(Scutellaria baicalensis)
<400> 123
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtttccgta ggtgaacctg cggaaggatc attgtcgaaa 60
cctgcgaaag cagaccgcga acacgtgtct aacgaccaat cgagggcaac ggcgtggggg 120
cgtgcccccc gtcggggtcc tcacacccgc gcggccggcg cgagagcgtc gcgtcgtgcg 180
ggccaacgaa cccgggcgcg gaatgcgcca aggaaaacca aaagagatcg tcccccctcc 240
gtgcgtcccg tccgcggagc acgcgcgggg tgggtcgggc gtccatcgaa tgtcataacg 300
actctcggca acggatatct cggctctc 328
<210> 124
<211> 349
<212> DNA
<213> 黄芩(Scutellaria baicalensis)
<400> 124
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccatcag gccgagggca cgcctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cccccctcgc accgcctcga gcggtgccgt gtgggggggg 180
cggagattgg ccccccgtgc gccccggcgc gcggccggcc caaatgcgat cccccggcga 240
cgcacgcccc gacaagtggt ggttgtttcc tcaactcgcg tgctgtcgtg tgccaaggcg 300
tcgtccgttc gggagagaat cgaaagatga gacccaacgg ccatcgtgc 349
<210> 125
<211> 294
<212> DNA
<213> 人参(Panax ginseng)
<400> 125
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtttccgta ggtgaacctg cggaaggatc attgtcgaaa 60
cctgcatagc agaacgaccc gcgaacacgt tacaataccg ggtgagggac gaggggtgcg 120
caagctcccc aagttgcaaa cccatggtcg gggaccaccc ttgggtggat ctcgtccgaa 180
caacgacccc ccggcgcgga atgcgccaag gaaatcaaac tgaactgcac gcgtcccccc 240
cgtttgcggg cggcggaagc gtctttctaa aacacaaacg actctcggca acgg 294
<210> 126
<211> 370
<212> DNA
<213> 人参(Panax ginseng)
<400> 126
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaagc cattaggccg 60
agggcacgtc tgcctgggcg tcacgcatcg cgtcgccccc caacccatca ctcccttgcg 120
ggagttgagg cggaggggcg gataatggcc tcccgtgtct caccgcgcgg ttggcccaaa 180
tgcgagtcct tggcgatgga cgtcacgaca agtggtggtt gtaaaaagcc ctcttctcat 240
gtcgtgcggt gacccgtcgc cagcaaaagc tctcatgacc ctgttgcgcc gtcctcgacg 300
tgcgctccga ccgcgacccc aggtcaggcg ggactacccg ctgagtttaa gcatatcaat 360
aagcggagga 370
<210> 127
<211> 164
<212> DNA
<213> 兴安升麻(Cimicifuga dahurica)
<400> 127
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaatgacc cgtgaacacg ttaaaaaata 60
ttatgtggat tgatgaggag tgtgagctct aaatcatcca ttgtcggggc atgggatcga 120
ctatggttga tcttatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gcgc 164
<210> 128
<211> 164
<212> DNA
<213> 升麻(Cimicifuga foetida)
<400> 128
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaacgacc cgtgaacacg ttaaaaaaca 60
ttatgtggat tgaggaggag catgagctct taatcatcca ttgtcgagtc atgggatcga 120
ccacggttga tcttatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gcgc 164
<210> 129
<211> 164
<212> DNA
<213> 大三叶升麻(Cimicifuga heracleifolia)
<400> 129
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaacgacc cgtgaacacg ttaaaaaata 60
ttatgtggat tgaygaggag cgtgagcttt aaatcatcca ttgtcggggc atgggatcga 120
ycatggttga tcgtatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gcgc 164
<210> 130
<211> 164
<212> DNA
<213> 单穗升麻(Cimicifuga simplex)
<400> 130
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaacgacc cgtgaacacg ttaaaaaaca 60
ttatgtggat tgacgaggag cgtgagctct taatcatcca ttgtcgggtc atgggatcga 120
ccatggttga tcttatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gcgc 164
<210> 131
<211> 205
<212> DNA
<213> 兴安升麻(Cimicifuga dahurica)
<400> 131
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aggccattta ggttgagggc acgtctgcct 120
gggcgtcaca cacagcgtcg ttcccaacca attttattaa ttggggaacg gaaattggcc 180
ccccgagtcc ttttgggcac ggttg 205
<210> 132
<211> 205
<212> DNA
<213> 升麻(Cimicifuga foetida)
<400> 132
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aggccattta ggttgagggc acgtctgcct 120
gggcgtcaca cacagcgtcg ttcctaacca attttattag ttggggaacg gaaattggcc 180
ccccgagtcc ttttgggcac ggttg 205
<210> 133
<211> 205
<212> DNA
<213> 大三叶升麻(Cimicifuga heracleifolia)
<400> 133
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aggccattta ggttgagggc acgtctgcct 120
gggcgtcaca catagcgtcg ttcccaacca attttattaa ttggggaacg gaaattggcc 180
ccccgagtcc ttttgggcac ggttg 205
<210> 134
<211> 205
<212> DNA
<213> 单穗升麻(Cimicifuga simplex)
<400> 134
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aggccattta ggttgagggc acgtctgcct 120
gggcgtcaca cacagcgtcg ttcccaacca attttattag ttggggaatg gagattggcc 180
ccccgagtcc ttttgggcac ggttg 205
<210> 135
<211> 162
<212> DNA
<213> 兴安升麻(Cimicifuga dahurica)
<400> 135
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaatgacc cgtgaacacg ttaaaaaata 60
ttatgtggat tgatgaggag tgtgagctct aaatcatcca ttgtcggggc atgggatcga 120
ctatggttga tcttatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gc 162
<210> 136
<211> 162
<212> DNA
<213> 升麻(Cimicifuga foetida)
<400> 136
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaacgacc cgtgaacacg ttaaaaaaca 60
ttatgtggat tgaggaggag catgagctct taatcatcca ttgtcgagtc atgggatcga 120
ccacggttga tcttatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gc 162
<210> 137
<211> 162
<212> DNA
<213> 大三叶升麻(Cimicifuga heracleifolia)
<400> 137
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaacgacc cgtgaacacg ttaaaaaata 60
ttatgtggat tgaygaggag cgtgagcttt aaatcatcca ttgtcggggc atgggatcga 120
ycatggttga tcgtatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gc 162
<210> 138
<211> 162
<212> DNA
<213> 单穗升麻(Cimicifuga simplex)
<400> 138
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaacgacc cgtgaacacg ttaaaaaaca 60
ttatgtggat tgacgaggag cgtgagctct taatcatcca ttgtcgggtc atgggatcga 120
ccatggttga tcttatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gc 162
<210> 139
<211> 161
<212> DNA
<213> 兴安升麻(Cimicifuga dahurica)
<400> 139
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc catttaggtt 60
gagggcacgt ctgcctgggc gtcacacaca gcgtcgttcc caaccaattt tattaattgg 120
ggaacggaaa ttggcccccc gagtcctttt gggcacggtt g 161
<210> 140
<211> 161
<212> DNA
<213> 升麻(Cimicifuga foetida)
<400> 140
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc catttaggtt 60
gagggcacgt ctgcctgggc gtcacacaca gcgtcgttcc taaccaattt tattagttgg 120
ggaacggaaa ttggcccccc gagtcctttt gggcacggtt g 161
<210> 141
<211> 161
<212> DNA
<213> 大三叶升麻(Cimicifuga heracleifolia)
<400> 141
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc catttaggtt 60
gagggcacgt ctgcctgggc gtcacacata gcgtcgttcc caaccaattt tattaattgg 120
ggaacggaaa ttggcccccc gagtcctttt gggcacggtt g 161
<210> 142
<211> 161
<212> DNA
<213> 单穗升麻(Cimicifuga simplex)
<400> 142
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc catttaggtt 60
gagggcacgt ctgcctgggc gtcacacaca gcgtcgttcc caaccaattt tattagttgg 120
ggaatggaga ttggcccccc gagtcctttt gggcacggtt g 161
<210> 143
<211> 201
<212> DNA
<213> 猪苓(Polyporus umbellatus)
<400> 143
cggaaggatc attaatgagt cttgacttgg gttgcagctg gtctctcaca aggcaaatgt 60
gctcaccctt gttcaaatcc actctacacc tgtgcactta ctgtagattc tggtgtccct 120
tttaaccggg gggcttggga tctgcgtttt atcacaaact cttgtaaaag tatcagaatg 180
cactattgcg ataataaacg c 201
<210> 144
<211> 368
<212> DNA
<213> 乌头(Aconitum carmichaeli)
<400> 144
ggtgtgaatt gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc 60
cattaggtcg agggcacgtc tgcctgggcg tcacacacag cgtcgcaccc cgtcaaccam 120
gttgtcgggg agcggagatt ggccccccgg gcccctgcgg gcacggtcgg cacaaatgtt 180
tgtccccggc ggcgagcgtc gcggtcagtg gtggttgtat ttctcatcct ccaaagacat 240
caagacgcgt cgtcctcgtt gcacgttggg acacatcgac cccaaggagc cgcttcgcgc 300
ggcattcacc ctgcgacccc aggtcaggcg ggatcacccg ctgagtttgc atatcaataa 360
gcggagga 368
<210> 145
<211> 368
<212> DNA
<213> 日本乌头(Aconitum japonicum)
<400> 145
ggtgtgaatt gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc 60
cattaggtcg agggcacgtc tgcctgggcg tcacacacag cgtcgcaccc cgtcaaccac 120
gttgtcgggg agcggagatt ggccccccgg gcccctgcgg ccacggtcgg cacaaatgtt 180
tgtccccggc ggcgagcgtc gcggtcagtg gtggttgtat ttctcatcct ccaaagacat 240
caagacgcgt cgtcctcgtt gcacgttggg acacatcgac cccaaggagc cgcttcgcgc 300
ggcattcacc ctgcgacccc aggtcaggcg ggatcacccg ctgagtttgc atatcaataa 360
gcggagga 368
<210> 146
<211> 306
<212> DNA
<213> 乌头(Aconitum carmichaeli)
<400> 146
gtcgaaacct gcccagcaga gcgacccgcg aacaagtgaa aacaaacccg gacgtaccga 60
agaggggcgc atgcccccga tcgctcgccc gtcggaccac gaccccttyt gcggccgcac 120
tgatctgcgg gcggaggggg tgggtcgttg tgtccgcaca aaaccaaaaa ccggcgcgac 180
aggcgccaag gaaatcttag cggaaaaaga gggttgcccc gtccgcggyg gcagccttca 240
gaatccgata ctcaaacgac tctcggcaac ggatatctcg gctcttgcat cgatgaagaa 300
cgcagc 306
<210> 147
<211> 305
<212> DNA
<213> 日本乌头(Aconitum japonicum)
<400> 147
gtcgaaacct gcccagcaga gcgacccgcg aacaagtgaa aacaaacccg gacgtacmga 60
agaggggcgc atgccccyga tcgctcgccy gtcggaccac gaccccttct gcggccgcac 120
tgatctgcgg gcggaggggt gggtcgttgt gtccgcacaa aaccaaaaac cggcgcgaca 180
ggcgccaagg aaatcttagc ggaaaaagag ggttgccccg tccgcggtgg cagccttcag 240
aatccgatac tcaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcttgcatc gatgaagaac 300
gcagc 305
<210> 148
<211> 167
<212> DNA
<213> 乌头(Aconitum carmichaeli)
<400> 148
gtgggtcgtt gtgtccgcac aaaaccaaaa accggcgcga caggcgccaa ggaaatctta 60
gcggaaaaag agggttgccc cgtccgcggy ggcagccttc agaatccgat actcaaacga 120
ctctcggcaa cggatatctc ggctcttgca tcgatgaaga acgcagc 167
<210> 149
<211> 167
<212> DNA
<213> 日本乌头(Aconitum japonicum)
<400> 149
gtgggtcgtt gtgtccgcac aaaaccaaaa accggcgcga caggcgccaa ggaaatctta 60
gcggaaaaag agggttgccc cgtccgcggt ggcagccttc agaatccgat actcaaacga 120
ctctcggcaa cggatatctc ggctcttgca tcgatgaaga acgcagc 167
<210> 150
<211> 368
<212> DNA
<213> 望春花(Magnolia biondii)
<400> 150
gacttgattg gattgagcct tggtagggaa acctactaag tggtaacttc caaattcaga 60
gaaaccctgg aattaaaaat gggcaatcct gagccaaatc ctgtgttcag aaaacaaggg 120
ttcagaaagc gagaatcaaa aaaaaaagga taggtgcaga gactcaatgg aagctgttct 180
aacaaatgga gttgactgca ttggtagagg aatcgaatcc ttctatcgaa actacagaaa 240
agatgaccct gtatacatac gtatacatac tgaaatatca aataattaat cacgactcga 300
atccttattt ttttatatga aaaatttaag aattattgtg aatcgattcc aagttgaagg 360
aagaatcg 368
<210> 151
<211> 277
<212> DNA
<213> 望春花(Magnolia biondii)
<400> 151
ctctttcaca aatgggtccg accataaatg tttctctctt atcacaagtc ttgtgataga 60
tatgatatac gtacaaatgc ccatattatg ggcaaggaat ctccattatt gaatcattca 120
cagtgcatat cattactctt acacttacaa agtcttcttt ttgaagatcc aagaaattcc 180
aggacctagg gaagattttg gaatgcaatt tgagtccctt taattgacat agacccgagt 240
cctctagtag gatgacgcat cgggaatggt cgggata 277
<210> 152
<211> 104
<212> DNA
<213> 丁香(Syzygium aromaticum)
<400> 152
ccaaggaact ttaacaagag agcgatgctc ccgccgtccc agacatggtg cgcgtgcggg 60
atgccatgca atctcccatt attcataacg actctcggca acgg 104
<210> 153
<211> 237
<212> DNA
<213> 钩藤(Uncaria rhynchophylla)
<400> 153
aatcctgcga aacgcacgac cgcgaacctg tgtaaacaat cgggcgtcgg gtggtagggg 60
agactaagcc ctccgttccc atccggcgct acccgcgcgc tcgtcgcgcg gaaaacgtaa 120
ctcaaacccg gcgcggaacg cgccaaggaa aactcaatag gactgccggg ccctcgatgc 180
cccgtacgcg gtgtgctcgg ggtgctgtgg ctcctgtcgt aatccaaacg actctcg 237
<210> 154
<211> 387
<212> DNA
<213> 钩藤(Uncaria rhynchophylla)
<400> 154
tcgtaatcca aacgactctc ggcaacggat atctcggctc tcgcatcgat gaagaacgta 60
gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga accatcgagt ctttgaacgc 120
aagttgcgcc cgaagccatc aggcctaggg cacgtctgcc tgggcgtcac gcatcgcgtc 180
gccgccccca cctatcgtgt ggggcggcgg atgttggcct cccgtgccgt aaggcgcggc 240
cggcctaaat gagagtcctc ggcgagggac gtcacgacga gtggtggttg aatgccccga 300
ctcgagtttt gttgtgtcgg ttcccatcgt cgtcttcggc tccacggatg accctagtgc 360
gcgttctgtt tgcagtcgcg ccccgaa 387
<210> 155
<211> 192
<212> DNA
<213> 钩藤(Uncaria rhynchophylla)
<400> 155
gtcgggtggt aggggagact aagccctccg ttcccatccg gcgctacccg cgcgctcgtc 60
gcgcggaaaa cgtaactcaa acccggcgcg gaacgcgcca aggaaaactc aataggactg 120
ccgggccctc gatgccccgt acgcggtgtg ctcggggtgc tgtggctcct gtcgtaatcc 180
aaacgactct cg 192
<210> 156
<211> 232
<212> DNA
<213> 钩藤(Uncaria rhynchophylla)
<400> 156
ctgcctgggc gtcacgcatc gcgtcgccgc ccccacctat cgtgtggggc ggcggatgtt 60
ggcctcccgt gccgtaaggc gcggccggcc taaatgagag tcctcggcga gggacgtcac 120
gacgagtggt ggttgaatgc cccgactcga gttttgttgt gtcggttccc atcgtcgtct 180
tcggctccac ggatgaccct agtgcgcgtt ctgtttgcag tcgcgccccg aa 232
<210> 157
<211> 214
<212> DNA
<213> 香附子(Cyperus rotundus)
<400> 157
gcggaaggat cattgtcgtc gcccgaaaca cgaccgcgaa cacgtaacgt aaagcctccg 60
ggggggcctc cyccccggac ccgccggccc cggcccctcg ggycgggtgc cggaacacgg 120
cgcggactgt cgcaargaac accgaactgc cccaggcacg ccgcagtccg cggcgccgcc 180
ggggccaagc aaacagtacg actctcggca acgg 214
<210> 158
<211> 223
<212> DNA
<213> 香附子(Cyperus rotundus)
<400> 158
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggg accctcccga 60
gggcacgcct gcctgggcgt tagaagccca tcaacgctcg gtcacccgac cgcacgcgga 120
cagtggccct ccgagccgcg taggcgcggc gggccgaagc gcgaggccgt cgaccgcgtc 180
gggggcggca agtggtgggc tacagcgcat gccgaccccg acc 223
<210> 159
<211> 258
<212> DNA
<213> 日本黄连(Coptis japonica)
<400> 159
gcgttggaga gaccgtttcc tattttgtgc tgaagcaatt tataaagcac aagccgaaac 60
cggtgaaatc aaaggacatt acttgaatgc tactgcgggt acatgcgaag aaatgatgaa 120
aagggctgta tttgccagag agttgggggt gcccatcgta atgcatgact acttaacggg 180
gggattcacc gcaaatacta gcttgtctca ttattgccga gataatggtc tacttcttca 240
cattcaccgc gcaatgca 258
<210> 160
<211> 258
<212> DNA
<213> 黄连(Coptis chinensis)
<400> 160
gcgttggaga gaccgtttcc tattttgtgc tgaagcaatt tataaagcac aagccgaaac 60
cggtgaaatc aaaggacatt acttgaatgc tactgcgggt acatgcgaag aaatgataaa 120
aagggctgta tttgccagag agttgggagt gcccatcgta atgcatgact acttaacggg 180
gggattcacc gcaaatacta gcttgtctca ttattgccga gataatggtc tacttcttca 240
cattcaccgc gcaatgca 258
<210> 161
<211> 258
<212> DNA
<213> 三角叶黄连(Coptis deltoidea)
<400> 161
gcgttggaga gaccgtttcc tattttgtgc tgaagcaatt tataaagcac aagccgaaac 60
cggtgaaatc aaaggacatt acttgaatgc tactgcgggt acatgcgaag aaatgataaa 120
aagggctgta tttgccagag agttgggggt gcccatcgta atgcatgact acttaacagg 180
gggattcacc gcaaatacta gcttgtctca ttattgccga gataatggtc tacttcttca 240
cattcaccgc gcaatgca 258
<210> 162
<211> 258
<212> DNA
<213> 云南黄连(Coptis teeta)
<400> 162
gcgttggaga gaccgtttcc tattttgtgc tgaagcaatt tataaagcac aagccgaaac 60
cggtgaaatc aaaggacatt acttgaatgc tactgcgggt acatgcgaag aaatgataaa 120
aagggctgta tttgccagag agttgggggt gcccatcgta atgcatgact acttaacggg 180
gggattcacc gcaaatacta gcttgtctca ttattgccga gataatggtc tacttcttca 240
cattcaccgc gcaatgca 258
<210> 163
<211> 219
<212> DNA
<213> 日本黄连(Coptis japonica)
<400> 163
gggttcaaag cgctacgcgc tctacgtttg gaggatttgc gaattcctgt tgcttatgtt 60
aaaactttcc agggaccgcc ccatggtatc caagttgaga gagataaatt gaacaagtat 120
ggtcgtcccc tattgggatg tactattaaa ccaaaattgg gattatctgc taagaactac 180
ggtagagcgg tttatgaatg tctccgcggt ggacttgat 219
<210> 164
<211> 219
<212> DNA
<213> 黄连(Coptis chinensis)
<400> 164
gggttcaaag cgctacgcgc tctacgtttg gaggatctgc gaattcctgt tgcttatgtt 60
aaaactttcc aggggccgcc ccatggtatc caagttgaga gagataaatt gaacaagtat 120
ggtcgtcccc tattgggatg tactattaaa ccaaaattgg gattatctgc taagaactac 180
ggtagagcgg tttatgaatg tctccgcggt ggacttgat 219
<210> 165
<211> 219
<212> DNA
<213> 三角叶黄连(Coptis deltoidea)
<400> 165
gggttcaaag cgctacgcgc tctacgtttg gaggatctgc gaattcctgt tgcttatgtt 60
aaaactttcc aggggccgcc ccatggtatc caagttgaga gagataaatt gaacaagtat 120
ggtcgtcccc tattgggatg tactattaaa ccaaaattgg gattatctgc taagaactac 180
ggtagagcgg tttatgaatg tctccgcggt ggacttgat 219
<210> 166
<211> 219
<212> DNA
<213> 云南黄连(Coptis teeta)
<400> 166
gggttcaaag cgctacgcgc tctacgtttg gaggatctgc gaattcctgt tgcttatgtt 60
aaaactttcc aggggccgcc ccatggtatc caagttgaga gagataaatt gaacaagtat 120
ggtcgtcccc tattgggatg tactattaaa ccaaaattgg gattatctgc taagaactat 180
ggtagagcgg tttatgaatg tctccgcggt ggacttgat 219
<210> 167
<211> 162
<212> DNA
<213> 姜(Zingiber officinale)
<400> 167
cttctggagt ccttcttgag cgaatacatt tttatgtaaa aatagaacat cttggagtgt 60
accgaatttt ttgtcagaag actctatgga ttttcaagga tcctttcata cattatattc 120
gatatcaagg aaaatcgatt ctgggttcaa gagggactca tt 162
<210> 168
<211> 360
<212> DNA
<213> 栀子(Gardenia jasminoides)
<400> 168
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcaagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccatcag gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cacccccctc ccgcgggggc ggcggagact ggcctcccgt 180
gccccggggc gcggccggcc caaatgagag ttcctcggcg aggggcgtca cgactggtgg 240
tggttgagtc cctcaactcg agtcgtcgtc gtgccggcaa accccagccg cggtcccgtg 300
accccgaagc tcccgcgagc ctcgaccgcg accccaggtc aggcgggatt acccgctgag 360
<210> 169
<211> 178
<212> DNA
<213> 川黄檗(Phellodendron chinense)
<400> 169
gtgcgggact cgtcccgttc cccgcggggg cgaccaacga acccccggcg cggactgcgc 60
caaggaaatc taacgagaga gcacgccccc ggggcccccg gacacggcga gccccgggac 120
gcggtgcctt ctttcactct atctataacg actctcggca acggatatct cggctctc 178
<210> 170
<211> 215
<212> DNA
<213> 厚朴(Magnolia officinalis)
<400> 170
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gtatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcatgtagg aatctgtata 120
tcttgtatat atagctagac gtatatttct atatatagaa gataatgcct ttgctttctt 180
tttataacga atccttgacc tttaccgaat cggcc 215
<210> 171
<211> 215
<212> DNA
<213> 凹叶厚朴(Magnolia officinalis var. biloba)
<400> 171
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gtatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcatgtagg aatctgtata 120
tcttgtatat atagctagac gtatatttct atatatagaa gataatgcct ttgctttctt 180
tttataacga atccttgacc tttaccgaat cggcc 215
<210> 172
<211> 215
<212> DNA
<213> 日本厚朴(Magnolia obovata)
<400> 172
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gtatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcatgtagg aatctgtata 120
tcttgtatat atagctagac gtatatttct atatatagaa gataatgcct ttgctttctt 180
tttataacga atccttgacc tttaccgaat cggcc 215
<210> 173
<211> 116
<212> DNA
<213> 厚朴(Magnolia officinalis)
<400> 173
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gtatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcatgtagg aatctg 116
<210> 174
<211> 116
<212> DNA
<213> 凹叶厚朴(Magnolia officinalis var. biloba)
<400> 174
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gtatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcatgtagg aatctg 116
<210> 175
<211> 116
<212> DNA
<213> 日本厚朴(Magnolia obovata)
<400> 175
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gtatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcatgtagg aatctg 116
<210> 176
<211> 121
<212> DNA
<213> 厚朴(Magnolia officinalis)
<400> 176
gaatctgtca tgtaggaatc tgtatatctt gtatatatag ctagacgtat atttctatat 60
atagaagata atgcctttgc tttcttttta taacgaatcc ttgaccttta ccgaatcggc 120
c 121
<210> 177
<211> 121
<212> DNA
<213> 凹叶厚朴(Magnolia officinalis var. biloba)
<400> 177
gaatctgtca tgtaggaatc tgtatatctt gtatatatag ctagacgtat atttctatat 60
atagaagata atgcctttgc tttcttttta taacgaatcc ttgaccttta ccgaatcggc 120
c 121
<210> 178
<211> 121
<212> DNA
<213> 日本厚朴(Magnolia obovata)
<400> 178
gaatctgtca tgtaggaatc tgtatatctt gtatatatag ctagacgtat atttctatat 60
atagaagata atgcctttgc tttcttttta taacgaatcc ttgaccttta ccgaatcggc 120
c 121
<210> 179
<211> 198
<212> DNA
<213> 东方泽泻(Alisma orientale CT)
<400> 179
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccaaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaacgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc cttggctttg tgctgcccgc tcacacccgg 120
cctctccacc cgcacgacat tgtgggcttc tgctcgcggt gcctgtgtgg tgcgtttggc 180
accaaaacaa atccccgg 198
<210> 180
<211> 198
<212> DNA
<213> 东方泽泻(Alisma orientale TA)
<400> 180
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccaaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaatgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc cttggctttg tgctgcccgc tcacacccgg 120
cctctccacc cgcacgacat tgtgggcttc tgctcgcggt gcctgtgtgg tgcgtttggc 180
accaaaacaa atccccgg 198
<210> 181
<211> 239
<212> DNA
<213> 东方泽泻(Alisma orientale CT)
<400> 181
cggtgggctg aaggatgtgg agtcggtccg tccaacgtta ttgggcatga ctgtgctggg 60
tcgctgctgc tactgctcgt tgctcgctgg gtgcggcagt cttagcaaat gcgggcatcg 120
tcgttgtgtc gagtagcctt gttgtcggac tcttacgcca gtaaagttac cacgattggt 180
atatcagcgg tcacaccgtt ggttcctcat attgcgaccc caagtcaggc gggaacacc 239
<210> 182
<211> 239
<212> DNA
<213> 东方泽泻(Alisma orientale TA)
<400> 182
cggtgggctg aaggatgtgg agtcggtccg tccaacgtta ttgggcatga ctgtgctggg 60
tcgctgcagc tactgctcgt tgctcgctgg gtgcggcagt cttagcaaat gcgggcatcg 120
tcgttgtgtc gagtagcctt gttgtcggac tcttacgcca gtaaagttac cacgattggt 180
atatcagcgg tcacaccgtt ggttcctcat attgcgaccc caagtcaggc gggaacacc 239
<210> 183
<211> 129
<212> DNA
<213> 东方泽泻(Alisma orientale CT)
<400> 183
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccaaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaacgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc cttggctttg tgctgcccgc tcacacccgg 120
cctctccac 129
<210> 184
<211> 129
<212> DNA
<213> 东方泽泻(Alisma orientale TA)
<400> 184
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccaaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaatgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc cttggctttg tgctgcccgc tcacacccgg 120
cctctccac 129
<210> 185
<211> 131
<212> DNA
<213> 东方泽泻(Alisma orientale CT)
<400> 185
cggtgggctg aaggatgtgg agtcggtccg tccaacgtta ttgggcatga ctgtgctggg 60
tcgctgctgc tactgctcgt tgctcgctgg gtgcggcagt cttagcaaat gcgggcatcg 120
tcgttgtgtc g 131
<210> 186
<211> 131
<212> DNA
<213> 东方泽泻(Alisma orientale TA)
<400> 186
cggtgggctg aaggatgtgg agtcggtccg tccaacgtta ttgggcatga ctgtgctggg 60
tcgctgcagc tactgctcgt tgctcgctgg gtgcggcagt cttagcaaat gcgggcatcg 120
tcgttgtgtc g 131
<210> 187
<211> 293
<212> DNA
<213> 北缬草(Valeriana fauriei)
<400> 187
gaagccatta ggccgagggc acgcctgcct gggcgtcacg catcgcgtcg ccccccctcc 60
ccgcctcccc ctcatcgggg cgcggcgtgc ggcggggggc gcggacgatg gcctcccgcg 120
cccccatcgg gcgcggctgg cccaaaacac ggtcccccgg cggcggacgt cacggcgagt 180
ggtggtcgaa aagtcctctg ttcgcgccgt ggccctcccc gtcttccggg cggcgaatcg 240
acccatacgc gccgtcgacg agacggcgct ccgaccgcga ccccaggtca ggc 293
<210> 188
<211> 218
<212> DNA
<213> 麻栎(Quercus acutissima)
<400> 188
cggaacgcgc caaggaaatc gaaccaagag agccacgcyg gaggccccgg acacggtgcg 60
ccctcggcgt cggcgtctta cgaattatta aaacgactct cggcaacgga tatctaggct 120
ctcgcatcga tgaagaacgc agcgaaatgc gatacttggt gtgaattgca gaatcccgcg 180
aatcatcgag tttttgaacg caagttgcgc ccgaagcc 218
<210> 189
<211> 218
<212> DNA
<213> 栓皮栎(Quercus variabilis)
<400> 189
cggaacgcgc caaggaaatc gaaccaagag agccacgcyg gaggccccgg acacggtgcg 60
ccctcggcgt cggcgtctta cgaattatta aaacgactct cggcaacgga tatctaggct 120
ctcgcatcga tgaagaacgc agcgaaatgc gatacttggt gtgaattgca gaatcccgcg 180
aatcatcgag tttttgaacg caagttgcgc ccgaagcc 218
<210> 190
<211> 219
<212> DNA
<213> 枹栎(Quercus serrata)
<400> 190
cggaacgcgc caaggaaatc taaccaagag agccatgctg gaggccccgg acacggtgcg 60
cccccggcgt cggcgtctta tgaattattc aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg cagcgaaatg cgatacttgg tgtgaattgc agaatcccgc 180
gaatcatcga gtttttgaac gcaagttgcg cccgaagcc 219
<210> 191
<211> 219
<212> DNA
<213> 蒙古栎(Quercus crispula)
<400> 191
cggaacgcgc caaggaaatc taaccaagag agccatgctg gaggccccgg acacggtgcg 60
cccccggcgt cggcgtctta tgaattattc aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg cagcgaaatg cgatacttgg tgtgaattgc agaatcccgc 180
gaatcatcga gtttttgaac gcaagttgcg cccgaagcc 219
<210> 192
<211> 144
<212> DNA
<213> 麻栎(Quercus acutissima)
<400> 192
cggaacgcgc caaggaaatc gaaccaagag agccacgcyg gaggccccgg acacggtgcg 60
ccctcggcgt cggcgtctta cgaattatta aaacgactct cggcaacgga tatctaggct 120
ctcgcatcga tgaagaacgc agcg 144
<210> 193
<211> 144
<212> DNA
<213> 栓皮栎(Quercus variabilis)
<400> 193
cggaacgcgc caaggaaatc gaaccaagag agccacgcyg gaggccccgg acacggtgcg 60
ccctcggcgt cggcgtctta cgaattatta aaacgactct cggcaacgga tatctaggct 120
ctcgcatcga tgaagaacgc agcg 144
<210> 194
<211> 145
<212> DNA
<213> 枹栎(Quercus serrata)
<400> 194
cggaacgcgc caaggaaatc taaccaagag agccatgctg gaggccccgg acacggtgcg 60
cccccggcgt cggcgtctta tgaattattc aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg cagcg 145
<210> 195
<211> 145
<212> DNA
<213> 蒙古栎(Quercus crispula)
<400> 195
cggaacgcgc caaggaaatc taaccaagag agccatgctg gaggccccgg acacggtgcg 60
cccccggcgt cggcgtctta tgaattattc aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg cagcg 145
<210> 196
<211> 231
<212> DNA
<213> 麻栎(Quercus acutissima)
<400> 196
gcctgggtgt cacgcatcgt tgccccccca aactccggtt cgggcggggc ggaagttggc 60
ctcccgtgcg cgcctgcgcg cgcggttagc ccaaaagcga gtcctcggcg acgagcgcca 120
cgacaatcgg tggtttttcg accctcgttc cacgtcgtgc gcgccccgtc gcccgaactc 180
ttgcgaccct tacgcgttgc ctcggcgacg ctcccaacgc gaccccaggt c 231
<210> 197
<211> 231
<212> DNA
<213> 栓皮栎(Quercus variabilis)
<400> 197
gcctgggtgt cacgcatcgt tgccccccca aactccggtt cgggcggggc ggaagttggc 60
ctcccgtgcg cgcctgcgcg cgcggttagc ccaaaagcga gtcctcggcg acgagcgcca 120
cgacaatcgg tggtttttcg accctcgttc cacgtcgtgc gcgccccgtc gcccgaactc 180
ttgcgaccct tacgcgttgc ctcggcgacg ctcccaacgc gaccccaggt c 231
<210> 198
<211> 235
<212> DNA
<213> 枹栎(Quercus serrata)
<400> 198
gcctgggtgt cacgcatcgt tgccccccca aactccggtt cgggcggggc ggaagttggc 60
ctcccgtgcg tgcctgcgcg cgcggttagc ccaaaagcga gtcctcggcg acgagcgcca 120
cgacaatcgg tggttttttt accctcgttc ctcgtcgtgc gtgtcccgtc gcccgaacgc 180
gctcttgtga ccctcacgcg tcgcctcggc ggcgctccca acgcgacccc aggtc 235
<210> 199
<211> 235
<212> DNA
<213> 蒙古栎(Quercus crispula)
<400> 199
gcctgggtgt cacgcatcgt tgccccccca aactccggtt cgggcggggc ggaagttggc 60
ctcccgtgcg tgcctgcgcg cgcggttagc ccaaaagcga gtcctcggcg acgagcgcca 120
cgacaatcgg tggttttttt accctcgttc ctcgtcgtgc gtgtcccgtc gcccgaacgc 180
gctcttgtga ccctcacgcg tcgcctcggc ggcgctccca acgcgacccc aggtc 235
<210> 200
<211> 151
<212> DNA
<213> 连翘(Forsythia suspensa)
<400> 200
cacgggagga tgacgacggt tcagccaccg tgctgtccct cgtcagagcc ccgctccgtc 60
gacgtgcgca ctcgctgcgt ccgtcgtatg gactaacgaa ccccggcgcg gaatgcgcca 120
aggaatactc tacaacattg cccgtcccca g 151
<210> 201
<211> 151
<212> DNA
<213> 连翘(Forsythia suspensa)
<400> 201
gctgagggca cgtctgcctg ggcgtcacgc atctcgtcgc cctccacctc tccccgaaag 60
ggattcgtga ggtgctgggc tggatattgg cctcccgtgc gccatcgtgt gcggttggcc 120
taaatttgat tcggcatcga cgcatgtcac g 151
<210> 202
<211> 243
<212> DNA
<213> 高良姜(Alpinia officinarum)
<400> 202
gcagttcctt ctccacgaat attataattg gaatagtctc attattccga ataaatctat 60
ttacatattt tcaaaagaca ataaaagact attttgtttc ttatataatt tatatatata 120
tgaatatgaa tttctattag tgtttccttg taaacaatct tcttttttac gattaatatc 180
ttctggagtc cttcttgagc gaatacattt ttatgtaaaa atagagcatc ttggagtgtg 240
ccg 243
<210> 203
<211> 243
<212> DNA
<213> 高良姜(Alpinia officinarum)
<400> 203
cttctggagt ccttcttgag cgaatacatt tttatgtaaa aatagagcat cttggagtgt 60
gccgaatttt ttgtcagaag actctatgga ttttcaagga tcctttcata cattatattc 120
gatatcaagg aaaatcgatt ttgggttcaa gagggactca ttttttgatg aagaaatgga 180
aataccatct tgttcatttt tggcaatatt attttcattt ttggtctcaa ccatatagga 240
ttg 243
<210> 204
<211> 165
<212> DNA
<213> 莲(Nelumbo nucifera)
<400> 204
gtctcgtggc ctcctagcta acaaccaact ccgggcgcgg atggcgccaa ggaatctcca 60
tggaagggtg cataatccca acattgttgg gtgttttgcc tctatattca aaaaacgact 120
ctcggcaacg gatatctcgg ctctcgcatc gatgaagaac gcagc 165
<210> 205
<211> 219
<212> DNA
<213> 莲(Nelumbo nucifera)
<400> 205
ggtgcggttg gcccaaatga tggcccccga caataaagtg ccacgacggt tggtggttca 60
atcttaggtg gtggaatgct ggacgtcgtg cacgttgtgt tgtcattggg gtgtcgagtg 120
tgtgacccga tgagggatcc gttgttgacg gagcctgcct tgcgacccca ggtcaggcgg 180
ggccacccgc tgaatttaag catatcaata agcggagga 219
<210> 206
<211> 309
<212> DNA
<213> 红花(Carthamus tinctorius)
<400> 206
gtcgaagcct gcacagcaga acgacccgtg aacatgtaat cacaaccggg tgtcgtggga 60
ttgggtgtga gccttagccc tacgatgctt gtcggcatgc gtgcaaggtg cttatctcta 120
ggcatcgtgg acgtcgtgtc ggcacaaaaa caaaccccgg cacggcatgt gccaaggaaa 180
acaaaactta agaagggttc gtctcgtgtt gccccgtttg cggtgtgcac acgggtcgtg 240
gcctctcatt aaccataaac gactctcggc aacggatatc tcggctcacg catcgatgaa 300
gaacgcagc 309
<210> 207
<211> 408
<212> DNA
<213> 红花(Carthamus tinctorius)
<400> 207
gcatcgatga agaacgcagc aaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagttt ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccattcg gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cccagaccat gctcccccat ggggaagtgt ttggtctggg 180
acgaagagtg gtctcccgtg tcgatggtgc ggttggccta aaaaggagtc ccctttggcg 240
gacgcacggc tagtggtggt tgtaaaggac ttcgtaacga gccgtgttga tgctagggaa 300
ttgctctcta aagaccctaa cgtgtcgtct tacgacgatg cttcgaccgc gaccccaggt 360
caggcggggg actacccgct gagtttaagc atatcaataa gcggagga 408
<210> 208
<211> 294
<212> DNA
<213> 苏木(Caesalpinia sappan)
<400> 208
ccgtaggtga acctgcggaa ggatcattgt cgatgcctct cgaagagaac gacccgcgaa 60
tcgtgtgctc atcattatgg agacgggggt gctggttgcc cccggttcct gtgttgcaag 120
agctcttgtg gactcgtgcc gcttgacctc ttcgacgcaa taactaaccc cggcgccctg 180
cgccaaggaa tcttgagaac caagcgtgcc ccttggtcgc ccggaaacgg tgcgggttgg 240
ggggtaatgc gacatcgtat acacaacgac tctcggcaac ggatatctcg gctc 294
<210> 209
<211> 322
<212> DNA
<213> 川赤芍(Paeonia veitchii)
<400> 209
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcggga tgacggaagg 60
cgtgagcctc tcctccatcc catgtccggt cgcgccagac gttgagtctc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccaag gttctggtgt gctctcggat ttacaacaac ccccggcgca 180
aaccgcgcca aggaactaaa acgaaagagc atgcccccgt tgccccgtct ttgggatgcg 240
cgggaggtaa tgtcttcttt tacatatcaa aacgactctc ggcaacggat atctcggctc 300
tcgcatcgat gaagaacgca gc 322
<210> 210
<211> 322
<212> DNA
<213> 窄叶芍药(Paeonia anomala)
<400> 210
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcggga tgacggaagg 60
cgtgagcctc tccttcatcc crtgtccggt cgcgccagac gttgagtcgc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccaag gttctggtgt gctctcggat ttacaacaac ccccggcgca 180
aaccgcgcca aggaactaaa acgaaagagc atgcccccgt tgccccgact tcgggatgcg 240
cgggaggtaa tgtcttcttt tacatatcaa aacgactctc ggcaacggat atctcggctc 300
tcgcatcgat gaagaacgca gc 322
<210> 211
<211> 322
<212> DNA
<213> 牡丹(Paeonia suffruticosa)
<400> 211
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcgggc tgagggaagg 60
cgtgagcctc tccttcatcc cacgtccgat cgcaccagac gttgagtcgc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccaag gttctggtgt gctctcggat ttacaacaaa ccccggcgca 180
aaccgcgcca aggaactaaa acgaaagagc atgcccccgt tgccccgact ttgggatgcg 240
cgggaggtaa tgtcttcttt tacatatcaa aacgactctc ggcaacggat atctcggctc 300
tcgcatcgat gaagaacgca gc 322
<210> 212
<211> 322
<212> DNA
<213> 细叶芍药(Paeonia tenuifolia)
<400> 212
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcggga tgacggaagg 60
cgtgagcctc tccttcatcc catgtccggt cgcgccatac gttgagtcgc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccatt gttctggtgt gctctcggat ttacaacaac ccccggcgca 180
aaccgcgcca aggaactaaa acaaaagagc atgcccccgt tgccccggct tcgggatgcg 240
cgggaggtaa tgtcttcttt tacatatcaa aacgactctc ggcaacggat atctcggctc 300
tcgcatcgat gaagaacgca gc 322
<210> 213
<211> 322
<212> DNA
<213> 荷兰芍药(Paeonia officinalis subsp. microcarpa)
<400> 213
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcggga tgacggaagg 60
cgtgagcctc tccttcatcc catgtccggt cgcgccatac gttgagtcgc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccatt gttctggtgt gctctcggat ttacaacaac ccccggcgca 180
aaccgcgcca aggaactaaa acraaagagc atgcccccgt tgccccggct tcgggatgcg 240
cgggaggtaa tgtcttcttt tacatatcaa aacgactctc ggcaacggat atctcggctc 300
tcgcatcgat gaagaacgca gc 322
<210> 214
<211> 322
<212> DNA
<213> 大叶芍药(Paeonia rhodia)
<400> 214
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcgggr tgacggaagg 60
cgtgagcctc tccttcatcc catgtccggt cgcgccagac gttgagtckc ccctmgcacg 120
atgtgcaggg amgcgycaws gttctggtgt gctcyyggat ttacaacaaa ccccggcgca 180
aaycgcgcca aggaactaaa acgaaagagc aygcccccgt tgccccract ttgggatgcg 240
cgggaggtaa tgtcttcttt tacatatcaa aacgactctc ggcaacggat atctcggctc 300
tcgcatcgat gaagaacgca gc 322
<210> 215
<211> 322
<212> DNA
<213> 新疆芍药(Paeonia sinjiangensis)
<400> 215
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcggga tgacggaagg 60
cgtgagcctc tcctccatcc catgtccggt cgcgccagac gttgartctc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccaag gttctggtgt gctctyggat ttacaacaac ccccggcgca 180
aaccgcgcca aggaactaaa acgaaagagc atgcccccgt tgccccgtct ttgggatgcg 240
cgggaggtaa tgtcttcttt tacatatcaa aacgactctc ggcaacggat atctcggctc 300
tcgcatcgat gaagaacgca gc 322
<210> 216
<211> 322
<212> DNA
<213> 超群芍药(Paeonia broteri)
<400> 216
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcgggm tgacggaagg 60
cgtgagcctc tccttcatcc catgtccgrt ygcgccagac gttgagtckc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg ahgcgycaas gttctggtgt gctctyggat ttacaacaaa ccccggcgca 180
aaccgygcca aggaactaaa acgaaagagc atgcccccgt tgccccgact ttgggatgcg 240
ygggaggtaa tgtcttcttt tacatatcaa aacgactctc ggcaacggat atctcggctc 300
tcgcatcgat gaagaacgca gc 322
<210> 217
<211> 322
<212> DNA
<213> 羊角芍药(Paeonia arietina)
<400> 217
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcggga tgacggaagg 60
cgtgagcctc tccttcatcc catgtccggt cgcgccatac gttgagtcgc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccatt gttctggtgt gctctcggat ttacaacaac ccccggcgca 180
aaccgcgcca aggaactaaa acgaaagagc atgcccccgt tgccccggct tcgggatgcg 240
cgggaggtaa tgtcttcttt tacatatcaa aacgactctc ggcaacggat atctcggctc 300
tcgcatcgat gaagaacgca gc 322
<210> 218
<211> 322
<212> DNA
<213> 巴纳特芍药(Paeonia banatica)
<400> 218
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcgggr tgacggaagg 60
cgtgagcctc tccttcatcc catgtccggt cgcgccakac gttgagtcgc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccawk gttctggtgt gctctcggat ttacaacaam ccccggcgca 180
aaccgcgcca aggaactaaa acgaaagagc atgcccccgt tgccccgrct tygggatgcg 240
cgggaggtaa tgtcttcttt tacatatcaa aacgactctc ggcaacggat atctcggctc 300
tcgcatcgat gaagaacgca gc 322
<210> 219
<211> 178
<212> DNA
<213> 川赤芍(Paeonia veitchii)
<400> 219
cgcaagttgc gcccaaagcc tttaggctga gggcacgtct gcctgggcgt cacgtatccc 60
gtcgcacccc ccaacccgtc ccaactcggr catgatggct ggtgggagcg gatattggcc 120
tcccgtgtac tcgcgttacg gttggtctaa aattgagccc cgagcgacga acgtcacg 178
<210> 220
<211> 178
<212> DNA
<213> 窄叶芍药(Paeonia anomala)
<400> 220
cgcaagttgc gcccaaagcc tttaggctga gggcacgtct gcctgggcgt cacgtatccc 60
gtcgcacccc ccaacccgtc ccaactcggg catgatggct ggtgggagcg gatattggcc 120
tcccgtgtac tcrcgttacg gttggtctaa aatcgagccc cgagcgacga acgtcacg 178
<210> 221
<211> 178
<212> DNA
<213> 牡丹(Paeonia suffruticosa)
<400> 221
cgcaagttgc gcccaaagcc tttaggctga gggcacgtct gcctgggcgt cacgtatccc 60
gtcgcacccc ccaacccgtc ccaacgcggg cacgatggct ggtgggagcg gatattggcc 120
tcccgtgtac tcgcgtcgcg gttggtctaa aatcgagccc cgagcgacga acgtcacg 178
<210> 222
<211> 178
<212> DNA
<213> 细叶芍药(Paeonia tenuifolia)
<400> 222
cgcaagttgc gcccaaagcc tttaggctga gggcacgtct gcctgggcgt cacgtatccc 60
gtcgcacccc ccaacccgtc ccaactcggg aatgatggct ggtgggagcg gatattggcc 120
tcccgtgtac tcgcgttacg gttggtctaa aatcgagccc cgagcgacga acgtcacg 178
<210> 223
<211> 178
<212> DNA
<213> 荷兰芍药(Paeonia officinalis subsp. microcarpa)
<400> 223
cgcaagttgc gcccaaagcc tttaggctga gggcacgtct gcctgggcgt cacgtatccc 60
gtcgcacccc caaccccgtc ccaactcggg aatgatggct ggtgggagcg gatattggcc 120
tcccgtgtac tcgcgttacg gttggtctaa aatcgagccc cgagcgacga acgtcacg 178
<210> 224
<211> 178
<212> DNA
<213> 大叶芍药(Paeonia rhodia)
<400> 224
cgcaagttgc gcccaaagcc tttaggctga gggcacgtct gcctgggcgt cacgtatccc 60
gtcgcacccc ccaacccgty ccaacgcggg cacgatggct ggtgggagcg gatattggcc 120
tcccgtgtac tcgcgtcacg gttggtctaa aatcgagccc cgagcgacga acgtcacg 178
<210> 225
<211> 178
<212> DNA
<213> 新疆芍药(Paeonia sinjiangensis)
<400> 225
cgcaagttgc gcccaaagcc tttaggctga gggcacgtct gcctgggcgt cacgtatccc 60
gtcgcacccc ccaacccgtc ccaactcggg catgatggct ggtgggagcg gatattggcc 120
tcccgtgtac tcgcgttacg gttggtctaa aattgagccc cgagcgacga acgtcacg 178
<210> 226
<211> 178
<212> DNA
<213> 超群芍药(Paeonia broteri)
<400> 226
cgcaagttgc gcccaaagcc tttaggctga gggcacgtct gcctgggcgt cacgtatccc 60
gtcgcacccc ccaacccgtc ccaacgcggg cacgatggct ggtgggagcg gatattggcc 120
tcccgtgtac tcgcgtcacg gttggtctaa aatcgagccc cgagcgacga acgtcacg 178
<210> 227
<211> 178
<212> DNA
<213> 羊角芍药(Paeonia arietina)
<400> 227
cgcaagttgc gcccaaagcc tttaggctga gggcacgtct gcctgggcgt cacgtatccc 60
gtcgcacccc ccaacccgtc ccaactcggg aatgatggct ggtgggagcg gatattggcc 120
tcccgtgtac tcgcgttacg gttggtctaa aatcgagccc cgagcgacga acgtcacg 178
<210> 228
<211> 178
<212> DNA
<213> 巴纳特芍药(Paeonia banatica)
<400> 228
cgcaagttgc gcccaaagcc tttaggctga gggcacgtct gcctgggcgt cacgtatccc 60
gtcgcacccc ccaacccgtc ccaackcggg maygatggct ggtgggagcg gatattggcc 120
tcccgtgtac tcgcgtyayg gttggtctaa aatcgagccc cgagcgacga acgtcacg 178
<210> 229
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 229
gtaaatccga gagcacacc 19
<210> 230
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 230
caagggttca gaaagcgag 19
<210> 231
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 231
aataaggatt cgagtcgtg 19
<210> 232
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工的(Artificial)
<220>
<223> 引物
<400> 232
cacagtgcat atcattactc 20
<210> 233
<211> 123
<212> DNA
<213> 芍药(Paeonia lactiflra)
<400> 233
accagcgaac ttgtaaaaat gctcgggatg acggaaggcg tgagcctttc cttcatccca 60
tgtccggtcg cgccagacgt tgagtctccc ctcgcacgat gtgcagggaa gcgccaaggt 120
tct 123
<210> 234
<211> 153
<212> DNA
<213> 柳叶木兰(Magnolia salicifolia)
<400> 234
aatcaaaaaa ggataggtgc agagactcaa tggaagctgt tctaacaaat ggagttgact 60
gcattggtag aggaatcgaa tccttctatc gaaactacag aaaagatgac cctgtataca 120
tacgtataca tactgaaata tcaaataatt aat 153
<210> 235
<211> 157
<212> DNA
<213> 皱叶木兰(Magnolia kobus)
<400> 235
aatcaaaaaa aaaaggatag gtgcagagac tcaatggaag ctgttctaac aaatggagtt 60
gactgcattg gtagaggaat cgaatccttc tatcgaaact acagaaaaga tgaccctgta 120
tacatacgta tacatactga aatatcaaat aattaat 157
<210> 236
<211> 153
<212> DNA
<213> 武当木兰(Magnolia sprengeri)
<400> 236
aatcaaaaaa ggataggtgc agagactcaa tggaagctgt tctaacaaat ggagttgact 60
gcattggtag aggaatcgaa tccttctatc gaaactacag aaaagatgac cctgtataca 120
tacgtataca tactgaaata tcaaataatt aat 153
<210> 237
<211> 153
<212> DNA
<213> 玉兰(Magnolia denudata)
<400> 237
aatcaaaaaa ggataggtgc agagactcaa tggaagctgt tctaacaaat ggagttgact 60
gcattggtag aggaatcgaa tccttctatc gaaactacag aaaagatgac cctgtataca 120
tacgtataca tactgaaata tcaaataatt aat 153
<210> 238
<211> 157
<212> DNA
<213> 望春花(Magnolia biondii)
<400> 238
aatcaaaaaa aaaaggatag gtgcagagac tcaatggaag ctgttctaac aaatggagtt 60
gactgcattg gtagaggaat cgaatccttc tatcgaaact acagaaaaga tgaccctgta 120
tacatacgta tacatactga aatatcaaat aattaat 157
<210> 239
<211> 119
<212> DNA
<213> 柳叶木兰(Magnolia salicifolia)
<400> 239
ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt ccaggaccta gggaagattt 60
tggaatgcaa tttgagtccc tttaattgac atagacccaa gtcctctagt aggatgacg 119
<210> 240
<211> 119
<212> DNA
<213> 武当木兰(Magnolia sprengeri)
<400> 240
ttacacttac aaagccttct ttttgaagat ccaagaaatt ccaggaccta ggtaagattt 60
tggaatgcaa tttgagtccc tttaattgac atagacccaa gtcctctagt aggatgacg 119
<210> 241
<211> 104
<212> DNA
<213> 皱叶木兰(Magnolia kobus)
<400> 241
ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt ccaggaccta gggaagattt 60
tggaatgcaa tttgagtccc tttaattgac atagacccaa gtcc 104
<210> 242
<211> 119
<212> DNA
<213> 玉兰(Magnolia denudata)
<400> 242
ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt ccaggaccta ggtaagattt 60
tggaatgcaa tttgagtccc tttaattgac atagacccaa gtcctctagt aggatgacg 119
<210> 243
<211> 119
<212> DNA
<213> 望春花(Magnolia biondii)
<400> 243
ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt ccaggaccta gggaagattt 60
tggaatgcaa tttgagtccc tttaattgac atagacccga gtcctctagt aggatgacg 119
<210> 244
<211> 164
<212> DNA
<213> 芍药(Paeonia lactiflra)
<400> 244
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcggga tgacggaagg 60
cgtgagcctt tccttcatcc catgtccggt cgcgccagac gttgagtctc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccaag gttctggtgt gctctcggat ttac 164
<210> 245
<211> 164
<212> DNA
<213> 牡丹(Paeonia suffruticsa)
<400> 245
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcgggc tgagggaagg 60
cgtgagcctc tccttcatcc cacgtccgat cgcaccagac gttgagtcgc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccaag gttctggtgt gctctcggat ttac 164
<210> 246
<211> 164
<212> DNA
<213> 川赤芍(Paeonia veitchii)
<400> 246
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcggga tgacggaagg 60
cgtgagcctc tcctccatcc catgtccggt cgcgccagac gttgagtctc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccaag gttctggtgt gctctcggat ttac 164
<210> 247
<211> 164
<212> DNA
<213> 大叶芍药(Paeonia rhodia)
<400> 247
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcgggr tgacggaagg 60
cgtgagcctc tccttcatcc catgtccggt cgcgccagac gttgagtckc ccctmgcacg 120
atgtgcaggg amgcgycaws gttctggtgt gctctcggat ttac 164
<210> 248
<211> 164
<212> DNA
<213> 超群芍药(Paeonia broteri)
<400> 248
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcgggm tgacggaagg 60
cgtgagcctc tccttcatcc catgtccgrt ygcgccagac gttgagtckc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg ahgcgycaas gttctggtgt gctctcggat ttac 164
<210> 249
<211> 164
<212> DNA
<213> 细叶芍药(Paeonia tenuifli)
<400> 249
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcggga tgacggaagg 60
cgtgagcctc tccttcatcc catgtccggt cgcgccatac gttgagtcgc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccatt gttctggtgt gctctcggat ttac 164
<210> 250
<211> 164
<212> DNA
<213> 窄叶芍药(Paeonia anomala)
<400> 250
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcggga tgacggaagg 60
cgtgagcctc tccttcatcc crtgtccggt cgcgccagac gttgagtcgc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccaag gttctggtgt gctctcggat ttac 164
<210> 251
<211> 164
<212> DNA
<213> 荷兰芍药(Paeonia officinalis subsp. micrcarpa)
<400> 251
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcggga tgacggaagg 60
cgtgagcctc tccttcatcc catgtccggt cgcgccatac gttgagtcgc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccatt gttctggtgt gctctcggat ttac 164
<210> 252
<211> 164
<212> DNA
<213> 羊角芍药(Paeonia arietina)
<400> 252
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcggga tgacggaagg 60
cgtgagcctc tccttcatcc catgtccggt cgcgccatac gttgagtcgc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccatt gttctggtgt gctctcggat ttac 164
<210> 253
<211> 164
<212> DNA
<213> 巴纳特芍药(Paeonia banatica)
<400> 253
gtcgaacctg cctagcagaa cgaccagcga acttgtaaaa atgctcgggr tgacggaagg 60
cgtgagcctc tccttcatcc catgtccggt cgcgccakac gttgagtcgc ccctcgcacg 120
atgtgcaggg aagcgccawk gttctggtgt gctctcggat ttac 164
<210> 254
<211> 183
<212> DNA
<213> 半夏(Pinellia ternata)
<400> 254
gcacgcctgc ctgggcgtca cgccccacgt cgctccccag tccccccacg caccgcggca 60
cccgtgcgcg cgtggaggga cgggggatgc ggagattggc ccaccgtgca ctcgcgcggc 120
gggctcaaga gctcggccct cccgccgggc gagcaaacgg cgagtggtgg acgacgctca 180
tcg 183
<210> 255
<211> 183
<212> DNA
<213> 鹞落坪半夏(Pinellia yaoluopingensis)
<400> 255
gcacgcctgc ctgggcgtca cgccccacgt cgctccccag tccccccacg cactgcggca 60
cccgtgcgcg cgtggaggga cgggggatgc ggagattggc ccatcgtgca ctcgcgcggc 120
gggctcaaga gctcggccct cccgccgggc gagcaaacgg cgagtggtgg acgacgctca 180
tcg 183
<210> 256
<211> 184
<212> DNA
<213> 虎掌(Pinellia pedatisecta)
<400> 256
gcacgcctgc ctgggcgtca cgccccgcgt cgctcccccg tccacccccc cacaccgccg 60
cgcgcgcgtg ctcgtggggg acgagggatg cggagattgg cccaccgtgc actcgcacgg 120
cgggctcaag agctcggccc tcccgccggg cgagcaaacg gcgagtggtg gacgacgctc 180
atcg 184
<210> 257
<211> 182
<212> DNA
<213> 三裂叶半夏(Pinellia tripartita)
<400> 257
gcacgcctgc ctgggcgtca cgccccgcgt cgctcccccg ccccacccgc accgcggcac 60
ccgtgcgtgc ggggggggac gagggatgcg gagattggcc caccgtgcac tcgcgcggcg 120
ggctcaagag ctcggccctc ccgccgggct agccaacggc gagtggtgga cgacgctcat 180
cg 182
<210> 258
<211> 170
<212> DNA
<213> 一把伞南星(Arisaema erubescens)
<400> 258
gcacgcctgc ctgggcgtca cgccccgcgt cgctccctga cccccccgcc tcacaaagtg 60
tgcgggggtg aggaatgcgg agattggccc accgtgcacg tgcgcggcag gctgaagaac 120
tcggccctcc tgccgggcga ttaacggcga gtggtggacg acgctcatcg 170
<210> 259
<211> 163
<212> DNA
<213> 天南星(Arisaema heterophyllum)
<400> 259
gcacgcctgc ctgggcgtca cgccccacgt cgctccctga ccccccccac aaagtgcggg 60
gtgaggggtg cggagattgg cccatcgtgc acgtgcgcgg taggctgaag aactcggccc 120
tcctgctggg cgattaacgg tgagtggtgg acgacgctca tcg 163
<210> 260
<211> 164
<212> DNA
<213> 东北南星(Arisaema amurense)
<400> 260
gcacgcctgc ctgggcgtca cgccccgcgt cgctccctga ccccccacag agtgtggtgg 60
ggtgagggat gcggagattg gcccaccgtg cacgtgcgcg gcaggctgaa gaactcagcc 120
ctccygtcgg gcgattaacg gcgagtggtg gacgacgctc atcg 164
<210> 261
<211> 162
<212> DNA
<213> 象南星(Arisaema elephas)
<400> 261
gcacgcctgc ctgggcgtca cgcccctcgt cgctctttga cccccacaga gtgtggggtg 60
agggatgcgg agattggccc accgtgcatg tgcgcggcag gctgaagaac tcggccctcc 120
tgtcgggcga ttataacggc gagtggtgga cgacgctcat cg 162
<210> 262
<211> 166
<212> DNA
<213> 狭叶南星(Arisaema angustatum)
<400> 262
gcacgcctgc ctgggcgtca cgccctacgt cgctccctga ccccccccat agagtgtgag 60
gtgttgaggg atgcggagat tggcccaccg tgcacgtgcg tggcaggttg aagaactcga 120
ccctcctgcc gggcgattaa cggtgagtgg tggacgacgc tcatcg 166
<210> 263
<211> 161
<212> DNA
<213> 双耳南星(Arisaema wattii)
<400> 263
gcacgcctgc ctgggcgtca cgccccgcgt cgctccctga ccccccacag agtgtggggt 60
gagggatgcg gagattggcc caccgtgcac gtgcgcggca ggctgaagaa ctcggccctc 120
ctgccgggcg atcaacggcg agtggtggac gacgctcatc g 161
<210> 264
<211> 147
<212> DNA
<213> 肉桂(Cinnamomum cassia)
<400> 264
accggcgaac cagtcccgcg agaacacgcc gctcgcggcg cgcggcccgg gggacgaccc 60
ggggacgcgc gtcccgtcga gctgcgaaca acaaccctct gggcgcggag agcgccaagg 120
aatcgaagcg gaaagggcgg ccgcctc 147
<210> 265
<211> 149
<212> DNA
<213> Cinnamomum sieboldii
<400> 265
accggcgaac cagtcccgcg agaacacgtc gctcgcggcg cgcggcccgg gggactatgc 60
ccggggacgc gcgtcccgtc gagctccgaa caacaaccct ctgggcgcgg cgagcgccaa 120
ggaatcgaag cggaaagggc ggccgcctc 149
<210> 266
<211> 150
<212> DNA
<213> 阴香(Cinnamomum burmanii)
<400> 266
accggcgaac cagtcccgcg agaacgcgtc gctcgcggcg cgcggccccg ggggactatg 60
cccggggacg cgcgtcccgt cgagctccga acaacaaccc tctgggcgcg gcgagcgcca 120
aggaatcgaa gcggaaaggg cggccgcctc 150
<210> 267
<211> 149
<212> DNA
<213> 网脉桂(Cinnamomum reticulatum)
<400> 267
accggcgaac cagtcccgcg agaacacgtc gctcgcggcg cgcggcccgg gggacgaccc 60
ggggacgcgc gtcccgtcga gctccaaacg acaaccctct gggcgcggcg agcgccaagg 120
aatatcgaag cggaaagggc ggccgcctc 149
<210> 268
<211> 149
<212> DNA
<213> Cinnamomum insularimontanum
<400> 268
accggcgaac cagtcccgcg agaacacgtc gctcgcggcg cgcggcccgg gggacgaccc 60
ggggacgcgc gtcccgtcga gctccaaacg acaaccctct gggcgcggcg agcgccaagg 120
aatatcgaag cggaaagggc ggccgcctc 149
<210> 269
<211> 149
<212> DNA
<213> 天竺桂(Cinnamomum japonicum)
<400> 269
accggcgaac cagtcccgcg agaacacgtc gctcgcggcg cgcggcccgg gggacgaccc 60
ggggacgcgc gtcccgtcga gctccagacg acaaccctct gggcgcggcg agcgccaagg 120
aatatcgaag cggaaagggc ggccgcctc 149
<210> 270
<211> 136
<212> DNA
<213> 锡兰肉桂(Cinnamomum zeylanicum)
<400> 270
accggcgaac cagtcccgcg agaaggacgc tcgcggcgcg cggcccgtgg gacgtgcgtc 60
cggacgagct ccgaacaaca aaaccctccg ggcgcggcga gcgccaagga atcgaagcgg 120
aaagggcggc cgcctc 136
<210> 271
<211> 302
<212> DNA
<213> 东当归(Angelica acutiloba)
<400> 271
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtttccgta ggtgaacctg cggaaggatc attgtcgaat 60
cctgcaatag cagaatgacc cgctaacacg tcaacatttt gggcgagcgt cggggggcct 120
cggtctcctg tctgcgaatc cctggtaggt ggccactccc gggtggccac tggcctgcaa 180
aatcattcgg gcgcggaatg cgccaaggac cttaaaactg aattgtacgt ccgtatcccg 240
ttagcgggca ccggcgtcat tccaaaacac aacgactctc gacaacggat atctcggctc 300
tc 302
<210> 272
<211> 301
<212> DNA
<213> 当归(Angelica sinensis)
<400> 272
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtttccgta ggtgaacctg cggaaggatc attgtcgaat 60
cctgcgatag cagaacgacc cgctaacatg taaacatatt gggcaagtgt tcgggggctt 120
tggtcccttg tatgcgaacc ctggtaggtg gcccctctcg ggtggccact ggcctgcgaa 180
atcattcggg cgcggaatgc gccaaggaac ttaaaattga attgtacgtc ggcatcccgt 240
tagcgggcat cgacgtcatt ccaaaacaca acgactctcg acaacggata tctcggctct 300
c 301
<210> 273
<211> 302
<212> DNA
<213> 杭白芷(Angelica dahurica var. formosana)
<400> 273
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtttccgta ggtgaacctg cggaaggatc attgtcgaat 60
cctgcaatag cagaatgacc cgctaacacg ttaacaattt gggcgagcgt cggggggcct 120
cggtctcctg tctgcgaatc cctggtaggt ggccactccc gggtggccac tggcctgcaa 180
aatcattcgg gcgcggaatg cgccaaggac cttaaaactg aattgtacgt ccgtatcccg 240
ttagcgggca tcggcgtcat tccaaaacac aacgactctc gacaacggat atctcggctc 300
tc 302
<210> 274
<211> 270
<212> DNA
<213> 重齿毛当归(Angelica pubescens)
<400> 274
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtcgaatcc tgcaatagca gaatgacccg ctaacacgtt 60
aacaatttgg gcgagcgtcg gggggcctcg gtctcctgtc tgcgaatccc tggtaggtgg 120
ccactcccgg gtggccactg gcctgcaaaa tcattcgggc gcggaatgcg ccaaggacct 180
taaaactgaa ttgtacgtcc gtatcccgtt agcgggcatc ggcgtcattc caaaacacaa 240
cgactctcga caacggatat ctcggctctc 270
<210> 275
<211> 302
<212> DNA
<213> 朝鲜当归(Angelica gigas)
<400> 275
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtttccgta ggtgaacctg cggaaggatc attgtcgaat 60
cctgcaatag caaaatgacc cgctaacacg ttaacaattt gggcgagcgt cggggggcct 120
cggtctcctg tctgcgaatc cctggtaggt ggccactctc gggtggccac tggcctgcaa 180
aatcattcgg gcgcggaatg cgccaaggac cttaaaactg aattgtacgt ccgtatcccg 240
ttagcgggca ccggcgtcat tccaaaatac aacgactctc gacaacggat atctcggctc 300
tc 302
<210> 276
<211> 270
<212> DNA
<213> Perissocoeleum barclayae
<400> 276
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtcgaatcc tgcaatagca gaatgacccg ctaacacgtc 60
aacaatttgg gcaagcgtcg gggggcctcg gtctcctgtc tgcgaatccc tggtaggtgg 120
ccactcccgg gtggccactg gcctgcaaaa tcattcgggc gcggaatgcg ccaaggacct 180
taaaaccgaa ttgtacgtcc gtatcccgtt agcgggcacc ggcgtcattc caaaacacaa 240
cgactctcga caacggatat ctcggctctc 270
<210> 277
<211> 270
<212> DNA
<213> Niphogeton josei
<400> 277
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtcgaatcc tgcaatagca gaatgacccg ctaacacgtc 60
aacaatttgg gcaagcgtcg gggggcctcg gtctcctgtc tgcgaatccc tggtaggtgg 120
ccactcccgg gtggccactg gcctgcaaaa tcattcgggc gcggaatgcg ccaaggacct 180
taaaactgaa ttgtacgtcc gtatcccgtt agcgggcacc ggcgtcattc caaaacacaa 240
cgactctcga caacggatat ctcggctctc 270
<210> 278
<211> 322
<212> DNA
<213> 东当归(Angelica acutiloba)
<400> 278
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccactag gctgagggca cgcctgcctg 120
ggtgtcacgc atcgtcttgc ccacaaacca ctcacacctg agaagttgtg ccggtttggg 180
gcggaaactg gcctcccgta ccttgtcgtg cggttggcgg aaaaacgagt ctccggcgac 240
ggacgtcgcg acatcggtgg ttgtaaaaga ccctcttgtc ttgtcgtgcg aatcctcgtc 300
atcttagcga gctccaggac cc 322
<210> 279
<211> 324
<212> DNA
<213> 当归(Angelica sinensis)
<400> 279
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccattag gctgagggca cgtctgcctg 120
ggtgtcacgc atcatctttg cccacaacca ctcactcctc gtggagctgt actggtatgg 180
gggcggaaat tggcctcccg tgccttgttg tgcggttggc gcaaaagtga gtctccggcg 240
acggacgtcg tgacattggt ggttgtaaaa taccctcatg tcttgtcgcg cgaatccgcg 300
tcatcttagc gagctccagg accc 324
<210> 280
<211> 322
<212> DNA
<213> 杭白芷(Angelica dahurica var. formosana)
<400> 280
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccactag gctgagggca cgcctgcctg 120
ggtgtcacgc atcgtattgc ccacaaacca ctcacacctg agaagttgtg ccggtttggg 180
gcggaaattc gcctcccgta ccttgtcgtg cggttggcgg aaaaacgagt ctccggcgac 240
ggacgtcgcg acatcggtgg ttgtgaaaga ccctcttgtc ttgtcgcgcg aatcctcgtc 300
atcttagcga gctccaggac cc 322
<210> 281
<211> 322
<212> DNA
<213> 重齿毛当归(Angelica pubescens)
<400> 281
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccactag gctgagggca cgcctgcctg 120
ggtgtcacgc atcgtattgc ccacaaacca ctcacacctg agaagttgtg ccggtttggg 180
gcggaaattc gcctcccgta ccttgtcgtg cggttggcgg aaaaacgagt ctccggcgac 240
ggacgtcgcg acatcggtgg ttgtgaaaga ccctcttgtc ttgtcgcgcg aatcctcgtc 300
atcttagcga gctccaggac cc 322
<210> 282
<211> 322
<212> DNA
<213> 朝鲜当归(Angelica gigas)
<400> 282
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccactag gctgagggca cgcctgcctg 120
ggtgtcacgc atcgtattgc ccacagacca ctcacacctg agaagttgtg ccggtttggg 180
gcgcaaattg gcctcccgta ccttgtcgtg cggttggcgg aaaaacgagt ctccggcgac 240
ggacgtcgcg acatcggtgg ttgtgaaaga ccctcttgtc ttgtcgcgcg aatcctcgtc 300
atcttagcga gctccaggac cc 322
<210> 283
<211> 322
<212> DNA
<213> Perissocoeleum barclayae
<400> 283
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccactag gctgagggca cgcctgcctg 120
ggtgtcacgc atcgtcttgc ccacaaacca ctcacacctg agaagttgtg ccggtttggg 180
gcggaaactg gcctcccgta ccttgtcgtg cggttggcgg aaaaacgagt ctccggcgac 240
ggacgtcgcg acatcggtgg ttgtaaaata ccctcttgtc ttgtcgcgca aatcctcgtc 300
atcttagcga gctccaggac cc 322
<210> 284
<211> 322
<212> DNA
<213> Niphogeton josei
<400> 284
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccactag gctgagggca cgcctgcctg 120
ggtgtcacgc atcgtcttgc ccacaaacca cccacacctg agaagttgtg ccggtttggg 180
gcggaaactg gcctcccgta ccttgtcgtg cggttggcgg aaaaacgagt ctccggcgac 240
ggacgtcgcg acatcggtgg ttgtaaaaga ccctcttgtc ttgtcgcgca aatcctcgtc 300
atcttagcga gctccaggac cc 322
<210> 285
<211> 304
<212> DNA
<213> 茅苍术(Atractylodes lancea)
<400> 285
cattgtcgaa gcctgcacag cagaacgacc cgcgaacatg taatggcaac cgggcgtcgg 60
ggggaacggg cgcaagcccg ggacctgcgg cgctccgtcg gcgagcgtcc gtggcgtccc 120
tatcggggcc ttgcgggcgt ttcgtcggca cataaacaaa ccccggcaca acacgtgcca 180
aggaaaacaa aacttaagaa aggcgcttct cgtgtcgccc cgttcgcggt gcgggcatgg 240
gtcgtggcct ctctggaaac acaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcacgcatc 300
gatg 304
<210> 286
<211> 304
<212> DNA
<213> 北苍术(Atractylodes chinensis)
<400> 286
cattgtcgaa gcctgcacag cagaacgacc cgcgaacatg taatgacaac cgggcgtcgg 60
ggggaacggg cgcaagcctg ggacctgcgg cactccgtcg gcaagcgtcc gtggcgtccc 120
tattggggcc ttgcgggcgt ttcgtcggca cgtaaacaaa ccccggcaca acacgtgcca 180
aggaaaacaa aacttacgaa aggcgcttct cgtgtcgccc cgttcgcggt gcgcgcatgg 240
gtcgtggcct ctccggaaac acaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcacgcatc 300
gatg 304
<210> 287
<211> 304
<212> DNA
<213> 茅苍术与北苍术杂交(A.lancea x A. chinensis)
<400> 287
cattgtcgaa gcctgcacag cagaacgacc cgcgaacatg taatgrcaac cgggcgtcgg 60
ggggaacggg cgcaagccyg ggacctgcgg crctccgtcg gcragcgtcc gtggcgtccc 120
tatyggggcc ttgcgggcgt ttcgtcggca crtaaacaaa ccccggcaca acacgtgcca 180
aggaaaacaa aacttamgaa aggcgcttct cgtgtcgccc cgttcgcggt gcgsgcatgg 240
gtcgtggcct ctcyggaaac acaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcacgcatc 300
gatg 304
<210> 288
<211> 304
<212> DNA
<213> 关苍术(Atractylodes japonica)
<400> 288
cattgtcgaa gcctgcacag cagaacgacc cgcgaacatg taatgacaac cgggcgtcgg 60
ggggaacggg cgcaagcccg ggacctgcgg cgctccgtcg gcgagcgtcc gtggcatccc 120
tatcggggcc ttgcgggcgt ttcgtcggca cataaacaaa ccccggcaca acacgtgcca 180
aggaaaacaa aacttaagaa aggcgcttct cgtgtcgccc cgttcgcggt gcgcgcatgg 240
gtcgtggcct ctctggaaac acaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcacgcatc 300
gatg 304
<210> 289
<211> 304
<212> DNA
<213> 关苍术(Atractylodes japonica)
<400> 289
cattgtcgaa gcctgcacag cagaacgacc cgcgaacatg taatgacaac cgggcrtcgg 60
ggggaacggg cgcaagcccg ggacctgcgg cgctycgtcg gcgagcgtmy gtggcrtccy 120
tatyggggcc ttgcgggcgt ttcgtcggca crtaaacaaa ccccggcaca acacgtgcca 180
aggaaaacaa aacttaagaa agrcgcttcw cgtgtcgccc cgttcgcggt gygcgcatgg 240
gtcgtggcct ctctggaaac acaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcacgcatc 300
gatg 304
<210> 290
<211> 304
<212> DNA
<213> 白术(Atractylodes macrocephala)
<400> 290
cattgtcgaa gcctgcacag cagaacgacc cgcgaacatg taacgacaac cgggcatcgg 60
ggggaacggg cgcaagcccg ggacctgcgg cgctccgtcg gcgagcgtcc gtggcgcacc 120
tatcggggcc tcgcgggcgt ttcgtcggca cgtaaacaaa ccccggcaca acacgtgcca 180
aggaaaacaa aacttaagaa gggcgcttct cgtgtcgccc cgttcgcggt gcgcgcatgg 240
gtcgtggcct ctctggaaac acaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcacgcatc 300
gatg 304
<210> 291
<211> 304
<212> DNA
<213> 白术(Atractylodes macrocephala)
<400> 291
cattgtcgaa gcctgcacag cagaacgacc cgcgaacatg taacgacaac cgggcatcgg 60
ggggaacggg cgcaagcccg ggacctgcgg cgctcagtcg gcgagcgtcc gtggcgcacc 120
tatcggggcc tcgcgggcgt ttcgccggca cgtaaacaaa ccccggcaca acacgtgcca 180
aggaaaacaa aacttaagaa gggcgcttct cgtgtcgccc cgttcgcggt gcgcgcatgg 240
gtcgtggcct ctctggaaac acaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcacgcatc 300
gatg 304
<210> 292
<211> 334
<212> DNA
<213> 三岛柴胡(Bupleurum falcatum)
<400> 292
ctgaatcgaa gagcgacccg agaacatgtt ttaagacggg gccagcggtc gtcggcctcg 60
gcctgacggc tgcgaaccct aggccggggg gcgcctagtt gtgcccgccg gcccaaaacc 120
taaccgggcg cggaatgcgc caaggaaacc gaaactgaac aggatgtctc cgccccgttt 180
ggggggggtc gacatccttc tgagaaacaa acgactctcg gcaacggata tcccggctct 240
cgcatcgatg aagaacgtag cgaaatgcga tacttggtgt gaattgcaga atcccgtgaa 300
ccatcgagtt tttgaacgca agttgcgccc gatg 334
<210> 293
<211> 334
<212> DNA
<213> 狭叶柴胡(Bupleurum scorzonerifolium)
<400> 293
ctgaatcgaa gagcgacccg agaacatgtt ttaagacggg gccagctgtc gtcggcctcg 60
gcctgacgtc tgcgaaccct aggccggggg gcgcctagtt gtgcccgccg gcccaaaacc 120
taaccgggcg cggaatgcgc caaggaaacc gaaactgaac aggatgtctc cgccccgttt 180
gaggggggtc gacatccttc tgagaaacaa acgactctcg gcaacggata tcccggctct 240
cgcatcgatg aagaacgtag cgaaatgcga tacttggtgt gaattgcaga atcccgtgaa 300
ccatcgagtt tttgaacgca agttgcgccc gatg 334
<210> 294
<211> 335
<212> DNA
<213> 三岛柴胡(Bupleurum falcatum)
<400> 294
ctgaatcgaa gagcgacccg agaacttgtt ttaagacggg gccagcggtc gtcggcctcg 60
gcccgacggc tgcgaaccct aggccggggg gcgcccagtt gtgcccgccg gcccaaaacc 120
taaccgggcg cggaatgcgc caaggaaacc gaaactgaac aggatgcctc cgccccgttt 180
gggggggggt cgacatcctt ctgagaaaca aacgactctc ggcaacggat atcccggctc 240
tcgcatcgat gaagaacgta gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga 300
accatcgagt ttttgaacgc aagttgcgcc cgatg 335
<210> 295
<211> 332
<212> DNA
<213> 北柴胡(Bupleurum chinense)
<400> 295
ctgaatcgaa gagcgacccg agaacatgtt ttaagacggg gccagcggtc gtcggcctcg 60
gcccgacggc tgcgaaccct aggccggggg gcgcccagtt gtgcccgccg gcccaaaacc 120
taaccgggcg cggaatgcgc caaggaaacc gaaactgaac aggatgcctc cgccccgttt 180
ggggggtcga catccttctg agaaacaaac gactctcggc aacggatatc ccggctctcg 240
catcgatgaa gaacgtagcg aaatgcgata cttggtgtga attgcagaat cccgtgaacc 300
atcgagtttt tgaacgcaag ttgcgcccga tg 332
<210> 296
<211> 335
<212> DNA
<213> Bupleurum ranunculoides
<400> 296
ctgaatcgaa gagcgacccg agaacatgtt ttaagacggg gccagcggtc gtcggcctcg 60
gcctgacggc tgcgaaccct aggccggggg gcgcctagtt gtgcccgccg gcccaaaacc 120
taaccgggcg cggaatgcgc caaggaaacc gaaactgaac aggatgtctc cgccccgttt 180
gaggggcggt cgacatcctt ctgagaaaca aacgactctc ggcaacggat atcccggctc 240
tcgcatcgat gaagaacgta gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga 300
accatcgagt ttttgaacgc aagttgcgcc cgatg 335
<210> 297
<211> 335
<212> DNA
<213> 锥叶柴胡(Bupleurum bicaule)
<400> 297
ctgaatcgaa gagcgacccg agaacatgtt ttaagacggg gccagcggtc gtcggcctcg 60
gcctgacggc tgcgaaccct aggccggggg gcgcctagtt gtgcccgccg gcccaaaacc 120
taaccgggcg cggaatgcgc caaggaaatc gaaactgaac aggatgtctc cgccccgttt 180
gacggggggt cgacatcctt ctgagaaaca aacgactctc ggcaacggat atcccggctc 240
tcgcatcgat gaagaacgta gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga 300
accatcgagt ttttgaacgc aagttgcgcc cgatg 335
<210> 298
<211> 335
<212> DNA
<213> 黑柴胡(Bupleurum smithii)
<400> 298
ctgaatcgaa gagcgacccg agaacatgtt ttaagacggg gccagcggtc gtcggcctcg 60
gcctgacggc tgcgaaccct aggccggggg gcgcctagtt gtgcccgccg gcccaaaacc 120
taaccgggcg cggaatgcgc caaggaaacc gaaactgaac aggatgtctc cgccccgttt 180
gagggggggt cgacatcctt caaagaaaca aacgactctc ggcaacggat atcccggctc 240
tcgcatcgat gaagaacgta gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga 300
accatcgagt ttttgaacgc aagttgcgcc cgatg 335
<210> 299
<211> 136
<212> DNA
<213> 天门冬(Aspagragus cochinchinensis)
<400> 299
ctgggcgtca tgcctcacat cgctccgtgc ccccccgcct cccacagcca tagcattggg 60
aagcggcggc gcggatgcgg agattgacct cccgtgcctt gcggcgcggc gggttgaaat 120
gatggtcgct ggccgg 136
<210> 300
<211> 136
<212> DNA
<213> 天门冬(Aspagragus cochinchinensis)
<400> 300
ctgggcgtca tgcctcacat cgctccgtgc ccccccgcct cccacggcca tagcattggg 60
aagcggcggc gcggatgcgg atattgaccc cccgtgcctt gcggcgcggc gggttgaaat 120
gatggtcgct ggccgg 136
<210> 301
<211> 136
<212> DNA
<213> 密齿天门冬(Aspagragus meioclados)
<400> 301
ctgggcgtca tgcctcacat cgctccgtgc ccccccgcct cccacggcca tagcattggg 60
aagcggcggc gcggatgcgg agattgacct cccgtgcctt gcggcgcggc gggttgaaat 120
gatggtcgct ggccgg 136
<210> 302
<211> 135
<212> DNA
<213> 短梗天门冬(Asparagus lycopodineus)
<400> 302
ctgggcgtca tgcctcacat cgctccgtgc cccccgcatc ccacggccat agcattggga 60
agcggcggcg cggatgcgga gattgacctc ccgtgccttg cggcgcggcg ggttgaaatg 120
atggtcgctg gccgg 135
<210> 303
<211> 135
<212> DNA
<213> 石刁柏(Asparagus officinalis)
<400> 303
ctgggcgtca tgcctcacat cgctcagtgc cccccgcctc ccaaggccat agcattggga 60
agcggcggcg cggatgcgga gattgacctc ccgtgccttg cggcgcggcg ggttgaaatg 120
atggtcgctg gccgg 135
<210> 304
<211> 135
<212> DNA
<213> 总序天冬(Asparagus racemosus)
<400> 304
ctgggcgtca tgcctcacat cgctcggtgc cccccacctc ccactgccat agcaccggga 60
agcggcggcg cggatgcgga gattgacctc ccgtgccttg cggcgcggcg ggttgaaatg 120
atggtcgctg gccgg 135
<210> 305
<211> 135
<212> DNA
<213> 雉隐天冬(Asparagus schoberioides)
<400> 305
ctgggcgtca tgcctcacat cgctccgttc cccccgcccc ccacggctat agcattggga 60
ggcgacggcg cggatgcgga gattgacctc ccgtgccttg cggcgcggcg ggttgaaatg 120
atggtcgctg gccgg 135
<210> 306
<211> 189
<212> DNA
<213> 山茱萸(Cornus officinalis)
<400> 306
cctgcacagc agaacgaccc gcgaacgtgt tttttacgac ggcggcgggg cgctctcgcg 60
ggtgccccgg cgccatcagg gtgagcgcgt gccgatccct tcgcgggggg aggcgggcgc 120
tttcccctgc aaaaataacg aaccccggcg cgaaccgcgc caaggaacac gaacgaaaga 180
gcgagcccg 189
<210> 307
<211> 190
<212> DNA
<213> 欧洲山茱萸(Cornus mas)
<400> 307
cctgcacagc agaacgaccc gcgaacgtgt ttttttacga cggcggcggg gtgctctcgc 60
gagtgccccg gcgtcatcag ggtgagcgcg tgccgatccc ctcgcggggg gaggcgggcg 120
ctttcccctg caaaaataac gaaccccggc gcgaaccgcg ccaaggaaca cgaacgaaag 180
agcgagcccg 190
<210> 308
<211> 196
<212> DNA
<213> Cornus eydeana
<400> 308
cctgcacagc agaacgaccc gcgaacatgt ttttacaacg gcggcggggt gctttctttc 60
gcgagcgccc tgccgtcacc gtcagggtga gcgcaggccg atcccttcgc ggggagaggc 120
gggcgctttc ccctgcaaaa aataacgaac cccggcgcga accgcgccaa ggaacacgaa 180
cgaaagagcg agcccg 196
<210> 309
<211> 191
<212> DNA
<213> 川鄂山茱萸(Cornus chinensis)
<400> 309
cctgcacagc agaacgaccc gcgaacgtgt tttcacaacg gcggcggggt gctttcgcga 60
gtgccccggc gtcaccatca gggtgagcgt gcgtcgatcc cttcgcaggg ggaggcgggc 120
gctttcccct gaaaaaataa cgaaccccgg cgcgaaccgc gccaaggaac acgaacgaaa 180
gagcgagccc g 191
<210> 310
<211> 173
<212> DNA
<213> Cornus stracheyi
<400> 310
cctgcacagc agaacgaccc ggaacgtgtt aaaacgacgg cggggcgccc gcgccccgcc 60
atcagggcga gcgcgcgccg atcccctcgc ggggggaggc ggtcgctctc cctgcaaaac 120
aacgaacccc ggcgcgaacc gcgccaagga acatgaacga aagagcgagc ccg 173
<210> 311
<211> 198
<212> DNA
<213> 卷丹(Lilium lancifolium)
<400> 311
gcggaaggat cattgtcgag aatcgattga gagaccgcga acctgtaaac ggatgayacc 60
gtgtcgggca ggcgttatgc ccgcccaact cgggacctcg catcgtgtcc gcggctgcct 120
tagagcgttt cgggcacgat ttgcggggga cgaacgaaac cccggcacgg cctgtgccaa 180
ggaacatatg tcaggacg 198
<210> 312
<211> 198
<212> DNA
<213> 野百合(Lilium brownii)
<400> 312
gcggaaggat cattgtcgag aatcgattga gagaccgcga acctgtaaac ggatgacacc 60
gtgtcggaca ggcgttaagc ctgcccaact cgggacctcg catcgtgtct gcggttgcct 120
tcgagcattt cgggcacgat ttgtggggga cgaacgaaac cccggcacga cctgtgccaa 180
ggaacatatg tcaggacg 198
<210> 313
<211> 198
<212> DNA
<213> 百合(Lilium brownii var. colchesteri)
<400> 313
gcggaaggat cattgtcgag aatcgattga gagaccgcga acctgtaaac ggatgacacc 60
gtgtcgggca ggcgttaagc ccgcccaact cgggacctcg catcgtgtct gcggttgcct 120
tcgagcattt cgggcacgat ttgtggggga cgaacgaaac cccggcacgg cctgtgccaa 180
ggaacatatg tcaggacg 198
<210> 314
<211> 198
<212> DNA
<213> 细叶百合(Lilium pumilum)
<400> 314
gcggaaggat cattgtcgag aatcgattga gagaccgcga acctgtaaac ggatgacacc 60
gtgtcgggca ggctttatgc ccgcccaact cgggacctcg catcgtgtcc gcgcctgcct 120
tcgagcgttt cgggcacgat ttgcggggga cgaacgaaac cccggcacgg cctgtgccaa 180
ggaacatatg tcaggacg 198
<210> 315
<211> 198
<212> DNA
<213> 条叶百合(Lilium callosum)
<400> 315
gcggaaggat cattgtcgag aatcgattga gagaccgcga acctgtaaac ggatgacacc 60
gtgtcgggca ggcgttatgc ccgcccaact cgggacctcg catcgtgtcc gcggctgcct 120
ttgagcgttt cgggcacgat ttgtggggga cgaacgaaac cccggcacgg cctgtgccaa 180
ggaacatatg tcaggacg 198
<210> 316
<211> 198
<212> DNA
<213> 川百合(Lilium davidii)
<400> 316
gcggaaggat cattgtcgag aatcgattga gagaccgcga acctgtaaac ggatgacacc 60
gtgtcgggcg ggtgttatgc ccgcccaact cgggacctcg catcgtgtcc gcggttgcct 120
tcgagcgttt cgggcacgat ttgcggggga cgaacgaaac cccggcacgg cctgtgccaa 180
ggaacatatg tcaggacg 198
<210> 317
<211> 198
<212> DNA
<213> 毛百合(Lilium dauricum)
<400> 317
gcggaaggat cattgtcgag aatcgattga gacaccgcga acctgtaaac ggatgatacc 60
gtgtcgggca ggcgttatgc ccgcccaact cgggacctcg catcgtgtcc gcggctgcct 120
tcgagcgttt cgggcacgat ttggggggga cgaacgaaac cccggcacgg cctgtgccaa 180
ggaacatatg tcaggacg 198
<210> 318
<211> 198
<212> DNA
<213> 朝鲜百合(Lilium amabile)
<400> 318
gcggaaggat cattgtcgag aatcgattga gagaccgcga acctgtaaac ggatgacacc 60
gtgtcgggca ggcattatgc ccgcccaact cgggacctcg catcgtgtcc gcggctgcct 120
ttgagcgttt cgggcacgat ttgtggggga cgaacgaaac cccagcacgg cctgtgccaa 180
ggaacatatg tcaggacg 198
<210> 319
<211> 198
<212> DNA
<213> 紫斑百合(Lilium nepalense)
<400> 319
gcggaaggat cattgtcgag aatcgattga gagaccgcga acctgtaaac ggatgacacc 60
gtgtcgggca ggcgttatgc ccgcccaact cgggacctcg catcgtgtcc gcggctgcct 120
tcgagcgttt cgggcacgat ttgcggggga cgaacgaaac cccggcacgg cctgtgccaa 180
ggaacatatg tcaggacg 198
<210> 320
<211> 198
<212> DNA
<213> Lilium sachalinense
<220>
<221> misc_feature
<222> (122)..(122)
<223> n是a、c、g或t
<400> 320
gcggaaggat cattgtcgag aatcgattga gagaccgcga acctgtaaac ggatgatacc 60
gtgtcgggca ggcgttatgc ccgcccaact cgggacctcg catcgtgtcc gcggctgcct 120
tngagcgttt cgggcacgat ttgcggggga cgaacgaaac cccggcacgg cctgtgccaa 180
ggaacatatg tcaggacg 198
<210> 321
<211> 198
<212> DNA
<213> 麝香百合(Lilium longiflorum)
<400> 321
gcggaaggat cattgtcgag aattgattga gagaccgcga acctgtaaac ggatgatacc 60
gtgtcgggca ggcgttaagc ccgcccaact cgggacctca catcgtgcct gtggttgcct 120
tcgagcgttt caggcatgat ttgtggggga cgaacgaaac cccggcacgg cctgtgccaa 180
ggaacatatg tcaggacg 198
<210> 322
<211> 198
<212> DNA
<213> 青岛百合(Lilium tsingtauense)
<400> 322
gcggaaggat cattgtcgag aatcgattga gagaccgtga acctgtaaac ggataatacc 60
gtgtcgggcg ggcgttatgc ccgcccaact cgggacctcg catcgtgtct gtggccgcct 120
ccgagcgttt cgggcacgat ttgtggggga cgaacgaaac cccggcacgg cctgtgccaa 180
ggaacatatg tcaggacg 198
<210> 323
<211> 171
<212> DNA
<213> 卷丹(Lilium lancifolium)
<400> 323
ccaaggaaca tatgtcagga cggacgctcg tcaatgcctc agtggtgggg cgacgttcgc 60
tctctatcta tacgactctc ggcaacggat atctcggctc tcgcatcgat gaagaacgta 120
gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga accatcgagt c 171
<210> 324
<211> 171
<212> DNA
<213> 野百合(Lilium brownii)
<400> 324
ccaaggaaca tatgtcagga cggacgctcg tcaatgcctc agtggttggg cgacgttcgc 60
tctctatcta tacgactctc ggcaacggat atctcggctc tcgcatcgat gaagaacgta 120
gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga accatcgagt c 171
<210> 325
<211> 171
<212> DNA
<213> 百合(Lilium brownii var. colchesteri)
<400> 325
ccaaggaaca tatgtcagga cggacgctcg tcaatgcctc agtggttggg cgacgttcgc 60
tctctatcta tacgactctc ggcaacggat atctcggctc tcgcatcgat gaagaacgta 120
gcgaaatgtg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga accatcgagt c 171
<210> 326
<211> 171
<212> DNA
<213> 细叶百合(Lilium pumilum)
<400> 326
ccaaggaaca tatgtcagga cggacgctcg tcaatgcctc aatggtgcgg cgacgttygc 60
tctctatcta tacgactctc ggcaacggat atctcggctc tcgcatcgat gaagaacgta 120
gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga accatcgagt c 171
<210> 327
<211> 171
<212> DNA
<213> 毛百合(Lilium dauricum)
<400> 327
ccaaggaaca tatgtcagga cggacgctcg tcaatgcctc agtggtgggg cgacgttcgc 60
tctctatcta tacgactctc ggcaacggat atctcggctc tcgcatcgat gaagaacgta 120
gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgtag aatcccgtga accatcgagt c 171
<210> 328
<211> 171
<212> DNA
<213> Lilium pensylvanicum
<400> 328
ccaaggaaca tatgtcagga cggacgctcg tcaatgcctc agtggtgggg cgacgttcgc 60
tctctatcta tacgactctc ggcaacggat atctcggctc tcgcatcgat gaagaacgta 120
gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga accatcgagt c 171
<210> 329
<211> 171
<212> DNA
<213> 条叶百合(Lilium callosum)
<400> 329
ccaaggaaca tatgtcagga cggacgctcg tcaatgcctc agtggtgggg cgacgttcgc 60
tctttatcta tacgactctc ggcaacggat atctcggctc tcgcatcgat gaagaacgta 120
gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga accatcgagt c 171
<210> 330
<211> 171
<212> DNA
<213> 垂花百合(Lilium cernuum)
<400> 330
ccaaggaaca tatgtcagga cggacgctcg tcaatgcctt agtggtgggg cgacgttcgc 60
tctctatcta tacgactctc ggcaacggat atctcggctc tcgcatcgat gaagaacgta 120
gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga accatcgagt c 171
<210> 331
<211> 171
<212> DNA
<213> 汉森百合(Lilium hansonii)
<400> 331
ccaaggaaca tatgtcagga cggacgcgcg tcaatgcctc agtggtgggg cgacgtccgc 60
tctctattta tacgactctc ggcaacggat atctcggctc tcgcatcgat gaagaacgta 120
gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga accatcgagt c 171
<210> 332
<211> 171
<212> DNA
<213> 柠檬色百合(Lilium leichtlinii)
<400> 332
ccaaggaaca tatgtcagga cggacgctcg tcaatgcctc agtggtgggg cgacgttcgc 60
tctctatcta tacgaatctc ggcaacggat atctcggctc tcgcatcgat gaagaacgta 120
gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga accatcgagt c 171
<210> 333
<211> 171
<212> DNA
<213> 麝香百合(Lilium longiflorum)
<400> 333
ccaaggaaca tatgtcagga cggacgctcg tcaatgcctc agtggttggg cgacgttcgc 60
tctctatcta tacgactctc ggcaacggat atctcggctc tcgcatcgat gaagaacgta 120
gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga accatcgagt c 171
<210> 334
<211> 171
<212> DNA
<213> 波拉内百合(Lilium poilanei)
<400> 334
ccaaggaaca tatgtcagga cggacgtgcg tcaatgcctc agtggtgggg cgatgtccgc 60
tctctatcta tacgactctc ggcaacggat atctcggctc tcgcatcgat gaagaacgta 120
gcgaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga accatcgagt c 171
<210> 335
<211> 294
<212> DNA
<213> 人参(Panax ginseng)
<400> 335
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtttccgta ggtgaacctg cggaaggatc attgtcgaaa 60
cctgcatagc agaacgaccc gcgaacacgt tacaataccg ggtgagggac gaggggtgcg 120
caagctcccc aagttgcaaa cccatggtcg gggaccaccc ttgggtggat ctcgtccgaa 180
caacgacccc ccggcgcgga atgcgccaag gaaatcaaac tgaactgcac gcgtcccccc 240
cgtttgcggg cggcggaagc gtctttctaa aacacaaacg actctcggca acgg 294
<210> 336
<211> 294
<212> DNA
<213> 西洋参(Panax quinquefolius)
<400> 336
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtttccgta ggtgaacctg cggaaggatc attgtcgaaa 60
cctgcatagc agaacgaccc gcgaacacgt tacaataccg ggtgagggac gaggggtgcg 120
caagctcccc aagttgcaaa cccatggtcg gggaccaccc ttgggtggct ctcgtccgaa 180
caacgacccc ccggcgcgga atgcgccaag gaaatcaaac tgaactgcac gcgtcccccc 240
cgtttgcggg cggcggaagc gtctttctaa aacacaaacg actctcggca acgg 294
<210> 337
<211> 294
<212> DNA
<213> Panax notoginseng
<400> 337
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtttccgta ggtgaacctg cggaaggatc attgtcgaaa 60
cctgcacagc agaacgaccc gcgaacaagt tacaataccg ggtgagggat gaggggtgcg 120
taggctcccc aagttgcaaa cccatggtcg gggaccgccc ttgggtggcc ctcgtccgaa 180
caacgacccc ccggcgcgga atgcgccaag gaaatcaaat tgaactgcac gcgtcccccc 240
cgtttgcggg cggcggaagc gtctttctaa aacacaaacg actctcggca acgg 294
<210> 338
<211> 294
<212> DNA
<213> Panax assamicus
<400> 338
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtttccgta ggtgaacctg cggaaggatc attgtcgaaa 60
cctgcatagc agaacgaccc gcgaacacgt tacactacca ggtgagggac gaggggtgcg 120
caagctcccc aagtttcaaa cccatggtcg gggaccaccc ttgggtggct ctcgtccgaa 180
caacgacccc ccggcgcgga atgcgccaag gaaatcaaac tgaactttac gcgtcccccc 240
cgtttgcggg cggcggaagc gtctttctaa aacacaaacg actctcggca acgg 294
<210> 339
<211> 294
<212> DNA
<213> Panax variabilis
<400> 339
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtttccgta ggtgaacctg cggaaggatc attgtcgaaa 60
cctgcatagc agaacgaccc gcgaacacgt tacactaccg ggtgagggac gaggggtgcg 120
caagctcccc aagttgcaaa cccatggtcg gggaccaccc ttgggtggcc ctcgtccgaa 180
caacgacccc ccggcgcgga atgcgccaag gaaatcaaac tgaactgtac gcgtcccccc 240
cgtttgcggg cggcggaagc gtctttctaa aacacaaacg actctcggca acgg 294
<210> 340
<211> 294
<212> DNA
<213> Panax vietnamensis
<400> 340
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtttccgta ggtgaacctg cggaaggatc attgtcgaaa 60
cctgcatagc agaacgaccc gcgaacacgt tacaataccg ggtgagggac gaggggtgcg 120
caagctcccc aagttgcaaa cccatggtcg gggaccaccc ttgggtggct ctcgtccgaa 180
caacgacccc ccggcgcgga atgcgccaag gaaatcaaac tgaactgcac gcgtcccccc 240
cgtttgcggg cggcggaagc gtctttctaa aacacaaacg actctcggca acgg 294
<210> 341
<211> 294
<212> DNA
<213> Panax shangianus
<400> 341
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtttccgta ggtgaacctg cggaaggatc attgtcgaaa 60
cctgcatagc agaacgaccc gcgaacacgt tacactaccg ggtgagggac gaggggtgcg 120
caagctcccc aagttgcaaa cccatggtcg gggaccaccc ttgggtgact ctcgtccgaa 180
caacgacccc ccggcgcgga atgcgccaag gaaatcaaac tgaactgcac gcgtcccccc 240
cgtttgcggg cggcggaagc gtctttctaa aacacaaacg actctcggca acgg 294
<210> 342
<211> 294
<212> DNA
<213> Panax sinensis
<400> 342
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggtttccgta ggtgaacctg cggaaggatc attgtcgaaa 60
cctgcatagc agaacgaccc gcgaacacgt tacaataccg ggtgagggac gaggggtgcg 120
caagctcccc aagttgcaaa cccatggtcg gggaccaccc ttgggtggct ctcgtccgaa 180
caacgacccc ccggcgcgga atgcgccaag gaaatcaaac tgaactgcac gcgtcccccc 240
cgtttgcggg cgatggaagc gtctttctaa aacacaaacg actctcggca acgg 294
<210> 343
<211> 370
<212> DNA
<213> 人参(Panax ginseng)
<400> 343
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaagc cattaggccg 60
agggcacgtc tgcctgggcg tcacgcatcg cgtcgccccc caacccatca ctcccttgcg 120
ggagttgagg cggaggggcg gataatggcc tcccgtgtct caccgcgcgg ttggcccaaa 180
tgcgagtcct tggcgatgga cgtcacgaca agtggtggtt gtaaaaagcc ctcttctcat 240
gtcgtgcggt gacccgtcgc cagcaaaagc tctcatgacc ctgttgcgcc gtcctcgacg 300
tgcgctccga ccgcgacccc aggtcaggcg ggactacccg ctgagtttaa gcatatcaat 360
aagcggagga 370
<210> 344
<211> 370
<212> DNA
<213> 西洋参(Panax quinquefolius)
<400> 344
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaagc cattaggccg 60
agggcacgtc tgcctgggcg tcacgcatcg cgtcgccccc caacccatca ctcctttgcg 120
ggagtcgagg cggaggggcg gataatggcc tcccgtgtct caccgcgcgg ttggcccaaa 180
tgcgagtcct tggcgatgga cgtcacgaca agtggtggtt gtaaaaagcc ctcttctcat 240
gtcgtgcggt gacccgtcgc cagcaaaagc tctcatgacc ctgttgcgcc gtcctcgacg 300
tgcgctccga ccgcgacccc aggtcaggcg ggactacccg ctgagtttaa gcatatcaat 360
aagcggagga 370
<210> 345
<211> 368
<212> DNA
<213> 竹节参(Panax japonicus)
<400> 345
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaagc cattaggccg 60
agggcacgtc tgcctgggcg tcacgcatcg cgtcgccccc caacccatca ctcccttgcg 120
ggagtcgagg cggaggggcg gataatggcc tcccgtgtct caccgtgcgg ttggcccaaa 180
tgcgagtcct tggcgatgga cgtcacgaca agtggtggtt gtaaaaagcc ctcttctcat 240
gtcgtgcggt gacccgtcgc cagcaaaagc tctcatgacc ctgttgcgcc gtcctcgacg 300
tgcgctccga ccgcgacccc aggtcaggcg gaactacccg ctgagtttaa atatcaataa 360
gcggagga 368
<210> 346
<211> 370
<212> DNA
<213> Panax japonicus var. major
<400> 346
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaagc cattaggccg 60
agggcacgtc tgcctgggcg tcacgcatcg cgtcgccccc caacccatca ctccctcgca 120
ggagtcgagg cggaggggcg gataatggcc tcccgtgtct caccgcgcgg ttggcccaaa 180
tgcgagtcct tggcgatgga cgtcacgaca agtggtggtt gtaaaaagcc ctcttctcat 240
gtcgtgcggt gacccgtcgc cagcaaaagc tctcatgacc ctgttgcgcc gtcctcgacg 300
tgtgctccga ccgcgacccc aggtcaggcg ggactacccg ctgagtttaa gcatatcaat 360
aagcggagga 370
<210> 347
<211> 370
<212> DNA
<213> Panax notoginseng
<400> 347
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaagc cattaggccg 60
agggcacgtc tgcctgggcg tcacgcatcg cgtcgccccc caacccatca ttccctcgcg 120
ggagtcgatg cggaggggcg gataatggcc tcccgtgtct caccgcgcgg ttggcccaaa 180
tgcgagtcct tggcgatgga cgtcacgaca agtggtggtt gttaaaagcc ctcttctcat 240
gtcgtgcggt gacccgtcgc cagcaaaagc tctcatgacc ctgttgcgct gtcctcgacg 300
cgcgctccga ccgcgacccc aggtcaggcg ggactacccg ctgagtttaa gcatatcaat 360
aagcggagga 370
<210> 348
<211> 370
<212> DNA
<213> Panax variabilis
<400> 348
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaagc cattaggccg 60
agggcacgtc tgcctgggcg tcacgcatcg cgtcgccccc caacccatca ctcccttgcg 120
ggagtcgagg tggaggggcg gataatggcc tcccgtgtct caccgcgcgg ttggcccaaa 180
tacgagtcct tggcgatgga cgtcacgaca agtggtggtt gtaaaaagcc ctcttctcat 240
gtcgtgcggt gacccgtcgc cagcaaaagc tctcatgacc ctgttgcgcc gtcctcgacg 300
cgcgctccga ccgcgacccc aggtcaggcg ggactacccg ctgagtttaa gcatatcaat 360
aagcggagga 370
<210> 349
<211> 370
<212> DNA
<213> Panax vietnamensis
<400> 349
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaagc cattaggccg 60
agggcacgtc tgcctgggcg tcacgcatcg cgtcgccccc caactcatca ctccctcacg 120
ggagtcgagg cggaggggcg gataatggcc tcccgtgtct caccgcgcgg ttggcccaaa 180
tgcgagtcct tggcgatgga cgtcacgaca agtggtggtt gtaaaaagcc ctcttctcat 240
gtcgtgcggt gacccgtcgc cagcaaaagc tctcatgacc ctgttgcgcc gtcctcgatg 300
cgcgctccga ccgcgacccc aggtcaggcg ggactacccg ctgagtttaa gcatatcaat 360
aagcggagga 370
<210> 350
<211> 366
<212> DNA
<213> Panax shangianus
<400> 350
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaagc cattaggccg 60
agggcacgtc tgcctgggcg tcacgcatcg cgtcgccccc caacccatca ctcccttgcg 120
ggagtcgagg cggaggggcg gataatggcc tcccgtgtct caccgcgcgg ttggcccaaa 180
tgcgagtcct tggcgatgga cgtcacgaca agtggtggtt gtaaaaagcc ctcttctcat 240
gtcgttcggt cgtcgccagc aaaagctctc atgaccctgt tgcgccgtcc tcgacgcgcg 300
ctccgaccgc gaccccaggt caggcgggac tacccgctga gtttaagcat atcaataagc 360
ggagga 366
<210> 351
<211> 198
<212> DNA
<213> 人参(Panax ginseng)
<400> 351
cagaacgacc cgcgaacacg ttacaatacc gggtgaggga cgaggggtgc gcaagctccc 60
caagttgcaa acccatggtc ggggaccacc cttgggtgga tctcgtccga acaacgaccc 120
cccggcgcgg aatgcgccaa ggaaatcaaa ctgaactgca cgcgtccccc ccgtttgcgg 180
gcggcggaag cgtctttc 198
<210> 352
<211> 198
<212> DNA
<213> 西洋参(Panax quinquefolius)
<400> 352
cagaacgacc cgcgaacacg ttacaatacc gggtgaggga cgaggggtgc gcaagctccc 60
caagttgcaa acccatggtc ggggaccacc cttgggtggc tctcgtccga acaacgaccc 120
cccggcgcgg aatgcgccaa ggaaatcaaa ctgaactgca cgcgtccccc ccgtttgcgg 180
gcggcggaag cgtctttc 198
<210> 353
<211> 198
<212> DNA
<213> 竹节参(Panax japonicus)
<400> 353
cagaacgacc cgcgaacacg ttacaatacc gggtgaggga cgaggggtgc gcaagctccc 60
caagttgcaa acccatggtc ggggaccacc cttgggtggc cctcgtccga acaacgaccc 120
cccggcgcgg aatgcgccaa ggaaatcaaa ctgaactgca cgcgtccccc ccgtttgcgg 180
gcggcggaag cgtctttc 198
<210> 354
<211> 198
<212> DNA
<213> Panax notoginseng
<400> 354
cagaacgacc cgcgaacacg ttacaatacc gggtgaggga tgaggggtgc gtaggctccc 60
caagttgcaa acccatggtc ggggaccgcc cttgggtggc cctcgtccga acaacgaccc 120
cccggcgcgg aatgcgccaa ggaaatcaaa ttgaactgca cgcgtccccc ccgtttgcgg 180
gcggcggaag cgtctttc 198
<210> 355
<211> 198
<212> DNA
<213> Panax assamicus
<400> 355
cagaacgacc cgcgaacacg ttacactacc aggtgaggga cgaggggtgc gtaagctccc 60
caagtttcaa acccatggtc ggggaccacc cttgggtggc tctcgtccga acaacgaccc 120
cccggcgcgg aatgcgccaa ggaaatcaaa ctgaactgca cgcgtccccc ccgtttgcgg 180
gcggcggaag cgtctttc 198
<210> 356
<211> 198
<212> DNA
<213> Panax variabilis
<400> 356
cagaacgacc cgcgaacacg ttacactacc gggtgaggga cgaggggtgc gcaagctccc 60
caagttgcaa acccatggtc ggggaccacc cttgggtggc cctcgtccga acaacgaccc 120
cccggcgcgg aatgcgccaa ggaaatcaaa ctgaactgta cgcgtccccc ccgtttgcgg 180
gcggcggaag cgtctttc 198
<210> 357
<211> 198
<212> DNA
<213> Panax vietnamensis
<400> 357
cagaacgacc cgcgaacacg ttacaatacc gggtgaggga cgaggggtgc gcaagctccc 60
caagttgcaa acccatggtc ggggaccacc cttgggtggc tctcgtccga acaacgaccc 120
cccggcgcgg aatgcgccaa ggaaatcaaa ctgaactgca cgcgtccccc ccgtttgcgg 180
gcggcggaag cgtctttc 198
<210> 358
<211> 198
<212> DNA
<213> Panax wangianus
<400> 358
cagaacgacc cgcgaacacg ttacactacc gggtgaggga tgaggggtgc gcaagctccc 60
caagttgcaa acccatggtc ggggacaacc cttgggtggc tctcgtccga acaacgaacc 120
cccggcgcgg aatgcgccaa ggaaatcaaa ctgaactgca cgtgtccccc ccgtttgcgg 180
gcggcggaag cgtctttc 198
<210> 359
<211> 198
<212> DNA
<213> Panax shangianus
<400> 359
cagaacgacc cgcgaacacg ttacactacc gggtgaggga cgaggggtgc gcaagctccc 60
caagttgcaa acccatggtc ggggaccacc cttgggtgac tctcgtccga acaacgaccc 120
cccggcgcgg aatgcgccaa ggaaatcaaa ctgaactgca cgcgtccccc ccgtttgcgg 180
gcggcggaag cgtctttc 198
<210> 360
<211> 198
<212> DNA
<213> Panax sinensis
<400> 360
cagaacgacc cgcgaacacg ttacaatacc gggtgaggga cgaggggtgc gcaagctccc 60
caagttgcaa acccatggtc ggggaccacc cttgggtggc tctcgtccga acaacgaccc 120
cccggcgcgg aatgcgccaa ggaaatcaaa ctgaactgca cgcgtccccc ccgtttgcgg 180
gcggcggaag cgtctttc 198
<210> 361
<211> 223
<212> DNA
<213> 人参(Panax ginseng)
<400> 361
gcaagttgcg cccgaagcca ttaggccgag ggcacgtctg cctgggcgtc acgcatcgcg 60
tcgcccccca acccatcact cccttgcggg agttgaggcg gaggggcgga taatggcctc 120
ccgtgtctca ccgcgcggtt ggcccaaatg cgagtccttg gcgatggacg tcacgacaag 180
tggtggttgt aaaaagccct cttctcatgt cgtgcggtga ccc 223
<210> 362
<211> 223
<212> DNA
<213> 西洋参(Panax quinquefolius)
<400> 362
gcaagttgcg cccgaagcca ttaggccgag ggcacgtctg cctgggcgtc acgcatcgcg 60
tcgcccccca acccatcact cctttgcggg agtcgaggcg gaggggcgga taatggcctc 120
ccgtgtctca ccgcgcggtt ggcccaaatg cgagtccttg gcgatggacg tcacgacaag 180
tggtggttgt aaaaagccct cttctcatgt cgtgcggtga ccc 223
<210> 363
<211> 223
<212> DNA
<213> 竹节参(Panax japonicus)
<400> 363
gcaagttgcg cccgaagcca ttaggccgag ggcacgtctg cctgggcgtc acgcatcgcg 60
tcgcccccca acccatcact cccttgcggg agtcgaggcg gaggggcgga taatggcctc 120
ccgtgtctca ccgtgcggtt ggcccaaatg cgagtccttg gcgatggacg tcacgacaag 180
tggtggttgt aaaaagccct cttctcatgt cgtgcggtga ccc 223
<210> 364
<211> 223
<212> DNA
<213> Panax notoginseng
<400> 364
gcaagttgcg cccgaagcca ttaggccgag ggcacgtctg cctgggcgtc acgcatcgcg 60
tcgcccccca acccatcatt ccctcgcggg agtcgatgcg gaggggcgga taatggcctc 120
ccgtgtctca ccgcgcggtt ggcccaaatg cgagtccttg gcgatggacg tcacgacaag 180
tggtggttgt taaaagccct cttctcatgt cgtgcggtga ccc 223
<210> 365
<211> 223
<212> DNA
<213> Panax variabilis
<400> 365
gcaagttgcg cccgaagcca ttaggccgag ggcacgtctg cctgggcgtc acgcatcgcg 60
tcgcccccca acccatcact cccttgcggg agtcgaggtg gaggggcgga taatggcctc 120
ccgtgtctca ccgcgcggtt ggcccaaata cgagtccttg gcgatggacg tcacgacaag 180
tggtggttgt aaaaagccct cttctcatgt cgtgcggtga ccc 223
<210> 366
<211> 223
<212> DNA
<213> Panax vietnamensis
<400> 366
gcaagttgcg cccgaagcca ttaggccgag ggcacgtctg cctgggcgtc acgcatcgcg 60
tcgcccccca actcatcact ccctcacggg agtcgaggcg gaggggcgga taatggcctc 120
ccgtgtctca ccgcgcggtt ggcccaaatg cgagtccttg gcgatggacg tcacgacaag 180
tggtggttgt aaaaagccct cttctcatgt cgtgcggtga ccc 223
<210> 367
<211> 223
<212> DNA
<213> Panax wangianus
<400> 367
gcaagttgcg cccgaagcca ttaggccgag ggcacgtctg cctgggcgtc acgcatcgcg 60
tcgcccccca acccatcact cccttgcggg agtcgaggcg gaggggcgga taatggcctc 120
ccgtgtctca ccgcgcggtt ggcccaaatg cgagtccttg gcgatggacg tcacgacaag 180
tggtggttgt aaaaggccct cttctcatgt cgtgcggtga ccc 223
<210> 368
<211> 223
<212> DNA
<213> Panax shangianus
<400> 368
gcaagttgcg cccgaagcca ttaggccgag ggcacgtctg cctgggcgtc acgcatcgcg 60
tcgcccccca acccatcact cccttgcggg agtcgaggcg gaggggcgga taatggcctc 120
ccgtgtctca ccgcgcggtt ggcccaaatg cgagtccttg gcgatggacg tcacgacaag 180
tggtggttgt aaaaagccct cttctcatgt cgtgcggtga ccc 223
<210> 369
<211> 155
<212> DNA
<213> 天麻(Gastrodia elata)
<400> 369
ctgaactcaa accggcgcag cgccgcgcca agggaacgcg ttcgtgcacg atcccgcgag 60
cgggcttcgt gacgtgggcg ccgttgcgcc ccgaaaggac tagcacgact ctcggcaatg 120
gatatctcgg ctctcgcatc gatgaagaac gcagc 155
<210> 370
<211> 155
<212> DNA
<213> 冬赤箭(Gastrodia pubilabiata)
<400> 370
ctgaactcaa accggcgcag cgccgcgcca agggaacgcg tttttgcacg atcccccgag 60
ggggcttcgt ggcgtgagcg ccgtcgcgct ccgaaaggaa tagcacgact ctcggcaatg 120
gatatctcgg ctctcgcatc gatgaagaac gcagc 155
<210> 371
<211> 156
<212> DNA
<213> Maxillaria cf. anatomorum
<400> 371
ctgaactcaa accggcgcag catcgcgcca agggaaagat cgaaaggcac gagccccgcg 60
tcgggctagg tggcgtgggt gctgttgcac gccatgcgga tggacacgac tctcggcaat 120
ggatatctcg gctctcgcat cgatgaagaa cgcagc 156
<210> 372
<211> 157
<212> DNA
<213> Maxillaria chionantha
<400> 372
ctgaactcaa accggcgcag catcgcgcca agggaaagat cgaaaggcac gagccccgcg 60
tcgggctcgg tggcgtgggg tgctgttgca cgccatgcgg atggacacga ctctcggcaa 120
tggatatctc ggctctcgca tcgatgaaga acgcagc 157
<210> 373
<211> 157
<212> DNA
<213> Maxillaria colemanii
<400> 373
ctgaactcaa accggcgcag catcgcgcca agggaaagat cgaaatgcac gagccccgcg 60
tcgggctcgg tggcgtgggg tgctgttgca ccccatgcgg atggacacga ctctcggcaa 120
tggatatctc ggctctcgca tcgatgaaga acgcagc 157
<210> 374
<211> 157
<212> DNA
<213> Maxillaria speciosa
<400> 374
ctgaactcaa accggcgcag catcgcgcca agggaaagat cgaaaggcac gagccccgcg 60
tcgggctcgg tggcgtgggg tgctgttgca cgccatgcgg atggacacga ctctcggcaa 120
tggatatctc ggctctcgca tcgatgaaga acgcagc 157
<210> 375
<211> 157
<212> DNA
<213> Maxillaria sp.
<400> 375
ctgaactcaa accggcgcag catcgcgcca agggaaagat cgaaaggcac gagccccgcg 60
tcgggctcgg tggcgtgggg tgctgttgca cgccatgcgg atggacacga ctctcggcaa 120
tggatatctc ggctctcgca tcgatgaaga acgcagc 157
<210> 376
<211> 157
<212> DNA
<213> Maxillaria martinezii
<400> 376
ctgaactcaa accggcgcag catcgcgcca agggaaagat cgaaaggcac gagccccgcg 60
tcgggctcgg tggcgtgggg tgctgtcgca cgccatgcgg atggacacga ctctcggcaa 120
tggatatctc ggctctcgca tcgatgaaga acgcagc 157
<210> 377
<211> 157
<212> DNA
<213> Maxillaria gentryi
<400> 377
ctgaactcaa accggcgcag catcgcgcca agggaaagat cgaaaggcac gagccccgcg 60
tcgggctcgg tggcgtgggg tgctgttgca cgccatgcgg atggacacga ctctcggcaa 120
tggatatctc ggctctcgca tcgatgaaga acgcagc 157
<210> 378
<211> 157
<212> DNA
<213> Maxillaria sanderiana
<400> 378
ctgaactcaa accggcgcag catcgcgcca agggaaagat cgaaaggcac gagccccgcg 60
tcgggctcgg tggcgtgggg tgctgttgca cgccatgcgg atggacacga ctctcggcaa 120
tggatatctc ggctctcgca tcgatgaaga acgcagc 157
<210> 379
<211> 158
<212> DNA
<213> Trigonidium turbinatum
<400> 379
ctgaactcaa accggcgcag catcgcgcca agggaaaggt acgaaaggca cgagccccgc 60
gtcgggctcg gtggcgtggg gtgctgtcgc acgccatgcg gatggacacg actctcggca 120
atggatatct cggctctcgc atcgatgaag aacgcagc 158
<210> 380
<211> 180
<212> DNA
<213> 天麻(Gastrodia elata)
<400> 380
gaggccaatc ggccaagggc acgcccgcct gggcgtcaag cattacgtcg ctccgcgccc 60
gagcgcacgc cgccggcacg gacgcgcaga ctggctcctc gcgcccgctg gcgcggcggg 120
ctgaagtgcg agttgcgccg ctctcgccgt ggccgcggcc gacaagggtg ggaggaaacg 180
<210> 381
<211> 191
<212> DNA
<213> Maxillaria lawrenceana
<400> 381
gaggccaatc ggccaagggc acgtccgcct gggcgtcaag cgtcgcgtcg ctccgtgcca 60
gctccgtccc gccagtgggc gtcggccgag gcccggatgc gcagagtggc ccgtcgtgcc 120
cccgtcggcg cggcgggctg aagagcgggt tacgtctcgc cggccgcgaa cgacaagggt 180
gggaggaaac g 191
<210> 382
<211> 189
<212> DNA
<213> Maxillaria cf. anatomorum
<400> 382
gaggccaatc ggccaagggc acgtccgcct gggcgtcaag cgtcgcgtcg ctccgtgcca 60
accgcgtcac gccagagggc gccggccgtg gcccggatgt gcagagtggc tcgtcgtgcc 120
cgtcggcgcg gcgggctgaa gagcgggttc cgtctcgccg gccgcggacg acaagggtgg 180
gaggaaacg 189
<210> 383
<211> 188
<212> DNA
<213> Maxillaria pumila
<400> 383
gaggccaatc ggccaagggc acgtccgcct gggcgtcaag cgtcgcgtcg ctccgtgcca 60
cttccgtcgc gccagagggc gtcgtcgggg cgcggatgtg cagagtggct cgtcgtgccc 120
gtcggcgcgg cgggctgaag agcgggtttc gtctcgccgg ccgcgaacga caagggtggg 180
aggaaacg 188
<210> 384
<211> 189
<212> DNA
<213> Maxillaria colemanii
<400> 384
gaggccaatc ggccaagggc acgtccgcct gggcgtcaag cgtcgcgtcg ctccgtgcca 60
cctgcgtccc gccagcgggc gtcggccgag gcccggatgt gcagagtggc tcgtcgtgcc 120
cgtcggcgcg gcgggctgaa gagcgggttc cgtctcgccg gccgcgaacg acaagggtgg 180
gaggaaacg 189
<210> 385
<211> 189
<212> DNA
<213> Maxillaria bolivarensis
<400> 385
gaggccaatc ggccaagggc acgtccgcct gggcgtcaag cgtcgcgtcg ctccgtgcca 60
cctgcgtccc gccagcgggc gtcggccgag gcccggacgt gcagagtggc tcgtcgtgcc 120
cgtcggcgcg gcgggctgaa gagcgggttc cgtctcgccg gccgcgaacg acaagggtgg 180
gaggaaacg 189
<210> 386
<211> 189
<212> DNA
<213> Maxillaria speciosa
<400> 386
gaggccaatc ggccaagggc acgtccgcct gggcgtcaag cgtcgcgtcg ctccgtgcca 60
cccgcgtccc gccagcgggc gccggacgag gcccggatgt gcagagtggc tcgtcgtgcc 120
cgtcggcgcg gcgggctgaa gagcgggttc cgtctcgccg gccgcgaacg acaagggtgg 180
gaggaaacg 189
<210> 387
<211> 189
<212> DNA
<213> Maxillaria sp.
<400> 387
gaggccaatc ggccaagggc acgtccgcct gggcgtcaag cgtctcgtcg ctccgcgcca 60
ccggcgtccc gccagcgggc gtcggccgag gcccggatgt gcagagtggc tcgtcgtgcc 120
cgtcggcgcg gcgggctgaa gagcgggttc cgtctcgccg gccgcgaacg acaagggtgg 180
gaggaaacg 189
<210> 388
<211> 189
<212> DNA
<213> Maxillaria elatior
<400> 388
gaggccaatc ggccaagggc acgtccgcct gggcgtcaag cgtcgcgtcg ctccgtgcca 60
cctctgtccc gccagcgggc gtcggccgag gcccggatgc gcagagtggc tcgtcgtgcc 120
cgtcggcgcg gcgggctgaa gagcgggttt cgtctcgtcg gccgcgaacg acaagggtgg 180
gaggaaacg 189
<210> 389
<211> 189
<212> DNA
<213> Maxillaria sanderiana
<400> 389
gaggccaatc ggccaagggc acgtccgcct gggcgtcaag cgtcgcgtcg ctccgtgcca 60
accgcgtccc cccagcgggc gccggccgtg gcccggatgc gcagagtggc tcgtcgtgcc 120
cgtcggcgcg gcgggctgaa gagcgggttc cgtctcgccg gccgcgaacg acaagggtgg 180
gaggaaacg 189
<210> 390
<211> 189
<212> DNA
<213> Trigonidium turbinatum
<400> 390
gaggccaatc ggccaagggc acgtccgcct gggcgtcagg cgtcgcgtcg ctccgtgcca 60
cctccgtccc gccagcgggc gccggtcgag gcccggacgt gcagagtggc tcgtcgtgcc 120
cgtcggcgcg gcgggctgaa gagcgggttc cgtctcgccg gccgcgaacg acaagggtgg 180
gaggaaacg 189
<210> 391
<211> 351
<212> DNA
<213> 黄芩(Scutellaria baicalensis)
<400> 391
ggaagtaaaa gtcgtaacaa gggaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga 60
accatcgagt ctttgaacgc aagttgcgcc cgaagccatc aggccgaggg cacgcctgcc 120
tgggcgtcac gcatcgcgtc gccccccctc gcaccgcctc gagcggtgcc gtgtgggggg 180
ggcggagatt ggccccccgt gcgccccggc gcgcggccgg cccaaatgcg atcccccggc 240
gacgcacgcc ccgacaagtg gtggttgttt cctcaactcg cgtgctgtcg tgtgccaagg 300
cgtcgtccgt tcgggagaga atcgaaagat gcaacggata tctcggctct c 351
<210> 392
<211> 335
<212> DNA
<213> 滇黄芩(Scutellaria amoena)
<400> 392
ggaagtaaaa gtcgtaacaa ggggtgtgaa ttgcagaatc ccgtgaacca tcgagtcttt 60
gaacgcaagt tgcgcccgaa gccgtcaggc cgagggcacg cctgcctggg cgtcacgcat 120
cgcgtcgccc cccctcgcac cgcctcgagc ggtgccgtgt ggggggcgga tattggcccc 180
ccgtgcgcct cggagcgcgg ccggcccaaa tgcgatcccc cggcgacgca cgccccgaca 240
agtggtggtt gtttcctcaa ctcgcgtgct gtcgtgtgcc aaggcgtcgt ccgttcggga 300
gagaatcgaa agatgcaacg gatatctcgg ctctc 335
<210> 393
<211> 340
<212> DNA
<213> 韩信草(Scutellaria indica)
<400> 393
ggaagtaaaa gtcgtaacaa gggaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga 60
accatcgagt ctttgaacgc aagttgcgcc cgaagccatc aggccgaggg cacgtctgcc 120
tgggcgtcac gcatcgcgtc gcccccccca cccgcatcgc ggtttcggag ggggcggaga 180
ttggcctccc gtgcgcctcg gtgcgcggcc ggcccaaatg cgatcccccg gcgacgcacg 240
ccccgacaag tggtggttga gctatcaact cgcgtgctgt cgtgtgccaa ggcgtcgtcc 300
gttcgggaga gaaataaacg caacggatat ctcggctctc 340
<210> 394
<211> 341
<212> DNA
<213> 京黄芩(Scutellaria pekinensis)
<400> 394
ggaagtaaaa gtcgtaacaa gggaaatgcg atacttggtg tgaattgcag aatcccgtga 60
accatcgagt ctttgaacgc aagttgcgcc cgaagccatc aggccgaggg cacgtctgcc 120
tgggcgtcac gcatcgcgtc gcccccccca cccgcatcgc ggttacggag gggggcggag 180
attggcctcc cgtgcgcctc ggtgcgcggc cggcccaaat gcgatccccc ggcgacgcac 240
gccccgacaa gtggtggttg agctatcaac tcgcgtgctg tcgtgtgcca aggcgtcgtc 300
cgttcgggag aggaacgaac gcaacggata tctcggctct c 341
<210> 395
<211> 349
<212> DNA
<213> 黄芩(Scutellaria baicalensis)
<400> 395
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccatcag gccgagggca cgcctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cccccctcgc accgcctcga gcggtgccgt gtgggggggg 180
cggagattgg ccccccgtgc gccccggcgc gcggccggcc caaatgcgat cccccggcga 240
cgcacgcccc gacaagtggt ggttgtttcc tcaactcgcg tgctgtcgtg tgccaaggcg 300
tcgtccgttc gggagagaat cgaaagatga gacccaacgg ccatcgtgc 349
<210> 396
<211> 333
<212> DNA
<213> 滇黄芩(Scutellaria amoena)
<400> 396
gcatcgatga agaacgcagc ggtgtgaatt gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga 60
acgcaagttg cgcccgaagc cgtcaggccg agggcacgcc tgcctgggcg tcacgcatcg 120
cgtcgccccc cctcgcaccg cctcgagcgg tgccgtgtgg ggggcggata ttggcccccc 180
gtgcgcctcg gagcgcggcc ggcccaaatg cgatcccccg gcgacgcacg ccccgacaag 240
tggtggttgt ttcctcaact cgcgtgctgt cgtgtgccaa ggcgtcgtcc gttcgggaga 300
gaatcgaaag atgagaccca acggccatcg tgc 333
<210> 397
<211> 338
<212> DNA
<213> 韩信草(Scutellaria indica)
<400> 397
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccatcag gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cccccccacc cgcatcgcgg tttcggaggg ggcggagatt 180
ggcctcccgt gcgcctcggt gcgcggccgg cccaaatgcg atcccccggc gacgcacgcc 240
ccgacaagtg gtggttgagc tatcaactcg cgtgctgtcg tgtgccaagg cgtcgtccgt 300
tcgggagaga aataaacgag acccaacggc catcgtgc 338
<210> 398
<211> 339
<212> DNA
<213> 京黄芩(Scutellaria pekinensis)
<400> 398
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccatcag gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cccccccacc cgcatcgcgg ttacggaggg gggcggagat 180
tggcctcccg tgcgcctcgg tgcgcggccg gcccaaatgc gatcccccgg cgacgcacgc 240
cccgacaagt ggtggttgag ctatcaactc gcgtgctgtc gtgtgccaag gcgtcgtccg 300
ttcgggagag gaacgaacga gacccaacgg ccatcgtgc 339
<210> 399
<211> 164
<212> DNA
<213> 兴安升麻(Cimicifuga dahurica)
<400> 399
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaatgacc cgtgaacacg ttaaaaaata 60
ttatgtggat tgatgaggag tgtgagctct aaatcatcca ttgtcggggc atgggatcga 120
ctatggttga tcttatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gcgc 164
<210> 400
<211> 164
<212> DNA
<213> 升麻(Cimicifuga foetida)
<400> 400
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaacgacc cgtgaacacg ttaaaaaaca 60
ttatgtggat tgaggaggag catgagctct taatcatcca ttgtcgagtc atgggatcga 120
ccacggttga tcttatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gcgc 164
<210> 401
<211> 164
<212> DNA
<213> 大三叶升麻(Cimicifuga heracleifolia)
<400> 401
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaacgacc cgtgaacacg ttaaaaaata 60
ttatgtggat tgacgaggag cgtgagcttt aaatcatcca ttgtcggggc atgggatcga 120
ccatggttga tcgtatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gcgc 164
<210> 402
<211> 164
<212> DNA
<213> 单穗升麻(Cimicifuga simplex)
<400> 402
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaacgacc cgtgaacacg ttaaaaaaca 60
ttatrtggat tgacgaggag cgtgagctct taatcatcca ttgtcgggtc atgggatcga 120
ccatggttga tcttatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gcgc 164
<210> 403
<211> 164
<212> DNA
<213> 总状升麻(Actaea racemosa)
<400> 403
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaacgacc cgtgaacacg ttaaaaaaca 60
ttatgtggat cgatgaggag tgtgagctct taatcatcca ttgtcgggtc atgggattga 120
ccacggttga tcttatgctc ttgtacaaac acaaaacccg gcgc 164
<210> 404
<211> 164
<212> DNA
<213> 小升麻(Cimicifuga acerina)
<400> 404
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaatgacc cgtgaacatg ttaaaaaaca 60
ttatatggat tgatgagggg cgtgagctct taatcatcca ttgtcgggcc atgggatcga 120
ccacagttga tcctatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gcgc 164
<210> 405
<211> 162
<212> DNA
<213> 日本升麻(Actaea japonica)
<400> 405
gcggaaggat cattgtcgaa acgctttgca gaatgacccg tgaacacgtt aaaaaacatt 60
atatggattg atgaggggcg tgagctctta atcatccatt gtcgggccat gggattgacc 120
acagttgatc ttatgttctc gtacaaacac aaaacccggc gc 162
<210> 406
<211> 205
<212> DNA
<213> 兴安升麻(Cimicifuga dahurica)
<400> 406
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aggccattta ggttgagggc acgtctgcct 120
gggcgtcaca cacagcgtcg ttcccaacca attttattaa ttggggaacg gaaattggcc 180
ccccgagtcc ttttgggcac ggttg 205
<210> 407
<211> 205
<212> DNA
<213> 升麻(Cimicifuga foetida)
<400> 407
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aggccattta ggttgagggc acgtctgcct 120
gggcgtcaca cacagcgtcg ttcctaacca attttattag ttggggaacg gaaattggcc 180
ccccgagtcc ttttgggcac ggttg 205
<210> 408
<211> 205
<212> DNA
<213> 大三叶升麻(Cimicifuga heracleifolia)
<400> 408
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aggccattta ggttgagggc acgtctgcct 120
gggcgtcaca catagcgtcg ttcccaacca attttattaa ttggggaacg gaaattggcc 180
ccccgagtcc ttttgggcac ggttg 205
<210> 409
<211> 182
<212> DNA
<213> 单穗升麻(Cimicifuga simplex)
<400> 409
gcatcgatga agaacgcagc tgcagaatcc cgtgaaccat cgagtctttg aacgcaagtt 60
gcgcccgagg ccatttaggt tgagggcacg tctgcctggg cgtcacacac agcgtcgttc 120
ccaaccaatt ttattagttg gggaatggag attggccccc cgagtccttt tgggcacggt 180
tg 182
<210> 410
<211> 205
<212> DNA
<213> 总状升麻(Actaea racemosa)
<400> 410
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aggccattta ggttgagggc acgtctgcct 120
gggcgtcaca cacagcttcg atcccaacca attttgttag ttagggaacg gaaattggcc 180
ccccgagtcc ttttgggcac ggttg 205
<210> 411
<211> 205
<212> DNA
<213> 小升麻(Cimicifuga acerina)
<400> 411
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagag tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aggccattta ggttgagggc acgtctgcct 120
gggcgtcaca cacagcgtcg ttcccaacta attttgttag ttgaggaacg gaaattggcc 180
ccccgagtcc ttttgggcac ggttg 205
<210> 412
<211> 205
<212> DNA
<213> 日本升麻(Actaea japonica)
<400> 412
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aggccattta ggttgagggc acgtctgcct 120
gggcgtcaca cacagcgtcg ttcccaacta attttgttag ttgaggaacg gaaattggcc 180
ccccgagtcc ttttgggcac ggttg 205
<210> 413
<211> 162
<212> DNA
<213> 兴安升麻(Cimicifuga dahurica)
<400> 413
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaatgacc cgtgaacacg ttaaaaaata 60
ttatgtggat tgatgaggag tgtgagctct aaatcatcca ttgtcggggc atgggatcga 120
ctatggttga tcttatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gc 162
<210> 414
<211> 162
<212> DNA
<213> 升麻(Cimicifuga foetida)
<400> 414
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaacgacc cgtgaacacg ttaaaaaaca 60
ttatgtggat tgaggaggag catgagctct taatcatcca ttgtcgagtc atgggatcga 120
ccacggttga tcttatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gc 162
<210> 415
<211> 162
<212> DNA
<213> 大三叶升麻(Cimicifuga heracleifolia)
<400> 415
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaacgacc cgtgaacacg ttaaaaaata 60
ttatgtggat tgacgaggag cgtgagcttt aaatcatcca ttgtcggggc atgggatcga 120
ccatggttga tcgtatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gc 162
<210> 416
<211> 162
<212> DNA
<213> 单穗升麻(Cimicifuga simplex)
<400> 416
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaacgacc cgtgaacacg ttaaaaaaca 60
ttatrtggat tgacgaggag cgtgagctct taatcatcca ttgtcgggtc atgggatcga 120
ccatggttga tcttatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gc 162
<210> 417
<211> 162
<212> DNA
<213> 总状升麻(Actaea racemosa)
<400> 417
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaacgacc cgtgaacacg ttaaaaaaca 60
ttatgtggat cgatgaggag tgtgagctct taatcatcca ttgtcgggtc atgggattga 120
ccacggttga tcttatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gc 162
<210> 418
<211> 162
<212> DNA
<213> 小升麻(Cimicifuga acerina)
<400> 418
gcggaaggat cattgtcgaa acctgctttg cagaatgacc cgtgaacatg ttaaaaaaca 60
ttatatggat tgatgagggg cgtgagctct taatcatcca ttgtcgggcc atgggatcga 120
ccacagttga tcctatgctc tcgtacaaac acaaaacccg gc 162
<210> 419
<211> 160
<212> DNA
<213> 日本升麻(Actaea japonica)
<400> 419
gcggaaggat cattgtcgaa acgctttgca gaatgacccg tgaacacgtt aaaaaacatt 60
atatggattg atgaggggcg tgagctctta atcatccatt gtcgggccat gggattgacc 120
acagttgatc ttatgttctc gtacaaacac aaaacccggc 160
<210> 420
<211> 161
<212> DNA
<213> 兴安升麻(Cimicifuga dahurica)
<400> 420
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc catttaggtt 60
gagggcacgt ctgcctgggc gtcacacaca gcgtcgttcc caaccaattt tattaattgg 120
ggaacggaaa ttggcccccc gagtcctttt gggcacggtt g 161
<210> 421
<211> 161
<212> DNA
<213> 升麻(Cimicifuga foetida)
<400> 421
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc catttaggtt 60
gagggcacgt ctgcctgggc gtcacacaca gcgtcgttcc taaccaattt tattagttgg 120
ggaacggaaa ttggcccccc gagtcctttt gggcacggtt g 161
<210> 422
<211> 161
<212> DNA
<213> 大三叶升麻(Cimicifuga heracleifolia)
<400> 422
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc catttaggtt 60
gagggcacgt ctgcctgggc gtcacacata gcgtcgttcc caaccaattt tattaattgg 120
ggaacggaaa ttggcccccc gagtcctttt gggcacggtt g 161
<210> 423
<211> 161
<212> DNA
<213> 单穗升麻(Cimicifuga simplex)
<400> 423
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc catttaggtt 60
gagggcacgt ctgcctgggc gtcacacaca gcgtcgttcc caaccaattt tattagttgg 120
ggaatggaga ttggcccccc gagtcctttt gggcacggtt g 161
<210> 424
<211> 161
<212> DNA
<213> 总状升麻(Actaea racemosa)
<400> 424
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc catttaggtt 60
gagggcacgt ctgcctgggc gtcacacaca gcttcgatcc caaccaattt tgttagttag 120
ggaacggaaa ttggcccccc gagtcctttt gggcacggtt g 161
<210> 425
<211> 161
<212> DNA
<213> 小升麻(Cimicifuga acerina)
<400> 425
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc catttaggtt 60
gagggcacgt ctgcctgggc gtcacacaca gcgtcgttcc caactaattt tgttagttga 120
ggaacggaaa ttggcccccc gagtcctttt gggcacggtt g 161
<210> 426
<211> 161
<212> DNA
<213> 日本升麻(Actaea japonica)
<400> 426
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc catttaggtt 60
gagggcacgt ctgcctgggc gtcacacaca gcgtcgttcc caactaattt tgttagttga 120
ggaacggaaa ttggcccccc gagtcctttt gggcacggtt g 161
<210> 427
<211> 201
<212> DNA
<213> 猪苓(Polyporus umbellatus)
<400> 427
cggaaggatc attaatgagt cttgacttgg gttgcagctg gtctctcaca aggcaaatgt 60
gctcaccctt gttcaaatcc actctacacc tgtgcactta ctgtagattc tggtgtccct 120
tttaaccggg gggcttggga tctgcgtttt atcacaaact cttgtaaaag tatcagaatg 180
cactattgcg ataataaacg c 201
<210> 428
<211> 193
<212> DNA
<213> 木蹄层孔菌(Fomes fomentarius)
<400> 428
cggaaggatc attaatgagt cttgacatgg gttgtagctg gccttccgag gcatgtgcac 60
gccctgctca tccactctac acctgtgcac ttactgtggg atttcaggtg cgtcgctttg 120
cggcggcgtc actcggccca cgttttcttt acaaactatt gaataacaga atgtctattg 180
cgataataaa cgc 193
<210> 429
<211> 185
<212> DNA
<213> 红木色孔菌(Tinctoporellus epimiltinus)
<400> 429
cggaaggatc attaatgagt cgaacggggt tgtagctggc cttcacaggc atgtgcacac 60
ctcactcatc cactctacac ctgtgcactt actgtgggtt tcgagaggcc gcgcttgcgt 120
ggttgatcgg gctcacgtct attacaaact cttcatatca gaatgtctat tgcgataata 180
aacgc 185
<210> 430
<211> 199
<212> DNA
<213> 猪苓(Polyporus umbellatus)
<400> 430
cggaaggatc attaatgagt cttgactttg ggttgaagct ggtctcttat gaggcaattg 60
tgctcaccct tgttcaaatc tactcttaca cctgtgcact tgctgtagat tctgtgcctt 120
ttaaccaggc ctcgggatct gcgttttatc acaaactctt gtaaaaatat cagaatggca 180
ctattgcgat aataaacgc 199
<210> 431
<211> 217
<212> DNA
<213> 猪苓(Polyporus umbellatus)
<400> 431
cggaaggatc attaatgagt cttgacttgg gttgaagctg gtctttcaca aggcaatgtg 60
ctcacccttg ttcaaatcca ctctacacct gtgcacttac tgtagattct ggggttggct 120
ggtgtccctt ttaaccgggg ggctcaatgc ctcgggatct gtgttttatc ccaaactctt 180
gtaaaatatc agaatgcact attgcgataa taaacgc 217
<210> 432
<211> 186
<212> DNA
<213> 猪苓(Polyporus umbellatus)
<400> 432
cggaaggatc attaatgagt cttgacttgg gttgaagctg gtttcttaca agtgctcgcc 60
ctggttcaaa tccactctac acctgtgcac ttactgtgga ttctggggtc aaatggcctt 120
gggacctgcg ttttatcaca aactcttgta aaaaatatcg gaatgcacta ttgcgataat 180
aaacgc 186
<210> 433
<211> 370
<212> DNA
<213> 乌头(Aconitum carmichaeli)
<400> 433
ggtgtgaatt gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc 60
cattaggtcg agggcacgtc tgcctgggcg tcacacacag cgtcgcaccc cgtcaaccam 120
gttgtcgggg agcggagatt ggccccccgg gcccctgcgg gcacggtcgg cacaaatgtt 180
tgtccccggc ggcgagcgtc gcggtcagtg gtggttgtat ttctcatcct ccaaagacat 240
caagacgcgt cgtcctcgtt gcacgttggg acacatcgac cccaaggagc cgcttcgcgc 300
ggcattcacc ctgcgacccc aggtcaggcg ggatcacccg ctgagtttaa gcatatcaat 360
aagcggagga 370
<210> 434
<211> 370
<212> DNA
<213> 日本乌头(Aconitum japonicum)
<400> 434
ggtgtgaatt gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc 60
cattaggtcg agggcacgtc tgcctgggcg tcacacacag cgtcgcaccc cgtcaaccac 120
gttgtcgggg agcggagatt ggccccccgg gcccctgcgg ccacggtcgg cacaaatgtt 180
tgtccccggc ggcgagcgtc gcggtcagtg gtggttgtat ttctcatcct ccaaagacat 240
caagacgcgt cgtcctcgtt gcacgttggg acacatcgac cccaaggagc cgcttcgcgc 300
ggcattcacc ctgcgacccc aggtcaggcg ggatcacccg ctgagtttaa gcatatcaat 360
aagcggagga 370
<210> 435
<211> 332
<212> DNA
<213> 瓜叶乌头(Aconitum hemsleyanum)
<400> 435
ggtgtgaatt gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc 60
cattaggtcg agggcacgtc tgcctgggcg tcacacacag cgtcgcaccc cgtcaaccac 120
gttgtcgggg agcggagatt ggccccccga gcccctgcgg gcacggtcgg cacaaatgtt 180
tgtccccggc ggcgagcgtc gcggtcagtg gtggttgtat ttctcatcct ccaaagacat 240
caagacgcgt cgtcctcgtt gcacgttggg acacatcgac cccaaggagc cgcttcgcgc 300
ggcattcacc ctgcatatca ataagcggag ga 332
<210> 436
<211> 332
<212> DNA
<213> 弯喙乌头(Aconitum campylorrhynchum)
<400> 436
ggtgtgaatt gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc 60
cattaggtcg agggcacgtc tgcctgggcg tcacacacag cgtcgcaccc cgtcaaccac 120
gttgtcgggg agcggagatt ggccccccgg gcccctgcgg gcacggtcgg cacaaatgtt 180
tgtccccggc ggcgagcgtc gcggtcagtg gtggttgtat ttctcatcct cctaagacat 240
caagacgcgt cgtcctcgtt gcacgttggg acacatcgac cccaaggagc tgcttcgtgc 300
ggcattcacc ctgcatatca ataagcggag ga 332
<210> 437
<211> 368
<212> DNA
<213> 滇南草乌(Aconitum austroyunnanense)
<400> 437
ggtgtgaatt gcagaatccc gtgaaccatc cagtctttga acgcaagttg cgcccgaagc 60
cattaagtcc agggcacgtc tgcctgggcg tcacacacag cgtcccaccc cgtcaaccaa 120
gttgtcgggg aacggaaatt ggccccccgg gcccctgcgg gcacggtcgg cacaaatgtt 180
tgtccccggc ggcgaacgtc ccggtcagtg gtggttgtat ttctcatcct ccaaagacat 240
caagacgcgt cgtcctcgtt gcacgttggg acacatcgac cccaaggagc cgcttcgcgc 300
ggcattcacc ctgcgacccc aggtcaggcg ggatcacccg ctgaatttgc atatcaataa 360
gcggagga 368
<210> 438
<211> 332
<212> DNA
<213> Aconitum bucovinense
<400> 438
ggtgtgaatt gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggc 60
cattaggtcg agggcacgtc tgcctgggcg tcacacacag cgtcgcaccc cgtcaaccac 120
gttgtcgggg agcggagatt ggccccccgg gcccctgcgg gcacggtcgg cacaaatgtt 180
tgtccccggc ggcgagcgtc gcggtcagtg gtggttgtat ctctcatcct ccaaagacat 240
caagacgcrt cgtcctcgtt gcacgttggg acacatcgac cccaaggagc cgcttcgcgc 300
ggcattcacc ctgcatatca ataagcggag ga 332
<210> 439
<211> 305
<212> DNA
<213> 乌头(Aconitum carmichaeli)
<400> 439
gtcgaaacct gcccagcaga gcgacccgcg aacaagtgaa aacaaacccg gacgtaccga 60
agaggggcgc atgcccccga tcgctcgccc gtcggaccac gaccccttct gcggccgcac 120
tgatctgcgg gcggaggggt gggtcgttgt gtccgcacaa aaccaaaaac cggcgcgaca 180
ggcgccaagg aaatcttagc ggaaaaagag ggttgccccg tccgcggtgg cagccttcag 240
aatccgatac tcaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcttgcatc gatgaagaac 300
gcagc 305
<210> 440
<211> 305
<212> DNA
<213> 瓜叶乌头(Aconitum hemsleyanum)
<400> 440
gtcgaaacct gcccagcaga gcgacccgcg aacaagtgaa aacaaacccg gacggaccga 60
agaggggcgc atgcccccga tcgctcgccc gtcggaccac gacctcttct gcgaccgcac 120
tgatctgcgg gcggaggggt gggtcgttgt gtccgcacaa aaccaaaaac cggcgcgaca 180
ggcgccaagg aaatcttagc ggaaaaagag ggttgccccg ttcgcggtgg cagccttcag 240
aatccgatac tcaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcttgcatc gatgaagaac 300
gcagc 305
<210> 441
<211> 305
<212> DNA
<213> 弯喙乌头(Aconitum campylorrhynchum)
<400> 441
gtcgaaacct gcccagcaga gcgacccgcg aacaagtgaa aacaaatccg gacggaccga 60
agaggggtgc atgcccccga tcgctcgccc gtcggaccac gacctcttct gcgaccgcac 120
tgatctgcgg gcggaggggt gggtcgttgt gtccgcacaa aaccaaaaac cggcgcgaca 180
ggcgtcaagg aaatcttagc ggaaaaagag ggttgctccg tccgcggtgg cagccttcag 240
aatccgatac tcaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcttgcatc gatgaagaac 300
gcagc 305
<210> 442
<211> 305
<212> DNA
<213> 滇南草乌(Aconitum austroyunnanense)
<400> 442
gtcgaaacct gcccagcaga gcgacccgcg aacaagtgaa aacaaacccg gacgtaccga 60
agaggggcgc atgcccccga tcgctcgccc gtcggaccac gaccccttct gcggccgcac 120
tgatctgcgg gcggaggggg gggtcggtgg ggccgcacaa aaccaaaaac cggcgcgaca 180
ggggccaagg aaatcttaac ggaaaaagag ggttgccccg tccgcggggg cagccttcaa 240
aatccgatac tcaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcttgcatc gatgaagaac 300
gcagc 305
<210> 443
<211> 305
<212> DNA
<213> Aconitum bucovinense
<400> 443
gtcgaaacct gcccagcaga gcgacccgcg aacaagtgaa aacaaacccg gacggaccga 60
agaggggcgc atgcccccga tcgctcgccc gtyggaccac gacctcttct gcgactgcat 120
tgatatgcgg gcggaggggt gggtcgttgt gtccacacaa aaccaaaaac cggcgagaca 180
ttcgccaagg aaatcttagc ggaaaaagag ggttgtcccg tccgcggtgg cagccttcag 240
aatccgatac tcaaacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctcttgcatc gatgaagaac 300
gcagc 305
<210> 444
<211> 167
<212> DNA
<213> 乌头(Aconitum carmichaeli)
<400> 444
gtgggtcgtt gtgtccgcac aaaaccaaaa accggcgcga caggcgccaa ggaaatctta 60
gcggaaaaag agggttgccc cgtccgcggt ggcagccttc agaatccgat actcaaacga 120
ctctcggcaa cggatatctc ggctcttgca tcgatgaaga acgcagc 167
<210> 445
<211> 167
<212> DNA
<213> 日本乌头(Aconitum japonicum)
<400> 445
gtgggtcgtt gtgtccgcac aaaaccaaaa accggcgcga caggcgccaa ggaaatctta 60
gcggaaaaag agggttgccc cgtccgcggt ggcagccttc agaatccgat actcaaacga 120
ctctcggcaa cggatatctc ggctcttgca tcgatgaaga acgcagc 167
<210> 446
<211> 167
<212> DNA
<213> 瓜叶乌头(Aconitum hemsleyanum)
<400> 446
gtgggtcgtt gtgtccgcac aaaaccaaaa accggcgcga caggcgccaa ggaaatctta 60
gcggaaaaag agggttgccc cgttcgcggt ggcagccttc agaatccgat actcaaacga 120
ctctcggcaa cggatatctc ggctcttgca tcgatgaaga acgcagc 167
<210> 447
<211> 167
<212> DNA
<213> 弯喙乌头(Aconitum campylorrhynchum)
<400> 447
gtgggtcgtt gtgtccgcac aaaaccaaaa accggcgcga caggcgtcaa ggaaatctta 60
gcggaaaaag agggttgctc cgtccgcggt ggcagccttc agaatccgat actcaaacga 120
ctctcggcaa cggatatctc ggctcttgca tcgatgaaga acgcagc 167
<210> 448
<211> 167
<212> DNA
<213> 滇南草乌(Aconitum austroyunnanense)
<400> 448
gtgggtcgtt gtgtccgcac aaaaccaaaa accggcgcga caggggccaa ggaaatctta 60
acggaaaaag agggttgccc cgtccgcggg ggcagccttc aaaatccgat actcaaacga 120
ctctcggcaa cggatatctc ggctcttgca tcgatgaaga acgcagc 167
<210> 449
<211> 167
<212> DNA
<213> Aconitum bucovinense
<400> 449
gtgggtcgtt gtgtccgcac aaaaccaaaa accggcgaga cattcgccaa ggaaatctta 60
gcggaaaaag agggttgtcc cgtccgcggt ggcagccttc agaatccgat actcaaacga 120
ctctcggcaa cggatatctc ggctcttgca tcgatgaaga acgcagc 167
<210> 450
<211> 191
<212> DNA
<213> 柳叶木兰(Magnolia salicifolia)
<400> 450
caagggttca gaaagcgaga atcaaaaaag gataggtgca gagactcaat ggaagctgtt 60
ctaacaaatg gagttgactg cattggtaga ggaatcgaat ccttctatcg aaactacaga 120
aaagatgacc ctgtatacat acgtatacat actgaaatat caaataatta atcacgactc 180
gaatccttat t 191
<210> 451
<211> 195
<212> DNA
<213> 皱叶木兰(Magnolia kobus)
<400> 451
caagggttca gaaagcgaga atcaaaaaaa aaaggatagg tgcagagact caatggaagc 60
tgttctaaca aatggagttg actgcattgg tagaggaatc gaatccttct atcgaaacta 120
cagaaaagat gaccctgtat acatacgtat acatactgaa atatcaaata attaatcacg 180
actcgaatcc ttatt 195
<210> 452
<211> 191
<212> DNA
<213> 武当木兰(Magnolia sprengeri)
<400> 452
caagggttca gaaagcgaga atcaaaaaag gataggtgca gagactcaat ggaagctgtt 60
ctaacaaatg gagttgactg cattggtaga ggaatcgaat ccttctatcg aaactacaga 120
aaagatgacc ctgtatacat acgtatacat actgaaatat caaataatta atcacgactc 180
gaatccttat t 191
<210> 453
<211> 191
<212> DNA
<213> 玉兰(Magnolia denudata)
<400> 453
caagggttca gaaagcgaga atcaaaaaag gataggtgca gagactcaat ggaagctgtt 60
ctaacaaatg gagttgactg cattggtaga ggaatcgaat ccttctatcg aaactacaga 120
aaagatgacc ctgtatacat acgtatacat actgaaatat caaataatta atcacgactc 180
gaatccttat t 191
<210> 454
<211> 195
<212> DNA
<213> 望春花(Magnolia biondii)
<400> 454
caagggttca gaaagcgaga atcaaaaaaa aaaggatagg tgcagagact caatggaagc 60
tgttctaaca aatggagttg actgcattgg tagaggaatc gaatccttct atcgaaacta 120
cagaaaagat gaccctgtat acatacgtat acatactgaa atatcaaata attaatcacg 180
actcgaatcc ttatt 195
<210> 455
<211> 191
<212> DNA
<213> Magnolia dealbata_
<400> 455
caagggttca gaaagcgaga atcaaaaaag gataggtgca gagactcaat ggaagctgtt 60
ctaacaaatg gagttgactg cattggtaga ggaatcgaat ccttctatcg aaactacaga 120
aaagatgacc ctgtatacgt acgtatacat actgaaatat caaataatta atcacgactc 180
gaatccttat t 191
<210> 456
<211> 191
<212> DNA
<213> 厚朴(Magnolia officinalis)
<400> 456
caagggttca gaaagcgaga atcaaaaaag gataggtgca gagactcaat ggaagctgtt 60
ctaacaaatg gagttgactg cattggtaga ggaatcgaat ccttctatcg aaactacaga 120
aaagatgacc ctgtatacgt acgtatacat gctgaaatat caaataatta atcacgactc 180
gaatccttat t 191
<210> 457
<211> 191
<212> DNA
<213> Magnolia macrophylla
<400> 457
caagggttca gaaagcgaga atcaaaaaag gataggtgca gagactcaat ggaagctgtt 60
ctaacaaatg gagttgactg cattggtaga ggaatcgaat ccttctatcg aaactacaga 120
aaagatgacc ctgtatacgt acgtatacat actgaaatat caaataatta atcacgactc 180
gaatccttat t 191
<210> 458
<211> 191
<212> DNA
<213> Magnolia mexicana
<400> 458
caagggttca gaaagcgaga atcaaaaaag gataggtgca gagactcaat ggaagctgtt 60
ctaacaaatg gagttgactg cattggtgga ggaatcgaat ccttctatcg aaactacaga 120
aaagatgacc ctgtatacgt acgtatacat actgaaatat caaataatta atcacgactc 180
gaatccttat t 191
<210> 459
<211> 191
<212> DNA
<213> 夜香木兰(Magnolia coco)
<400> 459
caagggttca gaaagcgaga atcaaaaaag gataggtgca gagactcaat ggaagctgtt 60
ctaacaaatg gagttgactg cattggtaga ggaatcgaat ccttctatcg aaactacaga 120
aaagatgacc ctgtatacgt acgtatacat actgaaatat caaataatta atcacgactc 180
gaatccttat t 191
<210> 460
<211> 191
<212> DNA
<213> Magnolia yunnanensis
<400> 460
caagggttca gaaagcgaga atcaaaaaag gataggtgca gagactcaat ggaagctgtt 60
ctaacaaatg gagttgactg cattggtaga ggaatcgaat ccttctatcg aaactacaga 120
aaagatgacc ctgtatacgt acgtatacat actgaaatat caaataatta atcacgactc 180
gaatccttat t 191
<210> 461
<211> 191
<212> DNA
<213> Magnolia splendens
<400> 461
caagggttca gaaagcgaga atcaaaaaag gataggtgca gagactcaat ggaagctgtt 60
ctaacaaatg gagttgactg cattggtaga ggaatcgaat ccttctatcg aaactacaga 120
aaagatgact ctgtatacgt acgtatacat actgaaatat caaataatta atcacgactc 180
gaatccttat t 191
<210> 462
<211> 191
<212> DNA
<213> 山玉兰(Magnolia delavayi)
<400> 462
caagggttca gaaagcgaga atcaaaaaag gataggtgca gagactcaat ggaagctgtt 60
ctaacaaatg gagttgactg cattggtaga ggaatcgaat ccttctatcg aaactacaga 120
aaagatgact ctgtatacgt acgtatacat actgaaatac caaataatta atcacgactc 180
gaatccttat t 191
<210> 463
<211> 191
<212> DNA
<213> Magnolia kwangsiensis
<400> 463
caagggttca gaaagcgaga atcaaaaaag gataggtgca gagactcaat ggaagctgtt 60
ctaacaaatg gagttgactg cattggtaga ggaatcgaat ccttctatcg aaactacaga 120
aaagatgacc ctgtatacgt acgtatacat actgaaatat caaataatta atcacgactc 180
gaatccttat t 191
<210> 464
<211> 191
<212> DNA
<213> Magnolia pealiana
<400> 464
caagggttca gaaagcgaga atcaaaaaag gataggtgca gagactcaat ggaagctgtt 60
ctaacaaatg gagttgactg cattggtaga ggaatcgaat ccttctatcg aaactacaga 120
aaagatgacc ctgtatacgt acgtatacat actgaaatat caaataatta atcacgactc 180
gaatccttat t 191
<210> 465
<211> 159
<212> DNA
<213> 柳叶木兰(Magnolia salicifolia)
<400> 465
cacagtgcat atcattactc ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt 60
ccaggaccta gggaagattt tggaatgcaa tttgagtccc tttaattgac atagacccaa 120
gtcctctagt aggatgacgc atcgggaatg gtcgggata 159
<210> 466
<211> 159
<212> DNA
<213> 武当木兰(Magnolia sprengeri)
<400> 466
cacagtgcat atcattactc ttacacttac aaagccttct ttttgaagat ccaagaaatt 60
ccaggaccta ggtaagattt tggaatgcaa tttgagtccc tttaattgac atagacccaa 120
gtcctctagt aggatgacgc atcgggaatg gtcgggata 159
<210> 467
<211> 144
<212> DNA
<213> 皱叶木兰(Magnolia kobus)
<400> 467
cacagtgcat atcattactc ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt 60
ccaggaccta gggaagattt tggaatgcaa tttgagtccc tttaattgac atagacccaa 120
gtcccatcgg gaatggtcgg gata 144
<210> 468
<211> 159
<212> DNA
<213> 玉兰(Magnolia denudata)
<400> 468
cacagtgcat atcattactc ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt 60
ccaggaccta ggtaagattt tggaatgcaa tttgagtccc tttaattgac atagacccaa 120
gtcctctagt aggatgacgc atcgggaatg gtcgggata 159
<210> 469
<211> 159
<212> DNA
<213> 望春花(Magnolia biondii)
<400> 469
cacagtgcat atcattactc ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt 60
ccaggaccta gggaagattt tggaatgcaa tttgagtccc tttaattgac atagacccga 120
gtcctctagt aggatgacgc atcgggaatg gtcgggata 159
<210> 470
<211> 159
<212> DNA
<213> Magnolia dealbata
<400> 470
cacagtgcat atcattactc ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt 60
ccaggaccta ggtaagattt tggaatgctt tttgagtccc tttaattgac atagacccaa 120
gccctctagt aggatgccgc atcgggaatg gtcgggata 159
<210> 471
<211> 159
<212> DNA
<213> 西康玉兰(Magnolia wilsonii)
<400> 471
cacagtgcat atcattactc ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt 60
ccaggaccta ggtaagattt tggaatgctt tttgagtccc tttaattgac atagacccaa 120
gtcctctagt aggatgacgc atcgggaatg gtcgggata 159
<210> 472
<211> 159
<212> DNA
<213> 厚朴(Magnolia officinalis)
<400> 472
cacagtgcat atcattactc ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt 60
ccaggaccta ggtaagattt tggaatgctt tttgagtccc tttaattgac atagacccaa 120
gtcctctagt aggatgacgc atcgggaatg gtcgggata 159
<210> 473
<211> 159
<212> DNA
<213> Magnolia macrophylla
<400> 473
cacagtgcat atcattactc ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt 60
ccaggaccta ggtaagattt tggaatgctt tttgagtccc tttaattgac atagacccaa 120
gccctctagt aggatgacgc atcgggaatg gtcgggata 159
<210> 474
<211> 159
<212> DNA
<213> Magnolia mexicana
<400> 474
cacagtgcat atcattactc ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt 60
ccaggaccta ggtaagattt tggaatgctt tttgagtccc tttaattgac atagacccaa 120
gtcctctagt aggatgacgc atcgggaatg gtcgggata 159
<210> 475
<211> 158
<212> DNA
<213> 夜香木兰(Magnolia coco)
<400> 475
cacagtgcat atcattactc ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt 60
ccaggaccta ggtaagattt tggaatgctt tttgagtccc tttaattgac atagacccaa 120
gtcctctagt aggatgacca tcgggaatgg tcgggata 158
<210> 476
<211> 159
<212> DNA
<213> Magnolia yunnanensis
<400> 476
cacagtgcat atcattactc ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt 60
ccaggaccta ggtaagattt tggaatgctt tttgaatccc tttaattgac atagacccaa 120
gtcctctagt aggatgacgc atcgggaatg gtcgggata 159
<210> 477
<211> 159
<212> DNA
<213> 三瓣木兰(Magnolia tripetala)
<400> 477
cacagtgcat atcattactc ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt 60
ccaggaccta ggtaagattt tggaatgctt tttgagtccc tttaattgac atagacccaa 120
gtcctctagt aggatgacgc atcgggaatg gtcgggata 159
<210> 478
<211> 159
<212> DNA
<213> Magnolia sinica
<400> 478
cacagtgcat atcattactc ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt 60
ccaggaccta ggtaagattt tggaatgctt tttgaatccc tttaattgac atagacccaa 120
gtcctctagt aggatgacgc atcgggaatg gtcgggata 159
<210> 479
<211> 159
<212> DNA
<213> Magnolia cathcartii
<400> 479
cacagtgcat atcattactc ttacacttac aaagtcttct ttttgaagat ccaagaaatt 60
ccaggaccta ggtaagattt tggaatgctt tttgagtccc tttaattgac atagacccaa 120
gtcctctagt aggatgacgc atcgggaatg gtcgggata 159
<210> 480
<211> 104
<212> DNA
<213> 丁香(Syzygium aromaticum)
<400> 480
ccaaggaact ttaacaagag agcgatgctc ccgccgtccc rgacatrgtg cgcgtgcggg 60
atgccatgca atctcccatt attcataacg actctcggca acgg 104
<210> 481
<211> 104
<212> DNA
<213> 蒲桃(Syzygium jambos)
<400> 481
ccaaggaact ttaacaagag agcgatgctc ccgccgcccc agacatggtg cgtgcgcggg 60
atgccatgca atctcctatt attcataacg actctcggca acgg 104
<210> 482
<211> 104
<212> DNA
<213> Syzygium boonjee
<400> 482
ccaaggaact ttaacaagag agcgatgctc ccgccgcccc agacatggtg cgtgtgcggg 60
atgccatgca atctcctatt attcataacg actctcggca acgg 104
<210> 483
<211> 105
<212> DNA
<213> Syzygium tierneyanum
<400> 483
ccaaggaact ttaacaagag agcgatgctc ccgccgcccc agacatggtg cgtgcgcggg 60
atgccatgca atctccctat tattcataac gactctcggc aacgg 105
<210> 484
<211> 104
<212> DNA
<213> Syzygium aqueum
<400> 484
ccaaggaact ttaacaagag agcgatgctc ctgccgcccc agacatggtg cgcgcgcggg 60
atgccatgca atctcctatt attcataacg actctcggca acgg 104
<210> 485
<211> 104
<212> DNA
<213> 乌墨(Syzygium cumini)
<400> 485
ccaaggaact ttaacaagag agcgatgctc ccgtcgcccc agacatggtg cgtgggcggg 60
atgccatgca atctcctatt attcataacg actctcggca acgg 104
<210> 486
<211> 104
<212> DNA
<213> Syzygium diospyrifolium
<400> 486
ccaaggaact ttaacaagag agcgatgctc ccgtcgcccc agacatggtg cgtgtgcggg 60
atgccattca atctcccatt attcataacg actctcggca acgg 104
<210> 487
<211> 104
<212> DNA
<213> Syzygium fibrosum
<400> 487
ccaaggaact ttaacaagag agcgatgctc ccgccgcccc agacatggtg cgtgtgcggg 60
atgccatgca atctcctatt attcataacg actctcggca acgg 104
<210> 488
<211> 104
<212> DNA
<213> Syzygium guineense
<400> 488
ccaaggaact ttaacaagag agcgatgctc ccgtcgcccc aaacatggtg cgcgtgcggg 60
atgccatgca atctcctatt attcataacg actctcggca acgg 104
<210> 489
<211> 104
<212> DNA
<213> 红鳞蒲桃(Syzygium hancei)
<400> 489
ccaaggaact ttaacaagag agcgatgctc ccgtcgcccc agacatggtg cgcgtgcggg 60
atgccatgca atctcctatt attcataacg actctcggca acgg 104
<210> 490
<211> 104
<212> DNA
<213> 长苞蒲桃(Syzygium longipes)
<400> 490
ccaaggaact ttaacaagag agcgatgctc ccgtcgcccc agacatggtg cgtgtgcggg 60
atgccatgca atctcctatt agtcataacg actctcggca acgg 104
<210> 491
<211> 232
<212> DNA
<213> 钩藤(Uncaria rhynchophylla)
<400> 491
ctgcctgggc gtcacgcatc gcgtcgccgc ccccacctat cgtgtggggc ggcggatgtt 60
ggcctcccgt gccgtaaggc gcggccggcc taaatgagag tcctcggcga gggacgtcac 120
gacgagtggt ggttgaatgc cccgactcga gttttgttgt gtcggttccc atcgtcgtct 180
tcggctccac ggatgaccct agtgcgcgtt ctgtttgcag tcgcgccccg aa 232
<210> 492
<211> 232
<212> DNA
<213> 华钩藤(Uncaria sinensis)
<400> 492
ctgcctgggc gtcacgcatc gcgtcgccgc ccccacctat tgtgtggggc ggcggatgtt 60
ggcctcccgt gccgtaaggc gcggcctgcc taaatgagag tcctcggcga gggacgtcac 120
gacgagtggt ggttgaatgc cccgactcga gttttgttgt gtcggttccc atcgtcgtct 180
tcggctccac ggatgaccct agtgcgcgtt ctgtttgcag tcgcgccccg aa 232
<210> 493
<211> 232
<212> DNA
<213> 大叶钩藤(Uncaria macrophylla)
<400> 493
ctgcctgggc gtcacgcatc gcgtcgccgc ccccacccgt cgtgtggggc ggcggatgtt 60
ggcctcccgt gccgttaggc gcggccggcc taaatgagag tcctcggcga gggacgtcac 120
gacgagtggt ggttgaatgc cccgactcga gttttgtcgt gccggttccc atcgtcgtct 180
tcggctccac ggatgaccct agtgcgcgat ctgtttgcag tcgcgccccg aa 232
<210> 494
<211> 232
<212> DNA
<213> 攀茎钩藤(Uncaria scandens)
<400> 494
ctgcctgggc gtcacgcatc gcgtcgccgc ccccacccat cgtgtggggc ggcggatgtt 60
ggcctcccgt gctgtaaggc gcggccggcc taaatgagag tcctcggcga gggacgtcac 120
gacgagtggt ggttgaatgc cccgactcga gttttgttgt gccggttccc atcgtcgtct 180
tcggctccac ggatgaccct agtgcgcgat ctgtttgcag tcgcgccccg aa 232
<210> 495
<211> 232
<212> DNA
<213> 毛钩藤(Uncaria hirsuta)
<400> 495
ctgcctgggc gtcacgcatc gcgtcgccgc ccccacccat cgtgtggggc ggcggatgct 60
ggcctcccgt gccgtaaggc gcggccggcc taaatgagag tcctcggcga gggacgtcac 120
gacgagtggt ggttgaatgc cccgactcga gttttgttgt gccggttccc atcgtcgtct 180
tcggctccac ggatgaccct agtgcgcgat ctgtttgcag tcgcgccccg aa 232
<210> 496
<211> 232
<212> DNA
<213> 披针叶钩藤(Uncaria lancifolia)
<400> 496
ctgcctgggc gtcacgcatc gcgtcgccgc ccccacctgt cgtgtggggc ggcggatgtt 60
ggcctcccgt gccgtcaggc gcggccggcc taaatgagag tcctcggcga gggacgtcac 120
gacgagtggt ggttgaatgc cccgactcga gttttgttgt gccggttccc attgtcgtct 180
tcggctccac ggatgaccct agtgcgcgat ctgtttgcag tcgcgccccg aa 232
<210> 497
<211> 233
<212> DNA
<213> 白钩藤(Uncaria sessilifructus)
<400> 497
ctgcctgggc gtcacgcatc tcgtcgccgc ccccacctgt cgtgtggggc ggcggatgtt 60
ggcctcccgt gccgttcggc gcggccggcc taaatgagag tcctcggcga gggacgtcac 120
gacgagtggt ggttgaatgc ccccgactcg atttttgttg tgccggttcc cgtcgtcgta 180
ttcggctcca cggatgaccc tagtgcgcga tctgtttgca gtcgcgcccc gaa 233
<210> 498
<211> 232
<212> DNA
<213> 平滑钩藤(Uncaria laevigata)
<400> 498
ctgcctgggc gtcacgcatc gcgtcgccgc ccccacctgt cgtgtggggc ggcggatgtt 60
ggcctcccgt gccgttgggc gcggccggcc taaatgagag tcctcggcga gggacgtcac 120
gacgagtggt ggttgaatga cccgactcga gttttgttgt gccggttccc gtcgtcgtct 180
tcggctccac ggatgaccct agtgcgcgat ctgtttgcag tcgcgccccg aa 232
<210> 499
<211> 216
<212> DNA
<213> 香附子(Cyperus rotundus)
<400> 499
gcggaaggat cattgtcgtc gccccgaaac acgaccgcga acacgtaacg taaagcctcc 60
gggggggcct cccccccgga cccgccggcc ccggcccctc gggccgggtg ccggaacacg 120
gcgcggactg tcgccaagga acaccgaact gccccaggca cgccgcagtc cgcggcgccg 180
ccggggccaa gcaaacagta cgactctcgg caacgg 216
<210> 500
<211> 216
<212> DNA
<213> 香附子(Cyperus rotundus)
<400> 500
gcggaaggat cattgtcgtc gccacgaaac acgaccgcga acacgtaacg taaagcctcc 60
gggggggcct cctccccgga cccgccggcc ccggcccctc kggtcgggtg ccggaacacg 120
gcgcggactg tcgccaagga acaccgatct gccccgggca cgccgcactc cgcggcgccg 180
ccgaggccaa gcaaacagta cgactctcgg caacgg 216
<210> 501
<211> 216
<212> DNA
<213> Cyperus articulatus
<400> 501
gcggaaggat cattgtcgtc gcctcgaaac acgaccgcga acacgtaacg taaagcctcc 60
gggggggcct cccccccgga cccgccggcc cccggcccct cggccgggtg ccggaacacg 120
gcgcggactg tcgccaagga acaccgatct gccccgggca cgccgcactc cgcggcgccg 180
ccgaggccaa gcaaacagta cgactctcgg caacgg 216
<210> 502
<211> 217
<212> DNA
<213> Cyperus insularis
<400> 502
gcggaaggat cattgtcgtc gccccgaaac acgaccgcga acacgtaacg taaagccgcc 60
ggggaggggc ctcctccccg gacccgccgg ccccggcccc ccggccgggc gccggaacac 120
ggcgcggact gtcgccaagg aacaccgatc tgcccacggc acgccgcgct ccgcggcgct 180
gccgaggcca tagaaacagt acgactctcg gcaacgg 217
<210> 503
<211> 217
<212> DNA
<213> Cyperus ustulatus
<400> 503
gcggaaggat cattgtcgtc gccccgaaac acgaccgcga acacgtaacg taaagccgcc 60
ggggaggggc ctcctccccg gacccgccgg ccccggcccc ycggccgggc gccggaacac 120
ggcgcggact gtcgccaagg aacaccgatc tgcccacggc acgccgcgct ccgcggcgct 180
gccgaggcca yagaaacagt acgactctcg gcaacgg 217
<210> 504
<211> 216
<212> DNA
<213> Cyperus corymbosus
<400> 504
gcggaaggat cattgtcgtc gcctcgaaac acgaccgcga acacgtaacg caaagcctcc 60
gggggggcct cccccccgga cccgccggcc cccggcccct cggccgggtg ccggaacacg 120
gcgcggactg tcgccaagga acaccgatct gccccgggca cgccgcattc cgcggcgccg 180
ccgaggccaa gcaaacagta cgactctcgg caacgg 216
<210> 505
<211> 223
<212> DNA
<213> 香附子(Cyperus rotundus)
<400> 505
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggg accctcccga 60
gggcacgcct gcctgggcgt tagaagccca tcaacgctcg gtcacccgac cgcacgcgga 120
cagtggccct ccgagccgcg taggcgcggc gggccgaagc gcgaggccgt cgaccgcgtc 180
gggggcggca agtggtgggc tacagcgcat gccgaccccg acc 223
<210> 506
<211> 223
<212> DNA
<213> 香附子(Cyperus rotundus)
<400> 506
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggg accctcccga 60
gggcacgcct gcctgggcgt tagaagccca tcmacgctcg gtcacccgac cgcaygcgga 120
cagtggccct ccgagccgtg taggcgcggc gggccgaagc gcgaggccgt cgaccgcgtc 180
gggggcggca agtggtgggc tacagcgcat gccgaccccg acc 223
<210> 507
<211> 223
<212> DNA
<213> Cyperus articulatus
<400> 507
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggg accctcccga 60
gggcacgcct gcctgggcgt tagaagccca tcaacgctcg gtcacccgrc cgcacgcgga 120
cagtggccct ccgagccgcg taggcgcggc gggctgaagc gcgaggccgt cgaccgcgtc 180
gggagcggca agtggtgggc tacagcgcat gccgaccccg acc 223
<210> 508
<211> 223
<212> DNA
<213> Cyperus insularis
<400> 508
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggg accctcccga 60
gggcacgcct gcctgggcgt tagaagccca tcaacgcccg gtcacccgac cgcgtgcgga 120
cagtggcccc ccgagccgca gaggcacggc gggctgaagc gcgaggccgt cgaccgcgtc 180
gggagcggca agtggtgggc cacagcgcat gccgaccccg acc 223
<210> 509
<211> 223
<212> DNA
<213> Cyperus ustulatus
<400> 509
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggg accctcccga 60
gggcacgcct gcctgggcgt tagaagccca tcaacgcccg gtcacccgac cgcgtgcgga 120
cagtggcccc ccgagccgca gaggcacggc gggctgaagc gcgaggccgt cgaccgcgtc 180
gggagcggca agtggtgggc cacagcgcat gccgaccccg acc 223
<210> 510
<211> 223
<212> DNA
<213> Cyperus corymbosus
<400> 510
gcagaatccc gtgaaccatc gagtctttga acgcaagttg cgcccgaggg accctcccga 60
gggcacgcct gcctgggcgt tagaagccca tcaacgctcg gtcacccgac cgcacgcgga 120
cagtggccct ccgagccgcg taggcacggc gggctgaagc gcgaggccgt cgaccgcgtc 180
gggagcggca agtggtgggc tacagcgcat gccgaccccg acc 223
<210> 511
<211> 258
<212> DNA
<213> 日本黄连(Coptis japonica)
<400> 511
gcgttggaga gaccgtttcc tattttgtgc tgaagcaatt tataaagcac aagccgaaac 60
cggtgaaatc aaaggacatt acttgaatgc tactgcgggt acatgcgaag aaatgatgaa 120
aagggctgta tttgccagag agttgggggt gcccatcgta atgcatgact acttaacggg 180
gggattcacc gcaaatacta gcttgtctca ttattgccga gataatggtc tacttcttca 240
cattcaccgc gcaatgca 258
<210> 512
<211> 258
<212> DNA
<213> 黄连(Coptis chinensis)
<400> 512
gcgttggaga gaccgtttcc tattttgtgc tgaagcaatt tataaagcac aagccgaaac 60
cggtgaaatc aaaggacatt acttgaatgc tactgcgggt acatgcgaag aaatgataaa 120
aagggctgta tttgccagag agttgggagt gcccatcgta atgcatgact acttaacggg 180
gggattcacc gcaaatacta gcttgtctca ttattgccga gataatggtc tacttcttca 240
cattcaccgc gcaatgca 258
<210> 513
<211> 258
<212> DNA
<213> 三角叶黄连(Coptis deltoidea)
<400> 513
gcgttggaga gaccgtttcc tattttgtgc tgaagcaatt tataaagcac aagccgaaac 60
cggtgaaatc aaaggacatt acttgaatgc tactgcgggt acatgcgaag aaatgataaa 120
aagggctgta tttgccagag agttgggggt gcccatcgta atgcatgact acttaacagg 180
gggattcacc gcaaatacta gcttgtctca ttattgccga gataatggtc tacttcttca 240
cattcaccgc gcaatgca 258
<210> 514
<211> 258
<212> DNA
<213> 云南黄连(Coptis teeta)
<400> 514
gcgttggaga gaccgtttcc tattttgtgc tgaagcaatt tataaagcac aagccgaaac 60
cggtgaaatc aaaggacatt acttgaatgc tactgcgggt acatgcgaag aaatgataaa 120
aagggctgta tttgccagag agttgggggt gcccatcgta atgcatgact acttaacggg 180
gggattcacc gcaaatacta gcttgtctca ttattgccga gataatggtc tacttcttca 240
cattcaccgc gcaatgca 258
<210> 515
<211> 258
<212> DNA
<213> 峨嵋黄连(Coptis omeiensis)
<400> 515
gcgttggaga gaccgtttcc tattttgtgc tgaagcaatt tataaagcac aagccgaaac 60
cggtgaaatc aaaggacatt acttgaatgc tactgcgggt acatgcgaag aaatgataaa 120
aagggctgta tttgccagag agttgggggt gcccatcgta atgcatgact acttaacggg 180
gggattcacc gcaaatacta gcttgtctca ttattgccga gataatggtc tacttcttca 240
cattcaccgc gcaatgca 258
<210> 516
<211> 258
<212> DNA
<213> 五裂黄连(Coptis quinquesecta)
<400> 516
gcgttggaga gaccgtttcc tattttgtgc tgaagcaatt tataaagcac aagccgaaac 60
cggtgaaatc aaaggacatt acttgaatgc tactgcgggt acatgcgaag aaatgataaa 120
aagggctgta tttgccagag agttgggggt gcccatcgta atgcatgact acttaacggg 180
gggattcacc gcaaatacta gcttgtctca ttattgccga gataatggtc tacttcttca 240
cattcaccgc gcaatgca 258
<210> 517
<211> 219
<212> DNA
<213> 日本黄连(Coptis japonica)
<400> 517
gggttcaaag cgctacgcgc tctacgtttg gaggatttgc gaattcctgt tgcttatgtt 60
aaaactttcc agggaccgcc ccatggtatc caagttgaga gagataaatt gaacaagtat 120
ggtcgtcccc tattgggatg tactattaaa ccaaaattgg gattatctgc taagaactac 180
ggtagagcgg tttatgaatg tctccgcggt ggacttgat 219
<210> 518
<211> 219
<212> DNA
<213> 黄连(Coptis chinensis)
<400> 518
gggttcaaag cgctacgcgc tctacgtttg gaggatctgc gaattcctgt tgcttatgtt 60
aaaactttcc aggggccgcc ccatggtatc caagttgaga gagataaatt gaacaagtat 120
ggtcgtcccc tattgggatg tactattaaa ccaaaattgg gattatctgc taagaactac 180
ggtagagcgg tttatgaatg tctccgcggt ggacttgat 219
<210> 519
<211> 219
<212> DNA
<213> 三角叶黄连(Coptis deltoidea)
<400> 519
gggttcaaag cgctacgcgc tctacgtttg gaggatctgc gaattcctgt tgcttatgtt 60
aaaactttcc aggggccgcc ccatggtatc caagttgaga gagataaatt gaacaagtat 120
ggtcgtcccc tattgggatg tactattaaa ccaaaattgg gattatctgc taagaactac 180
ggtagagcgg tttatgaatg tctccgcggt ggacttgat 219
<210> 520
<211> 219
<212> DNA
<213> 云南黄连(Coptis teeta)
<400> 520
gggttcaaag cgctacgcgc tctacgtttg gaggatctgc gaattcctgt tgcttatgtt 60
aaaactttcc aggggccgcc ccatggtatc caagttgaga gagataaatt gaacaagtat 120
ggtcgtcccc tattgggatg tactattaaa ccaaaattgg gattatctgc taagaactat 180
ggtagagcgg tttatgaatg tctccgcggt ggacttgat 219
<210> 521
<211> 219
<212> DNA
<213> 峨嵋黄连(Coptis omeiensis)
<400> 521
gggttcaaag cgctacgcgc tctacgtttg gaggatctgc gaattcctgt tgcttatgtt 60
aaaactttcc aggggccgcc ccatggtatc caagttgaga gagataaatt gaacaagtat 120
ggtcgtcccc tattgggatg tactattaaa ccaaaattgg gattatctgc taagaactac 180
ggtagagcgg tttatgaatg tctccgcggt ggacttgat 219
<210> 522
<211> 219
<212> DNA
<213> 五裂黄连(Coptis quinquesecta)
<400> 522
gggttcaaag cgctacgcgc tctacgtttg gaggatctgc gaattcctgt tgcttatgtt 60
aaaactttcc agggaccgcc ccatggtatc caagttgaga gagataaatt gaacaagtat 120
ggtcgtcccc tattgggatg tactattaaa ccaaaattgg gattatctgc taagaactac 180
ggtagagcgg tttatgaatg tctccgcggt ggacttgat 219
<210> 523
<211> 162
<212> DNA
<213> 姜(Zingiber officinale)
<400> 523
cttctggagt ccttcttgag cgaatacatt tttatgtaaa aatagaacat cttggagtgt 60
accgaatttt ttgtcagaag actctatgga ttttcaagga tcctttcata cattatattc 120
gatatcaagg aaaatcgatt ctgggttcaa gagggactca tt 162
<210> 524
<211> 162
<212> DNA
<213> Zingiber montanum
<400> 524
cttctggagt ccttcttgag cgaatacatt tttatgtaaa aatagaacat cttggagtgt 60
gccgaatttt ttgtcagaag actctatgga ttttcaagga tcctttcata cattatattc 120
gatatcaagg aaaatcgatt ctgggttcaa gagggactca tt 162
<210> 525
<211> 162
<212> DNA
<213> 多毛姜(Zingiber densissimum)
<400> 525
cttctggagt ccttcttgag cgaatacatt tttatgtaaa aatagaacat cttggagtgt 60
gccgaatttt ttgtcagaag actctatgga ttttcaagga tcctttcata cattatattc 120
gatatcaagg aaaatcgatt ctgggttcaa gagggactca tt 162
<210> 526
<211> 162
<212> DNA
<213> 圆瓣姜(Zingiber orbiculatum)
<400> 526
cttctggagt ccttcttgag cgaatacatt tttatgtaaa aatagaacat cttggagtgt 60
gccgaatttt ttgtcagaag actctatgga ttttcaagga tcctttcata cattatattc 120
gatatcaagg aaaatcgatt ctgggttcaa gagggactca tt 162
<210> 527
<211> 162
<212> DNA
<213> Zingiber rubens
<400> 527
cttctggagt ccttcttgag cgaatacatt tttatgtaaa aatagaacat cttggagtgt 60
gccgaatttt ttgtcagaag actctatgga ttttcaagga tcctttcata cattatattc 120
gatatcaagg aaaatcgatt ctgggttcaa gagggactca tt 162
<210> 528
<211> 162
<212> DNA
<213> Zingiber sulphureum
<400> 528
cttctggagt ccttcttgag cgaatacatt tttatgtaaa aatagaacat cttagagtgt 60
gccgaatttt ttgtcagaag actctatgga ttttcaagga tcctttcata cattatattc 120
gatatcaagg aaaatcgatt ctgggttcaa gagggactca tt 162
<210> 529
<211> 162
<212> DNA
<213> 珊瑚姜(Zingiber corallinum)
<400> 529
cttctggagt ccttcttgag cgaatacatt tttatgtaaa aatagaacat tttggagtgt 60
gccgaatttt ttgtcagaag actctatgga ttttcaagga tcctttcata cattatattc 120
gatatcaagg aaaatcgatt ctgggttcaa gagggactca tt 162
<210> 530
<211> 162
<212> DNA
<213> 红球姜(Zingiber zerumbet)
<400> 530
cttctggagt ccttcttgag cgaatacatt tttatgtaaa aatagaacat cttggagtgt 60
gccgaatttt ttgtcagaag actctatgga ttttcaagga tcctttcata cattatattc 120
gatatcaagg aaaatcaatt ctgggttcaa gagggactca tt 162
<210> 531
<211> 162
<212> DNA
<213> Zingiber engganoensis
<400> 531
cttctggagt ccttcttgag cgaatacatt tttatgtaaa aatagaacat cttggagtgt 60
gccgaatttt ttgtcagaag actctatgga ttttcaagga tcctttcata cattatattc 120
gatataaagg aaaatccatt ctgggttcaa gagggactca tt 162
<210> 532
<211> 360
<212> DNA
<213> 栀子(Gardenia jasminoides)
<400> 532
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcaagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccatcag gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cacccccctc ccgcgggggc ggcggagact ggcctcccgt 180
gccccggggc gcggccggcc caaatgagag ttcctcggcg aggggcgtca cgactggtgg 240
tggttgagtc cctcaactcg agtcgtcgtc gtgccggcaa accccagccg cggtcccgtg 300
accccgaagc tcccgcgagc ctcgaccgcg accccaggtc aggcgggatt acccgctgag 360
<210> 533
<211> 347
<212> DNA
<213> 南非栀子(Gardenia thunbergia)
<400> 533
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccatcag gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cacccccctc cgcgggggcg gcggagactg gcctcccgtg 180
ccccggggcg cggccggccc aaatgagagt tcctcggcga ggggcgtcac gactggtggt 240
ggttgagtcc ctcaactcga gtcgtcgtcg tgccggcaaa ccccagccgc ggtcccgtga 300
ccccgaagct ccctcgagcc tcgacccagg cgggattacc cgctgag 347
<210> 534
<211> 358
<212> DNA
<213> Gardenia hansemannii
<400> 534
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccatcag gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cacccccctc ccgcgggggg cggcggagac tggcctcccg 180
tgcccccggg gcgcggccgg cccaaatgag agttcctcgg cgaggggcgt cacgactggt 240
ggtggttgag tccctcaact cgagtcgtcg tcgtgccggc aagacccccg ccgcggtccg 300
gctcccacga cccccgaagc tcccgcgagc ctcgacccag gcgggattac ccgctgag 358
<210> 535
<211> 360
<212> DNA
<213> Gardenia fucata
<400> 535
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcacgtgaac 60
catcaagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccatcag gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cacccccctc ccgcgggggc ggcggagact ggcctcccgt 180
gcccctgggc gcggccggcc caaacgagag ttcctcggcg aggggcgtca cgactggtgg 240
tggttgagtc cctcaactcg agtcgtcgtc gtgccggcaa ccccccgccg cagtccggct 300
cccacggccc cgaagctccc gcgagcctcg accgcgaccc aggcgggatt acccgctgag 360
<210> 536
<211> 370
<212> DNA
<213> Coptosperma borbonicum
<400> 536
gcatcgatga agaacgcagc gaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagtct ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccatcag gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cacccccctc ccgcgggggg cggcggagac tggcctcccg 180
tgcccccggg gcgcggccgg cccaaatgag agttcctcgg cgaggggcgt cacgactggt 240
ggtggttgag tccctcaact cgagtcgtcg tcgtgccggc aagacccccg ccgcggtccg 300
gctcccacga cccccgaagc tcccgcgagc ctcgaccgcg accccaggtc aggcgggatt 360
acccgctgag 370
<210> 537
<211> 178
<212> DNA
<213> 川黄檗(Phellodendron chinense)
<400> 537
gtgcgggact cgtcccgttc cccgcggggg cgaccaacga acccccggcg cggactgcgc 60
caaggaaatc taacgagaga gcacgccccc ggggcccccg gacacggcga gccccgggac 120
gcggcgcctt ctttcactct atctataacg actctcggca acggatatct cggctctc 178
<210> 538
<211> 178
<212> DNA
<213> 黄檗(Phellodendron amurense)
<400> 538
gtgcgggact cgtcccgttc cccgcggggg cgaccaacga acccccggcg cggactgcgc 60
caaggaaatc taacgagaga gcacgccccc ggggcccccg gacacggcga gccccgggac 120
gcggcgcctt ctttcactct atctataacg actctcggca acggatatct cggctctc 178
<210> 539
<211> 177
<212> DNA
<213> 楝叶吴萸(Tetradium glabrifolium)
<400> 539
gtgcgggact cgtcccgttc ccctcggggg cgaccaacga acccccggcg cggactgcgc 60
caaggaaatc taacgagaga gcacgctccc ggggcaccgg acacggtgag ccccgggatg 120
cggcgccttc tttcactcta tctgtaacga ctctcggcaa cggatatctc ggctctc 177
<210> 540
<211> 177
<212> DNA
<213> 青花椒(Zanthoxylum schinifolium)
<400> 540
gtgcgggact cgtcccgttc cccgcggggg cggataacga acccccggcg cggaatgcgc 60
caaggaaatc taacgagaga gcacgctccc ggggccccgg acacggtgtg ctccgggacg 120
cgtcgccttc tttcactcta tctgaaacga ctctcggcaa cggatatctc ggctctc 177
<210> 541
<211> 215
<212> DNA
<213> 厚朴(Magnolia officinalis)
<400> 541
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gtatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcatgtagg aatctgtata 120
tcttgtatat atagctagac gtatatttct atatatagaa gataatgcct ttgctttctt 180
tttataacga atccttgacc tttaccgaat cggcc 215
<210> 542
<211> 215
<212> DNA
<213> 凹叶厚朴(Magnolia officinalis var.biloba)
<400> 542
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gtatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcatgtagg aatctgtata 120
tcttgtatat atagctagac gtatatttct atatatagaa gataatgcct ttgctttctt 180
tttataacga atccttgacc tttaccgaat cggcc 215
<210> 543
<211> 215
<212> DNA
<213> 日本厚朴(Magnolia obovata)
<400> 543
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gtatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcatgtagg aatctgtata 120
tcttgtatat atagctagac gtatatttct atatatagaa gataatgcct ttgctttctt 180
tttataacga atccttgacc tttaccgaat cggcc 215
<210> 544
<211> 215
<212> DNA
<213> 三瓣木兰(Magnolia tripetala)
<400> 544
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gtatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcatgtagg aatctgtata 120
tcttgtatat atagctagac gtatatttct atatatagaa gataatgtct ttgctttctt 180
tttataacga atccttgacc tttaccgaat cggcc 215
<210> 545
<211> 215
<212> DNA
<213> 尖头木兰(Magnolia acuminata)
<400> 545
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gtatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcacgtagg aatctgtata 120
tcttgtatat atagctagac gtatatttct atatatagaa gataatgcct ttgctttatt 180
tttataacga atccttgacc tttaccgaat cggcc 215
<210> 546
<211> 215
<212> DNA
<213> 落叶木莲(Magnolia decidua)
<400> 546
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gcatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcacgtagg aatctgtata 120
tcttgtatat atagctagac gtatatttct atatatagaa gataatgcct ttgctttctt 180
tttataacga atccttgacc tttaccgaat cggcc 215
<210> 547
<211> 184
<212> DNA
<213> 柳叶木兰(Magnolia salicifolia)
<400> 547
catccagctc ctcgcgaatg tgtatttatt gatatacact aaatcatggg atttattgat 60
attgaatctg tcacgtagga atctgtatat cttgtatata tagctagacg tatatttcta 120
tatatagaag ataatgcctt tgctttattt ttataacgaa tccttgacct ttaccgaatc 180
ggcc 184
<210> 548
<211> 116
<212> DNA
<213> 厚朴(Magnolia officinalis)
<400> 548
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gtatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcatgtagg aatctg 116
<210> 549
<211> 116
<212> DNA
<213> 凹叶厚朴(Magnolia officinalis var.biloba)
<400> 549
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gtatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcatgtagg aatctg 116
<210> 550
<211> 116
<212> DNA
<213> 日本厚朴(Magnolia obovata)
<400> 550
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gtatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcatgtagg aatctg 116
<210> 551
<211> 116
<212> DNA
<213> 三瓣木兰(Magnolia tripetala)
<400> 551
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gtatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcatgtagg aatctg 116
<210> 552
<211> 116
<212> DNA
<213> 尖头木兰(Magnolia acuminata)
<400> 552
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gtatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcatgtagg aatctg 116
<210> 553
<211> 116
<212> DNA
<213> 落叶木莲(Magnolia decidua)
<400> 553
catccagctc ctcgcgaatg aaacgattca ataatattac agatacacat gcatttattg 60
aataatacac taaatcatgg gatttattga tattgaatct gtcatgtagg aatctg 116
<210> 554
<211> 85
<212> DNA
<213> 柳叶木兰(Magnolia salicifolia)
<400> 554
catccagctc ctcgcgaatg tgtatttatt gatatacact aaatcatggg atttattgat 60
attgaatctg tcatgtagga atctg 85
<210> 555
<211> 121
<212> DNA
<213> 厚朴(Magnolia officinalis)
<400> 555
gaatctgtca tgtaggaatc tgtatatctt gtatatatag ctagacgtat atttctatat 60
atagaagata atgcctttgc tttcttttta taacgaatcc ttgaccttta ccgaatcggc 120
c 121
<210> 556
<211> 121
<212> DNA
<213> 凹叶厚朴(Magnolia officinalis var.biloba)
<400> 556
gaatctgtca tgtaggaatc tgtatatctt gtatatatag ctagacgtat atttctatat 60
atagaagata atgcctttgc tttcttttta taacgaatcc ttgaccttta ccgaatcggc 120
c 121
<210> 557
<211> 121
<212> DNA
<213> 日本厚朴(Magnolia obovata)
<400> 557
gaatctgtca tgtaggaatc tgtatatctt gtatatatag ctagacgtat atttctatat 60
atagaagata atgcctttgc tttcttttta taacgaatcc ttgaccttta ccgaatcggc 120
c 121
<210> 558
<211> 121
<212> DNA
<213> 三瓣木兰(Magnolia tripetala)
<400> 558
gaatctgtca tgtaggaatc tgtatatctt gtatatatag ctagacgtat atttctatat 60
atagaagata atgtctttgc tttcttttta taacgaatcc ttgaccttta ccgaatcggc 120
c 121
<210> 559
<211> 121
<212> DNA
<213> 尖头木兰(Magnolia acuminata)
<400> 559
gaatctgtca tgtaggaatc tgtatatctt gtatatatag ctagacgtat atttctatat 60
atagaagata atgcctttgc tttattttta taacgaatcc ttgaccttta ccgaatcggc 120
c 121
<210> 560
<211> 121
<212> DNA
<213> 落叶木莲(Magnolia decidua)
<400> 560
gaatctgtca tgtaggaatc tgtatatctt gtatatatag ctagacgtat atttctatat 60
atagaagata atgcctttgc tttcttttta taacgaatcc ttgaccttta ccgaatcggc 120
c 121
<210> 561
<211> 121
<212> DNA
<213> 柳叶木兰(Magnolia salicifolia)
<400> 561
gaatctgtca tgtaggaatc tgtatatctt gtatatatag ctagacgtat atttctatat 60
atagaagata atgcctttgc tttattttta taacgaatcc ttgaccttta ccgaatcggc 120
c 121
<210> 562
<211> 198
<212> DNA
<213> 东方泽泻(Alisma orientale)
<400> 562
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccaaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaacgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc cttggctttg tgctgcccgc tcacacccgg 120
cctctccacc cgcacgacat tgtgggcttc tgctcgcggt gcctgtgtgg tgcgtttggc 180
accaaaacaa atccccgg 198
<210> 563
<211> 198
<212> DNA
<213> 东方泽泻(Alisma orientale)
<400> 563
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccaaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaatgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc cttggctttg tgctgcccgc tcacacccgg 120
cctctccacc cgcacgacat tgtgggcttc tgctcgcggt gcctgtgtgg tgcgtttggc 180
accaaaacaa atccccgg 198
<210> 564
<211> 198
<212> DNA
<213> Alisma triviale
<400> 564
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccaaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaacgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc cttggctttg tgctgcccgt ttacacccgg 120
cctctccacc cgcacgacat tgtgggcttc tgctcgcggt gcctgtgtgg tgcgtttggc 180
accaaaacaa atccccgg 198
<210> 565
<211> 198
<212> DNA
<213> Alisma subcordatum
<400> 565
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccaaac gtttcatttg ttgaactcgt 60
aaacgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc cttggctttg tgctgcccgc tcacacccgg 120
cctctccacc cgcacgacat tgtgggcttc tgctcgcggt gcctgtgtgg tgcgtttggc 180
accaaaacaa atccccgg 198
<210> 566
<211> 199
<212> DNA
<213> 草泽泻(Alisma gramineum)
<400> 566
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccgaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaacgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc ccttggcttt gtgctgcccg ctcacacccg 120
gcctctccac ccgcgcggca ttgtgggctt ctgctcgcgg tgcccgtgcg gtgcgtttgg 180
caccaaaaca aatccccgg 199
<210> 567
<211> 199
<212> DNA
<213> 膜果泽泻(Alisma lanceolatum)
<400> 567
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccgaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaacgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc ccttggcttt gtgctgcccg ctcacacccg 120
gcctctccac ccgcgcggca ttgtgggctt ctgctcgcgg tgcccgtgcg gtgcgtttgg 180
caccaaaaca aatccccgg 199
<210> 568
<211> 199
<212> DNA
<213> Alisma wahlenbergii
<400> 568
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccgaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaacgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc ccttggcttt gtgctgcccg ctcacacccg 120
gcctctccac ccgcgcggca ttgtgggctt ctgctcgcgg tgcccgtgcg gtgcgtttgg 180
caccaaaaca aatccccgg 199
<210> 569
<211> 199
<212> DNA
<213> 草泽泻(Alisma gramineum)
<400> 569
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccgaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaacgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc ccttggcttt gtgctgcccg ctcacacccg 120
gcctctccac ccgcgcggca ttgtgggctt ctgctcgcgg tgcccgtgcg gtgcgtttgg 180
caccaaaaca aatccccgg 199
<210> 570
<211> 199
<212> DNA
<213> Alisma rariflorum
<400> 570
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccgaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaacgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc ccttggcttt gtgctgcccg ctcacacccg 120
gcctctccac ccgcgcggca ttgtgggctt ctgctcgcgg tgcccgtgcg gtgtgtttgg 180
caccaaaaca aatccccgg 199
<210> 571
<211> 198
<212> DNA
<213> 膜果泽泻(Alisma lanceolatum)
<400> 571
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccgaac gcttcatatg ttgaacccgt 60
aaacgtgacg tgtgggcggg tgtctcatgc cttggctttg tgctgcctgc tcacacccgg 120
ccactccact cgcgcgacat tgtgggcttc tgctcgctgt gcccgtgcag tgcgtttggc 180
accaaaacaa atccccgg 198
<210> 572
<211> 239
<212> DNA
<213> 东方泽泻(Alisma orientale)
<400> 572
cggtgggctg aaggatgtgg agtcggtccg tccaacgtta ttgggcatga ctgtgctggg 60
tcgctgctgc tactgctcgt tgctcgctgg gtgcggcagt cttagcaaat gcgggcatcg 120
tcgttgtgtc gagtagcctt gttgtcggac tcttacgcca gtaaagttac cacgattggt 180
atatcagcgg tcacaccgtt ggttcctcat attgcgaccc caagtcaggc gggaacacc 239
<210> 573
<211> 239
<212> DNA
<213> 东方泽泻(Alisma orientale)
<400> 573
cggtgggctg aaggatgtgg agtcggtccg tccaacgtta ttgggcatga ctgtgctggg 60
tcgctgcagc tactgctcgt tgctcgctgg gtgcggcagt cttagcaaat gcgggcatcg 120
tcgttgtgtc gagtagcctt gttgtcggac tcttacgcca gtaaagttac cacgattggt 180
atatcagcgg tcacaccgtt ggttcctcat attgcgaccc caagtcaggc gggaacacc 239
<210> 574
<211> 101
<212> DNA
<213> 窄叶泽泻(Alisma canaliculatum)
<400> 574
cggtgggctg aaggatgtgg agtcggtccg tccaatgtta ttgggcatga ctgtgctggg 60
tcgctgctgc tactgctcgt cccaagtcag gcgggaacac c 101
<210> 575
<211> 234
<212> DNA
<213> 小泽泻(Alisma nanum)
<400> 575
cggtgggctg aaggatgtgg agtctgtccg tccaaagtta ttgggcatga ctgtgctggg 60
tcgctgctgc taatgctcgt tgctcgctgg tgcggaagtt taacaatgcg ggatcgtcgt 120
ttgtccagta gccttgttgt cggactctta cgccagtaaa gttaccacga ttggtatatc 180
agcggtcaca ccgttggttc ctcatattgc gaccccaagt caggcgggaa cacc 234
<210> 576
<211> 101
<212> DNA
<213> Alisma rariflorum
<400> 576
cggtgggctg aaggatgtgg agtcggtccg tccaacgtta ttgggcatga ctgtgctggg 60
tcgctgctgg tactgctcgt cccaagtcag gcgggaacac c 101
<210> 577
<211> 129
<212> DNA
<213> 东方泽泻(Alisma orientale)
<400> 577
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccaaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaacgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc cttggctttg tgctgcccgc tcacacccgg 120
cctctccac 129
<210> 578
<211> 129
<212> DNA
<213> 东方泽泻(Alisma orientale)
<400> 578
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccaaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaatgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc cttggctttg tgctgcccgc tcacacccgg 120
cctctccac 129
<210> 579
<211> 129
<212> DNA
<213> Alisma subcordatum
<400> 579
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccaaac gtttcatttg ttgaactcgt 60
aaacgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc cttggctttg tgctgcccgc tcacacccgg 120
cctctccac 129
<210> 580
<211> 130
<212> DNA
<213> 膜果泽泻(Alisma lanceolatum)
<400> 580
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccgaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaacgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc ccttggcttt gtgctgcccg ctcacacccg 120
gcctctccac 130
<210> 581
<211> 130
<212> DNA
<213> 草泽泻(Alisma gramineum)
<400> 581
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccgaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaacgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc ccttggcttt gtgctgcccg ctcacacccg 120
gcctctccac 130
<210> 582
<211> 130
<212> DNA
<213> Alisma wahlenbergii
<400> 582
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccgaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaacgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc ccttggcttt gtgctgcccg ctcacacccg 120
gcctctccac 130
<210> 583
<211> 130
<212> DNA
<213> Alisma rariflorum
<400> 583
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccgaac gcttcatttg ttgaactcgt 60
aaacgtgatg tgtgggcggg tgtctcatgc ccttggcttt gtgctgcccg ctcacacccg 120
gcctctccac 130
<210> 584
<211> 129
<212> DNA
<213> 膜果泽泻(Alisma lanceolatum)
<400> 584
gtaggtgaac ctgcggaagg atcattgtcg agacccgaac gcttcatatg ttgaacccgt 60
aaacgtgacg tgtgggcggg tgtctcatgc cttggctttg tgctgcctgc tcacacccgg 120
cctctccac 129
<210> 585
<211> 131
<212> DNA
<213> 东方泽泻(Alisma orientale)
<400> 585
cggtgggctg aaggatgtgg agtcggtccg tccaacgtta ttgggcatga ctgtgctggg 60
tcgctgctgc tactgctcgt tgctcgctgg gtgcggcagt cttagcaaat gcgggcatcg 120
tcgttgtgtc g 131
<210> 586
<211> 131
<212> DNA
<213> 东方泽泻(Alisma orientale)
<400> 586
cggtgggctg aaggatgtgg agtcggtccg tccaacgtta ttgggcatga ctgtgctggg 60
tcgctgcagc tactgctcgt tgctcgctgg gtgcggcagt cttagcaaat gcgggcatcg 120
tcgttgtgtc g 131
<210> 587
<211> 100
<212> DNA
<213> 窄叶泽泻(Alisma canaliculatum)
<400> 587
cggtgggctg aaggatgtgg agtcggtccg tccaatgtta ttgggcatga ctgtgctggg 60
tcgctgctgc tactgctcgt cgggcatcgt cgttgtgtcg 100
<210> 588
<211> 128
<212> DNA
<213> 小泽泻(Alisma nanum)
<400> 588
cggtgggctg aaggatgtgg agtctgtccg tccaaagtta ttgggcatga ctgtgctggg 60
tcgctgctgc taatgctcgt tgctcgctgg tgcggaagtt taacaatgcg ggcatcgtcg 120
ttgtgtcg 128
<210> 589
<211> 100
<212> DNA
<213> Alisma rariflorum
<400> 589
cggtgggctg aaggatgtgg agtcggtccg tccaacgtta ttgggcatga ctgtgctggg 60
tcgctgctgg tactgctcgt cgggcatcgt cgttgtgtcg 100
<210> 590
<211> 263
<212> DNA
<213> 北缬草(Valeriana fauriei)
<400> 590
gaagccatta ggccgagggc cccccctccc cgcctccccc tcatcggggc gcggcgtgcg 60
gcggggggcg cggacgatgg cctcccgcgc ccccatcggg cgcggctggc ccaaaacacg 120
gtcccccggc ggcggacgtc acggcgagtg gtggtcgaaa agtcctctgt tcgcgccgtg 180
gccctccccg tcttccgggc ggcgaatcga cccatacgcg ccgtcgacga gacggcgctc 240
cgaccgcgac cccaggtcag gcg 263
<210> 591
<211> 294
<212> DNA
<213> 缬草(Valeriana officinalis)
<400> 591
gaagccatta ggccgagggc acgcctgcct gggcgtcacg catcgcgtcg ccccccctcc 60
ccgcctcccc ctcatcgggg cgcggcgtgc ggcggggggc gcggacgatg gcctcccgcg 120
cccccatcgg gcgcggctgg cccaaaacac ggtcccccgg cggcggacgt cacggcgagt 180
ggtggtcgaa aagtcctctg ttcgcgccgt gaccctcccc gtcttccggg cggcgaatcg 240
acccatgcgc gccgtccacg agacggcgct ccgaccgcga ccccaggtca ggcg 294
<210> 592
<211> 295
<212> DNA
<213> 蜘蛛香(Valeriana jatamansi)
<400> 592
gaagccatta ggccgagggc acgcctgcct gggcgtcacg catcgcgtcg ccccccctcc 60
cccgcctccc cctcatcggg gcgcggcgtg cggcgggggg cgcggacgat ggcctcccgc 120
gccccatcgg gcgcggctgg cccaaaacac ggtcccccgg cggcggacgt cacggcgagt 180
ggtggtcgaa tatgtcctct gttcgcgccg tggccctccc cgtctttcgg gtggcgaatc 240
gacccatacg cgctgtccac gagactgcgc tccgaccgcg accccaggtc aggcg 295
<210> 593
<211> 219
<212> DNA
<213> 麻栎(Quercus acutissima)
<400> 593
cggaacgcgc caaggaaatc gaaccaagag agccacgctg gaggccccgg acacggtgcg 60
ccctcggcgt cggcgtctta cgaattattt aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg cagcgaaatg cgatacttgg tgtgaattgc agaatcccgc 180
gaatcatcga gtttttgaac gcaagttgcg cccgaagcc 219
<210> 594
<211> 219
<212> DNA
<213> 栓皮栎(Quercus variabilis)
<400> 594
cggaacgcgc caaggaaatc gaaccaagag agccacgctg gaggccccgg acacggtgcg 60
ccctcggcgt cggcgtctta cgaattattt aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg cagcgaaatg cgatacttgg tgtgaattgc agaatcccgc 180
gaatcatcga gtttttgaac gcaagttgcg cccgaagcc 219
<210> 595
<211> 219
<212> DNA
<213> 枹栎(Quercus serrata)
<400> 595
cggaacgcgc caaggaaatc taaccaagag agccatgccg gaggccccgg acacggtgcg 60
cccccggcgt cggcgtctta tgaattattc aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg cagcgaaatg cgatacttgg tgtgaattgc agaatcccgc 180
gaatcatcga gtttttgaac gcaagttgcg cccgaagcc 219
<210> 596
<211> 219
<212> DNA
<213> 蒙古栎(Quercus crispula)
<400> 596
cggaacgcgc caaggaaatc taaccaagag agccatgccg gaggccccgg acacggtgcg 60
cccccggcgt cggcgtctta tgaattattc aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg cagcgaaatg cgatacttgg tgtgaattgc agaatcccgc 180
gaatcatcga gtttttgaac gcaagttgcg cccgaagcc 219
<210> 597
<211> 219
<212> DNA
<213> 马其顿栎(Quercus trojana)
<400> 597
cggaacgcgc caaggaaatc gaaccaagag agccgcgctg gaggccccgg acacggtgcg 60
ccctcggcgt cggcgtctta cgaattattt aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg tagcgaaatg cgatacttgg tgtgaattgc agaatcccgc 180
gaatcatcga gtttttgaac gcaagttgcg cccgaagcc 219
<210> 598
<211> 219
<212> DNA
<213> 刺叶栎(Quercus ilex)
<400> 598
cggaacgcgc caaggaaatc gaaccaagag agccacgctg gaggccccgg acacggtgtg 60
ccctcggcgt cggcgtctta cgaattattt aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg tagcgaaatg cgatacttgg tgtgaattgc agaatcccgc 180
gaatcatcga gtttttgaac gcaagttgcg cccgaagcc 219
<210> 599
<211> 219
<212> DNA
<213> 圆叶栎(Quercus rotundifolia)
<400> 599
cggaacgcgc caaggaaatc gaaccaagag agccacgctg gaggccccgg acacggtgtg 60
cccccggcgt cggcgtctta cgaattattt aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg tagcgaaatg cgatacttgg tgtgaattgc agaatcccgc 180
gaatcatcga gtttttgaac gcaagttgcg cccgaagcc 219
<210> 600
<211> 219
<212> DNA
<213> 欧洲栓皮栎(Quercus suber)
<400> 600
cggaacgcgc caaggaaatc gaaccaagag agccgcgctg gaggccccgg acacggtgcg 60
cccccggcgt cggcgtctta cgaattattt aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg tagcgaaatg cgatacttgg tgtgaattgc agaatcccgc 180
gaatcatcga gtttttgaac gcaagttgcg cccgaagcc 219
<210> 601
<211> 145
<212> DNA
<213> 麻栎(Quercus acutissima)
<400> 601
cggaacgcgc caaggaaatc gaaccaagag agccacgctg gaggccccgg acacggtgcg 60
ccctcggcgt cggcgtctta cgaattattt aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg cagcg 145
<210> 602
<211> 145
<212> DNA
<213> 栓皮栎(Quercus variabilis)
<400> 602
cggaacgcgc caaggaaatc gaaccaagag agccacgctg gaggccccgg acacggtgcg 60
ccctcggcgt cggcgtctta cgaattattt aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg cagcg 145
<210> 603
<211> 145
<212> DNA
<213> 枹栎(Quercus serrata)
<400> 603
cggaacgcgc caaggaaatc taaccaagag agccatgccg gaggccccgg acacggtgcg 60
cccccggcgt cggcgtctta tgaattattc aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg cagcg 145
<210> 604
<211> 145
<212> DNA
<213> 蒙古栎(Quercus crispula)
<400> 604
cggaacgcgc caaggaaatc taaccaagag agccatgccg gaggccccgg acacggtgcg 60
cccccggcgt cggcgtctta tgaattattc aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg cagcg 145
<210> 605
<211> 145
<212> DNA
<213> 马其顿栎(Quercus trojana)
<400> 605
cggaacgcgc caaggaaatc gaaccaagag agccgcgctg gaggccccgg acacggtgcg 60
ccctcggcgt cggcgtctta cgaattattt aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg cagcg 145
<210> 606
<211> 145
<212> DNA
<213> 刺叶栎(Quercus ilex)
<400> 606
cggaacgcgc caaggaaatc gaaccaagag agccacgctg gaggccccgg acacggtgtg 60
ccctcggcgt cggcgtctta cgaattattt aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg cagcg 145
<210> 607
<211> 145
<212> DNA
<213> 圆叶栎(Quercus rotundifolia)
<400> 607
cggaacgcgc caaggaaatc gaaccaagag agccacgctg gaggccccgg acacggtgtg 60
cccccggcgt cggcgtctta cgaattattt aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg cagcg 145
<210> 608
<211> 145
<212> DNA
<213> 欧洲栓皮栎(Quercus suber)
<400> 608
cggaacgcgc caaggaaatc gaaccaagag agccgcgctg gaggccccgg acacggtgcg 60
cccccggcgt cggcgtctta cgaattattt aaaacgactc tcggcaacgg atatctaggc 120
tctcgcatcg atgaagaacg cagcg 145
<210> 609
<211> 235
<212> DNA
<213> 麻栎(Quercus acutissima)
<400> 609
gcctgggtgt cacgcatcgt tgccccccca aactccggtt cgggcggggc ggaagttggc 60
ctcccgtgcg tgcctgcgcg cgcggttagc ccaaaagcga gtcctcggcg acgagcgcca 120
cgacaatcgg tggttttttt accctcgttc ctcgtcgtgc gtgccccgtc gcccgaacgc 180
gctcttgyga ccctyacgcg tcgcctcggc ggcgctccca acgcgacccc aggtc 235
<210> 610
<211> 235
<212> DNA
<213> 栓皮栎(Quercus variabilis)
<400> 610
gcctgggtgt cacgcatcgt tgccccccca aactccggtt cgggcggggc ggaagttggc 60
ctcccgtgcg tgcctgcgcg cgcggttagc ccaaaagcga gtcctcggcg acgagcgcca 120
cgacaatcgg tggttttttt accctcgttc ctcgtcgtgc gtgccccgtc gcccgaacgc 180
gctcttgyga ccctyacgcg tcgcctcggc ggcgctccca acgcgacccc aggtc 235
<210> 611
<211> 231
<212> DNA
<213> 枹栎(Quercus serrata)
<400> 611
gcctgggtgt cacgcatcgt tgccccccca aactccggtt cgggcggggc ggaagttggc 60
ctcccgtgcg cgcctgcgcg cgcggttagc ccaaaagcga gtcctcggcg acgagcgcca 120
cgacaatcgg tggtttttcg accctcgttc cacgtcgtgc gcgccccgtc gcccgaactc 180
ytgcgaccct tacgcgttgc ctcggcgacg ctcccaacgc gaccccaggt c 231
<210> 612
<211> 231
<212> DNA
<213> 蒙古栎(Quercus crispula)
<400> 612
gcctgggtgt cacgcatcgt tgccccccca aactccggtt cgggcggggc ggaagttggc 60
ctcccgtgcg cgcctgcgcg cgcggttagc ccaaaagcga gtcctcggcg acgagcgcca 120
cgacaatcgg tggtttttcg accctcgttc cacgtcgtgc gcgccccgtc gcccgaactc 180
ytgcgaccct tacgcgttgc ctcggcgacg ctcccaacgc gaccccaggt c 231
<210> 613
<211> 234
<212> DNA
<213> 马其顿栎(Quercus trojana)
<400> 613
gcctgggtgt cacgcatcgt tgcccctcaa actccggttc gggcggggcg gaagttggcc 60
tcccgtgcgt gcttgcgcgc gcggttagcc caaaagcgag tcctcggcga ggagcgccac 120
gacaatcggt ggtttttcga ccctcgttcc acgtcgtgcg cgccccgtcg cccgaacgcg 180
ctcttgcgac ccttacgcgt tgcctcgacg acgctcccaa cgcgacccca ggtc 234
<210> 614
<211> 235
<212> DNA
<213> 欧洲栓皮栎(Quercus suber)
<400> 614
gcctgggtgt cacgcatcgt tgccccccca aactccggtt cgggcggggc ggaagttggc 60
ctcccgtgcg tgcttgcgcg cgcggttagc ccaaaagcga gtcctcggcg acgagcgcca 120
cgacaatcgg tggtttttcg accctcgttc cacatcgtgc gcgccccgcc gcccgaacgc 180
gctcttgtga cccttatgcg ttgcctcgac gacgctccca acgcgacccc aggtc 235
<210> 615
<211> 238
<212> DNA
<213> 刺叶栎(Quercus ilex)
<400> 615
gcctgggtgt cacgcatcgt tgccccccca aactccggtt cgggcggggc ggaagttggc 60
ctcccgtgcg tgcttgcgcg cgcggttagc ccaaaagcga gtcctcggcg acgagcgcca 120
cgacaatcgg tggttttttc gaccctcgtt ccccgtcgtg cgcgccccgt cgcccgtacg 180
cgctcttgcg tacccttacg cttacgcgtc gcctcggctc ccaacgcgac cccaggtc 238
<210> 616
<211> 236
<212> DNA
<213> 圆叶栎(Quercus rotundifolia)
<400> 616
gcctgggtgt cacgcatcgt tgccccccca aactccggtt cgggcggggc ggaagttggc 60
ctcccgtgcg tgcttgcgcg cgcggttagc ccaaaagcga gtcctcggcg acgagcgcca 120
cgacaatcgg tggttttttc gaccctcgtt ccccgtcgtg cgcgccccgt cgcccgcacg 180
cgctcttgcg acccttacgc gtcgcctcgg cggcgctccc aacgcgaccc caggtc 236
<210> 617
<211> 151
<212> DNA
<213> 连翘(Forsythia suspensa)
<400> 617
cacgggagga tgacgacggt tcagccaccg tgctgtccct cgtcagagcc ccgctccgtc 60
gacgtgcgca ctcgctgcgt ccgtcgtatg gactaacgaa ccccggcgcg gaatgcgcca 120
aggaatactc tacaacattg cccgtcccca g 151
<210> 618
<211> 151
<212> DNA
<213> 日本连翘(Forsythia japonica)
<400> 618
cacgggagga tgacgacggt gcagccaccg tgctgtccct cgtcggagcc ccgctccgtc 60
gacgtgcgca ttcactgcgt ccgttgtatg gactaacgaa ccccggcgcg gaatgcgcca 120
aggaatactc tacaacattg cccgtcccca g 151
<210> 619
<211> 151
<212> DNA
<213> 欧洲连翘(Forsythia europaea)
<400> 619
cacgggagga tgacgacggt gcagccaccg cgctgtccct cgtcggagcc ccgctccgtc 60
gacgtgcgca ttcgctgcgt ccgtcgcatg gactaacgaa ccccggcgcg gaatgcgcca 120
aggaatacta tacaacattg cccgtcccca g 151
<210> 620
<211> 151
<212> DNA
<213> 卵叶连翘(Forsythia ovata)
<400> 620
cacgggagga tgacgacggt gcagccaccg tgctgtccct catgggagcc ccgctccgtc 60
gacgtgcgca ttcactgcgt ccgttgtatg gactaacgaa ccccggcgcg gaatgcgcca 120
aggaatactc tacaacattg cccgtcccca g 151
<210> 621
<211> 151
<212> DNA
<213> 金钟花(Forsythia viridissima)
<400> 621
cacgggagga tgacgacggt gcagccaccg cgctgtccct cgtcggagcc ccgctccgtc 60
gacgtgcgca ttcactgcgt ccgtcgcatg gactaacgaa ccccggcgcg gaatgcgcca 120
aggaatactc cacaacattg cccgtcccca g 151
<210> 622
<211> 151
<212> DNA
<213> Forsythia nakaii
<400> 622
cacgggagga tgacgacggt gcagccaccg tgctgtccct catcggagcc ccggtccgtc 60
aacgtgcgca ttcactgcgt ccgttgtatg gactaacgaa ccccggcgcg gaatgcgcca 120
aggaatactc tacaacattg cccgtcccca g 151
<210> 623
<211> 151
<212> DNA
<213> 秦连翘(Forsythia giraldiana)
<400> 623
cacgggagga tgacgacggt gcagccaccg cgctgtccct cgtcagagcc ccgctccgtc 60
gacgtgcgca ttcaatgcgt ccgtcgcatg gactaacgaa ccccggcgcg gaatgcgcca 120
aggaatactc tacaacattg cccgtcccca g 151
<210> 624
<211> 151
<212> DNA
<213> 连翘(Forsythia suspensa)
<400> 624
gctgagggca cgtctgcctg ggcgtcacgc atctcgtcgc cctccacctc tccccgaaag 60
ggattcgtga ggtgctgggc tggatattgg cctcccgtgc gccatcgtgt gcggttggcc 120
taaatttgat tcggcatcga cgcatgtcac g 151
<210> 625
<211> 151
<212> DNA
<213> 朝鲜金钟花(Forsythia viridissima var. koreana)
<400> 625
gctgagggca cgtctgcctg ggcgtcacgc atctcgtcgc cctccacctc tctccgaaag 60
ggattcgtga ggtgttgggt tggatattgg cctcccgtgc gccatcgtgt gcggttggcc 120
taaatttgat tcggcatcga cgcatgtcac g 151
<210> 626
<211> 151
<212> DNA
<213> Forsythia japonica var. saxatilis
<400> 626
gctgagggca cgtctgcctg ggcgtcacgc atctcgtcgc cctccacctc tctccgaaag 60
ggattcgtga ggtgttgggt tggatattgg cctcccgtgc gccatcgtgt gcggttggcc 120
taaatttgat tcggcatcga cgcatgtcac g 151
<210> 627
<211> 151
<212> DNA
<213> 欧洲连翘(Forsythia europaea)
<400> 627
gctgagggca cgtctgcctg ggcgtcacgc atctcgtcgc cctccacctc aacccgaaag 60
ggattcgtgg ggtgttgggt tggatattgg cctcccgtgc gccttcgtgt gcggctggcc 120
taaatttgat tcggcatcga cgcatgtcac g 151
<210> 628
<211> 151
<212> DNA
<213> 日本连翘(Forsythia japonica)
<400> 628
gctgagggca cgtctgcctg ggcgtcacgc atctcgtcgc cctccacctc cccccgaaag 60
ggattcgtgg ggtgttgggt tggatattgg cctcccgtgc gccctcgtgt gcggctggcc 120
taaatttgat tcggcatcga cgcatgtcac g 151
<210> 629
<211> 151
<212> DNA
<213> 卵叶连翘(Forsythia ovata)
<400> 629
gctgagggca cgtctgcctg ggcgtcacgc atctcgtcgc cctccacctc ctcccgaaag 60
ggattcgtgg ggtgttgggt tggatattgg cctcccgtgc gccctcgtgt gcggctggcc 120
taaatttgat tcggcatcga cgcatgtcac g 151
<210> 630
<211> 151
<212> DNA
<213> 金钟花(Forsythia viridissima)
<400> 630
gctgagggca cgtctgcctg ggcgtcacgc atctcgtcgc cctccacctc cccccgaaag 60
ggattcgtgg ggtgttgggt tggatattgg cctcccgtgc gccctcgtgc gcggctggcc 120
taaatttgat tcggcatcga cgcatgtcac g 151
<210> 631
<211> 151
<212> DNA
<213> Forsythia nakaii
<400> 631
gctgagggca cgtctgcctg ggcgtcacgc atctcgtcgc cctccacctc ctccagaaag 60
ggattcgtgg ggtgttgggt tggatattgg cctcccgtgc gccctcgtgt gcggttggcc 120
taaatttgat tcggcatcga cgcatgtcac g 151
<210> 632
<211> 151
<212> DNA
<213> 金钟花(Forsythia viridissima)
<400> 632
gctgagggca cgtctgcctg ggcgtcacgc atctcgtcgc cctccacctc ctcccgaaag 60
ggattcgtgg ggtgttgggt tggatattgg cctcccgtgc gccctcgtgc gcggctggct 120
taaatttgat tcggcatcga cgcatgtcac g 151
<210> 633
<211> 282
<212> DNA
<213> 高良姜(Alpinia officinarum)
<400> 633
gcagttcctt ctccacgaat acagttcctt ctccacgaat attataattg gaatagtctc 60
attattccga ataaatctat ttacatattt tcaaaagaca ataaaagact attttgtttc 120
ttatataatt tatatatata tgaatatgaa tttctattag tgtttccttg taaacaatct 180
tcttttttac gattaatatc ttctggagtc cttcttgagc gaatacattt ttatgtaaaa 240
atagagcatc ttggagtgtg ccgtagagca tcttggagtg tg 282
<210> 634
<211> 282
<212> DNA
<213> 距花山姜(Alpinia calcarata)
<400> 634
gcagttcctt ctccacgaat acagttcctt ctccacgaat attataattg gaatagtctc 60
attattccga ataaatctat ttacgtattt tcaaaagaca ataaaagact attttgtttc 120
ttatataatt tatatatata tgaatatgaa tttctattag tgtttccttg taaacaatct 180
tcttttttac gattaatatc ttctggagtc cttcttgagc gaatacattt ttatgtaaaa 240
atagagcatc ttggagtgtg ccgtagagca tcttggagtg tg 282
<210> 635
<211> 282
<212> DNA
<213> 美山姜(Alpinia formosana)
<400> 635
gcagttcctt ctccacgaat acagttcctt ctccacgaat attataattg gaatagtctc 60
attattccga ataaatctat ttacgtattt tcaaaagaca ataaaagact attttgtttc 120
ttatataatt tatatatata tgaatatgaa tttctattag tgtttccttg taaacaatct 180
tcttttttac gattaatatc ttctggagtc cttcttgagc gaatacattt ttatgtaaaa 240
atagagcatc ttggagtgtg ccgtagagca tcttggagtg tg 282
<210> 636
<211> 282
<212> DNA
<213> 大花山姜(Alpinia uraiensis)
<400> 636
gcagttcctt ctccacgaat acagttcctt ctccacgaat attataattg gaatagtctc 60
attattccga ataaatctat ttacgtattt tcaaaagaca ataaaagact attttgtttc 120
ttatataatt tatatatata tgaatatgaa tttctattag tgtttccttg taaacaatct 180
tcttttttac gattaatatc ttctggagtc cttcttgagc gaatacattt ttatgtaaaa 240
atagagcatc ttggagtgtg ccgtagagca tcttggagtg tg 282
<210> 637
<211> 282
<212> DNA
<213> 密穗山姜(Alpinia shimadae)
<400> 637
gcagttcctt ctccacgaat acagttcctt ctccacgaat attataattg gaatagtctc 60
attattccga ataaatctat ttacgtattt tcaaaagaca ataaaagact attttgtttc 120
ttatataatt tatatatata tgaatatgaa tttctattag tgtttccttg taaacaatct 180
tcttttttac gattaatatc ttctggagtc cttcttgagc gaatacattt ttatgtaaaa 240
atagagcatc ttggagtgtg ccgtagagca tcttggagtg tg 282
<210> 638
<211> 285
<212> DNA
<213> 高良姜(Alpinia officinarum)
<400> 638
cttctggagt ccttcttgag cgttctggag tccttcttga gcgaatacat ttttatgtaa 60
aaatagagca tcttggagtg tgccgaattt tttgtcagaa gactctatgg attttcaagg 120
atcctttcat acattatatt cgatatcaag gaaaatcgat tttgggttca agagggactc 180
attttttgat gaagaaatgg aaataccatc ttgttcattt ttggcaatat tattttcatt 240
tttggtctca accatatagg attgggtctc aaccatatag gattg 285
<210> 639
<211> 285
<212> DNA
<213> 距花山姜(Alpinia calcarata)
<400> 639
cttctggagt ccttcttgag cgttctggag tccttcttga gcgaatacat ttttatgtaa 60
aaatagagca tcttggagtg tgccgaattt tttgtcagaa gactctatgg attttcaagg 120
atcctttcat acattatatt cgatatcaag gaaaatcaat tttgggttca agagggactc 180
attttttgat gaagaaatgg aaataccatc ttgttcattt ttggcaatat tattttcatt 240
tttggtctca accatatagg attgggtctc aaccatatag gattg 285
<210> 640
<211> 285
<212> DNA
<213> 美山姜(Alpinia formosana)
<400> 640
cttctggagt ccttcttgag cgttctggag tccttcttga gcgaatacat ttttatgtaa 60
aaatagagca tcttggagtg tgccgaattt tttgtcagaa gactctatgg attttcaagg 120
atcctttcat acattatatt cgatatcaag gaaaatcaat tttgggttca agagggactc 180
attttttgat gaagaaatgg aaataccatc ttgttcattt ttggcaatat tattttcatt 240
tttggtctca accatatagg attgggtctc aaccatatag gattg 285
<210> 641
<211> 285
<212> DNA
<213> 大花山姜(Alpinia uraiensis)
<400> 641
cttctggagt ccttcttgag cgttctggag tccttcttga gcgaatacat ttttatgtaa 60
aaatagagca tcttggagtg tgccgaattt tttgtcagaa gactctatgg attttcaagg 120
atcctttcat acattatatt cgatatcaag gaaaatcaat tttgggttca agagggactc 180
attttttgat gaagaaatgg aaataccatc ttgttcattt ttggcaatat tattttcatt 240
tttggtctca accatatagg attgggtctc aaccatatag gattg 285
<210> 642
<211> 285
<212> DNA
<213> 密穗山姜(Alpinia shimadae)
<400> 642
cttctggagt ccttcttgag cgttctggag tccttcttga gcgaatacat ttttatgtaa 60
aaatagagca tcttggagtg tgccgaattt tttgtcagaa gactctatgg attttcaagg 120
atcctttcat acattatatt cgatatcaag gaaaatcaat tttgggttca agagggactc 180
attttttgat gaagaaatgg aaataccatc ttgttcattt ttggcaatat tattttcatt 240
tttggtctca accatatagg attgggtctc aaccatatag gattg 285
<210> 643
<211> 165
<212> DNA
<213> 莲(Nelumbo nucifera)
<400> 643
gtctcgtggc ctcctagcta acaaccaact ccgggcgcgg atggcgccaa ggaatctcca 60
tggaagggtg cataatccca acattgttgg gtgttttgcc tctatattca aaaaacgact 120
ctcggcaacg gatatctcgg ctctcgcatc gatgaagaac gcagc 165
<210> 644
<211> 164
<212> DNA
<213> 美洲黄莲(Nelumbo lutea)
<400> 644
gtctcgtggc ctcctagcta acaaccaact ccgggcgcgg atggcgccaa ggaatctcca 60
tggaagggtg cataatccca actttgttgg gtgttttgcc tctacactca aaaacgactc 120
tcggcaacgg atatctcggc tctcgcatcg atgaagaacg cagc 164
<210> 645
<211> 164
<212> DNA
<213> 美国黄莲(Nelumbo pentapetala)
<400> 645
gtctcgtggc ctcctagcta acaaccaact ccgggcgcgg atggcgccaa ggaatctcca 60
tggaagggtg cataatccca actttgttgg gtgttttgcc tctacactca aaaacgactc 120
tcggcaacgg atatctcggc tctcgcatcg atgaagaacg cagc 164
<210> 646
<211> 217
<212> DNA
<213> 莲(Nelumbo nucifera)
<400> 646
ggtgcggttg gcccaaatga tggcccccga caataaagtg ccacgacggt tggtggttca 60
atcttaggtg gtggaatgct ggacgtcgtg cacgttgtgt tgtcattggg gtgtcgagtg 120
tgtgacccga tgagggatcc gttgttgacg gagcctgcct tgcgacccca ggtcaggcgg 180
ggccacccgc tgaatttgca tatcaataag cggagga 217
<210> 647
<211> 218
<212> DNA
<213> 美洲黄莲(Nelumbo lutea)
<400> 647
ggtgcggttg gcccaaatga tggcccccga caacaaagtg ccacgacggt tggtggttca 60
aatcttaggt ggtggaatgc tggacgttgt gcacgttgtg ttgtcattgg ggtgtcgagt 120
gtgtgaccca gtgagggatc cgttgttgac ggagcctgcc ttgcgacccc aggtcaggcg 180
gggccacccg ctgaatttgc atatcaataa gcggagga 218
<210> 648
<211> 205
<212> DNA
<213> 美国黄莲(Nelumbo pentapetala)
<400> 648
ggtgcggttg gcccaaatga tggcccccga caacaaagtg ccacgacggt tggtggttca 60
aatcttaggt ggtggaatgc tggacgttgt gcacgttgtg ttgtcattgg ggtgtcgagt 120
gtgtgaccca gtgagggatc cgttgttgac ggagcctgcc ttgcgacccc aggtcaggcg 180
gggccgcata tcaataagcg gagga 205
<210> 649
<211> 309
<212> DNA
<213> 红花(Carthamus tinctorius)
<400> 649
gtcgaagcct gcacagcaga acgacccgtg aacatgtaat cacaaccggg tgtcgtggga 60
ttgggtgtga gccttagccc tacgatgctt gtcggcatgc gtgcaaggtg cttatctcta 120
ggcatcgtgg acgtcgtgtc ggcacaaaaa caaaccccgg cacggcatgt gccaaggaaa 180
acaaaactta agaagggttc gtctcgtgtt gccccgtttg cggtgtgcac acgggtcgtg 240
gcctctcatt aaccataaac gactctcggc aacggatatc tcggctcacg catcgatgaa 300
gaacgcagc 309
<210> 650
<211> 309
<212> DNA
<213> Carthamus glaucus
<400> 650
gtcgaagcct gcacagcaga acgacccgtg aacatgtaat cacaaccggg cgtcgtggga 60
ttgggtgtga gccttagccc tacgatgctc gtcggcatgc gtgcaaggtg cttatctcta 120
ggcatcgtgg acgttgtgtc ggcacaaaaa caaaccccgg cacggcatgt gccaaggaaa 180
acaaaactta agaagggtgc gtcttgtgtt gccccgtttt cggtgtgcac acgggtcgtg 240
gcctctcatt aaccataaac gactctcggc aacggatatc tcggctcacg catcgatgaa 300
gaacgcagc 309
<210> 651
<211> 309
<212> DNA
<213> Carthamus nitidus
<400> 651
gtcgaagcct gcacagcaga acgacccgtg aacatgtaat cacaaccggg tgtcgtggga 60
ttaggtgcga gccttagccc tacgatgctc gtcggcatgc gtgcaaggtg cttatctcta 120
ggcatcgtgg acgttgtgtc ggcacaaaaa caaaccccgg cacggcatgt gccaaggaaa 180
acaaaactta agaagggtgc gtcttgtgtt gccccgtttt cggtgtgcac acgggtcgtg 240
gcctctcatt aaccataaac gactctcggc aacggatatc tcggctcacg catcgatgaa 300
gaacgcagc 309
<210> 652
<211> 309
<212> DNA
<213> Carthamus oxyacanthus
<400> 652
gtcgaagcct gcacagcaga acgacccgtg aacatgtaat cacaaccggg tgtcgtggga 60
ttgggtgtga gccttagccc tacgatgctc gtcggcatgc gtgcaaggtg cttatctcta 120
ggcatcgtgg atgttgtgtc ggcacaaaaa caaaccccgg cacggcatgt gccaaggaaa 180
acaaaactta agaagggtkc gtctcgtgtt gccccgtttt cggtgtgcac acgggtcgtg 240
gcctctcatt aaccataaac gactctcggc aacggatatc tcggctcacg catcgatgaa 300
gaacgcagc 309
<210> 653
<211> 309
<212> DNA
<213> Carthamus turkestanicus
<400> 653
gtcgaagcct gcacagcaga acgacccgtg aacatgtaat cacaaccggg cgtcgtggga 60
ttgggtgtga gccttagccc tacgatgctc gtcggcatgc gtgcaaggtg cttatctcta 120
ggcatcgtgg acgttgtgtc ggcacaaaaa caaaccccgg cacggcatgt gccaaggaaa 180
acaaaactta agaagggtgc gtcttgtgtt gccccgtttt cggtgtgcac acgggtcgtg 240
gcctctcatt aaccataaac gactctcggc aacggatatc tcggctcacg catcgatgaa 300
gaacgcagc 309
<210> 654
<211> 309
<212> DNA
<213> Carthamus leucocaulos
<400> 654
gtcgaagcct gcacagcaga acgacccgtg aacatgtaat cacaaccggg cgtcgtggga 60
ttgggtgtga gccttagccc tacgatgctc gtcggcatgc gtgcaaggtg cttatctcta 120
ggcatcgtgg acgttgtgtc ggcacaaaaa caaaccccgg cacggcatgt gccaaggaaa 180
acaaaactta agaagggtgc gtcttgtgtt gccccgtttt cggtgtgcac acgggtcgtg 240
gcctctcatt aaccacaaac gactctcggc aacggatatc tcggctcacg catcgatgaa 300
gaacgcagc 309
<210> 655
<211> 309
<212> DNA
<213> Carthamus dentatus
<400> 655
gtcgaagcct gcacagcaga acgacccgtg aacatgtaat cacaaccggg cgtcgtggga 60
ttgggtgtga gccttagccc tacgatgctc gtcggcatgc gtgcaaggtg cttatctcta 120
ggcatcgtgg acgttgtgtc ggcacaaaaa caaaccccgg cacggcatgt gccaaggaaa 180
acaaaactta agaagggtgc gtcttgtgtt gccccgtttt cggtgtgcac acgggtcgtg 240
gcctctcatt aaccacaaac gactctcggc aacggatatc tcggctcacg catcgatgaa 300
gaacgcagc 309
<210> 656
<211> 309
<212> DNA
<213> Carthamus tenuis
<400> 656
gtcgaagcct gcacagcaga acgacccgtg aacatgtaat cacaaccggg cgtcgtggga 60
ttgggtgtga gccttagccc tacgatgctc gtcggcatgc gtgcaaggtg cttatctcta 120
ggcatcgtgg acgttgtgtc ggcacwaaaa caaaccccgg cacggcatgt gccaaggaaa 180
acaaaactta agaagggtgc gtcttgtgtt gccccgtttt cggtgtgcac acgggtcgtg 240
gcctctcatt aaccacaaac gactctcggc aacggatatc tcggctcacg catcgatgaa 300
gaacgcagc 309
<210> 657
<211> 309
<212> DNA
<213> 毛红花(Carthamus lanatus)
<400> 657
gtcgaagcct gcacagcaga acgacccgtg aacatgtaat cacaaccggg cgtcgtggga 60
ttgggtgtga gccttagccc tacgatgctc gtcggcatgc gtgcaaggtg cttatctcta 120
ggcatcgtgg atgttgtgtc ggcacaaaaa caaaccccgg cacggcatgt gccaaggaaa 180
acaaaactta agaagggtgc gtcttgtgtt gccccgtttt cggtgtgcac acgggtcgtg 240
gcctctcatt aaccacaaac gactctcggc aacggatatc tcggctcacg catcgatgaa 300
gaacgcagc 309
<210> 658
<211> 309
<212> DNA
<213> Carthamus alexandrinus
<400> 658
gtcgaagcct gcacagcaga acgacccgtg aacatgtaat cacaaccggg cgtcgtggga 60
ttgggtgtga gccttagccc tacgatgctc gtcggcatgc gtgcaaggtg cttatctcta 120
ggcatcgtgg acgttgtgtc ggcactaaaa caaaccccgg cacggcatgt gccaaggaaa 180
acaaaactta agaagggtgc gtcttgtgtt gccccgtttt cggtgtgcac acgggtcgtg 240
gcctctcatt aaccacaaac gactctcggc aacggatatc tcggctcacg catcgatgaa 300
gaacgcagc 309
<210> 659
<211> 408
<212> DNA
<213> 红花(Carthamus tinctorius)
<400> 659
gcatcgatga agaacgcagc aaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagttt ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccattcg gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cccagaccat gctcccccat ggggaagtgt ttggtctggg 180
acgaagagtg gtctcccgtg tcgatggtgc ggttggccta aaaaggagtc ccctttggcg 240
gacgcacggc tagtggtggt tgtaaaggac ttcgtaacga gccgtgttga tgctagggaa 300
ttgctctcta aagaccctaa cgtgtcgtct tacgacgatg cttcgaccgc gaccccaggt 360
caggcggggg actacccgct gagtttaagc atatcaataa gcggagga 408
<210> 660
<211> 407
<212> DNA
<213> Carthamus glaucus
<400> 660
gcatcgatga agaacgcagc aaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagttt ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccattcg gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cccagaccat gctctcccat ggggacgtgt ttggtctggg 180
acggagactg gtctcccgtg ctcatggtgc ggttggccta aaaaggagtc ccctttggcg 240
gacgcacggc tagtggtggt tgtcaaggcc ttcgtatcga gccgtgctga tgctagggaa 300
tcgctctyta aagaccctaa cgtgtcgtct ttacgacgat gcttcgaccg cgaccccagg 360
tcaggcggga ctacccgctg agtttaagca tatcaataag cggagga 407
<210> 661
<211> 407
<212> DNA
<213> Carthamus alexandrinus
<400> 661
gcatcgatga agaacgcagc aaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagttt ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccattcg gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atctcgtcgc cccagaccac gctcccccat ggggacgtgt ttggtctggg 180
acggagactg gtctcccgtg ctcatggtgc ggttggccta aaaaggagtc ccctttggcg 240
gacgcacggc tagtggtggt tgtcaaagcc ttcgtatcga gccgtgctga tgctagggaa 300
tcgctctcta aagaccctaa cgtgtcgtct ttacgacgat gcttcgaccg cgaccccagg 360
tcaggcggga ctacccgctg agtttaagca tatcaataag cggagga 407
<210> 662
<211> 408
<212> DNA
<213> Carthamus arborescens
<400> 662
gcatcgatga agaacgcagc aaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagttt ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccatttg gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cccagaccat ctcccccatg gggacgacgt gtttggtctg 180
ggacggagac tggtctcccg tgccaatggt gcggttggcc taaaaaggag tctcctttgg 240
tggacgcacg gctagtggtg gttgtcaagg ccttcgtatc gagccgtgct gatgctagga 300
aatctctctt aaaagaccct aatgtgtcgt cttgcgacga tgcttcgacc gcgaccccag 360
gtcaggcggg actacccgct gagtttaagc atatcaataa gcggagga 408
<210> 663
<211> 407
<212> DNA
<213> Carthamus dentatus
<400> 663
gcatcgatga agaacgcagc aaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagttt ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccattcg gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cccagaccat gctcccccat ggggacgtgt ttggtctggg 180
acggagactg gtctcccgtg ctcatggtgc ggttggccta aaaaggagtc ccctttggcg 240
gatgcacggc tagtggtggt tgtcaaggcc ttcgtatcga gccgtgctga tgctagggaa 300
tcgctctcta aagaccctaa cgtgtcgtct ttacgacgat gcttcgaccg cgaccccagg 360
tcaggcggga ctacccgctg agtttaagca tatcaataag cggagga 407
<210> 664
<211> 407
<212> DNA
<213> 毛红花(Carthamus lanatus)
<400> 664
gcatcgatga agaacgcagc aaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagttt ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccattcg gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cccagaccat gctcccccat ggggacgtgt ttggtctggg 180
acggagactg gtctcccgtg ctcatggtgc ggttggccta aaaaggagtc ccctttggcg 240
gacgcacggc tagtggtggt tgtcaaggcc ttcgtatcga gccgtgttga tgctagggaa 300
tcgctctcta aagaccctaa cgtgtcgtct ttacgacgat gcttcgaccg cgaccccagg 360
tcaggcggga ctacccgctg agtttaagca tatcaataag cggagga 407
<210> 665
<211> 366
<212> DNA
<213> Carthamus oxyacanthus
<400> 665
gcatcgatga agaacgcagc aaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagttt ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccattcg gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cccagaccat gctcccccat ggggaagtgt ttggtctggg 180
acgaagagtg gtctcccgtg tcgatggtgc ggttggccta aaaaggagtc ccctttggcg 240
gacgcacggc tagtggtggt tgtaaaggac ttcgtaacga gccgtgttga tgctagggaa 300
ttgctctcta aagaccctaa cgtgtcgtct tacgacgatg cttcgagcat atcaataagc 360
ggagga 366
<210> 666
<211> 406
<212> DNA
<213> 巴勒斯坦红花(Carthamus palaestinus)
<400> 666
gcatcgatga agaacgcagc aaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagttt ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccattcg gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cccagaccat gctcccccat ggggaagtgt ttggtctggg 180
acgaagagtg gtctcccgtg tcgatggtgc ggttggccta aaaaggagtc ccctttggcg 240
gacgcacggc tagtggtggt tgtaaaggac ttcgtaacga gccgtgttga tgctagggaa 300
ttgctctcta aagaccctaa cgtgtcgtct tacgacgatg cttcgaccgc gaccccaggt 360
caggcgggac tacccgctga gtttaagcat atcaataagc ggagga 406
<210> 667
<211> 406
<212> DNA
<213> 波斯红花(Carthamus persicus)
<400> 667
gcatcgatga agaacgcagc aaaatgcgat acttggtgtg aattgcagaa tcccgtgaac 60
catcgagttt ttgaacgcaa gttgcgcccg aagccattcg gccgagggca cgtctgcctg 120
ggcgtcacgc atcgcgtcgc cccagaccat gctcccccat ggggaagtgt ttggtctggg 180
acgaagagtg gtctcccgtg tcgatggtgc ggttggccta aaaaggagtc ccctttggcg 240
gacgcacggc tagtggtggt tgtaaaggac ttcgtaacga gccgtgttga tgctagggaa 300
ttgctctcta aagaccctaa cgtgtcgtct tacgacgatg cttcgaccgc gaccccaggt 360
caggcgggac tacccgctga gtttaagcat atcaataagc ggagga 406
<210> 668
<211> 294
<212> DNA
<213> 苏木(Caesalpinia sappan)
<400> 668
ccgtaggtga acctgcggaa ggatcattgt cgatgcctct cgaagagaac gacccgcgaa 60
tcgtgtgctc atcattatgg agacgggggt gctggttgcc cccggttcct gtgttgcaag 120
agctcttgtg gactcgtgcc gcttgacctc ttcgacgcaa taactaaccc cggcgccctg 180
cgccaaggaa tcttgagaac caagcgtgcc ccttggtcgc ccggaaacgg tgcgggttgg 240
ggggtaatgc gacatcgtat acacaacgac tctcggcaac ggatatctcg gctc 294
<210> 669
<211> 295
<212> DNA
<213> Caesalpinia angulata
<400> 669
ccgtaggtga acctgcggaa ggatcattgt cgatgcctcc gaaatagaac aaccagcgaa 60
tcggtttctt acgatcccct ggggagacgc gagcgcaagt tgcccacgat tcccccgtcg 120
gcggtggtgc cggtggccgt gcgctgcccg tccccgtcga cacaactaac cccggcgccc 180
tgcgccaagg aaattcggaa agcaagcatg cccgcggccg cccggagacg gtgcggtcgg 240
ggagcattgc gacaactgta tgcaaaacga ctctcggcaa cggatatctc ggctc 295
<210> 670
<211> 296
<212> DNA
<213> Caesalpinia anacantha
<400> 670
ccgtaggtga acctgcggaa ggatcattgt cgatgcctcc aaaaagaacg accagtgaac 60
acgtgtgcta gattcgagtg gaggcgaggg tgctcgtcgc ccttgactcc caagtcgggg 120
ggagcgcctg cggccttcgg tcgtcggtcc ccgtcgatgc aacaattaac cccggcgccc 180
tgcgccaagg aatcttgaaa gataagcgtg ccccttaggc cccggaaacg gtgcacgacg 240
gggagcgtca cgatattcat ataccaaacg actctcggca acggatatct cggctc 296
<210> 671
<211> 297
<212> DNA
<213> 巴哈马苏木(Caesalpinia bahamensis)
<220>
<221> misc_feature
<222> (140)..(140)
<223> n是a、c、g或t
<400> 671
ccgtaggtga acctgcggaa ggatcattgt cgatgcctcc aaaaagaacg accagtgaac 60
acgtgtgcta gattcgagtg gaggcgaggg tgcctgtcgc ccttgactcc caagtcgggg 120
ggagcgcctg cggccttcgn tcgtcggtcc ctgccgatgc aacaattaac cccggcgccc 180
tgcgccaagg aatcttgaaa gataagcgtg ccccttggtg ccccggaaac ggtgcacgac 240
ggggagcgtc gcgatattca tatacaaaac gactctcggc aacggatatc tcggctc 297
<210> 672
<211> 296
<212> DNA
<213> Caesalpinia barahonensis
<400> 672
ccgtaggtga acctgcggaa ggatcattgt cgattcctcc aaaaagaacg accagtgaac 60
acgtgtgcta gattcgagtg gaggcgaggg tgctcgtcgc ccttgactcc caagtcgggg 120
ggagcgcctg cggccttcgg tcgtcggtcc ccgtcgatgc aacaattaac cccggcgccc 180
tgcgccaagg aatcttgaaa gataagcgtg ccccttaggc cccggaaacg gtgcacgacg 240
gggagcgtcg cgatattcat ataccaaacg actctcggca acggatatct cggctc 296
<210> 673
<211> 297
<212> DNA
<213> Caesalpinia brasiliensis
<400> 673
ccgtaggtga acctgcggaa ggatcattgt cgatgcctcc aaaaagaacg accagtgaac 60
acgtgtgcta gattcgagtg gaggcgaggg tgcttgtcgc ccttgactcc caagtcgggg 120
gcagcgcctg cggccttcgg tcgtcggtcc ctgccgatgc aacaattaac cccggcgccc 180
tgcgccaagg aatcttgaaa gataagcgtg ccccttggtg ccccggaaac ggtgcacgac 240
ggggagcgtc gcgatattca tatacaaaac gactctcggc aacggatatc tcggctc 297
<210> 674
<211> 261
<212> DNA
<213> Caesalpinia buchii
<400> 674
ccgtaggtga acctgcggaa ggatcattgt cgatgcctgc caaacagaac gacccgcgaa 60
tcgtgttacg gaccgatgtc ggcgggagcg cgcgcggcct cgcgccgtgc gtcctcgtcg 120
gagcaacaac taaccccggc gccctgcgcc aaggaataaa ggaaacagag cgtgcccctc 180
ggtcgaccgg agacggtgcg ggccggggag cgtcgcgaca tttgtaaacg caacgactct 240
cggcaacgga tatctcggct c 261
<210> 675
<211> 297
<212> DNA
<213> Caesalpinia cassioides
<400> 675
ccgtaggtga acctgcggaa ggatcattgt cgatgcctca aaaagaacga cccgtgaaca 60
cgtgtgctgg atccttgggg aggtgggggt gctcgtcgcc cttggccccc atgttggcgg 120
gagcacttgc ggccacgagc tgttggtccc cgtcgacgca acaactaacc ccggcgccct 180
gcgccaagga atctcgaaac attagcatgg ccctcggcag cccggaaacg gtgcatgccg 240
ggggrgcatc gcgatagtct tactctaaac gactctcggc aacggatatc tcggctc 297
<210> 676
<211> 293
<212> DNA
<213> Caesalpinia celendiniana
<400> 676
ccgtaggtga acctgcggaa ggatcattgt cgatgcctct taaatagaac gacccgcgaa 60
ccggttttgt aagacccagg gggtcggggc gcctcgctgc ccacgattcc ctcgtcagga 120
ggagcgtcga tcgccgcgtg cggccggtcc ctgttgacac aactaacccc ggcgccctgc 180
gccaaggaat tctgaaaatc tggcgtgccc tcgacagccc ggaaacggtg caggtcgggg 240
agcaacgcga caagagtata cataacgact ctcggcaacg gatatctcgg ctc 293
<210> 677
<211> 295
<212> DNA
<213> 云实(Caesalpinia decapetala)
<400> 677
ccgtaggtga acctgcggaa ggatcattgt cgatgcctct caagcagaac gacccgtgaa 60
tcgtgtactc atcattgtgg aggcgggggt gctagttgcc ctcgtttcct gtgtcggcga 120
gagttctagc ggacttgtgc tgcttgacct ctttgacgca acaactaacc ccggcgccct 180
gcgccaagga attttgagaa aaaagcgtgc ccctcggctg ctcggaaacg gtgcggtttg 240
gggagcattg cgacatcgta tatagaacga ctctcggcaa cggatatctc ggctc 295
<210> 678
<211> 364
<212> DNA
<213> 柳叶木兰(Magnolia salicifolia)
<400> 678
gacttgattg gattgagcct tggtagggaa acctactaag tggtaacttc caaattcaga 60
gaaaccctgg aattaaaaat gggcaatcct gagccaaatc ctgtgttcag aaaacaaggg 120
ttcagaaagc gagaatcaaa aaaggatagg tgcagagact caatggaagc tgttctaaca 180
aatggagttg actgcattgg tagaggaatc gaatccttct atcgaaacta cagaaaagat 240
gaccctgtat acatacgtat acatactgaa atatcaaata attaatcacg actcgaatcc 300
ttattttttt atatgaaaaa tttaagaatt attgtgaatc gattccaagt tgaaggaaga 360
atcg 364
<210> 679
<211> 368
<212> DNA
<213> 皱叶木兰(Magnolia kobus)
<400> 679
gacttgattg gattgagcct tggtagggaa acctactaag tggtaacttc caaattcaga 60
gaaaccctgg aattaaaaat gggcaatcct gagccaaatc ctgtgttcag aaaacaaggg 120
ttcagaaagc gagaatcaaa aaaaaaagga taggtgcaga gactcaatgg aagctgttct 180
aacaaatgga gttgactgca ttggtagagg aatcgaatcc ttctatcgaa actacagaaa 240
agatgaccct gtatacatac gtatacatac tgaaatatca aataattaat cacgactcga 300
atccttattt ttttatatga aaaattgaag aattattgtg aatcgattcc aagttgaagg 360
aagaatcg 368
<210> 680
<211> 364
<212> DNA
<213> 武当木兰(Magnolia sprengeri)
<400> 680
gacttgattg gattgagcct tggtagggaa acctactaag tggtaacttc caaattcaga 60
gaaaccctgg aattaaaaat gggcaatcct gagccaaatc ctgtgttcag aaaacaaggg 120
ttcagaaagc gagaatcaaa aaaggatagg tgcagagact caatggaagc tgttctaaca 180
aatggagttg actgcattgg tagaggaatc gaatccttct atcgaaacta cagaaaagat 240
gaccctgtat acatacgtat acatactgaa atatcaaata attaatcacg actcgaatcc 300
ttattttttt atatgaaaaa tttaagaatt attgtgaatc gattccaagt tgaaggaaga 360
atcg 364
<210> 681
<211> 364
<212> DNA
<213> 玉兰(Magnolia denudata)
<400> 681
gacttgattg gattgagcct tggtagggaa acctactaag tggtaacttc caaattcaga 60
gaaaccctgg aattaaaaat gggcaatcct gagccaaatc ctgtgttcag aaaacaaggg 120
ttcagaaagc gagaatcaaa aaaggatagg tgcagagact caatggaagc tgttctaaca 180
aatggagttg actgcattgg tagaggaatc gaatccttct atcgaaacta cagaaaagat 240
gaccctgtat acatacgtat acatactgaa atatcaaata attaatcacg actcgaatcc 300
ttattttttt atatgaaaaa tttaagaatt attgtgaatc gattccaagt tgaaggaaga 360
atcg 364
<210> 682
<211> 368
<212> DNA
<213> 望春花(Magnolia biondii)
<400> 682
gacttgattg gattgagcct tggtagggaa acctactaag tggtaacttc caaattcaga 60
gaaaccctgg aattaaaaat gggcaatcct gagccaaatc ctgtgttcag aaaacaaggg 120
ttcagaaagc gagaatcaaa aaaaaaagga taggtgcaga gactcaatgg aagctgttct 180
aacaaatgga gttgactgca ttggtagagg aatcgaatcc ttctatcgaa actacagaaa 240
agatgaccct gtatacatac gtatacatac tgaaatatca aataattaat cacgactcga 300
atccttattt ttttatatga aaaatttaag aattattgtg aatcgattcc aagttgaagg 360
aagaatcg 368
<210> 683
<211> 364
<212> DNA
<213> Magnolia dealbata
<400> 683
gacttgattg gattgagcct tggtatggaa acctactaag tggtaacttc caaattcaga 60
gaaaccctgg aattaaaaat gggcaatcct gagccaaatc ctgtgttcag aaaacaaggg 120
ttcagaaagc gagaatcaaa aaaggatagg tgcagagact caatggaagc tgttctaaca 180
aatggagttg actgcattgg tagaggaatc gaatccttct atcgaaacta cagaaaagat 240
gaccctgtat acgtacgtat acatactgaa atatcaaata attaatcacg actcgaatcc 300
ttattttttt atatgaaaaa tttaagaatt attgtgaatc gattccaagt tgaaggaaga 360
atcg 364
<210> 684
<211> 364
<212> DNA
<213> 厚朴(Magnolia officinalis)
<400> 684
gacttgattg gattgagcct tggtatggaa acctactaag tggtaacttc caaattcaga 60
gaaaccctgg aattaaaaat gggcaatcct gagccaaatc ctgtgttcag aaaacaaggg 120
ttcagaaagc gagaatcaaa aaaggatagg tgcagagact caatggaagc tgttctaaca 180
aatggagttg actgcattgg tagaggaatc gaatccttct atcgaaacta cagaaaagat 240
gaccctgtat acgtacgtat acatgctgaa atatcaaata attaatcacg actcgaatcc 300
ttattttttt atatgaaaaa tttaagaatt attgtgaatc gattccaagt tgaaggaaga 360
atcg 364
<210> 685
<211> 364
<212> DNA
<213> Magnolia macrophylla
<400> 685
gacttgattg gattgagcct tggtatggaa acctactaag tggtaacttc caaattcaga 60
gaaaccctgg aattaaaaat gggcaatcct gagccaaatc ctgtgttcag aaaacaaggg 120
ttcagaaagc gagaatcaaa aaaggatagg tgcagagact caatggaagc tgttctaaca 180
aatggagttg actgcattgg tagaggaatc gaatccttct atcgaaacta cagaaaagat 240
gaccctgtat acgtacgtat acatactgaa atatcaaata attaatcacg actcgaatcc 300
ttattttttt atatgaaaaa tttaagaatt attgtgaatc gattccaagt tgaaggaaga 360
atcg 364
<210> 686
<211> 364
<212> DNA
<213> Magnolia mexicana
<400> 686
gacttgattg gattgagcct tggtatggaa acctactaag tggtaacttc caaattcaga 60
gaaaccctgg aattaaaaat gggcaatcct gagccaaatc ctgtgttcag aaaacaaggg 120
ttcagaaagc gagaatcaaa aaaggatagg tgcagagact caatggaagc tgttctaaca 180
aatggagttg actgcattgg tggaggaatc gaatccttct atcgaaacta cagaaaagat 240
gaccctgtat acgtacgtat acatactgaa atatcaaata attaatcacg actcgaatcc 300
ttattttttt atatgaaaaa tttaagaatt attgtgaatc gattccaagt tgaaggaaga 360
atcg 364
<210> 687
<211> 364
<212> DNA
<213> 夜香木兰(Magnolia coco)
<400> 687
gacttgattg gattgagcct tggtatggaa acctactaag tggtaacttc caaattcaga 60
gaaaccctgg aattaaaaat gggcaatcct gagccaaatc ctgtgttcag aaaacaaggg 120
ttcagaaagc gagaatcaaa aaaggatagg tgcagagact caatggaagc tgttctaaca 180
aatggagttg actgcattgg tagaggaatc gaatccttct atcgaaacta cagaaaagat 240
gaccctgtat acgtacgtat acatactgaa atatcaaata attaatcacg actcgaatcc 300
ttattttttt ctatgaaaaa tttaagaatt attgtgaatc gattccaagt tgaaggaaga 360
atcg 364
<210> 688
<211> 364
<212> DNA
<213> Magnolia yunnanensis
<400> 688
gacttgattg gattgagcct tggtatggaa acctactaag tggtaacttc caaattcaga 60
gaaaccctgg aattaaaaat gggcaatcct gagccaaatc ctgtgttcag aaaacaaggg 120
ttcagaaagc gagaatcaaa aaaggatagg tgcagagact caatggaagc tgttctaaca 180
aatggagttg actgcattgg tagaggaatc gaatccttct atcgaaacta cagaaaagat 240
gaccctgtat acgtacgtat acatactgaa atatcaaata attaatcacg actcgaatcc 300
ttattttttt atatgaaaaa tttaagaatt attgtgaatc gattccaagt tgaaggaaga 360
atcg 364
<210> 689
<211> 364
<212> DNA
<213> Magnolia splendens
<400> 689
gacttgattg gattgagcct tggtatggaa acctactaag tggtaacttc caaattcaga 60
gaaaccctgg aattaaaaat gggcaatcct gagccaaatc ctgtgttcag aaaacaaggg 120
ttcagaaagc gagaatcaaa aaaggatagg tgcagagact caatggaagc tgttctaaca 180
aatggagttg actgcattgg tagaggaatc gaatccttct atcgaaacta cagaaaagat 240
gactctgtat acgtacgtat acatactgaa atatcaaata attaatcacg actcgaatcc 300
ttattttttt atatgaaaaa tttaagaatt attgtgaatc gattccaagt tgaaggaaga 360
atcg 364
<210> 690
<211> 364
<212> DNA
<213> 山玉兰(Magnolia delavayi)
<400> 690
gacttgattg gattgagcct tggtatggaa acctactaag tggtaacttc caaattcaga 60
gaaaccctgg aattaaaaat gggcaatcct gagccaaatc ctgtgttcag aaaacaaggg 120
ttcagaaagc gagaatcaaa aaaggatagg tgcagagact caatggaagc tgttctaaca 180
aatggagttg actgcattgg tagaggaatc gaatccttct atcgaaacta cagaaaagat 240
gactctgtat acgtacgtat acatactgaa ataccaaata attaatcacg actcgaatcc 300
ttattttttt ctatgaaaaa tgtaagaatt attgtgaatc gattccaagt tgaaggaaga 360
atcg 364
<210> 691
<211> 357
<212> DNA
<213> Magnolia kwangsiensis
<400> 691
gacttgattg gattgagcct tggtatggaa acctactaag tggtaacttc caaattcaga 60
gaaaccctgg aattaaaaat gggcaatcct gagccaaatc ctgtgttcag aaaacaaggg 120
ttcagaaagc gagaatcaaa aaaggatagg tgcagagact caatggaagc tgttctaaca 180
aatggagttg actgcattgg tagaggaatc gaatccttct atcgaaacta cagaaaagat 240
gaccctgtat acgtacgtat acatactgaa atatcaaata attaatcacg accttatttt 300
tttatatgaa aaatttaaga attattgtga atcgattcca agttgaagga agaatcg 357
<210> 692
<211> 364
<212> DNA
<213> Magnolia pealiana
<400> 692
gacttgattg gattgagcct tggtatggaa acctactaag tggtaacttc caaattcaga 60
gaaaccctgg aattaaaaat gggcaatcct gagccaaatc ctgtgttcaa aaaacaaggg 120
ttcagaaagc gagaatcaaa aaaggatagg tgcagagact caatggaagc tgttctaaca 180
aatggagttg actgcattgg tagaggaatc gaatccttct atcgaaacta cagaaaagat 240
gaccctgtat acgtacgtat acatactgaa atatcaaata attaatcacg actcgaatcc 300
ttattttttt atatgaaaaa tttaagaatt attgtgaatc gattccaagt tgaaggaaga 360
atcg 364
<210> 693
<211> 277
<212> DNA
<213> 柳叶木兰(Magnolia salicifolia)
<400> 693
ctctttcaca aatgggtccg accataaatg tttctctctt atcacaagtc ttgtgataga 60
tatgatatac gtacaaatgc ccatattatg ggcaaggaat ctccattatt gaatcattca 120
cagtgcatat cattactctt acacttacaa agtcttcttt ttgaagatcc aagaaattcc 180
aggacctagg gaagattttg gaatgcaatt tgagtccctt taattgacat agacccaagt 240
cctctagtag gatgacgcat cgggaatggt cgggata 277
<210> 694
<211> 277
<212> DNA
<213> 武当木兰(Magnolia sprengeri)
<400> 694
ctctttcaca aatgggtccg accataaatg tttctctctt atcacaagtc ttgtgataga 60
tatgatatac gtacaaatgc ccatattatg ggcaaggaat ctccattatt gaatcattca 120
cagtgcatat cattactctt acacttacaa agccttcttt ttgaagatcc aagaaattcc 180
aggacctagg taagattttg gaatgcaatt tgagtccctt taattgacat agacccaagt 240
cctctagtag gatgacgcat cgggaatggt cgggata 277
<210> 695
<211> 262
<212> DNA
<213> 皱叶木兰(Magnolia kobus)
<400> 695
ctctttcaca aatgggtccg accataaatg tttctctctt atcacaagtc ttgtgataga 60
tatgatatac gtacaaatgc ccatattatg ggcaaggaat ctccattatt gaatcattca 120
cagtgcatat cattactctt acacttacaa agtcttcttt ttgaagatcc aagaaattcc 180
aggacctagg gaagattttg gaatgcaatt tgagtccctt taattgacat agacccaagt 240
cccatcggga atggtcggga ta 262
<210> 696
<211> 277
<212> DNA
<213> 玉兰(Magnolia denudata)
<400> 696
ctctttcaca aatgggtccg accataaatg tttctctctt atcacaagtc ttgtgataga 60
tatgatatac gtacaaatgc ccatattatg ggcaaggaat ctccattatt gaatcattca 120
cagtgcatat cattactctt acacttacaa agtcttcttt ttgaagatcc aagaaattcc 180
aggacctagg taagattttg gaatgcaatt tgagtccctt taattgacat agacccaagt 240
cctctagtag gatgacgcat cgggaatggt cgggata 277
<210> 697
<211> 277
<212> DNA
<213> 望春花(Magnolia biondii)
<400> 697
ctctttcaca aatgggtccg accataaatg tttctctctt atcacaagtc ttgtgataga 60
tatgatatac gtacaaatgc ccatattatg ggcaaggaat ctccattatt gaatcattca 120
cagtgcatat cattactctt acacttacaa agtcttcttt ttgaagatcc aagaaattcc 180
aggacctagg gaagattttg gaatgcaatt tgagtccctt taattgacat agacccgagt 240
cctctagtag gatgacgcat cgggaatggt cgggata 277
<210> 698
<211> 277
<212> DNA
<213> Magnolia dealbata
<400> 698
ctctttcaca aatgggtccg accagaaatg tttctctctt atcacaagtc ttgtgataga 60
tatgatatac gtgcaaatgc ccatattatg ggcaaggaat ctccattatt gaatcattca 120
cagtgcatat cattactctt acacttacaa agtcttcttt ttgaagatcc aagaaattcc 180
aggacctagg taagattttg gaatgctttt tgagtccctt taattgacat agacccaagc 240
cctctagtag gatgccgcat cgggaatggt cgggata 277
<210> 699
<211> 277
<212> DNA
<213> 西康玉兰(Magnolia wilsonii)
<400> 699
ctctttcaca aatgggtccg accagaaatg tttctctctt atcacaagtc ttgtgataga 60
tatgatatac gtacaaatgc ccatattatg ggcaaggaat ctccattatt gaatcattca 120
cagtgcatat cattactctt acacttacaa agtcttcttt ttgaagatcc aagaaattcc 180
aggacctagg taagattttg gaatgctttt tgagtccctt taattgacat agacccaagt 240
cctctagtag gatgacgcat cgggaatggt cgggata 277
<210> 700
<211> 277
<212> DNA
<213> 厚朴(Magnolia officinalis)
<400> 700
ctctttcaca aatgggtccg accagaaatg tttctctctt atcacaagtc ttgtgataga 60
tatgatatac gtacaaatgc ccatattatg ggcaaggaat ctccattatt gaatcattca 120
cagtgcatat cattactctt acacttacaa agtcttcttt ttgaagatcc aagaaattcc 180
aggacctagg taagattttg gaatgctttt tgagtccctt taattgacat agacccaagt 240
cctctagtag gatgacgcat cgggaatggt cgggata 277
<210> 701
<211> 277
<212> DNA
<213> Magnolia macrophylla
<400> 701
ctctttcaca aatgggtccg accagaaatg tttctctctt atcacaagtc ttgtgataga 60
tatgatatac gtacaaatgc ccatattatg ggcaaggaat ctccattatt gaatcattca 120
cagtgcatat cattactctt acacttacaa agtcttcttt ttgaagatcc aagaaattcc 180
aggacctagg taagattttg gaatgctttt tgagtccctt taattgacat agacccaagc 240
cctctagtag gatgacgcat cgggaatggt cgggata 277
<210> 702
<211> 277
<212> DNA
<213> Magnolia mexicana
<400> 702
ctctttcaca aatgggtccg accagaaatg tttctctctt atcacaagtc ttgtgataga 60
tatgatatac gtacaaatgc ccatattatg ggcaaggaat ctccattatt gaatcattca 120
cagtgcatat cattactctt acacttacaa agtcttcttt ttgaagatcc aagaaattcc 180
aggacctagg taagattttg gaatgctttt tgagtccctt taattgacat agacccaagt 240
cctctagtag gatgacgcat cgggaatggt cgggata 277
<210> 703
<211> 276
<212> DNA
<213> 夜香木兰(Magnolia coco)
<400> 703
ctctttcaca aatgggtccg accagaaatg tttctctctt atcacaagtc ttgtgataga 60
tatgatatac gtacaaatgc ccatattatg ggcaaggaat ctccattatt gaatcattca 120
cagtgcatat cattactctt acacttacaa agtcttcttt ttgaagatcc aagaaattcc 180
aggacctagg taagattttg gaatgctttt tgagtccctt taattgacat agacccaagt 240
cctctagtag gatgaccatc gggaatggtc gggata 276
<210> 704
<211> 277
<212> DNA
<213> Magnolia yunnanensis
<400> 704
ctctttcaca aatgggtccg accagaaatg tttctctctt atcacaagtc ttgtgataga 60
tatgatatac gtacaaatgc ccatattatg ggcaaggaat ctccattatt gaatcattca 120
cagtgcatat cattactctt acacttacaa agtcttcttt ttgaagatcc aagaaattcc 180
aggacctagg taagattttg gaatgctttt tgaatccctt taattgacat agacccaagt 240
cctctagtag gatgacgcat cgggaatggt cgggata 277
<210> 705
<211> 277
<212> DNA
<213> 三瓣木兰(Magnolia tripetala)
<400> 705
ctctttcaca aatgggtccg accagaaatg tttctctctt atcacaagtc ttgtgataga 60
tatgatatac gtacaaatgc ccatattatg ggcaaggaat ctccattatt gaatcattca 120
cagtgcatat cattactctt acacttacaa agtcttcttt ttgaagatcc aagaaattcc 180
aggacctagg taagattttg gaatgctttt tgagtccctt taattgacat agacccaagt 240
cctctagtag gatgacgcat cgggaatggt cgggata 277
<210> 706
<211> 277
<212> DNA
<213> Magnolia sinica
<400> 706
ctctttcaca aatgggtccg accagaaatg tttctctctt atcacaagtc ttgtgataga 60
tatgatatac gtacaaatgc ccatattatg ggcaaggaat ctccattatt gaatcattca 120
cagtgcatat cattactctt acacttacaa agtcttcttt ttgaagatcc aagaaattcc 180
aggacctagg taagattttg gaatgctttt tgaatccctt taattgacat agacccaagt 240
cctctagtag gatgacgcat cgggaatggt cgggata 277
<210> 707
<211> 277
<212> DNA
<213> Magnolia cathcartii
<400> 707
ctctttcaca aatgggtccg accagaaatg tttctctctt atcacaagtc ttgtgataga 60
tatgatatac gtacaaatgc ccatattatg ggcaaggaat ctccattatt gaatcattca 120
cagtgcatat cattactctt acacttacaa agtcttcttt ttgaagatcc aagaaattcc 180
aggacctagg taagattttg gaatgctttt tgagtccctt taattgacat agacccaagt 240
cctctagtag gatgacgcat cgggaatggt cgggata 277

Claims (14)

1.一种用于鉴别生药的引物组,其中,
所述生药选自于由以下生药组成的组:半夏/天南星、芍药/牡丹皮、桂皮、当归、苍术/白术、柴胡、天门冬、山茱萸、百合、红参、天麻、黄芩、人参、升麻、猪苓、附子、辛夷、丁香、钩藤、香附子、黄连、生姜/干姜、山栀子、黄柏、厚朴、泽泻、吉草根、橡木皮、连翘、良姜、莲肉、红花以及苏木,
所述引物组是由以下所示碱基序列组成的多核苷酸:
半夏/天南星时,为SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2;
芍药/牡丹皮时,为SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6,或者SEQID NO:3和SEQ ID NO:229;
桂皮时,为SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8;
当归时,为SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10,或者SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:12;
苍术/白术时,为SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14;
柴胡时,为SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16;
天门冬时,为SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18;
山茱萸时,为SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20;
百合时,为SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22,或者SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24;
红参时,为SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26,或者SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28;
天麻时,为SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:4,或者SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:31;
黄芩时,为SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:32,或者SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:33;
人参时,为SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:34,或者SEQ ID NO:35和SEQ ID NO:36;
升麻时,为SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:37和SEQ ID NO:40,或者SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:39;
猪苓时,为SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:43;
附子时,为SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:45和SEQ ID NO:4,或者SEQ IDNO:46和SEQ ID NO:4;
辛夷时,为SEQ ID NO:47和SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:49和SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:230和SEQ ID NO:231,或者SEQ ID NO:232和SEQ ID NO:50;
丁香时,为SEQ ID NO:51和SEQ ID NO:52;
钩藤时,为SEQ ID NO:53和SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:55和SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:57和SEQ ID NO:54,或者SEQ ID NO:58和SEQ ID NO:56;
香附子时,为SEQ ID NO:59和SEQ ID NO:60,或者SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:61;
黄连时,为SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63,或者SEQ ID NO:64和SEQ ID NO:65;
生姜/干姜时,为SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67;
山栀子时,为SEQ ID NO:11和SEQ ID NO:68;
黄柏时,为SEQ ID NO:69和SEQ ID NO:70;
厚朴时,为SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:71和SEQ ID NO:73,或者SEQ IDNO:74和SEQ ID NO:72;
泽泻时,为SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:78、SEQ ID NO:75和SEQ ID NO:79,或者SEQ ID NO:77和SEQ ID NO:80;
吉草根时,为SEQ ID NO:81和SEQ ID NO:82;
橡木皮时,为SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:83和SEQ ID NO:85,或者SEQID NO:86和SEQ ID NO:87;
连翘时,为SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89,或者SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:91;
良姜时,为SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93,或者SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:94;
莲肉时,为SEQ ID NO:95和SEQ ID NO:4,或者SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:36;
红花时,为SEQ ID NO:97和SEQ ID NO:4,或者SEQ ID NO:44和SEQ ID NO:36;
苏木时,为SEQ ID NO:98和SEQ ID NO:99。
2.一种生药鉴别套装,其包含选自于由权利要求1所述的用于鉴别生药的引物组组成的组中一个以上的引物组。
3.根据权利要求2所述的生药鉴别套装,其包含记载有扩增产物碱基序列信息的碱基序列表,所述扩增产物通过以从生药的基原植物中制备的核酸为模板并使用用于鉴别该生药的引物进行核酸扩增反应而得到。
4.一种半夏/天南星的鉴别方法,包括以下步骤:
从候选半夏/天南星的待测植物中提取核酸;
以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;
确定扩增产物的碱基序列;以及
将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:100或SEQ ID NO:101所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为半夏/天南星的基原植物,所述候选半夏/天南星被鉴别为半夏/天南星。
5.一种芍药/牡丹皮的鉴别方法,包括以下步骤:
从候选芍药/牡丹皮的待测植物中提取核酸;
以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4或者SEQ ID NO:5和SEQ IDNO:6所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;
确定扩增产物的碱基序列;以及
将使用由SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:102或SEQ ID NO:211所示的碱基序列进行比对,将使用由SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:103或SEQ ID NO:221所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:229所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:244或SEQ ID NO:245所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为芍药的基原植物,所述候选芍药/牡丹皮被鉴别为芍药或牡丹皮。
6.一种桂皮的鉴别方法,包括以下步骤:
从候选桂皮的待测植物中提取核酸;
以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;
确定扩增产物的碱基序列;以及
将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:104所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为桂皮的基原植物,所述候选桂皮被鉴别为桂皮。
7.一种当归的鉴别方法,包括以下步骤:
从候选当归的待测植物中提取核酸;
以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10或者SEQ ID NO:11和SEQID NO:12所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;
确定扩增产物的碱基序列;以及
将使用由SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:10所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:105所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:11和SEQ IDNO:12所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:106所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为当归的基原植物,所述候选当归被鉴别为当归。
8.一种苍术/白术的鉴别方法,包括以下步骤:
从候选苍术/白术的待测植物中提取核酸;
以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:13和SEQ ID NO:14所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;
确定扩增产物的碱基序列;以及
将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:107~SEQ ID NO:110,以及SEQ ID NO:289~SEQID NO:291中任一个所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为苍术/白术的基原植物,所述候选苍术/白术被鉴别为苍术/白术。
9.一种柴胡的鉴别方法,包括以下步骤:
从候选柴胡的待测植物中提取核酸;
以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;
确定扩增产物的碱基序列;以及
将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:111或SEQ ID NO:294所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为柴胡的基原植物,所述候选柴胡被鉴别为柴胡。
10.一种天门冬的鉴别方法,包括以下步骤:
从候选天门冬的待测植物中提取核酸;
以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:17和SEQ ID NO:18所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;
确定扩增产物的碱基序列;以及
将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:112~SEQ ID NO:115,或者SEQ ID NO:299中任一个所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为天门冬的基原植物,所述候选天门冬被鉴别为天门冬。
11.一种山茱萸的鉴别方法,包括以下步骤:
从候选山茱萸的待测植物中提取核酸;
以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;
确定扩增产物的碱基序列;以及
将扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:116所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为山茱萸的基原植物,所述候选山茱萸被鉴别为山茱萸。
12.一种百合的鉴别方法,包括以下步骤:
从候选百合的待测植物中提取核酸;
以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22或者SEQ ID NO:23和SEQID NO:24所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;
确定扩增产物的碱基序列;以及
将使用由SEQ ID NO:21和SEQ ID NO:22所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:117,或者SEQ ID NO:311~SEQ ID NO:314所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:24所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:118,或者SEQ ID NO:324~SEQ ID NO:326所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为百合的基原植物,所述候选百合被鉴别为百合。
13.一种红参的鉴别方法,包括以下步骤:
从候选红参的待测植物中提取核酸;
以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26或者SEQ ID NO:27和SEQID NO:28所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;
确定扩增产物的碱基序列;以及
将使用由SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:119所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:27和SEQ IDNO:28所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:120所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为红参的基原植物,所述候选红参被鉴别为红参。
14.一种天麻的鉴别方法,包括以下步骤:
从候选天麻的待测植物中提取核酸;
以提取的核酸为模板,使用由SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:4或者SEQ ID NO:30和SEQID NO:31所示碱基序列组成的引物组,对核糖体DNA的ITS区域进行扩增;
确定扩增产物的碱基序列;以及
将使用由SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:4所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:121所示的碱基序列进行比对,或将使用由SEQ ID NO:30和SEQ IDNO:31所示碱基序列组成的引物组时的扩增产物的碱基序列与SEQ ID NO:122所示的碱基序列进行比对,当二者的碱基序列一致时,则所述待测植物被鉴别为天麻的基原植物,所述候选天麻被鉴别为天麻。
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