CN108929886A - 生产目标物质的方法 - Google Patents

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Abstract

提供了生产目标物质例如香草醛和香草酸的方法。通过使用具有目标物质生产能力的微生物，从碳源或目标物质的前体生产目标物质，所述微生物已经以所述微生物具有特定特征的方式进行了修饰，例如AICAR甲酰转移酶/IMP环水解酶的活性降低，3‑PGDH的活性增加，和L‑丝氨酸脱氨酶的活性降低。

Description

生产目标物质的方法
技术领域
本发明涉及通过使用微生物生产目标物质例如香草醛和香草酸的方法。
背景技术
香草醛是提供香草气味的主要成分，并且在食品，饮料，香水等中用作芳香剂。香草醛通常通过从天然产品提取或通过化学合成来生产。
也已经在香草醛的生产中尝试生物工程技术。例如，已经尝试通过使用各种微生物和原材料，例如丁子香酚、异丁子香酚、阿魏酸、葡萄糖、香草酸、椰子壳等来生产香草醛(Kaur B.and Chakraborty D.,Biotechnological and molecular approaches forvanillin production:a review.Appl Biochem Biotechnol.2013Feb；169(4):1353-72)。另外，使用生物工程技术生产香草醛的其它方法包括以糖苷生产香草醛(WO2013/02288和WO2004/111254)，通过使用香草醛合酶从阿魏酸生产香草醛(JP2015-535181)，通过大肠杆菌的发酵生产香草酸且然后将香草酸转化为香草醛(美国专利号6,372,461)。
磷酸核糖基氨基咪唑甲酰胺甲酰转移酶(phosphoribosylaminoimidazolecarboxamide formyltransferase,AICAR甲酰转移酶)和IMP环化水解酶(cyclohydrolase)是涉及嘌呤核苷酸生物合成的酶。AICAR甲酰转移酶催化将5-氨基-1-(5-磷酸-D-核糖基)咪唑-4-甲酰胺(5-amino-1-(5-phospho-D-ribosyl)imidazole-4-carboxamide,AICAR)和10-甲酰四氢叶酸转化为5-甲酰胺-1-(5-磷酸-D-核糖基)咪唑-4-甲酰胺(FAICAR)和四氢叶酸的反应。IMP环化水解酶催化脱水FAICAR以生成IMP的反应。在一些生物体中，AICAR甲酰转移酶和IMP环化水解酶作为双功能酶编码。双功能AICAR甲酰转移酶/IMP环化水解酶的实例可以包括PurH蛋白，其由purH基因编码。
D-3-磷酸甘油酸脱氢酶(3-PGDH)是参与L-丝氨酸生物合成的酶，其催化在电子受体的存在下氧化3-磷酸甘油酸以生成3-磷酸羟基丙酮酸的反应。3-PGDH的实例可以包括SerA蛋白，其由serA基因编码。
L-丝氨酸脱氨酶是涉及L-丝氨酸利用的酶，其催化将L-丝氨酸转化为丙酮酸和氨的反应。L-丝氨酸脱氨酶的实例可以包括SdaA蛋白，其由sdaA基因编码。
发明内容
本发明描述了用于改进目标物质例如香草醛和香草酸的生产的新的技术，从而提供了有效生产目标物质的方法。
本发明的一个方面是能够以显著改善的方式生产目标物质例如香草醛和香草酸的微生物，其通过修饰所述微生物以使所述微生物具有本文所述的特定特征。
也就是说，本发明的一个方面是提供生产目标物质的方法，所述方法包括：
通过使用具有生产所述目标物质的能力的微生物来生产所述目标物质，
其中所述微生物具有选自下组的特征：
(A)选自下组的特征：
(A-i)所述微生物已经以使AICAR甲酰转移酶/IMP环化水解酶的活性相比于未修饰菌株降低的方式进行了修饰，
(A-ii)所述微生物已经以使编码AICAR甲酰转移酶/IMP环化水解酶的基因具有突变的方式进行了修饰，所述突变改善所述微生物生产所述目标物质的能力，和
(A-iii)其组合；
(B)选自下组的特征：
(B-i)所述微生物已经以使D-3-磷酸甘油酸脱氢酶的活性相比于未修饰菌株增加的方式进行了修饰，
(B-ii)所述微生物已经以使所述微生物具有编码对L-丝氨酸的反馈抑制有抗性的D-3-磷酸甘油酸脱氢酶的基因的方式进行了修饰，和
(B-iii)其组合；
(C)所述微生物已经以使L-丝氨酸脱氨酶的活性相比于未修饰菌株降低的方式进行了修饰；和
(D)其组合，
其中所述目标物质选自下组：
(X)代谢物，所述代谢物的生物合成需要S-腺苷甲硫氨酸；
(Y)L-甲硫氨酸；和
(Z)其组合。
本发明的进一步的方面是提供生产目标物质的方法，所述方法包括：
通过使用具有生产所述目标物质的能力的微生物来生产所述目标物质，
其中所述微生物具有选自下组的特征：
(i)所述微生物已经以使AICAR甲酰转移酶/IMP环化水解酶的活性相比于未修饰菌株降低的方式进行了修饰，
(ii)所述微生物已经以使编码AICAR甲酰转移酶/IMP环化水解酶的基因具有突变的方式进行了修饰，所述突变改善所述微生物生产所述目标物质的能力，和
(iii)其组合；
(X)代谢物，所述代谢物的生物合成需要S-腺苷甲硫氨酸；
(Y)L-甲硫氨酸；和
(Z)其组合。
本发明的进一步的方面是提供生产目标物质的方法，所述方法包括：
通过使用具有生产所述目标物质的能力的微生物来生产所述目标物质，
其中所述微生物具有选自下组的特征：
(i)所述微生物已经以使D-3-磷酸甘油酸脱氢酶的活性相比于未修饰菌株增加的方式进行了修饰，
(ii)所述微生物已经以使所述微生物具有编码对L-丝氨酸的反馈抑制有抗性的D-3-磷酸甘油酸脱氢酶的基因的方式进行了修饰，和
(iii)其组合；
其中所述目标物质选自下组：
(X)代谢物，所述代谢物的生物合成需要S-腺苷甲硫氨酸；
(Y)L-甲硫氨酸；和
(Z)其组合。
本发明的进一步的方面是提供生产目标物质的方法，所述方法包括：
通过使用具有生产所述目标物质的能力的微生物来生产所述目标物质，
其中所述微生物已经以使L-丝氨酸脱氨酶的活性相比于未修饰菌株降低的方式进行了修饰，
其中所述目标物质选自下组：
(X)代谢物，所述代谢物的生物合成需要S-腺苷甲硫氨酸；
(Y)L-甲硫氨酸；和
(Z)其组合。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述生产包括：
在含有碳源的培养基中培养所述微生物以在所述培养基中生产和积累所述目标物质。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述生产包括：
通过使用所述微生物将所述目标物质的前体转化为所述目标物质。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述使用：
在含有所述前体的培养基中培养所述微生物以在所述培养基中生产和积累所述目标物质。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述转化包括：
允许所述微生物的细胞在反应混合物中作用于所述前体以在所述反应混合物中生产和积累所述目标物质。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述细胞是存在于所述微生物的培养液中的细胞、从所述培养液收集的细胞、存在于所述培养液的加工产品中的细胞、存在于所述收集的细胞的加工产品中的细胞、或这些的组合。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述前体选自下组：原儿茶酸、原儿茶醛、L-色氨酸、L-组氨酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-精氨酸、L-鸟氨酸、甘氨酸，及其组合。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，所述方法进一步包括收集所述目标物质。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述AICAR甲酰转移酶/IMP环化水解酶由purH基因编码。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述purH基因编码选自下组的蛋白质：
(a)包含SEQ ID NO:135的氨基酸序列的蛋白质；
(b)包含SEQ ID NO:135的氨基酸序列，但该氨基酸序列包括1至10个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的蛋白质，且其中所述蛋白质具有AICAR甲酰转移酶/IMP环化水解酶活性；和
(c)包含与SEQ ID NO:135的氨基酸序列具有90％或更高同一性的氨基酸序列的蛋白质，且其中所述蛋白质具有AICAR甲酰转移酶/IMP环化水解酶活性。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述AICAR甲酰转移酶/IMP环化水解酶的活性通过选自下组的方式降低：
(A)弱化编码AICAR甲酰转移酶/IMP环化水解酶的基因的表达；
(B)破坏编码AICAR甲酰转移酶/IMP环化水解酶的基因；
(C)修饰编码AICAR甲酰转移酶/IMP环化水解酶的基因而使得该基因具有改善所述微生物生产所述目标物质的能力的突变；和
(D)其组合。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述弱化或所述破坏包括缺失编码AICAR甲酰转移酶/IMP环化水解酶的基因。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述微生物是属于肠杆菌科的细菌、棒状杆菌细菌，或酵母。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述微生物是属于棒状杆菌属的细菌。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述微生物是谷氨酸棒状杆菌。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述微生物是属于埃希氏菌属的细菌。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述微生物是大肠杆菌。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述代谢物选自下组：香草醛、香草酸、褪黑激素、麦角硫因、麦根酸、阿魏酸、多胺、愈创木酚、4-乙烯基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、肌酸，及其组合。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述微生物已经以使参与所述目标物质的生物合成的酶的活性相比于未修饰菌株增加的方式进行了进一步的修饰。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述酶选自下组：3-脱氧-D-阿拉伯糖-庚酮糖酸7-磷酸合酶、3-脱氢奎尼酸合酶、3-脱氢奎尼酸脱水酶、3-脱氢莽草酸脱水酶、O-甲基转移酶、芳香族醛氧化还原酶及其组合。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述微生物已经以使磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶的活性相比于未修饰菌株增加的方式进行了进一步的修饰。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述微生物已经以使参与除所述目标物质外的物质的副生产的酶的活性相比于未修饰菌株降低的方式进行了进一步的修饰。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述酶选自下组：香草酸脱甲基酶、原儿茶酸3,4-双加氧酶、醇脱氢酶、莽草酸脱氢酶及其组合。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述微生物已经以使L-半胱氨酸生物合成酶的活性相比于未修饰菌株增加的方式进行了进一步的修饰。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述L-半胱氨酸生物合成酶由选自下组的基因编码：cysI基因、cysX基因、cysH基因、cysD基因、cysN基因、cysY基因、cysZ基因、fpr2基因及其组合。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述L-半胱氨酸生物合成酶的活性通过增加由cysR基因编码的蛋白质的活性增加。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述微生物已经以使由NCgl2048基因编码的蛋白质的活性相比于未修饰菌株降低的方式进行了进一步的修饰。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述微生物已经以使烯醇酶的活性相比于未修饰菌株降低的方式进行了进一步的修饰。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述微生物已经以使S-腺苷基-L-高半胱氨酸水解酶的活性相比于未修饰菌株增加的方式进行了进一步的修饰。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述突变是与SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列第37位的丝氨酸残基对应的氨基酸残基被另一氨基酸残基替换的突变。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述另一氨基酸残基是苯丙氨酸残基。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述D-3-磷酸甘油酸脱氢酶由serA基因编码。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述serA基因编码选自下组的蛋白质：
(a)包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列的蛋白质；
(b)包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列，但该氨基酸序列包括1至10个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的蛋白质，且其中所述蛋白质具有D-3-磷酸甘油酸脱氢酶活性；和
(c)包含与SEQ ID NO:178的氨基酸序列具有90％或更高同一性的氨基酸序列的蛋白质，且其中所述蛋白质具有D-3-磷酸甘油酸脱氢酶活性。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述D-3-磷酸甘油酸脱氢酶的活性通过选自下组的方式增加：
(A)增加编码D-3-磷酸甘油酸脱氢酶的基因的表达；
(B)以使所述微生物具有编码对L-丝氨酸的反馈抑制有抗性的D-3-磷酸甘油酸脱氢酶的基因的方式修饰所述微生物；和
(C)其组合。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述编码D-3-磷酸甘油酸脱氢酶的基因的表达通过增加所述基因的拷贝数和/或修饰所述基因的表达控制序列增加。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述对L-丝氨酸的反馈抑制有抗性的D-3-磷酸甘油酸脱氢酶包含突变，所述突变为与SEQ ID NO:178所示的氨基酸序列的第325位的谷氨酸残基对应的氨基酸残基被另一氨基酸残基替换的突变。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述另一氨基酸残基是赖氨酸残基。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述对L-丝氨酸的反馈抑制有抗性的D-3-磷酸甘油酸脱氢酶是选自下组的蛋白质：
(a)包含SEQ ID NO:180的氨基酸序列的蛋白质；
(b)包含SEQ ID NO:180的氨基酸序列，但该序列包括1至10个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的蛋白质，且其中所述蛋白质具有D-3-磷酸甘油酸脱氢酶活性并对L-丝氨酸的反馈抑制有抗性；和
(c)包含与SEQ ID NO:180的氨基酸序列具有90％或更高同一性的氨基酸序列的蛋白质，且其中所述蛋白质具有D-3-磷酸甘油酸脱氢酶活性并对L-丝氨酸的反馈抑制有抗性。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述L-丝氨酸脱氨酶由sdaA基因编码
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述sdaA基因编码选自下组的蛋白质：
(a)包含SEQ ID NO:147的氨基酸序列的蛋白质；
(b)包含SEQ ID NO:147的氨基酸序列，但该氨基酸序列包括1至10个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的蛋白质，且其中所述蛋白质具有L-丝氨酸脱氨酶活性；和
(c)包含与SEQ ID NO:147的氨基酸序列具有90％或更高同一性的氨基酸序列的蛋白质，且其中所述蛋白质具有L-丝氨酸脱氨酶活性。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述L-丝氨酸脱氨酶的活性通过弱化编码L-丝氨酸脱氨酶的基因的表达，或通过破坏编码L-丝氨酸脱氨酶的基因降低。
本发明的进一步的方面是提供如上文所述的方法，其中所述弱化或所述破坏包括缺失所述编码L-丝氨酸脱氨酶的基因。
本发明的进一步的方面是提供生产香草醛的方法，所述方法包括：
通过如上文所述的方法生产香草酸；和
将所述香草酸转化为香草醛。
具体实施方式
<1>微生物
本文所述的微生物是具有生产目标物质的能力的微生物，所述微生物已经以使所述微生物具有如本文所述的特征的方式进行了修饰。生产目标物质的能力也可以称为“目标物质生产能力”。
<1-1>具有目标物质生产能力的微生物
短语“具有目标物质生产能力的微生物”可以指能够生产目标物质的微生物。
短语“具有目标物质生产能力的微生物”可以指在所述微生物用于发酵方法中时，能够通过发酵生产目标物质的微生物。也就是说，短语“具有目标物质生产能力的微生物”可以指能够从碳源生产目标物质的微生物。特别地，短语“具有目标物质生产能力的微生物”可以指当在培养基，例如含有碳源的培养基中培养时，在培养基中以能够从培养基收集目标物质的程度生产并积累目标物质。
另外，短语“具有目标物质生产能力的微生物”可以指在微生物用于生物转化方法中时，能够通过生物转化生产目标物质的微生物。即，短语“具有目标物质生产能力的微生物”可以指能够从目标物质的前体生产目标物质的微生物。特别地，短语“具有目标物质生产能力的微生物”可以指下述微生物，其当在含有目标物质前体的培养基中培养时，能够在培养基中生产并积累目标物质至能够从所述培养基收集所述目标物质的程度。另外，特别地，短语“具有目标物质生产能力的微生物”可以指下述微生物，其当允许作用于反应混合物中的目标物质的前体时，能够在反应混合物中生产并积累目标物质至能够从所述反应混合物收集所述目标物质的程度。
具有目标物质生产能力的微生物可以能够以比未修饰菌株可获得的量更大的量在培养基或反应混合物中生产并积累目标物质。未修饰菌株也可以称为“未修饰的微生物菌株”。短语“未修饰菌株”或“未修饰的微生物菌株”可以指未被修饰以使所述微生物具有特定特征的对照菌株。具有目标物质生产能力的微生物能够以例如0.01g/L或更多，0.05g/L或更多，或0.09g/L或更多的量在培养基或反应混合物中累积目标物质。
目标物质可以选自L-甲硫氨酸和其生物合成需要S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine，SAM)的代谢物。其生物合成需要SAM的代谢物的实例可以包括例如香草醛、香草酸、褪黑激素、麦角硫因、麦根酸、阿魏酸、多胺、愈创木酚、4-乙烯基愈创木酚、4-乙基愈创木酚，和肌酸。多胺的例子可以包括亚精胺和精胺。微生物可以仅能够生产一种目标物质，或者可以能够生产两种或更多种目标物质。而且，微生物可以能够从目标物质的一种前体或从目标物质的两种或更多种前体生产目标物质。
当目标物质是能够形成盐的化合物时，目标物质可以以游离化合物，其盐或它们的混合物的形式获得。也就是说，除非另有说明，否则术语“目标物质”可以指游离形式的目标物质，其盐或这些的混合物。盐的实例可以包括例如硫酸盐，盐酸盐，碳酸盐，铵盐，钠盐和钾盐。作为目标物质的盐，可以使用一种盐，或者可以组合使用两种或更多种盐。
可以用作亲本菌株以构建本文所述的微生物的微生物没有特别限制。微生物的实例包括细菌和酵母。
细菌的实例可以包括属于肠杆菌科(Enterobacteriaceae)的细菌和棒状杆菌细菌。
属于肠杆菌科的细菌的实例可以包括属于埃希氏菌属(Escherichia)、肠杆菌属(Enterobacter)、泛菌属(Pantoea)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、沙雷氏菌属(Serratia)、欧文氏菌属(Erwinia)、发光杆菌(Photorhabdus)、普罗威登斯菌属(Providencia)、沙门氏菌属(Salmonella)、摩根菌属(Morganella)等的细菌。具体来说，可以使用根据NCBI(国家生物技术信息中心)数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwwtax.cgi？id＝91347)中使用的分类法分类为肠杆菌科的细菌。
埃希氏菌属细菌没有特别限制，并且其实例可以包括根据微生物领域技术人员已知的分类法分类为埃希氏菌属的那些。埃希氏菌属细菌的实例可以包括例如Neidhardt etal.(Backmann B.J.,1996,Derivations and Genotypes of some mutant derivativesof Escherichia coli K-12,第2460-2488页，表1，于F.D.Neidhardt(编),Escherichiacoli and Salmonella Cellular and Molecular Biology/第二版,American Societyfor Microbiology Press,Washington,D.C.)的工作中描述的那些。埃希氏菌属细菌的实例可以包括例如大肠杆菌。大肠杆菌的具体实例可以包括例如大肠杆菌K-12菌株如W3110菌株(ATCC 27325)和MG1655菌株(ATCC 47076)；大肠杆菌K5菌株(ATCC 23506)；大肠杆菌B菌株如BL21(DE3)菌株；及其衍生菌株。
肠杆菌属细菌没有特别限制，并且实例可以包括根据微生物领域技术人员已知的分类法分类为肠杆菌属的那些。肠杆菌属细菌的实例可以包括例如成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)。成团肠杆菌的具体实例可以包括例如成团肠杆菌ATCC 12287菌株。产气肠杆菌的具体实例可以包括例如产气肠杆菌ATCC 13048菌株、NBRC 12010菌株(Biotechnol.Bioeng.,2007,Mar.27；98(2):340-348)和AJ110637菌株(FERM BP-10955)。肠杆菌属细菌的实例还可以包括例如欧洲专利申请公开(EP-A)No.0952221中描述的菌株。此外，成团肠杆菌还可以包括分类为成团泛菌(Pantoea agglomerans)的一些菌株。
泛菌细菌没有特别限制，并且实例包括根据微生物领域的技术人员已知的分类法分类为泛菌属的那些。泛菌属细菌的实例包括例如菠萝泛菌(Pantoea ananatis)、斯氏泛菌(Pantoea stewartii)、成团泛菌和柠檬泛菌(Pantoea citrea)。菠萝泛菌的具体实例包括例如菠萝泛菌LMG20103菌株、AJ13355菌株(FERM BP-6614)、AJ13356菌株(FERM BP-6615)、AJ13601菌株(FERM BP-7207)、SC17菌株(FERM BP-11091)、SC17(0)菌株(VKPM B-9246)和SC17sucA菌株(FERM BP-8646)。一些肠杆菌属细菌和欧文氏菌属细菌被重新分类为泛菌属(Int.J.Syst.Bacteriol.,39,337-345(1989)；Int.J.Syst.Bacteriol.,43,162-173(1993))。例如，根据16S rRNA等的核苷酸序列分析，最近将一些成团肠杆菌(Enterobacter agglomerans)菌株重新分类成成团泛菌、菠萝泛菌、斯氏泛菌，等等(Int.J.Syst.Bacteriol.,39,337-345(1989))。泛菌属细菌可以包括如上所述重新分类为泛菌属的那些。
欧文氏菌属细菌的实例可以包括解淀粉欧文氏菌(Erwinia amylovora)和胡萝卜软腐欧文氏菌(Erwinia carotovora)。克雷伯氏菌属细菌的实例可以包括植物克雷伯氏菌(Klebsiella planticola)。
棒状杆菌细菌的实例可以包括属于棒状杆菌属、短杆菌属
(Brevibacterium)、微杆菌属(Microbacterium)等的细菌。
棒状杆菌细菌的具体实例可以包括以下物种。
嗜乙酰乙酸棒杆菌(Corynebacterium acetoacidophilum)
醋谷棒杆菌(Corynebacterium acetoglutamicum)
解烷棒杆菌(Corynebacterium alkanolyticum)
美棒杆菌(Corynebacterium callunae)
钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)
谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)
百合棒杆菌(Corynebacterium lilium)
栖糖蜜棒杆菌(Corynebacterium melassecola)
嗜热产氨棒杆菌(Corynebacterium thermoaminogenes)(Corynebacteriumefficiens)
力士棒杆菌(Corynebacterium herculis)
散枝短杆菌(Brevibacterium divaricatum)(谷氨酸棒状杆菌)
黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)(谷氨酸棒状杆菌)
Brevibacterium immariophilum
乳发酵短杆菌(Brevibacterium lactofermentum)(谷氨酸棒状杆菌)
玫瑰色短杆菌(Brevibacterium roseum)
解糖短杆菌(Brevibacterium saccharolyticum)
硫殖短杆菌(Brevibacterium thiogenitalis)
产氨棒杆菌(Corynebacterium ammoniagenes)(停滞棒杆菌(Corynebacteriumstationis))
白色短杆菌(Brevibacterium album)
赌状短杆菌(Brevibacterium cerinum)
嗜氨微杆菌(Microbacterium ammoniaphilum)
棒状杆菌细菌的具体实例可以包括以下菌株。
嗜乙酰乙酸棒杆菌ATCC 13870
醋谷棒杆菌ATCC 15806
解烷棒杆菌ATCC 21511
美棒杆菌ATCC 15991
钝齿棒杆菌AS1.542
谷氨酸棒状杆菌ATCC 13020、ATCC 13032、ATCC 13060、ATCC 13869、FERM BP-734
百合棒杆菌ATCC 15990
栖糖蜜棒杆菌ATCC 17965
Corynebacterium efficiens(嗜热产氨棒杆菌)AJ12340(FERM BP-1539)
力士棒杆菌ATCC 13868
散枝短杆菌(谷氨酸棒状杆菌)ATCC 14020
黄色短杆菌(谷氨酸棒状杆菌)ATCC 13826、ATCC 14067、AJ12418(FERM BP-2205)
Brevibacterium immariophilum ATCC 14068
乳发酵短杆菌(谷氨酸棒状杆菌)ATCC 13869
玫瑰色短杆菌ATCC 13825
解糖短杆菌ATCC 14066
硫殖短杆菌ATCC 19240
产氨棒杆菌(停滞棒杆菌)ATCC 6871、ATCC 6872
白色短杆菌ATCC 15111
赌状短杆菌ATCC 15112
嗜氨微杆菌ATCC 15354
棒状杆菌属细菌可以包括以前分类为短杆菌属(Brevibacterium)，但目前已被结合到棒状杆菌属的细菌(Int.J.Syst.Bacteriol.,41,255(1991))。此外，停滞棒杆菌(Corynebacterium stationis)可以包括以前分类为产氨棒杆菌(Corynebacteriumammoniagenes)的细菌，但是目前根据16S rRNA等的核苷酸序列分析将其重新分类为停滞棒杆菌的细菌(Int.J.Syst.Evol.Microbiol.,60,874-879(2010))。
酵母可以是出芽酵母，或者可以是裂殖酵母。酵母可以是单倍体酵母，或者可以是二倍体或多倍体酵母。酵母的实例可以包括属于酵母属(Saccharomyces)的酵母，如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，毕赤酵母属(也称为Wickerhamomyces属)，如Pichiaciferrii，Pichia sydowiorum和巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)，假丝酵母属如产朊假丝酵母属(Candida utilis)，汉逊酵母如多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)，以及裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)如粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)。
这些菌株可以从例如美国典型培养物保藏中心(ATCC，地址：12301ParklawnDrive，Rockville，Maryland 20852，PO Box 1549，Manassas，VA 20108，United States ofAmerica)获得。也就是说，将登录号分配给相应菌株，并且可以通过使用这些登录号来购买菌株(参见http://www.atcc.org/)。美国典型培养物保藏中心(ATCC)的目录中列出了菌株的登录号。也可以从例如菌株保藏的保藏机构获得这些菌株。
微生物可以固有具有目标物质生产能力，或者可以已经以使所述微生物具有目标物质生产能力的方式进行了修饰。可以通过赋予如上所述的微生物以目标物质生产能力，或者通过提高如上所述的微生物的目标物质生产能力来获得具有目标物质生产能力的微生物。
以下，将说明赋予或提高目标物质生产能力的方法的具体实例。如下文所例示的用于赋予或增强目标物质生产能力的此类修饰可以独立使用或以任何适当的组合使用。
可以通过涉及目标物质的生产能力的酶的作用生成目标物质。此类酶也称为“目标物质的生物合成酶”。因此，微生物可以具有目标物质的生物合成酶。换句话说，微生物可以具有编码目标物质的生物合成酶的基因。此类基因也可以称为“目标物质的生物合成基因”。微生物可以固有地具有目标物质的生物合成基因，或可以已经引入目标物质的生物合成基因。将在本文说明用于引入基因的方法。
另外，可以通过增加目标物质的生物合成酶的活性来改善微生物的目标物质生产能力。也就是说，赋予或增强目标物质生产能力的方法的实例可以包括增加目标物质的生物合成酶的活性的方法。也就是说，可以以使目标物质生产能力生物合成酶的活性增加的方式对微生物进行修饰。可以增加一种目标物质的生物合成酶的活性，或者可以增加两种或更多种目标物质的生物合成酶的活性。将在本文中描述增加蛋白质例如酶等的活性的方法。可以通过例如增加编码蛋白质的基因的表达增加蛋白质例如酶的活性。
可以从例如碳源和/或目标物质的前体生产目标物质。因此，目标物质的生物合成酶的实例可以包括例如催化碳源和/或前体转化为目标物质的酶。例如，可以经由莽草酸途径的一部分生产3-脱氢莽草酸，所述莽草酸途径可以包括通过3-脱氧-D-阿拉伯糖-庚酮糖酸7-磷酸合酶(DAHP合酶)，3-脱氢奎宁酸合酶和3-脱氢奎尼酸脱水酶催化的步骤；3-脱氢莽草酸可以通过3-脱氢莽草酸脱水酶(DHSD)的作用转化为原儿茶酸；原儿茶酸可以通过O-甲基转移酶(OMT)或芳香族醛氧化还原酶(也称为芳香族羧酸还原酶；ACAR)的作用分别转化为香草酸或原儿茶醛；并且香草醛或原儿茶醛可以分别通过ACAR或OMT的作用转化为香草醛。也就是说，目标物质的生物合成酶的特定实例可以包括例如DAHP合酶、3-脱氢奎宁酸合酶、3-脱氢奎尼酸脱水酶、DHSD、OMT和ACAR。
术语“3-脱氧-D-阿拉伯糖-庚酮糖酸7-磷酸合酶(DAHP合酶)”可以指具有催化将D-赤藓糖-4-磷酸和磷酸烯醇丙酮酸转化为3-脱氧-D-阿拉伯糖-庚酮糖酸7-磷酸(DAHP)和磷酸的反应活性(EC 2.5.1.54)的蛋白质。该活性也可以称为“DAHP合酶活性”。编码DAHP合酶的基因也可称为“DAHP合酶基因”。DAHP合酶的实例可以包括分别由aroF，aroG和aroH基因编码的AroF，AroG和AroH蛋白。在这些之中，AroG蛋白可以作为主要的DAHP合酶发挥功能。DAHP合酶的实例例如AroF，AroG和AroH蛋白可以包括对于各种生物体例如肠杆菌科细菌和棒状杆菌细菌天然的那些。DAHP合酶的特定实例可以包括对于大肠杆菌天然的AroF，AroG和AroH蛋白。对于大肠杆菌K-12MG1655菌株天然的aroG基因的核苷酸序列如SEQ IDNO:1所示，且由该基因编码的AroG蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
DAHP合酶活性可以通过例如将酶与底物例如D-赤藓糖-4-磷酸和磷酸烯醇丙酮酸温育，并测量DAHP的酶和底物依赖性生成来测量。
术语“3-脱氢奎尼酸合酶”可以指具有催化DAHP去磷酸化以生成3-脱氢奎尼酸的反应活性(EC 4.2.3.4)的蛋白质。该活性也可以称为“3-脱氢奎尼酸合酶活性”。编码3-脱氢奎尼酸合酶的基因也可以称为“3-脱氢奎宁酸合酶基因”。3-脱氢奎尼酸合酶的实例可以包括由aroB基因编码的AroB蛋白。3-脱氢奎尼酸合酶如AroB蛋白的实例可以包括对于各种生物体例如肠杆菌科细菌和棒状杆菌细菌天然的那些。3-脱氢奎尼酸合酶的特定实例可以包括对于大肠杆菌天然的AroB蛋白。对于大肠杆菌K-12MG1655菌株天然的aroB基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，且由该基因编码的AroB蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。
3-脱氢奎尼酸合酶活性可通过例如将酶与底物例如DAHP温育，并测量3-脱氢奎尼酸的酶和底物依赖性生成来测量。
术语“3-脱氢奎尼酸脱水酶”可以指具有催化3-脱氢奎尼酸脱水以生成3-脱氢莽草酸的反应活性(EC 4.2.1.10)的蛋白质。该活性也可以称为“3-脱氢奎尼酸脱水酶活性”。编码3-脱氢奎尼酸脱水酶的基因也可以称为“3-脱氢奎尼酸脱水酶基因”。3-脱氢奎尼酸脱水酶的实例可以包括由aroD基因编码的AroD蛋白。3-脱氢奎尼酸脱水酶如AroD蛋白的实例可以包括对于各种生物体例如肠杆菌科细菌和棒状杆菌细菌天然的那些。3-脱氢奎尼酸脱水酶的特定实例可以包括对于大肠杆菌天然的AroD蛋白。对于大肠杆菌K-12MG1655菌株天然的aroD基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，且由该基因编码的AroD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示。
3-脱氢奎尼酸脱水酶活性可通过例如将酶与底物例如3-脱氢奎尼酸温育，并测量3-脱氢莽草酸的酶和底物依赖性生成来测量。
术语“3-脱氢草莽酸脱水酶(DHSD)”可以指具有催化3-脱氢莽草酸脱水以生成原儿茶酸的反应活性(EC 4.2.1.118)的蛋白质。该活性也可以称为“DHSD活性”。编码DHSD的基因也可以称为“DHSD基因”。DHSD的实例可以包括由asbF基因编码的AsbF蛋白。DHSD如AsbF蛋白的实例可以包括对于各种生物体例如苏云金芽孢杆菌、粗糙芽孢菌和Podosporapauciseta天然的那些。对于苏云金芽孢杆菌BMB171菌株天然的asbF基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，且由该基因编码的AsbF蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示。
DHSD活性可通过例如将酶与底物例如3-脱氢莽草酸温育，并测量原儿茶酸的酶和底物依赖性生成来测量。
编码莽草酸途径的酶例如DAHP合酶，3-脱氢奎尼酸合酶和3-脱氢奎尼酸脱水酶的基因的表达被酪氨酸阻遏物TyrR阻遏，所述酪氨酸阻遏物TyrR由tyrR基因编码。因此，莽草酸途径的酶的活性也可以通过降低酪氨酸阻遏物TyrR的活性而增加。酪氨酸阻遏物TyrR的实例可以包括对于各种生物体例如肠肝菌科细菌或棒状杆菌细菌天然的那些。酪氨酸阻遏物TyrR的具体实例可以包括对于大肠杆菌天然的TyrR蛋白。对于大肠杆菌K-12MG1655菌株天然的tyrR基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示，且由该基因编码的TyrR蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。
术语“O-甲基转移酶(OMT)”可以指具有在甲基供体的存在下催化将物质的羟基甲基化的反应活性(EC 2.1.1.68等)的蛋白质。该活性也可以称为“OMT活性”。编码OMT的基因也可以称为“OMT”活性。根据本文所述的方法中生产目标物质经由的特定的生物合成途径，OMT可以具有需要的底物特异性。例如，当经由原儿茶酸转化为香草酸生产目标物质时，可以使用对于至少原儿茶酸特异性的OMT。另外，例如，当经由原儿茶醛转化为香草醛生产目标物质时，可以使用对于至少原儿茶醛特异性的OMT。也就是说，特别地，术语“O-甲基转移酶(OMT)”可以指具有在甲基供体的存在下催化将原儿茶酸和/或原儿茶醛甲基化以生成香草酸和/或香草醛的反应活性的蛋白质，即在间位羟基的甲基化。OMT可以对作为底物的原儿茶酸和原儿茶醛两者都是特异性的，但不一定限于此。甲基供体的例子可以包括S-腺苷甲硫氨酸(SAM)。OMT的实例可以包括对于各种生物体天然的OMT，例如对于人(Homosapiens)(Hs)天然的OMT(GenBank登录号NP_000745和NP_009294)，对于拟南芥(Arabidopsis thaliana)天然的OMT(GenBank登录号NP_200227和NP_009294)，对于Fragaria x ananassa天然的OMT(GenBank登录号AAF28353)，以及对于WO2013/022881A1中例示的哺乳动物、植物和微生物天然的其它各种OMT。对于人天然的OMT基因，已知四种转录物变体和两种类型的OMT同种型。这些四种转录物变体(转录物变体1-4，GenBank登录号NM_000754.3，NM_001135161.1，NM_001135162.1和NM_007310.2)的核苷酸序列如SEQ ID NO:11-14所示，较长OMT同种型(MB-COMT，GenBank登录号NP_000745.1)的氨基酸序列如SEQ IDNO:15所示，且较短OMT同种型(S-COMT，GenBank登录号NP_009294.1)的氨基酸序列如SEQID NO:16所示。SEQ ID NO:16对应N末端50个氨基酸残基被截短的SEQ ID NO:15。OMT的实例还可以包括对于拟杆菌(Bacteroidetes)细菌天然的OMT，即属于拟杆菌门的细菌。拟杆菌细菌的实例可以包括属于Niastella、Terrimonas、Chitinophaga属等的细菌(International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology(2007),57,1828-1833)。Niastella细菌包括Niastella koreensis。对于Niastella koreensis天然的OMT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:130所示，且由该基因编码的OMT的氨基酸序列如SEQID NO:131所示。
OMT还可以催化将原儿茶酸和/或原儿茶醛甲基化以生成异香草酸和/或异香草醛的反应，即对位羟基的甲基化作为副反应。OMT可以选择性催化间位羟基的甲基化。表述“选择性催化间位羟基的甲基化”可以表示OMT从原儿茶酸选择性生成香草酸和/或OMT从原儿茶醛选择性生成香草醛。表述“从原儿茶酸选择性生成香草酸”可以表示当OMT允许作用于原儿茶酸时，以摩尔比率计OMT以异香草酸的量的例如3倍或更多，5倍或更多，10倍或更多，15倍或更多，20倍或更多，25倍或更多，或30倍或更多的量生成香草酸。表述“从原儿茶酸选择性生成香草酸”也可以表示当OMT允许作用于原儿茶酸时，以摩尔比率计OMT以香草酸和异香草酸的总量的例如60％或更多，65％或更多，70％或更多，75％或更多，80％或更多，85％或更多，90％或更多，或95％或更多的量生成香草酸。该比率，即香草酸的量相对于香草酸和异香草酸的总量的比率也可以称为“VA/(VA+iVA)比率”。另外，“从原儿茶醛选择性生成香草醛”可以表示当OMT允许作用于原儿茶醛时，以摩尔比率计OMT以异香草醛的量的例如3倍或更多，5倍或更多，10倍或更多，15倍或更多，20倍或更多，25倍或更多，或30倍或更多的量生成香草醛。表述“从原儿茶醛选择性生成香草醛”也可以表示当OMT允许作用于原儿茶醛时，以摩尔比率计OMT以香草醛和异香草醛的总量的例如60％或更多，65％或更多，70％或更多，75％或更多，80％或更多，85％或更多，90％或更多，或95％或更多的量生成香草醛。该比率，即香草醛的量相对于香草醛和异香草醛的总量的比率也可以称为“Vn/(Vn+iVn)比率”。选择性催化间位羟基的甲基化的OMT的实例可包括具有本文所述的“特定突变”的OMT。
具有“特定突变”的OMT也可以称为“突变体OMT”。编码突变体OMT的基因也可以称为“突变体OMT基因”。
不具有“特定突变”的OMT也可以称为“野生型OMT”。编码野生型OMT的基因也可称为“野生型OMT基因”。本文所指的术语“野生型”是为了方便区分“野生型”OMT和“突变体”OMT而使用，并且“野生型”OMT不限于作为天然物质获得的那些，并且可以包括任何不具有“特定突变”的OMT。野生型OMT的实例可以包括例如上文例示的OMT。另外，上文例示的OMT的所有保守变体都应包括在野生型OMT中，条件是此类保守变体不具有“特定突变”。
“特定突变”的实例可以包括WO2013/022881A1中描述的突变体OMT中存在的突变。也就是说，“特定突变”的实例可以包括野生型OMT位置198处的亮氨酸残基(L198)被具有低于亮氨酸残基的疏水性指数(水性指数)的氨基酸残基替换的突变，和野生型OMT位置199处的谷氨酸残基(E198)被在pH7.4具有中性或正性侧链电荷的氨基酸残基替换的突变。突变体OMT可以具有这些突变之一或两者。
“具有低于亮氨酸残基的疏水性指数(水性指数)的氨基酸残基”的实例可以包括Ala、Arg、Asn、Asp、Cys、Glu、Gln、Gly、His、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp和Tyr。作为“具有低于亮氨酸残基的疏水性指数(水性指数)的氨基酸残基”，特别地，选自Ala、Arg、Asn、Asp、Glu、Gln、Gly、His、Lys、Met、Pro、Ser、Thr、Trp和Tyr的氨基酸残基是具体的实例，并且Tyr是更具体的实例。
“在pH7.4具有中性或正性侧链电荷的氨基酸残基”可以包括Ala、Arg、Asn、Cys、Gln、Gly、His、Ile、Leu、Lys、Met、Phe、Pro、Ser、Thr、Trp、Tyr和Val。作为“在pH7.4具有中性或正性侧链电荷的氨基酸残基”，Ala或Gln是具体的实例。
任意野生型OMT中的术语“L198”和“E199”可以分别指“与SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列位置198处的亮氨酸残基对应的氨基酸残基”和“与SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列位置199处的谷氨酸残基对应的氨基酸残基”。这些氨基酸残基的位置表示相对位置，并且它们的绝对位置可以由于氨基酸残基的缺失，插入，添加等发生移位。例如，若在SEQ IDNO:16所示的氨基酸序列中位置X的N端侧的位置缺失或插入一个氨基酸残基，则最初在位置X处的氨基酸残基重新定位于位置X-1或X+1，然而，其仍被认为是“与SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列位置X处的氨基酸残基对应的氨基酸残基”。此外，尽管“L198”和“E199”通常分别是亮氨酸残基和谷氨酸残基，但它们可以分别不是亮氨酸残基和谷氨酸残基。也就是说，当“L198”和“E199”分别不是亮氨酸残基和谷氨酸残基时，“特定突变”可以包括那些氨基酸残基各自被任意上述氨基酸残基替换的突变。
在任意OMT的氨基酸序列中，哪个氨基酸残基是与“L198”或“E199”对应的氨基酸残基可以通过将任意OMT的氨基酸序列与SEQ ID NO:16的氨基酸序列比对来确定。可以通过例如使用已知的基因分析软件进行比对。此类软件的特定实例可以包括由HitachiSolutions生产的DNASIS，由Genetyx生产的GENETYX等(Elizabeth C.Tyler et al.,Computers and Biomedical Research,24(1)72-96,1991；Barton GJ et al.,Journal ofMolecular Biology,198(2),327-37,1987)。
“特定突变”的实例可以进一步包括在以下氨基酸残基处的突变：D21、L31、M36、S42、L67、Y90和P144。“特定突变”可以是在一个氨基酸残基处的突变，或者可以是在两个或更多个氨基酸残基处的突变的组合。也就是说，“特定突变”可以包括例如在以下氨基酸残基中的一个或多个处的突变：D21、L31、M36、S42、L67、Y90和P144。
在上述用于定义氨基酸残基的符号中，数字代表SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列中的位置，并且数字左侧的字母代表如SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列中相应位置处的氨基酸残基，也就是说，在相应位置处修饰前的氨基酸残基。例如“D21”表示如SEQ IDNO:131所示的氨基酸序列中位置21处的D(Asp)残基。任意野生型OMT中的这些氨基酸残基各自可以表示“与如SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列中指示的氨基酸残基对应的氨基酸残基”。也就是说，例如，任意野生型OMT中的“D21”表示与SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列中位置21处的D(Asp)残基对应的氨基酸残基。
在上述突变的每一个中，修饰后的氨基酸残基可以是除修饰前的氨基酸残基以外的任意氨基酸残基。修饰后的氨基酸残基的实例可以包括K(Lys)、R(Arg)、H(His)、A(Ala)、V(Val)、L(Leu)、I(Ile)、G(Gly)、S(Ser)、T(Thr)、P(Pro)、F(Phe)、W(Trp)、Y(Tyr)、C(Cys)、M(Met)，D(Asp)、E(Glu)、N(Asn)和Q(Gln)，条件是修饰后的氨基酸残基不同于修饰前的氨基酸残基。作为修饰后的氨基酸残基，可以选择对于产生目标物质有效的那些，例如导致OMT的VA/(VA+iVA)比率和/或Vn/(Vn+iVn)比率增加的那些。
“特定突变”的具体实例可以包括以下突变：D21Y、L31H、M36(K，V)、S42C、L67F、Y90(A，C，G，S)和P144(E，G，S，V，Y)。也就是说，氨基酸残基D21、L31、M36、S42、L67、Y90和P144处的突变可以是例如突变D21Y、L31H、M36(K，V)、S42C、L67F、Y90(A，C，G，S)和P144(E，G，S，V，Y)。“特定突变”可包括例如以下突变中的一种或多种：D21Y、L31H、M36(K，V)、S42C、L67F、Y90(A，C，G，S)和P144(E，G，S，V，Y)。
在上述用于定义突变的符号中，数字和数字左侧的字母表示与上述相同。在上述用于定义突变的符号中，数字右侧的字母表示在相应位置处修饰后的氨基酸残基。也就是说，例如，“D21Y”表示用Y(Tyr)残基替换SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列中位置21的D(Asp)残基的突变。另外，例如，M36(K，V)代表用K(Lys)或V(Val)残基替换SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列中位置36处的M(Met)残基的突变。任意野生型OMT中的这些突变各自可以指“与SEQ ID NO:131所示氨基酸序列中所指示的突变对应的突变”。“与SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列中的位置X处的氨基酸残基处的突变对应的突变”应当被解读为与SEQ IDNO:131所示的氨基酸序列中位置X处的氨基酸残基对应的氨基酸残基处的突变。也就是说，例如任意野生型OMT中的“D21Y”表示用Y(Tyr)残基替换与SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列中位置21处的D(Asp)残基对应的氨基酸残基的突变。
突变的组合没有特别的限制。突变组合的具体实例可以包括D21Y/M36K/L67F，D21Y/M36K/L67F/Y90A，L31H/M36K/L67F/P144V，L31H/L67F/Y90A，M36K/S42C/L67F，M36K/L67F，M36K/L67F/Y90A，M36K/L67F/Y90S/P144G，M36K/L67F/P144S，M36K/L67F/P144Y，M36K/L67F/Y90C/P144V，M36K/L67F/Y90C/M36K/Y90A/P144V，M36K/P144E和M36V/L67F/P144S。也就是说，“特定突变”可以包括例如这些组合中的任何组合。
在上述用于定义组合的符号中，数字和数字左侧和右侧的字母表示与上述相同。在用于定于组合的上述符号中，一起标注并插入“/”的两个或更多个突变表示双重或更多重突变。也就是说，例如“M36K/P144E”表示M36K和P144E的双重突变。
关于“L198”或“E199”处突变的描述，例如用于定义其绝对位置的描述，可以加以必要的变通适用于其它“特定突变”，例如与D21、L31、M36、S42、L67、Y90和P144的氨基酸残基处的突变，条件是将SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列用作野生型OMT的其它“特定突变”的参考序列。
例如，可以通过修饰野生型OMT基因使得编码的OMT具有“特定突变”来获得突变体OMT基因。待修饰的野生型OMT基因可以通过例如从具有野生型OMT基因的生物体克隆或化学合成来获得。或者，也可以在不使用野生型OMT基因的情况下获得突变体OMT基因。例如，可以通过例如从具有突变体OMT基因的生物克隆或化学合成直接获得突变体OMT基因。获得的突变体OMT基因可以以其本身使用，或者可以在使用前进一步修饰。待修饰的野生型OMT基因或突变体OMT基因可以源自或不源自宿主，例如本文所述的微生物来源的微生物。
可以通过使用已知的方法修饰基因。例如，可以通过位点特异性诱变方法将目标突变引入DNA的靶位点。位点特异性诱变方法的实例可以包括使用PCR的方法(Higuchi,R.,61,于PCR Technology,Erlich,H.A.Eds.,Stockton Press(1989)；Carter P.,Meth.InEnzymol.,154,382(1987))和使用噬菌体的方法(Kramer,W.and Frits,H.J.,Meth.inEnzymol.,154,350(1987)；Kunkel,T.A.et al.,Meth.in Enzymol.,154,367(1987))。
OMT活性可以通过例如在SAM存在下将酶与底物如原儿茶酸或原儿茶醛一起温育，并测量相应产物例如香草酸或香草醛的酶和底物依赖性产生来测量(WO2013/022881A1)。此外，通过在相同的条件下测量相应的副产物例如异香草酸或异香草醛的产生，并将副产物的生成与产物的生成进行比较，可以确定OMT是否选择性生成所述产品。
术语“芳香族醛氧化还原酶(芳香族羧酸还原酶；ACAR)”可以指具有在电子供体和ATP存在下催化还原香草酸和/或原儿茶酸以生成香草醛和/或原儿茶醛的反应活性(EC1.2.99.6等)的蛋白质。该活性也可以称为“ACAR活性”。编码ACAR的基因也可以称为“ACAR基因”。ACAR通常可以使用香草酸和原儿茶酸两者作为底物，但不一定限于此。也就是说，根据在本发明所述的方法中生产目标物质的特定生物合成途径，ACAR可以具有所需的底物特异性。例如，当目标物质经由香草酸转化为香草醛生产时，可以使用对至少香草酸特异性的ACAR。另外，例如当目标物质经由原儿茶酸转化为原儿茶醛生产时，可以使用至少对原儿茶酸特异性的ACAR。电子供体的实例包括NADH和NADPH。ACAR的实例可以包括对于各种生物体天然的ACAR，所述生物体例如诺卡氏菌属种菌株NRRL 5646，放线菌属种，热醋酸梭菌(Clostridium thermoaceticum)，黑曲霉，Corynespora melonis，革盖菌属种，和脉胞菌属种(J.Biol.Chem.,2007,Vol.282,No.1,pp.478-485)。诺卡氏菌属种菌株NRRL 5646已经分类为Nocardia iowensis。ACAR的实例还可以包括对于其它诺卡氏菌属细菌例如巴西诺卡氏菌(Nocardia brasiliensis)和Nocardia vulneris天然的ACAR。对于巴西诺卡氏菌ATCC700358菌株天然的ACAR基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:17所示，且由该基因编码的ACAR的氨基酸序列如SEQ ID NO:18所示。对于巴西诺卡氏菌ATCC 700358菌株天然的变体ACAR基因的实例的核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示，且由该基因编码的ACAR的氨基酸序列如SEQID NO:20所示。
ACAR活性可以通过例如在ATP和NADPH存在下将酶与底物例如香草酸或原儿茶酸温育，并测量NADPH的酶和底物依赖性氧化来测量(对J.Biol.Chem.,2007,Vol.282,No.1,pp.478-485中描述的方法的修改)。
可以通过磷酸泛酰巯基乙胺基化将ACAR制成活性酶(J.Biol.Chem.,2007,Vol.282,No.1,pp.478-485)。因此，ACAR活性也可以通过增加催化蛋白质的磷酸泛酰巯基乙胺基化的酶的活性而增加，该酶也可以称为“磷酸泛酰巯基乙胺基化酶”。也就是说，赋予或增强目标物质生产能力的方法的实例可以包括增加磷酸泛酰巯基乙胺基化酶的活性的方法。也就是说，可以以增加磷酸泛酰巯基乙胺基化酶的活性的方式修饰微生物。磷酸泛酰巯基乙胺基化酶的实例可以包括磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶(PPT)。
术语“磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶(PPT)”可以指具有在磷酸泛酰巯基乙胺基供体存在下催化磷酸泛酰巯基乙胺基化ACAR的反应活性的蛋白质。该活性也可以称为“PPT活性”。编码PPT的基因也可以称为“PPT基因”。磷酸泛酰巯基乙胺基供体的实例可以包括辅酶A(CoA)。PPT的实例可以包括EntD蛋白，其由entD基因编码。PPT例如EntD蛋白的实例可以包括对于各种生物体天然的那些。PPT的具体实例可以包括对于大肠杆菌天然的EntD蛋白。对于大肠杆菌K-12MG1655菌株天然的entD基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:21所示，且由该基因编码的EntD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:22所示。PPT的具体实例还可以包括对于巴西诺卡氏菌天然的PPT，对于Nocardia farcinica IFM10152天然的PPT(J.Biol.Chem.,2007,Vol.282,No.1,pp.478-485)和对于谷氨酸棒状杆菌天然的PPT(App.Env.Microbiol.2009,Vol.75,No.9,pp.2765-2774)。对于谷氨酸棒状杆菌ATCC13032菌株天然的PPT基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:23所示，且由该基因编码的PPT的氨基酸序列如SEQ ID NO:24所示。
PPT活性可以基于例如在CoA存在下酶与ACAR温育时观察到的ACAR活性的增强来测量(J.Biol.Chem.,2007,Vol.282,No.1,pp.478-485)。
褪黑激素可以从L-色氨酸生产。也就是说，目标物质生物合成酶的实例还可以包括例如L-色氨酸生物合成酶和催化L-色氨酸转化为褪黑激素的酶。L-色氨酸生物合成酶的实例可以包括例如3-脱氧-D-阿拉伯庚酮糖酸-7-磷酸合酶(aroF，aroG，aroH)，3-脱氢奎尼酸合酶(aroB)，3-脱氢奎尼酸脱水酶(aroD)，莽草酸脱氢酶(aroE)，莽草酸激酶(aroK，aroL)，5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(aroA)和分支酸合酶(aroC)；以及邻氨基苯甲酸合酶(trpED)和色氨酸合酶(trpAB)。在酶的名称之后的括号中显示的是编码酶的基因名称的实例(同样适用于下文的相同情况)。L-色氨酸可以通过色氨酸5-羟化酶(EC1.14.16.4)，5-羟基色氨酸脱羧酶(EC 4.1.1.28)，芳香胺N-乙酰转移酶(AANAT；EC2.3.1.87)和乙酰血清素O-甲基转移酶(EC 2.1.1.4)的作用依次转化为羟基色氨酸，血清素，N-乙酰血清素，和褪黑激素。也就是说，催化L-色氨酸转化为褪黑激素的酶的实例可以包括这些酶。值得注意的是，乙酰血清素O-甲基转移酶是使用SAM作为甲基供体，催化N-乙酰血清素甲基化以生成褪黑激素的反应的OMT的实例。
麦角硫因可以从L-组氨酸生产。也就是说，目标物质生物的合成酶的实例还可以包括例如L-组氨酸生物合成酶和催化L-组氨酸转化为麦角硫因的酶。L-组氨酸生物合成酶的实例可以包括ATP磷酸核糖基转移酶(hisG)、磷酸核糖基AMP环化水解酶(cyclohydrolase)(hisI)、磷酸核糖基-ATP焦磷酸水解酶(hisI)、磷酸核糖基亚氨甲基-5-氨基咪唑氨甲酰核糖核苷酸异构酶(phosphoribosylformimino-5-aminoimidazolecarboxamide ribotide isomerase，hisA)、氨基转移酶(hisH)、组氨醇磷酸氨基转移酶(hisC)、组氨醇磷酸酶(hisB)和组氨醇脱氢酶(hisD)。通过分别由egtB，egtC，egtD和egtE基因编码的EgtB，EgtC，EgtD和EgtE蛋白的作用，可以将L-组氨酸依次转化为组氨酸三甲基内盐(hercynine)，hercynyl-γ-L-谷氨基-L-半胱氨酸亚砜，hercynyl-L-半胱氨酸亚砜，和麦角硫因。组氨酸三甲基内盐还可以通过由egt1基因编码的Egt1蛋白的作用转化为hercynyl-L-半胱氨酸亚砜。也就是说，催化L-组氨酸转化为麦角硫因的酶的实例可以包括这些酶。值得注意的是，EgtD是使用SAM作为甲基供体，催化组氨酸甲基化以生成组氨酸三甲基内盐的反应的S-腺苷-l-甲硫氨酸(SAM)依赖性组氨酸N,N,N-甲基转移酶。
愈创木酚可以从香草酸生产。因此，上述关于香草酸的目标物质生物合成酶的描述可以加以必要的修改适用于愈创木酚的目标物质生物合成酶。香草酸可以通过香草酸脱羧酶(VDC)的作用转化为愈创木酚。也就是说，目标物质生物合成酶的实例也可以包括VDC。
阿魏酸，4-乙烯基愈创木酚和4-乙基愈创木酚可以从L-苯丙氨酸或L-酪氨酸生产。也就是说，目标物质生物合成酶的实例还可以包括例如L-苯丙氨酸生物合成酶，L-酪氨酸生物合成酶和催化L-苯丙氨酸或L-酪氨酸转化为阿魏酸，4-乙烯基愈创木酚或4-乙基愈创木酚的酶。L-苯丙氨酸生物合成酶的实例可以以上示例的芳香族氨基酸的共同生物合成酶，以及分支酸变位酶(pheA)，预苯酸脱水酶(pheA)和酪氨酸氨基转移酶(tyrB)。分支酸变位酶和预苯酸脱水酶可以由pheA基因编码为双功能酶。L-酪氨酸生物合成酶的实例可以包括上文例示的芳香族氨基酸的共同生物合成酶，以及分支酸变位酶(tyrA)，预苯酸脱氢酶(tyrA)和酪氨酸氨基转移酶(tyrB)。分支酸变位酶和预苯酸脱氢酶可由tyrA基因编码为双功能酶。L-苯丙氨酸可以通过苯丙氨酸解氨酶(PAL；EC 4.3.1.24)的作用转化为肉桂酸，然后通过肉桂酸4-羟化酶(C4H；EC 1.14.13.11)的作用转化为对香豆酸。另外，L-酪氨酸可以通过酪氨酸解氨酶(TAL；EC 4.3.1.23)的作用转化为对香豆酸。对香豆酸可以分别通过羟基肉桂酸3-羟化酶(C3H)，阿魏酸脱羧酶(FDC)和乙烯基苯酚还原酶(VPR)的作用依次转化为咖啡酸，阿魏酸，4-乙烯基愈创木酚和4-乙基愈创木酚。也就是说，催化L-苯丙氨酸或L-酪氨酸转化为阿魏酸，4-乙烯基愈创木酚或4-乙基愈创木酚的酶的实例可以包括这些酶。对于生产阿魏酸，4-乙烯基愈创木酚或4-乙基愈创木酚，可以使用至少使用咖啡酸的OMT。
多胺可以从L-精氨酸或L-鸟氨酸生产。也就是说，目标物质生物合成酶的实例还可以包括例如L-精氨酸生物合成酶，L-鸟氨酸生物合成酶和催化L-精氨酸或L-鸟氨酸转化为多胺的酶。L-鸟氨酸生物合成酶的实例可以包括N-乙酰谷氨酸合酶(argA)，N-乙酰谷氨酸激酶(argB)，N-乙酰谷氨酰磷酸还原酶(argC)，乙酰鸟氨酸转氨酶(argD)和乙酰鸟氨酸脱乙酰酶(argE)。L-精氨酸生物合成酶的实例可以包括以上例示的L-鸟氨酸生物合成酶，以及氨甲酰磷酸合成酶(carAB)，鸟氨酸氨甲酰转移酶(argF、argI)，精氨琥珀酸合成酶(argG)，精氨琥珀酸裂解酶(argH)。L-精氨酸可以通过精氨酸脱羧酶(speA；EC 4.1.1.19)的作用转化为胍丁胺，然后通过胍丁胺尿苷水解酶(speB；EC 3.5.3.11)的作用转化为腐胺。另外，L-鸟氨酸可以通过鸟氨酸脱羧酶(speC；EC 4.1.1.17)的作用转化为腐胺。腐胺可以通过亚精胺合酶(speE；EC 2.5.1.16)的作用转化为亚精胺，然后通过精胺合酶(EC2.5.1.22)的作用转化为精胺。胍丁胺还可以通过胍丁胺/三胺氨丙基转移酶的作用转化为氨丙基胍丁胺，然后通过氨丙基胍丁胺尿素水解酶的作用转化为亚精胺。也就是说，催化L-精氨酸或L-鸟氨酸转化为多胺的酶的实例可以包括这些酶。值得注意的是，亚精胺合酶，精胺合酶和胍基丁胺/三胺氨丙基转移酶各自催化将脱羧基化的S-腺苷甲硫氨酸(dcSAM)的丙胺基转移至相应的底物中的反应，所述dcSAM可以通过脱羧基化从SAM生成。
肌酸可以从L-精氨酸和甘氨酸生产。也就是说，目标物质生物合成酶的实例还可以包括例如L-精氨酸生物合成酶，甘氨酸生物合成酶和催化L-精氨酸和甘氨酸转化为肌酸的酶。L-精氨酸和甘氨酸可以通过精氨酸：甘氨酸脒基转移酶(AGAT，EC 2.1.4.1)的作用组合以生成胍基乙酸和鸟氨酸；并且胍基乙酸可以通过胍基乙酸N-甲基转移酶(GAMT，EC2.1.1.2)的作用，使用SAM作为甲基供体，被甲基化以生成肌酸。也就是说，催化L-精氨酸和甘氨酸转化为肌酸的酶的实例可以包括这些酶。
麦根酸可以从SAM生产。也就是说，目标物质生物合成酶的实例还可以包括例如催化SAM转化为麦根酸的酶。一个烟酰胺分子可以通过烟酰胺合酶(EC 2.5.1.43)的作用从三个SAM分子合成。烟酰胺可以分别通过烟酰胺转氨酶(EC 2.6.1.80)，3”-脱氨-3”-氧代烟酰胺还原酶(EC 1.1.1.285)和2'-脱氧麦根酸2'-双加氧酶(EC 1.14.11.24)的作用依次转化为3”-脱氨-3”-氧代烟酰胺，2'-脱氧麦根酸和麦根酸。也就是说，催化SAM转化为麦根酸的酶的实例可以包括这些酶。
L-甲硫氨酸可以从L-半胱氨酸生产。也就是说，目标物质生物合成酶的实例还可以包括例如L-半胱氨酸生物合成酶和催化L-半胱氨酸转化为L-甲硫氨酸的酶。L-半胱氨酸生物合成酶的实例可以包括本文所述的CysIXHDNYZ蛋白，Fpr2蛋白和CysK蛋白。催化L-半胱氨酸转化为L-甲硫氨酸的酶的实例可以包括胱硫醚-γ-合酶(cystathionine-gamma-synthase)和胱硫醚-β-裂解酶(cystathionine-beta-lyase)。
用于赋予或增强目标物质生成能力的方法的实例还可以包括增加除目标物质之外的物质(例如在目标物质的生产期间作为中间物生成的物质和用作目标物质的前体的物质)的摄取系统的活性的方法。也就是说，微生物可以以使此类摄取系统的活性增加的方式进行了修饰。术语“物质的摄取系统”可以指具有将细胞外部的物质掺入细胞中的功能的蛋白质。该活性也可以称为“物质的摄取活性”。编码此类摄取系统的基因也可以称为“摄取系统基因”。此类摄取系统的实例可以包括香草酸摄取系统和原儿茶酸摄取系统。香草酸摄取系统的实例可以包括由vanK基因编码的VanK蛋白(M.T.Chaudhry,et al.,Microbiology,2007,153:857-865)。对于谷氨酸棒状杆菌ATCC 13869菌株天然的vanK基因(NCgl2302)的核苷酸序列如SEQ ID NO:25所示，由该基因编码的VanK蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:26所示。原儿茶酸摄取系统基因的实例可以包括由pcaK基因编码的PcaK蛋白(M.T.Chaudhry,et al.,Microbiology,2007,153:857-865)。对于谷氨酸棒状杆菌ATCC 13869菌株天然的pcaK基因(NCgl1031)的核苷酸序列如SEQ ID NO:27所示，由该基因编码的PcaK蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:28所示。
可以根据例如已知方法(M.T.Chaudhry,et al.,Microbiology,2007.153:857-865)测量物质的摄取活性。
用于赋予或提高目标物质生成能力的方法的实例还可以包括降低参与除目标物质外的物质的副生产的酶的活性的方法。此类除目标物质外的物质也可以称为“副产物”。副产物生成酶的实例可以包括例如参与目标物质的利用的酶，和催化从目标物质的生物合成途径分支以生成除目标物质外的物质的反应的酶。本文将描述降低蛋白质如酶等的活性的方法。可以通过例如破坏编码蛋白质的基因来降低蛋白质例如酶等的活性。例如，已经报道了在棒状杆菌细菌中，香草醛以香草醛->香草酸->原儿茶酸的顺序代谢，并被利用(Current Microbiology,2005,Vol.51,pp.59-65)。也就是说，副产物生成酶的具体实例可以包括催化香草醛转化为原儿茶酸的酶和催化原儿茶酸的进一步代谢的酶。此类酶的实例包括香草醛脱甲基酶，原儿茶酸3,4-双加氧酶和将原儿茶酸3,4-二加氧酶的反应产物进一步分解为琥珀酰-CoA和乙酰-CoA的各种酶(Appl.Microbiol.Biotechnol.,2012,Vol.95,p77-89)。另外，香草醛可以通过醇脱氢酶的作用转化为香草醇(Kunjapur AM.et al.,J.Am.Chem.Soc.,2014,Vol.136,p11644-11654.；Hansen EH.et al.,App.Env.Microbiol.,2009,Vol.75,p2765-2774)。也就是说，副产物生成酶的具体实例还可以包括醇脱氢酶(ADH)。此外，作为香草酸和香草醛的生物合成途径的中间物的3-脱氢莽草酸也可以通过莽草酸脱氢酶的作用转化为莽草酸。也就是说，副产物生成酶的具体实例还可以包括莽草酸脱氢酶。
术语“香草酸脱甲基酶”可以指具有催化香草酸脱甲基化以生成原儿茶酸的反应的活性的蛋白质。该活性也可以称为“香草酸脱甲基酶活性”。编码香草酸脱甲基酶的基因也可称为“香草酸脱甲基酶基因”。香草酸脱甲基酶的实例可以包括由vanAB基因编码的VanAB蛋白(Current Microbiology,2005,Vol.51,pp.59-65)。vanA基因和vanB基因分别编码香草酸脱甲基酶(vanillate demethylase)的亚基A和亚基B。为了降低香草酸脱甲基酶活性，可以破坏vanAB基因两者等，或者可以仅破坏两者之一等。对于谷氨酸棒状杆菌ATCC13869菌株天然的vanAB基因的核苷酸序列如SEQ ID NOS:29和31所示，且由这些基因编码的VanAB蛋白的氨基酸序列分别如SEQ ID NOS:30和32所示。vanAB基因通常与vanK基因一起构成vanABK操纵子。因此，为了降低香草酸脱甲基酶活性，可以完全破坏vanABK操纵子等，例如缺失。在此类情况下，可以将vanK基因再次引入宿主。例如，当使用存在于细胞外的香草酸时，并且完全破坏vanABK操纵子等，例如缺失，优选重新引入vanK基因。
香草酸脱甲基酶活性可以通过例如将酶与底物例如香草酸一起温育并测量原儿茶酸的酶和底物依赖性生成来测量(J Bacteriol,2001,Vol.183,p3276-3281)。
术语“原儿茶酸3,4-双加氧酶”可以指具有催化氧化原儿茶酸以生成β-羧基-顺式,顺式-粘康酸的反应活性的蛋白质。此类活性也可以称为“原儿茶酸3,4-双加氧酶活性”。编码原儿茶酸3,4-双加氧酶的基因也可称为“原儿茶酸3,4-双加氧酶基因”。原儿茶酸3,4-双加氧酶的实例可以包括由pcaGH基因编码的PcaGH蛋白(Appl.Microbiol.Biotechnol.,2012,Vol.95,p77-89)。pcaG基因和pcaH基因分别编码原儿茶酸3,4-双加氧酶的α亚基和β亚基。为了降低原儿茶酸3,4-双加氧酶活性，可以破坏pcaGH基因两者等，或者可以进破坏两者之一等。对于谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032菌株天然的pcaGH基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:33和35所述，由这些基因编码的PcaGH蛋白的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:34和36所示。
原儿茶酸3,4-双加氧酶活性可通过例如将酶与底物例如原儿茶酸温育并测量酶和底物依赖性氧消耗来测量(Meth.Enz.,1970,Vol.17A,p526-529)。
术语“醇脱氢酶(ADH)”可以指具有在电子供体存在下催化还原醛以生成醇的反应活性的蛋白质(EC 1.1.1.1，EC 1.1.1.2，EC 1.1.1.71等)。该活性也可以称为“ADH活性”。编码ADH的基因也可以称为“ADH基因”。电子供体的实例可以包括NADH和NADPH。
作为ADH，具有在电子供体存在下催化还原香草醛以生成香草醇的反应活性的ADH是具体实例。该活性也可以特别称为“香草醇脱氢酶活性”。此外，具有香草醇脱氢酶活性的ADH也可以特别称为“香草醇脱氢酶”。
ADH的实例可以包括分别由yqhD基因，NCg10324基因，NCgl0313基因，NCgl2709基因，NCgl0219基因和NCgl2382基因编码的YqhD蛋白，NCgl0324蛋白，NCgl0313蛋白，NCgl2709蛋白，NCgl0219蛋白和NCgl2382蛋白。yqhD基因和NCg10324基因编码香草醇脱氢酶。yqhD基因可以在例如属于肠杆菌科的细菌例如大肠杆菌中发现。NCgl0324基因，NCgl0313基因，NCgl2709基因，NCgl0219基因和NCgl2382基因可以在例如棒状杆菌细菌例如谷氨酸棒状杆菌中发现。对于大肠杆菌K-12MG1655菌株天然的yqhD基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:37所示，由该基因编码的YqhD蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:38所示。对于谷氨酸棒状杆菌ATCC 13869菌株天然的NCgl0324基因，NCgl0313基因和NCgl2709基因的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:39、41和43所示，并且由这些基因编码的蛋白的氨基酸序列分别如SEQ ID NOS:40、42和44所示。对于谷氨酸棒状杆菌ATCC13032菌株天然的NCgl0219基因和NCgl2382基因的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:45和47所示，并且由这些基因编码的蛋白质的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:46和48所示。可以降低一种ADH的活性，或者可以降低两种或更多种ADH的活性。例如，可以降低NCgl0324蛋白，NCgl2709蛋白和NCgl0313蛋白的一种或多种的活性。特别地，可以降低至少NCgl0324蛋白的活性。
ADH活性可以通过例如在NADPH或NADH存在下将酶与底物(即醛，例如香草醛)一起温育，并测量NADPH或NADH的酶和底物依赖性氧化来测量。
术语“莽草酸脱氢酶”可以指具有在电子供体存在下催化还原3-脱氢莽草酸以生成莽草酸的反应活性(EC 1.1.1.25)的蛋白质。该活性也可以称为“莽草酸脱氢酶活性”。编码莽草酸脱氢酶的基因也可以称为“莽草酸脱氢酶基因”。电子供体的例子可以包括NADH和NADPH。莽草酸脱氢酶的实例可以包括由aroE基因编码的AroE蛋白。对于大肠杆菌K-12MG1655菌株天然的aroE基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:49所示，且由该基因编码的AroE蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:50所示。
莽草酸脱氢酶活性可以通过例如在NADPH或NADH存在下将酶与底物例如3-脱氢莽草酸一起温育并测量NADPH或NADH的酶和底物依赖性氧化来测量。
赋予或增强目标物质生产能力的方法的实例还可以包括增加L-半胱氨酸生物合成酶的活性的方法。
术语“L-半胱氨酸生物合成酶”可以指涉及L-半胱氨酸生物合成的蛋白质。编码L-半胱氨酸生物合成酶的基因也可以称为“L-半胱氨酸生物合成基因”。L-半胱氨酸生物合成酶的实例可以包括涉及硫利用的蛋白质。涉及硫利用的蛋白质的实例可以包括分别由cysIXHDNYZ基因和fpr2基因编码的CysIXHDNYZ蛋白和Fpr2蛋白。CysIXHDNYZ蛋白特别涉及无机硫化合物如硫酸盐和亚硫酸盐的还原。Fpr2蛋白可以特别涉及亚硫酸盐还原的电子传递。L-半胱氨酸生物合成酶的实例还可以包括O-乙酰丝氨酸(硫醇)-裂解酶。O-乙酰丝氨酸(硫醇)-裂解酶的实例可以包括由cysK基因编码的CysK蛋白。L-半胱氨酸生物合成酶的实例可以包括对于各种生物体例如肠杆菌科细菌和棒状杆菌细菌天然的那些。L-半胱氨酸生物合成酶的具体实例可以包括对于谷氨酸棒状杆菌天然的CysIXHDNYZ蛋白，Fpr2蛋白和CysK蛋白。对于谷氨酸棒状杆菌ATCC 13869菌株天然的cysIXHDNYZ基因和fpr2基因的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:88、90、92、94、96、98、100和102所示，并且由这些基因编码的蛋白质的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:89、91、93、95、97、99、101和103所示。可以增加一种L-半胱氨酸生物合成酶的活性，或者可以增加两种或更多种L-半胱氨酸生物合成酶的活性。例如，可以增加CysIXHDNYZ蛋白，Fpr2蛋白和CysK蛋白的一种或多种的活性，或者可以增加CysIXHDNYZ蛋白和Fpr2蛋白的一种或多种的活性。
L-半胱氨酸生物合成酶的活性可以通过例如增加编码L-半胱氨酸生物合成酶的基因的表达来增加，即L-半胱氨酸生物合成基因例如cysIXHDNYZ基因，fpr2基因和cysK基因。
可以通过例如修饰，例如增加或减少基因的表达调节子的活性，来增加L-半胱氨酸生物合成基因的表达。也就是说，可以通过例如增加基因的正表达调控子例如活化子的活性来增加L-半胱氨酸生物合成基因的表达。另外，可以通过例如降低基因的负表达调控子例如阻遏物的活性来增加L-半胱氨酸生物合成酶的表达。此类调节子也可以称为“调节子蛋白”。编码此类调节子的基因也可以称为“调节子基因”。
此类活化子的实例可以包括分别由cysR基因和ssuR基因编码的CysR蛋白和SsuR蛋白。CysR蛋白的活性增加可以导致cysIXHDNYZ基因，fpr2基因和ssuR基因的一种或多种的表达增加。另外，SsuR蛋白的活性增加可以导致涉及有机硫化合物利用的基因表达增加。此类活化子的实例可以包括对于各种生物体例如肠杆菌科细菌和棒状杆菌细菌天然的那些。此类活化子的具体实例可以包括对于谷氨酸棒状杆菌天然的CysR蛋白和SsuR蛋白。对于谷氨酸棒状杆菌ATCC13869菌株天然的cysR基因(NCgl0120)和ssuR基因的核苷酸序列分别如SEQ ID NO:104和106所示，并且由这些基因编码的蛋白质的氨基酸序列分别如SEQ IDNO:105和107所示。可以增加CysR蛋白和SsuR蛋白之一或两者的活性。例如，可以增加至少CysR蛋白的活性。可以通过例如增加编码活化子的基因的表达来增加此类活化子的活性。
此类阻遏物的实例可以包括由mcbR基因编码的McbR蛋白。McbR蛋白活性降低可以导致cysR基因和ssuR基因的一个或多个的表达增加，并且可以从而进一步导致cysIXHDNYZ基因和fpr2基因的一个或多个的表达增加。可以通过例如降低编码阻遏物的基因的表达或通过破坏编码阻遏物的基因来降低此类阻遏物的活性。
也就是说，特别地，可以通过例如增加cysIXHDNYZ基因，fpr2基因，cysR基因和ssuR基因的一种或多种的表达来增加L-半胱氨酸生物合成酶的活性。因此，短语“L-半胱氨酸生物合成酶的活性增加”可以表示例如cysIXHDNYZ基因，fpr2基因，cysR基因和ssuR基因的一种或多种的表达增加。例如，至少cysR基因的表达可以增加。另外，例如，所有这些基因的表达可以增加。可以通过增加cysR基因的表达来增加cysIXHDNYZ基因，fpr2基因和ssuR基因的一种或多种的表达。
赋予或增强目标物质生产能力的方法的实例可以进一步包括降低NCgl2048蛋白的活性的方法。
术语“NCgl2048蛋白”可以指由NCgl2048基因编码的蛋白。NCgl2048蛋白的实例可以包括对于各种生物体例如肠杆菌科细菌和棒状杆菌细菌天然的那些。NCgl2048蛋白的具体实例可以包括对于谷氨酸棒状杆菌天然的NCgl2048蛋白。对于谷氨酸棒状杆菌ATCC13869菌株天然的NCgl2048基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:119所示，且由该基因编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:120所示。顺便提及，关于本文所述的保守变体的NCgl2048蛋白的原始功能可以表示具有如SEQ ID NO:120所示的氨基酸序列的蛋白质的功能，或者也可以表示在微生物中蛋白质活性的降低提供目标物质的生产增加的性质。
赋予或增强目标物质生产能力的方法的实例还可以包括降低烯醇酶活性的方法。
术语“烯醇酶”可以指具有催化脱水2-磷酸-D-甘油酸以生成磷酸烯醇丙酮酸的反应活性(EC 4.2.1.11)的蛋白质。该活性也可以称为“烯醇酶活动”。烯醇酶也可以称为“磷酸丙酮酸水合酶”。编码烯醇酶的基因也可以称为“烯醇酶基因”。烯醇酶的实例可以包括由eno基因编码的Eno蛋白。烯醇酶例如Eno蛋白的实例可以包括包括对于各种生物体例如肠杆菌科细菌和棒状杆菌细菌天然的那些。烯醇酶的具体实例可以包括对于谷氨酸棒状杆菌天然的Eno蛋白。对于谷氨酸棒状杆菌ATCC 13869菌株天然的eno基因(NCg10935)的核苷酸序列如SEQ ID NO:128所示，且由该基因编码的Eno蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:129所示。
烯醇酶活性可以通过例如将酶与底物如2-磷酸-D-甘油酸温育并测量磷酸烯醇丙酮酸的酶和底物依赖性生成来测量。
赋予或增强目标物质生产能力的方法的实例还可以包括增加S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶的活性的方法。
术语“S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶”可以指具有催化水解S-腺苷-L-高半胱氨酸(SAH)以生成L-高半胱氨酸和腺苷的反应活性(EC 3.3.1.1)的蛋白质。该活性也可以称为“S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶活性”。S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶也可称为“腺苷高半胱氨酸酶”。编码S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶的基因也可以称为“S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶基因”。S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶的实例可以包括由sahH基因编码的SahH蛋白。S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶例如SahH蛋白的实例可以包括对于各种生物体例如酵母，链霉菌属细菌和棒状杆菌细菌天然的那些。S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶的具体实例可以包括对于谷氨酸棒状杆菌天然的SahH蛋白。对于谷氨酸棒状杆菌ATCC 13869菌株天然的sahH基因(NCg10719)的核苷酸序列如SEQ ID NO:144所示，且由该基因编码的SahH蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:145所示。
S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶活性可以通过例如将酶与底物例如S-腺苷-L-高半胱氨酸和DTNB(5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)温育，并基于412nm的吸光度测量产物例如高半胱氨酸依赖性TNB(5-巯基-2-硝基苯甲酸)生成来测量(J Mol Microbiol Biotechnol2008,15:277-286)。
活性待修饰的蛋白质可以根据在本文描述的方法中生产目标物质的生物合成途径的类型以及微生物固有具有的蛋白质的类型和活性来适当地选择。例如，当通过原儿茶酸的生物转化生产香草醛时，可以优选增强OMT、ACAR、PPT和原儿茶酸摄取系统的一种或多种的活性。另外，当通过原儿茶醛的生物转化生产香草醛时，可以优选增强OMT的活性。
用于培育具有目标物质生产能力的微生物的基因和蛋白质可以分别具有例如以上例示或其它已知的核苷酸序列和氨基酸序列。此外，用于培育具有目标物质生产能力的微生物的基因和蛋白质可以是以上例示的基因和蛋白质的保守变体，例如分别具有以上例示的或其它已知的核苷酸序列和氨基酸序列的基因和蛋白质。特别地，例如，用于培育具有目标物质生产能力的微生物的基因可以各自是编码以下蛋白质的基因，所述蛋白质具有以上例示的氨基酸序列或已知蛋白质的氨基酸序列，但包括一个或几个位置处的氨一个或几个氨基酸的取代、缺失、插入和/或添加，只要保持所述蛋白质的原始活性，例如酶活性，转运蛋白活性等。此外，例如，用于培育具有目标物质生产能力的微生物的基因可以各自是编码以下蛋白质的基因，所述蛋白质具有与以上例示的氨基酸序列或已知蛋白质的氨基酸序列的总氨基酸序列显示例如50％或更多，65％或更多，80％或更多，90％或更多，95％或更多，97％或更多，或99％或更多的同源性的氨基酸序列，只要保持所述蛋白质的原始活性。对于基因和蛋白质的保守变体，可以适当应用关于本文所述的AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因和AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的保守变体的描述。
<1-2>特定特征
本文所述的微生物可以以使所述微生物具有特定特征的方式进行修饰。换句话说，所述微生物具有特定特征。
所述特定特征选自以下特征(A)至(C)：
(A)所述微生物已经以使AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的活性降低和/或以使编码AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的基因具有如本文所述的“特定突变”的方式进行了修饰；
(B)所述微生物已经以使D-3-磷酸甘油酸脱氢酶(3-PGDH)的活性增加和/或以使所述微生物具有编码对L-丝氨酸反馈抑制抗性的3-PGDH的基因的方式进行了修饰；
(C)所述微生物已经以使L-丝氨酸脱氨酶的活性降低的方式进行了修饰。
作为特定特征，可以单独使用特征(A)至(C)中的一个，或者可以组合使用特征(A)至(C)中的两个或更多个。也就是说，微生物可以具有至少特征(A)，(B)或(C)。此外，微生物可以具有至少特征(A)，(B)或(C)，并且可以进一步具有至少一个剩下的特征。特征的组合没有特别限制。也就是说，微生物可具有例如特征(A)和(B)，特征(A)和(C)，特征(B)和(C)或所有特征(A)至(C)。
通过修饰微生物以使所述微生物具有特定的特征，可以提高微生物的目标物质生产能力，即可以增加通过使用所述微生物的目标物质生产。另外，通过修饰微生物以使所述微生物具有特定特征，可能改善微生物生成或再生成SAM的能力。也就是说，特别地，微生物的目标物质生产能力的增加可以是由于微生物生成或再生成SAM的能力增加。
可以通过修饰具有目标物质生产能力的微生物以使所述微生物具有特定特征来获得微生物。还可以通过修饰微生物以使所述微生物具有特定特征，然后对所述微生物赋予目标物质生产能力或增强所述微生物的目标物质生产能力来获得微生物。另外，所述微生物可以是作为产生特定特征的修饰的结果，或产生特定特征的修饰和其它赋予或增强目标物质生产能力的修饰的组合的结果，已经获得了目标物质生产能力的微生物。用于构建微生物的修饰可以以任意顺序进行。
<1-2-1>AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的活性降低和将突变导入AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因
微生物可以已经以使AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的活性降低和/或使编码AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的基因具有“特定突变”的方式进行了修饰。特别地，微生物可以已经以使AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的活性相比于未修饰菌株，也就是说相比于未修饰的微生物的菌株降低的方式进行了修饰。
术语“AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶”可以指AICAR甲酰基转移酶和/或IMP环化水解酶，即AICAR甲酰基转移酶和IMP环化水解酶中的之一或两者。术语“AICAR甲酰基转移酶”可以指具有催化将5-氨基-1-(5-磷酸-D-核糖基)咪唑-4-甲酰胺(AICAR)和10-甲酰基四氢叶酸转化为5-甲酰胺-1-(5-磷酸-D-核糖基)咪唑-4-甲酰胺(FAICAR)和四氢叶酸的反应活性(EC 2.1.2.3)的蛋白质。该活性也可以称为“AICAR甲酰基转移酶活性”。术语“IMP环化水解酶”可以指具有催化FAICAR脱水以生成IMP的反应活性(EC 3.5.4.10)的蛋白质。该活性也可以称为“IMP环化水解酶活性”。编码AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的基因也可以称为“AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因”。AICAR甲酰基转移酶和IMP环化水解酶可以编码为双功能酶。因此，术语“AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶”可以特别地指双功能AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶，即具有AICAR甲酰基转移酶活性和IMP环化水解酶活性的蛋白质。AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的实例可以包括PurH蛋白，其是由purH基因编码的双功能AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶。AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶例如PurH蛋白的实例可以包括对于各种生物体例如肠杆菌科细菌和棒状杆菌细菌天然的那些。AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的具体实例可以包括对于谷氨酸棒状杆菌天然的PurH蛋白质。对于谷氨酸棒状杆菌ATCC 13869菌株天然的purH基因(NCg10827)的核苷酸序列如SEQ ID NO:134所示，并且由该基因编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:135所示。
也就是说，AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因可以是例如具有如SEQ IDNO:134所示的核苷酸序列的基因。另外，AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶可以是例如具有如SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列的蛋白质。短语“基因或蛋白质具有核苷酸或氨基酸序列”可以表示基因或蛋白质包括(即包含)核苷酸或氨基酸序列，并且还可包括基因或蛋白质仅包括(即由其组成)核苷酸或氨基酸序列。
AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因可以是以上例示的任何AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因例如purH基因的变体，只要保持其原始功能。类似地，AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶可以是上文例示的任何AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶例如PurH蛋白的变体，只要保持其原始功能。保持其原始功能的变体也可以称为“保守变体”。用上述基因名称定义的基因和用上述蛋白名称定义的蛋白质不仅可以包括上文例示的基因和蛋白质，还可以包括其保守变体。也就是说，术语“purH基因(或NCg10827基因)”不仅可以包括上文例示的purH基因，例如具有SEQ ID NO:134所示的核苷酸序列的purH基因，并且还可以包括其保守变体。类似地，术语“PurH蛋白(或NCg10827蛋白)”不仅可以包括上文例示的PurH蛋白，例如具有如SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列的PurH蛋白，并且还可以包括其保守变体。保守变体的实例可以包括例如上文例示的基因和蛋白质的同源物和人工修饰形式。
短语“保持原始功能”是指基因或蛋白质的变体具有与原始基因或蛋白质的功能(例如活性或性质)相应的功能，例如活性或性质。关于基因的短语“保持原始功能”可以表示基因的变体编码保持原始功能的蛋白质。也就是说，关于AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因的短语“保持原始功能”可以表示基因的变体编码AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶。关于AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的短语“保持原始功能”可以表示蛋白质的变体具有AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶活性。
AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶活性可以通过例如将酶与底物(例如对于AICAR甲酰基转移酶为AICAR和10-甲酰基四氢叶酸；对于IMP环化水解酶为FAICAR)温育，并测量相应产物(例如对于AICAR甲酰基转移酶为FAICAR或四氢叶酸；对于IMP环化水解酶为IMP)的酶和底物依赖性产生来测量。可以基于298nm处的吸光度测量四氢叶酸的生成(RaylEA,et al(1996)JBC 271:2225-33)。此外，AICAR甲酰基转移酶活性和IMP环化水解酶活性可以通过例如将酶与AICAR甲酰基转移酶的底物例如AICAR和10-甲酰基四氢叶酸温育，并测量IMP环化水解酶的产物例如IMP的酶和底物依赖性生成来测量。AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶具有在至少一种适当条件下测量的AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶活性是足够的。换句话说，以使AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的活性当在至少一种适当条件下测量所述活性时降低的方式对微生物进行修饰是足够的。顺便提及，本文提到的所有其它蛋白质具有各自在至少一种适当条件下测量的相应的活性也是足够的。
以下将解释保守变体的实例。
AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因的同源物或AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的同源物可以容易地从公共数据库中获得，通过例如使用以上例示的AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因的任何核苷酸序列或以上例示的AICAR甲酰基转移酶/IMP环水解酶的任何氨基酸序列作为查询序列的BLAST搜索或FASTA搜索。此外，AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因的同源物例如可以通过以下获得：使用生物体例如棒状杆菌细菌的染色体作为模板，和基于以上例示的AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因的任何核苷酸序列制备的寡核苷酸作为引物的PCR。
AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因可以是编码具有任何上述氨基酸序列(例如SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列)的蛋白质的基因，所述氨基酸序列包括一个或几个位置处的氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加，只要保持原始功能。例如，编码的蛋白质可以具有延伸或缺失的N端和/或C端。尽管短语“一个或几个”所指的数字可以根据蛋白质的三维结构中的氨基酸残基的位置或氨基酸残基的类型而不同，具体地，例如其可以是1至50、1至40、1至30，1至20、1至10、1至5、或1至3。
上述一个或几个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加各自是保持蛋白质的原始功能的保守突变。保守突变的典型实例是保守取代。保守取代是下述突变，其中若取代位点是芳香族氨基酸，则在Phe、Trp和Tyr之间相互取代；若它是疏水性氨基酸，则在Leu、Ile和Val中相互取代；若它是极性氨基酸，则Gln和Asn之间相互取代；若它是碱性氨基酸，则在Lys、Arg和His中相互取代；若它是酸性氨基酸，则在Asp和Glu之间相互取代；并且若它是具有羟基的氨基酸，则在Ser和Thr之间相互取代。作为被视为保守取代的取代，具体而言，可以举出：从Ala向Ser或Thr的取代、从Arg向Gln、His或Lys的取代、从Asn向Glu、Gln、Lys、His或Asp的取代、从Asp向Asn、Glu或Gln的取代、从Cys向Ser或Ala的取代、从Gln向Asn、Glu、Lys、His、Asp或Arg的取代、从Glu向Gly、Asn、Gln、Lys或Asp的取代、从Gly向Pro的取代、从His向Asn、Lys、Gln、Arg或Tyr的取代、从Ile向Leu、Met、Val或Phe的取代、从Leu向Ile、Met、Val或Phe的取代、从Lys向Asn、Glu、Gln、His或Arg的取代、从Met向Ile、Leu、Val或Phe的取代、从Phe向Trp、Tyr、Met、Ile或Leu的取代、从Ser向Thr或Ala的取代、从Thr向Ser或Ala的取代、从Trp向Phe或Tyr的取代、从Tyr向His、Phe或Trp的取代及从Val向Met、Ile或Leu的取代。此外，如上所述的氨基酸的取代、缺失、插入、或添加也包含因基于基因来源的生物体的个体差异、种类的不同的情况等天然产生的突变(突变体或变体)。
此外，AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因可以是编码具有与任何前述氨基酸序列的总氨基酸序列显示例如50％或更多、65％或更多、80％或更多、90％或更多、95％或更多，97％或更多，或99％更多的同源性的氨基酸序列的蛋白质的基因，只要保持原始功能。在本说明书中，“同源性”等同于“同一性”。
此外，AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因可以是在严格条件下与可以从任何前述核苷酸序列(例如SEQ ID NO:134所示的核苷酸序列)制备的探针杂交的基因例如DNA，例如与任何上述核苷酸序列的整个序列或部分序列互补的序列，只要保持原始功能。术语“严格条件”可以指形成所谓的特异性杂交且不形成非特异性杂交的条件。严格条件的实例包括在该条件下高同源性的DNA(例如具有不少于50％、65％、80％、90％、95％、97％、99％同源性的DNA)彼此杂交，而较少同源性的DNA彼此不杂交的条件、或者典型的Southern杂交的清洗的条件，即在对应60℃、1×SSC、0.1％SDS；60℃、0.1×SSC、0.1％SDS；或68℃、0.1×SSC、0.1％SDS的盐浓度及温度下洗涤1次、或2或3次的条件。
用于上述杂交的探针可以是基因的互补序列的一部分。此类探针可以通过以基于公知的基因序列制作的寡核苷酸为引物，以含有任何前述基因的DNA片段为模板的PCR来制备。作为探针，例如，可以使用具有约300bp长度的DNA片段作为探针。特别地，当使用具有约300bp长度的DNA片段作为探针的情况下，杂交的清洗的条件可以是例如50℃、2×SSC和0.1％SDS。
此外，由于关于密码子简并性的性质根据宿主而改变，AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因可以包括对于任意密码子的相应等同密码子取代。也就是说AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因可以是由于遗传密码的简并性的上文例示的任意AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因的变体。例如，AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因可以是经修饰的基因，使得其具有根据选择的宿主中密码子频率的最佳密码子。
可以通过例如使用数学算法确定两个序列间的序列同一性的百分比。此类数学算法的非限制性实例包括Myers和Miller(1988)CABIOS 4:11-17的算法、Smith等(1981)Adv.Appl.Math.2:482的局部同源性算法、Needleman和Wunsch(1970)J.Mol.Biol.48:443-453的同源性比对算法、Pearson和Lipman(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.85:2444-2448的用于搜索同源性的方法、和Karlin和Altschul(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:2264的算法的修改形式，例如记如Karlin和Altschul(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:5873-5877中描述的算法。
通过使用基于此类数学算法的程序，可以实应用于确定序列同一性的序列比较(即比对)。程序可以由计算机适当执行。此类程序的实例包括但不限于PC/Gene程序(可购自Intelligenetics,Mountain View,Calif.)的CLUSTAL、ALIGN程序(Version 2.0)、和Wisconsin Genetics Software Package，Version 8(可购自Genetics Computer Group(GCG),575Science Drive,Madison,Wis.,USA)的GAP、BESTFIT、BLAST、FASTA、和TFASTA。可以例如通过使用初始参数实施使用这些程序的比对。CLUSTAL程序充分记载于Higgins etal.(1988)Gene 73:237-244(1988),Higgins et al.(1989)CABIOS 5:151-153,Corpet etal.(1988)Nucleic Acids Res.16:10881-90,Huang et al.(1992)CABIOS 8:155-65及Pearson et al.(1994)Meth.Mol.Biol.24:307-331。
为了获得与靶核苷酸序列同源的核苷酸序列，特别地，例如可以通过使用具有得分100和字长度12的BLASTN程序实施BLAST核苷酸搜索。为了获得与靶蛋白同源的氨基酸序列，特别地，例如可以通过使用具有得分50和字长度3的BLASTX程序实施BLAST蛋白质搜索。关于BLAST核苷酸搜索和BLAST蛋白质搜索，参见http://www.ncbi.nlm.nih.gov。另外，为了比较目的，可以使用缺口BLAST(BLAST 2.0)以获得包含缺口的比对。另外，可以使用PSI-BLAST以实应用于检测序列间的远离关系的重复搜索。关于缺口BLAST和PSI-BLAST，参见Altschul et al.(1997)Nucleic Acids Res.25:3389。当使用BLAST、缺口BLAST、或PSI-BLAST时，可以使用每种程序(例如对于核苷酸序列为BLASTN，并且对于氨基酸序列为BLASTX)的初始参数。也可以手动实施比对。
两个序列间的序列同一性作为当以使彼此最大符合来比对两个序列时，两个序列中匹配的残基的比率来计算。除非另有说明，术语氨基酸序列之间的“同一性”可以特别表示通过使用默认计分参数(即Matrix，BLOSUM62；Gap Costs，Existence＝11，Extension＝1；Compositional Adjustments，Conditional compositional score matrixadjustment)的blastp计算的同一性。除非另有说明，术语核苷酸序列之间的“同一性”可以特别表示通过使用默认计分参数(即Match/Mismatch Scores＝1，-2；Gap Costs＝Linear)的blastn计算的同一性。
关于基因和蛋白质的保守变体的上述描述可以加以必要的修改适用于任意蛋白质如3-PGDH，L-丝氨酸脱氨酶和目标物质生物合成酶和编码它们的基因的变体。
本文将解释用于降低蛋白质如AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的活性的方法。可以通过例如弱化编码AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的基因的表达，或破坏编码AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的基因来降低AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的活性。此外，在一个实施方案中，还可以通过例如以使编码AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的基因具有“特定突变”的方式修饰编码AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的基因来降低AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的活性。用于降低AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶活性的此类方法可以独立使用或以任意组合使用。
可以以使编码AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的基因具有“特定突变”的方式修饰微生物。
“特定突变”是导致改善微生物的目标物质生产能力的突变。关于AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因的术语“特定突变”可以指AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因的核苷酸序列的变化。“特定突变”可以提供编码的AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的氨基酸序列的变化。因此，术语“特定突变”也可以用于AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶，作为指代由AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因中的“特定突变”提供的AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的氨基酸序列中的变化的术语。也就是说，表述“AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因具有“特定突变”可以理解为由该基因编码的AICAR甲酰转移酶/IMP环化水解酶具有“特定突变”。
具有“特定突变”的AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶也可以称为“突变体AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶”。编码突变体AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的基因，即具有“特定突变”的AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因也可称为“突变体AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因”。
不具有“特定突变”的AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶也可以称为“野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶”。编码野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的基因，即不具有“特定突变”的AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因也可以称为“野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因”。野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因或野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的实例可包括例如以上例示的AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因或AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶及其保守变体。
“特定突变”没有特别限制，只要该突变改善了微生物的目标物质生产能力。“特定突变”可以是例如用于降低AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶活性的突变。“特定突变”还可以是例如增加AICAR的细胞内浓度的突变。
“特定突变”的具体实例可以包括编码的AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的位置37(S37)处的丝氨酸残基被另一个氨基酸残基替换的突变。
在“S37”处的突变中，修饰后的氨基酸残基可以是除修饰前的氨基酸残基以外的任何氨基酸残基，其至少是除丝氨酸残基以外的氨基酸残基，只要该突变改善微生物的目标物质生产能力。修饰后的氨基酸残基的实例可以包括K(Lys)、R(Arg)、H(His)、A(Ala)、V(Val)、L(Leu)、I(Ile)、G(Gly)、T(Thr)、P(Pro)、F(Phe)、W(Trp)、Y(Tyr)、C(Cys)、M(Met)、D(Asp)、E(Glu)、N(Asn)和Q(Gln)。修饰后的氨基酸残基的具体实例可以包括F(Phe)。也就是说，“特定突变”的具体实例可以包括用F替换S37的突变(S37F突变)。
任意野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶中的术语“S37”可以指与SEQ IDNO:135所示氨基酸序列的位置37处的丝氨酸残基对应的氨基酸残基。关于OMT的“L198”或“E199”处的突变的描述，例如用于定义其绝对位置的那些，可以加以必要的修改适用于AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的“S37”处的突变，条件是SEQ ID NO:135用作野生型蛋白的参考序列。
可以通过例如修饰野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因以使得由其编码的AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶具有“特定突变”来获得突变体AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因。待修饰的野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因可以通过例如从具有野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因的生物体中克隆或化学合成获得。或者，也可以在不使用野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因的情况下获得突变体AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因。例如，可以通过例如从具有突变体AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因的生物体克隆或化学和合成直接获得突变体AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因。获得的突变体AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因可以以其本身使用，或者可以在使用前进一步修饰。可以通过使用已知的方法修饰基因。例如，可以通过位点特异性诱变方法将目标突变引入DNA的靶位点。待修饰的野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因或突变体AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因可以源自或不源自宿主，例如本文所述的微生物来源的微生物。
以使AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因具有“特定突变”的方式对微生物进行修饰的方法没有特别限制。短语“以使编码AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的基因具有‘特定突变’的方式对微生物进行修饰”可以具体表示以使微生物具有突变体AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因而非天然野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因的方式对微生物进行修饰。短语“微生物具有突变体AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因而非天然野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因”可以表示微生物具有突变体AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因而其不再具有正常功能的天然野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因，也就是说，天然野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因已经被修饰成不正常发挥功能。以使微生物的目标物质生产能力改善的方式对天然野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因进行修饰是足够的。短语“天然野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因”可以指微生物中固有存在的野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因。可以通过例如向微生物中引入突变体AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因，以使AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因具有“特定突变”的方式对微生物进行修饰。在此类情况下，应当修饰例如破坏或缺失微生物的染色体等上的天然野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因，所述修饰以使微生物的目标物质生产能力改善的方式，与引入突变体AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因进行组合。例如，可以使用突变体AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因替换天然野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因，或者可以独立于突变体AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因的引入破坏或缺失天然野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因。或者，也可以通过例如向野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因例如微生物的染色体等上的天然野生型AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因引入“特定突变”，以使AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因具有“特定突变”的方式对微生物进行修饰。可以通过例如天然突变，诱变处理或基因工程将突变引入染色体等上的基因。
<1-2-2>增加D-3-磷酸甘油酸脱氢酶(3-PGDH)活性和引入编码对L-丝氨酸反馈抑制抗性的3-PGDH的基因
微生物可以以使D-3-磷酸甘油酸脱氢酶(3-PGDH)的活性增加和/或以使微生物具有编码对L-丝氨酸反馈抑制抗性的3-PGDH的基因的方式进行修饰。特别地，微生物可以以使3-PGDH的活性相比于未修饰菌株，即相比于未修饰的微生物的菌株增加的方式进行了修饰。
术语“D-3-磷酸甘油酸脱氢酶(3-PGDH)”可以指具有在电子受体存在下催化氧化3-磷酸甘油酸的以生成3-磷酸羟基丙酮酸的反应活性(EC 1.1.1.95)的蛋白质。该活性也可以称为“3-PGDH活性”。电子受体的实例可以包括NAD+和NADP+。编码3-PGDH的基因也可以称为“3-PGDH基因”。3-PGDH的实例可以包括由serA基因编码的SerA蛋白。3-PGDH例如SerA蛋白的实例可以包括那些对于各种生物体例如肠杆菌科细菌和棒状杆菌细菌天然的那些。3-PGDH的具体实例可以包括对于黄色短杆菌(B.flavum)天然的SerA蛋白。对于黄色短杆菌ATCC 14067菌株天然的serA基因(NCgl1235)的核苷酸序列如SEQ ID NO:177所示，且由该基因编码的SerA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:178所示。3-PGDH的具体实例还可以包括对于大肠杆菌天然的SerA蛋白。
也就是说，3-PGDH基因可以是例如具有如SEQ ID NO:177所示的核苷酸序列的基因。另外，3-PGDH可以是例如具有如SEQ ID NO:178所示的氨基酸序列的蛋白质。
3-PGDH基因可以是以上例示的任何3-PGDH基因例如serA基因的保守变体。类似地，3-PGDH可以是以上例示的任何3-PGDH例如SerA蛋白的保守变体。术语“serA基因(或NCgl1235基因)”不仅可以包括以上例示的serA基因，例如具有如SEQ ID NO:177所示的核苷酸序列的serA基因，而且还可以包括其保守变体。类似地，术语“SerA蛋白(或NCgl1235蛋白)”不仅可以包括以上例示的SerA蛋白，例如具有如SEQ ID NO:178所示的氨基酸序列的SerA蛋白，而且还可以包括其保守变体。关于本文所述的AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因和AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的保守变体的描述可以加以必要的修改适用于3-PGDH基因和3-PGDH的保守性变体。例如，3-PGDH基因可以是编码具有任何上述氨基酸序列，例如如SEQ ID NO:178所示的氨基酸序列，包括一个或几个位置处的一个或几个氨基酸的取代、缺失、插入和/或添加的蛋白质的基因，只要保持原始功能。此外，3-PGDH基因可以是编码具有与任何前述氨基酸序列例如如SEQ ID NO:178所示的氨基酸序列的总氨基酸序列显示例如50％或更多、65％或更多、80％或更多、90％或更多、95％或更多，97％或更多，或99％更多的同源性的氨基酸序列的蛋白质的基因，只要保持原始功能。关于3-PGDH基因的短语“保持原始功能”可以表示基因的变体编码3-PGDH。关于3-PGDH的短语“保持原始功能”可以表示蛋白质的变体具有3-PGDH活性。
3-PGDH活性可以通过例如在NAD+或NADP+存在下将酶与底物例如3-磷酸甘油酸温育并测量NAD+或NADP+的酶和底物依赖性还原来测量。3-PGDH具有在至少一种适当的条件下例如至少在NAD+存在下，或至少在NADP+存在下测量的3-PGDH活性就足够了。换句话说，微生物已经以使当在至少一种适当条件下测量活性时3-PGDH的活性增加的方式进行了修饰就足够了。
本文将解释用于增加蛋白质如3-PGDH的活性的方法。可以通过例如增加编码3-PGDH的基因例如以上例示的3-PGDH基因，包括以下描述的反馈敏感或野生型3-PGDH基因和反馈抗性或突变体3-PGDH基因的表达来增加3-PGDH的活性。此外，由于3-PGDH可以受到L-丝氨酸的反馈抑制，在一个实施方案中，还可以通过例如修饰微生物以使所述微生物具有编码对L-丝氨酸的反馈抑制抗性的3-PGDH的基因来增加3-PGDH的活性。此类增加3-PGDH活性的方法可以单独使用或以任意组合使用。
微生物可以以使微生物具有编码对L-丝氨酸的反馈抑制抗性的3-PGDH的基因的方式进行修饰。
对L-丝氨酸的反馈抑制抗性的3-PGDH也可以称为“反馈抗性3-PGDH”。编码反馈抗性3-PGDH的基因也可以称为“反馈抗性3-PGDH基因”。反馈抗性3-PGDH的实例可以包括具有提高对L-丝氨酸反馈抑制的抗性的突变的3-PGDH。提高对L-丝氨酸对反馈抑制的抗性的突变也可以称为“反馈抗性突变”。具有反馈抗性突变的3-PGDH也可称为“突变体3-PGDH”。编码突变体3-PGDH的基因也可以称为“突变体3-PGDH基因”。
不对L-丝氨酸反馈抑制抗性的3-PGDH也可以称为“反馈敏感3-PGDH”。编码反馈敏感3-PGDH的基因也可称为“反馈敏感3-PGDH基因”。反馈敏感3-PGDH的实例可以包括不具有反馈抗性突变的3-PGDH。不具有反馈抗性突变的3-PGDH也可以称为“野生型3-PGDH”。编码野生型3-PGDH的基因也可以称为“野生型3-PGDH基因”。此处所用的术语“野生型”是为了方便将“野生型”3-PGDH与“突变体”3-PGDH区分开，而“野生型”3-PGDH不限于作为天然物质获得的那些，并且可以包括不具有反馈抗性突变的任何3-PGDH。野生型3-PGDH的实例可以包括例如以上例示的3-PGDH。另外，以上例示的3-PGDH的所有保守变体都应包括在野生型3-PGDH中，条件是此类保守变体不具有反馈抗性突变。
突变体3-PGDH可以与野生型3-PGDH例如以上例示的3-PGDH及其保守变体相同，条件是突变体3-PGDH具有反馈抗性突变。也就是说，突变体3-PGDH可以是具有野生型3-PGDH的任何氨基酸序列但具有反馈抗性突变的蛋白质。特别地，突变体3-PGDH可以是例如具有SEQ ID NO:178所示的氨基酸序列的蛋白质，条件是突变体3-PGDH具有反馈抗性突变。另外，特别地，突变体3-PGDH可以是例如具有SEQ ID NO:178所示的氨基酸序列，但包括一个或几个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的蛋白质，条件是突变体3-PGDH具有反馈抗性突变。另外，特别地，突变体3-PGDH可以是例如具有与SEQ ID NO:178所示的氨基酸序列显示50％或更多，65％或更多，或80％或更多，90％或更多，95％或更多，97％或更多，或99％或更多的同一性的氨基酸序列的蛋白质，条件是突变体3-PGDH具有反馈抗性突变。
在用作野生型3-PGDH的保守变体中，保守突变可以发生在除反馈抗性突变的位置以外的位置。也就是说，突变体3-PGDH可以是具有以上例示的3-PGDH的任何氨基酸序列中，但具有反馈抗性突变和进一步包括保守突变例如在除反馈抗性突变的位置以外的位置处的一个或几个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的蛋白质。
反馈抗性突变没有特别限制，只要该突变改善对L-丝氨酸反馈抑制的抗性。已知在10mM的L-丝氨酸存在下，典型的野生型3-PGDH例如对黄色短杆菌ATCC 14067菌株天然的SerA蛋白的3-PGDH活性几乎完全被抑制。因此，反馈抗性突变可以是例如在10mM的L-丝氨酸存在下改善对L-丝氨酸反馈抑制的抗性的突变，也就是说，在10mM的L-丝氨酸存在下增加3-PGDH活性。因此，关于3-PGDH短语“对L-丝氨酸的反馈抑制的抗性”可以表示例如即便在10mM的L-丝氨酸存在下，3-PGDH保持3-PGDH活性。在10mM的L-丝氨酸存在下观察到的反馈抗性PGDH例如突变体3-PGDH的3-PGDH活性可以是例如在不存在L-丝氨酸的情况下观察到的活性的20％或更多，40％或更多，60％或更多，80％或更多，或90％或更多。因此，可以例如以使当在10mM的L-丝氨酸存在下测量活性时3-PGDH的活性增加的方式对微生物进行修饰。
突变体3-PGDH和反馈抗性突变的实例可以包括例如在US2003175912A1和US6180373B1中公开的那些。
反馈抗性突变的具体实例可以包括野生型3-PGDH的位置325处的谷氨酸残基(E325)被另一氨基酸残基替换的突变。
在“E325”的突变中，修饰后的氨基酸残基可以是除修饰前的氨基酸残基以外的任何氨基酸残基，其是至少除谷氨酸残基以外的氨基酸残基，只要所得的突变体3-PGDH是对L-丝氨酸的反馈抑制具有抗性。修饰后的氨基酸残基的实例可以包括K(Lys)、R(Arg)、H(His)、A(Ala)、V(Val)、L(Leu)、I(Ile)、G(Gly)、T(Thr)、P(Pro)、F(Phe)、W(Trp)、Y(Tyr)、C(Cys)、M(Met)、D(Asp)、N(Asn)和Q(Gln)。修饰后的氨基酸残基的具体实例可以包括K(Lys)。也就是说，反馈抗性突变的具体实例可以包括使用K替换E325的突变(E325K突变)。
任意野生型3-PGDH中的术语“E325”可以指与SEQ ID NO:178所示的氨基酸序列的位置325处的谷氨酸残基对应的氨基酸残基。关于OMT的“L198”或“E199”处的突变的描述，例如用于定义其绝对位置的那些，可以加以必要的修改适用于3-PGDH的“E325”处的突变，条件是SEQ ID NO:178用作野生型蛋白的参考序列。
突变体3-PGDH的具体实例可以包括由serA*基因编码的对于黄色短杆菌AJ13327菌株天然的SerA*蛋白(US2003175912A1)。黄色短杆菌AJ13327菌株是来自黄色短杆菌ATCC14067菌株的衍生菌株。对于黄色短杆菌AJ13327菌株天然的SerA*蛋白对应对于黄色短杆菌ATCC 14067菌株天然的SerA蛋白，条件是位置325处的谷氨酸残基已经被赖氨酸残基替换，也就是说已经引入E325K突变。黄色短杆菌AJ13327菌株的serA*基因(其是一种突变体3-PGDH基因)的核苷酸序列如SEQ ID NO:179所示，且由该基因编码的SerA*蛋白(其是一种突变体3-PGDH)的氨基酸序列如SEQ ID NO:180所示。也就是说，突变体3-PGDH基因可以是例如具有SEQ ID NO:179所示的核苷酸序列的基因。另外，突变体3-PGDH可以是例如具有如SEQ ID NO:180所示的氨基酸序列的蛋白质。此外，突变体3-PGDH基因可以是例如具有SEQID NO:179所示的核苷酸序列的基因对保守变体，例如编码具有3-PGDH活性，并且对L-丝氨酸反馈抑制抗性的蛋白质的变体，其中保守取代发生在除反馈抗性突变的位置以外的其它位置，使得该变体仍然具有反馈抗性突变。另外，突变体3-PGDH可以是例如具有如SEQ IDNO:180所示的氨基酸序列的蛋白质的保守变体，其中保守取代发生在除反馈抗性突变的位置以外的其它位置，使得该变体仍然具有反馈抗性突变的变体。对于突变体3-PGDH基因和突变体3-PGDH的保守变体，上述关于3-PGDH基因和3-PGDH的保守变体的描述可以加以必要的修改适用。
突变体3-PGDH基因可以通过例如修饰野生型3-PGDH基因以使由其编码的3-PGDH具有反馈抗性突变来获得。待修饰的野生型3-PGDH基因可以通过例如从具有野生型3-PGDH基因的生物体克隆或化学合成获得。或者，也可以在不使用野生型3-PGDH基因的情况下获得突变体3-PGDH基因。例如，突变体3-PGDH基因可以通过例如从具有突变体3-PGDH基因的生物体克隆或化学合成直接获得。类似地，任何其它反馈抗性3-PGDH基因可以通过例如从具有反馈抗性3-PGDH基因的生物体克隆或化学合成获得。获得的反馈抗性或突变体3-PGDH基因可以以其本身使用，或者可以在使用前进一步修饰。可以通过使用已知的方法修饰基因。例如，可以通过位点特异性诱变方法将目标突变引入DNA的靶位点。待修饰的野生型3-PGDH基因或反馈抑制或突变体3-PGDH可以源自或不源自宿主，例如本文所述的微生物来源的微生物。
修饰微生物以使所述微生物具有反馈抗性3-PGDH基因例如突变体3-PGDH基因的方法没有特别限制。可以通过例如将基因导入微生物中来修饰微生物以使所述微生物具有反馈抗性3-PGDH基因。或者，也可以通过例如将反馈抗性突变引入微生物的染色体等上的野生型3-PGDH基因例如天然3-PGDH基因来修饰微生物以使所述微生物具有反馈抗性3-PGDH基因，特别是突变体3-PGDH基因。术语“天然3-PGDH基因”可以指微生物中固有存在的野生型3-PGDH基因。可以通过例如天然突变，诱变处理或基因工程将突变引入染色体等上的基因。黄色短杆菌AJ13327菌株是经修饰以具有突变体3-PGDH基因的微生物的实例。
将反馈抗性3-PGDH基因例如突变体3-PGDH基因引入微生物中的方法没有特别限制。微生物能够表达反馈抗性3-PGDH基因就足够了。微生物可以具有反馈抗性3-PGDH基因的一个拷贝，或者可以具有反馈抗性3-PGDH基因的两个或更多个拷贝。微生物可以具有一种反馈抗性3-PGDH基因，或者可以具有两种或更多种反馈抗性3-PGDH基因。反馈抗性3-PGDH基因可以通过与“增加蛋白质的活性的方法”中所述的基因的引入相同的方式引入微生物中。
微生物可以具有或不具有除反馈抗性3-PGDH基因外的3-PGDH基因。例如，除反馈抗性3-PGDH基因外，微生物可以具有或不具有天然3-PGDH基因，其可以是反馈敏感或野生型3-PDGH基因。
<1-2-3>L-丝氨酸脱氨酶活性的降低
微生物可以以使L-丝氨酸脱氨酶的活性降低的方式进行了修饰。特别地，微生物可以以使L-丝氨酸脱氨酶的活性相比于未修饰菌株即相比于未修饰的微生物的菌株降低的方式进行了修饰。
术语“L-丝氨酸脱氨酶”可以指具有催化将L-丝氨酸转化成丙酮酸和氨的反应活性(EC 4.3.1.17)的蛋白质。该活性也可以称为“L-丝氨酸脱氨酶活性”。L-丝氨酸脱氨酶也可以称为“L-丝氨酸氨裂解酶”。编码L-丝氨酸脱氨酶的基因也可以称为“L-丝氨酸脱氨酶基因”。L-丝氨酸脱氨酶的实例可以包括由sdaA基因编码的SdaA蛋白。L-丝氨酸脱氨酶例如SdaA蛋白的实例可以包括对于各种生物体例如肠杆菌科细菌和棒状杆菌细菌天然的那些。L-丝氨酸脱氨酶的具体实例可以包括对于谷氨酸棒状杆菌天然的SdaA蛋白。对于谷氨酸棒状杆菌ATCC 13869菌株天然的sdaA基因(NCgl1583)的核苷酸序列如SEQ ID NO:146所示，且由该基因编码的SdaA蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:147所示。
也就是说，L-丝氨酸脱氨酶基因可以是例如具有如SEQ ID NO:146所示的核苷酸序列的基因。另外，L-丝氨酸脱氨酶可以是例如具有如SEQ ID NO:147所示的氨基酸序列的蛋白质。
L-丝氨酸脱氨酶基因可以是以上例示的任何L-丝氨酸脱氨酶基因例如sdaA基因的保守变体。类似地，L-丝氨酸脱氨酶可以是以上例示的任何L-丝氨酸脱氨酶例如SdaA蛋白的保守变体。术语“sdaA基因(或NCgl1583基因)”不仅可以包括以上例示的sdaA基因，例如具有如SEQ ID NO:146所示的核苷酸序列的sdaA基因，而且还可以包括其保守变体。类似地，术语“SdaA蛋白(或NCgl1583蛋白)”不仅可以包括以上例示的SdaA蛋白，例如具有如SEQID NO:147所示的氨基酸序列的SdaA蛋白，而且还可以包括其保守变体。关于本文所述的AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶基因和AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶的保守变体的描述可以加以必要的修改适用于L-丝氨酸脱氨酶基因和L-丝氨酸脱氨酶的保守性变体。例如，L-丝氨酸脱氨酶基因可以是编码具有任何上述氨基酸序列，例如如SEQ ID NO:147所示的氨基酸序列，包括一个或几个位置处的一个或几个氨基酸的取代、缺失、插入和/或添加的蛋白质的基因，只要保持原始功能。此外，L-丝氨酸脱氨酶基因可以是编码具有与任何前述氨基酸序列例如如SEQ ID NO:147所示的氨基酸序列的总氨基酸序列显示例如50％或更多、65％或更多、80％或更多、90％或更多、95％或更多，97％或更多，或99％更多的同源性的氨基酸序列的蛋白质的基因，只要保持原始功能。关于L-丝氨酸脱氨酶基因的短语“保持原始功能”可以表示基因的变体编码L-丝氨酸脱氨酶。关于L-丝氨酸脱氨酶的短语“保持原始功能”可以表示蛋白质的变体具有L-丝氨酸脱氨酶活性。
L-丝氨酸脱氨酶活性可以通过例如将酶与底物例如L-丝氨酸温育并测量丙酮酸或氨的酶和底物依赖性生成来测量。L-丝氨酸脱氨酶具有在至少一种适当的条件下测量的L-丝氨酸脱氨酶活性就足够了。换句话说，微生物已经以使当在至少一种适当条件下测量活性时L-丝氨酸脱氨酶的活性降低的方式进行了修饰就足够了。
<1-3>提高蛋白质活性的方法
以下，说明增加蛋白质例如3-PGDH的活性的方法。
短语“蛋白质的活性增加”可以表示相比于未修饰菌株即相比于未修饰的微生物的菌株，蛋白质的活性增加。具体地说，短语“蛋白质的活性增加”是指相比于未修饰菌株，每细胞的蛋白质的活性增加。本文使用的术语“未修饰菌株”或“未修饰微生物的菌株”是指未经修饰而增加目标蛋白的活性的对照菌株。未修饰菌株的实例包括野生型菌株和亲本菌株。未修饰菌株的具体实例可以包括微生物物种的各自类型菌株。未修饰菌株的具体实例还包括上文关于微生物描述例示的菌株。也就是说，在一个实施方案中，与一类菌株，即本发明所述的微生物所属物种的类型菌株相比，可以增加蛋白质的活性。在另一个实施方案中，与谷氨酸棒状杆菌ATCC 13869菌株相比，蛋白质的活性也可以增加。在另一个实施方案中，与谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032菌株相比，蛋白质的活性也可以增加。在另一个实施方案中，与大肠杆菌K-12MG1655株相比，蛋白质的活性也可以增加。短语“蛋白质的活性增加”也可以表示为“蛋白质的活性增强”。更具体地，短语“蛋白质的活性增加”可以意味着与未修饰菌株相比，每细胞的蛋白质的分子数目增加，和/或蛋白质的每个分子的功能增加。也就是说，术语“蛋白质的活性增加”中的术语“活性”不限于蛋白质的催化活性，而是也可以指编码蛋白质的基因的转录量(即mRNA的量)或编码蛋白质的基因的翻译量(即蛋白质的量)。此外，短语“蛋白质的活性增加”不仅包括在固有具有目标蛋白质的活性的菌株中目标蛋白质的活性增加，而且还包括对不固有具有目标蛋白质活性的菌株赋予目标蛋白质的活性。此外，只要蛋白质的活性最终增加，可以减弱和/或消除宿主中固有存在的目标蛋白质的活性，然后可以对宿主赋予适当类型的目标蛋白质。
蛋白质的活性增加的程度没有特别限制，只要与未修饰菌株相比蛋白质的活性增加即可。蛋白质的活性可以增加到例如未修饰菌株的1.2倍或更多、1.5倍或更多、2倍或更多、或3倍或更多。此外，当未修饰的菌株不具有目标蛋白质的活性时，由于引入编码蛋白质的基因而产生蛋白质就足够了，例如蛋白质可以以可测量到其活性的程度产生。
用于增加蛋白质活性的修饰可以通过例如增加编码蛋白质的基因的表达来实现。短语“基因的表达增加”是指与未修饰菌株如野生型菌株和亲本菌株相比，基因的表达增加。具体而言，短语“基因的表达增加”是指与未修饰菌株相比，每细胞的基因的表达量增加。更具体地，短语“基因的表达增加”可以表示着基因的转录量(即mRNA的量)增加，和/或基因的翻译量(即从基因表达的蛋白质的量)增加。短语“基因的表达增加”也可以称为“基因的表达增强”。基因的表达可以增加到例如未修饰菌株的1.2倍或更多、1.5倍或更多、2倍或更多、或3倍或更多。此外，短语“基因的表达增加”不仅包括在固有表达目标基因的菌株中目标基因的表达量增加，而且还包括将基因导入到不固有表达目标基因的菌株中并且在其中表达。也就是说，短语“基因的表达增加”也可以意味着例如将目标基因导入不具有该基因的菌株中，并且在其中表达。
可以通过例如增加基因的拷贝数来增加基因的表达。
可以通过将基因导入宿主的染色体增加基因的拷贝数。可以通过例如使用同源重组(Miller,J.H.,Experiments in Molecular Genetics,1972,Cold Spring HarborLaboratory)将基因导入染色体中。使用同源重组的基因转移方法的实例包括例如使用线性DNA的方法，例如Red驱动的整合(Datsenko,K.A.,and Wanner,B.L.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,97:6640-6645(2000))，使用含有温度敏感性复制起点的质粒的方法，使用能够接合转移的质粒的方法，使用不具有在宿主中发挥功能的复制起点的自杀载体的方法，以及使用噬菌体的转导方法。可以仅引入基因的一个拷贝，或者可以引入基因的两个或更多个拷贝。例如，通过使用在染色体上以多个拷贝存在的序列作为靶标进行同源重组，可将多个拷贝的基因导入染色体。以多个拷贝存在于染色体上的此类序列的实例包括重复DNA和位于转座子两端的反向重复序列。或者，可以通过使用染色体上适当的序列，如对于生产目标物质不必需的基因作为靶标来进行同源重组。此外，也可以使用转座子或Mini-Mu(日本专利公开(Kokai)号2-109985，美国专利号5,882,888，EP805867B1)将基因随机引入染色体。
可以使用具有与全基因或其一部分互补的序列的探针通过Southern杂交，使用基于该基因序列制备的引物进行PCR等确认靶基因对染色体的引入。
此外，还可以通过将含有基因的载体引入宿主中来增加基因的拷贝数。例如，可以通过将含有靶基因的DNA片段与在宿主中发挥功能的载体连接来构建基因的表达载体，并用表达载体转化宿主来增加基因的拷贝数。含有靶基因的DNA片段可以通过例如使用具有目标基因的微生物的基因组DNA作为模板的PCR获得。作为载体，可以使用在宿主细胞中自主复制的载体。载体可以是多拷贝载体。此外，载体可以具有用于选择转化体的抗生素抗性基因等标志物。此外，载体可以具有用于表达引入的基因的启动子和/或终止子。载体可以是例如源自细菌质粒的载体、源自酵母质粒的载体、源自噬菌体的载体、粘粒、噬菌粒等。在肠杆菌科细菌如大肠杆菌中自主复制的载体的具体实例包括，例如pUC19、pUC18、pHSG299、pHSG399、pHSG398、pBR322、pSTV29(所有这些可购自Takara Bio)、pACYC184、pMW219(NIPPON GENE)、pTrc99A (Pharmacia)、pPROK系列载体(Clontech)、pKK233-2(Clontech)、pET系列载体(Novagen)、pQE系列载体(QIAGEN)、pCold TF DNA(Takara Bio)、pACYC系列载体、和宽宿主谱载体RSF1010。在棒状杆菌细菌中可自主复制的载体的具体实例包括例如pHM1519(Agric.Biol.Chem.,48,2901-2903(1984))；pAM330(Agric.Biol.Chem.,48,2901-2903(1984))；通过改善这些并且具有药物抗性基因获得的质粒；日本专利公开(Kokai)号3-210184中描述的质粒pCRY30；日本专利公开(Kokai)号2-72876和美国专利号5,185,262中描述的质粒pCRY21、pCRY2KE、pCRY2KX、pCRY31、pCRY3KE、和pCRY3KX；日本专利公开(Kokai)号1-191686中描述的质粒pCRY2和pCRY3；日本专利公开(Kokai)号58-192900中描述的pAJ655、pAJ611和pAJ1844；日本专利公开(Kokai)号57-134500中描述的pCG1；日本专利公开(Kokai)号58-35197中描述的pCG2；日本专利公开(Kokai)号57-183799中描述的pCG4和pCG11；日本专利公开(Kokai)号10-215883中描述的pVK7；WO2007/046389中描述的pVK9；WO2013/069634中描述的pVS7；和日本专利公开(Kokai)号9-070291中描述的pVC7。
当引入基因时，该基因能够被选择的宿主表达是足够的。具体地说，基因存在于宿主中以使其在宿主中发挥功能的启动子的控制下表达是足够的。启动子没有特别限制，只要其在宿主中发挥功能。术语“在宿主中发挥功能的启动子”可以指在宿主中显示启动子活性的启动子。启动子可以是源自宿主的启动子，或者可以是异源启动子。启动子可以是待引入的基因的天然启动子或另一基因的启动子。作为启动子，例如还可以使用本文所述的此类更强的启动子。
用于终止基因转录的终止子可以位于基因的下游。终止子没有特别限制，只要它在选择的宿主中发挥功能。终止子可以是源自宿主的终止子，或者可以是异源终止子。终止子可以是待引入的基因的天然终止子，或另一基因的终止子。终止子的具体实例包括例如T7终止子、T4终止子、fd噬菌体终止子、tet终止子和trpA终止子。
可用于各种微生物的载体、启动子和终止子详细公开于"FundamentalMicrobiology Vol.8,Genetic Engineering,KYORITSU SHUPPAN CO.,LTD,1987"中，并且可以使用那些。
此外，当引入两个或更多个基因时，基因各自被宿主以可表达方式含有是足够的。例如，所有基因可以由单个表达载体或染色体携带。此外，基因可以由两个或多个表达载体分开携带，或者由单个或两个以上表达载体和染色体分开携带。还可以引入由两个或多个基因构成的操纵子。当“引入两个或多个基因”时，可以引入例如编码两种或多种蛋白质(例如酶)的相应基因；引入编码构成单个蛋白质复合物(例如酶复合物)的两个或多个亚基的相应基因，以及这些的组合。
要引入的基因没有特别限制，只要其编码在宿主中发挥功能的蛋白质即可。要引入的基因可以是源自宿主的基因，或者可以是异源基因。可以通过例如使用基于该基因的核苷酸序列设计的引物，并且使用具有该基因的生物体的基因组DNA，携带该基因的质粒等作为模板的PCR来获得要引入的基因。要引入的基因也可以例如基于该基因的核苷酸序列而完全合成(Gene,60(1),115-127(1987))。获得的基因可以原样使用，或根据需要进行修饰后使用。也就是说，可以通过修饰基因获得基因的变体。基因可以通过已知技术进行修饰。例如，可以通过位点特异性突变方法将目标突变引入DNA的目标位点。也就是说，可以通过位点特异性突变方法修饰基因的编码区，使得编码的蛋白质的特定位点包括氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加。位点特异性突变方法的实例包括使用PCR的方法(Higuchi,R.,61,于PCR Technology,Erlich,H.A.Eds.,Stockton Press(1989)；Carter,P.,Meth.于Enzymol.,154,382(1987))和利用噬菌体的方法(Kramer,W.and Frits,H.J.,Meth.于Enzymol.,154,350(1987)；Kunkel,T.A.et al.,Meth.于Enzymol.,154,367(1987))。或者，可以总体合成基因的变体。
另外，当蛋白质用作由多个亚基组成的复合物发挥功能时，可以修饰多个亚基的部分或全部，只要蛋白质的活性最终增加即可。也就是说，例如，通过增加基因的表达来增加蛋白质的活性时，可以增强编码亚基的部分或全部基因的表达。通常优选增强编码亚基的所有基因的表达。此外，构成复合物的亚基可以源自单种生物体或两种或更多种生物体，只要该复合物具有目标蛋白质的功能即可。也就是说，例如，可以将编码多个亚基的相同生物体的基因导入宿主，或者可以将编码多个亚基的不同生物体的基因引入宿主中。
此外，通过改善基因的转录效率可以增加基因的表达。另外，还可以通过改善基因的翻译效率来增加基因的表达。基因的转录效率和基因的翻译效率可以通过例如修饰基因的表达调控序列来改善。术语“表达控制序列”总地指影响基因表达的位点。表达调控序列的实例包括例如启动子、Shine-Dalgarno(SD)序列(也称为核糖体结合位点(RBS))，和RBS与起始密码子之间的间隔区。可以通过使用启动子搜索载体或基因分析软件如GENETYX鉴定表达控制序列。这些表达调控序列可以通过例如使用温度敏感载体的方法或Red驱动整合法(WO2005/010175)进行修饰。
通过例如用较强的启动子替换染色体上基因的启动子，可以改善基因的转录效率。术语“较强的启动子”是指与基因的固有存在的野生型启动子相比，提供了基因的改善转录的启动子。较强启动子的实例包括例如已知的高表达启动子如T7启动子、trp启动子、lac启动子、thr启动子、tac启动子、trc启动子、tet启动子、araBAD启动子、rpoH启动子、msrA启动子、Pm1启动子(源自双歧杆菌属)、PR启动子和PL启动子。可用于棒状杆菌细菌的较强启动子的实例包括例如人工修饰的P54-6启动子(Appl.Microbiol.Biotechnol.,53,674-679(2000))、在棒状杆菌细菌中用乙酸、乙醇、丙酮酸等可诱导的pta、aceA、aceB、adh和amyE启动子，或cspB、SOD和tuf(EF-Tu)启动子(其是能够在棒状杆菌细菌中提供大表达量的强启动子)(Journal of Biotechnology,104(2003)311-323；Appl.Environ.Microbiol.,2005Dec；71(12):8587-96)，P2启动子(SEQ ID NO:108的位置942-1034)和P3启动子(SEQ ID NO:111)，以及lac启动子、tac启动子和trc启动子。此外，作为较强的启动子，也可以通过使用各种报告基因获得高活性型的现有启动子。例如，通过使启动子区域中的-35和-10区域更接近共有序列，可以增强启动子的活性(WO00/18935)。高活性型启动子的实例可以包括各种tac样启动子(Katashkina JI等人，俄罗斯联邦专利申请号2006134574)。Goldstein等人的文章(Prokaryotic Promoters in Biotechnology,Biotechnol.Annu.Rev.,1,105-128(1995))等中描述了用于评估启动子的强度的方法和强启动子的实例。
基因的翻译效率可以通过例如用较强的SD序列替换染色体上的基因的Shine-Dalgarno(SD)序列(也称为核糖体结合位点(RBS))来改善。术语“较强的SD序列”可以指与基因的固有野生型SD序列相比提供了mRNA的改善的翻译的SD序列。较强的SD序列的实例包括例如源自噬菌体T7的基因10的RBS(Olins P.O.et al,Gene,1988,73,227-235)。此外，已知在RBS和起始密码子之间的间隔区域中，特别是在起始密码子(5'-UTR)的紧邻上游的序列中的几个核苷酸的取代、插入或缺失显著影响mRNA的稳定性和翻译效率，因此，也可以通过修饰来改善基因的翻译效率。
基因的翻译效率也可以通过例如修饰密码子来改善。例如，通过用更频繁使用的同义密码子替换基因中存在的稀有密码子，可以提高基因的翻译效率。也就是说，可以修饰要引入的基因，例如，以便根据在选择的宿主中观察到的密码子的频率包含最佳密码子。密码子可以通过例如位点特异性突变方法替换，用于将目标突变引入DNA的目标位点。或者，可以完全合成其中目标密码子被替换的基因片段。“密码子选择数据库”(kazusa.or.jp/codon；Nakamura,Y.et al,Nucl.Acids Res.,28,292(2000))中公开了各种生物体中的密码子的频率。
此外，还可以通过扩增增加基因表达的调节子，或者减少或弱化降低基因表达的调节子来增加基因的表达。
如上文所述的用于增加基因表达的此类方法可以独立使用或以任意组合使用。
此外，增加蛋白质活性的修饰也可以通过例如增强酶的比活性来实现。比活性的增强还包括对反馈抑制的脱敏。也就是说，当蛋白质受到代谢物的反馈抑制时，可以通过突变选择的宿主中的基因或蛋白质以对反馈抑制脱敏来增加蛋白质的活性。在本发明中，除非另有说明，术语“对反馈抑制脱敏”包括反馈抑制的完全消除和反馈抑制的减弱。此外，短语“对反馈抑制脱敏”，即反馈抑制被消除或减弱，也可以称为“对反馈抑制耐受”。可以通过例如搜索各种生物体来获得显示增强的比活性的蛋白质。此外，通过在现有蛋白质中引入突变，也可以获得高活性型的现有蛋白质。要引入的突变可以是例如在蛋白质的一个或几个位置上的一个或几个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加。可以通过例如如上文提及的此类位点特异性突变方法引入突变。突变也可以通过例如诱变处理来引入。诱变处理的实例包括X射线照射、紫外线照射和使用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)、甲磺酸乙酯(EMS)和甲磺酸甲酯(MMS)等突变剂的处理。此外，可以通过用羟胺在体外直接处理DNA来诱导随机突变。可以独立地使用比活性的增强，或者可以与如上文所述的用于增强基因表达的此类方法以任意组合使用。
转化方法没有特别限定，并且可以使用常规已知的方法。可以使用例如用氯化钙处理受体细胞以增加其对DNA的通透性的方法，其已经报告用于大肠杆菌K-12菌株(Mandel,M.and Higa,A.,J.Mol.Biol.,1970,53,159-162)，以及从生长阶段的细胞中制备感受态细胞，随后用DNA转化的方法，其已经报告用于枯草芽孢杆菌(Duncan,C.H.,Wilson,G.A.and Young,F.E.,Gene,1977,1:153-167)。或者，还可以使用将DNA受体细胞制成原生质体或原生质球(其可以容易地摄取重组DNA)，然后将重组DNA引入DNA受体细胞中的方法，已知其适用于枯草芽孢杆菌、放线菌和酵母(Chang,S.and Choen,S.N.,1979,Mol.Gen.Genet.,168:111-115；Bibb,M.J.,Ward,J.M.and Hopwood,O.A.,1978,Nature,274:398-400；Hinnen,A.,Hicks,J.B.and Fink,G.R.,1978,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,75:1929-1933)。此外，还可以使用针对棒状杆菌细菌报告的电脉冲方法(日本专利公开(Kokai)号2-207791)。
可以通过测量蛋白质的活性来确认蛋白质的活性的增加。
通过确认编码蛋白质的基因的表达增加也可以确认蛋白质的活性的增加。可以通过确认基因的转录量的增加或通过确认从该基因表达的蛋白质的量的增加来确认基因表达的增加。
可以通过比较从基因转录的mRNA与未修饰菌株如野生型菌株或亲本菌株的mRNA的量来确认基因的转录量的增加。用于评估mRNA量的方法的实例包括Northern杂交、RT-PCR、微阵列、RNA-seq等(Sambrook,J.,et al.,Molecular Cloning A LaboratoryManual/Third Edition,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor(USA),2001)。mRNA的量可以增加到例如未修饰菌株的mRNA量的1.2倍或更多、1.5倍或更多、2倍或更多、或3倍或更多。
可以通过使用抗体的Western印迹法(Molecular Cloning,Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor(USA),2001)来确认蛋白质量的增加。蛋白质的量(如每细胞的蛋白质的分子数)可以增加到例如未修饰菌株的蛋白质的量的1.2倍或更多、1.5倍或更多、2倍或更多、或3倍或更多。
除增强3-PGDH活性以外，用于增强蛋白质活性的上述方法可用于增强任意蛋白质如目标物质生物合成酶，磷酸泛酰巯基乙胺化酶，和物质的摄取系统的活性，以及增强任何基因例如编码那些任意蛋白质的基因的表达。
<1-4>降低蛋白质活性的方法
以下，将说明降低蛋白质例如AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶和L-丝氨酸脱氨酶的活性的方法。
表述“蛋白质的活性降低”表示相比于未修饰菌株即相比于未修饰的微生物的菌株，蛋白质的活性降低。具体地说，短语“蛋白质的活性降低”可以表示与未修饰菌株相比，每细胞的蛋白质的活性降低。本文使用的术语“未修饰菌株”或“未修饰微生物的菌株”是指未被修饰以使得目标蛋白的活性降低的对照菌株。未修饰菌株的实例可以包括野生型菌株和亲本菌株。未修饰菌株的具体实例包括微生物物种的相应菌株。未修饰菌株的具体实例还包括上文关于微生物描述示例的菌株。也就是说，在一个实施方案中，与类型菌株即本文所述的微生物所属物种的类型菌株相比，蛋白质的活性可以降低。在另一个实施方案中，与谷氨酸棒状杆菌ATCC 13869菌株相比，蛋白质的活性也可以降低。在另一个实施方案中，与谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032菌株相比，蛋白质的活性也可以降低。在另一个实施方案中，与大肠杆菌K-12MG1655菌株相比，蛋白质的活性也可以降低。短语“蛋白质的活性降低”也包括蛋白质的活性完全消失。更具体地，短语“蛋白质的活性降低”可以意味着与未修饰菌株相比，每细胞的蛋白质的分子数目减少，和/或蛋白质的每分子的功能降低。也就是说，短语“蛋白质的活性降低”中的术语“活性”不限于蛋白质的催化活性，而是也可以指编码蛋白质的基因的转录量(即mRNA的量)或编码蛋白质的基因的翻译量(即蛋白质的量)。短语“每细胞的蛋白质分子的数目减少”也包括蛋白质完全不存在。“蛋白质的每分子的功能降低”也包括每个蛋白质分子的功能完全消失。蛋白质活性降低的程度没有特别限制，只要与未修饰菌株相比活性降低即可。蛋白质的活性可以降低至未修饰菌株的活性的例如50％或更少，20％或更少，10％或更少，5％或更少或0％。
用于降低蛋白质活性的修饰可以通过例如降低编码蛋白质的基因的表达来实现。表述“基因的表达降低”可以表示与未修饰菌株例如野生型菌株和亲本菌株相比，基因的表达降低。具体而言，短语“基因的表达降低”可以表示与未修饰菌株相比，每细胞的基因的表达降低。更具体地，短语“基因的表达降低”可以表示基因的转录量(即mRNA的量)降低，和/或基因的翻译量(即从基因表达的蛋白质的量)降低。短语“基因的表达降低”也包括基因完全不表达。“基因的表达降低”也称为“基因的表达减弱”。基因的表达可以降低至例如未修饰菌株的表达的50％或更少，20％或更少，10％或更少，5％或更少或0％。
基因表达的降低可以是由于例如转录效率的降低、翻译效率的降低或它们的组合。可以通过修饰基因的表达控制序列，如启动子、Shine-Dalgarno(SD)序列(也称为核糖体结合位点(RBS))、以及基因的RBS和起始密码子之间的间隔区来降低基因的表达。当修饰表达控制序列时，修饰表达控制序列的一个或多个核苷酸，两个或更多个核苷酸，或三个或更多个核苷酸。例如，可以通过用较弱的启动子替换染色体上基因的启动子来降低基因的转录效率。术语“较弱的启动子”可以表示与基因的固有的野生型启动子相比，提供基因的减弱转录的启动子。较弱启动子的实例可以包括例如诱导型启动子。也就是说，诱导型启动子可以在非诱导条件下起作为较弱的启动子作用，例如不存在相应的诱导物的情况下。较弱的启动子的实例还可以包括例如P4和P8启动子(分别为SEQ ID NO:109的位置872-969和SEQ ID NO:110的位置901-1046)。此外，可以缺失表达控制序列的部分或全部。也可以通过例如操纵负责表达控制的因子来降低基因的表达。负责表达控制的因子的实例可以包括负责转录或翻译控制的低分子(例如诱导物、抑制物等)、负责转录或翻译控制的蛋白质(例如转录因子等)、负责转录或翻译控制的核酸(例如siRNA等等)，等等。此外，还可以通过例如将降低基因表达的突变引入基因的编码区来降低基因的表达。例如，可以通过用宿主中较不常使用的同义密码子替换基因的编码区中的密码子来降低基因的表达。此外，例如如本文所述，基因的表达可以由于基因的破坏而降低。
用于降低蛋白质活性的修饰也可以通过例如破坏编码蛋白质的基因来实现。短语“基因破坏”可以表示基因被修饰成不产生正常发挥功能的蛋白质。短语“不产生正常发挥功能的蛋白质”包括蛋白质完全不从基因产生，以及从基因产生每分子的功能(如活性或性质)被降低或消除的蛋白质。
可以通过例如缺失染色体上的基因来实现基因的破坏。术语“基因的缺失”是指缺失基因的编码区的部分或全部区域。此外，可以缺失整个基因，包括染色体上的基因编码区上游和下游的序列。要缺失的区域可以是任何区域，例如N端区域(即编码蛋白质的N端区域的区域)、内部区域或C端区域(即编码蛋白质的C端区域的区域)，只要能降低蛋白质的活性。较长区域的缺失通常可以更可靠地使基因失活。要缺失的区域可以是例如基因的编码区的总长度的10％或更多、20％或更多、30％或更多、40％或更多、50％或更多、60％或更多、70％或更多、80％或更多、90％或更多、或95％或更多。此外，优选要缺失的区域的上游和下游的序列的阅读框是不相同的。阅读框的不一致可以导致要缺失的区域下游的移码。
也可以通过例如对染色体上基因的编码区引入氨基酸取代(错义突变)、终止密码子(无义突变)、一个或两个核苷酸残基的添加或缺失(移码突变)等等的突变来实现基因的破坏(Journal of Biological Chemistry,272:8611-8617(1997)；Proceedings of theNational Academy of Sciences,USA,95 5511-5515(1998)；Journal of BiologicalChemistry,26 116,20833-20839(1991))。
基因的破坏也可以通过例如将另一个核苷酸序列插入染色体上的基因的编码区中来实现。插入位点可以位于基因的任何区域中，并且较长核苷酸序列的插入通常可以更可靠地使基因失活。优选插入位点上游和下游的序列的阅读框是不相同的。阅读框不一致可以导致要缺失的区域下游的移码。其它核苷酸序列没有特别限定，只要选择减少或消除编码的蛋白质的活性的序列，并且其实例可以包括例如标志物基因，如抗生素抗性基因，以及可用于生产目标物质的基因。
特别地，可以进行基因的破坏，使得编码的蛋白质的氨基酸序列缺失。换句话说，降低蛋白质活性的修饰可以通过例如缺失蛋白质的氨基酸序列来实现，特别是修饰基因以使得所述基因编码缺失氨基酸序列的蛋白质。短语“蛋白质的氨基酸序列的缺失”可以指蛋白质的氨基酸序列的部分或全部区域的缺失。另外，短语“蛋白质的氨基酸序列的缺失”可以指初始氨基酸序列在蛋白质中消失，且还包括将初始氨基酸序列改变为另一个氨基酸序列的情况。也就是说，例如，通过移码改变为另一个氨基酸序列的区域可以认为是缺失的区域。当蛋白质的氨基酸序列缺失时，蛋白质的总长度通常缩短，但是也可以存在蛋白质的总长度不变或延长的情况。例如，通过缺失基因的编码区域的部分或全部区域，可以在编码的蛋白质中缺失由缺失区域编码的区域。此外，例如，通过在基因的编码区域引入终止密码子，可以在编码的蛋白质中缺失导入位点的下游区域编码的区域。此外，例如，通过在基因的编码区域中的移码，可以在编码的蛋白质中缺失由移码区域编码的区域。关于缺失基因时要缺失的区域的位置和长度的上述描述可以加以必要的修改适用于在蛋白质的氨基酸序列的缺失中要缺失的区域的位置和长度。
如上所述的染色体上基因的此类修饰可以通过如下获得，例如制备破坏型基因，所述破坏型基因经修饰而使得其不能产生正常发挥功能的蛋白质，并用含有破坏型基因的重组DNA转化宿主，以引起破坏型基因与染色体上野生型基因之间的同源重组，从而用破坏型基因替换染色体上的野生型基因。在该方法中，若根据宿主的特征如营养缺陷型选择的标志物基因包括在重组DNA中，则操作变得更容易。破坏型基因的实例可以包括缺失编码区的部分或全部区域的基因、包含错义突变的基因、包含无义突变的基因、包含移码突变的基因、以及引入了插入序列如转座子或标志物基因的基因。由破坏型基因编码的蛋白质即便产生也具有与野生型蛋白质不同的构象，因此其功能减少或消除。已经建立了基于使用同源重组的基因取代的此类基因破坏，并且存在使用线性DNA的方法，如称为“Red驱动整合”的方法(Datsenko,K.A,and Wanner,B.L.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,97:6640-6645(2000))，以及与源自λ噬菌体的切除系统组合利用Red驱动整合的方法(Cho,E.H.,Gumport,R.I.,Gardner,J.F.,J.Bacteriol.,184:5200-5203(2002))(参见WO2005/010175)、使用具有温度敏感复制起点的质粒的方法、使用能够接合转移的质粒的方法、使用不具有在宿主中发挥功能的复制起点的自杀载体的方法(美国专利号6,303,383，日本专利公开(Kokai)号05-007491)等等。
降低蛋白质活性的修饰也可以通过例如诱变处理来实现。诱变处理的实例包括X射线或紫外线的照射和用N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)、甲磺酸乙酯(EMS)和甲磺酸甲酯(MMS)等突变剂进行处理。
如上文提及的用于降低蛋白质的活性的此类方法可以独立地或以任意组合使用。
当蛋白质作为由多个亚基组成的复合物发挥功能时，可以修饰多个亚基的部分或全部，只要蛋白质的活性最终降低即可。也就是说，例如，可以破坏编码各个亚基的多个基因的部分或全部，等等。此外，当存在蛋白质的多种同功酶时，可以减少多种同功酶的部分或全部活性，只要蛋白质的活性最终降低即可。也就是说，例如，可以破坏编码各个同功酶的多个基因的部分或全部等等。
可以通过测量蛋白质的活性来确认蛋白质活性的降低。
也可以通过确认编码蛋白质的基因的表达的降低来确认蛋白质的活性的降低。可以通过确认基因的转录量的减少或从该基因表达的蛋白质量的减少来确认基因表达的降低。
可以通过比较从基因转录的mRNA量与未修饰菌株的mRNA量来确认基因的转录量的降低。用于评估mRNA量的方法的实例包括Northern杂交、RT-PCR、微阵列、RNA-seq等(Molecular Cloning,Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor(USA),2001)。mRNA的量可以降低至未修饰菌株的量的例如50％或更少，20％或更少，10％或更少，5％或更少，或0％。
可以通过使用抗体的Western印迹法(Molecular Cloning,Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor(USA)2001)来确认蛋白质量的降低。蛋白质的量(如每细胞的蛋白质的分子数)可以降低至未修饰的菌株的例如50％或更少，20％或更少，10％或更少，5％或更少，或0％。
根据用于破坏的手段，可以通过确定基因的部分或全部的核苷酸序列、基因的限制酶图谱、全长等来确认基因的破坏。
除了减弱AICAR甲酰基转移酶/IMP环化水解酶活性或L-丝氨酸脱氨酶活性外，以上所述的降低蛋白质的活性的方法可以适用于降低任意蛋白质例如副产物生成酶的活性，以及降低任意基因例如编码那些任意蛋白质的基因的表达。
<2>生产目标物质的方法
本文所述的方法是通过使用本文所述的微生物来生产目标物质的方法。
<2-1>发酵方法
可以通过例如本文所述的微生物的发酵来生产目标物质。也就是说，本文所述的方法的实施方案可以是通过微生物的发酵来生产目标物质的方法。该实施方案也可以称为“发酵方法”。另外，通过微生物的发酵来生产目标物质的步骤也可以称为“发酵步骤”。
可以通过培养本文所述的微生物来实施发酵步骤。特别地，在发酵方法中，可以从碳源生产目标物质。也就是说，发酵步骤可以是例如在培养基例如含有碳源的培养基中培养微生物以在培养基中生产并积累目标物质的步骤。也就是说，发酵方法可以是生产目标物质的方法，其包括在培养基例如含有碳源的培养基中培养微生物以在培养基中生产并积累目标物质的步骤。另外，换句话说，发酵步骤可以是例如通过使用微生物从碳源生产目标物质的方法。
使用的培养基没有特别限制，只要本发明的微生物能在其中增殖并且生产目标L-氨基酸。作为培养基，例如可以使用用于培养微生物例如细菌和酵母的常见培养基。培养基可以含有碳源、氮源、磷源和硫源，以及根据需要的其它培养基组分例如根据需要的各种有机组分和无机组分。培养基组分的类型和浓度可以根据各种条件例如选择的微生物的类型适当确定。
碳源没有特别限制，只要微生物能够利用它并生产目标物质。碳源的具体实例可以包括糖，例如葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、赤糖糊(blackstrapmolasses)、淀粉的水解产物和生物质的水解产物；有机酸例如如乙酸、柠檬酸、琥珀酸和葡糖酸；醇例如乙醇、甘油和粗制甘油，以及脂族酸。作为碳源，特别可以使用植物来源的材料。植物的实例可以包括例如玉米、稻、小麦、大豆、甘蔗、甜菜和棉。植物来源的材料的实例可以包括例如根、茎、树干、枝、叶、花和种子等器官，包括它们的植物体以及这些植物器官的分解产物。植物来源的材料在其使用时的形式没有特别限制，并且它们可以以任何形式，如未加工的产品、果汁、研磨产物和纯化产物使用。戊糖如木糖、己糖如葡萄糖、或它们的混合物可以从例如植物生物质获得并使用。特别地，这些糖可以通过对植物生物质进行处理，如蒸汽处理、用浓酸水解、用稀酸水解、用酶如纤维素酶进行水解、和碱处理而得到。由于半纤维素通常比纤维素更易水解，植物生物质中的半纤维素可以预先水解以释放戊糖，然后纤维素可被水解以产生己糖。此外，可以通过从己糖转化来提供木糖，例如通过对本发明的细菌赋予将己糖如葡萄糖转化为木糖的途径进行。作为碳源，可以使用一种碳源，或者可以组合使用两种或更多种的碳源。
培养基中的碳源的浓度没有特别限制，只要微生物能够增殖并生产目标物质。培养基中碳源的浓度可以尽可能高，并且在不抑制目标物质生产的范围内。培养基中碳源的初始浓度可以为例如5至30％(w/v)或10至20％(w/v)。此外，可以根据需要将碳源添加到培养基中。例如，可以与伴随发酵进程的碳源的减少或消耗将碳源成比例地添加到培养基中。虽然碳源可以暂时耗尽，只要最终可以生产目标物质，但优选进行培养以使碳源不耗尽或碳源不持续耗尽。
氮源的具体实例可以包括例如铵盐例如硫酸铵、氯化铵和磷酸铵；有机氮源例如蛋白胨、酵母提取物、肉提取物、大豆蛋白质分解产物、氨和脲。用于pH调节的氨气或氨水也可以用作氮源。作为氮源，可以使用一种氮源，或者可以组合使用两种或更多种氮源。
磷酸源的具体实例可以包括例如磷酸盐例如磷酸二氢钾和磷酸氢二钾，和磷酸聚合物例如焦磷酸。作为磷酸源，可以使用一种磷酸源，也可以组合使用两种或更多种磷酸源。
硫源的具体实例可以包括例如无机硫化合物例如硫酸盐、硫代硫酸盐和亚硫酸盐和含硫氨基酸例如半胱氨酸、胱氨酸和谷胱甘肽。作为硫源，乐意使用一种硫源，或者可以组合使用两种或更多种硫源。
其它的各种有机成分及无机成分的实例包括例如无机盐例如氯化钠和氯化钾；微量金属例如铁、锰、镁和钙；维生素例如维生素B1、维生素B2、维生素B6、烟酸、烟酸酰胺和维生素B12；氨基酸；核酸；和含有这些的有机组分例如蛋白胨、酪蛋白氨基酸、酵母提取物和大豆蛋白质分解物。作为其它各种有机成分及无机成分，可以使用一种成分，也可以组合使用两种或更多种成分。
此外，当使用需要营养物例如氨基酸实现其生长的营养缺陷型突变体时，培养物可以优选含有所需的营养物。此外，培养基可以含有用于生产目标物质的组分。此类组分的具体实例可以包括例如甲基供体例如SAM及其前体例如甲硫氨酸。
培养条件没有特别限制，只要微生物可以增殖，并且生产目标物质。培养可以例如在用于微生物例如细菌和酵母培养的常规条件下进行。培养条件可以根据各种条件例如选择的微生物的类型等适当确定。
培养可以通过使用液体培养基进行。在培养时，例如在固体培养基如琼脂培养基上培养的微生物可以直接接种到液体培养基中，或者可以将液体培养基中培养的微生物作为种子培养物接种到液体培养基用于主培养。也就是说，培养可以作为种子培养和主培养分开进行。在此类情况下，种子培养和主培养的培养条件可以相同或可以不同。至少在主培养期间生产目标物质是足够的。在培养开始时培养基中存在的微生物的量没有特别限制。例如，在培养开始时，可以将0.1至100质量％或1至50质量％的显示4至100的OD660的种子培养液接种到培养基中用于主培养。
培养可以以分批培养、补料分批培养、连续培养或这些的组合进行。在培养开始时使用的培养基也可以称为“起始培养基”。在补料分批培养或连续培养中供应到培养系统(例如发酵罐)的培养基也可以称为“补料培养基”。此外，为了在补料分批培养或连续培养中向培养系统添加补料培养物也可以称为“补料”。此外，当培养作为种子培养和主培养独立进行时，种子培养和主培养的方案可以相同或不同。例如，种子培养和主培养两者可以都作为分批培养进行。或者，例如种子培养可以作为分批培养进行，并且主培养可以作为补料分批培养或连续培养进行。
各种组分例如碳源可以存在于起始培养基、补料培养基或二者中。也就是说，各种组分例如碳源在培养期间可以独立或以任意组合添加到培养基。这些组分可以添加一次或多次，或可以连续添加。存在于起始培养基中的组分的类型可以与存在于补料培养基中的组分的类型相同或不同。此外，存在于起始培养基中的组分的浓度可以与存在于补料培养基中的组分的浓度相同或不同。此外，可以使用含有不同类型和/或不同浓度的组分的两种或更多种补料培养基。例如，当补料间歇进行两次或更多次时，对于每次补料存在于补料培养基中的组分的类型和/或浓度可以相同或不同。
培养可以在例如需氧条件下进行。术语“需氧条件”可以指培养基中的溶解氧浓度为0.33ppm或更高，或者1.5ppm或更高。氧浓度可以控制为例如饱和氧浓度的1至50％，或约5％。可以例如通气或振荡进行培养。培养基的pH可以是例如3至10，或4.0至9.5。在培养过程中，可以根据需要调节培养基的pH值。可以通过使用各种碱性物质和酸性物质例如氨气、氨水、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾、碳酸镁、氢氧化钠、氢氧化钙和氢氧化镁来调节培养基的pH。培养温度可以是例如20-45℃，或25-37℃。培养时间可以是例如10-120小时。培养可以继续进行，例如，直到培养基中所含的碳源被消耗，或直到微生物失去活性。
通过在上述此类条件培养微生物，在培养基中积累目标物质。
可以通过用于检测或鉴定化合物的已知方法可以确认目标物质的生产。此类方法的实例可以包括例如HPLC、LC/MS、GC/MS和NMR。这些方法可以独立使用，或者可以适当组合使用。这些方法还可以用于确定培养基中存在的各种组分的浓度。
可以适当收集生产的目标物质。也就是说，发酵方法可以进一步包括收集目标物质的步骤。该步骤也可以称为“收集步骤”。收集步骤可以是从培养液中，特别是从培养基中收集目标物质的步骤。目标物质可以通过用于分离和纯化化合物的已知方法收集。此类方法的实例可以包括例如离子交换树脂法，膜处理，沉淀，萃取，蒸馏和结晶。目标物质可以特别通过用有机溶剂例如乙酸乙酯萃取或通过蒸汽蒸馏收集。这些方法可以独立使用，或者可以以适当的组合使用。
此外，当目标物质在培养基中沉淀时，可以通过例如离心或过滤来收集它。培养基中沉淀的目标物质和溶解在培养基中的目标物质可以在溶解在培养基中的目标物质结晶后一起分离。
除了目标物质之外，所收集的目标物质可以含有其它组分，例如微生物细胞，培养基组分，水分和副产物代谢物。收集的目标物质的纯度可以是例如30％(w/w)或更高，50％(w/w)或更高，70％(w/w)或更高，80％(w/w)或更高，90％(w/w)或更高，或95％(w/w)或更高。
<2-2>生物转化方法
目标物质也可以通过例如使用本文所述的微生物进行生物转化来生产。也就是说，如本文所述的方法的另一个实施方案可以是通过使用微生物进行生物转化来生产目标物质的方法。该实施方案也可以称为“生物转换方法”。另外，通过使用微生物的生物转化来生产目标物质的步骤也可称为“生物转化步骤”。
具体而言，在生物转化方法中，可以从目标物质的前体生产目标物质。更具体而言，在生物转化方法中，可以通过使用微生物将目标物质的前体转化为目标物质来生产目标物质。也就是说，生物转化步骤可以是通过使用微生物将目标物质的前体转化为目标物质的步骤。
目标物质的前体也可以简称为“前体”。前体的实例可以包括其转化成目标物质需要SAM的物质。前体的具体实例可以包括目标物质的生物合成途径的中间体，例如关于目标物质生物合成酶的描述中所述的那些中间体，条件是中间体转化为目标物质需要SAM。前体的更具体实例可以包括例如原儿茶酸、原儿茶醛、L-色氨酸、L-组氨酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-精氨酸、L-鸟氨酸和甘氨酸。原儿茶酸可以用作生产例如香草醛，香草酸或愈创木酚的前体。原儿茶醛可以用作生产例如香草醛的前体。L-色氨酸可以用作产生例如褪黑激素的前体。L-组氨酸可以用作产生例如麦角硫因的前体。L-苯丙氨酸和L-酪氨酸各自可以用作生产例如阿魏酸，4-乙烯基愈创木酚或4-乙基愈创木酚的前体。L-精氨酸和L-鸟氨酸各自可以用作生产例如多胺的前体。L-精氨酸和甘氨酸各自可以用作生产例如肌酸的前体。作为前体，可以使用一种前体，或者可以组合使用两种或更多种前体。在前体是可以形成盐的化合物的情况下，前体可以作为游离化合物，其盐或其混合物使用。也就是说，除非另有说明，术语“前体”可以指游离形式的前体，其盐或其混合物。盐的实例可以包括例如硫酸盐，盐酸盐，碳酸盐，铵盐，钠盐和钾盐。作为前体的盐，可以使用一种盐，或者可以组合使用两种或更多种盐。
作为前体，可以使用商业产品，或者可以使用适当制备和获得的产品。也就是说，生物转化方法可以进一步包括生产前体的步骤。生产前体的方法没有特别限制，并且可以使用例如已知的方法。可以通过例如化学合成法，酶法，生物转化法，发酵法，提取法或它们的组合来生产前体。也就是说，例如，可以使用催化进一步的前体转化为目标物质的前体的酶将其进一步的前体转化为目标物质的前体，该酶也可以称为“前体生物合成酶”。此外，例如可以通过使用具有前体生产能力的微生物从碳源或其进一步的前体生产目标物质的前体。短语“具有前体生产能力的微生物”可以指能够从碳源或其进一步的前体生成目标物质的前体的微生物。例如，根据酶法或生物转化法生产原儿茶酸的方法的实例可以包括使用恶臭假单胞菌KS-0180(日本专利公开(Kokai)号7-75589)将对甲基酚转化成原儿茶酸的方法，使用依赖NADH的对羟基苯甲酸羟化酶将对羟基苯甲酸转化为原儿茶酸的方法(日本专利公开(Kokai)号5-244941)，通过在含有对苯二甲酸的培养基中培养转化体来制备原儿茶酸的方法，所述转化体具有参与从对苯二甲酸生成原儿茶酸的反应的基因(日本专利公开(Kokai)号2007-104942)，和通过使用具有原儿茶酸生产能力并具有降低的原儿茶酸5-氧化酶活性或在该活性中缺陷的微生物，从其前体生产原儿茶酸的方法(日本专利公开(Kokai)号2010-207094)。此外，通过发酵生产原儿茶酸的方法的实例可以包括通过使用短杆菌属的细菌和乙酸作为碳源生产原儿茶酸的方法(日本专利公开(Kokai)号50-89592)通过使用引入编码3-二氢莽草酸脱氢酶的基因的埃希氏菌属或克雷伯氏菌属细菌和葡萄糖作为碳源生产原儿茶酸的方法(美国专利号5,272,073)。此外，原儿茶醛可以通过使用原生儿茶酸作为前体根据使用ACAR的酶方法或使用具有ACAR的微生物的生物转化方法来生产。生产的前体可以以其本身用于生物转化方法，或者根据需要进行适当的处理如浓缩、稀释、干燥、溶解、分级、提取和纯化后使用。也就是说，作为前体例如可以使用纯化至所需程度的纯化产品，或者可以使用含有前体的材料。含有前体的材料没有特别限制，只要微生物可以使用该前体。含有前体的材料的具体实例可以包括通过培养具有前体生产能力的微生物获得的培养液，从培养液分离出的培养上清液及其加工产品例如浓缩产品如其浓缩液体，及其干燥产品。
在一个实施方案中，生物转化步骤可以通过例如培养如本文所述的微生物进行。该实施方案也可以称为“生物转换方法的第一实施方案”。也就是说，生物转化步骤可以是例如在含有目标物质的前体的培养基中培养微生物以将前体转化为目标物质的步骤。生物转化步骤具体可以是在含有目标物质的前体的培养基中培养微生物以在培养基中生成并积累目标物质的步骤。
使用的培养基没有特别限制，只要培养基含有目标物质的前体，并且微生物能够在其中增殖并生产目标物质。培养条件没有特别限制，只要微生物能够增殖并且生产目标物质。关于发酵方法中提及的培养的描述，例如关于培养基和培养条件的描述，可以加以必要的修改适用于生物转化方法的第一实施方案中的培养，除了在第一实施方案中培养基含有前体。
前体可以在整个培养期间存在于培养基中，或者可以仅在培养的部分时期存在于培养基中。也就是说，“在含有前体的培养基中培养微生物”并不一定意味着前体在培养的整个过程中存在于培养基中。例如，从培养开始，前体可以存在或不存在于培养基中。当在培养开始时前体不存在于培养基中时，在培养开始后将前体添加到培养基中。添加的时机可根据各种条件例如培养周期适当确定。例如，在微生物充分生长后，可以将前体添加到培养基中。此外，在任何情况下，可以根据需要将前体添加到培养基中。例如，前体可以与伴随目标物质生成的前体减少或消耗成比例地添加到培养基中。将前体添加到培养基中的方法没有特别的限制。例如，可以通过将含有前体的补料培养基补料到培养基中来将前体添加到培养基中。此外，例如可以将本文所述的微生物和具有前体生产能力的微生物共培养，以使具有前体生产能力的微生物在培养基中生产前体，从而将前体添加培养基中。对于短语“将组分添加到培养基”，所述的“组分”可以包括在培养基中生成或再生成的组分。这些添加方法可以独立使用，或者可以适当组合使用。培养基中的前体的浓度没有特别限制，只要微生物能够使用前体作为目标物质的原料。培养基中的前体的浓度例如可以是以游离化合物的重量计0.1g/L或更高、1g/L或更高、2g/L或更高、5g/L或更高、10g/L更高，或者15g/L或更高，或者可以是200g/L或更低、100g/L或更低、50g/L或更低，或者20g/L或更低，或者可以在其组合限定的范围内。在整个培养周期内，前体可以以或者不以上述范围内的浓度存在于培养基中。例如，在培养开始时前体可以以上述范围内的浓度存在于培养基中，或者可以在培养开始后将其加入到培养基中使得达到以上例示的范围内的浓度。当培养作为种子培养和主培养独立进行时，至少在主培养期间生产目标物质就足够了。因此，至少在主培养期间，即在主培养的整个周期或在主培养的部分周期，前体存在于培养基中就足够了，也就是说，在种子培养期间前体可以存在或不存在于于培养基中。在此类情况下，关于培养的术语例如“培养周期(培养的周期)”和“培养的开始”可以理解为与主培养有关。
在另一个实施方案中，生物转化步骤也可以通过例如使用本文所述的微生物的细胞进行。该实施例也可以被称为“生物转换方法的第二实施方案”。也就是说，生物转化步骤可以是例如通过使用微生物的细胞将反应混合物中的目标物质的前体转化为目标物质的步骤。生物转化步骤特别可以是允许微生物的细胞作用于反应混合物中的目标物质的前体以在反应混合物中生成并积累目标物质的步骤。通过使用此类细胞进行的生物转化步骤也可以被称为“转化反应”。
可以通过培养微生物来获得微生物的细胞。用于获得细胞的培养方法没有特别限制，只要微生物能够增殖。在用于获得细胞的培养时，前体可以存在或不存在于培养基中。另外，在用于获得细胞的培养时，可以在培养基中生产或不生产目标物质。关于发酵方法中提及的培养的描述，例如关于培养基和培养条件的描述，可以加以必要的修改适用于生物转化方法的第二实施方案中用于获得细胞的培养。
细胞可以存在于培养液(特别是培养基)中，或者从培养液(特别是培养基)中收集后用于转化反应。细胞也可以在根据需要进行处理后用于转化反应。也就是说，细胞的实例可以包括含有细胞的培养液，从培养液中收集的细胞及其加工产品。换句话说，细胞的实例可以包括存在于微生物培养液中的细胞，从培养液中收集的细胞，或存在于其加工产品中的细胞。加工产品的实例可以包括通过对细胞进行处理而获得的产品。加工产品的具体实例可以包括通过对含有细胞的培养液进行处理，或对从培养液中收集的细胞进行处理而获得的产品。这些形式的细胞可以独立使用，或者可以以适当的组合使用。
从培养基中收集细胞的方法没有特别限制，例如可以使用已知的方法。此类方法的例子可以包括例如自发沉淀，离心和过滤。也可以使用絮凝剂也。这些方法可以独立使用，或者可以以适当的组合使用。收集的细胞可以根据需要通过使用合适的介质进行洗涤。收集的细胞可以根据需要通过使用适当的介质重新悬浮。可用于洗涤或悬浮细胞的介质的实例可以包括例如水性介质(水性溶剂)例如水和水性缓冲液。
细胞处理的实例可包括例如稀释，冷凝，固定化在载体如丙烯酰胺和角叉菜胶上，冷冻和解冻处理，以及增加细胞膜渗透性的处理。例如，可以通过使用表面活性剂或有机溶剂来增加细胞膜的渗透性。这些处理可以独立使用，或者可以以适当的组合使用。
用于转化反应的细胞没有特别限制，只要细胞具有目标物质生产能力。优选细胞保持其代谢活性。短语“细胞保持其代谢活性”可以表示细胞具有利用碳源来生成或再生成生产目标物质所需的物质的能力。此类物质的实例可以包括例如ATP，电子供体例如NADH和NADPH，以及甲基供体例如SAM。细胞可以具有或不具有增殖能力。
可以在适当的反应混合物中进行转化反应。特别地，转化反应可以通过使细胞和前体共存于适当的反应混合物中来进行。转化反应可以通过分批方法进行或可以通过柱方法(column method)进行。在分批方法的情况下，转化反应可以通过例如在存在于反应容器的反应混合物中将微生物的细胞与前体混合来进行。转化反应可以静态进行，或者可以在搅拌或摇动反应混合物的情况下进行。在柱方法的情况下，转化反应可以通过例如使含有前体的反应混合物通过填充有固定化细胞的柱来进行。反应混合物的实例可以包括基于水性介质(水性溶剂)例如水和水性缓冲液的那些。
除了前体之外，反应混合物可以根据需要含有除前体之外的组分。作为前体之外的成分的实例可以包括ATP、电子供体例如NADH和NADPH、甲基供体例如SAM、金属离子、缓冲剂、表面活性剂、有机溶剂、碳源、磷酸盐源等各种培养基成分。也就是说，例如含有前体的培养基也可以用作反应混合物。也就是说，关于生物转化方法的第一实施方案中提及的有关培养基的描述也可以加以必要的修改适用于转化方法的第二实施方案中的反应混合物。存在于反应混合物中的组分的类型和浓度可以根据各种条件来确定，例如使用的前体的类型和使用的细胞的形式。
转化反应的条件，例如溶解氧浓度，反应混合物的pH，反应温度，反应时间，各种组分的浓度等没有特别限制，只要生成目标物质。转化反应可以用例如用于使用微生物细胞例如静止细胞进行物质转化的典型条件进行。转化反应的条件可以根据各种条件如选择的微生物的类型来确定。转化反应可以例如在需氧条件下进行。术语“需氧条件”可以指其中反应混合物中的溶解氧浓度为0.33ppm或更高，或者1.5ppm或更高。可以将氧浓度控制为例如饱和氧浓度的1至50％或约5％。反应混合物的pH可以是例如典型地6.0至10.0，或6.5至9.0。反应温度可以是例如典型地15至50℃，15至45℃或20至40℃。反应时间可以是例如5分钟至200小时。在柱方法的情况下，反应混合物的加载速率可以是例如使得反应时间落入上述例示的反应时间范围内的速率。此外，转化反应也可以在例如培养条件下进行，例如用于微生物例如细菌和酵母的培养的典型条件。在转化反应期间，细胞可以增殖或可以不增殖。也就是说，关于生物转化方法的第一实施方案的培养条件的描述也可以加以必要的修改适用于生物转化方法的第二实施方案中的转化反应的条件，除了在第二实施方案中细胞可以增殖或可以不增殖。在此类情况下，用于获得细胞的培养条件和转化反应的条件可以相同或不同。反应混合物中的前体的浓度例如可以是以游离化合物的重量计0.1g/L或更高、1g/L或更高、2g/L或更高、5g/L或更高、10g/L更高，或者15g/L或更高，或者可以是200g/L或更低、100g/L或更低、50g/L或更低，或者20g/L或更低，或者可以在其组合限定的范围内。反应混合物中的细胞的密度例如可以是就600nm处的光密度(OD)而言1或更高，或者可以是300或更低，或者可以在其组合限定的范围内。
在转化反应期间，可以将细胞，前体和其它组分独立地或以其任何任意组合添加到反应混合物中。例如，前体可以与伴随生产目标物质的前体的减少或消耗成比例地添加到反应混合物中。这些组分可以添加一次或多次，或者可以连续添加。
用于向反应混合物中添加各种组分例如前体的方法没有特别限制。这些组分各自可以通过例如直接将它们加入到反应混合物中而加入到反应混合物中。此外，例如，可以将本文所述的微生物和具有前体生产能力的微生物共培养，以允许具有前体生产能力的微生物在反应混合物中生产前体，从而将前体添加至反应混合物。此外，例如，组分例如ATP，电子供体和甲基供体可以在反应混合物中生成或再生，可以在微生物的细胞中生成或再生，或者可以通过不同细胞之间的偶联反应生成或再生。例如，当微生物的细胞保持其代谢活性时，它们可以通过使用碳源在它们内部生成或再生组分例如ATP，电子供体和甲基供体。例如，特别地，微生物可以具有增强的生成或再生SAM的能力，并且由其生成或再生的SAM可以用于转化反应。SAM的生成或再生可以进一步结合用于生成或再生SAM的任何其它方法来增强。另外，生成或再生ATP的方法可以包括例如，通过使用棒状杆菌细菌从碳源供给ATP的方法(Hori,H.et al.,Appl.Microbiol.Biotechnol.,48(6):693-698(1997))，通过使用酵母细胞和葡萄糖再生ATP的方法(Yamamoto,S et al.,Biosci.Biotechnol.Biochem.,69(4):784-789(2005))，使用磷酸烯醇丙酮酸和丙酮酸激酶再生ATP的方法(C.Aug'e andCh.Gautheron,Tetrahedron Lett.,29:789-790(1988))，以及使用多磷酸和多磷酸激酶再生ATP的方法(Murata,K.et al.,Agric.Biol.Chem.,52(6):1471-1477(1988))。对于短语“将组分添加到反应混合物”，所述的“组分”可以包括在反应混合物中生成或再生成的组分。
此外，从转化反应的开始到结束，反应条件可以是恒定的，或者它们可以在转化反应期间变化。短语“反应条件在转化反应期间变化”不仅可以包括当反应条件在时间上改变，而且也包括反应条件在空间上改变。短语“反应条件在空间上变化”可以表示，例如当通过柱方法进行转化反应时，反应条件例如反应温度和细胞密度根据流动中的位置而不同。
通过进行如上所述的生物转化步骤获得含有目标物质的培养液(特别是培养基)或反应混合物。目标物质生产的确认和目标物质的收集可以以与上述发酵方法相同的方式进行。也就是说，生物转化方法可以进一步包括收集步骤，例如从培养液(特别是培养基)或反应混合物中收集目标物质的步骤。除了目标物质之外，所收集的目标物质可以含有例如其它组分，例如微生物细胞，培养基组分，水分和副产物代谢物。收集的目标物质的纯度可以是例如30％(w/w)或更高，50％(w/w)或更高，70％(w/w)或更高，80％(w/w)或更高，90％(w/w)或更高，或95％(w/w)或更高。
<2-3>生产香草醛和其它目标物质的方法
当通过使用如本文所述的微生物产生目标物质时，即通过发酵方法或生物转化方法，由此生产的目标物质可以进一步转化为另一种目标物质。因此，本发明提供了生产第二目标物质的方法，所述方法包括以下步骤：通过使用微生物生产第一目标物质，即通过发酵方法或生物转化方法，并将由此生产的第一目标物质转化成第二目标物质。
例如，当使用如本文所述的微生物生产香草酸时，即通过发酵方法或生物转化方法，由此产生的香草酸可以进一步转化为香草醛。因此，本发明提供了生产香草醛的方法，该方法包括通过使用微生物生产香草酸，即通过发酵方法或生物转化方法，并将由此生产的香草酸转化成香草醛的步骤。该方法也可以称为“香草醛生产方法”。
通过使用微生物生产的香草酸可以以其本身用于转化为香草醛，或者根据需要进行适当的处理，例如浓缩、稀释、干燥、溶解、分馏、提取和纯化。也就是说，作为香草酸，例如可以使用纯化至所需程度的纯化产物，或者可以使用含有香草酸的材料。含有香草酸的材料没有特别限制，只要催化转化的组分例如微生物和酶等可以使用香草酸。含有香草酸的材料的具体实例可以包括含有香草酸的培养液或反应液，从培养液或反应液中分离出的上清液。或其处理产品例如浓缩产品(例如浓缩液体)及其干燥产品。
将香草酸转化为香草醛的方法没有特别限制。
可以通过例如使用具有ACAR的微生物的生物转化方法将香草酸转化为香草醛。具有ACAR的微生物可以以使微生物具有本文所述的特定特征的方式进行修饰或不进行修饰。除了具有ACAR的微生物具有ACAR并且可以以使微生物具有特定特征的方式进行修饰或不进行修饰，本文中关于微生物的描述可以加以必要的修改适用于具有ACAR的微生物。可以对具有ACAR的微生物进行修饰，从而增强ACAR、PPT和香草酸摄取系统的一种或多种的活性。另外，关于使用微生物生产目标物质的生物转化方法的描述可以加以必要的修改适用于使用具有ACAR的微生物将香草酸转化成香草醛的生物转化方法。
也可以通过例如使用ACAR的酶促方法将香草酸转化为香草醛。
可以通过使具有ACAR基因的宿主表达ACAR基因来生产ACAR。也可以用无细胞蛋白质表达系统生产ACAR。
具有ACAR基因的宿主也可以称为“具有ACAR的宿主”。具有ACAR基因的宿主可以是固有具有ACAR基因的宿主，或者可以是经修饰以具有ACAR基因的宿主。固有具有ACAR基因的宿主的实例可以包括从其衍生以上例示的ACAR的生物体。经修饰以具有ACAR基因的宿主的实例可以包括引入了ACAR基因的宿主。另外，固有具有ACAR基因的宿主可以以使ACAR增加的方式进行修饰。用于表达ACAR的宿主没有特别限制，只要宿主可以表达能够发挥功能的ACAR。宿主的实例可以包括，例如微生物例如细菌和酵母(真菌)、植物细胞、昆虫细胞和动物细胞。
可以通过培养具有ACAR基因的宿主来表达ACAR基因。培养方法没有特别限制，只要具有ACAR基因的宿主可以增殖并表达ACAR。关于发酵方法的培养的描述可以加以必要的修改适用于具有ACAR基因的宿主的培养。必要时，可以诱导ACAR基因的表达。作为培养的结果，可以获得含有ACAR的培养液。ACAR可以在宿主细胞和/或培养基中积累。
存在于宿主细胞、培养基等中的ACAR可以以其本身用于酶促反应，或者从其纯化的ACAR可以用于酶促反应。可以以所需的程度进行纯化。也就是说，作为ACAR，可以使用纯化的ACAR，或者可以使用含有ACAR的部分。此类部分没有特别限制，只要存在于其中的ACAR可以作用于香草酸。此类部分的实例可以包括具有ACAR基因的宿主的培养液，其是具有ACAR的宿主；从培养液中收集的细胞；细胞加工产物例如细胞碎片，细胞裂解物，细胞提取物，以及固定化的细胞例如使用丙烯酰胺，角叉菜胶等固定化的细胞；从培养液收集的培养上清液；其部分纯化的产物，即粗产物；以及其组合。这些级分可以独立使用，或者与纯化的ACAR组合使用。
酶促反应可以通过允许ACAR作用于香草酸来进行。酶促反应的条件没有特别限制，只要生成香草醛。酶促反应可以用例如用于使用酶或微生物细胞例如静息细胞进行的物质转化的典型条件进行。例如，关于生物转化方法的第二实施方案中的转化反应的描述也可以加以必要的修改适用于香草醛生产方法中的酶促反应。
通过如上所述进行转化来获得含有香草醛的反应混合物。香草醛生产的确认和香草醛的收集可以以与上述发酵方法相同的方式进行。也就是说，香草醛生产方法可以进一步包括收集步骤，例如从培养液(特别是培养基)或反应混合物中收集香草醛的步骤。除了目标物质之外，收集的香草醛可以含有例如其它组分，例如微生物细胞，培养基组分，水分和副产物代谢物。收集的香草醛的纯度可以是例如30％(w/w)或更高，50％(w/w)或更高，70％(w/w)或更高，80％(w/w)或更高，90％(w/w)或更高，或95％(w/w)或更高。
通过例如使用具有VDC的微生物的生物转化方法或使用VDC的酶促方法，也可以将香草酸转化为愈创木酚。通过例如使用具有FDC的微生物的生物转化方法或使用FDC的酶促方法可以将阿魏酸转化成4-乙烯基愈创木酚。通过例如使用具有VPR的微生物的生物转化方法或使用VPR的酶促方法可以将4-乙烯基愈创木酚转化成4-乙基愈创木酚。通过这些方法的组合，也可以将阿魏酸转化为4-乙基愈创木酚。特别地，例如通过同时或序贯使用FDC或具有FDC的微生物与VPR或具有VPR的微生物的组合，可以将阿魏酸转化为4-乙基愈创木酚。关于香草醛生产方法的上述描述可以加以必要的修改适用于生产其它目标物质的方法。
实施例
在下文中，将参考以下非限制性实施例更具体地解释本发明。
在本实施例中，从谷氨酸棒状杆菌2256菌株(ATCC 13869)作为亲本菌株构建具有特定特征的菌株，并用构建的菌株进行香草酸生产。
<1>香草酸脱甲基酶基因缺陷菌株(FKS0165菌株)的构建
据报道，在棒状杆菌细菌中，香草醛按香草醛->香草酸->原儿茶酸的顺序代谢，并利用(Current Microbiology,2005，第51卷，第59-65页)。从香草酸至原儿茶酸的转化反应由香草酸脱甲基酶催化。vanA基因和vanB基因分别编码香草酸脱甲基酶的亚基A和亚基B。vanK基因编码香草酸摄取系统，并与vanAB基因一起构成vanABK操纵子(M.T.Chaudhry,etal.,Microbiology,2007,153:857-865)。因此，首先通过缺失vanABK操纵子，从谷氨酸棒状杆菌2256菌株构建目标物质诸如香草醛和香草酸的利用能力缺陷的菌株(FKS0165菌株)。程序如下所示。
<1-1>用于缺失vanABK基因的质粒pBS4SΔvanABK56的构建
通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:51和52的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有vanA基因的N端侧编码区的PCR产物。分开地，还通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:53和54的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有vanK基因的C端侧编码区的PCR产物。SEQ ID NO:52和53的序列彼此部分互补。然后，以近似等摩尔的量混合含有vanA基因的N端侧编码区的PCR产物和含有vanK基因的C端侧编码区的PCR产物，并通过使用In Fusion HD克隆试剂盒(Clontech)插入用BamHI和PstI处理的pBS4S载体(WO2007/046389)中。利用该DNA，转化大肠杆菌JM109(Takara Bio)的感受态细胞，并且将细胞应用于含有100μM IPTG、40μg/mL X-Gal和40μg/mL卡那霉素的LB琼脂培养基(5g/L酵母提取物，10g/L胰蛋白胨，10g/L NaCl，15g/L琼脂)，并培养过夜。然后，挑取出现的白色菌落，并且分离成单菌落以获得转化体。从获得的转化体中提取质粒，并且插入有靶PCR产物的质粒命名为pBS4SΔvanABK56。
<1-2>FKS0165菌株的构建
上文获得的pBS4SΔvanABK56不含使质粒能在棒状杆菌细菌中自主复制的区域。因此，若用该质粒转化棒状杆菌细菌，则通过同源重组将该质粒掺入基因组的菌株表现为转化体，尽管它以极低的频率发生。因此，通过电脉冲法将pBS4SΔvanABK56导入谷氨酸棒状杆菌2256菌株中。将细胞应用于含有25μg/mL卡那霉素的CM-Dex琼脂培养基(5g/L葡萄糖、10g/L聚胨、10g/L酵母提取物、1g/L KH2PO4、0.4g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L FeSO4·7H2O、0.01g/L MnSO4·7H2O、3g/L尿素、1.2g/L大豆水解产物、10μg/L生物素、15g/L琼脂，用NaOH调节至pH 7.5)，并在31.5℃培养。通过PCR确认生长的菌株是一次重组菌株，其中通过同源重组将pBS4SΔvanABK56掺入基因组中。此种一次重组菌株具有野生型vanABK基因和缺陷型vanABK基因两者。
在CM-Dex液体培养基(具有与CM-Dex琼脂培养基相同的组成，只是它不含琼脂)将一次重组菌株培养过夜，并将培养液应用于S10琼脂培养基(100g/L蔗糖、10g/L聚胨，10g/L酵母提取物，1g/L KH2PO4、0.4g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L FeSO4·7H2O、0.01g/L MnSO4·4-5H2O、3g/L尿素、1.2g/L大豆蛋白水解物溶液、10μg/L生物素、20g/L琼脂，用NaOH调节至pH7.5，并在120℃高压灭菌℃20分钟)，并在31.5℃培养。在出现的菌落中，在CM-Dex琼脂培养基上纯化显示卡那霉素易感性的菌株。通过从纯化的菌株中制备基因组DNA，并使用它进行用SEQ ID NO:55和56的合成DNA作为引物的PCR，并且确认vanABK基因的缺失，并将菌株命名为FKS0165菌株。
<2>醇脱氢酶同源物基因缺陷菌株(FKFC14菌株)的构建
随后，通过使用谷氨酸棒状杆菌FKS0165菌株作为亲本菌株，通过以下程序构建了缺乏醇脱氢酶同源基因，即NCgl0324基因(adhC)、NCgl0313基因(adhE)和NCgl2709基因(adhA)的菌株FKFC14。
<2-1>FKFC5菌株(FKS0165ΔNCgl0324菌株)的构建
<2-1-1>用于缺失NCgl0324基因的质粒pBS4SΔ2256adhC的构建
通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:57和58的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有NCgl0324基因的N端侧编码区的PCR产物。分开地，通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:59和60的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有NCgl0324基因的C端侧编码区的PCR产物。SEQ ID NO:58和59的序列彼此部分互补。然后，将近似等摩尔量的含有NCgl0324基因的N端侧编码区的PCR产物和含有NCgl0324基因的C端侧编码区的PCR产物混合，并通过使用In Fusion HD克隆试剂盒(Clontech)插入用BamHI和PstI处理的pBS4S载体(WO2007/046389)。利用该DNA，转化大肠杆菌JM109(Takara Bio)的感受态细胞，并且将细胞应用于含有100μM IPTG、40μg/mL X-Gal和40μg/mL卡那霉素的LB琼脂培养基，并培养过夜。然后，挑取出现的白色菌落，并且分离成单菌落以获得转化体。从获得的转化体中提取质粒，并插入有靶PCR产物的质粒命名为pBS4SΔ2256adhC。
<2-1-2>FKFC5菌株(FKS0165ΔNCgl0324菌株)的构建
由于上文获得的pBS4SΔ2256adhC不含使质粒能够在棒状杆菌细菌中自主复制的区域，若用该质粒转化棒状杆菌细菌，则通过同源重组将该质粒掺入基因组中的菌株作为转化体出现，尽管它以极低的频率发生。因此，通过电脉冲法将pBS4SΔ2256adhC导入谷氨酸棒状杆菌FKS0165菌株中。将细胞应用于含有25μg/mL卡那霉素的CM-Dex琼脂培养基，并在31.5℃培养。通过PCR确认，生长的菌株是一次重组菌株，其中通过同源重组将pBS4SΔ2256adhC掺入基因组中。该一次重组菌株具有野生型NCgl0324基因和缺陷型NCgl0324基因两者。
在CM-Dex液体培养基中将一次重组菌株培养过夜，将培养液应用于S10琼脂培养基上，并在31.5℃进行培养。在出现的菌落中，在CM-Dex琼脂培养基上纯化显示卡那霉素易感性的菌株。从纯化的菌株制备基因组DNA，并用SEQ ID NO:61和62的合成DNA作为引物进行PCR以确认NCgl0324基因的缺失，并将该菌株命名为FKFC5菌株。
<2-2>FKFC11菌株(2256ΔvanABKΔNCgl0324ΔNCgl0313菌株)的构建
<2-2-1>用于缺失NCgl0313基因的质粒pBS4SΔ2256adhE的构建
通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:63和64的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有NCgl0313基因的N端侧编码区的PCR产物。分开地，通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:65和66的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有NCgl0313基因的C端侧编码区的PCR产物。SEQ ID NO:64和65的序列彼此部分互补。然后，将近似等摩尔量的含有NCgl0313基因的N端侧编码区的PCR产物和含有NCgl0313基因的C端侧编码区的PCR产物混合，并通过使用In Fusion HD克隆试剂盒(Clontech)插入用BamHI和PstI处理的pBS4S载体(WO2007/046389)。利用该DNA，转化大肠杆菌JM109(Takara Bio)的感受态细胞，并且将细胞应用于含有100μM IPTG、40μg/mL X-Gal和40μg/mL卡那霉素的LB琼脂培养基，并培养过夜。然后，挑取出现的白色菌落，并且分离成单菌落以获得转化体。从获得的转化体中提取质粒，并将插入有靶PCR产物的质粒命名为pBS4SΔ2256adhE。
<2-2-2>FKFC11菌株(2256ΔvanABKΔNCgl0324ΔNCgl0313菌株)的构建
由于上文获得的pBS4SΔ2256adhE不含有使质粒能够在棒状杆菌细菌中自主复制的区域，若用该质粒转化棒状杆菌细菌，通过同源重组将该质粒掺入基因组的菌株作为转化体出现，尽管它以极低的频率发生。因此，通过电脉冲方法将pBS4SΔ2256adhE导入谷氨酸棒状杆菌FKFC5菌株。将细胞应用于含有25μg/mL卡那霉素的CM-Dex琼脂培养基，并在31.5℃培养。通过PCR确认，生长的菌株是一次重组菌株，其中通过同源重组将pBS4SΔ2256adhE掺入基因组中。该一次重组菌株具有野生型NCgl0313基因和缺陷型NCgl0313基因两者。
在CM-Dex液体培养基中将一次重组菌株培养过夜，将培养液应用于S10琼脂培养基上，并在31.5℃进行培养。在出现的菌落中，在CM-Dex琼脂培养基上纯化显示卡那霉素易感性的菌株。从纯化的菌株中制备基因组DNA，并使用SEQ ID NO:67和68的合成DNA作为引物进行PCR以确认NCgl0313基因的缺失，并将该菌株命名为FKFC11菌株。
<2-3>FKFC14菌株(2256ΔvanABKΔNCgl0324ΔNCgl0313ΔNCgl2709菌株)的构建
<2-3-1>用于缺失NCgl2709基因的质粒pBS4SΔ2256adhA的构建
通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:69和70的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有NCgl2709基因的N端侧编码区的PCR产物。分开地，通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:71和72的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有NCgl2709基因的C端侧编码区的PCR产物。SEQ ID NO:70和71的序列彼此部分互补。然后，将近似等摩尔量的含有NCgl2709基因的N端侧编码区的PCR产物和含有NCgl2709基因的C端侧编码区的PCR产物混合，并通过使用In Fusion HD克隆试剂盒(Clontech)插入用BamHI和PstI处理的pBS4S载体中。利用该DNA，转化大肠杆菌JM109(Takara Bio)的感受态细胞，并且将细胞应用于含有100μM IPTG、40μg/mL X-Gal和40μg/mL卡那霉素的LB琼脂培养基，并培养过夜。然后，挑取出现的白色菌落，分离成单菌落以获得转化体。从获得的转化体中提取质粒，并将插入有靶PCR产物的质粒命名为pBS4SΔ2256adhA。
<2-3-2>FKFC14菌株(2256ΔvanABKΔNCgl0324ΔNCgl0313ΔNCgl2709菌株)的构建
由于上文获得的pBS4SΔ2256adhA不含使质粒能够在棒状杆菌细菌中自主复制的区域，若用该质粒转化棒状杆菌，通过同源重组将该质粒掺入基因组的菌株作为转化体出现，尽管它以极低的频率发生。因此，通过电脉冲法将pBS4SΔ2256adhA导入谷氨酸棒状杆菌FKFC11菌株。将细胞应用于含有25μg/mL卡那霉素的CM-Dex琼脂培养基，并在31.5℃培养。通过PCR确认，生长的菌株是一次重组菌株，其中通过同源重组将pBS4SΔ2256adhA掺入基因组中。该一次重组菌株具有野生型NCgl2709基因和缺陷型NCgl2709基因两者。
在CM-Dex液体培养基中将一次重组菌株培养过夜，将培养液应用于S10琼脂培养基上，并在31.5℃进行培养。在出现的菌落中，在CM-Dex琼脂培养基上纯化显示卡那霉素易感性的菌株。从纯化的菌株制备基因组DNA，并使用SEQ ID NO:73和74的合成DNA作为引物进行PCR以确认NCgl2709基因的缺失，并将该菌株命名为FKFC14菌株。
<3>原儿茶酸双加氧酶基因缺陷株(FKFC14ΔpcaGH菌株)的构建
随后，通过使用谷氨酸棒状杆菌FKFC14菌株作为亲本菌株，通过外包构建了编码原儿茶酸3,4-双加氧酶的α亚基和β亚基的NCgl2314基因(pcaG)和NCgl2315基因(pcaH)缺陷的菌株FKFC14ΔpcaGH。也可以通过以下程序构建FKFC14ΔpcaGH菌株。
<3-1>用于缺失NCgl2314和NCgl2315基因的质粒pBS4SΔ2256pcaGH的构建
NCgl2314和NCgl2315基因彼此相邻，并且因此可以一起缺失这些基因。通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:75和76的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有NCgl2315基因上游区域的PCR产物。分开地，通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:77和78的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有NCgl2314基因的下游区域的PCR产物。SEQ ID NO:76和77的序列彼此部分互补。然后，将近似等摩尔量的含有NCgl2315基因上游区域的PCR产物和含有NCgl2314基因下游区域的PCR产物混合，并通过使用In Fusion HD克隆试剂盒(Clontech)插入用BamHI和PstI处理的pBS4S载体(WO2007/046389)中。利用该DNA，转化大肠杆菌JM109(Takara Bio)的感受态细胞，将细胞应用于含有100μM IPTG、40μg/mL X-Gal和40μg/mL卡那霉素的LB琼脂培养基，并培养过夜。然后，挑出出现的白色菌落，并且分离成单菌落以获得转化体。从获得的转化体中提取质粒，并将插入有目标PCR产物的质粒命名为pBS4SΔ2256pcaGH。
<3-2>FKFC14ΔpcaGH菌株的构建
由于上文获得的pBS4SΔ2256pcaGH不含使质粒能够在棒状杆菌细菌中自主复制的区域，若用该质粒转化棒状杆菌，通过同源重组将该质粒掺入基因组的菌株作为转化体出现，尽管它以极低的频率发生。因此，通过电脉冲法将pBS4SΔ2256pcaGH导入谷氨酸棒状杆菌FKFC14菌株。将细胞应用于含有25μg/mL卡那霉素的CM-Dex琼脂培养基，并在31.5℃培养。通过PCR确认，生长的菌株是一次重组菌株，其中通过同源重组将pBS4SΔ2256pcaGH掺入基因组中。该一次重组菌株具有野生型NCgl2314和NCgl2315基因以及缺陷型NCgl2314和NCgl2315基因两者。
在CM-Dex液体培养基中将一次重组菌株培养过夜，将培养基应用于S10琼脂培养基，并在31.5℃进行培养。在出现的菌落中，在CM-Dex琼脂培养基上纯化显示卡那霉素易感性的菌株。从纯化的菌株制备基因组DNA，并使用SEQ ID NO:79和80的合成DNA作为引物进行PCR以确认NCgl2314和NCgl2315基因的缺失，并将该菌株命名为FKFC14ΔpcaGH菌株。
<4>进一步修饰的菌株的构建
<4-1>Ap1_0007菌株(FKFC14ΔpcaGH P2::NCgl0120菌株)的构建
随后，通过使用谷氨酸棒状杆菌FKFC14ΔpcaGH菌株作为亲本菌株，通过外包构建了菌株Ap1_0007，其中编码Crp家族表达调节蛋白的NCgl0120基因(cysR)的启动子区域已被P2启动子替换以增强此基因的表达。在该菌株中含有P2启动子的基因组区域的核苷酸序列显示为SEQ ID NO:108，其中942-1034位置对应于P2启动子。也可以通过以下程序构建Ap1_0007菌株。
<4-1-1>用于取代NCgl0120基因启动子的质粒pBS4SP2::NCgl0120的构建
通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:81和82的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有NCgl0120基因的上游区域的PCR产物。分开地，通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:83和84的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有NCgl0120基因的N端侧编码区的PCR产物。另外，通过人工基因合成获得含有P2启动子区域的SEQ ID NO:85的DNA片段。然后，通过使用SEQ ID NO:85的DNA片段作为模板和SEQ ID NO:86和87的合成DNA作为引物进行PCR以获得含有P2启动子的PCR产物。SEQ ID NO:82和86的序列彼此部分互补，并且SEQ ID NO:83和87的序列彼此部分互补。然后，将近似等摩尔量的含有NCgl0120基因上游区域的PCR产物、含有NCgl0120基因的N端侧编码区域的PCR产物和含有P2启动子的PCR产物混合，并通过使用In Fusion HD克隆试剂盒(Clontech)插入用BamHI和PstI处理的pBS4S载体(WO2007/046389)。利用该DNA，转化大肠杆菌JM109(Takara Bio)的感受态细胞，将细胞应用于含有100μM IPTG、40μg/mL X-Gal和40μg/mL卡那霉素的LB琼脂培养基，并培养过夜。然后，挑出出现的白色菌落，并且分离成单菌落以获得转化体。从获得的转化体中提取质粒，并且将插入有靶PCR产物的质粒命名为pBS4SP2::NCgl0120。
<4-1-2>Ap1_0007菌株的构建
由于上文获得的pBS4SP2::NCgl0120不含有使质粒能够在棒状杆菌细菌中自主复制的区域，若用该质粒转化棒状杆菌细菌，通过同源重组将该质粒掺入基因组中的菌株作为转化体出现，尽管它以极低的频率发生。因此，通过电脉冲方法将pBS4SP2::NCgl0120导入谷氨酸棒状杆菌FKFC14ΔpcaGH菌株中。将细胞应用于含有25μg/mL卡那霉素的CM-Dex琼脂培养基，并在31.5℃培养。通过PCR确认，生长的菌株是一次重组菌株，其中通过同源重组将pBS4SP2::NCgl0120掺入基因组中。
在CM-Dex液体培养基中将一次重组菌株培养过夜，将培养基应用于S10琼脂培养基，并在31.5℃进行培养。在出现的菌落中，在CM-Dex琼脂培养基上纯化显示卡那霉素易感性的菌株。从纯化的菌株制备基因组DNA，并用于进行核苷酸序列分析以确认P2启动子位于NCgl0120基因的上游，并且该菌株命名为Ap1_0007菌株。
<4-2>Bp1_0112菌株(FKFC14ΔpcaGH P2::NCgl0120P8::NCgl2048菌株)的构建
随后，通过使用谷氨酸棒状杆菌Ap1_0007菌株作为亲本菌株，通过外包构建了菌株Bp1_0112，其中NCgl2048基因的启动子区域已经被P8启动子替换以减弱此基因的表达。该菌株中含有P8启动子的基因组区域的核苷酸序列显示为SEQ ID NO:110，其中901-1046位置对应于P8启动子。也可以通过以下程序构建Bp1_0112菌株。
<4-2-1>用于取代NCgl2048基因启动子的质粒pBS4SP8::NCgl2048的构建
通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:112和113的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有NCgl2048基因的上游区域的PCR产物。分开地，通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:114和115的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有NCgl2048基因的N端侧编码区的PCR产物。另外，通过人工基因合成获得含有P8启动子区的SEQ ID NO:116的DNA片段。然后，通过使用SEQ ID NO:116的DNA片段作为模板和SEQ ID NO:117和118的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有P8启动子的PCR产物。SEQ ID NO:113和117的序列彼此部分互补，并且SEQ ID NO:114和118的序列彼此部分互补。然后，将近似等摩尔量的含有NCgl2048基因上游区域的PCR产物、含有NCgl2048基因的N端侧编码区域的PCR产物和含有P8启动子的PCR产物混合，并通过使用InFusion HD克隆试剂盒(Clontech)插入用BamHI和PstI处理的pBS4S载体(WO2007/046389)中。利用该DNA，转化大肠杆菌JM109(Takara Bio)的感受态细胞，将细胞应用于含有100μMIPTG、40μg/mL X-Gal和40μg/mL卡那霉素的LB琼脂培养基，并培养过夜。然后，挑出出现的白色菌落，并且分离成单菌落以获得转化体。从获得的转化体中提取质粒，并且插入有靶PCR产物的质粒命名为pBS4SP8::NCgl2048。
<4-2-2>Bp1_0112菌株的构建
由于上文获得的pBS4SP8::NCgl2048不含有使质粒能够在棒状杆菌细菌中自主复制的区域，若用该质粒转化棒状杆菌细菌，通过同源重组将该质粒掺入基因组的菌株以转化体出现，尽管它以极低的频率发生。因此，通过电脉冲方法将pBS4SP8::NCgl2048导入谷氨酸棒状杆菌Ap1_0007菌株。将细胞应用于含有25μg/mL卡那霉素的CM-Dex琼脂培养基，并在31.5℃培养。通过PCR确认，生长的菌株是一次重组菌株，其中通过同源重组将pBS4SP8::NCgl2048掺入基因组中。
在CM-Dex液体培养基中将一次重组菌株培养过夜，将培养基应用于S10琼脂培养基，并在31.5℃进行培养。在出现的菌落中，在CM-Dex琼脂培养基上纯化显示卡那霉素易感性的菌株。从纯化的菌株制备基因组DNA，并用于进行核苷酸序列分析以确认P8启动子位于NCgl2048基因的上游，并且该菌株命名为Bp1_0112菌株。
<4-3>Dp2_0340菌株(FKFC14ΔpcaGH P2::NCgl0120P8::NCgl2048P4::NCgl0935菌株)的构建
随后，通过使用谷氨酸棒状杆菌Bp1_0112菌株作为亲本菌株，通过外包构建了菌株Dp2_0340，其中编码烯醇酶的NCg10935基因(eno)的启动子区域已被P4启动子替换以减弱该基因的表达。在该菌株中含有P4启动子的基因组区域的核苷酸序列显示为SEQ ID NO:109，其中位置872-969对应于P4启动子。也可以通过以下程序构建Dp2_0340菌株。
<4-3-1>用于取代NCgl0935基因启动子的质粒pBS4SP4::NCgl0935的构建
通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:121和122的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有NCgl0935基因上游区域的PCR产物。分开地，通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:123和124的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有NCgl0935基因的N端侧编码区的PCR产物。另外，通过人工基因合成获得含有P4启动子区域的SEQ ID NO:125的DNA片段。然后，通过使用SEQ ID NO:125的DNA片段作为模板和SEQ ID NO:126和127的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有P4启动子的PCR产物。SEQ ID NO:122和126的序列彼此部分互补，并且SEQ ID NO:123和127的序列彼此部分互补。然后，将近似等摩尔量的含有NCgl0935基因上游区域的PCR产物、含有NCgl0935基因的N端侧编码区的PCR产物和含有P4启动子的PCR产物混合，并通过使用InFusion HD克隆试剂盒(Clontech)插入用BamHI和PstI处理的pBS4S载体(WO2007/046389)。利用该DNA，转化大肠杆菌JM109(Takara Bio)的感受态细胞，将细胞应用于含有100μMIPTG、40μg/mL X-Gal和40μg/mL卡那霉素的LB琼脂培养基，并培养过夜。然后，挑出出现的白色菌落，并且分离成单菌落以获得转化体。从获得的转化体中提取质粒，并且插入有靶PCR产物的质粒命名为pBS4SP4::NCgl0935。
<4-3-2>Dp2_0340菌株的构建
由于上文获得的pBS4SP4::NCgl0935不含有使质粒能够在棒状杆菌细菌中自主复制的区域，若用该质粒转化棒状杆菌细菌，通过同源重组将该质粒掺入基因组的菌株以转化体出现，尽管它以极低的频率发生。因此，通过电脉冲方法将pBS4SP4::NCgl0935导入谷氨酸棒状杆菌Bp1_0112菌株。将细胞应用于含有25μg/mL卡那霉素的CM-Dex琼脂培养基，并在31.5℃培养。通过PCR确认，生长的菌株是一次重组菌株，其中通过同源重组将pBS4SP4::NCgl0935掺入基因组中。
在CM-Dex液体培养基中将一次重组菌株培养过夜，将培养基应用于S10琼脂培养基，并在31.5℃进行培养。在出现的菌落中，在CM-Dex琼脂培养基上纯化显示卡那霉素易感性的菌株。从纯化的菌株制备基因组DNA，并用于进行核苷酸序列分析以确认P4启动子位于NCgl0935基因的上游，并且该菌株命名为Dp2_0340菌株。
<4-4>Ep2_0055菌株(FKFC14ΔpcaGH P2::NCgl0120P8::NCgl2048P4::NCgl0935P3::NCgl0719菌株)的构建
随后，通过使用谷氨酸棒状杆菌Dp2_0340菌株作为亲本菌株，通过外包构建了菌株Ep2_0055，其中编码S-腺苷-L-高半胱氨酸水解酶的NCgl0719基因(sahH)的启动子区域已被P3启动子替换。P3启动子的核苷酸序列显示为SEQ ID NO:111。也可以通过以下程序构建Ep2_0055菌株。
<4-4-1>用于取代NCgl0719基因启动子的质粒pBS4SP3::NCgl0719的构建
通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:138和139的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有NCgl0719基因的上游区域的PCR产物。分开地，通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:140和141的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有NCgl0719基因的N端侧编码区的PCR产物。另外，通过人工基因合成获得含有P3启动子区域的SEQ ID NO:111的DNA片段。然后，通过使用SEQ ID NO:111的DNA片段为模板和SEQ ID NO:142和143的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有P3启动子的PCR产物。SEQ ID NO:139和142的序列彼此部分互补，并且SEQ ID NO:140和143的序列彼此部分互补。然后，将近似等摩尔量的含有NCgl0719基因上游区域的PCR产物、含有NCgl0719基因的N端侧编码区域的PCR产物和含有P3启动子的PCR产物混合，并通过使用InFusion HD克隆试剂盒(Clontech)插入用BamHI和PstI处理的pBS4S载体(WO2007/046389)。利用该DNA，转化大肠杆菌JM109(Takara Bio)的感受态细胞，将细胞应用于含有100μMIPTG、40μg/mL X-Gal和40μg/mL卡那霉素的LB琼脂培养基，并培养过夜。然后，挑出出现的白色菌落，并且分离成单菌落以获得转化体。从获得的转化体中提取质粒，并插入有靶PCR产物的质粒命名为pBS4SP3::NCgl0719。
<4-4-2>Ep2_0055株的构建
由于上文获得的pBS4SP3::NCgl0719不含使质粒能够在棒状杆菌细菌中自主复制的区域，若用该质粒转化棒状杆菌细菌，通过同源重组将该质粒掺入基因组的菌株以转化体出现，尽管它以极低的频率发生。因此，通过电脉冲方法将pBS4SP3::NCgl0719导入谷氨酸棒状杆菌Dp2_0340菌株。将细胞应用于含有25μg/mL卡那霉素的CM-Dex琼脂培养基，并在31.5℃培养。通过PCR确认，生长的菌株是一次重组菌株，其中通过同源重组将pBS4SP3::NCgl0719掺入基因组中。
在CM-Dex液体培养基中将一次重组菌株培养过夜，将培养基应用于S10琼脂培养基，并在31.5℃进行培养。在出现的菌落中，在CM-Dex琼脂培养基上纯化显示卡那霉素易感性的菌株。从纯化的菌株制备基因组DNA，并用于进行核苷酸序列分析以确认P3启动子位于NCgl0719基因的上游，并且该菌株命名为Ep2_0055菌株。
<4-5>Ep2_0055ΔsdaA菌株(FKFC14ΔpcaGHΔsdaA P2::NCgl0120P8::NCgl2048P4::NCgl0935P3::NCgl0719菌株)的构建
随后，通过使用谷氨酸棒状杆菌Ep2_0055菌株作为亲本菌株，构建了编码L-丝氨酸脱氨酶的NCgl1583基因(sdaA)缺陷的菌株Ep2_0055ΔsdaA。
<4-5-1>用于缺失sdaA基因的质粒pBS4SΔ2256sdaA的构建
通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:148和149的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有sdaA基因的N端侧编码区的PCR产物。分开地，通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:150和151的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有sdaA基因的C端侧编码区的PCR产物。SEQ ID NO:149和150的序列彼此部分互补。然后，将近似等摩尔量的含有sdaA基因的N端侧编码区的PCR产物和含有sdaA基因的C端侧编码区的PCR产物混合，并通过使用In Fusion HD克隆试剂盒(Clontech)插入用BamHI和PstI处理的pBS4S载体中。利用该DNA，转化大肠杆菌JM109(Takara Bio)的感受态细胞，将细胞应用于含有100μM IPTG、40μg/mL X-Gal和40μg/mL卡那霉素的LB琼脂培养基，并培养过夜。然后，挑取出现的白色菌落，并且分离成单菌落以获得转化体。从获得的转化体中提取质粒，并且插入有靶PCR产物的质粒命名为pBS4SΔ2256sdaA。
<4-5-2>Ep2_0055ΔsdaA菌株(FKFC14ΔpcaGHΔsdaA P2::NCgl0120P8::NCgl2048P4::NCgl0935P3::NCgl0719菌株)的构建
由于上文获得的pBS4SΔ2256sdaA不含使质粒能够在棒状杆菌细菌中自主复制的区域，若用该质粒转化棒状细菌，则通过同源重组将该质粒掺入基因组的菌株作为转化体出现，尽管它以极低的频率发生。因此，通过电脉冲法将pBS4SΔ2256sdaA导入谷氨酸棒状杆菌Ep2_0055菌株中。将细胞应用于含有25μg/mL卡那霉素的CM-Dex琼脂培养基，并在31.5℃培养。通过PCR确认，生长的菌株是一次重组菌株，其中通过同源重组将pBS4SΔ2256sdaA掺入基因组中。此种一次重组菌株具有野生型sdaA基因和缺陷型sdaA基因两者。
在CM-Dex液体培养基中将一次重组菌株培养过夜，将培养液应用于S10琼脂培养基，并在31.5℃进行培养。在出现的菌落中，在CM-Dex琼脂培养基上纯化显示卡那霉素易感性的菌株。从纯化的菌株制备基因组DNA，并用SEQ ID NO:152和153的合成DNA作为引物进行PCR以确认sdaA基因的缺失，并该菌株命名为Ep2_0055ΔsdaA菌株。
<4-6>FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)菌株和Ep2_0055ΔsdaA purH(S37F)菌株(FKFC14ΔpcaGHΔsdaA purH(S37F)P2::NCgl0120P8::NCgl2048P4::NCgl0935P3::NCgl0719菌株)的构建
作为亲本菌株的谷氨酸棒状杆菌FKFC14ΔpcaGH菌株进行用UV照射的诱变，由此构建菌株FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)。随后，使用FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)菌株的基因组DNA对作为亲本菌株的谷氨酸棒状杆菌Ep2_0055ΔsdaA菌株进行基因重组，从而构建菌株Ep2_0055ΔsdaA purH(S37F)。FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)和Ep2_0055ΔsdaA purH(S37F)菌株含有作为突变体purH基因的purH(S37F)基因，而不是野生型purH基因。purH(S37F)基因编码PurH(S37F)蛋白，其具有位置37的丝氨酸残基被苯丙氨酸残基替换的突变。相应野生型purH基因的核苷酸序列显示为SEQ ID NO:134，并且相应野生型purH蛋白的氨基酸序列显示为SEQ ID NO:135。purH(S37F)基因的核苷酸序列显示为SEQ ID NO:136，并且purH(S37F)蛋白的氨基酸序列显示为SEQ ID NO:137。也可以通过以下程序FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)和Ep2_0055ΔsdaA purH(S37F)菌株。
<4-6-1>用于引入purH(S37F)突变的质粒pBS4SΔ2256purH(S37F)的构建
通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:154和155的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有purH基因的N端侧编码区的PCR产物。分开地，通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:156和157的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有purH基因的C端侧编码区的PCR产物。另外，通过人工基因合成获得了SEQ ID NO:158的DNA片段。SEQ ID NO:155和158的序列彼此部分互补，并且SEQ IDNO:156和158的序列彼此部分互补。然后，将近似等摩尔量的purH基因的含有N端侧编码区的PCR产物、SEQ ID NO:158的DNA片段和含有purH基因的C端侧编码区的PCR产物混合并通过使用In Fusion HD克隆试剂盒(Clontech)插入用BamHI和PstI处理的pBS4S载体中。利用该DNA，转化大肠杆菌JM109(Takara Bio)的感受态细胞，将细胞应用于含有100μM IPTG、40μg/mL X-Gal和40μg/mL卡那霉素的LB琼脂培养基，并培养过夜。然后，挑出出现的白色菌落，并且分离成单菌落以获得转化体。从获得的转化体中提取质粒，并且插入有靶PCR产物的质粒命名为pBS4SΔ2256purH(S37F)。
<4-6-2>FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)菌株和Ep2_0055ΔsdaA purH(S37F)菌株(FKFC14ΔpcaGHΔsdaA purH(S37F)P2::NCgl0120P8::NCgl2048P4::NCgl0935P3::NCgl0719)的构建
由于上文获得的pBS4SΔ2256purH(S37F)不含有使质粒能够在棒状杆菌细菌中自主复制的区域，用该质粒转化棒状杆菌细菌，通过同源重组将该质粒掺入基因组的菌株以转化体出现，尽管它以极低的频率发生。因此，通过电脉冲法将pBS4SΔ2256purH(S37F)导入谷氨酸棒状杆菌FKFC14ΔpcaGH和Ep2_0055ΔsdaA菌株。将细胞应用于含有25μg/mL卡那霉素的CM-Dex琼脂培养基，并在31.5℃培养。通过PCR确认，生长的菌株是一次重组菌株，其中通过同源重组将pBS4SΔ2256purH(S37F)掺入基因组中。这些一次重组菌株具有野生型purH基因和S37F型purH基因两者。
将一次重组菌株各自在CM-Dex液体培养基中培养过夜，将培养液应用于S10琼脂培养基，并在31.5℃进行培养。在出现的菌落中，在CM-Dex琼脂培养基上纯化显示卡那霉素易感性的菌株。从纯化的菌株制备基因组DNA，并用SEQ ID NO:159和160的合成DNA作为引物进行PCR以确认purH(S37F)基因的导入，并将该菌株命名为FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)菌株和Ep2_0055ΔsdaA purH(S37F)菌株。
<5>用于表达OMT基因的质粒和用于表达突变体3-PGDH基因的质粒的构建
<5-1>用于表达人OMT基因的质粒pVK9::PcspB-hsomt的构建
<5-1-1>质粒pEPlac-COMT2的构建
对于人的OMT基因，已知四种转录物变体和两种OMT同种型。这四种转录物变体(转录物变体1-4，GenBank登录号NM_000754.3、NM_001135161.1、NM_001135162.1和NM_007310.2)的核苷酸序列显示为SEQ ID NO:11-14，较长的OMT同种型(MB-COMT，GenBank登录号NP_000745.1)的氨基酸序列显示为SEQ ID NO:15，并且较短的OMT同种型(S-COMT，GenBank登录号NP_009294.1)的氨基酸序列显示为SEQ ID NO:16。编码S-COMT的野生型cDNA的核苷酸序列显示为SEQ ID NO:161。S-COMT的野生型cDNA经密码子优化用于在大肠杆菌中的表达，并使用由ATG Service Gen(Russian Federation,Saint-Petersburg)提供的服务进行化学合成。为了便于进一步克隆，合成在3’和5’端分别具有限制酶NdeI和SacI的位点的基因的DNA片段。密码子优化的S-COMT cDNA也可以称为COMT2基因。含有COMT2基因的合成DNA片段的核苷酸序列显示为SEQ ID NO:162。在pUC57载体(GenScript)中获得包含COMT2基因的合成DNA片段。
在T7系统中确认了COMT2基因的表达。将插入pUC57载体中的COMT2基因再克隆到pET22(+)载体(Novagen)的NdeI和SacI限制位点中。将获得的质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)细胞(Novagen)中。使含有质粒的细胞在含有氨苄青霉素200mg/l的LB培养基(胰蛋白胨，10g/l；酵母提取物，5g/l；NaCl，10g/l)中培养，并在指数增长期的2小时内通过IPTG，1mM诱导。通过超声处理破碎细胞。使用12％SDS-PAGE中的电泳分析粗蛋白提取物。鉴定对应于S-OMT(约24kDa)的条带并从凝胶中切下。从凝胶中分离目标蛋白质并用胰蛋白酶处理。使用质谱术分析获得的胰蛋白酶水解产物以确认COMT2基因的表达。
将插入pUC57载体中的COMT2基因再克隆到pELAC载体的NdeI和SacI限制位点(SEQID NO:163，Smirnov S.V.et al.,Appl.Microbiol.Biotechnol,.2010,88(3):719-726)。通过用含有PlacUV5启动子的合成BglII-XbaI片段替换pET22b(+)(Novagen)的BglII-XbaI-片段构建pELAC载体。为了将COMT2基因插入pELAC载体，按照供应商的推荐进行使用T4DNA连接酶(Fermentas，Lithuania)的连接反应。用乙醇处理连接混合物，并将获得的沉淀物溶解在水中，并在供应商推荐的条件下使用电穿孔(Micro Pulser，BioRad)导入大肠杆菌TG1细胞中。将细胞应用于补充有氨苄青霉素(200mg/L)的LA平板上(Sambrook J.and RussellD.W.,Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第3版),Cold Spring HarborLaboratory Press,2001)并在37℃培养过夜。使用PCR分析测试获得的菌落以选择期望的克隆。使用引物P1和P2(SEQ ID NO:164和165)来选择含有COMT2基因的菌落。当使用用于COMT2基因末端的载体特异性引物P1和反向引物P2时获得DNA片段(713bp)。因此，构建了载体pEPlac-COMT2。使用引物P1和P3(SEQ ID NO:164和166)确定克隆的COMT2基因的序列。
<5-1-2>质粒pVK9::PcspB-hsomt的构建
通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:167和168的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有cspB基因的启动子区域和SD序列的PCR产物。分开地，也使用质粒pEPlac-COMT2作为模板和SEQ ID NO:169和170的合成DNA作为引物进行PCR以获得含有COMT2基因的PCR产物。然后，通过使用In Fusion HD克隆试剂盒(Clontech)将这些PCR产物插入用BamHI和PstI处理的pVK9载体(WO2007/046389)中。pVK9载体是棒状杆菌细菌和大肠杆菌的穿梭载体。利用该DNA，转化大肠杆菌JM109(Takara Bio)的感受态细胞，将细胞应用于含有100μM IPTG、40μg/mL X-Gal和25μg/mL卡那霉素的LB琼脂培养基，并培养过夜。然后，挑取出现的白色菌落，分离成单菌落以获得转化体。从获得的转化体中提取质粒，并且将插入有靶PCR产物的质粒命名为pVK9::PcspB-hsomt。
<5-2>用于表达Niastella koreensis的OMT基因的质粒pVK9::PcspB-omt35的构建
通过外购获得质粒pVK9::PcspB-omt35。质粒pVK9::PcspB-omt35含有针对谷氨酸棒状杆菌的密码子选择而密码子优化的Niastella koreensis的野生型OMT基因。该基因也可以称为“omt35基因”，并且由该基因编码的OMT也可以称为“OMT35”。omt35基因的核苷酸序列显示为SEQ ID NO:174，并且OMT35的氨基酸序列显示为SEQ ID NO:131。也可以通过以下程序构建质粒pVK9::PcspB-omt35。
通过使用谷氨酸棒状杆菌2256菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:171和172的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有cspB基因的启动子区域和SD序列的PCR产物。分开地，通过人工基因合成获得含有omt35基因的ORF的SEQ ID NO:173的DNA片段。然后，使用InFusion HD克隆试剂盒(Clontech)将PCR产物和DNA片段插入用BamHI和PstI处理的pVK9载体(WO2007/046389)中。利用该DNA，转化大肠杆菌JM109(Takara Bio)的感受态细胞，将细胞应用于含有100μM IPTG、40μg/mL X-Gal和25μg/mL卡那霉素的LB培养基，并培养过夜。然后，挑出出现的白色菌落，并且分离成单菌落以获得转化体。从获得的转化体中提取质粒，并且插入有目标结构的质粒命名为pVK9::PcspB-omt35。
<5-3>用于表达Niastella koreensis的突变体OMT基因的质粒pVK9::PcspB-omt202的构建
通过外购获得质粒pVK9::PcspB-omt202。质粒pVK9::PcspB-omt202含有针对谷氨酸棒状杆菌的密码子选择而密码子优化的Niastella koreensis的突变体OMT基因。该突变体OMT基因编码对应于OMT35的突变体OMT，条件是由于密码子从ATG变为AAG，位置36处的甲硫氨酸残基(M)已被赖氨酸残基(K)取代。该突变体OMT基因也可以称为“omt202基因”，并且该突变体OMT也可以称为“OMT202”。也可以通过以下程序构建质粒pVK9::PcspB-omt202。
通过使用QuikChange定点诱变试剂盒(Agilent Technologies)进行突变的引入。即，通过使用质粒pVK9::PcspB-omt35为模板和SEQ ID NO:175和176的合成DNA作为引物用Pfu Ultra DNA聚合酶进行PCR。然后，用DpnI处理PCR产物以消化模板。用该DNA将XL1-Blue超感受态细胞转化，并将细胞应用于含有25μg/mL卡那霉素的LB培养基中并培养过夜。然后，挑出出现的菌落，并分离成单菌落以获得转化体。从获得的转化体中提取质粒，确认其核苷酸序列，并将插入有目的突变的序列命名为pVK9::PcspB-omt202。
<5-4>用于表达Niastella koreensis的突变体OMT基因的质粒pVK9::PcspB-omt312的构建
通过外购获得质粒pVK9::PcspB-omt312。质粒pVK9::PcspB-omt312含有针对谷氨酸棒状杆菌的密码子选择而密码子优化的Niastella koreensis的突变OMT基因。该突变体OMT基因编码对应于OMT35的突变体OMT，条件是引入了双重突变M36K/L67F，具体地，由于密码子从ATG变化为AAG，36位处的甲硫氨酸残基(M)已被赖氨酸残基(K)替换以及由于密码子从TTG变化为TTT，67位处的亮氨酸残基(L)已经被苯丙氨酸残基(F)取代。该突变体OMT基因也可以称为“omt312基因”，并且该突变体OMT也可以称为“OMT312”。pVK9::PcspB-omt312的核苷酸序列显示为SEQ ID NO:132，其中omt312基因对应于位置4880-5545。OMT312的氨基酸序列显示为SEQ ID NO:133。也可以通过人工基因合成构建pVK9::PcspB-omt312。
<5-5>用于表达突变体3-PGDH基因的质粒pVS7::Plac-serA*的构建
质粒pVS7::Plac-serA*含有黄色短杆菌AJ13327菌株的serA*基因，其是突变体3-PGDH基因。serA*基因编码SerA*蛋白，其是具有325位处的谷氨酸残基被赖氨酸残基取代的突变的突变体3-PGDH，并且因此对L-丝氨酸的反馈抑制有抗性(US2003175912A1)。相应的野生型serA基因的核苷酸序列显示为SEQ ID NO:177，并且相应的野生型SerA蛋白的氨基酸序列显示为SEQ ID NO:178。serA*基因的核苷酸序列显示为SEQ ID NO:179，并且SerA*蛋白的氨基酸序列显示为SEQ ID NO:180。通过以下程序构建质粒pVS7::Plac-serA*。
通过使用黄色短杆菌AJ13327菌株的基因组DNA作为模板和SEQ ID NO:181和182的合成DNA作为引物进行PCR，以获得含有serA*基因的PCR产物。然后，通过使用In FusionHD克隆试剂盒(Clontech)将PCR产物插入用BamHI和PstI处理的pVS7载体(WO2013/069634)中。pVS7载体是棒状杆菌细菌和大肠杆菌的穿梭载体。利用该DNA，转化大肠杆菌JM109(Takara Bio)的感受态细胞，并且将细胞应用于含有100μM IPTG、40μg/mL X-Gal和50μg/mL壮观霉素的LB琼脂培养基，并培养过夜。然后，挑取出现的白色菌落，并且分离成单菌落以获得转化体。从获得的转化体中提取质粒，并将插入有靶PCR产物的质粒命名为pVS7::Plac-serA*。顺便提及，即便不使用黄色短杆菌AJ13327菌株，质粒pVS7::Plac-serA*也可以通过例如serA*基因的人工合成可再生地获得。
<6>香草酸生产菌株(1)的构建
通过电脉冲法将质粒pVK9::PcspB-hsomt导入谷氨酸棒状杆菌FKFC14ΔpcaGH和FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)菌株。通过电脉冲方法将质粒pVK9::PcspB-omt312导入谷氨酸棒状杆菌Ep2_0055ΔsdaA和Ep2_0055ΔsdaA purH(S37F)菌株。将细胞应用于含有25μg/mL卡那霉素的CM-Dex琼脂培养基，并在31.5℃培养。在相同的琼脂培养基上纯化生长的菌株，并分别命名为菌株FKFC14ΔpcaGH/pVK9::PcspB-hsomt、FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)/pVK9::PcspB-hsomt、Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt312和Ep2_0055ΔsdaA purH(S37F)/pVK9::PcspB-omt312。
将这些菌株各自接种到存在于试管中的4mL含有25μg/mL卡那霉素且不含mameno的CM-Dex培养基(5g/L葡萄糖、10g/L聚胨、10g/L酵母提取物、1g/L KH2PO4、0.4g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L FeSO4·7H2O、0.01g/L MnSO4·7H2O、3g/L尿素、10μg/L生物素，用KOH调节至pH 7.5)，并在31.5℃振荡培养约16小时。将所得培养液0.8mL等分试样与0.8mL 40％甘油水溶液混合，以获得甘油原液，并且贮存于-80℃。
<7>在烧瓶培养物中谷氨酸棒状杆菌FKFC14ΔpcaGH/pVK9::PcspB-hsomt和FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)/pVK9::PcspB-hsomt菌株的香草酸生产
将FKFC14ΔpcaGH/pVK9::PcspB-hsomt和FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)/pVK9::PcspB-hsomt菌株的每种甘油原液的5μL等分试样接种到存在于试管中4mL含有25μg/mL卡那霉素且不含mameno的CM-Dex培养基中，并在31.5℃振荡培养20小时作为预培养物。将获得的预培养液的0.5mL等分试样接种到存在于带有挡板的锥形瓶中50mL含有25μg/mL卡那霉素且不含mameno的CM-Dex培养基中，并在31.5℃振荡培养20小时。将获得的培养液以8000rpm离心5分钟，除去上清液，将细胞悬浮于无菌生理盐水中。测量细胞悬浮液的光密度(OD)，并用生理盐水稀释细胞悬浮液以获得600nm的OD为50。将稀释细胞悬浮液的5mL等分试样接种到存在于带有挡板的锥形瓶中20mL含有25μg/mL卡那霉素的香草酸生产培养基(75g/L葡萄糖、0.6g/L MgSO4·7H2O、6.3g/L(NH4)2SO4、2.5g/L KH2PO4、12.5mg/L FeSO4·7H2O、12.5mg/L MnSO4·4-5H2O、2.5g/L酵母提取物、150μg/L维生素B1、150μg/L生物素、6.9g/L原儿茶酸，用KOH调节至pH 7，然后与37.5g/L的CaCO3(在180℃热空气中灭菌3小时)混合)，并在31.5℃振荡培养24小时。
在培养开始和完成时，通过使用Biotech Analyzer AS-310(Sakura SI)分析培养基中葡萄糖的浓度。此外，使用超高效液相层析NEXERA X2系统(SHIMADZU)在下列条件下分析培养基中原儿茶酸和香草酸的浓度。
UPLC分析的条件
柱：KINETEX 2.6μm XB-C18,150x 30mm(Phenomenex)
烘箱温度：40℃
流动相(A)：0.1％三氟乙酸
流动相(B)：0.1％三氟乙酸/80％乙腈
梯度程序(时间，A(％)，B(％))：(0,90,10)->(3,80,20)
流速：1.5ml/min
结果显示在表1中。对FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)/pVK9::PcspB-hsomt菌株观察到的培养基中的香草酸浓度为FKFC14ΔpcaGH/pVK9::PcspB-hsomt所观察到的浓度的约3.8倍。
表1：在烧瓶培养中谷氨酸棒状杆菌香草酸生产菌株的香草酸生产
<8>在S-型罐培养物中谷氨酸棒状杆菌FKFC14ΔpcaGH/pVK9::PcspB-hsomt和FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)/pVK9::PcspB-hsomt菌株的香草酸生产
将Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt312和Ep2_0055ΔsdaA purH(S37F)/pVK9::PcspB-omt312菌株的每种甘油原液的5μL等分试样接种到存在于试管中的4mL含有25μg/mL卡那霉素且不含mameno的CM-Dex培养基中，并在31.5℃振荡培养20小时作为预培养物。将所得预培养液的1mL等分试样接种到存在于三个坂口(Sakaguchi)烧瓶中的100mL含有25μg/mL卡那霉素且不含mameno的CM-Dex w/o培养基中，并在31.5℃振荡培养20小时。将获得的培养液以7000rpm离心10分钟，除去上清液，将细胞悬浮于无菌生理盐水中。测量细胞悬浮液的光密度(OD)，并用生理盐水稀释细胞悬浮液以获得600nm的OD为50。将稀释细胞悬浮液的60mL等分试样接种到存在于S型发酵罐中的240mL含有25μg/mL卡那霉素的香草酸生产培养基(葡萄糖125g/L、0.6g/L MgSO4·7H2O、6.3g/L(NH4)2SO4、2.5g/L KH2PO4、12.5mg/LFeSO4·7H2O、12.5mg/L MnSO4·4-5H2O、2.5g/L酵母提取物、150μg/L维生素B1、150μg/L生物素、5.3g/L丝氨酸、9.0mg/L ZnSO4·7H2O、6.3mg/L维生素B12、6.9g/L原儿茶酸，用KOH调节至pH7)，并将控制温度于31.5℃，pH7.0培养5小时，通气速率为4/3vvm，PL>5。
<9>胞内AICAR(5-氨基-1-(5-磷酸-D-核糖基)咪唑-4-甲酰胺)的分析
将2mL含有细胞的培养液的等分试样与预先冷却至-80℃的30mL 70％甲醇混合，所述含有细胞的培养液对于Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt312和Ep2_0055ΔsdaApurH(S37F)/pVK9::PcspB-omt312中的每种在实施例<8>中培养开始后5小时获得。将所得混合物以8000rpm离心1分钟，除去上清液，并将细胞悬浮于15mL 15％甲醇中。将所得悬浮液以8000rpm离心1分钟，除去上清液，并且将细胞悬浮于400μL的75％甲醇中。将所得悬浮液与2mL氯仿混合，再与2mL含有内部标准品(5μM的甲硫氨酸砜，5μM的D-樟脑-10-磺酸)的超纯水混合，离心该混合物，并且收集2mL的水层。用0.45μm过滤器过滤收集的水层，进一步用Ultrafree MC-PLHCC 250/pk过滤以进行代谢物组分析(Human MetabolomeTechnologies)，并用旋转蒸发器蒸发。
通过使用U-2900分光光度计(HITACHI)在600nm处测量培养液的光密度(OD)。通过外包分析AICAR的量。也可以通过使用高效液相层析Chromaster(HITACHI)在以下条件下进行分析AICAR的量。
UPLC分析的条件
柱：Shodex Asahipak GS-220HQ 7.5x 300mm(Showa Denko)
烘箱温度：55℃
流动相：0.2M NaH2PO4(pH3.98)
流速：0.6ml/min
将对每个样品一式三份测量的AICAR量的平均值除以OD的值以计算胞内AICAR量的相对值。结果，对Ep2_0055ΔsdaA purH(S37F)/pVK9::PcspB-omt312菌株观察到的胞内AICAR量为对Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt312菌株所观察到的胞内AICAR量的约33倍。因此，认为purH基因中的S37F突变导致PurH蛋白的活性降低。
<10>香草酸生产菌株(2)的构建
通过电脉冲法将质粒pVK9::PcspB-omt202和pVS7载体的混合物以及质粒pVK9::PcspB-omt202和质粒pVS7::Plac-serA*的混合物各自导入谷氨酸棒状杆菌Ep2_0055ΔsdaA菌株中。将细胞应用于含有25μg/mL卡那霉素和50μg/mL壮观霉素的CM-Dex琼脂培养基，并在31.5℃培养。生长的菌株分别命名为Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7和Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7::Plac-serA*。
将这些菌株各自接种到存在于试管中的3mL含有25μg/mL卡那霉素和50μg/mL壮观霉素的CM-Dex液体培养基中，并在31.5℃振荡培养约16小时。将所得培养液的0.8mL等分试样与0.8mL 40％甘油水溶液混合，以获得甘油原液，贮存于-80℃。
<11>谷氨酸棒状杆菌Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7和Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7::Plac-serA*菌株的香草酸生产
将Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7和Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7::Plac-serA*菌株的每种甘油原液的5μL等分试样接种到存在于2.0mL深孔板中的0.5mL含有25μg/mL卡那霉素和50μg/mL壮观霉素且不含mameno的CM-Dex培养基(5g/L葡萄糖、10g/L聚胨、10g/L酵母提取物、1g/L KH2PO4、0.4g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L FeSO4·7H2O、0.01g/L MnSO4·7H2O、3g/L尿素、10μg/L生物素，用KOH调节至pH 7.5)中，并在31.5℃振荡培养16小时作为预培养物。将所得预培养液的0.1mL等分试样接种到存在于2.0mL深孔板中的0.4mL含有25μg/mL卡那霉素和50μg/mL壮观霉素的香草酸生产培养基(75g/L葡萄糖、0.6g/L MgSO4·7H2O、6.3g/L(NH4)2SO4、2.5g/L KH2PO4、12.5mg/L FeSO4·7H2O、12.5mg/L MnSO4·4-5H2O、2.5g/L的酵母提取物、150μg/L的维生素B1、150μg/L的生物素、6.9g/L的原儿茶酸，用KOH调节至pH7，然后与30g/L CaCO3(在180℃的热空气中灭菌3小时)混合)，并在31.5℃振荡培养24小时。
在培养结束时，使用超高效液相层析NEXERA X2系统(SHIMADZU)在下列条件下分析培养基中香草酸的浓度。另外，使用Spectra Max 190(Molecular Devices)在600nm处测量光密度(OD)。
UPLC分析的条件
柱：KINETEX 2.6μm XB-C18,150x 30mm(Phenomenex)
烘箱温度：40℃
流动相(A)：0.1％三氟乙酸
流动相(B)：0.1％三氟乙酸/80％乙腈
梯度程序(时间，A(％),B(％)):(0,90,10)->(3,80,20)
流速：1.5ml/min
结果显示在表2中。对于Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7::Plac-serA*菌株观察到的培养基中的香草酸浓度是对Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7菌株观察到的香草酸浓度的1.12倍。此外，对于Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7::Plac-serA*菌株观察到的每OD的香草酸生产率是对Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7菌株所观察到的香草酸生产率的约1.06倍。
表2：谷氨酸棒状杆菌香草酸生产菌株的香草酸生产
<12>香草酸生产菌株(3)的构建
通过电脉冲方法将质粒pVK9::PcspB-omt202和pVS7载体(WO2013/069634)导入谷氨酸棒状杆菌Ep2_0055和Ep2_0055ΔsdaA菌株中。将细胞应用于含有25μg/mL卡那霉素和50μg/mL壮观霉素的CM-Dex琼脂培养基，并在31.5℃培养。在相同的琼脂培养基上纯化培养的菌株，并且分别命名为Ep2_0055/pVK9::PcspB-omt202+pVS7和Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7。
将这些菌株各自接种到存在于试管中4mL含有25μg/mL卡那霉素和50μg/mL壮观霉素且不含mameno的CM-Dex培养基(5g/L葡萄糖、10g/L聚胨、10g/L酵母提取物、1g/L KH2PO4、0.4g/L MgSO4·7H2O、0.01g/L FeSO4·7H2O、0.01g/L MnSO4·7H2O、3g/L尿素，10μg/L生物素，用KOH调节至pH 7.5)中，并在31.5℃振荡培养约16小时。将获得的培养液的0.8mL等分试样与0.8mL40％甘油水溶液混合以获得甘油原液，并且贮存于-80℃。
<13>谷氨酸棒状杆菌Ep2_0055/pVK9::PcspB-omt202+pVS7和Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7菌株的香草酸生产
将Ep2_0055/pVK9::PcspB-omt202+pVS7和Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7菌株的每种甘油原液的5μL等分试样接种到存在于2.0mL深孔板中的0.5mL含有25μg/mL卡那霉素和50μg/mL壮观霉素且不含mameno的CM-Dex培养基中，并在31.5℃振荡培养16小时作为预培养物。将获得的预培养液的0.1mL等分试样接种到0.4mL香草酸生产培养基(75g/L葡萄糖、0.6g/L MgSO4·7H2O、6.3g/L(NH4)2SO4、2.5g/L KH2PO4、12.5mg/L FeSO4·7H2O、12.5mg/L MnSO4·4-5H2O、2.5g/L酵母提取物、150μg/L维生素B1、150μg/L的生物素、6.9g/L原儿茶酸，用KOH调节至pH7，然后与30g/L CaCO3(在180℃的热空气中灭菌3小时)混合)，并在31.5℃振荡培养24小时。
在培养结束时，使用超高效液相层析NEXERA X2系统(SHIMADZU)在下列条件下分析培养基中香草酸的浓度。另外，使用Spectra Max 190(Molecular Devices)在600nm处测量光密度(OD)。
UPLC分析的条件
柱：KINETEX 2.6μm XB-C18,150x 30mm(Phenomenex)
烘箱温度：40℃
流动相(A)：0.1％三氟乙酸
流动相(B)：0.1％三氟乙酸/80％乙腈
梯度程序(时间，A(％),B(％)):(0,90,10)->(3,80,20)
流速：1.5ml/min
结果显示在表3中。对Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7菌株观察到的培养基中的香草酸浓度是对Ep2_0055/pVK9::PcspB-omt202+pVS7菌株观察到的香草酸浓度的约1.18倍。此外，对Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7菌株观察到的每OD的香草酸生产率是对Ep2_0055/pVK9::PcspB-omt202+pVS7菌株观察到的每OD的香草酸生产率的约1.08倍。
表3：谷氨酸棒状杆菌香草酸生产菌株的香草酸生产
工业适用性
根据本发明，可以改善微生物生产目标物质例如香草醛和香草酸的能力，并且可以有效地生产目标物质。
序列表说明
SEQ ID NO:
1：大肠杆菌MG1655的aroG基因的核苷酸序列
2：大肠杆菌MG1655的AroG蛋白的氨基酸序列
3：大肠杆菌MG1655的aroB基因的核苷酸序列
4：大肠杆菌MG1655的AroB蛋白的氨基酸序列
5：大肠杆菌MG1655的aroD基因的核苷酸序列
6：大肠杆菌MG1655的AroD蛋白的氨基酸序列
7：苏云金芽孢杆菌BMB171的asbF基因的核苷酸序列
8：苏云金芽孢杆菌BMB171的AsbF蛋白的氨基酸序列
9：大肠杆菌MG1655的tyrR基因的核苷酸序列
10：大肠杆菌MG1655的TyrR蛋白的氨基酸序列
11-14：人的OMT基因的转录物变体1-4的核苷酸序列
15：人的OMT同种型(MB-COMT)的氨基酸序列
16：人的OMT同种型(S-COMT)的氨基酸序列
17：巴西诺卡氏菌的ACAR基因的核苷酸序列
18：巴西诺卡氏菌的ACAR蛋白的氨基酸序列
19：巴西诺卡氏菌的ACAR基因的核苷酸序列
20：巴西诺卡氏菌的ACAR蛋白的氨基酸序列
21：大肠杆菌MG1655的entD基因的核苷酸序列
22：大肠杆菌MG1655的EntD蛋白的氨基酸序列
23：谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032的PPT基因的核苷酸序列
24：谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032的PPT蛋白的氨基酸序列
25：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的vanK基因的核苷酸序列
26：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的VanK蛋白的氨基酸序列
27：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的pcaK基因的核苷酸序列
28：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的PcaK蛋白的氨基酸序列
29：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的vanA基因的核苷酸序列
30：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的VanA蛋白的氨基酸序列
31：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的vanB基因的核苷酸序列
32：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的VanB蛋白的氨基酸序列
33：谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032的pcaG基因的核苷酸序列
34：谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032的PcaG蛋白的氨基酸序列
35：谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032的pcaH基因的核苷酸序列
36：谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032的PcaH蛋白的氨基酸序列
37：大肠杆菌MG1655的yqhD基因的核苷酸序列
38：大肠杆菌MG1655的YqhD蛋白的氨基酸序列
39：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的NCgl0324基因的核苷酸序列
40：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的NCgl0324蛋白的氨基酸序列
41：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的NCgl0313基因的核苷酸序列
42：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的NCgl0313蛋白的氨基酸序列
43：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的NCgl2709基因的核苷酸序列
44：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的NCgl2709蛋白的氨基酸序列
45：谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032的NCgl0219基因的核苷酸序列
46：谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032的NCgl0219蛋白的氨基酸序列
47：谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032的NCgl2382基因的核苷酸序列
48：谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032的NCgl2382蛋白的氨基酸序列
49：大肠杆菌MG1655的aroE基因的核苷酸序列
50：大肠杆菌MG1655的AroE蛋白的氨基酸序列
51-84：引物
85：含有P2启动子区的DNA片段的的核苷酸序列
86和87：引物
88：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的cysI基因的核苷酸序列
89：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的CysI蛋白的氨基酸序列
90：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的cysX基因的核苷酸序列
91：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的CysX蛋白的氨基酸序列
92：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的cysH基因的核苷酸序列
93：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的CysH蛋白的氨基酸序列
94：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的cysD基因的核苷酸序列
95：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的CysD蛋白的氨基酸序列
96：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的cysN基因的核苷酸序列
97：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的CysN蛋白的氨基酸序列
98：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的cysY基因的核苷酸序列
99：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的CysY蛋白的氨基酸序列
100：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的cysZ基因的核苷酸序列
101：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的CysZ蛋白的氨基酸序列
102：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的fpr2基因的核苷酸序列
103：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的Fpr2蛋白的氨基酸序列
104：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的cysR基因的核苷酸序列
105：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的CysR蛋白的氨基酸序列
106：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的ssuR基因的核苷酸序列
107：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的SsuR蛋白的氨基酸序列
108：含有P2启动子的核苷酸序列
109：含有P4启动子的核苷酸序列
110：含有P8启动子的核苷酸序列
111：含有P3启动子的核苷酸序列
112-115：引物
116：含有P8启动子区的DNA片段的核苷酸序列
117和118：引物
119：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的NCgl2048基因的核苷酸序列
120：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的NCgl2048蛋白的氨基酸序列
121-124：引物
125：含有P4启动子区的DNA片段的核苷酸序列
126和127：引物
128：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的eno基因的核苷酸序列
129：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的Eno蛋白的氨基酸序列
130：Niastella koreensis的OMT基因的核苷酸序列
131：Niastella koreensis的OMT的氨基酸序列
132：pVK9::PcspB-omt312的核苷酸序列
133：OMT312的氨基酸序列
134：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的purH基因的核苷酸序列
135：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的PurH蛋白的氨基酸序列
136：purH(S37F)基因(突变体purH基因)的核苷酸序列
137：purH(S37F)蛋白(突变体purH蛋白)的氨基酸序列
138-143：引物
144：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的sahH基因的核苷酸序列
145：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的SahH蛋白的氨基酸序列
146：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的sdaA基因的核苷酸序列
147：谷氨酸棒状杆菌2256(ATCC 13869)的SdaA蛋白的氨基酸序列
148-157：引物
158：DNA片段的核苷酸序列
159和160：引物
161：编码人S-COMT的cDNA的核苷酸序列
162：含有COMT2基因的合成DNA片段的核苷酸序列
163：pELAC载体的核苷酸序列
164-170：引物
171和172：引物
173：含有omt35基因的DNA片段的核苷酸序列
174：omt35基因(Niastella koreensis的密码子优化的OMT基因)的核苷酸序列
175和176：引物
177：黄色短杆菌ATCC 14067的serA基因的核苷酸序列
178：黄色短杆菌ATCC 14067的SerA蛋白的氨基酸序列
179：黄色短杆菌AJ13327的serA*基因(突变体3-PGDH基因)的核苷酸序列
180：黄色短杆菌AJ13327的SerA*蛋白(突变体3-PGDH)的氨基酸序列
181和182：引物
序列表
<110> 味之素株式会社
<120> 生产目标物质的方法
<130> D996-16340
<150> US62/509320
<151> 2017-05-22
<150> US62/509326
<151> 2017-05-22
<150> US62/509337
<151> 2017-05-22
<160> 182
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1053
<212> DNA
<213> 大肠杆菌
<400> 1
atgaattatc agaacgacga tttacgcatc aaagaaatca aagagttact tcctcctgtc 60
gcattgctgg aaaaattccc cgctactgaa aatgccgcga atacggttgc ccatgcccga 120
aaagcgatcc ataagatcct gaaaggtaat gatgatcgcc tgttggttgt gattggccca 180
tgctcaattc atgatcctgt cgcggcaaaa gagtatgcca ctcgcttgct ggcgctgcgt 240
gaagagctga aagatgagct ggaaatcgta atgcgcgtct attttgaaaa gccgcgtacc 300
acggtgggct ggaaagggct gattaacgat ccgcatatgg ataatagctt ccagatcaac 360
gacggtctgc gtatagcccg taaattgctg cttgatatta acgacagcgg tctgccagcg 420
gcaggtgagt ttctcgatat gatcacccca caatatctcg ctgacctgat gagctggggc 480
gcaattggcg cacgtaccac cgaatcgcag gtgcaccgcg aactggcatc agggctttct 540
tgtccggtcg gcttcaaaaa tggcaccgac ggtacgatta aagtggctat cgatgccatt 600
aatgccgccg gtgcgccgca ctgcttcctg tccgtaacga aatgggggca ttcggcgatt 660
gtgaatacca gcggtaacgg cgattgccat atcattctgc gcggcggtaa agagcctaac 720
tacagcgcga agcacgttgc tgaagtgaaa gaagggctga acaaagcagg cctgccagca 780
caggtgatga tcgatttcag ccatgctaac tcgtccaaac aattcaaaaa gcagatggat 840
gtttgtgctg acgtttgcca gcagattgcc ggtggcgaaa aggccattat tggcgtgatg 900
gtggaaagcc atctggtgga aggcaatcag agcctcgaga gcggggagcc gctggcctac 960
ggtaagagca tcaccgatgc ctgcatcggc tgggaagata ccgatgctct gttacgtcaa 1020
ctggcgaatg cagtaaaagc gcgtcgcggg taa 1053
<210> 2
<211> 350
<212> PRT
<213> 大肠杆菌
<400> 2
Met Asn Tyr Gln Asn Asp Asp Leu Arg Ile Lys Glu Ile Lys Glu Leu
1 5 10 15
Leu Pro Pro Val Ala Leu Leu Glu Lys Phe Pro Ala Thr Glu Asn Ala
20 25 30
Ala Asn Thr Val Ala His Ala Arg Lys Ala Ile His Lys Ile Leu Lys
35 40 45
Gly Asn Asp Asp Arg Leu Leu Val Val Ile Gly Pro Cys Ser Ile His
50 55 60
Asp Pro Val Ala Ala Lys Glu Tyr Ala Thr Arg Leu Leu Ala Leu Arg
65 70 75 80
Glu Glu Leu Lys Asp Glu Leu Glu Ile Val Met Arg Val Tyr Phe Glu
85 90 95
Lys Pro Arg Thr Thr Val Gly Trp Lys Gly Leu Ile Asn Asp Pro His
100 105 110
Met Asp Asn Ser Phe Gln Ile Asn Asp Gly Leu Arg Ile Ala Arg Lys
115 120 125
Leu Leu Leu Asp Ile Asn Asp Ser Gly Leu Pro Ala Ala Gly Glu Phe
130 135 140
Leu Asp Met Ile Thr Pro Gln Tyr Leu Ala Asp Leu Met Ser Trp Gly
145 150 155 160
Ala Ile Gly Ala Arg Thr Thr Glu Ser Gln Val His Arg Glu Leu Ala
165 170 175
Ser Gly Leu Ser Cys Pro Val Gly Phe Lys Asn Gly Thr Asp Gly Thr
180 185 190
Ile Lys Val Ala Ile Asp Ala Ile Asn Ala Ala Gly Ala Pro His Cys
195 200 205
Phe Leu Ser Val Thr Lys Trp Gly His Ser Ala Ile Val Asn Thr Ser
210 215 220
Gly Asn Gly Asp Cys His Ile Ile Leu Arg Gly Gly Lys Glu Pro Asn
225 230 235 240
Tyr Ser Ala Lys His Val Ala Glu Val Lys Glu Gly Leu Asn Lys Ala
245 250 255
Gly Leu Pro Ala Gln Val Met Ile Asp Phe Ser His Ala Asn Ser Ser
260 265 270
Lys Gln Phe Lys Lys Gln Met Asp Val Cys Ala Asp Val Cys Gln Gln
275 280 285
Ile Ala Gly Gly Glu Lys Ala Ile Ile Gly Val Met Val Glu Ser His
290 295 300
Leu Val Glu Gly Asn Gln Ser Leu Glu Ser Gly Glu Pro Leu Ala Tyr
305 310 315 320
Gly Lys Ser Ile Thr Asp Ala Cys Ile Gly Trp Glu Asp Thr Asp Ala
325 330 335
Leu Leu Arg Gln Leu Ala Asn Ala Val Lys Ala Arg Arg Gly
340 345 350
<210> 3
<211> 1089
<212> DNA
<213> 大肠杆菌
<400> 3
atggagagga ttgtcgttac tctcggggaa cgtagttacc caattaccat cgcatctggt 60
ttgtttaatg aaccagcttc attcttaccg ctgaaatcgg gcgagcaggt catgttggtc 120
accaacgaaa ccctggctcc tctgtatctc gataaggtcc gcggcgtact tgaacaggcg 180
ggtgttaacg tcgatagcgt tatcctccct gacggcgagc agtataaaag cctggctgta 240
ctcgataccg tctttacggc gttgttacaa aaaccgcatg gtcgcgatac tacgctggtg 300
gcgcttggcg gcggcgtagt gggcgatctg accggcttcg cggcggcgag ttatcagcgc 360
ggtgtccgtt tcattcaagt cccgacgacg ttactgtcgc aggtcgattc ctccgttggc 420
ggcaaaactg cggtcaacca tcccctcggt aaaaacatga ttggcgcgtt ctaccaacct 480
gcttcagtgg tggtggatct cgactgtctg aaaacgcttc ccccgcgtga gttagcgtcg 540
gggctggcag aagtcatcaa atacggcatt attcttgacg gtgcgttttt taactggctg 600
gaagagaatc tggatgcgtt gttgcgtctg gacggtccgg caatggcgta ctgtattcgc 660
cgttgttgtg aactgaaggc agaagttgtc gccgccgacg agcgcgaaac cgggttacgt 720
gctttactga atctgggaca cacctttggt catgccattg aagctgaaat ggggtatggc 780
aattggttac atggtgaagc ggtcgctgcg ggtatggtga tggcggcgcg gacgtcggaa 840
cgtctcgggc agtttagttc tgccgaaacg cagcgtatta taaccctgct caagcgggct 900
gggttaccgg tcaatgggcc gcgcgaaatg tccgcgcagg cgtatttacc gcatatgctg 960
cgtgacaaga aagtccttgc gggagagatg cgcttaattc ttccgttggc aattggtaag 1020
agtgaagttc gcagcggcgt ttcgcacgag cttgttctta acgccattgc cgattgtcaa 1080
tcagcgtaa 1089
<210> 4
<211> 362
<212> PRT
<213> 大肠杆菌
<400> 4
Met Glu Arg Ile Val Val Thr Leu Gly Glu Arg Ser Tyr Pro Ile Thr
1 5 10 15
Ile Ala Ser Gly Leu Phe Asn Glu Pro Ala Ser Phe Leu Pro Leu Lys
20 25 30
Ser Gly Glu Gln Val Met Leu Val Thr Asn Glu Thr Leu Ala Pro Leu
35 40 45
Tyr Leu Asp Lys Val Arg Gly Val Leu Glu Gln Ala Gly Val Asn Val
50 55 60
Asp Ser Val Ile Leu Pro Asp Gly Glu Gln Tyr Lys Ser Leu Ala Val
65 70 75 80
Leu Asp Thr Val Phe Thr Ala Leu Leu Gln Lys Pro His Gly Arg Asp
85 90 95
Thr Thr Leu Val Ala Leu Gly Gly Gly Val Val Gly Asp Leu Thr Gly
100 105 110
Phe Ala Ala Ala Ser Tyr Gln Arg Gly Val Arg Phe Ile Gln Val Pro
115 120 125
Thr Thr Leu Leu Ser Gln Val Asp Ser Ser Val Gly Gly Lys Thr Ala
130 135 140
Val Asn His Pro Leu Gly Lys Asn Met Ile Gly Ala Phe Tyr Gln Pro
145 150 155 160
Ala Ser Val Val Val Asp Leu Asp Cys Leu Lys Thr Leu Pro Pro Arg
165 170 175
Glu Leu Ala Ser Gly Leu Ala Glu Val Ile Lys Tyr Gly Ile Ile Leu
180 185 190
Asp Gly Ala Phe Phe Asn Trp Leu Glu Glu Asn Leu Asp Ala Leu Leu
195 200 205
Arg Leu Asp Gly Pro Ala Met Ala Tyr Cys Ile Arg Arg Cys Cys Glu
210 215 220
Leu Lys Ala Glu Val Val Ala Ala Asp Glu Arg Glu Thr Gly Leu Arg
225 230 235 240
Ala Leu Leu Asn Leu Gly His Thr Phe Gly His Ala Ile Glu Ala Glu
245 250 255
Met Gly Tyr Gly Asn Trp Leu His Gly Glu Ala Val Ala Ala Gly Met
260 265 270
Val Met Ala Ala Arg Thr Ser Glu Arg Leu Gly Gln Phe Ser Ser Ala
275 280 285
Glu Thr Gln Arg Ile Ile Thr Leu Leu Lys Arg Ala Gly Leu Pro Val
290 295 300
Asn Gly Pro Arg Glu Met Ser Ala Gln Ala Tyr Leu Pro His Met Leu
305 310 315 320
Arg Asp Lys Lys Val Leu Ala Gly Glu Met Arg Leu Ile Leu Pro Leu
325 330 335
Ala Ile Gly Lys Ser Glu Val Arg Ser Gly Val Ser His Glu Leu Val
340 345 350
Leu Asn Ala Ile Ala Asp Cys Gln Ser Ala
355 360
<210> 5
<211> 759
<212> DNA
<213> 大肠杆菌
<400> 5
atgaaaaccg taactgtaaa agatctcgtc attggtacgg gcgcacctaa aatcatcgtc 60
tcgctgatgg cgaaagatat cgccagcgtg aaatccgaag ctctcgccta tcgtgaagcg 120
gactttgata ttctggaatg gcgtgtggac cactatgccg acctctccaa tgtggagtct 180
gtcatggcgg cagcaaaaat tctccgtgag accatgccag aaaaaccgct gctgtttacc 240
ttccgcagtg ccaaagaagg cggcgagcag gcgatttcca ccgaggctta tattgcactc 300
aatcgtgcag ccatcgacag cggcctggtt gatatgatcg atctggagtt atttaccggt 360
gatgatcagg ttaaagaaac cgtcgcctac gcccacgcgc atgatgtgaa agtagtcatg 420
tccaaccatg acttccataa aacgccggaa gccgaagaaa tcattgcccg tctgcgcaaa 480
atgcaatcct tcgacgccga tattcctaag attgcgctga tgccgcaaag taccagcgat 540
gtgctgacgt tgcttgccgc gaccctggag atgcaggagc agtatgccga tcgtccaatt 600
atcacgatgt cgatggcaaa aactggcgta atttctcgtc tggctggtga agtatttggc 660
tcggcggcaa cttttggtgc ggtaaaaaaa gcgtctgcgc cagggcaaat ctcggtaaat 720
gatttgcgca cggtattaac tattttacac caggcataa 759
<210> 6
<211> 252
<212> PRT
<213> 大肠杆菌
<400> 6
Met Lys Thr Val Thr Val Lys Asp Leu Val Ile Gly Thr Gly Ala Pro
1 5 10 15
Lys Ile Ile Val Ser Leu Met Ala Lys Asp Ile Ala Ser Val Lys Ser
20 25 30
Glu Ala Leu Ala Tyr Arg Glu Ala Asp Phe Asp Ile Leu Glu Trp Arg
35 40 45
Val Asp His Tyr Ala Asp Leu Ser Asn Val Glu Ser Val Met Ala Ala
50 55 60
Ala Lys Ile Leu Arg Glu Thr Met Pro Glu Lys Pro Leu Leu Phe Thr
65 70 75 80
Phe Arg Ser Ala Lys Glu Gly Gly Glu Gln Ala Ile Ser Thr Glu Ala
85 90 95
Tyr Ile Ala Leu Asn Arg Ala Ala Ile Asp Ser Gly Leu Val Asp Met
100 105 110
Ile Asp Leu Glu Leu Phe Thr Gly Asp Asp Gln Val Lys Glu Thr Val
115 120 125
Ala Tyr Ala His Ala His Asp Val Lys Val Val Met Ser Asn His Asp
130 135 140
Phe His Lys Thr Pro Glu Ala Glu Glu Ile Ile Ala Arg Leu Arg Lys
145 150 155 160
Met Gln Ser Phe Asp Ala Asp Ile Pro Lys Ile Ala Leu Met Pro Gln
165 170 175
Ser Thr Ser Asp Val Leu Thr Leu Leu Ala Ala Thr Leu Glu Met Gln
180 185 190
Glu Gln Tyr Ala Asp Arg Pro Ile Ile Thr Met Ser Met Ala Lys Thr
195 200 205
Gly Val Ile Ser Arg Leu Ala Gly Glu Val Phe Gly Ser Ala Ala Thr
210 215 220
Phe Gly Ala Val Lys Lys Ala Ser Ala Pro Gly Gln Ile Ser Val Asn
225 230 235 240
Asp Leu Arg Thr Val Leu Thr Ile Leu His Gln Ala
245 250
<210> 7
<211> 843
<212> DNA
<213> 苏云金芽孢杆菌
<400> 7
atgaaatatt cgctatgtac catttcattt cgtcatcaat taatttcatt tactgatatt 60
gttcaatttg catatgaaaa cggttttgaa ggaattgaat tatgggggac gcatgcacaa 120
aatttgtaca tgcaagaacg tgaaacgaca gaacgagaat tgaattttct aaaggataaa 180
aacttagaaa ttacgatgat aagtgattac ttagatatat cattatcagc agattttgaa 240
aaaacgatag agaaaagtga acaacttgta gtactagcta attggtttaa tacgaataaa 300
attcgcacgt ttgctgggca aaaagggagc aaggacttct cggaacaaga gagaaaagag 360
tatgtgaagc gaatacgtaa gatttgtgat gtgtttgctc agaacaatat gtatgtgctg 420
ttagaaacac atcccaatac actaacggac acattgcctt ctactataga gttattagaa 480
gaagtaaacc atccgaattt aaaaataaat cttgattttc ttcatatatg ggagtctggc 540
gcagatccaa tagacagttt ccatcgatta aagccgtgga cactacatta ccattttaag 600
aatatatctt cagcggatta tttgcatgtg tttgaaccta ataatgtata tgctgcagca 660
ggaagtcgta taggtatggt tccgttattt gaaggtattg taaattatga tgagattatt 720
caggaagtga gaaatacgga tctttttgct tccttagaat ggtttggaca taattcaaaa 780
gagatattaa aagaagaaat gaaagtatta ataaatagaa aattagaagt agtaacttcg 840
taa 843
<210> 8
<211> 280
<212> PRT
<213> 苏云金芽孢杆菌
<400> 8
Met Lys Tyr Ser Leu Cys Thr Ile Ser Phe Arg His Gln Leu Ile Ser
1 5 10 15
Phe Thr Asp Ile Val Gln Phe Ala Tyr Glu Asn Gly Phe Glu Gly Ile
20 25 30
Glu Leu Trp Gly Thr His Ala Gln Asn Leu Tyr Met Gln Glu Arg Glu
35 40 45
Thr Thr Glu Arg Glu Leu Asn Phe Leu Lys Asp Lys Asn Leu Glu Ile
50 55 60
Thr Met Ile Ser Asp Tyr Leu Asp Ile Ser Leu Ser Ala Asp Phe Glu
65 70 75 80
Lys Thr Ile Glu Lys Ser Glu Gln Leu Val Val Leu Ala Asn Trp Phe
85 90 95
Asn Thr Asn Lys Ile Arg Thr Phe Ala Gly Gln Lys Gly Ser Lys Asp
100 105 110
Phe Ser Glu Gln Glu Arg Lys Glu Tyr Val Lys Arg Ile Arg Lys Ile
115 120 125
Cys Asp Val Phe Ala Gln Asn Asn Met Tyr Val Leu Leu Glu Thr His
130 135 140
Pro Asn Thr Leu Thr Asp Thr Leu Pro Ser Thr Ile Glu Leu Leu Glu
145 150 155 160
Glu Val Asn His Pro Asn Leu Lys Ile Asn Leu Asp Phe Leu His Ile
165 170 175
Trp Glu Ser Gly Ala Asp Pro Ile Asp Ser Phe His Arg Leu Lys Pro
180 185 190
Trp Thr Leu His Tyr His Phe Lys Asn Ile Ser Ser Ala Asp Tyr Leu
195 200 205
His Val Phe Glu Pro Asn Asn Val Tyr Ala Ala Ala Gly Ser Arg Ile
210 215 220
Gly Met Val Pro Leu Phe Glu Gly Ile Val Asn Tyr Asp Glu Ile Ile
225 230 235 240
Gln Glu Val Arg Asn Thr Asp Leu Phe Ala Ser Leu Glu Trp Phe Gly
245 250 255
His Asn Ser Lys Glu Ile Leu Lys Glu Glu Met Lys Val Leu Ile Asn
260 265 270
Arg Lys Leu Glu Val Val Thr Ser
275 280
<210> 9
<211> 1542
<212> DNA
<213> 大肠杆菌
<400> 9
atgcgtctgg aagtcttttg tgaagaccga ctcggtctga cccgcgaatt actcgatcta 60
ctcgtgctaa gaggcattga tttacgcggt attgagattg atcccattgg gcgaatctac 120
ctcaattttg ctgaactgga gtttgagagt ttcagcagtc tgatggccga aatacgccgt 180
attgcgggtg ttaccgatgt gcgtactgtc ccgtggatgc cttccgaacg tgagcatctg 240
gcgttgagcg cgttactgga ggcgttgcct gaacctgtgc tctctgtcga tatgaaaagc 300
aaagtggata tggcgaaccc ggcgagctgt cagctttttg ggcaaaaatt ggatcgcctg 360
cgcaaccata ccgccgcaca attgattaac ggctttaatt ttttacgttg gctggaaagc 420
gaaccgcaag attcgcataa cgagcatgtc gttattaatg ggcagaattt cctgatggag 480
attacgcctg tttatcttca ggatgaaaat gatcaacacg tcctgaccgg tgcggtggtg 540
atgttgcgat caacgattcg tatgggccgc cagttgcaaa atgtcgccgc ccaggacgtc 600
agcgccttca gtcaaattgt cgccgtcagc ccgaaaatga agcatgttgt cgaacaggcg 660
cagaaactgg cgatgctaag cgcgccgctg ctgattacgg gtgacacagg tacaggtaaa 720
gatctctttg cctacgcctg ccatcaggca agccccagag cgggcaaacc ttacctggcg 780
ctgaactgtg cgtctatacc ggaagatgcg gtcgagagtg aactgtttgg tcatgctccg 840
gaagggaaga aaggattctt tgagcaggcg aacggtggtt cggtgctgtt ggatgaaata 900
ggggaaatgt caccacggat gcaggcgaaa ttactgcgtt tccttaatga tggcactttc 960
cgtcgggttg gcgaagacca tgaggtgcat gtcgatgtgc gggtgatttg cgctacgcag 1020
aagaatctgg tcgaactggt gcaaaaaggc atgttccgtg aagatctcta ttatcgtctg 1080
aacgtgttga cgctcaatct gccgccgcta cgtgactgtc cgcaggacat catgccgtta 1140
actgagctgt tcgtcgcccg ctttgccgac gagcagggcg tgccgcgtcc gaaactggcc 1200
gctgacctga atactgtact tacgcgttat gcgtggccgg gaaatgtgcg gcagttaaag 1260
aacgctatct atcgcgcact gacacaactg gacggttatg agctgcgtcc acaggatatt 1320
ttgttgccgg attatgacgc cgcaacggta gccgtgggcg aagatgcgat ggaaggttcg 1380
ctggacgaaa tcaccagccg ttttgaacgc tcggtattaa cccagcttta tcgcaattat 1440
cccagcacgc gcaaactggc aaaacgtctc ggcgtttcac ataccgcgat tgccaataag 1500
ttgcgggaat atggtctgag tcagaagaag aacgaagagt aa 1542
<210> 10
<211> 513
<212> PRT
<213> 大肠杆菌
<400> 10
Met Arg Leu Glu Val Phe Cys Glu Asp Arg Leu Gly Leu Thr Arg Glu
1 5 10 15
Leu Leu Asp Leu Leu Val Leu Arg Gly Ile Asp Leu Arg Gly Ile Glu
20 25 30
Ile Asp Pro Ile Gly Arg Ile Tyr Leu Asn Phe Ala Glu Leu Glu Phe
35 40 45
Glu Ser Phe Ser Ser Leu Met Ala Glu Ile Arg Arg Ile Ala Gly Val
50 55 60
Thr Asp Val Arg Thr Val Pro Trp Met Pro Ser Glu Arg Glu His Leu
65 70 75 80
Ala Leu Ser Ala Leu Leu Glu Ala Leu Pro Glu Pro Val Leu Ser Val
85 90 95
Asp Met Lys Ser Lys Val Asp Met Ala Asn Pro Ala Ser Cys Gln Leu
100 105 110
Phe Gly Gln Lys Leu Asp Arg Leu Arg Asn His Thr Ala Ala Gln Leu
115 120 125
Ile Asn Gly Phe Asn Phe Leu Arg Trp Leu Glu Ser Glu Pro Gln Asp
130 135 140
Ser His Asn Glu His Val Val Ile Asn Gly Gln Asn Phe Leu Met Glu
145 150 155 160
Ile Thr Pro Val Tyr Leu Gln Asp Glu Asn Asp Gln His Val Leu Thr
165 170 175
Gly Ala Val Val Met Leu Arg Ser Thr Ile Arg Met Gly Arg Gln Leu
180 185 190
Gln Asn Val Ala Ala Gln Asp Val Ser Ala Phe Ser Gln Ile Val Ala
195 200 205
Val Ser Pro Lys Met Lys His Val Val Glu Gln Ala Gln Lys Leu Ala
210 215 220
Met Leu Ser Ala Pro Leu Leu Ile Thr Gly Asp Thr Gly Thr Gly Lys
225 230 235 240
Asp Leu Phe Ala Tyr Ala Cys His Gln Ala Ser Pro Arg Ala Gly Lys
245 250 255
Pro Tyr Leu Ala Leu Asn Cys Ala Ser Ile Pro Glu Asp Ala Val Glu
260 265 270
Ser Glu Leu Phe Gly His Ala Pro Glu Gly Lys Lys Gly Phe Phe Glu
275 280 285
Gln Ala Asn Gly Gly Ser Val Leu Leu Asp Glu Ile Gly Glu Met Ser
290 295 300
Pro Arg Met Gln Ala Lys Leu Leu Arg Phe Leu Asn Asp Gly Thr Phe
305 310 315 320
Arg Arg Val Gly Glu Asp His Glu Val His Val Asp Val Arg Val Ile
325 330 335
Cys Ala Thr Gln Lys Asn Leu Val Glu Leu Val Gln Lys Gly Met Phe
340 345 350
Arg Glu Asp Leu Tyr Tyr Arg Leu Asn Val Leu Thr Leu Asn Leu Pro
355 360 365
Pro Leu Arg Asp Cys Pro Gln Asp Ile Met Pro Leu Thr Glu Leu Phe
370 375 380
Val Ala Arg Phe Ala Asp Glu Gln Gly Val Pro Arg Pro Lys Leu Ala
385 390 395 400
Ala Asp Leu Asn Thr Val Leu Thr Arg Tyr Ala Trp Pro Gly Asn Val
405 410 415
Arg Gln Leu Lys Asn Ala Ile Tyr Arg Ala Leu Thr Gln Leu Asp Gly
420 425 430
Tyr Glu Leu Arg Pro Gln Asp Ile Leu Leu Pro Asp Tyr Asp Ala Ala
435 440 445
Thr Val Ala Val Gly Glu Asp Ala Met Glu Gly Ser Leu Asp Glu Ile
450 455 460
Thr Ser Arg Phe Glu Arg Ser Val Leu Thr Gln Leu Tyr Arg Asn Tyr
465 470 475 480
Pro Ser Thr Arg Lys Leu Ala Lys Arg Leu Gly Val Ser His Thr Ala
485 490 495
Ile Ala Asn Lys Leu Arg Glu Tyr Gly Leu Ser Gln Lys Lys Asn Glu
500 505 510
Glu
<210> 11
<211> 2304
<212> DNA
<213> 人
<400> 11
cggcctgcgt ccgccaccgg aagcgccctc ctaatccccg cagcgccacc gccattgccg 60
ccatcgtcgt ggggcttctg gggcagctag ggctgcccgc cgcgctgcct gcgccggacc 120
ggggcgggtc cagtcccggg cgggccgtcg cgggagagaa ataacatctg ctttgctgcc 180
gagctcagag gagaccccag acccctcccg cagccagagg gctggagcct gctcagaggt 240
gctttgaaga tgccggaggc cccgcctctg ctgttggcag ctgtgttgct gggcctggtg 300
ctgctggtgg tgctgctgct gcttctgagg cactggggct ggggcctgtg ccttatcggc 360
tggaacgagt tcatcctgca gcccatccac aacctgctca tgggtgacac caaggagcag 420
cgcatcctga accacgtgct gcagcatgcg gagcccggga acgcacagag cgtgctggag 480
gccattgaca cctactgcga gcagaaggag tgggccatga acgtgggcga caagaaaggc 540
aagatcgtgg acgccgtgat tcaggagcac cagccctccg tgctgctgga gctgggggcc 600
tactgtggct actcagctgt gcgcatggcc cgcctgctgt caccaggggc gaggctcatc 660
accatcgaga tcaaccccga ctgtgccgcc atcacccagc ggatggtgga tttcgctggc 720
gtgaaggaca aggtcaccct tgtggttgga gcgtcccagg acatcatccc ccagctgaag 780
aagaagtatg atgtggacac actggacatg gtcttcctcg accactggaa ggaccggtac 840
ctgccggaca cgcttctctt ggaggaatgt ggcctgctgc ggaaggggac agtgctactg 900
gctgacaacg tgatctgccc aggtgcgcca gacttcctag cacacgtgcg cgggagcagc 960
tgctttgagt gcacacacta ccaatcgttc ctggaataca gggaggtggt ggacggcctg 1020
gagaaggcca tctacaaggg cccaggcagc gaagcagggc cctgactgcc cccccggccc 1080
ccctctcggg ctctctcacc cagcctggta ctgaaggtgc cagacgtgct cctgctgacc 1140
ttctgcggct ccgggctgtg tcctaaatgc aaagcacacc tcggccgagg cctgcgccct 1200
gacatgctaa cctctctgaa ctgcaacact ggattgttct tttttaagac tcaatcatga 1260
cttctttact aacactggct agctatatta tcttatatac taatatcatg ttttaaaaat 1320
ataaaataga aattaagaat ctaaatattt agatataact cgacttagta catccttctc 1380
aactgccatt cccctgctgc ccttgacttg ggcaccaaac attcaaagct ccccttgacg 1440
gacgctaacg ctaagggcgg ggcccctagc tggctgggtt ctgggtggca cgcctggccc 1500
actggcctcc cagccacagt ggtgcagagg tcagccctcc tgcagctagg ccaggggcac 1560
ctgttagccc catggggacg actgccggcc tgggaaacga agaggagtca gccagcattc 1620
acacctttct gaccaagcag gcgctgggga caggtggacc ccgcagcagc accagcccct 1680
ctgggcccca tgtggcacag agtggaagca tctccttccc tactccccac tgggccttgc 1740
ttacagaaga ggcaatggct cagaccagct cccgcatccc tgtagttgcc tccctggccc 1800
atgagtgagg atgcagtgct ggtttctgcc cacctacacc tagagctgtc cccatctcct 1860
ccaaggggtc agactgctag ccacctcaga ggctccaagg gcccagttcc caggcccagg 1920
acaggaatca accctgtgct agctgagttc acctgcaccg agaccagccc ctagccaaga 1980
ttctactcct gggctcaagg cctggctagc ccccagccag cccactccta tggatagaca 2040
gaccagtgag cccaagtgga caagtttggg gccacccagg gaccagaaac agagcctctg 2100
caggacacag cagatgggca cctgggacca cctccaccca gggccctgcc ccagacgcgc 2160
agaggcccga cacaagggag aagccagcca cttgtgccag acctgagtgg cagaaagcaa 2220
aaagttcctt tgctgcttta atttttaaat tttcttacaa aaatttaggt gtttaccaat 2280
agtcttattt tggcttattt ttaa 2304
<210> 12
<211> 2262
<212> DNA
<213> 人
<400> 12
ctcccacggg aggagcaaga acacagaaca gagggggcaa gacagctcca ccaggagtca 60
ggagtgaatc ccctctggga acgaggcact aggaagaaga acttccagcc caggagaaat 120
aacatctgct ttgctgccga gctcagagga gaccccagac ccctcccgca gccagagggc 180
tggagcctgc tcagaggtgc tttgaagatg ccggaggccc cgcctctgct gttggcagct 240
gtgttgctgg gcctggtgct gctggtggtg ctgctgctgc ttctgaggca ctggggctgg 300
ggcctgtgcc ttatcggctg gaacgagttc atcctgcagc ccatccacaa cctgctcatg 360
ggtgacacca aggagcagcg catcctgaac cacgtgctgc agcatgcgga gcccgggaac 420
gcacagagcg tgctggaggc cattgacacc tactgcgagc agaaggagtg ggccatgaac 480
gtgggcgaca agaaaggcaa gatcgtggac gccgtgattc aggagcacca gccctccgtg 540
ctgctggagc tgggggccta ctgtggctac tcagctgtgc gcatggcccg cctgctgtca 600
ccaggggcga ggctcatcac catcgagatc aaccccgact gtgccgccat cacccagcgg 660
atggtggatt tcgctggcgt gaaggacaag gtcacccttg tggttggagc gtcccaggac 720
atcatccccc agctgaagaa gaagtatgat gtggacacac tggacatggt cttcctcgac 780
cactggaagg accggtacct gccggacacg cttctcttgg aggaatgtgg cctgctgcgg 840
aaggggacag tgctactggc tgacaacgtg atctgcccag gtgcgccaga cttcctagca 900
cacgtgcgcg ggagcagctg ctttgagtgc acacactacc aatcgttcct ggaatacagg 960
gaggtggtgg acggcctgga gaaggccatc tacaagggcc caggcagcga agcagggccc 1020
tgactgcccc cccggccccc ctctcgggct ctctcaccca gcctggtact gaaggtgcca 1080
gacgtgctcc tgctgacctt ctgcggctcc gggctgtgtc ctaaatgcaa agcacacctc 1140
ggccgaggcc tgcgccctga catgctaacc tctctgaact gcaacactgg attgttcttt 1200
tttaagactc aatcatgact tctttactaa cactggctag ctatattatc ttatatacta 1260
atatcatgtt ttaaaaatat aaaatagaaa ttaagaatct aaatatttag atataactcg 1320
acttagtaca tccttctcaa ctgccattcc cctgctgccc ttgacttggg caccaaacat 1380
tcaaagctcc ccttgacgga cgctaacgct aagggcgggg cccctagctg gctgggttct 1440
gggtggcacg cctggcccac tggcctccca gccacagtgg tgcagaggtc agccctcctg 1500
cagctaggcc aggggcacct gttagcccca tggggacgac tgccggcctg ggaaacgaag 1560
aggagtcagc cagcattcac acctttctga ccaagcaggc gctggggaca ggtggacccc 1620
gcagcagcac cagcccctct gggccccatg tggcacagag tggaagcatc tccttcccta 1680
ctccccactg ggccttgctt acagaagagg caatggctca gaccagctcc cgcatccctg 1740
tagttgcctc cctggcccat gagtgaggat gcagtgctgg tttctgccca cctacaccta 1800
gagctgtccc catctcctcc aaggggtcag actgctagcc acctcagagg ctccaagggc 1860
ccagttccca ggcccaggac aggaatcaac cctgtgctag ctgagttcac ctgcaccgag 1920
accagcccct agccaagatt ctactcctgg gctcaaggcc tggctagccc ccagccagcc 1980
cactcctatg gatagacaga ccagtgagcc caagtggaca agtttggggc cacccaggga 2040
ccagaaacag agcctctgca ggacacagca gatgggcacc tgggaccacc tccacccagg 2100
gccctgcccc agacgcgcag aggcccgaca caagggagaa gccagccact tgtgccagac 2160
ctgagtggca gaaagcaaaa agttcctttg ctgctttaat ttttaaattt tcttacaaaa 2220
atttaggtgt ttaccaatag tcttattttg gcttattttt aa 2262
<210> 13
<211> 2279
<212> DNA
<213> 人
<400> 13
tggagataac acggatcgct gtgtacactg tgtgctccgg ttgttgcatc cgagggttga 60
tcggatggtg gttcccatcc agatccaagt cctggcccct gatcacagag aaacacagct 120
ggacattaaa gtgaaataac atctgctttg ctgccgagct cagaggagac cccagacccc 180
tcccgcagcc agagggctgg agcctgctca gaggtgcttt gaagatgccg gaggccccgc 240
ctctgctgtt ggcagctgtg ttgctgggcc tggtgctgct ggtggtgctg ctgctgcttc 300
tgaggcactg gggctggggc ctgtgcctta tcggctggaa cgagttcatc ctgcagccca 360
tccacaacct gctcatgggt gacaccaagg agcagcgcat cctgaaccac gtgctgcagc 420
atgcggagcc cgggaacgca cagagcgtgc tggaggccat tgacacctac tgcgagcaga 480
aggagtgggc catgaacgtg ggcgacaaga aaggcaagat cgtggacgcc gtgattcagg 540
agcaccagcc ctccgtgctg ctggagctgg gggcctactg tggctactca gctgtgcgca 600
tggcccgcct gctgtcacca ggggcgaggc tcatcaccat cgagatcaac cccgactgtg 660
ccgccatcac ccagcggatg gtggatttcg ctggcgtgaa ggacaaggtc acccttgtgg 720
ttggagcgtc ccaggacatc atcccccagc tgaagaagaa gtatgatgtg gacacactgg 780
acatggtctt cctcgaccac tggaaggacc ggtacctgcc ggacacgctt ctcttggagg 840
aatgtggcct gctgcggaag gggacagtgc tactggctga caacgtgatc tgcccaggtg 900
cgccagactt cctagcacac gtgcgcggga gcagctgctt tgagtgcaca cactaccaat 960
cgttcctgga atacagggag gtggtggacg gcctggagaa ggccatctac aagggcccag 1020
gcagcgaagc agggccctga ctgccccccc ggcccccctc tcgggctctc tcacccagcc 1080
tggtactgaa ggtgccagac gtgctcctgc tgaccttctg cggctccggg ctgtgtccta 1140
aatgcaaagc acacctcggc cgaggcctgc gccctgacat gctaacctct ctgaactgca 1200
acactggatt gttctttttt aagactcaat catgacttct ttactaacac tggctagcta 1260
tattatctta tatactaata tcatgtttta aaaatataaa atagaaatta agaatctaaa 1320
tatttagata taactcgact tagtacatcc ttctcaactg ccattcccct gctgcccttg 1380
acttgggcac caaacattca aagctcccct tgacggacgc taacgctaag ggcggggccc 1440
ctagctggct gggttctggg tggcacgcct ggcccactgg cctcccagcc acagtggtgc 1500
agaggtcagc cctcctgcag ctaggccagg ggcacctgtt agccccatgg ggacgactgc 1560
cggcctggga aacgaagagg agtcagccag cattcacacc tttctgacca agcaggcgct 1620
ggggacaggt ggaccccgca gcagcaccag cccctctggg ccccatgtgg cacagagtgg 1680
aagcatctcc ttccctactc cccactgggc cttgcttaca gaagaggcaa tggctcagac 1740
cagctcccgc atccctgtag ttgcctccct ggcccatgag tgaggatgca gtgctggttt 1800
ctgcccacct acacctagag ctgtccccat ctcctccaag gggtcagact gctagccacc 1860
tcagaggctc caagggccca gttcccaggc ccaggacagg aatcaaccct gtgctagctg 1920
agttcacctg caccgagacc agcccctagc caagattcta ctcctgggct caaggcctgg 1980
ctagccccca gccagcccac tcctatggat agacagacca gtgagcccaa gtggacaagt 2040
ttggggccac ccagggacca gaaacagagc ctctgcagga cacagcagat gggcacctgg 2100
gaccacctcc acccagggcc ctgccccaga cgcgcagagg cccgacacaa gggagaagcc 2160
agccacttgt gccagacctg agtggcagaa agcaaaaagt tcctttgctg ctttaatttt 2220
taaattttct tacaaaaatt taggtgttta ccaatagtct tattttggct tatttttaa 2279
<210> 14
<211> 2035
<212> DNA
<213> 人
<400> 14
gctgttggca gctgtgttgc tgggcctggt gctgctggtg gtgctgctgc tgcttctgag 60
gcactggggc tggggcctgt gccttatcgg ctggaacgag ttcatcctgc agcccatcca 120
caacctgctc atgggtgaca ccaaggagca gcgcatcctg aaccacgtgc tgcagcatgc 180
ggagcccggg aacgcacaga gcgtgctgga ggccattgac acctactgcg agcagaagga 240
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ccagccctcc gtgctgctgg agctgggggc ctactgtggc tactcagctg tgcgcatggc 360
ccgcctgctg tcaccagggg cgaggctcat caccatcgag atcaaccccg actgtgccgc 420
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agcgtcccag gacatcatcc cccagctgaa gaagaagtat gatgtggaca cactggacat 540
ggtcttcctc gaccactgga aggaccggta cctgccggac acgcttctct tggaggaatg 600
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cctggaatac agggaggtgg tggacggcct ggagaaggcc atctacaagg gcccaggcag 780
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atcttatata ctaatatcat gttttaaaaa tataaaatag aaattaagaa tctaaatatt 1080
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ggccacccag ggaccagaaa cagagcctct gcaggacaca gcagatgggc acctgggacc 1860
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ttttcttaca aaaatttagg tgtttaccaa tagtcttatt ttggcttatt tttaa 2035
<210> 15
<211> 271
<212> PRT
<213> 人
<400> 15
Met Pro Glu Ala Pro Pro Leu Leu Leu Ala Ala Val Leu Leu Gly Leu
1 5 10 15
Val Leu Leu Val Val Leu Leu Leu Leu Leu Arg His Trp Gly Trp Gly
20 25 30
Leu Cys Leu Ile Gly Trp Asn Glu Phe Ile Leu Gln Pro Ile His Asn
35 40 45
Leu Leu Met Gly Asp Thr Lys Glu Gln Arg Ile Leu Asn His Val Leu
50 55 60
Gln His Ala Glu Pro Gly Asn Ala Gln Ser Val Leu Glu Ala Ile Asp
65 70 75 80
Thr Tyr Cys Glu Gln Lys Glu Trp Ala Met Asn Val Gly Asp Lys Lys
85 90 95
Gly Lys Ile Val Asp Ala Val Ile Gln Glu His Gln Pro Ser Val Leu
100 105 110
Leu Glu Leu Gly Ala Tyr Cys Gly Tyr Ser Ala Val Arg Met Ala Arg
115 120 125
Leu Leu Ser Pro Gly Ala Arg Leu Ile Thr Ile Glu Ile Asn Pro Asp
130 135 140
Cys Ala Ala Ile Thr Gln Arg Met Val Asp Phe Ala Gly Val Lys Asp
145 150 155 160
Lys Val Thr Leu Val Val Gly Ala Ser Gln Asp Ile Ile Pro Gln Leu
165 170 175
Lys Lys Lys Tyr Asp Val Asp Thr Leu Asp Met Val Phe Leu Asp His
180 185 190
Trp Lys Asp Arg Tyr Leu Pro Asp Thr Leu Leu Leu Glu Glu Cys Gly
195 200 205
Leu Leu Arg Lys Gly Thr Val Leu Leu Ala Asp Asn Val Ile Cys Pro
210 215 220
Gly Ala Pro Asp Phe Leu Ala His Val Arg Gly Ser Ser Cys Phe Glu
225 230 235 240
Cys Thr His Tyr Gln Ser Phe Leu Glu Tyr Arg Glu Val Val Asp Gly
245 250 255
Leu Glu Lys Ala Ile Tyr Lys Gly Pro Gly Ser Glu Ala Gly Pro
260 265 270
<210> 16
<211> 221
<212> PRT
<213> 人
<400> 16
Met Gly Asp Thr Lys Glu Gln Arg Ile Leu Asn His Val Leu Gln His
1 5 10 15
Ala Glu Pro Gly Asn Ala Gln Ser Val Leu Glu Ala Ile Asp Thr Tyr
20 25 30
Cys Glu Gln Lys Glu Trp Ala Met Asn Val Gly Asp Lys Lys Gly Lys
35 40 45
Ile Val Asp Ala Val Ile Gln Glu His Gln Pro Ser Val Leu Leu Glu
50 55 60
Leu Gly Ala Tyr Cys Gly Tyr Ser Ala Val Arg Met Ala Arg Leu Leu
65 70 75 80
Ser Pro Gly Ala Arg Leu Ile Thr Ile Glu Ile Asn Pro Asp Cys Ala
85 90 95
Ala Ile Thr Gln Arg Met Val Asp Phe Ala Gly Val Lys Asp Lys Val
100 105 110
Thr Leu Val Val Gly Ala Ser Gln Asp Ile Ile Pro Gln Leu Lys Lys
115 120 125
Lys Tyr Asp Val Asp Thr Leu Asp Met Val Phe Leu Asp His Trp Lys
130 135 140
Asp Arg Tyr Leu Pro Asp Thr Leu Leu Leu Glu Glu Cys Gly Leu Leu
145 150 155 160
Arg Lys Gly Thr Val Leu Leu Ala Asp Asn Val Ile Cys Pro Gly Ala
165 170 175
Pro Asp Phe Leu Ala His Val Arg Gly Ser Ser Cys Phe Glu Cys Thr
180 185 190
His Tyr Gln Ser Phe Leu Glu Tyr Arg Glu Val Val Asp Gly Leu Glu
195 200 205
Lys Ala Ile Tyr Lys Gly Pro Gly Ser Glu Ala Gly Pro
210 215 220
<210> 17
<211> 3453
<212> DNA
<213> 巴西诺卡氏菌
<400> 17
ttgttcgccg aggacgagca ggtgaaagcc gcggtgccgg accaggaggt ggtcgaggcg 60
atccgggcgc ccggcctgcg cctggcacag atcatggcca ccgtgatgga gcgctatgcg 120
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ttccggctgc tcccggaatt cgagaccctg acctaccgcg agctgtgggc gcgcgtccgc 240
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ctgttcgttc ccgccgcgga cgaggacccg ctggctctgc tcatctacac ctccggcagc 720
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gcggccgcga gcccggaact cgagcaggaa ctgaagaccg aactgcgctt gtccgcggtc 1080
ggggaccgct tactcggggc gatcgcgggc agcgcgccgc tgtcggccga gatgcgggag 1140
ttcatggagt cgctgctgga tctggaactg cacgacggct acggctcgac cgaggcgggt 1200
atcggcgtac tgcaagacaa tatcgtccag cgtccgccgg tcatcgatta caagctcgtc 1260
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ttgaaaaccg aagggatgat tccgggctac ttccggcggc ccgaggtgac cgcggagatc 1380
ttcgacgagg acggtttcta caggaccggt gacatcgtcg ccgaactcga accggatcgg 1440
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gtcgcccatc tggaagcggt gttcgcgacc agtccgctga tccggcagat ctacatctac 1560
ggcaacagcg agcgctcgtt cctgctggcg gtgatcgtgc ccaccgcgga cgcgctggcc 1620
gacggtgtca ccgacgcgct gaacacggcg ctgaccgaat ccttgcgaca gctcgcgaaa 1680
gaagccgggc tgcaatccta tgagctgccg cgcgagttcc tggtcgaaac cgaaccgttc 1740
accgtcgaga acggtctgct ctccggtatc gcgaaactgt tgcggcccaa gctcaaggag 1800
cactacggcg agcgactcga gcagctgtac cgcgatatcg aggcgaaccg caacgacgag 1860
ctgatcgagc tgcggcgcac cgcggccgag ctgccggtgc tcgaaaccgt cacgcgggct 1920
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gtcgaggtcc cggtcggtgt catcgtgagc cccgccaact cgctcgccga tctggcgaaa 2100
tacatcgagg ccgaacggca ttcgggggtg cggcggccga gcctgatctc ggtgcacggt 2160
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ctcgctgccg cgaaagcggt tccggccgcg ccggcccagg cgcagaccgt cctgctcacc 2280
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accggcggca cgctggtctg catcgtgcgc ggtaccgacg cggccgccgc gcggaagcgc 2400
ctggatgcgg tgttcgacag cggtgatccg gagctgctcg accactaccg gaagctggcc 2460
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atgatcctgg cgcacagcaa atacgtcggt cagctcaacg tccccgatgt gttcacccgg 2940
ctcatcctga gcctggcgct caccggcatc gcaccgtatt cgttctacgg gacggacagc 3000
gccgggcagc gcaggcgggc ccactacgac ggtctgcccg ccgatttcgt cgccgaggcg 3060
atcaccaccc tcggcgcgcg agccgagtcg gggttccata cctacgacgt gtggaacccg 3120
tacgacgacg gcatctcgct ggacgaattc gtcgactggc tcggcgattt cggcgtgccg 3180
atccagcgga tcgacgacta cgacgaatgg ttccggcgtt tcgagaccgc gatccgcgcg 3240
ctgcccgaaa agcagcgcga tgcttcgctg ctaccgctgc tggacgcaca ccggcggcca 3300
ctgcgcgcgg tgcgcggttc gctgttgccc gccaagaact tccaggcggc ggtgcagtcc 3360
gcgcggatcg gccccgatca ggacatcccg catctttccc cgcagttgat cgacaagtac 3420
gtcaccgacc tgcgccacct cggcctgctc tga 3453
<210> 18
<211> 1150
<212> PRT
<213> 巴西诺卡氏菌
<400> 18
Met Phe Ala Glu Asp Glu Gln Val Lys Ala Ala Val Pro Asp Gln Glu
1 5 10 15
Val Val Glu Ala Ile Arg Ala Pro Gly Leu Arg Leu Ala Gln Ile Met
20 25 30
Ala Thr Val Met Glu Arg Tyr Ala Asp Arg Pro Ala Val Gly Gln Arg
35 40 45
Ala Ser Glu Pro Val Thr Glu Ser Gly Arg Thr Thr Phe Arg Leu Leu
50 55 60
Pro Glu Phe Glu Thr Leu Thr Tyr Arg Glu Leu Trp Ala Arg Val Arg
65 70 75 80
Ala Val Ala Ala Ala Trp His Gly Asp Ala Glu Arg Pro Leu Arg Ala
85 90 95
Gly Asp Phe Val Ala Leu Leu Gly Phe Ala Gly Ile Asp Tyr Gly Thr
100 105 110
Leu Asp Leu Ala Asn Ile His Leu Gly Leu Val Thr Val Pro Leu Gln
115 120 125
Ser Gly Ala Thr Ala Pro Gln Leu Ala Ala Ile Leu Ala Glu Thr Thr
130 135 140
Pro Arg Val Leu Ala Ala Thr Pro Asp His Leu Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Leu Leu Thr Gly Gly Ala Ser Pro Glu Arg Leu Val Val Phe Asp Tyr
165 170 175
Arg Pro Ala Asp Asp Asp His Arg Ala Ala Leu Glu Ser Ala Arg Arg
180 185 190
Arg Leu Ser Asp Ala Gly Ser Ala Val Val Val Glu Thr Leu Asp Ala
195 200 205
Val Arg Ala Arg Gly Ser Glu Leu Pro Ala Ala Pro Leu Phe Val Pro
210 215 220
Ala Ala Asp Glu Asp Pro Leu Ala Leu Leu Ile Tyr Thr Ser Gly Ser
225 230 235 240
Thr Gly Thr Pro Lys Gly Ala Met Tyr Thr Glu Arg Leu Asn Arg Thr
245 250 255
Thr Trp Leu Ser Gly Ala Lys Gly Val Gly Leu Thr Leu Gly Tyr Met
260 265 270
Pro Met Ser His Ile Ala Gly Arg Ala Ser Phe Ala Gly Val Leu Ala
275 280 285
Arg Gly Gly Thr Val Tyr Phe Thr Ala Arg Ser Asp Met Ser Thr Leu
290 295 300
Phe Glu Asp Leu Ala Leu Val Arg Pro Thr Glu Met Phe Phe Val Pro
305 310 315 320
Arg Val Cys Asp Met Ile Phe Gln Arg Tyr Gln Ala Glu Leu Ser Arg
325 330 335
Arg Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ser Pro Glu Leu Glu Gln Glu Leu Lys
340 345 350
Thr Glu Leu Arg Leu Ser Ala Val Gly Asp Arg Leu Leu Gly Ala Ile
355 360 365
Ala Gly Ser Ala Pro Leu Ser Ala Glu Met Arg Glu Phe Met Glu Ser
370 375 380
Leu Leu Asp Leu Glu Leu His Asp Gly Tyr Gly Ser Thr Glu Ala Gly
385 390 395 400
Ile Gly Val Leu Gln Asp Asn Ile Val Gln Arg Pro Pro Val Ile Asp
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Tyr Lys Leu Val Asp Val Pro Glu Leu Gly Tyr Phe Arg Thr Asp Gln
420 425 430
Pro His Pro Arg Gly Glu Leu Leu Leu Lys Thr Glu Gly Met Ile Pro
435 440 445
Gly Tyr Phe Arg Arg Pro Glu Val Thr Ala Glu Ile Phe Asp Glu Asp
450 455 460
Gly Phe Tyr Arg Thr Gly Asp Ile Val Ala Glu Leu Glu Pro Asp Arg
465 470 475 480
Leu Ile Tyr Leu Asp Arg Arg Asn Asn Val Leu Lys Leu Ala Gln Gly
485 490 495
Glu Phe Val Thr Val Ala His Leu Glu Ala Val Phe Ala Thr Ser Pro
500 505 510
Leu Ile Arg Gln Ile Tyr Ile Tyr Gly Asn Ser Glu Arg Ser Phe Leu
515 520 525
Leu Ala Val Ile Val Pro Thr Ala Asp Ala Leu Ala Asp Gly Val Thr
530 535 540
Asp Ala Leu Asn Thr Ala Leu Thr Glu Ser Leu Arg Gln Leu Ala Lys
545 550 555 560
Glu Ala Gly Leu Gln Ser Tyr Glu Leu Pro Arg Glu Phe Leu Val Glu
565 570 575
Thr Glu Pro Phe Thr Val Glu Asn Gly Leu Leu Ser Gly Ile Ala Lys
580 585 590
Leu Leu Arg Pro Lys Leu Lys Glu His Tyr Gly Glu Arg Leu Glu Gln
595 600 605
Leu Tyr Arg Asp Ile Glu Ala Asn Arg Asn Asp Glu Leu Ile Glu Leu
610 615 620
Arg Arg Thr Ala Ala Glu Leu Pro Val Leu Glu Thr Val Thr Arg Ala
625 630 635 640
Ala Arg Ser Met Leu Gly Leu Ala Ala Ser Glu Leu Arg Pro Asp Ala
645 650 655
His Phe Thr Asp Leu Gly Gly Asp Ser Leu Ser Ala Leu Ser Phe Ser
660 665 670
Thr Leu Leu Gln Asp Met Leu Glu Val Glu Val Pro Val Gly Val Ile
675 680 685
Val Ser Pro Ala Asn Ser Leu Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Glu Ala
690 695 700
Glu Arg His Ser Gly Val Arg Arg Pro Ser Leu Ile Ser Val His Gly
705 710 715 720
Pro Gly Thr Glu Ile Arg Ala Ala Asp Leu Thr Leu Asp Lys Phe Ile
725 730 735
Asp Glu Arg Thr Leu Ala Ala Ala Lys Ala Val Pro Ala Ala Pro Ala
740 745 750
Gln Ala Gln Thr Val Leu Leu Thr Gly Ala Asn Gly Tyr Leu Gly Arg
755 760 765
Phe Leu Cys Leu Glu Trp Leu Gln Arg Leu Asp Gln Thr Gly Gly Thr
770 775 780
Leu Val Cys Ile Val Arg Gly Thr Asp Ala Ala Ala Ala Arg Lys Arg
785 790 795 800
Leu Asp Ala Val Phe Asp Ser Gly Asp Pro Glu Leu Leu Asp His Tyr
805 810 815
Arg Lys Leu Ala Ala Glu His Leu Glu Val Leu Ala Gly Asp Ile Gly
820 825 830
Asp Pro Asn Leu Gly Leu Asp Glu Ala Thr Trp Gln Arg Leu Ala Ala
835 840 845
Thr Val Asp Leu Ile Val His Pro Ala Ala Leu Val Asn His Val Leu
850 855 860
Pro Tyr Ser Gln Leu Phe Gly Pro Asn Val Val Gly Thr Ala Glu Ile
865 870 875 880
Ile Arg Leu Ala Ile Thr Glu Arg Arg Lys Pro Val Thr Tyr Leu Ser
885 890 895
Thr Val Ala Val Ala Ala Gln Val Asp Pro Ala Gly Phe Asp Glu Glu
900 905 910
Arg Asp Ile Arg Glu Met Ser Ala Val Arg Ser Ile Asp Ala Gly Tyr
915 920 925
Ala Asn Gly Tyr Gly Asn Ser Lys Trp Ala Gly Glu Val Leu Leu Arg
930 935 940
Glu Ala His Asp Leu Cys Gly Leu Pro Val Ala Val Phe Arg Ser Asp
945 950 955 960
Met Ile Leu Ala His Ser Lys Tyr Val Gly Gln Leu Asn Val Pro Asp
965 970 975
Val Phe Thr Arg Leu Ile Leu Ser Leu Ala Leu Thr Gly Ile Ala Pro
980 985 990
Tyr Ser Phe Tyr Gly Thr Asp Ser Ala Gly Gln Arg Arg Arg Ala His
995 1000 1005
Tyr Asp Gly Leu Pro Ala Asp Phe Val Ala Glu Ala Ile Thr Thr
1010 1015 1020
Leu Gly Ala Arg Ala Glu Ser Gly Phe His Thr Tyr Asp Val Trp
1025 1030 1035
Asn Pro Tyr Asp Asp Gly Ile Ser Leu Asp Glu Phe Val Asp Trp
1040 1045 1050
Leu Gly Asp Phe Gly Val Pro Ile Gln Arg Ile Asp Asp Tyr Asp
1055 1060 1065
Glu Trp Phe Arg Arg Phe Glu Thr Ala Ile Arg Ala Leu Pro Glu
1070 1075 1080
Lys Gln Arg Asp Ala Ser Leu Leu Pro Leu Leu Asp Ala His Arg
1085 1090 1095
Arg Pro Leu Arg Ala Val Arg Gly Ser Leu Leu Pro Ala Lys Asn
1100 1105 1110
Phe Gln Ala Ala Val Gln Ser Ala Arg Ile Gly Pro Asp Gln Asp
1115 1120 1125
Ile Pro His Leu Ser Pro Gln Leu Ile Asp Lys Tyr Val Thr Asp
1130 1135 1140
Leu Arg His Leu Gly Leu Leu
1145 1150
<210> 19
<211> 3501
<212> DNA
<213> 巴西诺卡氏菌
<400> 19
atggcgactg attcgcgaag cgatcggcta cggcgtcgaa ttgcacagtt gttcgccgag 60
gacgagcagg tgaaagccgc ggtgccggac caggaggtgg tcgaggcgat ccgggcgccc 120
ggcctgcgcc tggcacagat catggccacc gtgatggagc gctatgcgga ccgccccgcg 180
gtgggacagc gggcgagcga gccggtcacc gagagcggtc gcaccacctt ccggctgctc 240
ccggaattcg agaccctgac ctaccgcgag ctgtgggcgc gcgtccgcgc ggtggccgcc 300
gcgtggcacg gagatgccga aaggcctttg cgggccgggg atttcgttgc tctgctgggt 360
ttcgccggca tcgattacgg caccctcgat ctcgcgaaca tccatctcgg cctcgtcacg 420
gtgccgctgc aatccggcgc cacggccccg caactcgccg cgatcctggc cgagaccacg 480
ccccgggtgc tggccgcgac acccgaccat ctcgatatcg ccgtcgaatt gctgaccggg 540
ggagcctcgc cggaacggct ggtggtattc gactaccgcc ccgcggacga cgatcaccgg 600
gcggcgctcg agtccgcgcg cagacggttg agcgacgcgg gcagtgcggt ggtggtcgag 660
acgctcgacg cggtccgcgc ccgcggcagc gaattgccgg ccgcgccgct gttcgttccc 720
gccgcggacg aggacccgct ggctctgctc atctacacct ccggcagcac cggcacgcct 780
aagggcgcca tgtacaccga aagactgaac cgcacgacgt ggctgagcgg ggcgaaaggc 840
gtcggcctca cgctcggcta catgccgatg agtcatattg ccgggcgggc ctcgttcgcc 900
ggtgtgctgg cccgcggcgg cacggtctac ttcaccgccc gcagcgatat gtcgacgctg 960
ttcgaagatc tggccctggt gcggccgacc gagatgttct tcgtcccgcg cgtgtgcgac 1020
atgatcttcc agcgctatca ggccgaactg tcgcggcgcg cgcccgccgc ggccgcgagc 1080
ccggaactcg agcaggaact gaagaccgaa ctgcgcttgt ccgcggtcgg ggaccgctta 1140
ctcggggcga tcgcgggcag cgcgccgctg tcggccgaga tgcgggagtt catggagtcg 1200
ctgctggatc tggaactgca cgacggctac ggctcgaccg aggcgggtat cggcgtactg 1260
caagacaata tcgtccagcg tccgccggtc atcgattaca agctcgtcga cgtgccggaa 1320
ttgggctact tccggacgga ccagccgcat ccccgcggtg agttgctgtt gaaaaccgaa 1380
gggatgattc cgggctactt ccggcggccc gaggtgaccg cggagatctt cgacgaggac 1440
ggtttctaca ggaccggtga catcgtcgcc gaactcgaac cggatcggct gatctacctg 1500
gaccgccgca acaatgtgct gaaactggcc cagggcgagt tcgtcacggt cgcccatctg 1560
gaagcggtgt tcgcgaccag tccgctgatc cggcagatct acatctacgg caacagcgag 1620
cgctcgttcc tgctggcggt gatcgtgccc accgcggacg cgctggccga cggtgtcacc 1680
gacgcgctga acacggcgct gaccgaatcc ttgcgacagc tcgcgaaaga agccgggctg 1740
caatcctatg agctgccgcg cgagttcctg gtcgaaaccg aaccgttcac cgtcgagaac 1800
ggtctgctct ccggtatcgc gaaactgttg cggcccaagc tcaaggagca ctacggcgag 1860
cgactcgagc agctgtaccg cgatatcgag gcgaaccgca acgacgagct gatcgagctg 1920
cggcgcaccg cggccgagct gccggtgctc gaaaccgtca cgcgggctgc acgttcgatg 1980
ctcggactgg ccgcgtcgga gttgcggccg gacgcgcatt tcaccgatct cggcggtgat 2040
tcactgtccg cgctgtcgtt ttcgaccctg ctgcaggaca tgctcgaggt cgaggtcccg 2100
gtcggtgtca tcgtgagccc cgccaactcg ctcgccgatc tggcgaaata catcgaggcc 2160
gaacggcatt cgggggtgcg gcggccgagc ctgatctcgg tgcacggtcc cggcaccgag 2220
atccgtgccg ccgatctcac cctggacaag ttcatcgacg agcgcaccct cgctgccgcg 2280
aaagcggttc cggccgcgcc ggcccaggcg cagaccgtcc tgctcaccgg ggcgaacggc 2340
tatctcggcc gcttcctgtg cctggaatgg ctgcagcgac tggaccagac cggcggcacg 2400
ctggtctgca tcgtgcgcgg taccgacgcg gccgccgcgc ggaagcgcct ggatgcggtg 2460
ttcgacagcg gtgatccgga gctgctcgac cactaccgga agctggccgc cgagcacctc 2520
gaggtgctcg cgggcgatat cggcgacccg aatctcggcc tggacgaagc gacttggcag 2580
cggctcgccg cgaccgtcga cctgatcgtg caccccgccg ccctcgtcaa ccatgtgctg 2640
ccgtacagcc agctgttcgg gccgaatgtg gtcggcaccg ccgagatcat ccggctggcc 2700
atcaccgagc gccgtaagcc cgtgacgtac ctgtcgacgg tcgcggtggc cgcacaggtc 2760
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gaggcccatg atctgtgcgg gctgccggtc gccgtgttcc gctcggacat gatcctggcg 2940
cacagcaaat acgtcggtca gctcaacgtc cccgatgtgt tcacccggct catcctgagc 3000
ctggcgctca ccggcatcgc accgtattcg ttctacggga cggacagcgc cgggcagcgc 3060
aggcgggccc actacgacgg tctgcccgcc gatttcgtcg ccgaggcgat caccaccctc 3120
ggcgcgcgag ccgagtcggg gttccatacc tacgacgtgt ggaacccgta cgacgacggc 3180
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cagcgcgatg cttcgctgct accgctgctg gacgcacacc ggcggccact gcgcgcggtg 3360
cgcggttcgc tgttgcccgc caagaacttc caggcggcgg tgcagtccgc gcggatcggc 3420
cccgatcagg acatcccgca tctttccccg cagttgatcg acaagtacgt caccgacctg 3480
cgccacctcg gcctgctctg a 3501
<210> 20
<211> 1166
<212> PRT
<213> 巴西诺卡氏菌
<400> 20
Met Ala Thr Asp Ser Arg Ser Asp Arg Leu Arg Arg Arg Ile Ala Gln
1 5 10 15
Leu Phe Ala Glu Asp Glu Gln Val Lys Ala Ala Val Pro Asp Gln Glu
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Val Val Glu Ala Ile Arg Ala Pro Gly Leu Arg Leu Ala Gln Ile Met
35 40 45
Ala Thr Val Met Glu Arg Tyr Ala Asp Arg Pro Ala Val Gly Gln Arg
50 55 60
Ala Ser Glu Pro Val Thr Glu Ser Gly Arg Thr Thr Phe Arg Leu Leu
65 70 75 80
Pro Glu Phe Glu Thr Leu Thr Tyr Arg Glu Leu Trp Ala Arg Val Arg
85 90 95
Ala Val Ala Ala Ala Trp His Gly Asp Ala Glu Arg Pro Leu Arg Ala
100 105 110
Gly Asp Phe Val Ala Leu Leu Gly Phe Ala Gly Ile Asp Tyr Gly Thr
115 120 125
Leu Asp Leu Ala Asn Ile His Leu Gly Leu Val Thr Val Pro Leu Gln
130 135 140
Ser Gly Ala Thr Ala Pro Gln Leu Ala Ala Ile Leu Ala Glu Thr Thr
145 150 155 160
Pro Arg Val Leu Ala Ala Thr Pro Asp His Leu Asp Ile Ala Val Glu
165 170 175
Leu Leu Thr Gly Gly Ala Ser Pro Glu Arg Leu Val Val Phe Asp Tyr
180 185 190
Arg Pro Ala Asp Asp Asp His Arg Ala Ala Leu Glu Ser Ala Arg Arg
195 200 205
Arg Leu Ser Asp Ala Gly Ser Ala Val Val Val Glu Thr Leu Asp Ala
210 215 220
Val Arg Ala Arg Gly Ser Glu Leu Pro Ala Ala Pro Leu Phe Val Pro
225 230 235 240
Ala Ala Asp Glu Asp Pro Leu Ala Leu Leu Ile Tyr Thr Ser Gly Ser
245 250 255
Thr Gly Thr Pro Lys Gly Ala Met Tyr Thr Glu Arg Leu Asn Arg Thr
260 265 270
Thr Trp Leu Ser Gly Ala Lys Gly Val Gly Leu Thr Leu Gly Tyr Met
275 280 285
Pro Met Ser His Ile Ala Gly Arg Ala Ser Phe Ala Gly Val Leu Ala
290 295 300
Arg Gly Gly Thr Val Tyr Phe Thr Ala Arg Ser Asp Met Ser Thr Leu
305 310 315 320
Phe Glu Asp Leu Ala Leu Val Arg Pro Thr Glu Met Phe Phe Val Pro
325 330 335
Arg Val Cys Asp Met Ile Phe Gln Arg Tyr Gln Ala Glu Leu Ser Arg
340 345 350
Arg Ala Pro Ala Ala Ala Ala Ser Pro Glu Leu Glu Gln Glu Leu Lys
355 360 365
Thr Glu Leu Arg Leu Ser Ala Val Gly Asp Arg Leu Leu Gly Ala Ile
370 375 380
Ala Gly Ser Ala Pro Leu Ser Ala Glu Met Arg Glu Phe Met Glu Ser
385 390 395 400
Leu Leu Asp Leu Glu Leu His Asp Gly Tyr Gly Ser Thr Glu Ala Gly
405 410 415
Ile Gly Val Leu Gln Asp Asn Ile Val Gln Arg Pro Pro Val Ile Asp
420 425 430
Tyr Lys Leu Val Asp Val Pro Glu Leu Gly Tyr Phe Arg Thr Asp Gln
435 440 445
Pro His Pro Arg Gly Glu Leu Leu Leu Lys Thr Glu Gly Met Ile Pro
450 455 460
Gly Tyr Phe Arg Arg Pro Glu Val Thr Ala Glu Ile Phe Asp Glu Asp
465 470 475 480
Gly Phe Tyr Arg Thr Gly Asp Ile Val Ala Glu Leu Glu Pro Asp Arg
485 490 495
Leu Ile Tyr Leu Asp Arg Arg Asn Asn Val Leu Lys Leu Ala Gln Gly
500 505 510
Glu Phe Val Thr Val Ala His Leu Glu Ala Val Phe Ala Thr Ser Pro
515 520 525
Leu Ile Arg Gln Ile Tyr Ile Tyr Gly Asn Ser Glu Arg Ser Phe Leu
530 535 540
Leu Ala Val Ile Val Pro Thr Ala Asp Ala Leu Ala Asp Gly Val Thr
545 550 555 560
Asp Ala Leu Asn Thr Ala Leu Thr Glu Ser Leu Arg Gln Leu Ala Lys
565 570 575
Glu Ala Gly Leu Gln Ser Tyr Glu Leu Pro Arg Glu Phe Leu Val Glu
580 585 590
Thr Glu Pro Phe Thr Val Glu Asn Gly Leu Leu Ser Gly Ile Ala Lys
595 600 605
Leu Leu Arg Pro Lys Leu Lys Glu His Tyr Gly Glu Arg Leu Glu Gln
610 615 620
Leu Tyr Arg Asp Ile Glu Ala Asn Arg Asn Asp Glu Leu Ile Glu Leu
625 630 635 640
Arg Arg Thr Ala Ala Glu Leu Pro Val Leu Glu Thr Val Thr Arg Ala
645 650 655
Ala Arg Ser Met Leu Gly Leu Ala Ala Ser Glu Leu Arg Pro Asp Ala
660 665 670
His Phe Thr Asp Leu Gly Gly Asp Ser Leu Ser Ala Leu Ser Phe Ser
675 680 685
Thr Leu Leu Gln Asp Met Leu Glu Val Glu Val Pro Val Gly Val Ile
690 695 700
Val Ser Pro Ala Asn Ser Leu Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Glu Ala
705 710 715 720
Glu Arg His Ser Gly Val Arg Arg Pro Ser Leu Ile Ser Val His Gly
725 730 735
Pro Gly Thr Glu Ile Arg Ala Ala Asp Leu Thr Leu Asp Lys Phe Ile
740 745 750
Asp Glu Arg Thr Leu Ala Ala Ala Lys Ala Val Pro Ala Ala Pro Ala
755 760 765
Gln Ala Gln Thr Val Leu Leu Thr Gly Ala Asn Gly Tyr Leu Gly Arg
770 775 780
Phe Leu Cys Leu Glu Trp Leu Gln Arg Leu Asp Gln Thr Gly Gly Thr
785 790 795 800
Leu Val Cys Ile Val Arg Gly Thr Asp Ala Ala Ala Ala Arg Lys Arg
805 810 815
Leu Asp Ala Val Phe Asp Ser Gly Asp Pro Glu Leu Leu Asp His Tyr
820 825 830
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835 840 845
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850 855 860
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900 905 910
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Ala Asn Gly Tyr Gly Asn Ser Lys Trp Ala Gly Glu Val Leu Leu Arg
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Glu Ala His Asp Leu Cys Gly Leu Pro Val Ala Val Phe Arg Ser Asp
965 970 975
Met Ile Leu Ala His Ser Lys Tyr Val Gly Gln Leu Asn Val Pro Asp
980 985 990
Val Phe Thr Arg Leu Ile Leu Ser Leu Ala Leu Thr Gly Ile Ala Pro
995 1000 1005
Tyr Ser Phe Tyr Gly Thr Asp Ser Ala Gly Gln Arg Arg Arg Ala
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Asp Glu Trp Phe Arg Arg Phe Glu Thr Ala Ile Arg Ala Leu Pro
1085 1090 1095
Glu Lys Gln Arg Asp Ala Ser Leu Leu Pro Leu Leu Asp Ala His
1100 1105 1110
Arg Arg Pro Leu Arg Ala Val Arg Gly Ser Leu Leu Pro Ala Lys
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Asn Phe Gln Ala Ala Val Gln Ser Ala Arg Ile Gly Pro Asp Gln
1130 1135 1140
Asp Ile Pro His Leu Ser Pro Gln Leu Ile Asp Lys Tyr Val Thr
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Asp Leu Arg His Leu Gly Leu Leu
1160 1165
<210> 21
<211> 621
<212> DNA
<213> 大肠杆菌
<400> 21
atgaaaacta cgcatacctc cctccccttt gccggacata cgctgcattt tgttgagttc 60
gatccggcga atttttgtga gcaggattta ctctggctgc cgcactacgc acaactgcaa 120
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ttgcgggaat atggctataa atgtgtgccc gcaatcggcg agctacgcca acctgtctgg 240
cctgcggagg tatacggcag tattagccac tgtgggacta cggcattagc cgtggtatct 300
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acagacaaca ttattacacc agcggaacac gagcgactcg cagactgcgg tttagccttt 420
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caaactgatg caggttttct ggactatcag ataattagct ggaataaaca gcaggtcatc 540
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<210> 22
<211> 206
<212> PRT
<213> 大肠杆菌
<400> 22
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Phe Val Glu Phe Asp Pro Ala Asn Phe Cys Glu Gln Asp Leu Leu Trp
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Leu Pro His Tyr Ala Gln Leu Gln His Ala Gly Arg Lys Arg Lys Thr
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Glu His Leu Ala Gly Arg Ile Ala Ala Val Tyr Ala Leu Arg Glu Tyr
50 55 60
Gly Tyr Lys Cys Val Pro Ala Ile Gly Glu Leu Arg Gln Pro Val Trp
65 70 75 80
Pro Ala Glu Val Tyr Gly Ser Ile Ser His Cys Gly Thr Thr Ala Leu
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Ala Val Val Ser Arg Gln Pro Ile Gly Ile Asp Ile Glu Glu Ile Phe
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Ser Val Gln Thr Ala Arg Glu Leu Thr Asp Asn Ile Ile Thr Pro Ala
115 120 125
Glu His Glu Arg Leu Ala Asp Cys Gly Leu Ala Phe Ser Leu Ala Leu
130 135 140
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<210> 23
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<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 23
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aaggatgttt tgggttcaat cgctcgggtg ggggagattc ctcaacttaa gcgcttggag 420
gaacaaggtg tgcactgcgc ggatcgcctg ctgttttgtg ccaaggaagc aacatacaaa 480
gcgtggttcc cgctgacgca taggtggctt ggttttgaac aagctgagat cgacttgcgt 540
gatgatggca cttttgtgtc ctatttgctg gttcgaccaa ctccagtgcc gtttatttca 600
ggtaaatggg tactgcgtga tggttatgtc atagctgcga ctgcagtgac ttga 654
<210> 24
<211> 217
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 24
Met Leu Asp Glu Ser Leu Phe Pro Asn Ser Ala Lys Phe Ser Phe Ile
1 5 10 15
Lys Thr Gly Asp Ala Val Asn Leu Asp His Phe His Gln Leu His Pro
20 25 30
Leu Glu Lys Ala Leu Val Ala His Ser Val Asp Ile Arg Lys Ala Glu
35 40 45
Phe Gly Asp Ala Arg Trp Cys Ala His Gln Ala Leu Gln Ala Leu Gly
50 55 60
Arg Asp Ser Gly Asp Pro Ile Leu Arg Gly Glu Arg Gly Met Pro Leu
65 70 75 80
Trp Pro Ser Ser Val Ser Gly Ser Leu Thr His Thr Asp Gly Phe Arg
85 90 95
Ala Ala Val Val Ala Pro Arg Leu Leu Val Arg Ser Met Gly Leu Asp
100 105 110
Ala Glu Pro Ala Glu Pro Leu Pro Lys Asp Val Leu Gly Ser Ile Ala
115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Ala Trp Phe Pro Leu Thr His Arg Trp Leu Gly Phe Glu Gln Ala Glu
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180 185 190
Pro Thr Pro Val Pro Phe Ile Ser Gly Lys Trp Val Leu Arg Asp Gly
195 200 205
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<211> 1428
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 25
atgcgcctgc gtgtctcgag tagtctcctc cccttcctcg tccccaacct cgaccattac 60
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ggcagccagc ttggtgtgct gctgagttcc gcgctgttcg gcatgaccgc tggatctttg 300
ctgttcggtc cgatcggtga ccgtttcggc cgtaagaatg ccctgatgat cgcgctgctg 360
ttcaacgtgg tgggattggt attgtccgcc accgcgcagt ccgcaggcca gttgggcgtg 420
tggcgtttga tcactggtat cggcatcggc ggaatcctcg cctgcatcac agtggtgatc 480
agtgagttct ccaacaacaa aaaccgcggc atggccatgt ccatctacgc tgctggttac 540
ggcatcggcg cgtccttggg cggattcggc gcagcgcagc tcatcccaac atttggatgg 600
cgctccgtgt tcgcagccgg tgcgatcgca actggtatcg ccaccatcgc tactttcttc 660
ttcctgccag aatccgttga ttggctgagc actcgccgcc ctgcgggcgc tcgcgacaag 720
atcaattaca ttgcgcgccg cctgggcaaa gtcggtacct ttgagcttcc aggcgaacaa 780
agcttgtcga cgaaaaaagc cggtctccaa tcgtatgcag tgctcgttaa caaagagaac 840
cgtggaacca gcatcaagct gtgggttgcg ttcggcatcg tgatgttcgg cttctacttc 900
gccaacactt ggaccccgaa gctgctcgtg gaaaccggaa tgtcagaaca gcagggcatc 960
atcggtggtt tgatgttgtc catgggtgga gcattcggtt ccctgctcta cggtttcctc 1020
accaccaagt tcagctcccg aaacacactg atgaccttca tggtgctgtc cggcctgacg 1080
ctgatcctgt tcatttcctc cacctctgtt ccatccatcg cgtttgccag cggcgttgtc 1140
gtgggcatgc tgatcaatgg ttgtgtggct ggtctgtaca ccctgtcccc acagctgtac 1200
tccgctgaag tacgcaccac tggtgtgggc gctgcgattg gtatgggtcg tgtcggtgcg 1260
atttccgcgc cactgctggt gggtagcctg ctggattctg gctggtcccc aacgcagctg 1320
tatgttggtg tggcagtgat tgttattgcc ggtgcaaccg cattgattgg gatgcgcact 1380
caggcagtag ccgtcgaaaa gcagcctgaa gccctagcga ccaaatag 1428
<210> 26
<211> 475
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 26
Met Arg Leu Arg Val Ser Ser Ser Leu Leu Pro Phe Leu Val Pro Asn
1 5 10 15
Leu Asp His Tyr Gly Arg Pro Leu Leu Lys Glu Pro Gly Met Asp Ile
20 25 30
Arg Gln Thr Ile Asn Asp Thr Ala Met Ser Arg Tyr Gln Trp Phe Ile
35 40 45
Val Phe Ile Ala Val Leu Leu Asn Ala Leu Asp Gly Phe Asp Val Leu
50 55 60
Ala Met Ser Phe Thr Ala Asn Ala Val Thr Glu Glu Phe Gly Leu Ser
65 70 75 80
Gly Ser Gln Leu Gly Val Leu Leu Ser Ser Ala Leu Phe Gly Met Thr
85 90 95
Ala Gly Ser Leu Leu Phe Gly Pro Ile Gly Asp Arg Phe Gly Arg Lys
100 105 110
Asn Ala Leu Met Ile Ala Leu Leu Phe Asn Val Val Gly Leu Val Leu
115 120 125
Ser Ala Thr Ala Gln Ser Ala Gly Gln Leu Gly Val Trp Arg Leu Ile
130 135 140
Thr Gly Ile Gly Ile Gly Gly Ile Leu Ala Cys Ile Thr Val Val Ile
145 150 155 160
Ser Glu Phe Ser Asn Asn Lys Asn Arg Gly Met Ala Met Ser Ile Tyr
165 170 175
Ala Ala Gly Tyr Gly Ile Gly Ala Ser Leu Gly Gly Phe Gly Ala Ala
180 185 190
Gln Leu Ile Pro Thr Phe Gly Trp Arg Ser Val Phe Ala Ala Gly Ala
195 200 205
Ile Ala Thr Gly Ile Ala Thr Ile Ala Thr Phe Phe Phe Leu Pro Glu
210 215 220
Ser Val Asp Trp Leu Ser Thr Arg Arg Pro Ala Gly Ala Arg Asp Lys
225 230 235 240
Ile Asn Tyr Ile Ala Arg Arg Leu Gly Lys Val Gly Thr Phe Glu Leu
245 250 255
Pro Gly Glu Gln Ser Leu Ser Thr Lys Lys Ala Gly Leu Gln Ser Tyr
260 265 270
Ala Val Leu Val Asn Lys Glu Asn Arg Gly Thr Ser Ile Lys Leu Trp
275 280 285
Val Ala Phe Gly Ile Val Met Phe Gly Phe Tyr Phe Ala Asn Thr Trp
290 295 300
Thr Pro Lys Leu Leu Val Glu Thr Gly Met Ser Glu Gln Gln Gly Ile
305 310 315 320
Ile Gly Gly Leu Met Leu Ser Met Gly Gly Ala Phe Gly Ser Leu Leu
325 330 335
Tyr Gly Phe Leu Thr Thr Lys Phe Ser Ser Arg Asn Thr Leu Met Thr
340 345 350
Phe Met Val Leu Ser Gly Leu Thr Leu Ile Leu Phe Ile Ser Ser Thr
355 360 365
Ser Val Pro Ser Ile Ala Phe Ala Ser Gly Val Val Val Gly Met Leu
370 375 380
Ile Asn Gly Cys Val Ala Gly Leu Tyr Thr Leu Ser Pro Gln Leu Tyr
385 390 395 400
Ser Ala Glu Val Arg Thr Thr Gly Val Gly Ala Ala Ile Gly Met Gly
405 410 415
Arg Val Gly Ala Ile Ser Ala Pro Leu Leu Val Gly Ser Leu Leu Asp
420 425 430
Ser Gly Trp Ser Pro Thr Gln Leu Tyr Val Gly Val Ala Val Ile Val
435 440 445
Ile Ala Gly Ala Thr Ala Leu Ile Gly Met Arg Thr Gln Ala Val Ala
450 455 460
Val Glu Lys Gln Pro Glu Ala Leu Ala Thr Lys
465 470 475
<210> 27
<211> 1296
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 27
gtgtcaacga ccaccccaac ccgcgcaacc aaaagtgtcg gaacagttct cgcactcctg 60
tggttcgcaa ttgtcctcga cggctttgac ctagtcgtcc tgggcgcaac aatcccgtcc 120
atgctggagg atcccgcgtg ggatctcact gctggacagg ccacacagat ttccaccatc 180
ggcctcgtcg gcatgaccat cggcgcactg accattggtt tcttaactga ccgtctgggt 240
cgacgccgcg tcatgctgtt ctctgtggca gtgttttctg tattcaccct cctgctggca 300
ttcaccacca acgtccagct cttcagcctg tggcgtttcc tcgcaggtgt tggccttggt 360
ggagcactcc ccaccgcaat tgccatggtg accgagtttc gccccggcac caaagcgggc 420
tctgcatcaa ctaccttgat gaccggatac cacgtcgggg cagtagcaac cgctttcctt 480
ggtctcttcc ttatcgacgg ctttggttgg cactccatgt tcatcgcagg cgctgtgcca 540
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atctccggca agttggatga ggcgcaggca gttgcagcat cttatggact ttccctggat 660
gatgatcttg atcgcgaaca cgaagaagaa cttggcgagt cctcctcact ttcctccctg 720
ttcaagccct cgttccgccg caacaccctg gcgatttggg gcacctcatt catgggactc 780
ctcctggtct acggcctgaa cacatggctg ccacaaatca tgcgccaagc agactacgac 840
atgggtaact ccctgggctt cctcatggtt cttaacatcg gcgcagtgat cggcctttat 900
attgcagggc gaattgccga taagaactcc cctcgcaaaa cagcactcgt atggttcgtg 960
ttctctgcat ttttcctcgc actacttgct gtccggatgc cactgatcgg tctgtatggc 1020
atcgtgctgc tcaccggcat ctttgtgttc agctcccagg tactcatcta cgccttcgtt 1080
ggtgagaatc accctgccaa gatgcgtgca actgccatgg gattctccgc aggaattggt 1140
cgcctcggcg cgatctcggg tccgttgctg ggcggcctgc ttgtcagtgc caaccttgct 1200
tacccatggg gcttcttcgc cttcgctggc gttggactgc tgggcgcgct gattttctcc 1260
gcatcgaaga ctctgaggca tcgcgagaac gcttag 1296
<210> 28
<211> 431
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 28
Met Ser Thr Thr Thr Pro Thr Arg Ala Thr Lys Ser Val Gly Thr Val
1 5 10 15
Leu Ala Leu Leu Trp Phe Ala Ile Val Leu Asp Gly Phe Asp Leu Val
20 25 30
Val Leu Gly Ala Thr Ile Pro Ser Met Leu Glu Asp Pro Ala Trp Asp
35 40 45
Leu Thr Ala Gly Gln Ala Thr Gln Ile Ser Thr Ile Gly Leu Val Gly
50 55 60
Met Thr Ile Gly Ala Leu Thr Ile Gly Phe Leu Thr Asp Arg Leu Gly
65 70 75 80
Arg Arg Arg Val Met Leu Phe Ser Val Ala Val Phe Ser Val Phe Thr
85 90 95
Leu Leu Leu Ala Phe Thr Thr Asn Val Gln Leu Phe Ser Leu Trp Arg
100 105 110
Phe Leu Ala Gly Val Gly Leu Gly Gly Ala Leu Pro Thr Ala Ile Ala
115 120 125
Met Val Thr Glu Phe Arg Pro Gly Thr Lys Ala Gly Ser Ala Ser Thr
130 135 140
Thr Leu Met Thr Gly Tyr His Val Gly Ala Val Ala Thr Ala Phe Leu
145 150 155 160
Gly Leu Phe Leu Ile Asp Gly Phe Gly Trp His Ser Met Phe Ile Ala
165 170 175
Gly Ala Val Pro Gly Leu Leu Leu Leu Pro Leu Leu Tyr Phe Phe Leu
180 185 190
Pro Glu Ser Pro Gln Tyr Leu Lys Ile Ser Gly Lys Leu Asp Glu Ala
195 200 205
Gln Ala Val Ala Ala Ser Tyr Gly Leu Ser Leu Asp Asp Asp Leu Asp
210 215 220
Arg Glu His Glu Glu Glu Leu Gly Glu Ser Ser Ser Leu Ser Ser Leu
225 230 235 240
Phe Lys Pro Ser Phe Arg Arg Asn Thr Leu Ala Ile Trp Gly Thr Ser
245 250 255
Phe Met Gly Leu Leu Leu Val Tyr Gly Leu Asn Thr Trp Leu Pro Gln
260 265 270
Ile Met Arg Gln Ala Asp Tyr Asp Met Gly Asn Ser Leu Gly Phe Leu
275 280 285
Met Val Leu Asn Ile Gly Ala Val Ile Gly Leu Tyr Ile Ala Gly Arg
290 295 300
Ile Ala Asp Lys Asn Ser Pro Arg Lys Thr Ala Leu Val Trp Phe Val
305 310 315 320
Phe Ser Ala Phe Phe Leu Ala Leu Leu Ala Val Arg Met Pro Leu Ile
325 330 335
Gly Leu Tyr Gly Ile Val Leu Leu Thr Gly Ile Phe Val Phe Ser Ser
340 345 350
Gln Val Leu Ile Tyr Ala Phe Val Gly Glu Asn His Pro Ala Lys Met
355 360 365
Arg Ala Thr Ala Met Gly Phe Ser Ala Gly Ile Gly Arg Leu Gly Ala
370 375 380
Ile Ser Gly Pro Leu Leu Gly Gly Leu Leu Val Ser Ala Asn Leu Ala
385 390 395 400
Tyr Pro Trp Gly Phe Phe Ala Phe Ala Gly Val Gly Leu Leu Gly Ala
405 410 415
Leu Ile Phe Ser Ala Ser Lys Thr Leu Arg His Arg Glu Asn Ala
420 425 430
<210> 29
<211> 1131
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 29
atgacactgt ccgaacgcaa gctcaccacc accgccaaga ttcttcccca cccactcaac 60
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tccgtgacgg tcacccgctg gatgcatgac atagatgcac caccgttttg gcaaaagaac 660
atgaatgata agttcccagg atttgaaggc aaggtggatc gttggcagat catccactac 720
tactaccctt ccaccatctg cattgatgtt ggtgtagcaa aggctggaac cggcgcgcag 780
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ctggatatcc ccaccacatt cccccgcgca acaccgaagc cggaggcata a 1131
<210> 30
<211> 376
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 30
Met Thr Leu Ser Glu Arg Lys Leu Thr Thr Thr Ala Lys Ile Leu Pro
1 5 10 15
His Pro Leu Asn Ala Trp Tyr Val Ala Ala Trp Asp Tyr Glu Val Thr
20 25 30
Ser Lys Lys Pro Met Ala Arg Thr Ile Ala Asn Lys Pro Leu Ala Leu
35 40 45
Tyr Arg Thr Lys Asp Gly Arg Ala Val Ala Leu Ala Asp Ala Cys Trp
50 55 60
His Arg Leu Ala Pro Leu Ser Lys Gly Lys Leu Val Gly Thr Asp Gly
65 70 75 80
Ile Gln Cys Pro Tyr His Gly Leu Glu Tyr Asn Ser Ala Gly Arg Cys
85 90 95
Met Lys Met Pro Ala Gln Glu Thr Leu Asn Pro Ser Ala Ala Val Asn
100 105 110
Ser Tyr Pro Val Val Glu Ala His Arg Phe Val Trp Val Trp Leu Gly
115 120 125
Asp Pro Thr Leu Ala Asp Pro Thr Gln Val Pro Asp Met His Gln Met
130 135 140
Ser His Pro Glu Trp Ala Gly Asp Gly Arg Thr Ile Ser Ala Asp Cys
145 150 155 160
Asn Tyr Gln Leu Val Leu Asp Asn Leu Met Asp Leu Thr His Glu Glu
165 170 175
Phe Val His Ser Ser Ser Ile Gly Gln Asp Glu Leu Ser Glu Ser Glu
180 185 190
Phe Val Val Thr His Thr Glu Asp Ser Val Thr Val Thr Arg Trp Met
195 200 205
His Asp Ile Asp Ala Pro Pro Phe Trp Gln Lys Asn Met Asn Asp Lys
210 215 220
Phe Pro Gly Phe Glu Gly Lys Val Asp Arg Trp Gln Ile Ile His Tyr
225 230 235 240
Tyr Tyr Pro Ser Thr Ile Cys Ile Asp Val Gly Val Ala Lys Ala Gly
245 250 255
Thr Gly Ala Gln Glu Gly Asp Arg Ser Gln Gly Val Asn Gly Tyr Val
260 265 270
Met Asn Thr Ile Thr Pro Asp Ser Asp Arg Ser Ser His Tyr Phe Trp
275 280 285
Ala Phe Met Arg Asn Tyr Arg Leu Glu Ser Gln Thr Ile Thr Thr Gln
290 295 300
Leu Arg Asp Gly Val Ser Gly Val Phe Lys Glu Asp Glu Asp Met Leu
305 310 315 320
Thr Ala Gln Gln Asp Ala Ile Asp Ala Asn Thr Asp Tyr Glu Phe Tyr
325 330 335
Ser Leu Asn Ile Asp Ala Gly Gly Met Trp Val Arg Arg Ile Leu Glu
340 345 350
Glu Ala Leu Ser Lys Glu Gly Arg Leu Asp Ile Pro Thr Thr Phe Pro
355 360 365
Arg Ala Thr Pro Lys Pro Glu Ala
370 375
<210> 31
<211> 978
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 31
atgaactcgc aatggcaaga tgcacatgtt gtttccagcg aaatcatcgc tgcagacatt 60
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gagttcatgc atacgcttcg agctggagac acagttactg tctccaggcc gtctcaggat 300
tttcctctcc gcgtgggtgc gcctgagtat gtacttgttg ccggcggaat tggaatcaca 360
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cggcgcgcat ggaacacccg cggacttgac cccaccaatc tgcgtttcga aacgtttgga 660
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acggtcgccc tctcctaa 978
<210> 32
<211> 325
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 32
Met Asn Ser Gln Trp Gln Asp Ala His Val Val Ser Ser Glu Ile Ile
1 5 10 15
Ala Ala Asp Ile Arg Arg Ile Glu Leu Ser Pro Lys Phe Ala Ile Pro
20 25 30
Val Lys Pro Gly Glu His Leu Lys Ile Met Val Pro Leu Lys Thr Gly
35 40 45
Gln Glu Lys Arg Ser Tyr Ser Ile Val Asp Ala Arg His Asp Gly Ser
50 55 60
Thr Leu Ala Leu Ser Val Leu Lys Thr Arg Asn Ser Arg Gly Gly Ser
65 70 75 80
Glu Phe Met His Thr Leu Arg Ala Gly Asp Thr Val Thr Val Ser Arg
85 90 95
Pro Ser Gln Asp Phe Pro Leu Arg Val Gly Ala Pro Glu Tyr Val Leu
100 105 110
Val Ala Gly Gly Ile Gly Ile Thr Ala Ile Arg Ser Met Ala Ser Leu
115 120 125
Leu Lys Lys Leu Gly Ala Asn Tyr Arg Ile His Phe Ala Ala Arg Ser
130 135 140
Leu Asp Ala Met Ala Tyr Lys Asp Glu Leu Val Ala Glu His Gly Asp
145 150 155 160
Lys Leu His Leu His Leu Asp Ser Glu Gly Thr Thr Ile Asp Val Pro
165 170 175
Ala Leu Ile Glu Thr Leu Asn Pro His Thr Glu Leu Tyr Met Cys Gly
180 185 190
Pro Ile Arg Leu Met Asp Ala Ile Arg Arg Ala Trp Asn Thr Arg Gly
195 200 205
Leu Asp Pro Thr Asn Leu Arg Phe Glu Thr Phe Gly Asn Ser Gly Trp
210 215 220
Phe Ser Pro Glu Val Phe His Ile Gln Val Pro Glu Leu Gly Leu His
225 230 235 240
Ala Thr Val Asn Lys Asp Glu Ser Met Leu Glu Ala Leu Gln Lys Ala
245 250 255
Gly Ala Asn Met Met Phe Asp Cys Arg Lys Gly Glu Cys Gly Leu Cys
260 265 270
Gln Val Arg Val Leu Glu Val Asp Gly Gln Val Asp His Arg Asp Val
275 280 285
Phe Phe Ser Asp Arg Gln Lys Glu Ser Asp Ala Lys Ala Cys Ala Cys
290 295 300
Val Ser Arg Val Val Ser Ser Pro Ser Ser Ser Pro Thr Ser Thr Ile
305 310 315 320
Thr Val Ala Leu Ser
325
<210> 33
<211> 615
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 33
atgattgata cagggaagaa cggcgagttc cgctacgagc agtcgaatat catcgatcag 60
aacgaagccg agttcggcat cactccttca cagaccgtgg gcccttacgt ccacatcggt 120
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accgcagatg gcttccgcgg gcttggtcgc gcgatggcaa acgcgcaggg tgaggcaacg 360
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ttttttggac tctaa 615
<210> 34
<211> 204
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 34
Met Ile Asp Thr Gly Lys Asn Gly Glu Phe Arg Tyr Glu Gln Ser Asn
1 5 10 15
Ile Ile Asp Gln Asn Glu Ala Glu Phe Gly Ile Thr Pro Ser Gln Thr
20 25 30
Val Gly Pro Tyr Val His Ile Gly Leu Thr Leu Glu Gly Ala Glu His
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Leu Val Glu Pro Gly Ser Glu Gly Ala Val Ser Phe Thr Val Ser Ala
50 55 60
Thr Asp Gly Asn Gly Asp Pro Ile Ala Asp Ala Met Phe Glu Leu Trp
65 70 75 80
Gln Ala Asp Pro Glu Gly Ile His Asn Ser Asp Leu Asp Pro Asn Arg
85 90 95
Thr Ala Pro Ala Thr Ala Asp Gly Phe Arg Gly Leu Gly Arg Ala Met
100 105 110
Ala Asn Ala Gln Gly Glu Ala Thr Phe Thr Thr Leu Val Pro Gly Ala
115 120 125
Phe Ala Asp Glu Ala Pro His Phe Lys Val Gly Val Phe Ala Arg Gly
130 135 140
Met Leu Glu Arg Leu Tyr Thr Arg Ala Tyr Leu Pro Asp Ala Asp Leu
145 150 155 160
Ser Thr Asp Pro Val Leu Ala Val Val Pro Ala Asp Arg Arg Asp Leu
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Leu Val Ala Gln Lys Thr Asp Asp Gly Phe Arg Phe Asp Ile Thr Val
180 185 190
Gln Ala Glu Asp Asn Glu Thr Pro Phe Phe Gly Leu
195 200
<210> 35
<211> 693
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 35
atggacatcc cacacttcgc cccgacggga ggcgaatact ccccactgca cttcccggag 60
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ggtttcgatg gcaagccagt tccgcacacc ttggtcgagg cgtggcaggc aaacgccgca 300
ggccgttacc gccacaagaa tgactcctgg ccagcgccac tggatccaca cttcaacggt 360
gttgcacgta ctctcaccga caaggacggc cagtaccact tctggaccgt tatgccaggt 420
aattaccctt ggggtaacca ccacaacgca tggcgcccgg cgcacattca cttctcgctc 480
tatggtcgtc agtttacgga gcgtctggtc acccagatgt acttcccgaa cgatccattg 540
ttcttccagg atccgatcta caacgcggtg ccaaagggtg cacgtgagcg catgatcgca 600
acgttcgact atgacgagac ccgtgaaaac ttcgcgcttg gttacaagtt cgacatcgtc 660
cttcgtggcc gcaacgccac cccatttgag taa 693
<210> 36
<211> 230
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 36
Met Asp Ile Pro His Phe Ala Pro Thr Gly Gly Glu Tyr Ser Pro Leu
1 5 10 15
His Phe Pro Glu Tyr Arg Thr Thr Ile Lys Arg Asn Pro Ser Asn Asp
20 25 30
Leu Ile Met Val Pro Ser Arg Leu Gly Glu Ser Thr Gly Pro Val Phe
35 40 45
Gly Asp Arg Asp Leu Gly Asp Ile Asp Asn Asp Met Thr Lys Val Asn
50 55 60
Gly Gly Glu Ala Ile Gly Gln Arg Ile Phe Val His Gly Arg Val Leu
65 70 75 80
Gly Phe Asp Gly Lys Pro Val Pro His Thr Leu Val Glu Ala Trp Gln
85 90 95
Ala Asn Ala Ala Gly Arg Tyr Arg His Lys Asn Asp Ser Trp Pro Ala
100 105 110
Pro Leu Asp Pro His Phe Asn Gly Val Ala Arg Thr Leu Thr Asp Lys
115 120 125
Asp Gly Gln Tyr His Phe Trp Thr Val Met Pro Gly Asn Tyr Pro Trp
130 135 140
Gly Asn His His Asn Ala Trp Arg Pro Ala His Ile His Phe Ser Leu
145 150 155 160
Tyr Gly Arg Gln Phe Thr Glu Arg Leu Val Thr Gln Met Tyr Phe Pro
165 170 175
Asn Asp Pro Leu Phe Phe Gln Asp Pro Ile Tyr Asn Ala Val Pro Lys
180 185 190
Gly Ala Arg Glu Arg Met Ile Ala Thr Phe Asp Tyr Asp Glu Thr Arg
195 200 205
Glu Asn Phe Ala Leu Gly Tyr Lys Phe Asp Ile Val Leu Arg Gly Arg
210 215 220
Asn Ala Thr Pro Phe Glu
225 230
<210> 37
<211> 1164
<212> DNA
<213> 大肠杆菌
<400> 37
atgaacaact ttaatctgca caccccaacc cgcattctgt ttggtaaagg cgcaatcgct 60
ggtttacgcg aacaaattcc tcacgatgct cgcgtattga ttacctacgg cggcggcagc 120
gtgaaaaaaa ccggcgttct cgatcaagtt ctggatgccc tgaaaggcat ggacgtgctg 180
gaatttggcg gtattgagcc aaacccggct tatgaaacgc tgatgaacgc cgtgaaactg 240
gttcgcgaac agaaagtgac tttcctgctg gcggttggcg gcggttctgt actggacggc 300
accaaattta tcgccgcagc ggctaactat ccggaaaata tcgatccgtg gcacattctg 360
caaacgggcg gtaaagagat taaaagcgcc atcccgatgg gctgtgtgct gacgctgcca 420
gcaaccggtt cagaatccaa cgcaggcgcg gtgatctccc gtaaaaccac aggcgacaag 480
caggcgttcc attctgccca tgttcagccg gtatttgccg tgctcgatcc ggtttatacc 540
tacaccctgc cgccgcgtca ggtggctaac ggcgtagtgg acgcctttgt acacaccgtg 600
gaacagtatg ttaccaaacc ggttgatgcc aaaattcagg accgtttcgc agaaggcatt 660
ttgctgacgc taatcgaaga tggtccgaaa gccctgaaag agccagaaaa ctacgatgtg 720
cgcgccaacg tcatgtgggc ggcgactcag gcgctgaacg gtttgattgg cgctggcgta 780
ccgcaggact gggcaacgca tatgctgggc cacgaactga ctgcgatgca cggtctggat 840
cacgcgcaaa cactggctat cgtcctgcct gcactgtgga atgaaaaacg cgataccaag 900
cgcgctaagc tgctgcaata tgctgaacgc gtctggaaca tcactgaagg ttccgatgat 960
gagcgtattg acgccgcgat tgccgcaacc cgcaatttct ttgagcaatt aggcgtgccg 1020
acccacctct ccgactacgg tctggacggc agctccatcc cggctttgct gaaaaaactg 1080
gaagagcacg gcatgaccca actgggcgaa aatcatgaca ttacgttgga tgtcagccgc 1140
cgtatatacg aagccgcccg ctaa 1164
<210> 38
<211> 387
<212> PRT
<213> 大肠杆菌
<400> 38
Met Asn Asn Phe Asn Leu His Thr Pro Thr Arg Ile Leu Phe Gly Lys
1 5 10 15
Gly Ala Ile Ala Gly Leu Arg Glu Gln Ile Pro His Asp Ala Arg Val
20 25 30
Leu Ile Thr Tyr Gly Gly Gly Ser Val Lys Lys Thr Gly Val Leu Asp
35 40 45
Gln Val Leu Asp Ala Leu Lys Gly Met Asp Val Leu Glu Phe Gly Gly
50 55 60
Ile Glu Pro Asn Pro Ala Tyr Glu Thr Leu Met Asn Ala Val Lys Leu
65 70 75 80
Val Arg Glu Gln Lys Val Thr Phe Leu Leu Ala Val Gly Gly Gly Ser
85 90 95
Val Leu Asp Gly Thr Lys Phe Ile Ala Ala Ala Ala Asn Tyr Pro Glu
100 105 110
Asn Ile Asp Pro Trp His Ile Leu Gln Thr Gly Gly Lys Glu Ile Lys
115 120 125
Ser Ala Ile Pro Met Gly Cys Val Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gly Ser
130 135 140
Glu Ser Asn Ala Gly Ala Val Ile Ser Arg Lys Thr Thr Gly Asp Lys
145 150 155 160
Gln Ala Phe His Ser Ala His Val Gln Pro Val Phe Ala Val Leu Asp
165 170 175
Pro Val Tyr Thr Tyr Thr Leu Pro Pro Arg Gln Val Ala Asn Gly Val
180 185 190
Val Asp Ala Phe Val His Thr Val Glu Gln Tyr Val Thr Lys Pro Val
195 200 205
Asp Ala Lys Ile Gln Asp Arg Phe Ala Glu Gly Ile Leu Leu Thr Leu
210 215 220
Ile Glu Asp Gly Pro Lys Ala Leu Lys Glu Pro Glu Asn Tyr Asp Val
225 230 235 240
Arg Ala Asn Val Met Trp Ala Ala Thr Gln Ala Leu Asn Gly Leu Ile
245 250 255
Gly Ala Gly Val Pro Gln Asp Trp Ala Thr His Met Leu Gly His Glu
260 265 270
Leu Thr Ala Met His Gly Leu Asp His Ala Gln Thr Leu Ala Ile Val
275 280 285
Leu Pro Ala Leu Trp Asn Glu Lys Arg Asp Thr Lys Arg Ala Lys Leu
290 295 300
Leu Gln Tyr Ala Glu Arg Val Trp Asn Ile Thr Glu Gly Ser Asp Asp
305 310 315 320
Glu Arg Ile Asp Ala Ala Ile Ala Ala Thr Arg Asn Phe Phe Glu Gln
325 330 335
Leu Gly Val Pro Thr His Leu Ser Asp Tyr Gly Leu Asp Gly Ser Ser
340 345 350
Ile Pro Ala Leu Leu Lys Lys Leu Glu Glu His Gly Met Thr Gln Leu
355 360 365
Gly Glu Asn His Asp Ile Thr Leu Asp Val Ser Arg Arg Ile Tyr Glu
370 375 380
Ala Ala Arg
385
<210> 39
<211> 1062
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 39
atgagcatcc aagtaaaagc actccagaaa accggccccg aagcaccttt cgaggtcaaa 60
atcattgagc gtcgtgagcc tcgcgctgac gacgtagtta tcgacatcaa agctgccggc 120
atctgccaca gcgatatcca caccatccgc aacgaatggg gcgaggcaca cttcccgctc 180
accgtcggcc acgaaatcgc aggcgttgtc tctgcggttg gctccgatgt aaccaagtgg 240
aaagtcggcg accgcgttgg cgtcggctgc ctagttaact cctgcggcga atgtgaacag 300
tgtgtcgcgg gatttgaaaa caactgcctt cgcggaaacg tcggaaccta caactccgac 360
gacgtcgacg gcaccatcac gcaaggtggc tacgccgaaa aggtagtggt caacgaacgt 420
ttcctctgca gcatcccaga ggaactcgac ttcgatgtcg cagcaccact gctgtgcgca 480
ggcatcacca cctactcccc gatcgctcgc tggaacgtta aagaaggcga caaagtagca 540
gtcatgggcc tcggcgggct cggccacatg ggtgtccaaa tcgccgcagc caagggcgct 600
gacgttaccg ttctgtcccg ttccctgcgc aaggctgaac ttgccaagga actcggcgca 660
gctcgcacgc ttgcgacttc tgatgaggat ttcttcaccg aacacgccgg tgaattcgac 720
ttcatcctca acaccattag cgcatccatc ccagtcgaca agtacctgag ccttctcaag 780
ccacacggtg tcatggctgt tgtcggtctg ccaccagaga agcagccact gagcttcggt 840
gcgctcatcg gcggcggaaa agtcctcacc ggatccaaca ttggcggcat ccctgaaacc 900
caggaaatgc tcgacttctg tgcaaaacac ggcctcggcg cgatgatcga aactgtcggc 960
gtcaacgatg ttgatgcagc ctacgaccgc gttgttgccg gcgacgttca gttccgcgtt 1020
gtcattgata ctgcttcgtt tgcagaggta gaggcggttt ag 1062
<210> 40
<211> 353
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 40
Met Ser Ile Gln Val Lys Ala Leu Gln Lys Thr Gly Pro Glu Ala Pro
1 5 10 15
Phe Glu Val Lys Ile Ile Glu Arg Arg Glu Pro Arg Ala Asp Asp Val
20 25 30
Val Ile Asp Ile Lys Ala Ala Gly Ile Cys His Ser Asp Ile His Thr
35 40 45
Ile Arg Asn Glu Trp Gly Glu Ala His Phe Pro Leu Thr Val Gly His
50 55 60
Glu Ile Ala Gly Val Val Ser Ala Val Gly Ser Asp Val Thr Lys Trp
65 70 75 80
Lys Val Gly Asp Arg Val Gly Val Gly Cys Leu Val Asn Ser Cys Gly
85 90 95
Glu Cys Glu Gln Cys Val Ala Gly Phe Glu Asn Asn Cys Leu Arg Gly
100 105 110
Asn Val Gly Thr Tyr Asn Ser Asp Asp Val Asp Gly Thr Ile Thr Gln
115 120 125
Gly Gly Tyr Ala Glu Lys Val Val Val Asn Glu Arg Phe Leu Cys Ser
130 135 140
Ile Pro Glu Glu Leu Asp Phe Asp Val Ala Ala Pro Leu Leu Cys Ala
145 150 155 160
Gly Ile Thr Thr Tyr Ser Pro Ile Ala Arg Trp Asn Val Lys Glu Gly
165 170 175
Asp Lys Val Ala Val Met Gly Leu Gly Gly Leu Gly His Met Gly Val
180 185 190
Gln Ile Ala Ala Ala Lys Gly Ala Asp Val Thr Val Leu Ser Arg Ser
195 200 205
Leu Arg Lys Ala Glu Leu Ala Lys Glu Leu Gly Ala Ala Arg Thr Leu
210 215 220
Ala Thr Ser Asp Glu Asp Phe Phe Thr Glu His Ala Gly Glu Phe Asp
225 230 235 240
Phe Ile Leu Asn Thr Ile Ser Ala Ser Ile Pro Val Asp Lys Tyr Leu
245 250 255
Ser Leu Leu Lys Pro His Gly Val Met Ala Val Val Gly Leu Pro Pro
260 265 270
Glu Lys Gln Pro Leu Ser Phe Gly Ala Leu Ile Gly Gly Gly Lys Val
275 280 285
Leu Thr Gly Ser Asn Ile Gly Gly Ile Pro Glu Thr Gln Glu Met Leu
290 295 300
Asp Phe Cys Ala Lys His Gly Leu Gly Ala Met Ile Glu Thr Val Gly
305 310 315 320
Val Asn Asp Val Asp Ala Ala Tyr Asp Arg Val Val Ala Gly Asp Val
325 330 335
Gln Phe Arg Val Val Ile Asp Thr Ala Ser Phe Ala Glu Val Glu Ala
340 345 350
Val
<210> 41
<211> 1113
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 41
gtgtccatga gcactgtcgt gcctggaatt gtcgccctgt ccaagggggc accggtagaa 60
aaagtaaacg ttgttgtccc tgatccaggt gctaacgatg tcatcgtcaa gattcaggcc 120
tgcggtgtgt gccacaccga cttggcctac cgcgatggcg atatttcaga tgagttccct 180
tacctcctcg gccacgaggc agcaggtatt gttgaggagg taggcgagtc cgtcacccac 240
gttgaggtcg gcgatttcgt catcttgaac tggcgtgcag tgtgcggcga gtgccgtgca 300
tgtaagaagg gcgagccaaa gtactgcttt aacacccaca acgcatctaa gaagatgacc 360
ctggaagacg gcaccgagct gtccccagca ctgggtattg gcgcgttctt ggaaaagacc 420
ctggtccacg aaggccagtg caccaaggtt aaccctgagg aagatccagc agcagctggc 480
cttctgggtt gcggcatcat ggcaggtctt ggtgctgcgg taaacaccgg tgatattaag 540
cgcggcgagt ccgtggcagt cttcggcctt ggtggcgtgg gcatggcagc tattgctggc 600
gccaagattg ctggtgcatc gaagattatt gctgttgata tcgatgagaa gaagttggag 660
tgggcgaagg aattcggcgc aacccacacc attaattcct ctggtcttgg tggcgagggt 720
gatgcctctg aggtcgtggc aaaggttcgt gagctcactg atggtttcgg tactgacgtc 780
tccatcgatg cggtaggcat catgccgacc tggcagcagg cgttttactc ccgtgatcat 840
gcaggccgca tggtgatggt gggcgttcca aacctgacgt ctcgcgtaga tgttcctgcg 900
attgattttt acggtcgcgg tggctctgtg cgccctgcat ggtacggcga ctgcctgcct 960
gagcgtgatt tcccaactta tgtggatctg cacctgcagg gtcgtttccc gctggataag 1020
tttgtttctg agcgtattgg tcttgatgat gttgaagagg ctttcaacac catgaaggct 1080
ggcgacgtgc tgcgttctgt ggtggagatc taa 1113
<210> 42
<211> 370
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 42
Met Ser Met Ser Thr Val Val Pro Gly Ile Val Ala Leu Ser Lys Gly
1 5 10 15
Ala Pro Val Glu Lys Val Asn Val Val Val Pro Asp Pro Gly Ala Asn
20 25 30
Asp Val Ile Val Lys Ile Gln Ala Cys Gly Val Cys His Thr Asp Leu
35 40 45
Ala Tyr Arg Asp Gly Asp Ile Ser Asp Glu Phe Pro Tyr Leu Leu Gly
50 55 60
His Glu Ala Ala Gly Ile Val Glu Glu Val Gly Glu Ser Val Thr His
65 70 75 80
Val Glu Val Gly Asp Phe Val Ile Leu Asn Trp Arg Ala Val Cys Gly
85 90 95
Glu Cys Arg Ala Cys Lys Lys Gly Glu Pro Lys Tyr Cys Phe Asn Thr
100 105 110
His Asn Ala Ser Lys Lys Met Thr Leu Glu Asp Gly Thr Glu Leu Ser
115 120 125
Pro Ala Leu Gly Ile Gly Ala Phe Leu Glu Lys Thr Leu Val His Glu
130 135 140
Gly Gln Cys Thr Lys Val Asn Pro Glu Glu Asp Pro Ala Ala Ala Gly
145 150 155 160
Leu Leu Gly Cys Gly Ile Met Ala Gly Leu Gly Ala Ala Val Asn Thr
165 170 175
Gly Asp Ile Lys Arg Gly Glu Ser Val Ala Val Phe Gly Leu Gly Gly
180 185 190
Val Gly Met Ala Ala Ile Ala Gly Ala Lys Ile Ala Gly Ala Ser Lys
195 200 205
Ile Ile Ala Val Asp Ile Asp Glu Lys Lys Leu Glu Trp Ala Lys Glu
210 215 220
Phe Gly Ala Thr His Thr Ile Asn Ser Ser Gly Leu Gly Gly Glu Gly
225 230 235 240
Asp Ala Ser Glu Val Val Ala Lys Val Arg Glu Leu Thr Asp Gly Phe
245 250 255
Gly Thr Asp Val Ser Ile Asp Ala Val Gly Ile Met Pro Thr Trp Gln
260 265 270
Gln Ala Phe Tyr Ser Arg Asp His Ala Gly Arg Met Val Met Val Gly
275 280 285
Val Pro Asn Leu Thr Ser Arg Val Asp Val Pro Ala Ile Asp Phe Tyr
290 295 300
Gly Arg Gly Gly Ser Val Arg Pro Ala Trp Tyr Gly Asp Cys Leu Pro
305 310 315 320
Glu Arg Asp Phe Pro Thr Tyr Val Asp Leu His Leu Gln Gly Arg Phe
325 330 335
Pro Leu Asp Lys Phe Val Ser Glu Arg Ile Gly Leu Asp Asp Val Glu
340 345 350
Glu Ala Phe Asn Thr Met Lys Ala Gly Asp Val Leu Arg Ser Val Val
355 360 365
Glu Ile
370
<210> 43
<211> 1047
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 43
gtgagtttta tgaccactgc tgcaccccaa gaatttaccg ctgctgttgt tgaaaaattc 60
ggtcatgacg tgaccgtgaa ggatattgac cttccaaagc cagggccaca ccaggcattg 120
gtgaaggtac tcacctccgg catctgccac accgacctcc acgccttgga gggcgattgg 180
ccagtaaagc cggaaccacc attcgtacca ggacacgaag gtgtaggtga agttgttgag 240
ctcggaccag gtgaacacga tgtgaaggtc ggcgatattg tcggcaatgc gtggctctgg 300
tcagcgtgcg gcacctgcga atactgcatc acaggcaggg aaactcagtg taacgaagct 360
gagtacggtg gctacaccca aaatggatcc ttcggccagt acatgctggt ggatacccga 420
tacgccgctc gcatcccaga cggcgtggac tacctcgaag cagcgccaat tctgtgtgca 480
ggcgtgactg tctacaaggc actcaaagtc tctgaaaccc gcccgggcca attcatggtg 540
atctccggtg tcggcggact tggccacatc gcagtccaat acgcagcggc gatgggcatg 600
cgtgtcattg cggtagatat tgccgaggac aagctggaac ttgcccgtaa gcacggtgcg 660
gaatttaccg tgaatgcgcg taatgaagat ccaggcgaag ctgtacagaa gtacaccaac 720
ggtggcgcac acggcgtgct tgtgactgca gttcacgagg cagcattcgg ccaggcactg 780
gatatggctc gacgtgcagg aacaattgtg ttcaacggtc tgccaccggg agagttccca 840
gcatccgtgt tcaacatcgt attcaagggc ctgaccatcc gtggatccct cgtgggaacc 900
cgccaagact tggccgaagc gctcgatttc tttgcacgcg gactaatcaa gccaaccgtg 960
agtgagtgct ccctcgatga ggtcaatgga gttcttgacc gcatgcgaaa cggcaagatc 1020
gatggtcgtg tggcgattcg tttctaa 1047
<210> 44
<211> 348
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 44
Met Ser Phe Met Thr Thr Ala Ala Pro Gln Glu Phe Thr Ala Ala Val
1 5 10 15
Val Glu Lys Phe Gly His Asp Val Thr Val Lys Asp Ile Asp Leu Pro
20 25 30
Lys Pro Gly Pro His Gln Ala Leu Val Lys Val Leu Thr Ser Gly Ile
35 40 45
Cys His Thr Asp Leu His Ala Leu Glu Gly Asp Trp Pro Val Lys Pro
50 55 60
Glu Pro Pro Phe Val Pro Gly His Glu Gly Val Gly Glu Val Val Glu
65 70 75 80
Leu Gly Pro Gly Glu His Asp Val Lys Val Gly Asp Ile Val Gly Asn
85 90 95
Ala Trp Leu Trp Ser Ala Cys Gly Thr Cys Glu Tyr Cys Ile Thr Gly
100 105 110
Arg Glu Thr Gln Cys Asn Glu Ala Glu Tyr Gly Gly Tyr Thr Gln Asn
115 120 125
Gly Ser Phe Gly Gln Tyr Met Leu Val Asp Thr Arg Tyr Ala Ala Arg
130 135 140
Ile Pro Asp Gly Val Asp Tyr Leu Glu Ala Ala Pro Ile Leu Cys Ala
145 150 155 160
Gly Val Thr Val Tyr Lys Ala Leu Lys Val Ser Glu Thr Arg Pro Gly
165 170 175
Gln Phe Met Val Ile Ser Gly Val Gly Gly Leu Gly His Ile Ala Val
180 185 190
Gln Tyr Ala Ala Ala Met Gly Met Arg Val Ile Ala Val Asp Ile Ala
195 200 205
Glu Asp Lys Leu Glu Leu Ala Arg Lys His Gly Ala Glu Phe Thr Val
210 215 220
Asn Ala Arg Asn Glu Asp Pro Gly Glu Ala Val Gln Lys Tyr Thr Asn
225 230 235 240
Gly Gly Ala His Gly Val Leu Val Thr Ala Val His Glu Ala Ala Phe
245 250 255
Gly Gln Ala Leu Asp Met Ala Arg Arg Ala Gly Thr Ile Val Phe Asn
260 265 270
Gly Leu Pro Pro Gly Glu Phe Pro Ala Ser Val Phe Asn Ile Val Phe
275 280 285
Lys Gly Leu Thr Ile Arg Gly Ser Leu Val Gly Thr Arg Gln Asp Leu
290 295 300
Ala Glu Ala Leu Asp Phe Phe Ala Arg Gly Leu Ile Lys Pro Thr Val
305 310 315 320
Ser Glu Cys Ser Leu Asp Glu Val Asn Gly Val Leu Asp Arg Met Arg
325 330 335
Asn Gly Lys Ile Asp Gly Arg Val Ala Ile Arg Phe
340 345
<210> 45
<211> 1020
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 45
atgcccaaat acattgccat gcaggtatcc gaatccggtg caccgttagc cgcgaatctc 60
gtgcaacctg ctccgttgaa atcgagggaa gtccgcgtgg aaatcgctgc tagtggtgtg 120
tgccatgcag atattggcac ggcagcagca tcggggaagc acactgtttt tcctgttacc 180
cctggtcatg agattgcagg aaccatcgcg gaaattggtg aaaacgtatc tcggtggacg 240
gttggtgatc gcgttgcaat cggttggttt ggtggcaatt gcggtgactg cgctttttgt 300
cgtgcaggtg atcctgtgca ttgcagagag cggaagattc ctggcgtttc ttatgcgggt 360
ggttgggcac agaatattgt tgttccagcg gaggctcttg ctgcgattcc agatggcatg 420
gacttttacg aggccgcccc gatgggctgc gcaggtgtga caacattcaa tgcgttgcga 480
aacctgaagc tggatcccgg tgcggctgtc gcggtctttg gaatcggcgg tttagtgcgc 540
ctagctattc agtttgctgc gaaaatgggt tatcgaacca tcaccatcgc ccgcggttta 600
gagcgtgagg agctagctag gcaacttggc gccaaccact acatcgatag caatgatctg 660
caccctggcc aggcgttatt tgaacttggc ggggctgact tgatcttgtc tactgcgtcc 720
accacggagc ctctttcgga gttgtctacc ggtctttcta ttggcgggca gctaaccatt 780
atcggagttg atgggggaga tatcaccgtt tcggcagccc aattgatgat gaaccgtcag 840
atcatcacag gtcacctcac tggaagtgcg aatgacacgg aacagactat gaaatttgct 900
catctccatg gcgtgaaacc gcttattgaa cggatgcctc tcgatcaagc caacgaggct 960
attgcacgta tttcagctgg taaaccacgt ttccgtattg tcttggagcc gaattcataa 1020
<210> 46
<211> 339
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 46
Met Pro Lys Tyr Ile Ala Met Gln Val Ser Glu Ser Gly Ala Pro Leu
1 5 10 15
Ala Ala Asn Leu Val Gln Pro Ala Pro Leu Lys Ser Arg Glu Val Arg
20 25 30
Val Glu Ile Ala Ala Ser Gly Val Cys His Ala Asp Ile Gly Thr Ala
35 40 45
Ala Ala Ser Gly Lys His Thr Val Phe Pro Val Thr Pro Gly His Glu
50 55 60
Ile Ala Gly Thr Ile Ala Glu Ile Gly Glu Asn Val Ser Arg Trp Thr
65 70 75 80
Val Gly Asp Arg Val Ala Ile Gly Trp Phe Gly Gly Asn Cys Gly Asp
85 90 95
Cys Ala Phe Cys Arg Ala Gly Asp Pro Val His Cys Arg Glu Arg Lys
100 105 110
Ile Pro Gly Val Ser Tyr Ala Gly Gly Trp Ala Gln Asn Ile Val Val
115 120 125
Pro Ala Glu Ala Leu Ala Ala Ile Pro Asp Gly Met Asp Phe Tyr Glu
130 135 140
Ala Ala Pro Met Gly Cys Ala Gly Val Thr Thr Phe Asn Ala Leu Arg
145 150 155 160
Asn Leu Lys Leu Asp Pro Gly Ala Ala Val Ala Val Phe Gly Ile Gly
165 170 175
Gly Leu Val Arg Leu Ala Ile Gln Phe Ala Ala Lys Met Gly Tyr Arg
180 185 190
Thr Ile Thr Ile Ala Arg Gly Leu Glu Arg Glu Glu Leu Ala Arg Gln
195 200 205
Leu Gly Ala Asn His Tyr Ile Asp Ser Asn Asp Leu His Pro Gly Gln
210 215 220
Ala Leu Phe Glu Leu Gly Gly Ala Asp Leu Ile Leu Ser Thr Ala Ser
225 230 235 240
Thr Thr Glu Pro Leu Ser Glu Leu Ser Thr Gly Leu Ser Ile Gly Gly
245 250 255
Gln Leu Thr Ile Ile Gly Val Asp Gly Gly Asp Ile Thr Val Ser Ala
260 265 270
Ala Gln Leu Met Met Asn Arg Gln Ile Ile Thr Gly His Leu Thr Gly
275 280 285
Ser Ala Asn Asp Thr Glu Gln Thr Met Lys Phe Ala His Leu His Gly
290 295 300
Val Lys Pro Leu Ile Glu Arg Met Pro Leu Asp Gln Ala Asn Glu Ala
305 310 315 320
Ile Ala Arg Ile Ser Ala Gly Lys Pro Arg Phe Arg Ile Val Leu Glu
325 330 335
Pro Asn Ser
<210> 47
<211> 879
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 47
atgcaaaccc ttgctgctat tgttcgtgcc acgaagcaac cttttgagat caccaccatt 60
gatctggatg caccacgacc agatgaagtt caaatccgtg ttattgctgc cggagtgcgc 120
cacactgacg caattgttcg tgatcagatt tacccaactt ttcttcccgc agttttcggc 180
cacgaaggcg ccggagtagt tgtcgccgtg ggttctgcag tcacctcggt gaaaccagat 240
gacaaggtag tgctgggatt caactcttgt ggccagtgct tgaagtgttt gggcggtaag 300
cctgcgtact gtgagaaatt ctatgaccgc aacttcgcat gcacccgcga tgccgggcac 360
actactttgt ttacccgtgc aacaaaagag caggcagagg ccatcatcga cacccttgat 420
gatgttttct acgatgcgga tgcgggtttc ctggcatacc cagcaactcc cccagaggct 480
tcgggagtaa gcgtgttggt tgtcgcggct ggtacctctg atctccccca agcaaaggaa 540
gcactacaca ctgcctccta cttggggcgc tccacctcac tgattgttga ttttggagtg 600
gctggcatcc accgcctgct ttcatacgaa gaagaactcc gcgctgcggg cgtgctcatc 660
gttgccgctg gaatggatgg tgcgctaccc ggagttgtcg caggcttagt gtccgcacct 720
gtcgtcgcac tgccaacctc cgtgggatac ggcgcaggtg ctggaggaat cgcaccactt 780
ctgaccatgc ttaacgcctg cgcgccggga gttggagtgg tcaacattga taacggctat 840
ggagcaggac acctggctgc gcagattgcg gcgaggtaa 879
<210> 48
<211> 292
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 48
Met Gln Thr Leu Ala Ala Ile Val Arg Ala Thr Lys Gln Pro Phe Glu
1 5 10 15
Ile Thr Thr Ile Asp Leu Asp Ala Pro Arg Pro Asp Glu Val Gln Ile
20 25 30
Arg Val Ile Ala Ala Gly Val Arg His Thr Asp Ala Ile Val Arg Asp
35 40 45
Gln Ile Tyr Pro Thr Phe Leu Pro Ala Val Phe Gly His Glu Gly Ala
50 55 60
Gly Val Val Val Ala Val Gly Ser Ala Val Thr Ser Val Lys Pro Asp
65 70 75 80
Asp Lys Val Val Leu Gly Phe Asn Ser Cys Gly Gln Cys Leu Lys Cys
85 90 95
Leu Gly Gly Lys Pro Ala Tyr Cys Glu Lys Phe Tyr Asp Arg Asn Phe
100 105 110
Ala Cys Thr Arg Asp Ala Gly His Thr Thr Leu Phe Thr Arg Ala Thr
115 120 125
Lys Glu Gln Ala Glu Ala Ile Ile Asp Thr Leu Asp Asp Val Phe Tyr
130 135 140
Asp Ala Asp Ala Gly Phe Leu Ala Tyr Pro Ala Thr Pro Pro Glu Ala
145 150 155 160
Ser Gly Val Ser Val Leu Val Val Ala Ala Gly Thr Ser Asp Leu Pro
165 170 175
Gln Ala Lys Glu Ala Leu His Thr Ala Ser Tyr Leu Gly Arg Ser Thr
180 185 190
Ser Leu Ile Val Asp Phe Gly Val Ala Gly Ile His Arg Leu Leu Ser
195 200 205
Tyr Glu Glu Glu Leu Arg Ala Ala Gly Val Leu Ile Val Ala Ala Gly
210 215 220
Met Asp Gly Ala Leu Pro Gly Val Val Ala Gly Leu Val Ser Ala Pro
225 230 235 240
Val Val Ala Leu Pro Thr Ser Val Gly Tyr Gly Ala Gly Ala Gly Gly
245 250 255
Ile Ala Pro Leu Leu Thr Met Leu Asn Ala Cys Ala Pro Gly Val Gly
260 265 270
Val Val Asn Ile Asp Asn Gly Tyr Gly Ala Gly His Leu Ala Ala Gln
275 280 285
Ile Ala Ala Arg
290
<210> 49
<211> 819
<212> DNA
<213> 大肠杆菌
<400> 49
atggaaacct atgctgtttt tggtaatccg atagcccaca gcaaatcgcc attcattcat 60
cagcaatttg ctcagcaact gaatattgaa catccctatg ggcgcgtgtt ggcacccatc 120
aatgatttca tcaacacact gaacgctttc tttagtgctg gtggtaaagg tgcgaatgtg 180
acggtgcctt ttaaagaaga ggcttttgcc agagcggatg agcttactga acgggcagcg 240
ttggctggtg ctgttaatac cctcatgcgg ttagaagatg gacgcctgct gggtgacaat 300
accgatggtg taggcttgtt aagcgatctg gaacgtctgt cttttatccg ccctggttta 360
cgtattctgc ttatcggcgc tggtggagca tctcgcggcg tactactgcc actcctttcc 420
ctggactgtg cggtgacaat aactaatcgg acggtatccc gcgcggaaga gttggctaaa 480
ttgtttgcgc acactggcag tattcaggcg ttgagtatgg acgaactgga aggtcatgag 540
tttgatctca ttattaatgc aacatccagt ggcatcagtg gtgatattcc ggcgatcccg 600
tcatcgctca ttcatccagg catttattgc tatgacatgt tctatcagaa aggaaaaact 660
ccttttctgg catggtgtga gcagcgaggc tcaaagcgta atgctgatgg tttaggaatg 720
ctggtggcac aggcggctca tgcctttctt ctctggcacg gtgttctgcc tgacgtagaa 780
ccagttataa agcaattgca ggaggaattg tccgcgtga 819
<210> 50
<211> 272
<212> PRT
<213> 大肠杆菌
<400> 50
Met Glu Thr Tyr Ala Val Phe Gly Asn Pro Ile Ala His Ser Lys Ser
1 5 10 15
Pro Phe Ile His Gln Gln Phe Ala Gln Gln Leu Asn Ile Glu His Pro
20 25 30
Tyr Gly Arg Val Leu Ala Pro Ile Asn Asp Phe Ile Asn Thr Leu Asn
35 40 45
Ala Phe Phe Ser Ala Gly Gly Lys Gly Ala Asn Val Thr Val Pro Phe
50 55 60
Lys Glu Glu Ala Phe Ala Arg Ala Asp Glu Leu Thr Glu Arg Ala Ala
65 70 75 80
Leu Ala Gly Ala Val Asn Thr Leu Met Arg Leu Glu Asp Gly Arg Leu
85 90 95
Leu Gly Asp Asn Thr Asp Gly Val Gly Leu Leu Ser Asp Leu Glu Arg
100 105 110
Leu Ser Phe Ile Arg Pro Gly Leu Arg Ile Leu Leu Ile Gly Ala Gly
115 120 125
Gly Ala Ser Arg Gly Val Leu Leu Pro Leu Leu Ser Leu Asp Cys Ala
130 135 140
Val Thr Ile Thr Asn Arg Thr Val Ser Arg Ala Glu Glu Leu Ala Lys
145 150 155 160
Leu Phe Ala His Thr Gly Ser Ile Gln Ala Leu Ser Met Asp Glu Leu
165 170 175
Glu Gly His Glu Phe Asp Leu Ile Ile Asn Ala Thr Ser Ser Gly Ile
180 185 190
Ser Gly Asp Ile Pro Ala Ile Pro Ser Ser Leu Ile His Pro Gly Ile
195 200 205
Tyr Cys Tyr Asp Met Phe Tyr Gln Lys Gly Lys Thr Pro Phe Leu Ala
210 215 220
Trp Cys Glu Gln Arg Gly Ser Lys Arg Asn Ala Asp Gly Leu Gly Met
225 230 235 240
Leu Val Ala Gln Ala Ala His Ala Phe Leu Leu Trp His Gly Val Leu
245 250 255
Pro Asp Val Glu Pro Val Ile Lys Gln Leu Gln Glu Glu Leu Ser Ala
260 265 270
<210> 51
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 51
cggtacccgg ggatccttac ttccgcgtat ccaac 35
<210> 52
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 52
ctaggaatcg cggccggtga actcctaaag aactatataa c 41
<210> 53
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 53
ggccgcgatt cctagcatgc 20
<210> 54
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 54
ccaagcttgc atgccagtca tcatcaacgg tgccg 35
<210> 55
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 55
atctccgcag aagacgtact g 21
<210> 56
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 56
tccgatcatg tatgacctcc 20
<210> 57
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 57
cggtacccgg ggatcggcat agtgcttcca acgctc 36
<210> 58
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 58
tagctccact caagattcct cgatattacc tacagg 36
<210> 59
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 59
tcttgagtgg agctagggcc 20
<210> 60
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 60
ccaagcttgc atgcccatat agagcccagg agctctc 37
<210> 61
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 61
cgccgcaaag tccaaataga aag 23
<210> 62
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 62
ggattcttcc tgaactcagc 20
<210> 63
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 63
cggtacccgg ggatcgggct cgtcctgaaa ttgcac 36
<210> 64
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 64
tccgtcgtga gccatgttgt gcccacgaga ctacc 35
<210> 65
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 65
atggctcacg acggattgcg 20
<210> 66
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 66
ccaagcttgc atgcccggtt gcagccttca taaacg 36
<210> 67
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 67
agaccaatga gtacccaacc g 21
<210> 68
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 68
tcagcgtctg gctcagctac 20
<210> 69
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 69
cggtacccgg ggatcaaccc cagctcaaat aacacc 36
<210> 70
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 70
tttcaacaca atccgtcctt ctcgcttgga ttacttg 37
<210> 71
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 71
cggattgtgt tgaaattgct ctg 23
<210> 72
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 72
ccaagcttgc atgcctcacc acgggaatct tcagg 35
<210> 73
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 73
ccggactggg gtgtgttttg 20
<210> 74
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 74
cccggaaaat acggtatagc 20
<210> 75
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 75
ccaagcttgc atgccccatc gcattgccga aaagc 35
<210> 76
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 76
aaagatcggg tcaatgcagt tcgcggggcg aacat 35
<210> 77
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 77
cgccccgcga actgcattga cccgatcttt atacc 35
<210> 78
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 78
cggtacccgg ggatcaacgt tgacggtgat gccat 35
<210> 79
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 79
gaaatgtcat acttcagcca tcagg 25
<210> 80
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 80
tgcgagtgat gaaatcctga aactt 25
<210> 81
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 81
ccaagcttgc atgcctttcg cggtgaatca accca 35
<210> 82
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 82
caggtcaaag ctaaggcatt gtctgtaaat gggca 35
<210> 83
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 83
ctaaggggtt tagcaatgcc caatcaggcc cactt 35
<210> 84
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 84
cggtacccgg ggatcttagg gtacgagggt aagtg 35
<210> 85
<211> 93
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> P2启动子的DNA片段
<400> 85
cttagctttg acctgcacaa atagttgcaa attgtcccac atacacataa agtagcttgc 60
gtatttaaaa ttatgaacct aaggggttta gca 93
<210> 86
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 86
atttacagac aatgccttag ctttgacctg cacaa 35
<210> 87
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 87
ggcctgattg ggcattgcta aaccccttag g 31
<210> 88
<211> 1686
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 88
atgacaacaa ccaccggaag tgcccggcca gcacgtgccg ccaggaagcc taagcccgaa 60
ggccaatgga aaatcgacgg caccgagccg cttaaccatg ccgaggaaat taagcaagaa 120
gaacccgctt ttgctgtcaa gcagcgggtc attgatattt actccaagca gggtttttct 180
tccattgcac cggatgacat tgccccacgc tttaagtggt tgggcattta cacccagcgt 240
aagcaggatc tgggcggtga actgaccggt cagcttcctg atgatgagct gcaggatgag 300
tacttcatga tgcgtgtgcg ttttgatggc ggactggctt cccctgagcg cctgcgtgcc 360
gtgggtgaaa tttctaggga ttatgctcgt tccaccgcgg acttcaccga ccgccagaac 420
attcagctgc actggattcg tattgaagat gtgcctgcga tctgggagaa gctagaaacc 480
gtcggactgt ccaccatgct tggttgcggt gacgttccac gtgttatctt gggctcccca 540
gtttctggcg tagctgctga agagctgatc gatgccaccc cggctatcga tgcgattcgt 600
gagcgctacc tagacaagga agagttccac aaccttcctc gtaagtttaa gactgctatc 660
actggcaacc agcgccagga tgttacccac gaaatccagg acgtttcctt cgttccttcg 720
attcacccag aattcggccc aggatttgag tgctttgtgg gcggcggcct gtccaccaac 780
ccaatgcttg ctcagccact tggttcttgg attccacttg atgaggttcc agaagtgtgg 840
gctggcgtcg ccggaatttt ccgcgactac ggcttccgac gcctgcgtaa ccgtgctcgc 900
ctcaagttct tggtggcaca gtggggtatt gagaagttcc gtgaagttct tgagaccgaa 960
tacctcgagc gcaagctgat tgatggccca gttgttacca ccaaccctgg ctaccgtgac 1020
cacattggca ttcacccaca aaaggacggc aagttctacc tcggtgtgaa gccaaccgtt 1080
ggacacacca ccggtgagca gctcattgcc attgctgatg ttgcagaaaa gcacggcatc 1140
accaggattc gtaccacggc ggaaaaggaa ctgctcttcc tcgatattga gcgagagaac 1200
cttactaccg ttgcacgtga cctggatgaa atcggactgt actcttcacc ttccgagttc 1260
cgccgcggca tcatttcctg caccggcttg gagttctgca agcttgcgca cgcaaccacc 1320
aagtcacgag caattgagct tgtggacgaa ctggaagagc gactcggcga tttggatgtt 1380
cccatcaaga ttgccctgaa cggttgccct aactcttgtg cacgcaccca ggtttccgac 1440
atcggattca agggacagac cgtcactgat gctgacggca accgcgttga aggtttccag 1500
gttcacctgg gcggttccat gaacttggat ccaaacttcg gacgcaagct caagggccac 1560
aaggttattg ccgatgaagt gggagagtac gtcactcgcg ttgttaccca cttcaaggaa 1620
cagcgccacg aggacgagca cttccgcgat tgggtccagc gggccgctga ggaagatttg 1680
gtgtga 1686
<210> 89
<211> 561
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 89
Met Thr Thr Thr Thr Gly Ser Ala Arg Pro Ala Arg Ala Ala Arg Lys
1 5 10 15
Pro Lys Pro Glu Gly Gln Trp Lys Ile Asp Gly Thr Glu Pro Leu Asn
20 25 30
His Ala Glu Glu Ile Lys Gln Glu Glu Pro Ala Phe Ala Val Lys Gln
35 40 45
Arg Val Ile Asp Ile Tyr Ser Lys Gln Gly Phe Ser Ser Ile Ala Pro
50 55 60
Asp Asp Ile Ala Pro Arg Phe Lys Trp Leu Gly Ile Tyr Thr Gln Arg
65 70 75 80
Lys Gln Asp Leu Gly Gly Glu Leu Thr Gly Gln Leu Pro Asp Asp Glu
85 90 95
Leu Gln Asp Glu Tyr Phe Met Met Arg Val Arg Phe Asp Gly Gly Leu
100 105 110
Ala Ser Pro Glu Arg Leu Arg Ala Val Gly Glu Ile Ser Arg Asp Tyr
115 120 125
Ala Arg Ser Thr Ala Asp Phe Thr Asp Arg Gln Asn Ile Gln Leu His
130 135 140
Trp Ile Arg Ile Glu Asp Val Pro Ala Ile Trp Glu Lys Leu Glu Thr
145 150 155 160
Val Gly Leu Ser Thr Met Leu Gly Cys Gly Asp Val Pro Arg Val Ile
165 170 175
Leu Gly Ser Pro Val Ser Gly Val Ala Ala Glu Glu Leu Ile Asp Ala
180 185 190
Thr Pro Ala Ile Asp Ala Ile Arg Glu Arg Tyr Leu Asp Lys Glu Glu
195 200 205
Phe His Asn Leu Pro Arg Lys Phe Lys Thr Ala Ile Thr Gly Asn Gln
210 215 220
Arg Gln Asp Val Thr His Glu Ile Gln Asp Val Ser Phe Val Pro Ser
225 230 235 240
Ile His Pro Glu Phe Gly Pro Gly Phe Glu Cys Phe Val Gly Gly Gly
245 250 255
Leu Ser Thr Asn Pro Met Leu Ala Gln Pro Leu Gly Ser Trp Ile Pro
260 265 270
Leu Asp Glu Val Pro Glu Val Trp Ala Gly Val Ala Gly Ile Phe Arg
275 280 285
Asp Tyr Gly Phe Arg Arg Leu Arg Asn Arg Ala Arg Leu Lys Phe Leu
290 295 300
Val Ala Gln Trp Gly Ile Glu Lys Phe Arg Glu Val Leu Glu Thr Glu
305 310 315 320
Tyr Leu Glu Arg Lys Leu Ile Asp Gly Pro Val Val Thr Thr Asn Pro
325 330 335
Gly Tyr Arg Asp His Ile Gly Ile His Pro Gln Lys Asp Gly Lys Phe
340 345 350
Tyr Leu Gly Val Lys Pro Thr Val Gly His Thr Thr Gly Glu Gln Leu
355 360 365
Ile Ala Ile Ala Asp Val Ala Glu Lys His Gly Ile Thr Arg Ile Arg
370 375 380
Thr Thr Ala Glu Lys Glu Leu Leu Phe Leu Asp Ile Glu Arg Glu Asn
385 390 395 400
Leu Thr Thr Val Ala Arg Asp Leu Asp Glu Ile Gly Leu Tyr Ser Ser
405 410 415
Pro Ser Glu Phe Arg Arg Gly Ile Ile Ser Cys Thr Gly Leu Glu Phe
420 425 430
Cys Lys Leu Ala His Ala Thr Thr Lys Ser Arg Ala Ile Glu Leu Val
435 440 445
Asp Glu Leu Glu Glu Arg Leu Gly Asp Leu Asp Val Pro Ile Lys Ile
450 455 460
Ala Leu Asn Gly Cys Pro Asn Ser Cys Ala Arg Thr Gln Val Ser Asp
465 470 475 480
Ile Gly Phe Lys Gly Gln Thr Val Thr Asp Ala Asp Gly Asn Arg Val
485 490 495
Glu Gly Phe Gln Val His Leu Gly Gly Ser Met Asn Leu Asp Pro Asn
500 505 510
Phe Gly Arg Lys Leu Lys Gly His Lys Val Ile Ala Asp Glu Val Gly
515 520 525
Glu Tyr Val Thr Arg Val Val Thr His Phe Lys Glu Gln Arg His Glu
530 535 540
Asp Glu His Phe Arg Asp Trp Val Gln Arg Ala Ala Glu Glu Asp Leu
545 550 555 560
Val
<210> 90
<211> 249
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 90
gtgagtcttc ggaggaaacc caatcccaac cgcaaccacc ctctgtactg cccatactgc 60
gcgggagaag ttcttttccc cgatgagcaa acagaattcg cgtggttgtg tgcggattgc 120
accagagttt ttgaagtgaa atatcacggc caggacgatc cagtgcacag gccagcacca 180
gcaaagtcca catcgcaagc attaaaagaa tctctcgaaa gacacaaaag aggtgagtcg 240
caacaatga 249
<210> 91
<211> 82
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 91
Met Ser Leu Arg Arg Lys Pro Asn Pro Asn Arg Asn His Pro Leu Tyr
1 5 10 15
Cys Pro Tyr Cys Ala Gly Glu Val Leu Phe Pro Asp Glu Gln Thr Glu
20 25 30
Phe Ala Trp Leu Cys Ala Asp Cys Thr Arg Val Phe Glu Val Lys Tyr
35 40 45
His Gly Gln Asp Asp Pro Val His Arg Pro Ala Pro Ala Lys Ser Thr
50 55 60
Ser Gln Ala Leu Lys Glu Ser Leu Glu Arg His Lys Arg Gly Glu Ser
65 70 75 80
Gln Gln
<210> 92
<211> 786
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 92
atgagctttc aactagttaa cgccctgaaa aatactggtt cggtaaaaga tcccgagatc 60
tcacccgaag gacctcgcac gaccacaccg ttgtcaccag aggtagcaaa acacaacgag 120
gaactcgtcg aaaagcatgc tgctgcgttg tatgacgcca gcgcgcaaga gatcctggaa 180
tggacagccg agcacacgcc gggcgctatt gcagtgacct tgagcatgga aaacaccgtg 240
ctggcggagc tggctgcgcg gcacctgccg gaagctgatt tcctcttttt ggacaccggt 300
taccacttca aggaaactct tgaagttgcc cgccaggtag atgagcgtta ttcccagaag 360
cttgtcaccg cgctgccaat cctcaagcgc acggagcagg attccattta tggtctcaac 420
ctgtaccgca gcaacccagc ggcgtgctgc cgaatgcgca aagttgaacc gctggcggcg 480
tcgttaagcc catacgctgg ctggatcacc ggcctgcgcc gcgctgatgg cccaacccgt 540
gctcaagccc ctgcgctgag cttggatgcc accggcaggc tcaagatttc tccaattatc 600
acctggtcat tggaggaaac caacgagttc attgcggaca acaacctcat cgatcaccca 660
cttacccatc agggttatcc atcaattgga tgcgaaacct gcacccttcc tgttgctgaa 720
ggacaagacc ctagggccgg ccgttgggct ggaaacgcca agacagaatg cggacttcac 780
tcatga 786
<210> 93
<211> 261
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 93
Met Ser Phe Gln Leu Val Asn Ala Leu Lys Asn Thr Gly Ser Val Lys
1 5 10 15
Asp Pro Glu Ile Ser Pro Glu Gly Pro Arg Thr Thr Thr Pro Leu Ser
20 25 30
Pro Glu Val Ala Lys His Asn Glu Glu Leu Val Glu Lys His Ala Ala
35 40 45
Ala Leu Tyr Asp Ala Ser Ala Gln Glu Ile Leu Glu Trp Thr Ala Glu
50 55 60
His Thr Pro Gly Ala Ile Ala Val Thr Leu Ser Met Glu Asn Thr Val
65 70 75 80
Leu Ala Glu Leu Ala Ala Arg His Leu Pro Glu Ala Asp Phe Leu Phe
85 90 95
Leu Asp Thr Gly Tyr His Phe Lys Glu Thr Leu Glu Val Ala Arg Gln
100 105 110
Val Asp Glu Arg Tyr Ser Gln Lys Leu Val Thr Ala Leu Pro Ile Leu
115 120 125
Lys Arg Thr Glu Gln Asp Ser Ile Tyr Gly Leu Asn Leu Tyr Arg Ser
130 135 140
Asn Pro Ala Ala Cys Cys Arg Met Arg Lys Val Glu Pro Leu Ala Ala
145 150 155 160
Ser Leu Ser Pro Tyr Ala Gly Trp Ile Thr Gly Leu Arg Arg Ala Asp
165 170 175
Gly Pro Thr Arg Ala Gln Ala Pro Ala Leu Ser Leu Asp Ala Thr Gly
180 185 190
Arg Leu Lys Ile Ser Pro Ile Ile Thr Trp Ser Leu Glu Glu Thr Asn
195 200 205
Glu Phe Ile Ala Asp Asn Asn Leu Ile Asp His Pro Leu Thr His Gln
210 215 220
Gly Tyr Pro Ser Ile Gly Cys Glu Thr Cys Thr Leu Pro Val Ala Glu
225 230 235 240
Gly Gln Asp Pro Arg Ala Gly Arg Trp Ala Gly Asn Ala Lys Thr Glu
245 250 255
Cys Gly Leu His Ser
260
<210> 94
<211> 954
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 94
ttgggctgga aacgccaaga cagaatgcgg acttcactca tgaccacaac cgttgcatca 60
gaactttccc cacaccttaa agatcttgaa aatgaatcca tccacatcct ccgcgaggta 120
gctggccagt ttgataaggt cggcctgctg ttttccggcg gtaaggattc cgtcgtggtg 180
tacgagcttg cgcgccgcgc tttcgctcca gctaacgtgc cttttgaatt gctgcacgtg 240
gacaccggcc acaacttccc agaggttttg gaattccgcg acaacctggt ggagcgcacc 300
ggcgcccgcc tgcgcgtagc taaagtccag gactggatcg atcgcggtga cctgcaggaa 360
cgcccagacg gcacccgcaa cccactgcag actgtccctt tggtggagac catcgctgag 420
cagggctacg acgccgtgct tggtggcgct cgccgcgatg aggagcgtgc ccgcgccaag 480
gagcgtgtgt tctctgtgcg tgactccttc ggtggttggg atccacgccg tcagcgccca 540
gagctgtgga ccctctacaa cggtggccac ctgccaggcg aaaacatccg tgttttccca 600
atctccaact ggactgaagc tgacatctgg gagtacatcg gcgcccgtgg catcgaactt 660
ccaccgatct acttctccca cgaccgcgaa gttttcgagc gcgacggcat gtggctgacc 720
gcaggcgagt ggggtggacc aaagaagggc gaggagatcg tcaccaagac tgtccgctac 780
cgcaccgtcg gcgatatgtc ctgcaccggt gctgtgctct cagaagcccg caccattgac 840
gatgtgatcg aagagatcgc cacctccacc cttaccgaac gtggcgcaac ccgcgccgat 900
gaccgcctca gcgaatccgc aatggaagac cgcaagaagg aaggctactt ctga 954
<210> 95
<211> 317
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 95
Met Gly Trp Lys Arg Gln Asp Arg Met Arg Thr Ser Leu Met Thr Thr
1 5 10 15
Thr Val Ala Ser Glu Leu Ser Pro His Leu Lys Asp Leu Glu Asn Glu
20 25 30
Ser Ile His Ile Leu Arg Glu Val Ala Gly Gln Phe Asp Lys Val Gly
35 40 45
Leu Leu Phe Ser Gly Gly Lys Asp Ser Val Val Val Tyr Glu Leu Ala
50 55 60
Arg Arg Ala Phe Ala Pro Ala Asn Val Pro Phe Glu Leu Leu His Val
65 70 75 80
Asp Thr Gly His Asn Phe Pro Glu Val Leu Glu Phe Arg Asp Asn Leu
85 90 95
Val Glu Arg Thr Gly Ala Arg Leu Arg Val Ala Lys Val Gln Asp Trp
100 105 110
Ile Asp Arg Gly Asp Leu Gln Glu Arg Pro Asp Gly Thr Arg Asn Pro
115 120 125
Leu Gln Thr Val Pro Leu Val Glu Thr Ile Ala Glu Gln Gly Tyr Asp
130 135 140
Ala Val Leu Gly Gly Ala Arg Arg Asp Glu Glu Arg Ala Arg Ala Lys
145 150 155 160
Glu Arg Val Phe Ser Val Arg Asp Ser Phe Gly Gly Trp Asp Pro Arg
165 170 175
Arg Gln Arg Pro Glu Leu Trp Thr Leu Tyr Asn Gly Gly His Leu Pro
180 185 190
Gly Glu Asn Ile Arg Val Phe Pro Ile Ser Asn Trp Thr Glu Ala Asp
195 200 205
Ile Trp Glu Tyr Ile Gly Ala Arg Gly Ile Glu Leu Pro Pro Ile Tyr
210 215 220
Phe Ser His Asp Arg Glu Val Phe Glu Arg Asp Gly Met Trp Leu Thr
225 230 235 240
Ala Gly Glu Trp Gly Gly Pro Lys Lys Gly Glu Glu Ile Val Thr Lys
245 250 255
Thr Val Arg Tyr Arg Thr Val Gly Asp Met Ser Cys Thr Gly Ala Val
260 265 270
Leu Ser Glu Ala Arg Thr Ile Asp Asp Val Ile Glu Glu Ile Ala Thr
275 280 285
Ser Thr Leu Thr Glu Arg Gly Ala Thr Arg Ala Asp Asp Arg Leu Ser
290 295 300
Glu Ser Ala Met Glu Asp Arg Lys Lys Glu Gly Tyr Phe
305 310 315
<210> 96
<211> 1302
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 96
atgactgctc caaccttgaa taaagcatcc gaaaagattg catcacgcga gacccttcgt 60
ctgtgcaccg caggttccgt agatgatggc aagtccacct tcgtcggccg cctcctgcac 120
gacaccaagt ctgttcttgc tgatcagcta gcttccgtag agcgcacctc cgccgaccgc 180
ggcttcgaag gcctcgacct gtccctcctc gtcgacggcc tgcgcgccga gcgtgagcag 240
ggcatcacca tcgacgttgc ctaccgctac ttcgccactg acaagcgcac cttcatcctg 300
gctgacaccc caggccacgt gcagtacacc cgcaacaccg tcaccggcgt ctccacctcc 360
caggttgtag ttttgcttgt cgacgcccgc cacggcgtcg tcgagcagac ccgccgccac 420
ctgtccgtat cggccctgct gggcgtgcgc acggtgatcc tcgcagtcaa caaaattgac 480
cttgttgatt acagcgaaga agtcttccgc aacattgaaa aagaattcgt ttctttggct 540
tccgctttag atgtcaccga cacccacgtc gttccgatct ccgcactcaa gggcgacaac 600
gttgcagaac cttccaccca catggactgg tacgcgggac caaccgtgct ggaaatcctg 660
gaaaacgttg aagtttcccg cggccgtgca cacgacctgg gcttccgctt cccaatccag 720
tacgtcatcc gcgagcacgc aaccgattac cgcggctacg ccggcaccat caacgctggt 780
tccatctccg tgggcgatac cgtgcaccta cctgaaggcc gcaccaccca ggtcacccac 840
atcgattccg ctgacggatc cctccaaacc gcatcagttg gagaagccgt tgtcctgcgc 900
ctagcccagg aaatcgacct catccgcggc gaactcatcg caggctccga tcgcccagaa 960
tccgttcgtt ccttcaacgc cactgtcgtt ggtctagcag atcgcactat caaaccaggt 1020
gcagcagtca aggtccgcta cggcaccgag ctggtccgcg gacgcgtcgc agccatcgaa 1080
cgagtcctcg acatcgacgg cgtcaacgac aacgaagcac cagaaaccta cggcctcaac 1140
gacatcgcgc acgtgcgcat cgatgttgca ggtgaattgg aagttgaaga ttacgctgct 1200
cgtggcgcaa ttggctcctt ccttcttatc gatcaatcct ccggcgacac cctcgctgcc 1260
ggtttggttg gccaccgcct acgcaataac tggtcgatct ag 1302
<210> 97
<211> 433
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 97
Met Thr Ala Pro Thr Leu Asn Lys Ala Ser Glu Lys Ile Ala Ser Arg
1 5 10 15
Glu Thr Leu Arg Leu Cys Thr Ala Gly Ser Val Asp Asp Gly Lys Ser
20 25 30
Thr Phe Val Gly Arg Leu Leu His Asp Thr Lys Ser Val Leu Ala Asp
35 40 45
Gln Leu Ala Ser Val Glu Arg Thr Ser Ala Asp Arg Gly Phe Glu Gly
50 55 60
Leu Asp Leu Ser Leu Leu Val Asp Gly Leu Arg Ala Glu Arg Glu Gln
65 70 75 80
Gly Ile Thr Ile Asp Val Ala Tyr Arg Tyr Phe Ala Thr Asp Lys Arg
85 90 95
Thr Phe Ile Leu Ala Asp Thr Pro Gly His Val Gln Tyr Thr Arg Asn
100 105 110
Thr Val Thr Gly Val Ser Thr Ser Gln Val Val Val Leu Leu Val Asp
115 120 125
Ala Arg His Gly Val Val Glu Gln Thr Arg Arg His Leu Ser Val Ser
130 135 140
Ala Leu Leu Gly Val Arg Thr Val Ile Leu Ala Val Asn Lys Ile Asp
145 150 155 160
Leu Val Asp Tyr Ser Glu Glu Val Phe Arg Asn Ile Glu Lys Glu Phe
165 170 175
Val Ser Leu Ala Ser Ala Leu Asp Val Thr Asp Thr His Val Val Pro
180 185 190
Ile Ser Ala Leu Lys Gly Asp Asn Val Ala Glu Pro Ser Thr His Met
195 200 205
Asp Trp Tyr Ala Gly Pro Thr Val Leu Glu Ile Leu Glu Asn Val Glu
210 215 220
Val Ser Arg Gly Arg Ala His Asp Leu Gly Phe Arg Phe Pro Ile Gln
225 230 235 240
Tyr Val Ile Arg Glu His Ala Thr Asp Tyr Arg Gly Tyr Ala Gly Thr
245 250 255
Ile Asn Ala Gly Ser Ile Ser Val Gly Asp Thr Val His Leu Pro Glu
260 265 270
Gly Arg Thr Thr Gln Val Thr His Ile Asp Ser Ala Asp Gly Ser Leu
275 280 285
Gln Thr Ala Ser Val Gly Glu Ala Val Val Leu Arg Leu Ala Gln Glu
290 295 300
Ile Asp Leu Ile Arg Gly Glu Leu Ile Ala Gly Ser Asp Arg Pro Glu
305 310 315 320
Ser Val Arg Ser Phe Asn Ala Thr Val Val Gly Leu Ala Asp Arg Thr
325 330 335
Ile Lys Pro Gly Ala Ala Val Lys Val Arg Tyr Gly Thr Glu Leu Val
340 345 350
Arg Gly Arg Val Ala Ala Ile Glu Arg Val Leu Asp Ile Asp Gly Val
355 360 365
Asn Asp Asn Glu Ala Pro Glu Thr Tyr Gly Leu Asn Asp Ile Ala His
370 375 380
Val Arg Ile Asp Val Ala Gly Glu Leu Glu Val Glu Asp Tyr Ala Ala
385 390 395 400
Arg Gly Ala Ile Gly Ser Phe Leu Leu Ile Asp Gln Ser Ser Gly Asp
405 410 415
Thr Leu Ala Ala Gly Leu Val Gly His Arg Leu Arg Asn Asn Trp Ser
420 425 430
Ile
<210> 98
<211> 900
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 98
ttggctcctt ccttcttatc gatcaatcct ccggcgacac cctcgctgcc ggtttggttg 60
gccaccgcct acgcaataac tggtcgatct agaccagttg ctgtgaaggc aaggtgccgg 120
cttagatgcc ggcgcctagc ctacatccag ctaagacccc ctttaggaca cctcatgatt 180
cccctgatta cgctttccca cggttcccgc aaaaagtccg cagctgcagg tattactgcg 240
ctgactcatg aggccggacg aatgctggaa acaccagccg tggaagcgca tttagagctt 300
gctgaacctt cccttgatca ggttgtggca acgctcagtg cggaaggcgt aaccagggca 360
gcgttggttc ctttgctgtt tagcaatgcg tatcacgcaa agattgacgt tcctgaggca 420
gtaaaagatg cttcagaaaa gtatggtgtg gaacttctcg tgggtccgca tttgggcact 480
ggctccgatg tagccagcgt gcttgcgcag cggttgcgtg cggacgcccc cacagatgcc 540
catgtgattt tgtattccgt tggcagctca cacgtgtccg ccaatgaatc agtcatcgat 600
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<210> 99
<211> 299
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 99
Met Ala Pro Ser Phe Leu Ser Ile Asn Pro Pro Ala Thr Pro Ser Leu
1 5 10 15
Pro Val Trp Leu Ala Thr Ala Tyr Ala Ile Thr Gly Arg Ser Arg Pro
20 25 30
Val Ala Val Lys Ala Arg Cys Arg Leu Arg Cys Arg Arg Leu Ala Tyr
35 40 45
Ile Gln Leu Arg Pro Pro Leu Gly His Leu Met Ile Pro Leu Ile Thr
50 55 60
Leu Ser His Gly Ser Arg Lys Lys Ser Ala Ala Ala Gly Ile Thr Ala
65 70 75 80
Leu Thr His Glu Ala Gly Arg Met Leu Glu Thr Pro Ala Val Glu Ala
85 90 95
His Leu Glu Leu Ala Glu Pro Ser Leu Asp Gln Val Val Ala Thr Leu
100 105 110
Ser Ala Glu Gly Val Thr Arg Ala Ala Leu Val Pro Leu Leu Phe Ser
115 120 125
Asn Ala Tyr His Ala Lys Ile Asp Val Pro Glu Ala Val Lys Asp Ala
130 135 140
Ser Glu Lys Tyr Gly Val Glu Leu Leu Val Gly Pro His Leu Gly Thr
145 150 155 160
Gly Ser Asp Val Ala Ser Val Leu Ala Gln Arg Leu Arg Ala Asp Ala
165 170 175
Pro Thr Asp Ala His Val Ile Leu Tyr Ser Val Gly Ser Ser His Val
180 185 190
Ser Ala Asn Glu Ser Val Ile Asp Leu Ala His Thr Ile Ala Leu Leu
195 200 205
Thr Gly Phe Ser Val Glu Val Val Pro Ala Thr Gly Gly Pro Gly Ala
210 215 220
Gly Gly Ala Gly Val Ile Glu Val Ala Ser Lys His Lys Ala Val His
225 230 235 240
Ile Leu Pro Leu Phe Val Thr Glu Gly Leu Leu Leu Asp Arg Val Ile
245 250 255
Asp Gln Ser Ala Asn Ile Ala Ala Ala Thr Gly Thr Asn Phe Thr Tyr
260 265 270
Ser Glu Pro Leu Thr Thr Asp Leu Ala Pro Leu Val Ala Ala Arg Tyr
275 280 285
His Ala Ala Leu Ser Ala Leu Leu Ala His Ile
290 295
<210> 100
<211> 930
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 100
atgcagacat taatctttat cgccattgca ggcgtcgcag cacagcttgt tgatggcggc 60
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ccacagggac aaaagattaa aagctcttaa 930
<210> 101
<211> 309
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 101
Met Gln Thr Leu Ile Phe Ile Ala Ile Ala Gly Val Ala Ala Gln Leu
1 5 10 15
Val Asp Gly Gly Leu Gly Met Gly Phe Gly Val Thr Ser Thr Thr Ile
20 25 30
Leu Ile Met Leu Ala Gly Leu Gly Pro Ala Gln Ala Ser Ala Val Val
35 40 45
His Thr Ala Glu Val Gly Thr Thr Leu Val Ser Gly Leu Ser His Trp
50 55 60
Lys Phe Gly Asn Val Asp Trp Lys Val Val Val Arg Leu Gly Ile Pro
65 70 75 80
Gly Ala Ile Gly Ala Phe Ala Gly Ala Thr Phe Leu Ser Asn Ile Ser
85 90 95
Thr Glu Ala Ala Ala Pro Ile Thr Ser Leu Ile Leu Ala Leu Ile Gly
100 105 110
Met Asn Leu Val Trp Arg Phe Ser Lys Gly Arg Ile Arg Arg Asp Tyr
115 120 125
Ser Asp Arg Pro His Ser Lys Gly Phe Leu Gly Gly Leu Gly Ile Val
130 135 140
Gly Gly Phe Val Asp Ala Ser Gly Gly Gly Gly Trp Gly Pro Val Thr
145 150 155 160
Thr Ser Thr Leu Leu Ser Leu Gly Arg Thr Glu Pro Arg Lys Val Val
165 170 175
Gly Thr Val Asn Thr Ala Glu Phe Leu Val Ser Leu Ala Ala Thr Leu
180 185 190
Gly Phe Val Val Gly Leu Trp Asp Asp Leu Val Ala Asn Leu Ser Ala
195 200 205
Val Leu Ala Leu Leu Ile Gly Gly Ala Ile Ala Ala Pro Ile Gly Ala
210 215 220
Trp Met Ile Ser Arg Val Asn Ala Thr Val Leu Gly Gly Phe Val Gly
225 230 235 240
Thr Leu Ile Val Thr Leu Asn Leu Pro Lys Val Leu Asn Val Val Gly
245 250 255
Leu Asp Phe Ile Pro Thr Gly Leu Val Gln Val Thr Val Leu Leu Ile
260 265 270
Gly Leu Pro Leu Thr Tyr Leu Gly Phe Arg Arg Tyr Arg Lys Asn Leu
275 280 285
Leu Asn Glu Thr Ile Ser Ser Glu Val Val Ser Glu Pro Gln Gly Gln
290 295 300
Lys Ile Lys Ser Ser
305
<210> 102
<211> 1374
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 102
atgacaactc ccctgcgcgt agccatcatc ggagctggcc ctgctggcat ttacgcatcc 60
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tcccaggacc tggtctgcca gatcctggaa cagtacgcaa tccgcgagcc aaaggacgct 780
ccgcacaccc tgcagatcca cctctttgaa aacccagttg aggttcttca aaaggacggc 840
aaggttgttg gcctgcgcac cgaacgcacc gcgctcgacg gcaacggtgg cgtaaacggc 900
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<210> 103
<211> 457
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 103
Met Thr Thr Pro Leu Arg Val Ala Ile Ile Gly Ala Gly Pro Ala Gly
1 5 10 15
Ile Tyr Ala Ser Asp Leu Leu Ile Arg Asn Glu Glu Arg Glu Val Phe
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Val Asp Leu Phe Glu Gln Met Pro Ala Pro Phe Gly Leu Ile Arg Tyr
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Gly Val Ala Pro Asp His Pro Arg Ile Lys Gly Ile Val Lys Ser Leu
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His Asn Val Leu Asp Lys Pro Arg Leu Arg Leu Leu Gly Asn Ile Glu
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Ile Gly Lys Asp Ile Thr Val Glu Glu Leu Arg Asp Tyr Tyr Asp Ala
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Val Val Phe Ser Thr Gly Ala Val Ala Asp Arg Asp Leu Asn Ile Pro
100 105 110
Gly Ile Glu Ala Glu Gly Ser Phe Gly Ala Gly Glu Phe Val Gly Phe
115 120 125
Tyr Asp Gly Asn Pro Arg Phe Glu Arg Ser Trp Asp Leu Ser Ala Gln
130 135 140
Ser Val Ala Val Ile Gly Val Gly Asn Val Gly Leu Asp Val Ala Arg
145 150 155 160
Ile Leu Ala Lys Thr Gly Asp Glu Leu Lys Val Thr Glu Ile Ser Asp
165 170 175
Asn Val Tyr Asp Ser Leu Lys Glu Asn Lys Ala Thr Glu Val His Val
180 185 190
Phe Gly Arg Arg Gly Pro Ala Gln Val Lys Phe Thr Pro Gln Glu Leu
195 200 205
Lys Glu Leu Asp His Ser Pro Thr Ile Asn Val Val Val Asp Pro Glu
210 215 220
Asp Ile Asp Tyr Asp Gly Ala Ser Glu Glu Ala Arg Arg Ala Ser Lys
225 230 235 240
Ser Gln Asp Leu Val Cys Gln Ile Leu Glu Gln Tyr Ala Ile Arg Glu
245 250 255
Pro Lys Asp Ala Pro His Thr Leu Gln Ile His Leu Phe Glu Asn Pro
260 265 270
Val Glu Val Leu Gln Lys Asp Gly Lys Val Val Gly Leu Arg Thr Glu
275 280 285
Arg Thr Ala Leu Asp Gly Asn Gly Gly Val Asn Gly Thr Gly Glu Phe
290 295 300
Lys Asp Trp Pro Val Gln Ala Val Tyr Arg Ala Val Gly Tyr Lys Ser
305 310 315 320
Asp Pro Ile Asp Gly Val Pro Phe Asp Gly Asn Lys His Val Ile Pro
325 330 335
Asn Asp Gly Gly His Val Leu Thr Ala Pro Gly Ala Glu Pro Val Pro
340 345 350
Gly Leu Tyr Ala Thr Gly Trp Ile Lys Arg Gly Pro Ile Gly Leu Ile
355 360 365
Gly Asn Thr Lys Ser Asp Ala Lys Glu Thr Thr Asp Ile Leu Ile Lys
370 375 380
Asp Ala Val Thr Gly Val Leu Glu Ala Pro Lys His Gln Gly Glu Glu
385 390 395 400
Ala Ile Ile Glu Leu Leu Asp Ser Arg Asn Ile Pro Phe Thr Thr Trp
405 410 415
Glu Gly Trp Tyr Lys Leu Asp Ala Ala Glu Arg Ala Leu Gly Glu Ala
420 425 430
Glu Gly Arg Glu Arg Lys Lys Ile Val Asp Trp Glu Glu Met Val Arg
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Gln Ala Arg Glu Ala Pro Ala Ile Val
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<210> 104
<211> 1173
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 104
ttgtctatga ttggctatgg tttacctatg cccaatcagg cccacttctc tgcgtccttt 60
gcccgcccct ctaccccggc tgcaaagtgc atgcaccata tccgcctcgg ccagcaactc 120
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ccaactccca tcaccttgac cttctacgcc gatgactctg tgggcgcggc ctacagcaat 720
gatttgggag tacatgtcat tggaccactg gctacaactc gtggatcagg tttggatact 780
ttgggcatgg ctgctgaaga tgcgctgagc acccaaggtt tcttaagcag ggtttctgat 840
cagggtatct ttgccaacag ccttggtgag ctagtcacca ttgctaaaga caatgaaacc 900
gcacgggaat tcctcaacga tcgcgcgacc ctgctggctc acactgccgc agaagctgct 960
gaaacagtta agccatccac cctggttctc tcgggatcgg cgttttccga agatccacaa 1020
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ttgatcccca cccaccggga aaatgtccgc gcagcagctc gcgcagtcgc acttgatcga 1140
ctactcaacg agccacttac cctcgtaccc taa 1173
<210> 105
<211> 390
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 105
Leu Ser Met Ile Gly Tyr Gly Leu Pro Met Pro Asn Gln Ala His Phe
1 5 10 15
Ser Ala Ser Phe Ala Arg Pro Ser Thr Pro Ala Ala Lys Cys Met His
20 25 30
His Ile Arg Leu Gly Gln Gln Leu Ile Arg Asn Glu Leu Val Glu Ala
35 40 45
Thr Gly Leu Ser Gln Pro Thr Val Thr Arg Ala Val Thr Ala Leu Met
50 55 60
Gln Ala Gly Leu Val Arg Glu Arg Pro Asp Leu Thr Leu Ser Ser Gly
65 70 75 80
Pro Gly Arg Pro Asn Ile Pro Leu Glu Leu Ala Pro Ser Pro Trp Ile
85 90 95
His Ala Gly Val Ala Ile Gly Thr Lys Ser Ser Tyr Val Ala Leu Phe
100 105 110
Asp Thr Lys Gly Arg Thr Leu Arg Asp Ala Ile Leu Glu Ile Ser Ala
115 120 125
Ala Asp Leu Asp Pro Asp Thr Phe Ile Glu His Leu Ile Ala Gly Val
130 135 140
Asn Arg Leu Thr Thr Gly Leu Asp Leu Pro Leu Val Gly Ile Gly Val
145 150 155 160
Ala Thr Ser Gly Lys Val Thr Asn Ala Gly Val Val Thr Ala Ser Asn
165 170 175
Leu Gly Trp Asp Gly Val Asp Ile Ala Gly Arg Leu Asn Tyr Gln Phe
180 185 190
Ser Val Pro Ala Thr Val Ala Ser Ala Ile Pro Ala Ile Ala Ala Ser
195 200 205
Glu Leu Gln Ala Ser Pro Leu Pro His Pro Glu Gln Pro Thr Pro Ile
210 215 220
Thr Leu Thr Phe Tyr Ala Asp Asp Ser Val Gly Ala Ala Tyr Ser Asn
225 230 235 240
Asp Leu Gly Val His Val Ile Gly Pro Leu Ala Thr Thr Arg Gly Ser
245 250 255
Gly Leu Asp Thr Leu Gly Met Ala Ala Glu Asp Ala Leu Ser Thr Gln
260 265 270
Gly Phe Leu Ser Arg Val Ser Asp Gln Gly Ile Phe Ala Asn Ser Leu
275 280 285
Gly Glu Leu Val Thr Ile Ala Lys Asp Asn Glu Thr Ala Arg Glu Phe
290 295 300
Leu Asn Asp Arg Ala Thr Leu Leu Ala His Thr Ala Ala Glu Ala Ala
305 310 315 320
Glu Thr Val Lys Pro Ser Thr Leu Val Leu Ser Gly Ser Ala Phe Ser
325 330 335
Glu Asp Pro Gln Gly Arg Leu Val Phe Ala Ser Gln Leu Lys Lys Glu
340 345 350
Tyr Asp Ala Asp Ile Glu Leu Arg Leu Ile Pro Thr His Arg Glu Asn
355 360 365
Val Arg Ala Ala Ala Arg Ala Val Ala Leu Asp Arg Leu Leu Asn Glu
370 375 380
Pro Leu Thr Leu Val Pro
385 390
<210> 106
<211> 1074
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 106
gtgttcatgc ttgcacagcg aacactcccc attcacatca ccgcccccca cctgcccgtc 60
gcgcgcgtat ttcaccaaat tcgcgccaca gacgccgatc gcacctcgct gcaacgcgat 120
cttgaactct cccaagctgg catcactcgg catgtatcag cgcttattga tgcaggtctc 180
gtggaggaaa cccgagtgga ttccggggcg cgctcggggc gaccgcgcac aaaattaggc 240
atcgacggcc gccatctcac cgcctgggga gtgcacattg gcctgcgcag cacggatttt 300
gcggtgtgcg atttagccgg ccgagtgatt aggtatgagc gcgtggacca tgaagtttca 360
cactccacgc cgtcggaaac gctgaatttt gtcgcacata ggttacaaac attgagcgcc 420
ggcttgcccg agccccgcaa tgtgggcgtg gcattatctg cccacttaag cgccaacggc 480
accgtcactt ccgaagatta tggctggtca gaggtggaaa ttgggataca cctccccttc 540
cccgccacca tcggatcagg tgttgcggcg atggccggtt cggaaattat caacgcgcca 600
ctgacccaat ccacgcagtc cacgctgtat ttctacgccc gcgaaatggt ctcccacgcc 660
tggattttca acggcgctgt ccaccgcccc aacagcggcc gcacgccgac ggcgttcgga 720
aatacaaata ccttaaaaga tgcttttcga cgtggactca caccaacaac tttctccgat 780
ttagtccaac tctcccacac caacccgctt gcccgacaga tcctcaacga gcgcgcccac 840
aaacttgccg acgccgtaac caccgccgtt gatgttgtcg accccgaagc cgtcgtcttc 900
gccggcgaag ccttcaccct ggatccggaa actcttcgca ttgtggtgac ccagctccga 960
gcaaacaccg gcagccaact gagaatccaa cgcgcagacg cccacattct ccgcaccgcg 1020
gccatccagg tggcgctgca tccgatccgt caagatccgt tagcatttgt gtaa 1074
<210> 107
<211> 357
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 107
Met Phe Met Leu Ala Gln Arg Thr Leu Pro Ile His Ile Thr Ala Pro
1 5 10 15
His Leu Pro Val Ala Arg Val Phe His Gln Ile Arg Ala Thr Asp Ala
20 25 30
Asp Arg Thr Ser Leu Gln Arg Asp Leu Glu Leu Ser Gln Ala Gly Ile
35 40 45
Thr Arg His Val Ser Ala Leu Ile Asp Ala Gly Leu Val Glu Glu Thr
50 55 60
Arg Val Asp Ser Gly Ala Arg Ser Gly Arg Pro Arg Thr Lys Leu Gly
65 70 75 80
Ile Asp Gly Arg His Leu Thr Ala Trp Gly Val His Ile Gly Leu Arg
85 90 95
Ser Thr Asp Phe Ala Val Cys Asp Leu Ala Gly Arg Val Ile Arg Tyr
100 105 110
Glu Arg Val Asp His Glu Val Ser His Ser Thr Pro Ser Glu Thr Leu
115 120 125
Asn Phe Val Ala His Arg Leu Gln Thr Leu Ser Ala Gly Leu Pro Glu
130 135 140
Pro Arg Asn Val Gly Val Ala Leu Ser Ala His Leu Ser Ala Asn Gly
145 150 155 160
Thr Val Thr Ser Glu Asp Tyr Gly Trp Ser Glu Val Glu Ile Gly Ile
165 170 175
His Leu Pro Phe Pro Ala Thr Ile Gly Ser Gly Val Ala Ala Met Ala
180 185 190
Gly Ser Glu Ile Ile Asn Ala Pro Leu Thr Gln Ser Thr Gln Ser Thr
195 200 205
Leu Tyr Phe Tyr Ala Arg Glu Met Val Ser His Ala Trp Ile Phe Asn
210 215 220
Gly Ala Val His Arg Pro Asn Ser Gly Arg Thr Pro Thr Ala Phe Gly
225 230 235 240
Asn Thr Asn Thr Leu Lys Asp Ala Phe Arg Arg Gly Leu Thr Pro Thr
245 250 255
Thr Phe Ser Asp Leu Val Gln Leu Ser His Thr Asn Pro Leu Ala Arg
260 265 270
Gln Ile Leu Asn Glu Arg Ala His Lys Leu Ala Asp Ala Val Thr Thr
275 280 285
Ala Val Asp Val Val Asp Pro Glu Ala Val Val Phe Ala Gly Glu Ala
290 295 300
Phe Thr Leu Asp Pro Glu Thr Leu Arg Ile Val Val Thr Gln Leu Arg
305 310 315 320
Ala Asn Thr Gly Ser Gln Leu Arg Ile Gln Arg Ala Asp Ala His Ile
325 330 335
Leu Arg Thr Ala Ala Ile Gln Val Ala Leu His Pro Ile Arg Gln Asp
340 345 350
Pro Leu Ala Phe Val
355
<210> 108
<211> 2180
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 启动子P2
<400> 108
tttcgcggtg aatcaaccca cccgaacggc gatccttcga agtattttgc cgattgatca 60
attagcgtcg gcaacatcac tgaatatgct gctcatgcag accggcgcaa tcgttggccc 120
gctgatcgca ggtgcgttga ttccgctgat cggtttcggg tggctgtatt tccttgatgt 180
tgtctccatc atccccacac tgtgggctgt atggtcactg ccttcaatca agccatccgg 240
caaggtcatg aaggccggtt tcgccagtgt ggtggatggc ctgaagtatt tggctggcca 300
acccgtgttg ttgatggtga tggtgctgga tcttatcgcc atgattttcg gcatgccacg 360
tgcgctttac cccgagatcg cggaagtgaa cttcggtggt ggtgacgccg gtgcaacgat 420
gctggcgttc atgtactcat ccatggctgt tggcgcagtt cttggcggcg tgctgtctgg 480
ttgggtttcc cggattagcc gccagggtgt tgcagtttat tggtgcatca tcgcctgggg 540
cgcagccgtt gctttgggtg gcgtagcaat tgttgtcagc cccggcgctg tgaccgcgtg 600
ggcgtggatg ttcatcatca tgatggtcat tggtggcatg gctgacatgt ttagctcggc 660
tgttcgaaat gctattttgc agcagtctgc agcggaacat gtgcagggcc gaatccaagg 720
tgtgtggatc atcgtcgtgg tgggtggacc tcgtttagct gacgtccttc acggttgggc 780
cgctgagccc ttgggtgcag gttggacggt attatggggc ggagtagcgg tggttgtact 840
cactgcaatt tgtatggtgg cggtgcctaa attctggaaa tacgagaaac caaaaattac 900
cggcatctaa atacttatcc atgcccattt acagacaatg ccttagcttt gacctgcaca 960
aatagttgca aattgtccca catacacata aagtagcttg cgtatttaaa attatgaacc 1020
taaggggttt agcaatgccc aatcaggccc acttctctgc gtcctttgcc cgcccctcta 1080
ccccggctgc aaagtgcatg caccatatcc gcctcggcca gcaactcatt agaaatgagc 1140
tggtcgaggc cacaggtctg tcccaaccga ctgtcacccg cgcagtcacc gctttaatgc 1200
aggcaggttt ggttcgtgaa cgccctgatc tcacactctc atcgggccct ggtcgtccca 1260
atattcctct agaactcgct ccaagtccat ggattcatgc aggcgtggca atcggcacca 1320
agtcttccta cgtcgctttg tttgatacca agggtcgcac ccttcgtgat gccatactgg 1380
aaatctcagc agctgattta gatccagaca ccttcatcga acacctcatc gctggtgtca 1440
accgcctcac cactggtctt gatctaccac tggtaggtat tggtgtggct acctcaggaa 1500
aagtcaccaa cgcgggcgtt gtcaccgcaa gcaacttggg ctgggatggc gttgatatcg 1560
ccggccgtct gaactaccaa ttcagcgttc cagcaaccgt ggcatcagca attcctgcca 1620
tcgcagcttc tgaactgcag gcttccccac ttccccaccc tgagcagcca actcccatca 1680
ccttgacctt ctacgccgat gactctgtgg gcgcggccta cagcaatgat ttgggagtac 1740
atgtcattgg accactggct acaactcgtg gatcaggttt ggatactttg ggcatggctg 1800
ctgaagatgc gctgagcacc caaggtttct taagcagggt ttctgatcag ggtatctttg 1860
ccaacagcct tggtgagcta gtcaccattg ctaaagacaa tgaaaccgca cgggaattcc 1920
tcaacgatcg cgcgaccctg ctggctcaca ctgccgcaga agctgctgaa acagttaagc 1980
catccaccct ggttctctcg ggatcggcgt tttccgaaga tccacaaggt cggttggtgt 2040
tcgcttccca attgaagaag gaatacgacg cagacattga gctccgcttg atccccaccc 2100
accgggaaaa tgtccgcgca gcagctcgcg cagtcgcact tgatcgacta ctcaacgagc 2160
cacttaccct cgtaccctaa 2180
<210> 109
<211> 2247
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 启动子P4
<400> 109
ccctcatgag ttcaggggtt agaaaagcaa tgggatttgg atgcggttcg gttttggccg 60
tcatcatggt tatctcattt gttggatggg cgcttagctt catggatgga acggcaccta 120
ttcgccaact ccagcaaatc cctgaagatg ttccgccggc gcgtggtgta gaagttccgc 180
aaattgatac aggggcagat ggacgcacgt cagatcattt gcgtttttgg gcggaaccaa 240
ttgctcaaga tgctggtgtg tccgctcaag cgattgcggc ttatggaaac gcagagctca 300
ttgcgagtac tgcgtggcct ggctgcaatc tggggtggaa taccttggca ggtatcggcc 360
aggtggaaac ccgtcacggt acctacaacg gcaaaatgtt cgggggcagt tccctggatg 420
aaaatggagt tgcaacccct ccaatcatcg gcgttccact tgatggttca ccggggtttg 480
cggaaattcc cgacactgat ggtggggaat tagatggcga tactgaatat gatcgcgcgg 540
taggtcccat gcagttcatt ccggaaacgt ggcgacttat gggattggat gcaaacggtg 600
atggggtagc ggaccccaac caaattgatg acgcagcatt gagtgccgca aacctgttgt 660
gttccaacga tcgtgacttg tccactcctg aaggatggac cgcagctgtt cattcttaca 720
acatgtctaa tcagtatttg atggacgttc gagatgctgc cgcgtcctac gctttacgac 780
agccggcgat ctaaaactta acaagcgcaa cccccgaaaa tgtgagatta tgtccggtcg 840
gacacgtgcg ggctggggat atgggtagtt taataaattt ataccacaca gtctattgca 900
atagaccaag ctgttcagta gggtgcatgg gagaagaatt tcctaataaa aactcttaag 960
gacctccaag tggctgaaat catgcacgta ttcgctcgcg aaattctcga ctcccgcggt 1020
aacccaaccg tcgaggcaga ggttttcctt gatgacggtt cccacggtgt cgcaggtgtt 1080
ccatccggcg catccaccgg cgtccacgag gctcatgagc tgcgtgacgg tggcgatcgc 1140
tacctgggca agggcgtttt gaaggcagtt gaaaacgtca acgaagaaat cggcgacgag 1200
ctcgctggcc tagaggctga cgatcagcgc ctcatcgacg aagcaatgat caagcttgat 1260
ggcaccgcca acaagtcccg cctgggtgca aacgcaatcc ttggtgtttc catggctgtt 1320
gcaaaggctg ctgctgattc cgcaggcctc ccactgttcc gctacatcgg tggaccaaac 1380
gcacacgttc ttccagttcc aatgatgaac atcatcaacg gtggcgctca cgctgactcc 1440
ggtgttgacg ttcaggaatt catgatcgct ccaatcggtg cagagacctt ctctgaggct 1500
ctccgcaacg gcgcagaggt ctaccacgca ctgaagtccg tcatcaagga aaagggcctg 1560
tccaccggac ttggcgatga gggcggcttc gctccttccg tcggctccac ccgtgaggct 1620
cttgacctta tcgttgaggc aatcgagaag gctggcttca ccccaggcaa ggacatcgct 1680
cttgctctgg acgttgcttc ctctgagttc ttcaaggacg gcacctacca cttcgaaggt 1740
ggccagcact ccgcagctga gatggcaaac gtttacgctg agctcgttga cgcgtaccca 1800
atcgtctcca tcgaggaccc actgcaggaa gatgactggg agggttacac caacctcacc 1860
gcaaccatcg gcgacaaggt tcagatcgtt ggcgacgact tcttcgtcac caaccctgag 1920
cgcctgaagg agggcatcgc taagaaggct gccaactcca tcctggttaa ggtgaaccag 1980
atcggtaccc tcaccgagac cttcgacgct gtcgacatgg ctcaccgcgc aggctacacc 2040
tccatgatgt cccaccgttc cggtgagacc gaggacacca ccattgctga cctcgcagtt 2100
gcactcaact gtggccagat caagactggt gctccagcac gttccgaccg tgtcgcaaag 2160
tacaaccagc ttctccgcat cgagcagttg cttggcgacg ccggcgtcta cgcaggtcgc 2220
agcgcattcc cacgctttca gggctaa 2247
<210> 110
<211> 2192
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 启动子P8
<400> 110
tcaccgagtc tttgatcaag ggtggcgctt ttgactccct tggacacgca cgaaaaggcc 60
tcatgctggt cttcgaagat gccgttgatt ccgtcatcgc taccaaaaaa gctgctgaca 120
agggacaatt tgatctcttt gcagctttcg actcggataa caacgacgat gtggcaagtt 180
tcttccagat caccgttcct gatgacgaat gggaccgtaa gcatgagctc gcactcgagc 240
gagaaatgct gggtctgtat gtttctggac acccactcga tggctatgaa gatgccattg 300
ctgcccaggt tgatacagca ctgaccacca ttgttgccgg tgaactcaag cacggcgcag 360
aagtgaccgt gggtggcatt atctctggtg tggatcgacg gttctccaag aaggacggtt 420
ccccttgggc gattgtcacc attgaagatc acaacggcgc gtccgttgaa ttgttggtct 480
tcaacaaggt gtattccatc gttggatcca tgattgtgga agacaacatc attttggcca 540
aggcacacat ctccattcga gatgatcgta tgagcctttt ctgtgatgat ctccgcgttc 600
cagagcttgg gccaggaaac gggcaaggac ttccgcttcg tttgtccatg cgtactgatc 660
agtgcaccat gtccaacatt gccaagctca agcaggtgct ggtggacaac aagggtgaat 720
ctgatgtgta cctcaatttg atcgatgggg ataactccac ggtcatgatt ttgggtgatc 780
acttaagagt caaccgatcc gcaagtttga tgggcgacct caaggcaacg atggggccag 840
gcatcctcgg ttaatcacat cacactggga ttaccccgtg taggggtgaa aacccgaatg 900
tggctaaaac ttttggaaac ttaagttacc tttaatcgga aacttattga attcgggtga 960
ggcaactgca actctggact taaagcatga gccagaaccg catcaggacc actcacgttg 1020
gttccttgcc ccgtacccca gagctacttg atgcaaacat caagcgctct aacggtgaga 1080
ttggggagga ggaattcttc cagatcctgc agtcttctgt agatgacgtg atcaagcgcc 1140
aggttgacct gggtatcgac atcctcaacg agggcgaata cggccacgtc acctccggtg 1200
cagttgactt cggtgcatgg tggaactact ccttcacccg cctgggcgga ctgaccatga 1260
ccgataccga ccgttgggca agccaggaag cagtgcgttc cacccctggc aacatcaagc 1320
tgaccagctt ctctgatcgt cgcgaccgcg cattgttcag cgaagcatac gaggatccag 1380
tatctggcat cttcaccggc cgcgcttctg tgggcaaccc agagttcacc ggacctatta 1440
cctacattgg ccaggaagaa actcagacgg atgttgatct gctgaagaag ggcatgaacg 1500
cagcgggagc taccgacggc ttcgttgcag cactatcccc aggatctgca gctcgattga 1560
ccaacaagtt ctacgacact gatgaagaag tcgtcgcagc atgtgccgat gcgctttccc 1620
aggaatacaa gatcatcacc gatgcaggtc tgaccgttca gctcgacgca ccggacttgg 1680
cagaagcatg ggatcagatc aacccagagc caagcgtgaa ggattactta gactggatcg 1740
gtacacgcat cgatgccatc aacagtgcag tgaagggcct tccaaaggaa cagacccgcc 1800
tgcacatctg ctggggctct tggcacggac cacacgtcac tgacatccca ttcggtgaca 1860
tcattggtga gatcctgcgc gcagaggtcg gtggcttctc cttcgaaggc gcatctcctc 1920
gtcacgcaca cgagtggcgt gtatgggaag aaaacaagct tcctgaaggc tctgttatct 1980
accctggtgt tgtgtctcac tccatcaacg ctgtggagca cccacgcctg gttgctgatc 2040
gtatcgttca gttcgccaag cttgttggcc ctgagaacgt cattgcgtcc actgactgtg 2100
gtctgggcgg acgtctgcat tcccagatcg catgggcaaa gctggagtcc ctagtagagg 2160
gcgctcgcat tgcatcaaag gaactgttct aa 2192
<210> 111
<211> 97
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 启动子P3
<400> 111
tgccgtttct cgcgttgtgt gtggtactac gtggggacct aagcgtgtaa gatggaaacg 60
tctgtatcgg ataagtagcg aggagtgttc gttaaaa 97
<210> 112
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 112
ccaagcttgc atgcctcacc gagtctttga tcaag 35
<210> 113
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 113
caaaagtttt agccacattc gggttttcac cccta 35
<210> 114
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 114
ctctggactt aaagcatgag ccagaaccgc atcag 35
<210> 115
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 115
cggtacccgg ggatcttaga acagttcctt tgatg 35
<210> 116
<211> 87
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> P8启动子的DNA片段
<400> 116
gtggctaaaa cttttggaaa cttaagttac ctttaatcgg aaacttattg aattcgggtg 60
aggcaactgc aactctggac ttaaagc 87
<210> 117
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 117
gtgaaaaccc gaatgtggct aaaacttttg gaaac 35
<210> 118
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 118
gcggttctgg ctcatgcttt aagtccagag ttgca 35
<210> 119
<211> 1206
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 119
atgagccaga accgcatcag gaccactcac gttggttcct tgccccgtac cccagagcta 60
cttgatgcaa acatcaagcg ttctaacggt gagattgggg aggaggaatt cttccagatt 120
ctgcagtctt ctgtagatga cgtgatcaag cgccaggttg acctgggtat cgacatcctt 180
aacgagggcg aatacggcca cgtcacctcc ggtgcagttg acttcggtgc atggtggaac 240
tactccttca cccgcctggg cggactgacc atgaccgata ccgaccgttg ggcaagccag 300
gaagcagtgc gttccacccc tggcaacatc aagctgacca gcttctctga tcgtcgcgac 360
cgcgcattgt tcagcgaagc atacgaggat ccagtatctg gcatcttcac cggtcgcgct 420
tctgtgggca acccagagtt caccggacct attacctaca ttggccagga agaaactcag 480
acggatgttg atctgctgaa gaagggcatg aacgcagcgg gagctaccga cggcttcgtt 540
gcagcactat ccccaggatc tgcagctcga ttgaccaaca agttctacga cactgatgaa 600
gaagtcgtcg cagcatgtgc tgatgcgctt tcccaggaat acaagatcat caccgatgca 660
ggtctgaccg ttcagctcga cgcaccggac ttggcagaag catgggatca gatcaaccca 720
gagccaagcg tgaaggatta cttggactgg atcggtacac gcatcgatgc catcaacagt 780
gcagtgaagg gccttccaaa ggaacagacc cgcctgcaca tctgctgggg ctcttggcac 840
ggaccacacg tcactgacat cccattcggt gacatcattg gtgagatcct gcgcgcagag 900
gtcggtggct tctccttcga aggcgcatct cctcgtcacg cacacgagtg gcgtgtatgg 960
gaagaaaaca agcttcctga aggctctgtt atctaccctg gtgttgtgtc tcactccatc 1020
aacgctgtgg agcacccacg cctggttgct gatcgtatcg ttcagttcgc caagcttgtt 1080
ggccctgaga acgtcattgc gtccactgac tgtggtctgg gcggacgtct gcattcccag 1140
atcgcatggg caaagctgga gtccctagta gagggcgctc gcattgcatc aaaggaactg 1200
ttctaa 1206
<210> 120
<211> 401
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 120
Met Ser Gln Asn Arg Ile Arg Thr Thr His Val Gly Ser Leu Pro Arg
1 5 10 15
Thr Pro Glu Leu Leu Asp Ala Asn Ile Lys Arg Ser Asn Gly Glu Ile
20 25 30
Gly Glu Glu Glu Phe Phe Gln Ile Leu Gln Ser Ser Val Asp Asp Val
35 40 45
Ile Lys Arg Gln Val Asp Leu Gly Ile Asp Ile Leu Asn Glu Gly Glu
50 55 60
Tyr Gly His Val Thr Ser Gly Ala Val Asp Phe Gly Ala Trp Trp Asn
65 70 75 80
Tyr Ser Phe Thr Arg Leu Gly Gly Leu Thr Met Thr Asp Thr Asp Arg
85 90 95
Trp Ala Ser Gln Glu Ala Val Arg Ser Thr Pro Gly Asn Ile Lys Leu
100 105 110
Thr Ser Phe Ser Asp Arg Arg Asp Arg Ala Leu Phe Ser Glu Ala Tyr
115 120 125
Glu Asp Pro Val Ser Gly Ile Phe Thr Gly Arg Ala Ser Val Gly Asn
130 135 140
Pro Glu Phe Thr Gly Pro Ile Thr Tyr Ile Gly Gln Glu Glu Thr Gln
145 150 155 160
Thr Asp Val Asp Leu Leu Lys Lys Gly Met Asn Ala Ala Gly Ala Thr
165 170 175
Asp Gly Phe Val Ala Ala Leu Ser Pro Gly Ser Ala Ala Arg Leu Thr
180 185 190
Asn Lys Phe Tyr Asp Thr Asp Glu Glu Val Val Ala Ala Cys Ala Asp
195 200 205
Ala Leu Ser Gln Glu Tyr Lys Ile Ile Thr Asp Ala Gly Leu Thr Val
210 215 220
Gln Leu Asp Ala Pro Asp Leu Ala Glu Ala Trp Asp Gln Ile Asn Pro
225 230 235 240
Glu Pro Ser Val Lys Asp Tyr Leu Asp Trp Ile Gly Thr Arg Ile Asp
245 250 255
Ala Ile Asn Ser Ala Val Lys Gly Leu Pro Lys Glu Gln Thr Arg Leu
260 265 270
His Ile Cys Trp Gly Ser Trp His Gly Pro His Val Thr Asp Ile Pro
275 280 285
Phe Gly Asp Ile Ile Gly Glu Ile Leu Arg Ala Glu Val Gly Gly Phe
290 295 300
Ser Phe Glu Gly Ala Ser Pro Arg His Ala His Glu Trp Arg Val Trp
305 310 315 320
Glu Glu Asn Lys Leu Pro Glu Gly Ser Val Ile Tyr Pro Gly Val Val
325 330 335
Ser His Ser Ile Asn Ala Val Glu His Pro Arg Leu Val Ala Asp Arg
340 345 350
Ile Val Gln Phe Ala Lys Leu Val Gly Pro Glu Asn Val Ile Ala Ser
355 360 365
Thr Asp Cys Gly Leu Gly Gly Arg Leu His Ser Gln Ile Ala Trp Ala
370 375 380
Lys Leu Glu Ser Leu Val Glu Gly Ala Arg Ile Ala Ser Lys Glu Leu
385 390 395 400
Phe
<210> 121
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 121
ccaagcttgc atgccccctc atgagttcag gggtt 35
<210> 122
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 122
tggtataaat ttattaaact acccatatcc ccagc 35
<210> 123
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 123
cttaaggacc tccaagtggc tgaaatcatg cacgt 35
<210> 124
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 124
cggtacccgg ggatcttagc cctgaaagcg tggga 35
<210> 125
<211> 98
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> P4启动子的DNA片段
<400> 125
aataaattta taccacacag tctattgcaa tagaccaagc tgttcagtag ggtgcatggg 60
agaagaattt cctaataaaa actcttaagg acctccaa 98
<210> 126
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 126
ggatatgggt agtttaataa atttatacca cacag 35
<210> 127
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 127
catgatttca gccacttgga ggtccttaag agttt 35
<210> 128
<211> 1278
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 128
gtggctgaaa tcatgcacgt attcgctcgc gaaattctcg actcccgcgg taacccaacc 60
gtcgaggcag aggttttcct tgatgacggt tcccacggtg tcgcaggtgt tccatccggc 120
gcatccaccg gcgtccacga ggctcatgag ctgcgtgacg gtggcgatcg ctacctgggc 180
aagggcgttt tgaaggcagt tgaaaacgtc aacgaagaaa tcggcgacga gctcgctggc 240
ctagaggctg acgatcagcg cctcatcgac gaagcaatga tcaagcttga tggcaccgcc 300
aacaagtccc gcctgggtgc aaacgcaatc cttggtgttt ccatggctgt tgcaaaggct 360
gctgctgatt ccgcaggcct cccactgttc cgctacatcg gtggaccaaa cgcacacgtt 420
cttccagttc caatgatgaa catcatcaac ggtggcgctc acgctgactc cggtgttgac 480
gttcaggaat tcatgatcgc tccaatcggt gcagagacct tctctgaggc tctccgcaac 540
ggcgcagagg tctaccacgc actgaagtcc gtcatcaagg aaaagggcct gtccaccgga 600
cttggcgatg agggcggctt cgctccttcc gtcggctcca cccgtgaggc tcttgacctt 660
atcgttgagg caatcgagaa ggctggcttc accccaggca aggacatcgc tcttgctctg 720
gacgttgctt cctctgagtt cttcaaggac ggcacctacc acttcgaagg tggccagcac 780
tccgcagctg agatggcaaa cgtttacgct gagctcgttg acgcgtaccc aatcgtctcc 840
atcgaggacc cactgcagga agatgactgg gagggttaca ccaacctcac cgcaaccatc 900
ggcgacaagg ttcagatcgt tggcgacgac ttcttcgtca ccaaccctga gcgcctgaag 960
gagggcatcg ctaagaaggc tgccaactcc atcctggtta aggtgaacca gatcggtacc 1020
ctcaccgaga ccttcgacgc tgtcgacatg gctcaccgcg caggctacac ctccatgatg 1080
tcccaccgtt ccggtgagac cgaggacacc accattgctg acctcgcagt tgcactcaac 1140
tgtggccaga tcaagactgg tgctccagca cgttccgacc gtgtcgcaaa gtacaaccag 1200
cttctccgca tcgagcagtt gcttggcgac gccggcgtct acgcaggtcg cagcgcattc 1260
ccacgctttc agggctaa 1278
<210> 129
<211> 425
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 129
Met Ala Glu Ile Met His Val Phe Ala Arg Glu Ile Leu Asp Ser Arg
1 5 10 15
Gly Asn Pro Thr Val Glu Ala Glu Val Phe Leu Asp Asp Gly Ser His
20 25 30
Gly Val Ala Gly Val Pro Ser Gly Ala Ser Thr Gly Val His Glu Ala
35 40 45
His Glu Leu Arg Asp Gly Gly Asp Arg Tyr Leu Gly Lys Gly Val Leu
50 55 60
Lys Ala Val Glu Asn Val Asn Glu Glu Ile Gly Asp Glu Leu Ala Gly
65 70 75 80
Leu Glu Ala Asp Asp Gln Arg Leu Ile Asp Glu Ala Met Ile Lys Leu
85 90 95
Asp Gly Thr Ala Asn Lys Ser Arg Leu Gly Ala Asn Ala Ile Leu Gly
100 105 110
Val Ser Met Ala Val Ala Lys Ala Ala Ala Asp Ser Ala Gly Leu Pro
115 120 125
Leu Phe Arg Tyr Ile Gly Gly Pro Asn Ala His Val Leu Pro Val Pro
130 135 140
Met Met Asn Ile Ile Asn Gly Gly Ala His Ala Asp Ser Gly Val Asp
145 150 155 160
Val Gln Glu Phe Met Ile Ala Pro Ile Gly Ala Glu Thr Phe Ser Glu
165 170 175
Ala Leu Arg Asn Gly Ala Glu Val Tyr His Ala Leu Lys Ser Val Ile
180 185 190
Lys Glu Lys Gly Leu Ser Thr Gly Leu Gly Asp Glu Gly Gly Phe Ala
195 200 205
Pro Ser Val Gly Ser Thr Arg Glu Ala Leu Asp Leu Ile Val Glu Ala
210 215 220
Ile Glu Lys Ala Gly Phe Thr Pro Gly Lys Asp Ile Ala Leu Ala Leu
225 230 235 240
Asp Val Ala Ser Ser Glu Phe Phe Lys Asp Gly Thr Tyr His Phe Glu
245 250 255
Gly Gly Gln His Ser Ala Ala Glu Met Ala Asn Val Tyr Ala Glu Leu
260 265 270
Val Asp Ala Tyr Pro Ile Val Ser Ile Glu Asp Pro Leu Gln Glu Asp
275 280 285
Asp Trp Glu Gly Tyr Thr Asn Leu Thr Ala Thr Ile Gly Asp Lys Val
290 295 300
Gln Ile Val Gly Asp Asp Phe Phe Val Thr Asn Pro Glu Arg Leu Lys
305 310 315 320
Glu Gly Ile Ala Lys Lys Ala Ala Asn Ser Ile Leu Val Lys Val Asn
325 330 335
Gln Ile Gly Thr Leu Thr Glu Thr Phe Asp Ala Val Asp Met Ala His
340 345 350
Arg Ala Gly Tyr Thr Ser Met Met Ser His Arg Ser Gly Glu Thr Glu
355 360 365
Asp Thr Thr Ile Ala Asp Leu Ala Val Ala Leu Asn Cys Gly Gln Ile
370 375 380
Lys Thr Gly Ala Pro Ala Arg Ser Asp Arg Val Ala Lys Tyr Asn Gln
385 390 395 400
Leu Leu Arg Ile Glu Gln Leu Leu Gly Asp Ala Gly Val Tyr Ala Gly
405 410 415
Arg Ser Ala Phe Pro Arg Phe Gln Gly
420 425
<210> 130
<211> 666
<212> DNA
<213> Niastella koreensis
<400> 130
atgaataatc aaatttttga atccgttgac cattatatca gcgatttact gggttacgaa 60
gacgatgcat tgcttgccgc caccaattca ttagccgaag caggcatgcc tgccatcagc 120
gtatcaccca accagggcaa gtttctgcaa ttactggccc aattgtgcca ggcaaaaaat 180
atcctggagc tgggcacact ggcaggctac agcaccattt ggatggcccg ggccttaccc 240
aaaaacggcc ggctcatcac ccttgaatat gaccccaaac atgcggccgt tgcacaaaaa 300
aatatcgacc gggccggcct tacttcacaa gtacagatca gaaccggtaa agcaattgac 360
atattaccgc aattagtgga agaaggcgcc ggaccttttg atatgatctt tatcgatgcc 420
gataaaccac cttacaccga atattttcaa tgggcgcttc ggttatcacg tcccggtaca 480
ctcatcgtgg ccgataatgt gatccgtgat ggcaaagtgc tggatgaaaa cagtacggag 540
cctgctgtac agggcgcaag acgtttcaat gccatgctgg gcgccaatac cgccgttgac 600
gccaccattc ttcaaatggt aggtgtaaaa gaatacgatg gaatggcttt ggccatagta 660
aaataa 666
<210> 131
<211> 221
<212> PRT
<213> Niastella koreensis
<400> 131
Met Asn Asn Gln Ile Phe Glu Ser Val Asp His Tyr Ile Ser Asp Leu
1 5 10 15
Leu Gly Tyr Glu Asp Asp Ala Leu Leu Ala Ala Thr Asn Ser Leu Ala
20 25 30
Glu Ala Gly Met Pro Ala Ile Ser Val Ser Pro Asn Gln Gly Lys Phe
35 40 45
Leu Gln Leu Leu Ala Gln Leu Cys Gln Ala Lys Asn Ile Leu Glu Leu
50 55 60
Gly Thr Leu Ala Gly Tyr Ser Thr Ile Trp Met Ala Arg Ala Leu Pro
65 70 75 80
Lys Asn Gly Arg Leu Ile Thr Leu Glu Tyr Asp Pro Lys His Ala Ala
85 90 95
Val Ala Gln Lys Asn Ile Asp Arg Ala Gly Leu Thr Ser Gln Val Gln
100 105 110
Ile Arg Thr Gly Lys Ala Ile Asp Ile Leu Pro Gln Leu Val Glu Glu
115 120 125
Gly Ala Gly Pro Phe Asp Met Ile Phe Ile Asp Ala Asp Lys Pro Pro
130 135 140
Tyr Thr Glu Tyr Phe Gln Trp Ala Leu Arg Leu Ser Arg Pro Gly Thr
145 150 155 160
Leu Ile Val Ala Asp Asn Val Ile Arg Asp Gly Lys Val Leu Asp Glu
165 170 175
Asn Ser Thr Glu Pro Ala Val Gln Gly Ala Arg Arg Phe Asn Ala Met
180 185 190
Leu Gly Ala Asn Thr Ala Val Asp Ala Thr Ile Leu Gln Met Val Gly
195 200 205
Val Lys Glu Tyr Asp Gly Met Ala Leu Ala Ile Val Lys
210 215 220
<210> 132
<211> 8317
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pVK9::PcspB-omt312
<400> 132
cgcagcaggc atgagcagcc cgaatatgcg cctgctggct gcaacgaccg aggaaatgac 60
ccgcgttttc ggcgctgacc aggctttttc acataggctg agccggtggc cactgcacgt 120
ctccgacgat cccaccgcgt accgctggca tgcccagcac aatcgcgtgg atcgcctagc 180
tgatcccgaa aaagtttttg ccttttgtaa aaaacttctc ggtcgccccg caaattttcg 240
attccagatt ttttaaaaac caagccagaa atacgacaca ccgtttgcag ataatctgtc 300
tttcggaaaa atcaagtgcg atacaaaatt tttagcaccc ctgagctgcg caaagtcccg 360
cttcgtgaaa attttcgtgc cgcgtgattt tccgccaaaa actttaacga acgttcgtta 420
taatggtgtc atgaccttca cgacgaagta ccaaaattgg cccgaatcat cagctatgga 480
tctctctgat gtcgcgctgg agtccgacgc gctcgatgct gccgtcgatt taaaaacggt 540
gatcggattt ttccgagctc tcgatacgac ggacgcgcca gcatcacgag actgggccag 600
tgccgcgagc gacctagaaa ctctcgtggc ggatcttgag gagctggctg acgagctgcg 660
tgctcggcag cgccaggagg acgcacagta gtggaggatc gaatcagttg cgcctactgc 720
ggtggcctga ttcctccccg gcctgacccg cgaggacggc gcgcaaaata ttgctcagat 780
gcgtgtcgtg ccgcagccag ccgcgagcgc gccaacaaac gccacgccga ggagctggag 840
gcggctaggt cgcaaatggc gctggaagtg cgtcccccga gcgaaatttt ggccatggtc 900
gtcacagagc tggaagcggc agcgagaatt atccgcgatc gtggcgcggt gcccgcaggc 960
atgacaaaca tcgtaaatgc cgcgtttcgt gtggccgtgg ccgcccagga cgtgtcagcg 1020
ccgccaccac ctgcaccgaa tcggcagcag cgtcgcgcgt cgaaaaagcg cacaggcggc 1080
aagaagcgat aagctgcacg aatacctgaa aaatgttgaa cgccccgtga gcggtaactc 1140
acagggcgtc ggctaacccc cagtccaaac ctgggagaaa gcgctcaaaa atgactctag 1200
cggattcacg agacattgac acaccggcct ggaaattttc cgctgatctg ttcgacaccc 1260
atcccgagct cgcgctgcga tcacgtggct ggacgagcga agaccgccgc gaattcctcg 1320
ctcacctggg cagagaaaat ttccagggca gcaagacccg cgacttcgcc agcgcttgga 1380
tcaaagaccc ggacacggga gaaacacagc cgaagttata ccgagttggt tcaaaatcgc 1440
ttgcccggtg ccagtatgtt gctctgacgc acgcgcagca cgcagccgtg cttgtcctgg 1500
acattgatgt gccgagccac caggccggcg ggaaaatcga gcacgtaaac cccgaggtct 1560
acgcgatttt ggagcgctgg gcacgcctgg aaaaagcgcc agcttggatc ggcgtgaatc 1620
cactgagcgg gaaatgccag ctcatctggc tcattgatcc ggtgtatgcc gcagcaggca 1680
tgagcagccc gaatatgcgc ctgctggctg caacgaccga ggaaatgacc cgcgttttcg 1740
gcgctgacca ggctttttca cataggctga gccggtggcc actgcacgtc tccgacgatc 1800
ccaccgcgta ccgctggcat gcccagcaca atcgcgtgga tcgcctagct gatcttatgg 1860
aggttgctcg catgatctca ggcacagaaa aacctaaaaa acgctatgag caggagtttt 1920
ctagcggacg ggcacgtatc gaagcggcaa gaaaagccac tgcggaagca aaagcacttg 1980
ccacgcttga agcaagcctg ccgagcgccg ctgaagcgtc tggagagctg atcgacggcg 2040
tccgtgtcct ctggactgct ccagggcgtg ccgcccgtga tgagacggct tttcgccacg 2100
ctttgactgt gggataccag ttaaaagcgg ctggtgagcg cctaaaagac accaagatca 2160
tcgacgccta cgagcgtgcc tacaccgtcg ctcaggcggt cggagcagac ggccgtgagc 2220
ctgatctgcc gccgatgcgt gaccgccaga cgatggcgcg acgtgtgcgc ggctacgtcg 2280
ctaaaggcca gccagtcgtc cctgctcgtc agacagagac gcagagcagc cgagggcgaa 2340
aagctctggc cactatggga agacgtggcg gtaaaaaggc cgcagaacgc tggaaagacc 2400
caaacagtga gtacgcccga gcacagcgag aaaaactagc taagtccagt caacgacaag 2460
ctaggaaagc taaaggaaat cgcttgacca ttgcaggttg gtttatgact gttgagggag 2520
agactggctc gtggccgaca atcaatgaag ctatgtctga atttagcgtg tcacgtcaga 2580
ccgtgaatag agcacttaag tctgcgggca ttgaacttcc acgaggacgc cgtaaagctt 2640
cccagtaaat gtgccatctc gtaggcagaa aacggttccc cccgtagggg tctctctctt 2700
ggcctccttt ctaggtcggg ctgattgctc ttgaagctct ctaggggggc tcacaccata 2760
ggcagataac ggttccccac cggctcacct cgtaagcgca caaggactgc tcccaaagat 2820
cgcctagctg atcttatgga ggttgctcgc atgatccttt ttgataatct catgaccaaa 2880
atcccttaac gtgagttttc gttccactga gcgtcagacc ccgtagaaaa gatccccgtc 2940
cacctacaac aaagctctca tcaaccgtgg ctccctcact ttctggctgg atgatggggc 3000
gattcaggcc tggtatgagt cagcaacacc ttcttcacga ggcagacctc tcgacggagt 3060
tccactgagc gtcagacccc gtagaaaaga tcaaaggatc ttcttgagat cctttttttc 3120
tgcgcgtaat ctgctgcttg caaacaaaaa aaccaccgct accagcggtg gtttgtttgc 3180
cggatcaaga gctaccaact ctttttccga aggtaactgg cttcagcaga gcgcagatac 3240
caaatactgt tcttctagtg tagccgtagt taggccacca cttcaagaac tctgtagcac 3300
cgcctacata cctcgctctg ctaatcctgt taccagtggc tgctgccagt ggcgataagt 3360
cgtgtcttac cgggttggac tcaagacgat agttaccgga taaggcgcag cggtcgggct 3420
gaacgggggg ttcgtgcaca cagcccagct tggagcgaac gacctacacc gaactgagat 3480
acctacagcg tgagctatga gaaagcgcca cgcttcccga agggagaaag gcggacaggt 3540
atccggtaag cggcagggtc ggaacaggag agcgcacgag ggagcttcca gggggaaacg 3600
cctggtatct ttatagtcct gtcgggtttc gccacctctg acttgagcgt cgatttttgt 3660
gatgctcgtc aggggggcgg agcctatgga aaaacgccag caacgcggcc tttttacggt 3720
tcctggcctt ttgctggcct tttgctcaca tgttctttcc tgcgttatcc cctgattctg 3780
tggataaccg tattaccgcc tttgagtgag ctgataccgc tcgccgcagc cgaacgaccg 3840
agcgcagcga gtcagtgagc gaggaagcgg aagaagctcg cacattcagc agcgtttttc 3900
agcgcgtttt cgatcaacgt ttcaatgttg gtatcaacac caggtttaac tttgaactta 3960
tcggcactga cggttactga ttttgaactt ttgctttgcc acggaacggt ctgcgttgtc 4020
gggaagatgc gtgatctgat ccttcaactc agcaaaagtt cccaatacgc aaaccgcctc 4080
tccccgcgcg ttggccgatt cattaatgca gctggcacga caggtttccc gactggaaag 4140
cgggcagtga gcgcaacgca attaatgtga gttagctcac tcattaggca ccccaggctt 4200
tacactttat gcttccggct cgtatgttgt gtggaattgt gagcggataa caatttcaca 4260
caggaaacag ctatgaccat gattacgcca agcttgcatg ccaaattcct gtgattagct 4320
gatttagtac ttttcggagg tgtctattct taccaaatcg tcaagttgtg ggtagagtca 4380
cctgaatatt aattgcaccg cacgggtgat atatgcttat ttgctcaagt agttcgaggt 4440
taagtgtatt ttaggtgaac aaatttcagc ttcgggtaga agactttcga tgcgcttcag 4500
agcttctatt gggaaatctg acaccacttg attaaatagc ctacccccga attgggggat 4560
tggtcatttt ttgctgtgaa ggtagttttg atgcatatga cctgcgttta taaagaaatg 4620
taaacgtgat cagatcgata taaaagaaac agtttgtact caggtttgaa gcattttctc 4680
cgattcgcct ggcaaaaatc tcaattgtcg cttacagttt ttctcaacga caggctgcta 4740
agctgctagt tcggtggcct agtgagtggc gtttacttgg ataaaagtaa tcccatgtcg 4800
tgatcagcca ttttgggttg tttccatagc aatccaaagg tttcgtcttt cgatacctat 4860
tcaaggagcc ttcgcctcta tgaacaacca gatcttcgaa tccgtcgatc actatatttc 4920
tgatcttctg ggctacgagg atgatgcgct tttggccgcc actaattccc tggccgaggc 4980
aggtaagccg gctattagcg tttccccgaa ccagggcaaa tttttgcaac tgctggccca 5040
actttgccaa gccaaaaaca ttttggagct tggtacgttt gccggctatt cgaccatctg 5100
gatggctcgc gctctcccca agaacggccg ccttatcacc ctggaatacg atccgaagca 5160
tgccgcggta gctcagaaga acattgatcg cgctggcttg accagccaag tgcaaatccg 5220
cacgggtaaa gcaatcgaca tcctgccgca gctggtggag gagggtgccg gtccatttga 5280
tatgatcttc attgatgccg ataagccccc atacaccgaa tactttcaat gggctctgcg 5340
actgtcccgc cccggcactc tcatcgtcgc ggataatgtc atccgcgatg gaaaggtgct 5400
ggacgaaaac tccaccgagc ctgccgtcca aggtgcccgc cgttttaatg ccatgctcgg 5460
tgctaatacg gcagttgacg caaccatcct ccaaatggtg ggcgtgaaag agtacgacgg 5520
catggcgctg gccatcgtta agtaagagct ccgtcgacaa gcttgcggcc gcactcgagc 5580
accaccacca ccaccactga gatccggctg ctaacaaagc ccgaaaggaa gctgagttgg 5640
ctgctgccac cgctgagcaa taactagcat gatccccggg taccgagctc gaattcactg 5700
gccgtcgttt tacaacgtcg tgactgggaa aaccctggcg ttacccaact taatcgcctt 5760
gcagcacatc cccctttcgc cagctggcgt aatagcgaag aggcccgcac cgatcgccct 5820
tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa tgcgatttat tcaacaaagc cgccgtcccg 5880
tcaagtcagc gtaatgctct gccctgatga atcccctaat gattttggta aaaatcatta 5940
agttaaggtg gatacacatc ttgtcatatg atcaaatggt ttcgcgaaaa atcaataatc 6000
agacaacaag atgtgcgaac tcgatatttt acacgactct ctttaccaat tctgccccga 6060
attacactta aaacgactca acagcttaac gttggcttgc cacgcattac ttgactgtaa 6120
aactctcact cttaccgaac ttggccgtaa cctgccaacc aaagcgagaa caaaacataa 6180
catcaaacga atcgaccgat tgttaggtaa tcgtcacctc cacaaagagc gactcgctgt 6240
ataccgttgg catgctagct ttatctgttc gggcaatacg atgcccattg tacttgttga 6300
ctggtctgat attcgtgagc aaaaacgact tatggtattg cgagcttcag tcgcactaca 6360
cggtcgttct gttactcttt atgagaaagc gttcccgctt tcagagcaat gttcaaagaa 6420
agctcatgac caatttctag ccgaccttgc gagcattcta ccgagtaaca ccacaccgct 6480
cattgtcagt gatgctggct ttaaagtgcc atggtataaa tccgttgaga agctgggttg 6540
gtactggtta agtcgagtaa gaggaaaagt acaatatgca gacctaggag cggaaaactg 6600
gaaacctatc agcaacttac atgatatgtc atctagtcac tcaaagactt taggctataa 6660
gaggctgact aaaagcaatc caatctcatg ccaaattcta ttgtataaat ctcgctctaa 6720
aggccgaaaa aatcagcgct cgacacggac tcattgtcac cacccgtcac ctaaaatcta 6780
ctcagcgtcg gcaaaggagc catgggttct agcaactaac ttacctgttg aaattcgaac 6840
acccaaacaa cttgttaata tctattcgaa gcgaatgcag attgaagaaa ccttccgaga 6900
cttgaaaagt cctgcctacg gactaggcct acgccatagc cgaacgagca gctcagagcg 6960
ttttgatatc atgctgctaa tcgccctgat gcttcaacta acatgttggc ttgcgggcgt 7020
tcatgctcag aaacaaggtt gggacaagca cttccaggct aacacagtca gaaatcgaaa 7080
cgtactctca acagttcgct taggcatgga agttttgcgg cattctggct acacaataac 7140
aagggaagac ttactcgtgg ctgcaaccct actagctcaa aatttattca cacatggtta 7200
cgctttgggg aaattatgag gggatctctc agtgctctgc cagtgttaca accaattaac 7260
caattctgat tagaaaaact catcgagcat caaatgaaac tgcaatttat tcatatcagg 7320
attatcaata ccatattttt gaaaaagccg tttctgtaat gaaggagaaa actcaccgag 7380
gcagttccat aggatggcaa gatcctggta tcggtctgcg attccgactc gtccaacatc 7440
aatacaacct attaatttcc cctcgtcaaa aataaggtta tcaagtgaga aatcaccatg 7500
agtgacgact gaatccggtg agaatggcaa aagcttatgc atttctttcc agacttgttc 7560
aacaggccag ccattacgct cgtcatcaaa atcactcgca tcaaccaaac cgttattcat 7620
tcgtgattgc gcctgagcga gacgaaatac gcgatcgctg ttaaaaggac aattacaaac 7680
aggaatcgaa tgcaaccggc gcaggaacac tgccagcgca tcaacaatat tttcacctga 7740
atcaggatat tcttctaata cctggaatgc tgttttcccg gggatcgcag tggtgagtaa 7800
ccatgcatca tcaggagtac ggataaaatg cttgatggtc ggaagaggca taaattccgt 7860
cagccagttt agtctgacca tctcatctgt aacatcattg gcaacgctac ctttgccatg 7920
tttcagaaac aactctggcg catcgggctt cccatacaat cgatagattg tcgcacctga 7980
ttgcccgaca ttatcgcgag cccatttata cccatataaa tcagcatcca tgttggaatt 8040
taatcgcggc ttcgagcaag acgtttcccg ttgaatatgg ctcataacac cccttgtatt 8100
actgtttatg taagcagaca gttttattgt tcatgatgat atatttttat cttgtgcaat 8160
gtaacatcag agattttgag acacaacgtg gctttgttga ataaatcgaa cttttgctga 8220
gttgaaggat cagatcacgc atcttcccga caacgcagac cgttccgtgg caaagcaaaa 8280
gttcaaaatc accaactggt cgcgatccgg tgtatgc 8317
<210> 133
<211> 221
<212> PRT
<213> Niastella koreensis
<400> 133
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1 5 10 15
Leu Gly Tyr Glu Asp Asp Ala Leu Leu Ala Ala Thr Asn Ser Leu Ala
20 25 30
Glu Ala Gly Lys Pro Ala Ile Ser Val Ser Pro Asn Gln Gly Lys Phe
35 40 45
Leu Gln Leu Leu Ala Gln Leu Cys Gln Ala Lys Asn Ile Leu Glu Leu
50 55 60
Gly Thr Phe Ala Gly Tyr Ser Thr Ile Trp Met Ala Arg Ala Leu Pro
65 70 75 80
Lys Asn Gly Arg Leu Ile Thr Leu Glu Tyr Asp Pro Lys His Ala Ala
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Val Ala Gln Lys Asn Ile Asp Arg Ala Gly Leu Thr Ser Gln Val Gln
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115 120 125
Gly Ala Gly Pro Phe Asp Met Ile Phe Ile Asp Ala Asp Lys Pro Pro
130 135 140
Tyr Thr Glu Tyr Phe Gln Trp Ala Leu Arg Leu Ser Arg Pro Gly Thr
145 150 155 160
Leu Ile Val Ala Asp Asn Val Ile Arg Asp Gly Lys Val Leu Asp Glu
165 170 175
Asn Ser Thr Glu Pro Ala Val Gln Gly Ala Arg Arg Phe Asn Ala Met
180 185 190
Leu Gly Ala Asn Thr Ala Val Asp Ala Thr Ile Leu Gln Met Val Gly
195 200 205
Val Lys Glu Tyr Asp Gly Met Ala Leu Ala Ile Val Lys
210 215 220
<210> 134
<211> 1563
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 134
atgagcgatg atcgtaaggc aattaaacgc gcactaatta gcgtgtatga caagactggc 60
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ttccctgagt gccttgaggg ccgtgtgaag acactgcatc ctaaggttca cgctggcatc 240
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cgccacaccg caacctacga tgtcaccgtt gcaacctgga tgagcgagca gctggctgcc 600
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cttgcacagg ctaagcagtt ccacggcaag gaaatgagct acaacaacta caccgattct 780
gatgctgcat ggcgtgcagc gtgggatcac gagcgtcctt gtgtagctat catcaagcat 840
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taa 1563
<210> 135
<211> 520
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 135
Met Ser Asp Asp Arg Lys Ala Ile Lys Arg Ala Leu Ile Ser Val Tyr
1 5 10 15
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Val Glu Ile Val Ser Thr Gly Ser Thr Ala Ala Lys Ile Ala Glu Leu
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275 280 285
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Ser Val Ser Ala Phe Gly Gly Val Ile Ala Ser Asn Arg Glu Val Ser
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<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 136
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taa 1563
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<211> 520
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
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1 5 10 15
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Leu Ala Asp Thr Arg Lys Glu Asp His Leu Arg Gln Leu Lys Glu Leu
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<212> DNA
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<223> 引物
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<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 139
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<210> 140
<211> 35
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<213> 人工序列
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<223> 引物
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<210> 141
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 141
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<210> 142
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<220>
<223> 引物
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<210> 143
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
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cataacctgt gccattttta acgaacactc ctcgc 35
<210> 144
<211> 1437
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 144
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<210> 145
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<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 145
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1 5 10 15
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Met Ala Val Ile Arg Gly Arg Glu Tyr Glu Gln Ala Gly Leu Val Pro
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Pro Ala Glu Ala Asn Asp Ser Asp Glu Tyr Ile Ala Phe Leu Gly Met
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Leu Arg Glu Val Leu Ala Ala Glu Pro Gly Lys Trp Gly Lys Ile Ala
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Glu Ala Val Lys Gly Val Thr Glu Glu Thr Thr Thr Gly Val His Arg
195 200 205
Leu Tyr His Phe Ala Glu Glu Gly Val Leu Pro Phe Pro Ala Met Asn
210 215 220
Val Asn Asp Ala Val Thr Lys Ser Lys Phe Asp Asn Lys Tyr Gly Thr
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Arg His Ser Leu Ile Asp Gly Ile Asn Arg Ala Thr Asp Met Leu Met
245 250 255
Gly Gly Lys Asn Val Leu Val Cys Gly Tyr Gly Asp Val Gly Lys Gly
260 265 270
Cys Ala Glu Ala Phe Asp Gly Gln Gly Ala Arg Val Lys Val Thr Glu
275 280 285
Ala Asp Pro Ile Asn Ala Leu Gln Ala Leu Met Asp Gly Tyr Ser Val
290 295 300
Val Thr Val Asp Glu Ala Ile Glu Asp Ala Asp Ile Val Ile Thr Ala
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Thr Gly Asn Lys Asp Ile Ile Ser Phe Glu Gln Met Leu Lys Met Lys
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Asp His Ala Leu Leu Gly Asn Ile Gly His Phe Asp Asn Glu Ile Asp
340 345 350
Met His Ser Leu Leu His Arg Asp Asp Val Thr Arg Thr Thr Ile Lys
355 360 365
Pro Gln Val Asp Glu Phe Thr Phe Ser Thr Gly Arg Ser Ile Ile Val
370 375 380
Leu Ser Glu Gly Arg Leu Leu Asn Leu Gly Asn Ala Thr Gly His Pro
385 390 395 400
Ser Phe Val Met Ser Asn Ser Phe Ala Asp Gln Thr Ile Ala Gln Ile
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Glu Leu Phe Gln Asn Glu Gly Gln Tyr Glu Asn Glu Val Tyr Arg Leu
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Pro Lys Val Leu Asp Glu Lys Val Ala Arg Ile His Val Glu Ala Leu
435 440 445
Gly Gly Gln Leu Thr Glu Leu Thr Lys Glu Gln Ala Glu Tyr Ile Gly
450 455 460
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465 470 475
<210> 146
<211> 1458
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 146
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gaggtggggt gtcagggtga ggttggttca gcgtccgcga tggcggctgc cgggttgtgt 1140
gcagtcttag gtggttctcc gcaacaggtg gaaaacgccg cggagattgc gttggagcac 1200
aatttgggat tgacgtgcga tccggtgggc gggttagtgc agattccgtg tattgaacgc 1260
aacgctattg ctgccatgaa gtccatcaat gcggcaaggc ttgcccggat tggtgatggc 1320
aacaatcgcg tgagtttgga tgatgtggtg gtcacgatgg ctgccaccgg tcgggacatg 1380
ttgaccaaat acaaggaaac gtcccttggt ggtttggcaa ccaccttggg cttcccggtg 1440
tcgatgacgg agtgttag 1458
<210> 147
<211> 485
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌
<400> 147
Met Val Asp Ser Cys Asn Phe Arg Leu Ser Arg Arg Arg Trp Thr Lys
1 5 10 15
Asn Asn Tyr Asn Gln Ala Asp His Leu Val His His Gln Arg Lys Gly
20 25 30
Pro Pro Ser Ala Met Ala Ile Ser Val Val Asp Leu Phe Ser Ile Gly
35 40 45
Ile Gly Pro Ser Ser Ser His Thr Val Gly Pro Met Arg Ala Ala Leu
50 55 60
Thr Tyr Ile Ser Glu Phe Pro Ser Ser His Val Asp Ile Thr Leu His
65 70 75 80
Gly Ser Leu Ala Ala Thr Gly Lys Gly His Cys Thr Asp Arg Ala Val
85 90 95
Leu Leu Gly Leu Val Gly Trp Glu Pro Thr Ile Val Pro Ile Asp Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Pro Gly Ala Pro Ile Pro Ala Lys Gly Ser Val Asn Gly
115 120 125
Pro Lys Gly Thr Val Ser Tyr Ser Leu Thr Phe Asp Pro His Pro Leu
130 135 140
Pro Glu His Pro Asn Ala Val Thr Phe Lys Gly Ser Thr Thr Arg Thr
145 150 155 160
Tyr Leu Ser Val Gly Gly Gly Phe Ile Met Thr Leu Glu Asp Phe Arg
165 170 175
Lys Leu Asp Asp Ile Gly Ser Gly Val Ser Thr Ile His Pro Glu Ala
180 185 190
Glu Val Pro Cys Pro Phe Gln Lys Ser Ser Gln Leu Leu Ala Tyr Gly
195 200 205
Arg Asp Phe Ala Glu Val Met Lys Asp Asn Glu Arg Leu Ile His Gly
210 215 220
Asp Leu Gly Thr Val Asp Ala His Leu Asp Arg Val Trp Gln Ile Met
225 230 235 240
Gln Glu Cys Val Ala Gln Gly Ile Ala Thr Pro Gly Ile Leu Pro Gly
245 250 255
Gly Leu Asn Val Gln Arg Arg Ala Pro Gln Val His Ala Leu Ile Ser
260 265 270
Asn Gly Asp Thr Cys Glu Leu Gly Ala Asp Leu Asp Ala Val Glu Trp
275 280 285
Val Asn Leu Tyr Ala Leu Ala Val Asn Glu Glu Asn Ala Ala Gly Gly
290 295 300
Arg Val Val Thr Ala Pro Thr Asn Gly Ala Ala Gly Ile Ile Pro Ala
305 310 315 320
Val Met His Tyr Ala Arg Asp Phe Leu Thr Gly Phe Gly Ala Glu Gln
325 330 335
Ala Arg Thr Phe Leu Tyr Thr Ala Gly Ala Val Gly Ile Ile Ile Lys
340 345 350
Glu Asn Ala Ser Ile Ser Gly Ala Glu Val Gly Cys Gln Gly Glu Val
355 360 365
Gly Ser Ala Ser Ala Met Ala Ala Ala Gly Leu Cys Ala Val Leu Gly
370 375 380
Gly Ser Pro Gln Gln Val Glu Asn Ala Ala Glu Ile Ala Leu Glu His
385 390 395 400
Asn Leu Gly Leu Thr Cys Asp Pro Val Gly Gly Leu Val Gln Ile Pro
405 410 415
Cys Ile Glu Arg Asn Ala Ile Ala Ala Met Lys Ser Ile Asn Ala Ala
420 425 430
Arg Leu Ala Arg Ile Gly Asp Gly Asn Asn Arg Val Ser Leu Asp Asp
435 440 445
Val Val Val Thr Met Ala Ala Thr Gly Arg Asp Met Leu Thr Lys Tyr
450 455 460
Lys Glu Thr Ser Leu Gly Gly Leu Ala Thr Thr Leu Gly Phe Pro Val
465 470 475 480
Ser Met Thr Glu Cys
485
<210> 148
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 148
cggtacccgg ggatcgaaag ctcactgttg ttaccgcagg 40
<210> 149
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 149
cgttttccac ctgttacgaa atttcagcaa tctgtggtgg 40
<210> 150
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 150
aacaggtgga aaacgccgcg gag 23
<210> 151
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 151
ccaagcttgc atgccattcg gtacgcgcta caccgcttg 39
<210> 152
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 152
caaccctggt cagccaactg agtag 25
<210> 153
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 153
tgaaagcgat atcgatttgc tgcttg 26
<210> 154
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 154
cggtacccgg ggatcctcaa cctcctggcg tcagtt 36
<210> 155
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 155
acaatgagtt tacgctcaac ctgcttgatt ctttc 35
<210> 156
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 156
attccagctt gtcgtggtga acctgtaccc atttg 35
<210> 157
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 157
ccaagcttgc atgccgatca agtcgcgttc ctgaac 36
<210> 158
<211> 400
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA片段
<400> 158
gcgtaaactc attgtagaag tcctgaacag cgtggaattt tcgcgtcagg gtggcgtaca 60
actcaactgg agaggctaaa tccttcatga gcgatgatcg taaggcaatt aaacgcgcac 120
taattagcgt gtatgacaag actggcctgg aggatctagc ccaggcactt caccgcgcga 180
acgtggaaat tgttttcacc ggatccactg cggcgaagat tgctgagctt ggtattcctg 240
ttaccccggt tgaggagctc accggtttcc ctgagtgcct tgagggccgt gtgaagacac 300
tgcatcctaa ggttcacgct ggcatcttgg cggacacccg caaggaagac cacctgcgtc 360
agctcaagga acttgaggtc gccccattcc agcttgtcgt 400
<210> 159
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 159
cagcactgtg tttcctcgtc 20
<210> 160
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 160
caggtccttc agaacctcag 20
<210> 161
<211> 666
<212> DNA
<213> 人
<400> 161
atgggtgaca ccaaggagca gcgcatcctg aaccacgtgc tgcagcatgc ggagcccggg 60
aacgcacaga gcgtgctgga ggccattgac acctactgcg agcagaagga gtgggccatg 120
aacgtgggcg acaagaaagg caagatcgtg gacgccgtga ttcaggagca ccagccctcc 180
gtgctgctgg agctgggggc ctactgtggc tactcagctg tgcgcatggc ccgcctgctg 240
tcaccagggg cgaggctcat caccatcgag atcaaccccg actgtgccgc catcacccag 300
cggatggtgg atttcgctgg cgtgaaggac aaggtcaccc ttgtggttgg agcgtcccag 360
gacatcatcc cccagctgaa gaagaagtat gatgtggaca cactggacat ggtcttcctc 420
gaccactgga aggaccggta cctgccggac acgcttctct tggaggaatg tggcctgctg 480
cggaagggga cagtgctact ggctgacaac gtgatctgcc caggtgcgcc agacttccta 540
gcacacgtgc gcgggagcag ctgctttgag tgcacacact accaatcgtt cctggaatac 600
agggaggtgg tggacggcct ggagaaggcc atctacaagg gcccaggcag cgaagcaggg 660
ccttaa 666
<210> 162
<211> 675
<212> DNA
<213> 人
<400> 162
catatggggg ataccaaaga acagcggatt ctgaatcatg ttttacagca cgctgaaccg 60
ggcaatgctc agagcgtttt agaagcaata gatacctatt gtgaacagaa ggaatgggca 120
atgaatgttg gcgataaaaa gggcaaaatt gttgatgcag ttatccagga acatcagccg 180
agcgttttac ttgaactggg cgcatattgc ggttattccg cagttcggat ggcacggctg 240
ctgtcccctg gcgctcgctt aattaccatt gaaattaatc cggattgcgc agcaattacc 300
cagcggatgg ttgactttgc aggtgttaaa gataaagtca ccttggttgt cggcgctagc 360
caggatatta ttccgcagct gaaaaaaaaa tacgatgttg ataccctgga tatggtcttt 420
ttagatcatt ggaaagatcg gtatctgccc gatactctgt tattggaaga gtgcggtctg 480
ctgcggaaag gcaccgttct actggcagat aatgttattt gtcctggggc tcctgatttt 540
ctagctcatg ttcggggcag cagctgtttc gaatgtaccc attaccaatc gtttctggaa 600
tatcgcgaag ttgttgatgg tctggaaaag gcaatttata aaggtcctgg tagcgaggct 660
ggcccgtaag agctc 675
<210> 163
<211> 6557
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pELAC载体
<400> 163
tggcgaatgg gacgcgccct gtagcggcgc attaagcgcg gcgggtgtgg tggttacgcg 60
cagcgtgacc gctacacttg ccagcgccct agcgcccgct cctttcgctt tcttcccttc 120
ctttctcgcc acgttcgccg gctttccccg tcaagctcta aatcgggggc tccctttagg 180
gttccgattt agtgctttac ggcacctcga ccccaaaaaa cttgattagg gtgatggttc 240
acgtagtggg ccatcgccct gatagacggt ttttcgccct ttgacgttgg agtccacgtt 300
ctttaatagt ggactcttgt tccaaactgg aacaacactc aaccctatct cggtctattc 360
ttttgattta taagggattt tgccgatttc ggcctattgg ttaaaaaatg agctgattta 420
acaaaaattt aacgcgaatt ttaacaaaat attaacgttt acaatttcag gtggcacttt 480
tcggggaaat gtgcgcggaa cccctatttg tttatttttc taaatacatt caaatatgta 540
tccgctcatg agacaataac cctgataaat gcttcaataa tattgaaaaa ggaagagtat 600
gagtattcaa catttccgtg tcgcccttat tccctttttt gcggcatttt gccttcctgt 660
ttttgctcac ccagaaacgc tggtgaaagt aaaagatgct gaagatcagt tgggtgcacg 720
agtgggttac atcgaactgg atctcaacag cggtaagatc cttgagagtt ttcgccccga 780
agaacgtttt ccaatgatga gcacttttaa agttctgcta tgtggcgcgg tattatcccg 840
tattgacgcc gggcaagagc aactcggtcg ccgcatacac tattctcaga atgacttggt 900
tgagtactca ccagtcacag aaaagcatct tacggatggc atgacagtaa gagaattatg 960
cagtgctgcc ataaccatga gtgataacac tgcggccaac ttacttctga caacgatcgg 1020
aggaccgaag gagctaaccg cttttttgca caacatgggg gatcatgtaa ctcgccttga 1080
tcgttgggaa ccggagctga atgaagccat accaaacgac gagcgtgaca ccacgatgcc 1140
tgcagcaatg gcaacaacgt tgcgcaaact attaactggc gaactactta ctctagcttc 1200
ccggcaacaa ttaatagact ggatggaggc ggataaagtt gcaggaccac ttctgcgctc 1260
ggcccttccg gctggctggt ttattgctga taaatctgga gccggtgagc gtgggtctcg 1320
cggtatcatt gcagcactgg ggccagatgg taagccctcc cgtatcgtag ttatctacac 1380
gacggggagt caggcaacta tggatgaacg aaatagacag atcgctgaga taggtgcctc 1440
actgattaag cattggtaac tgtcagacca agtttactca tatatacttt agattgattt 1500
aaaacttcat ttttaattta aaaggatcta ggtgaagatc ctttttgata atctcatgac 1560
caaaatccct taacgtgagt tttcgttcca ctgagcgtca gaccccgtag aaaagatcaa 1620
aggatcttct tgagatcctt tttttctgcg cgtaatctgc tgcttgcaaa caaaaaaacc 1680
accgctacca gcggtggttt gtttgccgga tcaagagcta ccaactcttt ttccgaaggt 1740
aactggcttc agcagagcgc agataccaaa tactgtcctt ctagtgtagc cgtagttagg 1800
ccaccacttc aagaactctg tagcaccgcc tacatacctc gctctgctaa tcctgttacc 1860
agtggctgct gccagtggcg ataagtcgtg tcttaccggg ttggactcaa gacgatagtt 1920
accggataag gcgcagcggt cgggctgaac ggggggttcg tgcacacagc ccagcttgga 1980
gcgaacgacc tacaccgaac tgagatacct acagcgtgag ctatgagaaa gcgccacgct 2040
tcccgaaggg agaaaggcgg acaggtatcc ggtaagcggc agggtcggaa caggagagcg 2100
cacgagggag cttccagggg gaaacgcctg gtatctttat agtcctgtcg ggtttcgcca 2160
cctctgactt gagcgtcgat ttttgtgatg ctcgtcaggg gggcggagcc tatggaaaaa 2220
cgccagcaac gcggcctttt tacggttcct ggccttttgc tggccttttg ctcacatgtt 2280
ctttcctgcg ttatcccctg attctgtgga taaccgtatt accgcctttg agtgagctga 2340
taccgctcgc cgcagccgaa cgaccgagcg cagcgagtca gtgagcgagg aagcggaaga 2400
gcgcctgatg cggtattttc tccttacgca tctgtgcggt atttcacacc gcatatatgg 2460
tgcactctca gtacaatctg ctctgatgcc gcatagttaa gccagtatac actccgctat 2520
cgctacgtga ctgggtcatg gctgcgcccc gacacccgcc aacacccgct gacgcgccct 2580
gacgggcttg tctgctcccg gcatccgctt acagacaagc tgtgaccgtc tccgggagct 2640
gcatgtgtca gaggttttca ccgtcatcac cgaaacgcgc gaggcagctg cggtaaagct 2700
catcagcgtg gtcgtgaagc gattcacaga tgtctgcctg ttcatccgcg tccagctcgt 2760
tgagtttctc cagaagcgtt aatgtctggc ttctgataaa gcgggccatg ttaagggcgg 2820
ttttttcctg tttggtcact gatgcctccg tgtaaggggg atttctgttc atgggggtaa 2880
tgataccgat gaaacgagag aggatgctca cgatacgggt tactgatgat gaacatgccc 2940
ggttactgga acgttgtgag ggtaaacaac tggcggtatg gatgcggcgg gaccagagaa 3000
aaatcactca gggtcaatgc cagcgcttcg ttaatacaga tgtaggtgtt ccacagggta 3060
gccagcagca tcctgcgatg cagatccgga acataatggt gcagggcgct gacttccgcg 3120
tttccagact ttacgaaaca cggaaaccga agaccattca tgttgttgct caggtcgcag 3180
acgttttgca gcagcagtcg cttcacgttc gctcgcgtat cggtgattca ttctgctaac 3240
cagtaaggca accccgccag cctagccggg tcctcaacga caggagcacg atcatgcgca 3300
cccgtggggc cgccatgccg gcgataatgg cctgcttctc gccgaaacgt ttggtggcgg 3360
gaccagtgac gaaggcttga gcgagggcgt gcaagattcc gaataccgca agcgacaggc 3420
cgatcatcgt cgcgctccag cgaaagcggt cctcgccgaa aatgacccag agcgctgccg 3480
gcacctgtcc tacgagttgc atgataaaga agacagtcat aagtgcggcg acgatagtca 3540
tgccccgcgc ccaccggaag gagctgactg ggttgaaggc tctcaagggc atcggtcgag 3600
atcccggtgc ctaatgagtg agctaactta cattaattgc gttgcgctca ctgcccgctt 3660
tccagtcggg aaacctgtcg tgccagctgc attaatgaat cggccaacgc gcggggagag 3720
gcggtttgcg tattgggcgc cagggtggtt tttcttttca ccagtgagac gggcaacagc 3780
tgattgccct tcaccgcctg gccctgagag agttgcagca agcggtccac gctggtttgc 3840
cccagcaggc gaaaatcctg tttgatggtg gttaacggcg ggatataaca tgagctgtct 3900
tcggtatcgt cgtatcccac taccgagata tccgcaccaa cgcgcagccc ggactcggta 3960
atggcgcgca ttgcgcccag cgccatctga tcgttggcaa ccagcatcgc agtgggaacg 4020
atgccctcat tcagcatttg catggtttgt tgaaaaccgg acatggcact ccagtcgcct 4080
tcccgttccg ctatcggctg aatttgattg cgagtgagat atttatgcca gccagccaga 4140
cgcagacgcg ccgagacaga acttaatggg cccgctaaca gcgcgatttg ctggtgaccc 4200
aatgcgacca gatgctccac gcccagtcgc gtaccgtctt catgggagaa aataatactg 4260
ttgatgggtg tctggtcaga gacatcaaga aataacgccg gaacattagt gcaggcagct 4320
tccacagcaa tggcatcctg gtcatccagc ggatagttaa tgatcagccc actgacgcgt 4380
tgcgcgagaa gattgtgcac cgccgcttta caggcttcga cgccgcttcg ttctaccatc 4440
gacaccacca cgctggcacc cagttgatcg gcgcgagatt taatcgccgc gacaatttgc 4500
gacggcgcgt gcagggccag actggaggtg gcaacgccaa tcagcaacga ctgtttgccc 4560
gccagttgtt gtgccacgcg gttgggaatg taattcagct ccgccatcgc cgcttccact 4620
ttttcccgcg ttttcgcaga aacgtggctg gcctggttca ccacgcggga aacggtctga 4680
taagagacac cggcatactc tgcgacatcg tataacgtta ctggtttcac attcaccacc 4740
ctgaattgac tctcttccgg gcgctatcat gccataccgc gaaaggtttt gcgccattcg 4800
atggtgtccg ggatctcgac gctctccctt atgcgactcc tgcattagga agcagcccag 4860
tagtaggttg aggccgttga gcaccgccgc cgcaaggaat ggtgcatgca aggagatggc 4920
gcccaacagt cccccggcca cggggcctgc caccataccc acgccgaaac aagcgctcat 4980
gagcccgaag tggcgagccc gatcttcccc atcggtgatg tcggcgatat aggcgccagc 5040
aaccgcacct gtggcgccgg tgatgccggc cacgatgcgt ccggcgtaga ggatcgagat 5100
ctgcgggcag tgagcgcaac gcaattaatg tgagttagct cactcattag gcaccccagg 5160
ctttacactt tatgcttccg gctcgtataa tgtgtggaat tgtgagcgga taacaatttc 5220
acacaggatc tagatttaag aaggagatat acatatggcc gaagaaggta aactggtaat 5280
ctggattaac ggcgataaag gctataacgg tctcgctgaa gtcggtaaga aattcgagaa 5340
agataccgga attaaagtca ccgttgagca tccggataaa ctggaagaga aattcccaca 5400
ggttgcggca acaggcgatg gccctgacat tatcttctgg gcacacgacc gctttggtgg 5460
ctacgctcaa tctggcctgt tggctgaaat caccccggac aaagcgttcc aggacaagct 5520
gtatccgttt acctgggatg ccgtacgtta caacggcaag ctgattgctt acccgatcgc 5580
tgttgaagcg ttatcgctga tttataacaa agatctgctg ccgaacccgc caaaaacctg 5640
ggaagagatc ccggcgctgg ataaagaact gaaagcgaaa ggtaagagcg cgctgatgtt 5700
caacctgcaa gaaccgtact tcacctggcc gctgattgct gctgacgggg gttatgcgtt 5760
caagtatgaa aacggcaagt acgacattaa agacgtgggc gtggataacg ctggcgcgaa 5820
agcgggtctg accttcctgg ttgacctgat taaaaacaaa cacatgaatg cagacaccga 5880
ttactccatc gcagaagctg cctttaataa aggcgaaaca gcgatgacca tcaacggccc 5940
gtgggcatgg tccaacatcg acaccagcaa agtgaattat ggtgtaacgg tactgccgac 6000
cttcaagggt caaccatcca aaccgttcgt tggcgtgctg agcgcaggta ttaacgccgc 6060
cagtccgaac aaagagctgg caaaagagtt cctcgaaaac tatctgctga ctgatgaagg 6120
tctggaagcg gttaataaag acaaaccgct gggtgccgta gcgctgaagt cttacgagga 6180
agagttggcg aaagatccac gtattgccgc cactatggaa aacgcccaga aaggtgaaat 6240
catgccgaac atcccgcaga tgtccgcttt ctggtatgcc gtgcgtactg cggtgatcaa 6300
cgccgccagc ggtcgtcaga ctgtcgatga agccctgaaa gacgcgcaga ctaaggatcc 6360
gaattcgagc tccgtcgaca agcttgcggc cgcactcgag caccaccacc accaccactg 6420
agatccggct gctaacaaag cccgaaagga agctgagttg gctgctgcca ccgctgagca 6480
ataactagca taaccccttg gggcctctaa acgggtcttg aggggttttt tgctgaaagg 6540
aggaactata tccggat 6557
<210> 164
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 164
gtgagttagc tcactcatta gg 22
<210> 165
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 165
cgattggtaa tgggtacatt cg 22
<210> 166
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 166
ggatctcagt ggtggtggtg 20
<210> 167
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 167
ccaagcttgc atgccaaatt cctgtgaatt agctgattta gtac 44
<210> 168
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 168
tttggtatcc cccatagagg cgaaggctcc ttgaatag 38
<210> 169
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 169
atgggggata ccaaagaaca gc 22
<210> 170
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 170
cggtacccgg ggatcatgct agttattgct cagcggtg 38
<210> 171
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 171
catgattacg ccaagcttgc atgccaaatt cctgtgatta gctgatttag 50
<210> 172
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 172
cggattcgaa gatctggttg ttcatagagg cgaaggctcc ttgaataggt 50
<210> 173
<211> 778
<212> DNA
<213> Niastella koreensis
<400> 173
atgaacaacc agatcttcga atccgtcgat cactatattt ctgatcttct gggctacgag 60
gatgatgcgc ttttggccgc cactaattcc ctggccgagg caggtatgcc ggctattagc 120
gtttccccga accagggcaa atttttgcaa ctgctggccc aactttgcca agccaaaaac 180
attttggagc ttggtacgtt ggccggctat tcgaccatct ggatggctcg cgctctcccc 240
aagaacggcc gccttatcac cctggaatac gatccgaagc atgccgcggt agctcagaag 300
aacattgatc gcgctggctt gaccagccaa gtgcaaatcc gcacgggtaa agcaatcgac 360
atcctgccgc agctggtgga ggagggtgcc ggtccatttg atatgatctt cattgatgcc 420
gataagcccc catacaccga atactttcaa tgggctctgc gactgtcccg ccccggcact 480
ctcatcgtcg cggataatgt catccgcgat ggaaaggtgc tggacgaaaa ctccaccgag 540
cctgccgtcc aaggtgcccg ccgttttaat gccatgctcg gtgctaatac ggcagttgac 600
gcaaccatcc tccaaatggt gggcgtgaaa gagtacgacg gcatggcgct ggccatcgtt 660
aagtaaaagc ttgcggccgc actcgagcac caccaccacc accactgaga tccggctgct 720
aacaaagccc gaaaggaagc tgagttggct gctgccaccg ctgagcaata actagcat 778
<210> 174
<211> 666
<212> DNA
<213> Niastella koreensis
<400> 174
atgaacaacc agatcttcga atccgtcgat cactatattt ctgatcttct gggctacgag 60
gatgatgcgc ttttggccgc cactaattcc ctggccgagg caggtatgcc ggctattagc 120
gtttccccga accagggcaa atttttgcaa ctgctggccc aactttgcca agccaaaaac 180
attttggagc ttggtacgtt ggccggctat tcgaccatct ggatggctcg cgctctcccc 240
aagaacggcc gccttatcac cctggaatac gatccgaagc atgccgcggt agctcagaag 300
aacattgatc gcgctggctt gaccagccaa gtgcaaatcc gcacgggtaa agcaatcgac 360
atcctgccgc agctggtgga ggagggtgcc ggtccatttg atatgatctt cattgatgcc 420
gataagcccc catacaccga atactttcaa tgggctctgc gactgtcccg ccccggcact 480
ctcatcgtcg cggataatgt catccgcgat ggaaaggtgc tggacgaaaa ctccaccgag 540
cctgccgtcc aaggtgcccg ccgttttaat gccatgctcg gtgctaatac ggcagttgac 600
gcaaccatcc tccaaatggt gggcgtgaaa gagtacgacg gcatggcgct ggccatcgtt 660
aagtaa 666
<210> 175
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 175
ctggccgagg caggtaagcc ggctattagc gtt 33
<210> 176
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 176
aacgctaata gccggcttac ctgcctcggc cag 33
<210> 177
<211> 1593
<212> DNA
<213> 黄色短杆菌
<400> 177
gtgagccaga atggccgtcc ggtagtcctc atcgccgata agcttgcgca gtccactgtt 60
gacgcgcttg gagatgcagt agaagtccgt tgggttgacg gacctaaccg cccagaactg 120
cttgatacag ttaaggaagc ggacgcactg ctcgtgcgtt ctgctaccac tgtcgatgct 180
gaagtcatcg ccgctgcccc taacttgaag atcgtcggtc gtgccggcgt gggcttggac 240
aacgttgaca tccctgctgc cactgaagct ggcgtcatgg ttgctaacgc accgacctct 300
aacattcact ctgcttgtga gcacgcaatt tctttgctgc tgtctactgc tcgccagatc 360
cctgctgctg atgcgacgct gcgtgagggc gagtggaagc ggtcttcttt caacggtgtg 420
gaaattttcg gaaaaactgt cggtatcgtc ggttttggcc acattggtca gttgtttgct 480
cagcgtcttg ctgcgtttga gaccaccatt gttgcttacg atccttacgc taaccctgct 540
cgtgcggctc agctgaacgt tgagttggtt gagttggatg agctgatgag ccgttctgac 600
tttgtcacca ttcaccttcc taagaccaag gaaactgctg gcatgtttga tgcgcagctc 660
cttgctaagt ccaagaaggg ccagatcatc atcaacgctg ctcgtggtgg ccttgttgat 720
gaacaggctt tggctgatgc gattgagtcc ggtcacattc gtggcgctgg tttcgatgtg 780
tactccaccg agccttgcac tgattctcct ttgttcaagt tgcctcaggt tgttgtgact 840
cctcacttgg gtgcttctac tgaagaggct caggatcgtg cgggtactga cgttgctgat 900
tctgtgctca aggcgctggc tggcgagttc gtggcggatg ctgtgaacgt ttccggtggt 960
cgcgtgggcg aagaggttgc tgtgtggatg gatctggctc gcaagcttgg tcttcttgct 1020
ggcaagcttg tcgacgccgc cccagtctcc attgaggttg aggctcgagg cgagctttct 1080
tccgagcagg tcgatgcact tggtttgtcc gctgttcgtg gtttgttctc cggaattatc 1140
gaagagtccg ttactttcgt caacgctcct cgcattgctg aagagcgtgg cctggacatc 1200
tccgtgaaga ccaactctga gtctgttact caccgttccg tcctgcaggt caaggtcatt 1260
actggcagcg gcgcgagcgc aactgttgtt ggtgccctga ctggtcttga gcgcgttgag 1320
aagatcaccc gcatcaatgg ccgtggcctg gatctgcgcg cagagggtct gaacctcttc 1380
ctgcagtaca ctgacgctcc tggtgcactg ggtaccgttg gtaccaagct gggtgctgct 1440
ggcatcaaca tcgaggctgc tgcgttgact caggctgaga agggtgacgg cgctgtcctg 1500
atcctgcgtg ttgagtccgc tgtctccgaa gagctggaag ctgaaatcaa cgctgagttg 1560
ggtgctactt ccttccaggt tgatcttgac taa 1593
<210> 178
<211> 530
<212> PRT
<213> 黄色短杆菌
<400> 178
Met Ser Gln Asn Gly Arg Pro Val Val Leu Ile Ala Asp Lys Leu Ala
1 5 10 15
Gln Ser Thr Val Asp Ala Leu Gly Asp Ala Val Glu Val Arg Trp Val
20 25 30
Asp Gly Pro Asn Arg Pro Glu Leu Leu Asp Thr Val Lys Glu Ala Asp
35 40 45
Ala Leu Leu Val Arg Ser Ala Thr Thr Val Asp Ala Glu Val Ile Ala
50 55 60
Ala Ala Pro Asn Leu Lys Ile Val Gly Arg Ala Gly Val Gly Leu Asp
65 70 75 80
Asn Val Asp Ile Pro Ala Ala Thr Glu Ala Gly Val Met Val Ala Asn
85 90 95
Ala Pro Thr Ser Asn Ile His Ser Ala Cys Glu His Ala Ile Ser Leu
100 105 110
Leu Leu Ser Thr Ala Arg Gln Ile Pro Ala Ala Asp Ala Thr Leu Arg
115 120 125
Glu Gly Glu Trp Lys Arg Ser Ser Phe Asn Gly Val Glu Ile Phe Gly
130 135 140
Lys Thr Val Gly Ile Val Gly Phe Gly His Ile Gly Gln Leu Phe Ala
145 150 155 160
Gln Arg Leu Ala Ala Phe Glu Thr Thr Ile Val Ala Tyr Asp Pro Tyr
165 170 175
Ala Asn Pro Ala Arg Ala Ala Gln Leu Asn Val Glu Leu Val Glu Leu
180 185 190
Asp Glu Leu Met Ser Arg Ser Asp Phe Val Thr Ile His Leu Pro Lys
195 200 205
Thr Lys Glu Thr Ala Gly Met Phe Asp Ala Gln Leu Leu Ala Lys Ser
210 215 220
Lys Lys Gly Gln Ile Ile Ile Asn Ala Ala Arg Gly Gly Leu Val Asp
225 230 235 240
Glu Gln Ala Leu Ala Asp Ala Ile Glu Ser Gly His Ile Arg Gly Ala
245 250 255
Gly Phe Asp Val Tyr Ser Thr Glu Pro Cys Thr Asp Ser Pro Leu Phe
260 265 270
Lys Leu Pro Gln Val Val Val Thr Pro His Leu Gly Ala Ser Thr Glu
275 280 285
Glu Ala Gln Asp Arg Ala Gly Thr Asp Val Ala Asp Ser Val Leu Lys
290 295 300
Ala Leu Ala Gly Glu Phe Val Ala Asp Ala Val Asn Val Ser Gly Gly
305 310 315 320
Arg Val Gly Glu Glu Val Ala Val Trp Met Asp Leu Ala Arg Lys Leu
325 330 335
Gly Leu Leu Ala Gly Lys Leu Val Asp Ala Ala Pro Val Ser Ile Glu
340 345 350
Val Glu Ala Arg Gly Glu Leu Ser Ser Glu Gln Val Asp Ala Leu Gly
355 360 365
Leu Ser Ala Val Arg Gly Leu Phe Ser Gly Ile Ile Glu Glu Ser Val
370 375 380
Thr Phe Val Asn Ala Pro Arg Ile Ala Glu Glu Arg Gly Leu Asp Ile
385 390 395 400
Ser Val Lys Thr Asn Ser Glu Ser Val Thr His Arg Ser Val Leu Gln
405 410 415
Val Lys Val Ile Thr Gly Ser Gly Ala Ser Ala Thr Val Val Gly Ala
420 425 430
Leu Thr Gly Leu Glu Arg Val Glu Lys Ile Thr Arg Ile Asn Gly Arg
435 440 445
Gly Leu Asp Leu Arg Ala Glu Gly Leu Asn Leu Phe Leu Gln Tyr Thr
450 455 460
Asp Ala Pro Gly Ala Leu Gly Thr Val Gly Thr Lys Leu Gly Ala Ala
465 470 475 480
Gly Ile Asn Ile Glu Ala Ala Ala Leu Thr Gln Ala Glu Lys Gly Asp
485 490 495
Gly Ala Val Leu Ile Leu Arg Val Glu Ser Ala Val Ser Glu Glu Leu
500 505 510
Glu Ala Glu Ile Asn Ala Glu Leu Gly Ala Thr Ser Phe Gln Val Asp
515 520 525
Leu Asp
530
<210> 179
<211> 1593
<212> DNA
<213> 黄色短杆菌
<400> 179
gtgagccaga atggccgtcc ggtagtcctc atcgccgata agcttgcgca gtccactgtt 60
gacgcgcttg gagatgcagt agaagtccgt tgggttgacg gacctaaccg cccagaactg 120
cttgatacag ttaaggaagc ggacgcactg ctcgtgcgtt ctgctaccac tgtcgatgct 180
gaagtcatcg ccgctgcccc taacttgaag atcgtcggtc gtgccggcgt gggcttggac 240
aacgttgaca tccctgctgc cactgaagct ggcgtcatgg ttgctaacgc accgacctct 300
aacattcact ctgcttgtga gcacgcaatt tctttgctgc tgtctactgc tcgccagatc 360
cctgctgctg atgcgacgct gcgtgagggc gagtggaagc ggtcttcttt caacggtgtg 420
gaaattttcg gaaaaactgt cggtatcgtc ggttttggcc acattggtca gttgtttgct 480
cagcgtcttg ctgcgtttga gaccaccatt gttgcttacg atccttacgc taaccctgct 540
cgtgcggctc agctgaacgt tgagttggtt gagttggatg agctgatgag ccgttctgac 600
tttgtcacca ttcaccttcc taagaccaag gaaactgctg gcatgtttga tgcgcagctc 660
cttgctaagt ccaagaaggg ccagatcatc atcaacgctg ctcgtggtgg ccttgttgat 720
gaacaggctt tggctgatgc gattgagtcc ggtcacattc gtggcgctgg tttcgatgtg 780
tactccaccg agccttgcac tgattctcct ttgttcaagt tgcctcaggt tgttgtgact 840
cctcacttgg gtgcttctac tgaagaggct caggatcgtg cgggtactga cgttgctgat 900
tctgtgctca aggcgctggc tggcgagttc gtggcggatg ctgtgaacgt ttccggtggt 960
cgcgtgggcg aaaaggttgc tgtgtggatg gatctggctc gcaagcttgg tcttcttgct 1020
ggcaagcttg tcgacgccgc cccagtctcc attgaggttg aggctcgagg cgagctttct 1080
tccgagcagg tcgatgcact tggtttgtcc gctgttcgtg gtttgttctc cggaattatc 1140
gaagagtccg ttactttcgt caacgctcct cgcattgctg aagagcgtgg cctggacatc 1200
tccgtgaaga ccaactctga gtctgttact caccgttccg tcctgcaggt caaggtcatt 1260
actggcagcg gcgcgagcgc aactgttgtt ggtgccctga ctggtcttga gcgcgttgag 1320
aagatcaccc gcatcaatgg ccgtggcctg gatctgcgcg cagagggtct gaacctcttc 1380
ctgcagtaca ctgacgctcc tggtgcactg ggtaccgttg gtaccaagct gggtgctgct 1440
ggcatcaaca tcgaggctgc tgcgttgact caggctgaga agggtgacgg cgctgtcctg 1500
atcctgcgtg ttgagtccgc tgtctccgaa gagctggaag ctgaaatcaa cgctgagttg 1560
ggtgctactt ccttccaggt tgatcttgac taa 1593
<210> 180
<211> 530
<212> PRT
<213> 黄色短杆菌
<400> 180
Met Ser Gln Asn Gly Arg Pro Val Val Leu Ile Ala Asp Lys Leu Ala
1 5 10 15
Gln Ser Thr Val Asp Ala Leu Gly Asp Ala Val Glu Val Arg Trp Val
20 25 30
Asp Gly Pro Asn Arg Pro Glu Leu Leu Asp Thr Val Lys Glu Ala Asp
35 40 45
Ala Leu Leu Val Arg Ser Ala Thr Thr Val Asp Ala Glu Val Ile Ala
50 55 60
Ala Ala Pro Asn Leu Lys Ile Val Gly Arg Ala Gly Val Gly Leu Asp
65 70 75 80
Asn Val Asp Ile Pro Ala Ala Thr Glu Ala Gly Val Met Val Ala Asn
85 90 95
Ala Pro Thr Ser Asn Ile His Ser Ala Cys Glu His Ala Ile Ser Leu
100 105 110
Leu Leu Ser Thr Ala Arg Gln Ile Pro Ala Ala Asp Ala Thr Leu Arg
115 120 125
Glu Gly Glu Trp Lys Arg Ser Ser Phe Asn Gly Val Glu Ile Phe Gly
130 135 140
Lys Thr Val Gly Ile Val Gly Phe Gly His Ile Gly Gln Leu Phe Ala
145 150 155 160
Gln Arg Leu Ala Ala Phe Glu Thr Thr Ile Val Ala Tyr Asp Pro Tyr
165 170 175
Ala Asn Pro Ala Arg Ala Ala Gln Leu Asn Val Glu Leu Val Glu Leu
180 185 190
Asp Glu Leu Met Ser Arg Ser Asp Phe Val Thr Ile His Leu Pro Lys
195 200 205
Thr Lys Glu Thr Ala Gly Met Phe Asp Ala Gln Leu Leu Ala Lys Ser
210 215 220
Lys Lys Gly Gln Ile Ile Ile Asn Ala Ala Arg Gly Gly Leu Val Asp
225 230 235 240
Glu Gln Ala Leu Ala Asp Ala Ile Glu Ser Gly His Ile Arg Gly Ala
245 250 255
Gly Phe Asp Val Tyr Ser Thr Glu Pro Cys Thr Asp Ser Pro Leu Phe
260 265 270
Lys Leu Pro Gln Val Val Val Thr Pro His Leu Gly Ala Ser Thr Glu
275 280 285
Glu Ala Gln Asp Arg Ala Gly Thr Asp Val Ala Asp Ser Val Leu Lys
290 295 300
Ala Leu Ala Gly Glu Phe Val Ala Asp Ala Val Asn Val Ser Gly Gly
305 310 315 320
Arg Val Gly Glu Lys Val Ala Val Trp Met Asp Leu Ala Arg Lys Leu
325 330 335
Gly Leu Leu Ala Gly Lys Leu Val Asp Ala Ala Pro Val Ser Ile Glu
340 345 350
Val Glu Ala Arg Gly Glu Leu Ser Ser Glu Gln Val Asp Ala Leu Gly
355 360 365
Leu Ser Ala Val Arg Gly Leu Phe Ser Gly Ile Ile Glu Glu Ser Val
370 375 380
Thr Phe Val Asn Ala Pro Arg Ile Ala Glu Glu Arg Gly Leu Asp Ile
385 390 395 400
Ser Val Lys Thr Asn Ser Glu Ser Val Thr His Arg Ser Val Leu Gln
405 410 415
Val Lys Val Ile Thr Gly Ser Gly Ala Ser Ala Thr Val Val Gly Ala
420 425 430
Leu Thr Gly Leu Glu Arg Val Glu Lys Ile Thr Arg Ile Asn Gly Arg
435 440 445
Gly Leu Asp Leu Arg Ala Glu Gly Leu Asn Leu Phe Leu Gln Tyr Thr
450 455 460
Asp Ala Pro Gly Ala Leu Gly Thr Val Gly Thr Lys Leu Gly Ala Ala
465 470 475 480
Gly Ile Asn Ile Glu Ala Ala Ala Leu Thr Gln Ala Glu Lys Gly Asp
485 490 495
Gly Ala Val Leu Ile Leu Arg Val Glu Ser Ala Val Ser Glu Glu Leu
500 505 510
Glu Ala Glu Ile Asn Ala Glu Leu Gly Ala Thr Ser Phe Gln Val Asp
515 520 525
Leu Asp
530
<210> 181
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 181
gccaagcttg catgcctgca ggtgagccag aatggccgtc c 41
<210> 182
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 引物
<400> 182
cggtacccgg ggatccttag tcaagatcaa cctgga 36

Claims (43)

1.生产目标物质的方法，所述方法包括：
通过使用具有生产所述目标物质的能力的微生物来生产所述目标物质，
其中所述微生物具有选自下组的特征：
(A)选自下组的特征：
(A-i)所述微生物已经以使AICAR甲酰转移酶/IMP环水解酶的活性相比于未修饰菌株降低的方式进行了修饰，
(A-ii)所述微生物已经以使编码AICAR甲酰转移酶/IMP环水解酶的基因具有突变的方式进行了修饰，所述突变改善所述微生物生产所述目标物质的能力，和
(A-iii)其组合；
(B)选自下组的特征：
(B-i)所述微生物已经以使D-3-磷酸甘油酸脱氢酶的活性相比于未修饰菌株增加的方式进行了修饰，
(B-ii)所述微生物已经以使所述微生物具有编码对L-丝氨酸的反馈抑制有抗性的D-3-磷酸甘油酸脱氢酶的基因的方式进行了修饰，和
(B-iii)其组合；
(C)所述微生物已经以使L-丝氨酸脱氨酶的活性相比于未修饰菌株降低的方式进行了修饰；和
(D)其组合，
其中所述目标物质选自下组：
(X)代谢物，所述代谢物的生物合成需要S-腺苷甲硫氨酸；
(Y)L-甲硫氨酸；和
(Z)其组合。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述生产包括：
在含有碳源的培养基中培养所述微生物以在所述培养基中生产和积累所述目标物质。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述生产包括：
通过使用所述微生物将所述目标物质的前体转化为所述目标物质。
4.根据权利要求3所述的方法，其中所述使用：
在含有所述前体的培养基中培养所述微生物以在所述培养基中生产和积累所述目标物质。
5.根据权利要求3所述的方法，其中所述转化包括：
允许所述微生物的细胞在反应混合物中作用于所述前体以在所述反应混合物中生产和积累所述目标物质。
6.根据权利要求5所述的方法，其中所述细胞是存在于所述微生物的培养液中的细胞、从所述培养液收集的细胞、存在于所述培养液的加工产品中的细胞、存在于所述收集的细胞的加工产品中的细胞、或这些的组合。
7.根据权利要求3至6中任一项所述的方法，其中所述前体选自下组：原儿茶酸、原儿茶醛、L-色氨酸、L-组氨酸、L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-精氨酸、L-鸟氨酸、甘氨酸，及其组合。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，所述方法进一步包括收集所述目标物质。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述AICAR甲酰转移酶/IMP环水解酶由purH基因编码。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述purH基因编码选自下组的蛋白质：
(a)包含SEQ ID NO:135的氨基酸序列的蛋白质；
(b)包含SEQ ID NO:135的氨基酸序列，但该氨基酸序列包括1至10个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的蛋白质，且其中所述蛋白质具有AICAR甲酰转移酶/IMP环水解酶活性；和
(c)包含与SEQ ID NO:135的氨基酸序列具有90％或更高同一性的氨基酸序列的蛋白质，且其中所述蛋白质具有AICAR甲酰转移酶/IMP环水解酶活性。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述AICAR甲酰转移酶/IMP环水解酶的活性通过选自下组的方式降低：
(A)弱化编码AICAR甲酰转移酶/IMP环水解酶的基因的表达；
(B)破坏编码AICAR甲酰转移酶/IMP环水解酶的基因；
(C)修饰编码AICAR甲酰转移酶/IMP环水解酶的基因而使得该基因具有改善所述微生物生产所述目标物质的能力的突变；和
(D)其组合。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述弱化或所述破坏包括缺失编码AICAR甲酰转移酶/IMP环水解酶的基因。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述微生物是属于肠杆菌科的细菌、棒状杆菌细菌，或酵母。
14.根据权利要求13所述的方法，其中所述微生物是属于棒状杆菌属的细菌。
15.根据权利要求14所述的方法，其中所述微生物是谷氨酸棒状杆菌。
16.根据权利要求13所述的方法，其中所述微生物是属于埃希氏菌属的细菌。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述微生物是大肠杆菌。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述代谢物选自下组：香草醛、香草酸、褪黑激素、麦角硫因、麦根酸、阿魏酸、多胺、愈创木酚、4-乙烯基愈创木酚、4-乙基愈创木酚、肌酸，及其组合。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述微生物已经以使参与所述目标物质的生物合成的酶的活性相比于未修饰菌株增加的方式进行了进一步的修饰。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述酶选自下组：3-脱氧-D-阿拉伯糖-庚酮糖酸7-磷酸合酶、3-脱氢奎尼酸合酶、3-脱氢奎尼酸脱水酶、3-脱氢莽草酸脱水酶、O-甲基转移酶、芳香族醛氧化还原酶，及其组合。
21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，其中所述微生物已经以使磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶的活性相比于未修饰菌株增加的方式进行了进一步的修饰。
22.根据权利要求1至21中任一项所述的方法，其中所述微生物已经以使参与除所述目标物质外的物质的副生产的酶的活性相比于未修饰菌株降低的方式进行了进一步的修饰。
23.根据权利要求22所述的方法，其中所述酶选自下组：香草酸脱甲基酶、原儿茶酸3,4-双加氧酶、醇脱氢酶、莽草酸脱氢酶，及其组合。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述微生物已经以使L-半胱氨酸生物合成酶的活性相比于未修饰菌株增加的方式进行了进一步的修饰。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述L-半胱氨酸生物合成酶由选自下组的基因编码：cysI基因、cysX基因、cysH基因、cysD基因、cysN基因、cysY基因、cysZ基因、fpr2基因，及其组合。
26.根据权利要求24或25所述的方法，其中所述L-半胱氨酸生物合成酶的活性通过增加由cysR基因编码的蛋白质的活性增加。
27.根据权利要求1至26中任一项所述的方法，其中所述微生物已经以使由NCgl2048基因编码的蛋白质的活性相比于未修饰菌株降低的方式进行了进一步的修饰。
28.根据权利要求1至27中任一项所述的方法，其中所述微生物已经以使烯醇酶的活性相比于未修饰菌株降低的方式进行了进一步的修饰。
29.根据权利要求1至28中任一项所述的方法，其中所述微生物已经以使S-腺苷基-L-高半胱氨酸水解酶的活性相比于未修饰菌株增加的方式进行了进一步的修饰。
30.根据权利要求1至29中任一项所述的方法，其中所述突变是与SEQ ID NO:135所示的氨基酸序列第37位的丝氨酸残基对应的氨基酸残基被另一氨基酸残基替换的突变。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述另一氨基酸残基是苯丙氨酸残基。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的方法，其中所述D-3-磷酸甘油酸脱氢酶由serA基因编码。
33.根据权利要求32所述的方法，其中所述serA基因编码选自下组的蛋白质：
(a)包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列的蛋白质；
(b)包含SEQ ID NO:178的氨基酸序列，但该氨基酸序列包括1至10个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的蛋白质，且其中所述蛋白质具有D-3-磷酸甘油酸脱氢酶活性；和
(c)包含与SEQ ID NO:178的氨基酸序列具有90％或更高同一性的氨基酸序列的蛋白质，且其中所述蛋白质具有D-3-磷酸甘油酸脱氢酶活性。
34.根据权利要求1至33中任一项所述的方法，其中所述D-3-磷酸甘油酸脱氢酶的活性通过选自下组的方式增加：
(A)增加编码D-3-磷酸甘油酸脱氢酶的基因的表达；
(B)以使所述微生物具有编码对L-丝氨酸的反馈抑制有抗性的D-3-磷酸甘油酸脱氢酶的基因的方式修饰所述微生物；和
(C)其组合。
35.根据权利要求34的方法，其中所述编码D-3-磷酸甘油酸脱氢酶的基因的表达通过增加所述基因的拷贝数和/或修饰所述基因的表达控制序列增加。
36.根据权利要求1至35中任一项所述的方法，其中所述对L-丝氨酸的反馈抑制有抗性的D-3-磷酸甘油酸脱氢酶包含突变，所述突变为与SEQ ID NO:178所示的氨基酸序列的第325位的谷氨酸残基对应的氨基酸残基被另一氨基酸残基替换的突变。
37.根据权利要求36所述的方法，其中所述另一氨基酸残基是赖氨酸残基。
38.根据权利要求1至37中任一项所述的方法，其中所述对L-丝氨酸的反馈抑制有抗性的D-3-磷酸甘油酸脱氢酶是选自下组的蛋白质：
(a)包含SEQ ID NO:180的氨基酸序列的蛋白质；
(b)包含SEQ ID NO:180的氨基酸序列，但该序列包括1至10个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的蛋白质，且其中所述蛋白质具有D-3-磷酸甘油酸脱氢酶活性并对L-丝氨酸的反馈抑制有抗性；和
(c)包含与SEQ ID NO:180的氨基酸序列具有90％或更高同一性的氨基酸序列的蛋白质，且其中所述蛋白质具有D-3-磷酸甘油酸脱氢酶活性并对L-丝氨酸的反馈抑制有抗性。
39.根据权利要求1至38中任一项所述的方法，其中所述L-丝氨酸脱氨酶由sdaA基因编码。
40.根据权利要求39所述的方法，其中所述sdaA基因编码选自下组的蛋白质：
(a)包含SEQ ID NO:147的氨基酸序列的蛋白质；
(b)包含SEQ ID NO:147的氨基酸序列，但该氨基酸序列包括1至10个氨基酸残基的取代、缺失、插入和/或添加的蛋白质，且其中所述蛋白质具有L-丝氨酸脱氨酶活性；和
(c)包含与SEQ ID NO:147的氨基酸序列具有90％或更高同一性的氨基酸序列的蛋白质，且其中所述蛋白质具有L-丝氨酸脱氨酶活性。
41.根据权利要求1至40中任一项所述的方法，其中所述L-丝氨酸脱氨酶的活性通过弱化编码L-丝氨酸脱氨酶的基因的表达，或通过破坏编码L-丝氨酸脱氨酶的基因降低。
42.根据权利要求41所述的方法，其中所述弱化或所述破坏包括缺失所述编码L-丝氨酸脱氨酶的基因。
43.生产香草醛的方法，所述方法包括：
通过根据权利要求1至42中任一项所述的方法生产香草酸；和
将所述香草酸转化为香草醛。
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