JP6838584B2 - 目的物質の製造方法 - Google Patents
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Description
技術を開示し、以て効率的な目的物質の製造法を提供する。
目的物質を生産する能力を有する微生物を利用して目的物質を製造すること
を含み、
前記微生物が、下記からなる群より選択される性質:
(A)下記からなる群より選択される性質:
(A−i)AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼの活性が非改変株と比較して低下するように改変されている;
(A−ii)AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼをコードする遺伝子が前記微生物の目的物質を生産する能力を向上させる変異を有するように改変されている;および
(A−iii)それらの組み合わせ;
(B)下記からなる群より選択される性質:
(B−i)D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼの活性が非改変株と比較して増大するように改変されている;
(B−ii)L−セリンによるフィードバック阻害に耐性のD−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を有するように改変されている;および
(B−iii)それらの組み合わせ;
(C)L−セリンデアミナーゼの活性が非改変株と比較して低下するように改変されている;および
(D)それらの組み合わせ
を有し、
前記目的物質が、下記からなる群より選択される、方法を提供することである:
(X)生合成にS−アデノシルメチオニンを要求する代謝物;
(Y)L−メチオニン;および
(Z)それらの組み合わせ。
目的物質を生産する能力を有する微生物を利用して目的物質を製造すること
を含み、
前記微生物が、下記からなる群より選択される性質:
(i)AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼの活性が非改変株と比較して低下するように改変されている;
(ii)AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼをコードする遺伝子が前記微生物の目的物質を生産する能力を向上させる変異を有するように改変されている;および
(iii)それらの組み合わせ
を有し、
前記目的物質が、下記からなる群より選択される、方法を提供することである:
(X)生合成にS−アデノシルメチオニンを要求する代謝物;
(Y)L−メチオニン;および
(Z)それらの組み合わせ。
目的物質を生産する能力を有する微生物を利用して目的物質を製造すること
を含み、
前記微生物が、下記からなる群より選択される性質:
(i)D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼの活性が非改変株と比較して増大するように改変されている;
(ii)L−セリンによるフィードバック阻害に耐性のD−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を有するように改変されている;および
(iii)それらの組み合わせ
を有し、
前記目的物質が、下記からなる群より選択される、方法を提供することである:
(X)生合成にS−アデノシルメチオニンを要求する代謝物;
(Y)L−メチオニン;および
(Z)それらの組み合わせ。
目的物質を生産する能力を有する微生物を利用して目的物質を製造すること
を含み、
前記微生物が、L−セリンデアミナーゼの活性が非改変株と比較して低下するように改変されており、
前記目的物質が、下記からなる群より選択される、方法を提供することである:
(X)生合成にS−アデノシルメチオニンを要求する代謝物;
(Y)L−メチオニン;および
(Z)それらの組み合わせ。
ーゼが、purH遺伝子にコードされる、前記方法を提供することである。
(a)配列番号135に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(b)配列番号135に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼ活性を有するタンパク質;および
(c)配列番号135に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼ活性を有するタンパク質。
(A)AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼをコードする遺伝子の発現を弱化させること;
(B)AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼをコードする遺伝子を破壊すること;
(C)AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼをコードする遺伝子を、前記微生物の目的物質を生産する能力を向上させる変異を有するように改変すること;および
(D)それらの組み合わせ。
である。
(a)配列番号178に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(b)配列番号178に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼ活性を有するタンパク質;および
(c)配列番号178に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼ活性を有するタンパク質。
(B)L−セリンによるフィードバック阻害に耐性のD−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を有するように前記微生物を改変すること;および
(C)それらの組み合わせ。
(a)配列番号180に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(b)配列番号180に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼ活性を有し、L−セリンによるフィードバック阻害に耐性であるタンパク質;および
(c)配列番号180に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼ活性を有し、L−セリンによるフィードバック阻害に耐性であるタンパク質。
(a)配列番号147に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(b)配列番号147に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、L−セリンデアミナーゼ活性を有するタンパク質;および
(c)配列番号147に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、L−セリンデアミナーゼ活性を有するタンパク質。
前記方法によりバニリン酸を製造すること;および
前記バニリン酸をバニリンに変換すること
を含む、方法を提供することである。
本明細書に記載の微生物は、本明細書に記載の特定の性質を有するように改変された、目的物質を生産する能力を有する微生物である。目的物質を生産する能力を、「目的物質生産能」ともいう。
「目的物質生産能を有する微生物」とは、目的物質を生産することができる微生物を意味してよい。
上、または0.09 g/L以上の量の目的物質を培地または反応液に蓄積することができ得る。
of some mutant derivatives of Escherichia coli K-12, p. 2460-2488. Table 1. In F. D. Neidhardt (ed.), Escherichia coli and Salmonella Cellular and Molecular Biology/Second Edition, American Society for Microbiology Press, Washington, D.C.)に記載されたものが挙げられる。エシェリヒア属細菌としては、例えば、エシェリヒア・コリ(Escherichia coli)が挙げられる。エシェリヒア・コリとして、具体的には、例えば、W3110株(ATCC 27325)やMG1655株(ATCC 47076)等のエシェリヒア・コリK-12株;エシェリヒア・コリK5株(ATCC 23506);BL21(DE3)株等のエシェリヒア・コリB株;およびそれらの派生株が挙げられる。
ー属細菌としては、例えば、エンテロバクター・アグロメランス(Enterobacter agglomerans)やエンテロバクター・アエロゲネス(Enterobacter aerogenes)が挙げられる。エンテロバクター・アグロメランスとして、具体的には、例えば、エンテロバクター・アグロメランスATCC12287株が挙げられる。エンテロバクター・アエロゲネスとして、具体的には、例えば、エンテロバクター・アエロゲネスATCC13048株、NBRC12010株(Biotechonol Bioeng. 2007 Mar 27; 98(2) 340-348)、AJ110637株(FERM BP-10955)が挙げられる。また、エンテロバクター属細菌としては、例えば、欧州特許出願公開EP0952221号明細書に記載されたものが挙げられる。なお、Enterobacter agglomeransには、Pantoea agglomeransと分類されているものも存在する。
コリネバクテリウム・アセトアシドフィラム(Corynebacterium acetoacidophilum)
コリネバクテリウム・アセトグルタミカム(Corynebacterium acetoglutamicum)
コリネバクテリウム・アルカノリティカム(Corynebacterium alkanolyticum)
コリネバクテリウム・カルナエ(Corynebacterium callunae)
コリネバクテリウム・クレナタム(Corynebacterium crenatum)
コリネバクテリウム・グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)
コリネバクテリウム・リリウム(Corynebacterium lilium)
コリネバクテリウム・メラセコーラ(Corynebacterium melassecola)
コリネバクテリウム・サーモアミノゲネス(コリネバクテリウム・エフィシエンス)(Corynebacterium thermoaminogenes (Corynebacterium efficiens))
コリネバクテリウム・ハーキュリス(Corynebacterium herculis)
ブレビバクテリウム・ディバリカタム(コリネバクテリウム・グルタミカム)(Brevibacterium divaricatum (Corynebacterium glutamicum))
ブレビバクテリウム・フラバム(コリネバクテリウム・グルタミカム)(Brevibacterium
flavum (Corynebacterium glutamicum))
ブレビバクテリウム・イマリオフィラム(Brevibacterium immariophilum)
ブレビバクテリウム・ラクトファーメンタム(コリネバクテリウム・グルタミカム)(Brevibacterium lactofermentum (Corynebacterium glutamicum))
ブレビバクテリウム・ロゼウム(Brevibacterium roseum)
ブレビバクテリウム・サッカロリティカム(Brevibacterium saccharolyticum)
ブレビバクテリウム・チオゲニタリス(Brevibacterium thiogenitalis)
コリネバクテリウム・アンモニアゲネス(コリネバクテリウム・スタティオニス)(Corynebacterium ammoniagenes (Corynebacterium stationis))
ブレビバクテリウム・アルバム(Brevibacterium album)
ブレビバクテリウム・セリナム(Brevibacterium cerinum)
ミクロバクテリウム・アンモニアフィラム(Microbacterium ammoniaphilum)
Corynebacterium acetoacidophilum ATCC 13870
Corynebacterium acetoglutamicum ATCC 15806
Corynebacterium alkanolyticum ATCC 21511
Corynebacterium callunae ATCC 15991
Corynebacterium crenatum AS1.542
Corynebacterium glutamicum ATCC 13020, ATCC 13032, ATCC 13060, ATCC 13869, FERM BP-734
Corynebacterium lilium ATCC 15990
Corynebacterium melassecola ATCC 17965
Corynebacterium efficiens (Corynebacterium thermoaminogenes) AJ12340 (FERM BP-1539)
Corynebacterium herculis ATCC 13868
Brevibacterium divaricatum (Corynebacterium glutamicum) ATCC 14020
Brevibacterium flavum (Corynebacterium glutamicum) ATCC 13826, ATCC 14067, AJ12418(FERM BP-2205)
Brevibacterium immariophilum ATCC 14068
Brevibacterium lactofermentum (Corynebacterium glutamicum) ATCC 13869
Brevibacterium roseum ATCC 13825
Brevibacterium saccharolyticum ATCC 14066
Brevibacterium thiogenitalis ATCC 19240
Corynebacterium ammoniagenes (Corynebacterium stationis) ATCC 6871, ATCC 6872
Brevibacterium album ATCC 15111
Brevibacterium cerinum ATCC 15112
Microbacterium ammoniaphilum ATCC 15354
rhamomyces)属ともいう)、キャンディダ・ユティリス(Candida utilis)等のキャンディダ属、ハンゼヌラ・ポリモルファ(Hansenula polymorpha)等のハンゼヌラ属、シゾサッカロマイセス・ポンベ(Schizosaccharomyces pombe)等のシゾサッカロマイセス属に属する酵母が挙げられる。
Box 1549, Manassas, VA 20108, United States of Americaまたはatcc.org)より分譲を受けることが出来る。すなわち各菌株に対応する登録番号が付与されており、この登録番号を利用して分譲を受けることが出来る(atcc.org/参照)。各菌株に対応する登録番号は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクションのカタログに記載されている。また、これらの菌株は、例えば、各菌株が寄託された寄託機関から入手することができる。
により、それぞれ、バニリン酸(vanillic acid)またはプロトカテクアルデヒド(protocatechualdehyde)へと変換され得る。バニリン酸またはプロトカテクアルデヒドは、それぞれ、ACARまたはOMTの作用により、バニリンへと変換され得る。すなわち、目的物質生合成酵素として、具体的には、例えば、DAHP synthase、3-dehydroquinate synthase、3-dehydroquinate dehydratase、DHSD、OMT、ACARが挙げられる。
coli K-12 MG1655株のaroB遺伝子の塩基配列を配列番号3に、同遺伝子がコードするAroBタンパク質のアミノ酸配列を配列番号4に示す。
dehydrataseとしては、腸内細菌科(Enterobacteriaceae)の細菌やコリネ型細菌等の各種生物のものが挙げられる。3-dehydroquinate dehydrataseとして、具体的には、E. coliのAroDタンパク質が挙げられる。E. coli K-12 MG1655株のaroD遺伝子の塩基配列を配列番号5に、同遺伝子がコードするAroDタンパク質のアミノ酸配列を配列番号6に示す。
dehydratase等)をコードする遺伝子の発現は、tyrR遺伝子にコードされるチロシンリプレッサーTyrRにより抑制される。よって、シキミ酸経路の酵素の活性は、チロシンリプレッサーTyrRの活性を低下させることによっても、増大させることができる。チロシンリプレッサーTyrRとしては、腸内細菌科(Enterobacteriaceae)の細菌やコリネ型細菌等の各種生物のものが挙げられる。チロシンリプレッサーTyrRとして、具体的には、E. coliのTyrRタンパク質が挙げられる。E. coli K-12 MG1655株のtyrR遺伝子の塩基配列を配列番号9に、同遺伝子がコードするTyrRタンパク質のアミノ酸配列を配列番号10に示す。
を欠くアミノ酸配列に相当する。OMTとしては、さらに、Bacteroidetes門細菌(すなわちBacteroidetes門に属する細菌)のOMTが挙げられる。Bacteroidetes門細菌としては、Niastella属、Terrimonas属、またはChitinophaga属等に属する細菌が挙げられる(International Journal of Systematic and Evolutionary Microbiology (2007), 57, 1828-1833)。Niastella属細菌としては、Niastella koreensisが挙げられる。Niastella koreensisのOMT遺伝子の塩基配列を配列番号130に、同遺伝子がコードするOMTのアミノ酸配列を配列番号131に示す。
or positive side-chain charge at pH 7.4)に置換される変異が挙げられる。変異型OMTは、これらの変異のいずれか一方を有していてもよく、両方を有していてもよい。
Lys, Met, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyrから選択されるアミノ酸残基が挙げられ、さらに特には、Tyrが挙げられる。
Asn, Cys, Gln, Gly, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Valが挙げられる。「pH7.4において側鎖が無電荷または正電荷となるアミノ酸残基」としては、特に、AlaまたはGlnが挙げられる。
al., Computers and Biomedical Research, 24(1), 72-96, 1991;Barton GJ et al., Journal of molecular biology, 198(2), 327-37. 1987)。
ば、野生型OMT遺伝子を有する生物からのクローニングにより、または、化学合成により、取得できる。あるいは、変異型OMT遺伝子は、野生型OMT遺伝子を介さずに取得することもできる。変異型OMT遺伝子は、例えば、変異型OMT遺伝子を有する生物からのクローニングにより、または、化学合成により、直接取得してもよい。取得した変異型OMT遺伝子は、そのまま、あるいはさらに改変して利用してよい。改変の元になる野生型OMT遺伝子または変異型OMT遺伝子は、本明細書に記載の微生物が由来する微生物等の、宿主に由来するものであってもよく、そうでなくてもよい。
T. A. et al., Meth. in Enzymol., 154, 367 (1987))が挙げられる。
sp.、Neurospora sp.等の各種微生物のACARが挙げられる(J. Biol. Chem. 2007, Vol. 282, No.1, p478-485)。Nocardia sp. NRRL 5646株は、Nocardia iowensisに分類されている。ACARとしては、さらに、Nocardia brasiliensisやNocardia vulneris等の、他のNocardia属細菌のACARも挙げられる。Nocardia brasiliensis ATCC 700358株のACAR遺伝子の塩基配列を配列番号17に、同遺伝子がコードするACARのアミノ酸配列を配列番号18に示す。また、Nocardia brasiliensis ATCC 700358株のバリアントACAR遺伝子の一例の塩基配列を配列番号19に、同遺伝子がコードするACARのアミノ酸配列を配列番号20に示す。
基供与体としてN−アセチルセロトニンをメチル化してメラトニンを生成するOMTの一例である。
sulfoxide)、ヘルシニル−L−システインスルホキシド(hercynyl-L-cysteine sulfoxide)、およびエルゴチオネインへと変換され得る。また、ヘルシニンは、egt1遺伝子にコードされるEgt1タンパク質の作用により、ヘルシニル−L−システインスルホキシドへと変換され得る。すなわち、L−ヒスチジンからエルゴチオネインへの変換を触媒する酵素としては、これらの酵素が挙げられる。なお、EgtDは、SAMをメチル基供与体としてヒスチジンをメチル化してヘルシニンを生成するSAM依存的ヒスチジン−N,N,N−メチルトランスフェラーゼ(S-adenosyl-l-methionine (SAM)-dependent histidine N,N,N-methyltransferase)である。
13.11)の作用によりp−クマル酸(p-coumaric acid)へと変換され得る。また、L−チロシンは、チロシンアンモニアリアーゼ(tyrosine ammonia lyase;TAL;EC 4.3.1.23)の作用により、p−クマル酸へと変換され得る。p−クマル酸は、ヒドロキシ桂皮酸−3−ヒドロキシラーゼ(hydroxycinnamic acid 3-hydroxylase;C3H)、O−メチルトランスフェラーゼ(O-methyltransferase;OMT)、フェルラ酸デカルボキシラーゼ(ferulic acid decarboxylase;FDC)、およびビニルフェノールレダクターゼ(vinylphenol reductase;VPR)の作用により、順に、コーヒー酸(caffeic acid)、フェルラ酸、4−ビニルグアイアコール、および4−エチルグアイアコールへと変換され得る。すなわち、L−フェニルアラニンまたはL−チロシンからフェルラ酸、4−ビニルグアイアコール、または4−エチルグアイアコールへの変換を触媒する酵素としては、これらの酵素が挙げられる。フェルラ酸、4−ビニルグアイアコール、または4−エチルグアイアコールを生産するためには、少なくともコーヒー酸を利用するOMTを用いることができる。
ノ酢酸は、グアニジノ酢酸−N−メチルトランスフェラーゼ(guanidinoacetate N-methyltransferase;GAMT;EC 2.1.1.2)の作用により、SAMをメチル基供与体としてメチル化されクレアチンを生成し得る。すなわち、L−アルギニンおよびグリシンからクレアチンへの変換を触媒する酵素としては、これらの酵素が挙げられる。
酵素等)の活性を低下させる手法については本明細書に記載する。タンパク質(酵素等)の活性は、例えば、同タンパク質をコードする遺伝子を破壊等することにより、低下させることができる。例えば、コリネ型細菌において、バニリンは、バニリン→バニリン酸→プロトカテク酸の順に代謝され、資化されることが報告されている(Current Microbiology, 2005, Vol.51, p59-65)。すなわち、副生物生成酵素として、具体的には、バニリンからプロトカテク酸への変換を触媒する酵素や、プロトカテク酸のさらなる代謝を触媒する酵素が挙げられる。そのような酵素としては、バニリン酸デメチラーゼ(vanillate demethylase)、プロトカテク酸3,4−ジオキシゲナーゼ(protocatechuate 3,4-dioxygenase)、およびプロトカテク酸3,4−ジオキシゲナーゼによる反応産物をスクシニルCoAとアセチルCoAまでさらに分解する各種酵素(Appl. Microbiol. Biotechnol., 2012, Vol.95, p77-89)が挙げられる。また、バニリンは、アルコールデヒドロゲナーゼ(alcohol dehydrogenase)の作用により、バニリルアルコールへと変換され得る(Kunjapur AM. et al., J. Am. Chem. Soc., 2014, Vol.136, p11644-11654.; Hansen EH. et al., App.
Env. Microbiol., 2009, Vol.75, p2765-2774.)。すなわち、副生物生成酵素として、具体的には、alcohol dehydrogenase(ADH)も挙げられる。また、バニリン生合成経路の中間体である3−デヒドロシキミ酸は、シキミ酸デヒドロゲナーゼ(shikimate dehydrogenase)の作用によりシキミ酸へと変換され得る。すなわち、副生物生成酵素として、具体的には、shikimate dehydrogenaseも挙げられる。
aGH遺伝子の塩基配列を配列番号33と35に、同遺伝子がコードするPcaGHタンパク質のアミノ酸配列を配列番号34と36に、それぞれ示す。
MG1655のaroE遺伝子の塩基配列を配列番号49に、同遺伝子がコードするAroEタンパク質のアミノ酸配列を配列番号50に示す。
酸配列を配列番号105と107に、それぞれ示す。CysRタンパク質およびSsuRタンパク質の一方または両方の活性を増大させてよい。例えば、少なくとも、CysRタンパク質の活性を低下させてもよい。そのようなアクチベーターの活性は、例えば、同アクチベーターをコードする遺伝子の発現を増大させることにより、増大させることができる。
ンキュベートし、酵素および基質依存的なホスホエノールピルビン酸の生成を測定することにより、測定できる。
Mol Microbiol Biotechnol 2008, 15: 277-286)。
IMP cyclohydrolase遺伝子およびAICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolaseの保存的バリアントに関する記載を準用できる。
本明細書に記載の微生物は、特定の性質を有するように改変されている。言い換えると、微生物は、特定の性質を有する。
(A)AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼ(AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolase)の活性が低下するように、且つ/又は、AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolaseをコードする遺伝子が「特定の変異」を有するように、微生物が改変されている;
(B)D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼ(D-3-phosphoglycerate dehydrogenase;3-PGDH)の活性が増大するように、且つ/又は、L−セリンによるフィードバック阻害に耐性の3-PGDHをコードする遺伝子を有するように、微生物が改変されている;
(C)L−セリンデアミナーゼ(L-serine deaminase)の活性が低下するように、微生物が改変されている。
微生物は、AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼ(AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolase)の活性が低下するように、且つ/又は、AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolaseをコードする遺伝子が「特定の変異」を有するように、改変されていてよい。微生物は、具体的には、非改変株と比較して、すなわち非改変微生物の株と比較して、AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolaseの活性が低下するように改変されていてよい。
ase/IMP cyclohydrolase)」とは、AICAR formyltransferaseおよび/またはIMP cyclohydrolase、すなわち、AICAR formyltransferaseおよびIMP cyclohydrolaseの一方または両方を意味してよい。「AICARホルミルトランスフェラーゼ(AICAR formyltransferase)」とは、5−アミノ−1−(5−ホスホ−D−リボシル)イミダゾール−4−カルボキシアミド(5-amino-1-(5-phospho-D-ribosyl)imidazole-4-carboxamide;AICAR)と10−ホルミルテトラヒドロ葉酸(10-formyltetrahydrofolate)を、5−ホルムアミド−1−(5−ホスホ−D−リボシル)イミダゾール−4−カルボキシアミド(5-formamido-1-(5-phospho-D-ribosyl)imidazole-4-carboxamide;FAICAR)とテトラヒドロ葉酸(tetrahydrofolate)に変換する反応を触媒する活性を有するタンパク質を意味してよい(EC 2.1.2.3)。同活性を、「AICAR formyltransferase活性」ともいう。「IMPシクロヒドロラーゼ(IMP cyclohydrolase)」とは、FAICARを脱水してIMPを生成する反応を触媒する活性を有するタンパク質を意味してよい(EC 3.5.4.10)。同活性を、「IMP cyclohydrolase活性」ともいう。AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolaseをコードする遺伝子を、「AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolase遺伝子」ともいう。AICAR formyltransferaseとIMP cyclohydrolaseは、二機能酵素としてコードされていてもよい。よって、「AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼ(AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolase)」とは、具体的には、二機能性AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolase、すなわち、AICAR formyltransferase活性およびIMP cyclohydrolase活性の両方を有するタンパク質を意味してもよい。AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolaseとしては、purH遺伝子にコードされる二機能性AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolaseであるPurHタンパク質が挙げられる。PurHタンパク質等のAICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolaseとしては、腸内細菌科(Enterobacteriaceae)の細菌やコリネ型細菌等の各種生物のものが挙げられる。AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolaseとして、具体的には、C. glutamicumのPurHタンパク質が挙げられる。C. glutamicum ATCC 13869株のpurH遺伝子(NCgl0827)の塩基配列を配列番号134に、同遺伝子がコードするPurHタンパク質のアミノ酸配列を配列番号135に示す。
換である。保存的置換とは、置換部位が芳香族アミノ酸である場合には、Phe、Trp、Tyr間で、置換部位が疎水性アミノ酸である場合には、Leu、Ile、Val間で、極性アミノ酸である場合には、Gln、Asn間で、塩基性アミノ酸である場合には、Lys、Arg、His間で、酸性アミノ酸である場合には、Asp、Glu間で、ヒドロキシル基を持つアミノ酸である場合には、Ser、Thr間でお互いに置換する変異である。保存的置換とみなされる置換としては、具体的には、AlaからSer又はThrへの置換、ArgからGln、His又はLysへの置換、AsnからGlu、Gln、Lys、His又はAspへの置換、AspからAsn、Glu又はGlnへの置換、CysからSer又はAlaへの置換、GlnからAsn、Glu、Lys、His、Asp又はArgへの置換、GluからGly、Asn、Gln、Lys又はAspへの置換、GlyからProへの置換、HisからAsn、Lys、Gln、Arg又はTyrへの置換、IleからLeu、Met、Val又はPheへの置換、LeuからIle、Met、Val又はPheへの置換、LysからAsn、Glu、Gln、His又はArgへの置換、MetからIle、Leu、Val又はPheへの置換、PheからTrp、Tyr、Met、Ile又はLeuへの置換、SerからThr又はAlaへの置換、ThrからSer又はAlaへの置換、TrpからPhe又はTyrへの置換、TyrからHis、Phe又はTrpへの置換、及び、ValからMet、Ile又はLeuへの置換が挙げられる。また、上記のようなアミノ酸の置換、欠失、挿入、または付加等には、遺伝子が由来する生物の個体差、種の違いに基づく場合などの天然に生じる変異(mutant又はvariant)によって生じるものも含まれる。
生産能の向上をもたらす限り、改変前のアミノ酸残基以外(少なくともセリン残基以外)のいずれのアミノ酸残基であってもよい。改変後のアミノ酸残基として、具体的には、K(Lys)、R(Arg)、H(His)、A(Ala)、V(Val)、L(Leu)、I(Ile)、G(Gly)、T(Thr)、P(Pro)、F(Phe)、W(Trp)、Y(Tyr)、C(Cys)、M(Met)、D(Asp)、E(Glu)、N(Asn)、Q(Gln)の内、改変前のアミノ酸残基以外のものが挙げられる。改変後のアミノ酸残基としては、特に、F(Phe)が挙げられる。すなわち、「特定の変異」としては、特に、S37がFに置換される変異(S37F変異)が挙げられる。
rolase遺伝子は、変異型AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolase遺伝子の導入との組み合わせにより微生物の目的物質生産能が向上するように改変(例えば、破壊や欠損)されるものとする。例えば、生来の野生型AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolase遺伝子は、変異型AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolase遺伝子で置換されてもよく、変異型AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolase遺伝子の導入とは独立に破壊または欠損してもよい。あるいは、例えば、微生物の染色体等に存在する野生型AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolase遺伝子(例えば、生来の野生型AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolase遺伝子)に「特定の変異」を導入することにより、AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolase遺伝子が「特定の変異」を有するように微生物を改変することができる。変異は、例えば、自然変異、変異処理、または遺伝子工学により、染色体等に存在する遺伝子に導入することができる。
微生物は、D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼ(D-3-phosphoglycerate dehydrogenase;3-PGDH)の活性が増大するように、且つ/又は、L−セリンによるフィードバック阻害に耐性の3-PGDHをコードする遺伝子を有するように、改変されていてよい。微生物は、具体的には、非改変株と比較して、すなわち非改変微生物の株と比較して、3-PGDHの活性が増大するように改変されていてよい。
であってもよい。また、3-PGDH遺伝子は、元の機能が維持されている限り、上記アミノ酸配列(例えば、配列番号178に示すアミノ酸配列)全体に対して、例えば、50%以上、65%以上、80%以上、90%以上、95%以上、97%以上、または99%以上の相同性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子であってもよい。3-PGDH遺伝子についての「元の機能が維持されている」とは、遺伝子のバリアントが3-PGDHをコードすることを意味してよい。また、3-PGDHについての「元の機能が維持されている」とは、タンパク質のバリアントが3-PGDH活性を有することを意味してよい。
ンパク質であってよい。具体的には、変異型3-PGDHは、例えば、フィードバック耐性変異を有すること以外は、配列番号178に示すアミノ酸配列アミノ酸配列を有するタンパク質であってよい。また、具体的には、変異型3-PGDHは、例えば、フィードバック耐性変異を有すること以外は、配列番号178に示すアミノ酸配列において、1又は数個のアミノ酸残基が置換、欠失、挿入、および/または付加されたアミノ酸配列を有するタンパク質であってもよい。また、具体的には、変異型3-PGDHは、例えば、フィードバック耐性変異を有すること以外は、配列番号178に示すアミノ酸配列に対して、50%以上、65%以上、80%以上、90%以上、95%以上、97%以上、または99%以上の同一性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質であってもよい。
に示すアミノ酸配列を野生型タンパク質の参照配列とする。
特に制限されない。フィードバック耐性型3-PGDH遺伝子は、微生物により発現可能であればよい。微生物は、1コピーのフィードバック耐性型3-PGDH遺伝子を有していてもよく、2コピーまたはそれ以上のフィードバック耐性型3-PGDH遺伝子を有していてもよい。微生物は、1種のフィードバック耐性型3-PGDH遺伝子を有していてもよく、2種またはそれ以上のフィードバック耐性型3-PGDH遺伝子を有していてもよい。フィードバック耐性型3-PGDH遺伝子は、「タンパク質の活性を増大させる手法」において後述する遺伝子の導入と同様にして微生物に導入することができる。
微生物は、L−セリンデアミナーゼ(L-serine deaminase)の活性が低下するように改変されていてよい。微生物は、具体的には、非改変株と比較して、すなわち非改変微生物の株と比較して、L-serine deaminaseの活性が低下するように改変されていてよい。
性を有するアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする遺伝子であってもよい。L-serine deaminase遺伝子についての「元の機能が維持されている」とは、遺伝子のバリアントがL-serine deaminaseをコードすることを意味してよい。また、L-serine deaminaseについての「元の機能が維持されている」とは、タンパク質のバリアントがL-serine deaminase活性を有することを意味してよい。
以下に、3-PGDH等のタンパク質の活性を増大させる手法について説明する。
子の発現が野生株や親株等の非改変株と比較して増大することを意味してよい。「遺伝子の発現が上昇する」とは、具体的には、同遺伝子の細胞当たりの発現量が非改変株と比較して増大することを意味してよい。「遺伝子の発現が上昇する」とは、より具体的には、遺伝子の転写量(mRNA量)が増大すること、および/または、遺伝子の翻訳量(タンパク質の量)が増大することを意味してよい。なお、「遺伝子の発現が上昇する」ことを、「遺伝子の発現が増強される」ともいう。遺伝子の発現は、例えば、非改変株の、1.2倍以上、1.5倍以上、2倍以上、または3倍以上に上昇してよい。また、「遺伝子の発現が上昇する」ことには、もともと標的の遺伝子が発現している菌株において同遺伝子の発現量を上昇させることだけでなく、もともと標的の遺伝子が発現していない菌株において、同遺伝子を発現させることも包含される。すなわち、「遺伝子の発現が上昇する」とは、例えば、標的の遺伝子を保持しない菌株に同遺伝子を導入し、同遺伝子を発現させることを意味してもよい。
れもタカラバイオ社より入手可)、pACYC184、pMW219(ニッポンジーン社)、pTrc99A(ファルマシア社)、pPROK系ベクター(クロンテック社)、pKK233‐2(クロンテック社)、pET系ベクター(ノバジェン社)、pQE系ベクター(キアゲン社)、pCold TF DNA(TaKaRa)、pACYC系ベクター、広宿主域ベクターRSF1010が挙げられる。コリネ型細菌で自律複製可能なベクターとして、具体的には、例えば、pHM1519(Agric. Biol. Chem., 48, 2901-2903(1984));pAM330(Agric. Biol. Chem., 48, 2901-2903(1984));これらを改良した薬剤耐性遺伝子を有するプラスミド;pCRY30(特開平3-210184);pCRY21、pCRY2KE、pCRY2KX、pCRY31、pCRY3KE、およびpCRY3KX(特開平2-72876、米国特許5,185,262号);pCRY2およびpCRY3(特開平1-191686);pAJ655、pAJ611、およびpAJ1844(特開昭58-192900);pCG1(特開昭57-134500);pCG2(特開昭58-35197);pCG4およびpCG11(特開昭57-183799);pVK7(特開平10-215883);pVK9(WO2007/046389);pVS7(WO2013/069634);pVC7(特開平9-070291)が挙げられる。
した遺伝子は、そのまま、あるいは適宜改変して、利用することができる。すなわち、遺伝子を改変することにより、そのバリアントを取得することができる。遺伝子の改変は公知の手法により行うことができる。例えば、部位特異的変異法により、DNAの目的部位に目的の変異を導入することができる。すなわち、例えば、部位特異的変異法により、コードされるタンパク質が特定の部位においてアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むように、遺伝子のコード領域を改変することができる。部位特異的変異法としては、PCRを用いる方法(Higuchi, R., 61, in PCR technology, Erlich, H. A. Eds., Stockton press (1989);Carter, P., Meth. in Enzymol., 154, 382 (1987))や、ファージを用いる方法(Kramer, W. and Frits, H. J., Meth. in Enzymol., 154, 350 (1987);Kunkel, T. A. et al., Meth. in Enzymol., 154, 367 (1987))が挙げられる。あるいは、遺伝子のバリアントを全合成してもよい。
のものを取得してもよい。例えば、プロモーター領域内の-35、-10領域をコンセンサス配列に近づけることにより、プロモーターの活性を高めることができる(国際公開第00/18935号)。高活性型プロモーターとしては、各種tac様プロモーター(Katashkina JI et al. Russian Federation Patent application 2006134574)が挙げられる。プロモーターの強度の評価法および強力なプロモーターの例は、Goldsteinらの論文(Prokaryotic promoters in biotechnology. Biotechnol. Annu. Rev., 1, 105-128 (1995))等に記載されている。
1988, 73, 227-235)。さらに、RBSと開始コドンとの間のスペーサー領域、特に開始コドンのすぐ上流の配列(5'-UTR)における数個のヌクレオチドの置換、あるいは挿入、あるいは欠失がmRNAの安定性および翻訳効率に非常に影響を及ぼすことが知られており、これらを改変することによっても遺伝子の翻訳効率を向上させることができる。
、ならびにN−メチル−N'−ニトロ−N−ニトロソグアニジン(MNNG)、エチルメタンスルフォネート(EMS)、およびメチルメタンスルフォネート(MMS)等の変異剤による処理が挙げられる。また、in vitroでDNAを直接ヒドロキシルアミンで処理し、ランダム変異を誘発してもよい。比活性の増強は、単独で用いてもよく、上記のような遺伝子の発現を増強する手法と任意に組み合わせて用いてもよい。
以下に、AICAR formyltransferase/IMP cyclohydrolaseやL-serine deaminase等のタンパク質の活性を低下させる手法について説明する。
、非誘導条件下(例えば、誘導物質の非存在下)でより弱いプロモーターとして機能し得る。また、発現調節配列の一部または全部を欠失させてもよい。また、遺伝子の発現の低下は、例えば、発現制御に関わる因子を操作することによっても達成できる。発現制御に関わる因子としては、転写や翻訳制御に関わる低分子(誘導物質、阻害物質など)、タンパク質(転写因子など)、核酸(siRNAなど)等が挙げられる。また、遺伝子の発現の低下は、例えば、遺伝子のコード領域に遺伝子の発現が低下するような変異を導入することによっても達成できる。例えば、遺伝子のコード領域のコドンを、宿主においてより低頻度で利用される同義コドンに置き換えることによって、遺伝子の発現を低下させることができる。また、例えば、本明細書に記載するような遺伝子の破壊により、遺伝子の発現自体が低下し得る。
ンパク質をコードするように遺伝子を改変することにより、達成できる。なお、「タンパク質のアミノ酸配列の欠失」とは、タンパク質のアミノ酸配列の一部または全部の領域の欠失を意味してよい。また、「タンパク質のアミノ酸配列の欠失」とは、タンパク質において元のアミノ酸配列が存在しなくなることを意味してよく、元のアミノ酸配列が別のアミノ酸配列に変化する場合も包含されてよい。すなわち、例えば、フレームシフトにより別のアミノ酸配列に変化した領域は、欠失した領域とみなしてよい。アミノ酸配列の欠失により、典型的にはタンパク質の全長が短縮されるが、タンパク質の全長が変化しないか、あるいは延長される場合もあり得る。例えば、遺伝子のコード領域の一部又は全部の領域の欠失により、コードされるタンパク質のアミノ酸配列において、当該欠失した領域がコードする領域を欠失させることができる。また、例えば、遺伝子のコード領域への終止コドンの導入により、コードされるタンパク質のアミノ酸配列において、当該導入部位より下流の領域がコードする領域を欠失させることができる。また、例えば、遺伝子のコード領域におけるフレームシフトにより、当該フレームシフト部位がコードする領域を欠失させることができる。アミノ酸配列の欠失における欠失させる領域の位置および長さについては、遺伝子の欠失における欠失させる領域の位置および長さの説明を準用できる。
本明細書に記載の方法は、本明細書に記載の微生物を利用して目的物質を製造する方法である。
目的物質は、例えば、本明細書に記載の微生物の発酵により製造することができる。すなわち、本明細書に記載の方法の一態様は、微生物の発酵により目的物質を製造する方法であってよい。この態様を、「発酵法」ともいう。また、微生物の発酵により目的物質を製造する工程を、「発酵工程」ともいう。
例えば、通気培養または振盪培養で行うことができる。培地のpHは、例えば、pH 3〜10、またはpH 4.0〜9.5であってよい。培養中、必要に応じて培地のpHを調整することができる。培地のpHは、アンモニアガス、アンモニア水、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、炭酸マグネシウム、水酸化ナトリウム、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム等の各種アルカリ性または酸性物質を用いて調整することができる。培養温度は、例えば、20〜45℃、または25℃〜37℃であってよい。培養期間は、例えば、10時間〜120時間であってよい。培養は、例えば、培地中の炭素源が消費されるまで、あるいは微生物の活性がなくなるまで、継続してもよい。
目的物質は、例えば、本明細書に記載の微生物を利用した生物変換により製造することもできる。すなわち、本明細書に記載の方法の別の態様は、微生物を利用した生物変換により目的物質を製造する方法であってよい。この態様を、「生物変換法」ともいう。また、微生物を利用した生物変換により目的物質を製造する工程を、「生物変換工程」ともいう。
て、目的物質への変換にSAMが要求されるものが挙げられる。前駆体として、より具体的には、例えば、プロトカテク酸、プロトカテクアルデヒド、L−トリプトファン、L−ヒスチジン、L−フェニルアラニン、L−チロシン、L−アルギニン、L−オルニチン、グリシンが挙げられる。プロトカテク酸は、例えば、バニリン、バニリン酸、またはグアイアコールを生産するための前駆体として用いてよい。プロトカテクアルデヒドは、例えば、バニリンを生産するための前駆体として用いてよい。L−トリプトファンは、例えば、メラトニンを生産するための前駆体として用いてよい。L−ヒスチジンは、例えば、エルゴチオネインを生産するための前駆体として用いてよい。L−フェニルアラニンおよびL−チロシンは、いずれも、例えば、フェルラ酸、4−ビニルグアイアコール、または4−エチルグアイアコールを生産するための前駆体として用いてよい。L−アルギニンおよびL−オルニチンは、いずれも、例えば、ポリアミンを生産するための前駆体として用いてよい。L−アルギニンおよびグリシンは、いずれも、例えば、クレアチンを生産するための前駆体として用いてよい。前駆体としては、1種の前駆体を用いてもよく、2種またはそれ以上の前駆体を組み合わせて用いてもよい。前駆体が塩の形態を取り得る化合物である場合、前駆体は、フリー体として用いてもよく、塩として用いてもよく、それらの混合物として用いてもよい。すなわち、「前駆体」とは、特記しない限り、フリー体の前駆体、もしくはその塩、またはそれらの混合物を意味してよい。塩としては、例えば、硫酸塩、塩酸塩、炭酸塩、アンモニウム塩、ナトリウム塩、カリウム塩が挙げられる。前駆体の塩としては、1種の塩を用いてもよく、2種またはそれ以上の塩を組み合わせて用いてもよい。
含有する素材を用いてもよい。前駆体を含有する素材は、微生物が前駆体を利用できる限り特に制限されない。前駆体を含有する素材として、具体的には、例えば、前駆体生産能を有する微生物を培養して得られた培養液、該培養液から分離した培養上清、それらの濃縮物(例えば、濃縮液)や乾燥物等の処理物が挙げられる。
物質の前駆体に作用させ、目的物質を該反応液中に生成蓄積する工程であってもよい。そのような菌体を利用して実施する生物変換工程を、「変換反応」ともいう。
オン、緩衝剤、界面活性剤、有機溶媒、炭素源、リン酸源、その他各種培地成分が挙げられる。すなわち、例えば、前駆体を含有する培地を反応液として用いてもよい。すなわち、生物変換法の第2の態様における反応液については、生物変換法の第1の態様における培地についての記載を準用できる。反応液に含有される成分の種類や濃度は、用いる前駆体の種類や、用いる菌体の態様等の諸条件に応じて適宜設定してよい。
とピルビン酸キナーゼを利用してATPを再生する方法(C. Aug'e and Ch. Gautheron, Tetrahedron Lett. 29:789-790 (1988))、ポリリン酸とポリリン酸キナーゼを利用してATPを再生する方法(Murata, K et al., Agric. Biol. Chem. 52(6): 1471-1477 (1988))が挙げられる。「或る成分を反応液に添加する」という場合の「成分」には、反応液中で生成または再生するものも包含されてよい。
本明細書に記載の微生物を利用して(すなわち発酵法または生物変換法により)目的物質が製造される場合、製造された目的物質をさらに他の目的物質に変換することができる。すなわち、本発明は、微生物を利用して(すなわち発酵法または生物変換法により)第1の目的物質を製造する工程、および製造された第1の目的物質を第2の目的物質に変換する工程を含む、第2の目的物質を製造する方法を提供する。
に改変されていてもよく、いなくてもよい。ACARを有する微生物については、同微生物がACARを有しており、且つ、特定の性質を有するように改変されていてもよく、いなくてもよいこと以外は、本明細書に記載の微生物に関する記載を準用できる。ACARを有する微生物は、ACAR、PPT、およびバニリン酸取り込み系の1種またはそれ以上の活性が増大するように改変されていてもよい。また、ACARを有する微生物を利用してバニリン酸をバニリンに変換する生物変換法については、微生物を利用して目的物質を製造する生物変換法に関する記載を準用できる。
物菌体、培地成分、反応液成分、ACAR、水分、及び微生物の代謝副産物等の他の成分を含んでいてもよい。回収されたバニリンの純度は、例えば、30%(w/w)以上、50%(w/w)以上、70%(w/w)以上、80%(w/w)以上、90%(w/w)以上、または95%(w/w)以上であってよい。
コリネ型細菌において、バニリンは、バニリン→バニリン酸→プロトカテク酸の順に代謝され、資化されることが報告されている(Current Microbiology, 2005, Vol.51, p59-65)。バニリン酸からプロトカテク酸への変換反応は、バニリン酸デメチラーゼにより触媒される。vanA遺伝子およびvanB遺伝子は、それぞれバニリン酸デメチラーゼのサブユニットAおよびサブユニットBをコードする。vanK遺伝子は、バニリン酸取り込み系をコードし、vanAB遺伝子とvanABKオペロンを構成している(M. T. Chaudhry, et al., Microbiology, 2007. 153:857-865)。よって、まず、vanABKオペロンを欠損させることにより、C.
glutamicum 2256株からバニリンやバニリン酸等の目的物質の資化能を欠損した株(FKS0165株)を構築した。手順を以下に示す。
C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号51および52の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、vanA遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物を得た。一方、C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号53および54の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、vanK遺伝子のC末端側コード領域を含むPCR産物を得た。配列番号52および53は一部が相補的な配列となっている。次にvanA遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物およびvanK遺伝子のC末端側コード領域を含むPCR産物をそれぞれほぼ等モルとなるように混合し、In Fusion HD cloning kit(Clontech)を用いて、BamHIとPstIで処理をしたpBS4Sベクター(WO2007/046389)に挿入した。このDNAを用いてEscherichia coli JM109のコンピテントセル(タカラバイオ)を形質転換し、IPTG 100μM、X-Gal 40μg/mL、およびカナマイシン40μg/mLを含有するLB寒天培地(Yeast Extract 5 g/L、tryptone 10 g/L、NaCl 10 g/L、寒天 15 g/L)に塗布し、一晩培養した。その後、出現した白色のコロニーを釣り上げ、単コロニー分離し、形質転換体を得た。得られた形質転換体よりプラスミドを抽出し、目的のPCR産物が挿入されていたものをpBS4SΔvanABK56と命名した。
上記で得られたpBS4SΔvanABK56はコリネ型細菌の細胞内で自律複製可能とする領域を含まないため、本プラスミドでコリネ型細菌を形質転換した場合、極めて低頻度であるが本プラスミドが相同組換えによりゲノムに組み込まれた株が形質転換体として出現する。そこで、pBS4SΔvanABK56を電気パルス法にてC. glutamicum 2256株に導入した。菌体を、カナマイシン25μg/mLを含有するCM-Dex寒天培地(グルコース 5 g/L、Polypeptone 10
g/L、Yeast Extract 10 g/L、KH2PO4 1 g/L、MgSO4・7H2O 0.4 g/L、FeSO4・7H2O 0.01 g/L、MnSO4・7H2O 0.01 g/L、尿素 3 g/L、大豆加水分解物 1.2 g/L、ビオチン 10μg/L、寒天 15 g/L、NaOHでpH7.5に調整)に塗布し、31.5℃にて培養した。生育してきた株について、相同組換えによってゲノム上にpBS4SΔvanABK56が組み込まれた1回組換え株であることをPCRで確認した。該1回組換え株は、野生型のvanABK遺伝子群と欠損型のvanABK遺伝子群の両方を有する。
次いで、Corynebacterium glutamicum FKS0165株を親株として、アルコールデヒドロゲナーゼホモログ遺伝子であるNCgl0324遺伝子(adhC)、NCgl0313遺伝子(adhE)、NCgl2709遺伝子(adhA)を欠損した株(FKFC14株)を以下の手順で構築した。
<2−1−1>NCgl0324遺伝子欠損用プラスミドpBS4SΔ2256adhCの構築
C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号57および58の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、NCgl0324遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物を得た。一方、C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号59および60の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、NCgl0324遺伝子のC末端側コード領域を含むPCR産物を得た。配列番号58および59は一部が相補的な配列となっている。次に、NCgl0324遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物およびNCgl0324遺伝子のC末端側コード領域を含むPCR産物をそれぞれほぼ等モルとなるように混合し、In Fusion HD cloning kit(Clontech)を用いて、BamHIとPstIで処理をしたpBS4Sベクター(WO2007/046389)に挿入した。このDNAを用いてEscherichia coli JM109のコンピテントセル(タカラバイオ)を形質転換し、IPTG 100μM、X-Gal 40μg/mL、およびカナマイシン40μg/mLを含有するLB寒天培地に塗布し、一晩培養した。その後、出現した白色のコロニーを釣り上げ、単コロニー分離し、形質転換体を得た。得られた形質転換体よりプラスミドを抽出し、目的のPCR産物が挿入されていたものをpBS4SΔ2256adhCと命名した。
上記で得られたpBS4SΔ2256adhCはコリネ型細菌の細胞内で自律複製可能とする領域を含まないため、本プラスミドでコリネ型細菌を形質転換した場合、極めて低頻度であるが本プラスミドが相同組換えによりゲノムに組み込まれた株が形質転換体として出現する。そこで、pBS4SΔ2256adhCを電気パルス法にてC. glutamicum FKS0165株に導入した。菌体を、カナマイシン25μg/mLを含有するCM-Dex寒天培地に塗布し、31.5℃にて培養した。生
育してきた株について、相同組換えによってゲノム上にpBS4SΔ2256adhCが組み込まれた1回組換え株であることをPCRで確認した。該1回組換え株は、野生型のNCgl0324遺伝子と欠損型のNCgl0324遺伝子の両方を有する。
<2−2−1>NCgl0313遺伝子欠損用プラスミドpBS4SΔ2256adhEの構築
C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号63および64の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、NCgl0313遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物を得た。一方、C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号65および66の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、NCgl0313遺伝子のC末端側コード領域を含むPCR産物を得た。配列番号64および65は一部が相補的な配列となっている。次に、NCgl0313遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物およびNCgl0313遺伝子のC末端側コード領域を含むPCR産物をそれぞれほぼ等モルとなるように混合し、In Fusion HD cloning kit(Clontech)を用いて、BamHIとPstIで処理をしたpBS4Sベクター(WO2007/046389)に挿入した。このDNAを用いてEscherichia coli JM109のコンピテントセル(タカラバイオ)を形質転換し、IPTG 100μM、X-Gal 40μg/mL、およびカナマイシン40μg/mLを含有するLB寒天培地に塗布し、一晩培養した。その後、出現した白色のコロニーを釣り上げ、単コロニー分離し、形質転換体を得た。得られた形質転換体よりプラスミドを抽出し、目的のPCR産物が挿入されていたものをpBS4SΔ2256adhEと命名した。
上記で得られたpBS4SΔ2256adhEはコリネ型細菌の細胞内で自律複製可能とする領域を含まないため、本プラスミドでコリネ型細菌を形質転換した場合、極めて低頻度であるが本プラスミドが相同組換えによりゲノムに組み込まれた株が形質転換体として出現する。そこで、pBS4SΔ2256adhEを電気パルス法にてC. glutamicum FKFC5株に導入した。菌体を、カナマイシン25μg/mLを含有するCM-Dex寒天培地に塗布し、31.5℃にて培養した。生育してきた株について、相同組換えによってゲノム上にpBS4SΔ2256adhEが組み込まれた1回組換え株であることをPCRで確認した。該1回組換え株は、野生型のNCgl0313遺伝子と欠損型のNCgl0313遺伝子の両方を有する。
<2−3−1>NCgl2709遺伝子欠損用プラスミドpBS4SΔ2256adhAの構築
C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号69および70の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、NCgl2709遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物を得た。一方、C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号71および72の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、NCgl2709遺伝子のC末端側コード領域を含むPCR産物を得た。配列番号70および71は一部が相補的な配列となっている。次に、NCgl2709遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物およびNCgl2709遺伝子のC末端側コード領域を含
むPCR産物をそれぞれほぼ等モルとなるように混合し、In Fusion HD cloning kit(Clontech)を用いて、BamHIとPstIで処理をしたpBS4Sベクターに挿入した。このDNAを用いてEscherichia coli JM109のコンピテントセル(タカラバイオ)を形質転換し、IPTG 100μM、X-Gal 40μg/mL、およびカナマイシン40μg/mLを含有するLB寒天培地に塗布し、一晩培養した。その後、出現した白色のコロニーを釣り上げ、単コロニー分離し、形質転換体を得た。得られた形質転換体よりプラスミドを抽出し、目的のPCR産物が挿入されていたものをpBS4SΔ2256adhAと命名した。
上記で得られたpBS4SΔ2256adhAはコリネ型細菌の細胞内で自律複製可能とする領域を含まないため、本プラスミドでコリネ型細菌を形質転換した場合、極めて低頻度であるが本プラスミドが相同組換えによりゲノムに組み込まれた株が形質転換体として出現する。そこで、pBS4SΔ2256adhAを電気パルス法にてC. glutamicum FKFC11株に導入した。菌体を、カナマイシン25μg/mLを含有するCM-Dex寒天培地に塗布し、31.5℃にて培養した。生育してきた株について、相同組換えによってゲノム上にpBS4SΔ2256adhAが組み込まれた1回組換え株であることをPCRで確認した。該1回組換え株は、野生型のNCgl2709遺伝子と欠損型のNCgl2709遺伝子の両方を有する。
次いで、Corynebacterium glutamicum FKFC14株を親株として、プロトカテク酸ジオキシゲナーゼαサブユニットおよびβサブユニットをコードするNCgl2314遺伝子(pcaG)およびNCgl2315遺伝子(pcaH)を欠損したFKFC14ΔpcaGH株を外注により構築した。FKFC14ΔpcaGH株は、以下の手順でも構築することができる。
pcaG遺伝子とpcaH遺伝子は隣接しており、まとめて欠損させることが可能である。C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号75および76の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、NCgl2315遺伝子の上流領域を含むPCR産物を得る。一方、C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号77および78の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、NCgl2314遺伝子の下流領域を含むPCR産物を得る。配列番号76および77は一部が相補的な配列となっている。次に、NCgl2315遺伝子の上流領域を含むPCR産物およびNCgl2314遺伝子の下流領域を含むPCR産物をそれぞれほぼ等モルとなるように混合し、In Fusion HD cloning kit(Clontech)を用いて、BamHIとPstIで処理をしたpBS4Sベクター(WO2007/046389)に挿入する。このDNAを用いてEscherichia coli JM109のコンピテントセル(タカラバイオ)を形質転換し、IPTG 100μM、X-Gal 40μg/mL、およびカナマイシン40μg/mLを含有するLB寒天培地に塗布し、一晩培養する。その後、出現した白色のコロニーを釣り上げ、単コロニー分離し、形質転換体を得る。得られた形質転換体よりプラスミドを抽出し、目的のPCR産物が挿入されていたものをpBS4SΔ2256pcaGHと命名する。
上記で得られたpBS4SΔ2256pcaGHはコリネ型細菌の細胞内で自律複製可能とする領域を含まないため、本プラスミドでコリネ型細菌を形質転換した場合、極めて低頻度であるが本プラスミドが相同組換えによりゲノムに組み込まれた株が形質転換体として出現する。
そこで、pBS4SΔ2256pcaGHを電気パルス法にてC. glutamicum FKFC14株に導入する。菌体を、カナマイシン25μg/mLを含有するCM-Dex寒天培地に塗布し、31.5℃にて培養する。生育してきた株について、相同組換えによってゲノム上にpBS4SΔ2256pcaGHが組み込まれた1回組換え株であることをPCRで確認する。該1回組換え株は、野生型のNCgl2314およびNCgl2315遺伝子と、欠損型のNCgl2314およびNCgl2315遺伝子の両方を有する。
<4−1>Ap1_0007株(FKFC14ΔpcaGH P2::NCgl0120株)の構築
次いで、Corynebacterium glutamicum FKFC14ΔpcaGH株を親株として、Crpファミリーの発現制御タンパク質をコードするNCgl0120遺伝子(cysR)のプロモーター領域がP2プロモーターに置換され、以て該遺伝子の発現が増強されたAp1_0007株を外注により構築した。同株におけるP2プロモーターを含むゲノム領域の塩基配列を配列番号108(942-1034位がP2プロモーターに相当)に示す。Ap1_0007株は、以下の手順でも構築することができる。
C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号81および82の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、NCgl0120遺伝子の上流領域を含むPCR産物を得る。一方、C.
glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号83および84の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、NCgl0120遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物を得る。また、P2プロモーター領域を含む配列番号85のDNA断片を人工遺伝子合成によって得る。次に、配列番号85のDNA断片を鋳型として、配列番号86および87の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、P2プロモーターを含むPCR産物を得る。配列番号82および86は一部が相補的な配列となっている。配列番号83および87は一部が相補的な配列となっている。次に、NCgl0120遺伝子の上流領域を含むPCR産物、NCgl0120遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物、およびP2プロモーターを含むPCR産物をそれぞれほぼ等モルとなるように混合し、In Fusion HD cloning kit(Clontech)を用いて、BamHIとPstIで処理をしたpBS4Sベクター(WO2007/046389)に挿入する。このDNAを用いてEscherichia coli JM109のコンピテントセル(タカラバイオ)を形質転換し、IPTG 100μM、X-Gal 40μg/mL、およびカナマイシン40μg/mLを含有するLB寒天培地に塗布し、一晩培養する。その後、出現した白色のコロニーを釣り上げ、単コロニー分離し、形質転換体を得る。得られた形質転換体よりプラスミドを抽出し、目的のPCR産物が挿入されていたものをpBS4SP2::NCgl0120と命名する。
上記で得られたpBS4SP2::NCgl0120はコリネ型細菌の細胞内で自律複製可能とする領域を含まないため、本プラスミドでコリネ型細菌を形質転換した場合、極めて低頻度であるが本プラスミドが相同組換えによりゲノムに組み込まれた株が形質転換体として出現する。そこで、pBS4SP2::NCgl0120を電気パルス法にてC. glutamicum FKFC14ΔpcaGH株に導入する。菌体を、カナマイシン25μg/mLを含有するCM-Dex寒天培地に塗布し、31.5℃にて培養する。生育してきた株について、相同組換えによってゲノム上にpBS4SP2::NCgl0120が組み込まれた1回組換え株であることをPCRで確認する。
培養する。出現したコロニーのうち、カナマイシン感受性を示す株をCM-Dex寒天培地上で純化する。純化した株よりゲノムDNAを調製し、シーケンス解析によりNCgl0120遺伝子上流にP2プロモーターが存在することを確認し、該株をAp1_0007株とする。
次いで、Corynebacterium glutamicum Ap1_0007株を親株として、NCgl2048遺伝子のプロモーター領域がP8プロモーターに置換され、以て該遺伝子の発現が弱化されたBp1_0112株を外注により構築した。同株におけるP8プロモーターを含むゲノム領域の塩基配列を配列番号110(901-1046位がP8プロモーターに相当)に示す。Bp1_0112株は、以下の手順でも構築することができる。
C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号112および113の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、NCgl2048遺伝子の上流領域を含むPCR産物を得る。一方、C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号114および115の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、NCgl2048遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物を得る。また、P8プロモーター領域を含む配列番号116のDNA断片を人工遺伝子合成によって得る。次に、配列番号116のDNA断片を鋳型として、配列番号117および118の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、P8プロモーターを含むPCR産物を得る。配列番号113および117は一部が相補的な配列となっている。配列番号114および118は一部が相補的な配列となっている。次に、NCgl2048遺伝子の上流領域を含むPCR産物、NCgl2048遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物、およびP8プロモーターを含むPCR産物をそれぞれほぼ等モルとなるように混合し、In Fusion HD cloning kit(Clontech)を用いて、BamHIとPstIで処理をしたpBS4Sベクター(WO2007/046389)に挿入する。このDNAを用いてEscherichia coli JM109のコンピテントセル(タカラバイオ)を形質転換し、IPTG
100μM、X-Gal 40μg/mL、およびカナマイシン40μg/mLを含有するLB寒天培地に塗布し、一晩培養する。その後、出現した白色のコロニーを釣り上げ、単コロニー分離し、形質転換体を得る。得られた形質転換体よりプラスミドを抽出し、目的のPCR産物が挿入されていたものをpBS4SP8::NCgl2048と命名する。
上記で得られたpBS4SP8::NCgl2048はコリネ型細菌の細胞内で自律複製可能とする領域を含まないため、本プラスミドでコリネ型細菌を形質転換した場合、極めて低頻度であるが本プラスミドが相同組換えによりゲノムに組み込まれた株が形質転換体として出現する。そこで、pBS4SP8::NCgl2048を電気パルス法にてC. glutamicum Ap1_0007株に導入する。菌体を、カナマイシン25μg/mLを含有するCM-Dex寒天培地に塗布し、31.5℃にて培養する。生育してきた株について、相同組換えによってゲノム上にpBS4SP8::NCgl2048が組み込まれた1回組換え株であることをPCRで確認する。
次いで、Corynebacterium glutamicum Bp1_0112株を親株として、エノラーゼをコードするNCgl0935遺伝子(eno)のプロモーター領域がP4プロモーターに置換され、以て該遺伝子の発現が弱化されたDp2_0340株を外注により構築した。同株におけるP4プロモーターを含むゲノム領域の塩基配列を配列番号109(872-969位がP4プロモーターに相当)に
示す。Dp2_0340株は、以下の手順でも構築することができる。
C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号121および122の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、NCgl0935遺伝子の上流領域を含むPCR産物を得る。一方、C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号123および124の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、NCgl0935遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物を得る。また、P4プロモーターを含む配列番号125のDNA断片を人工遺伝子合成によって得る。次に、配列番号125のDNA断片を鋳型として、配列番号126および127の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、P4プロモーターを含むPCR産物を得る。配列番号122および126は一部が相補的な配列となっている。配列番号123および127は一部が相補的な配列となっている。次に、NCgl0935遺伝子の上流領域を含むPCR産物、NCgl0935遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物、およびP4プロモーターを含むPCR産物をそれぞれほぼ等モルとなるように混合し、In Fusion HD cloning kit(Clontech)を用いて、BamHIとPstIで処理をしたpBS4Sベクター(WO2007/046389)に挿入する。このDNAを用いてEscherichia coli JM109のコンピテントセル(タカラバイオ)を形質転換し、IPTG 100μM、X-Gal 40μg/mL、およびカナマイシン40μg/mLを含有するLB寒天培地に塗布し、一晩培養する。その後、出現した白色のコロニーを釣り上げ、単コロニー分離し、形質転換体を得る。得られた形質転換体よりプラスミドを抽出し、目的のPCR産物が挿入されていたものをpBS4SP4::NCgl0935と命名する。
上記で得られたpBS4SP4::NCgl0935はコリネ型細菌の細胞内で自律複製可能とする領域を含まないため、本プラスミドでコリネ型細菌を形質転換した場合、極めて低頻度であるが本プラスミドが相同組換えによりゲノムに組み込まれた株が形質転換体として出現する。そこで、pBS4SP4::NCgl0935を電気パルス法にてC. glutamicum Bp1_0112株に導入する。菌体を、カナマイシン25μg/mLを含有するCM-Dex寒天培地に塗布し、31.5℃にて培養する。生育してきた株について、相同組換えによってゲノム上にpBS4SP4::NCgl0935が組み込まれた1回組換え株であることをPCRで確認する。
次いで、Corynebacterium glutamicum Dp2_0340株を親株として、S−アデノシル−L−ホモシステインハイドロラーゼをコードするNCgl0719遺伝子(sahH)のプロモーター領域がP3プロモーターに置換されたEp2_0055株を外注により構築した。P3プロモーターの塩基配列を配列番号111に示す。Ep2_0055株は、以下の手順でも構築することができる。
C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号138および139の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、NCgl0719遺伝子の上流領域を含むPCR産物を得る。一方、C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号140および141の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、NCgl0719遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物を得る。また、P3プロモーターを含む配列番号111のDNA断片を人工遺伝子合成によって得る。次に、配列番号111のDNA断片を鋳型として、配列番号142および143の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、P3プロモーターを含むPCR産物を得る。配列番号1
39および142は一部が相補的な配列となっている。配列番号140および143は一部が相補的な配列となっている。次に、NCgl0719遺伝子の上流領域を含むPCR産物、NCgl0719遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物、およびP3プロモーターを含むPCR産物をそれぞれほぼ等モルとなるように混合し、In Fusion HD cloning kit(Clontech)を用いて、BamHIとPstIで処理をしたpBS4Sベクター(WO2007/046389)に挿入する。このDNAを用いてEscherichia coli JM109のコンピテントセル(タカラバイオ)を形質転換し、IPTG 100μM、X-Gal 40μg/mL、およびカナマイシン40μg/mLを含有するLB寒天培地に塗布し、一晩培養する。その後、出現した白色のコロニーを釣り上げ、単コロニー分離し、形質転換体を得る。得られた形質転換体よりプラスミドを抽出し、目的のPCR産物が挿入されていたものをpBS4SP3::NCgl0719と命名する。
上記で得られたpBS4SP3::NCgl0719はコリネ型細菌の細胞内で自律複製可能とする領域を含まないため、本プラスミドでコリネ型細菌を形質転換した場合、極めて低頻度であるが本プラスミドが相同組換えによりゲノムに組み込まれた株が形質転換体として出現する。そこで、pBS4SP3::NCgl0719を電気パルス法にてC. glutamicum Dp2_0340株に導入する。菌体を、カナマイシン25μg/mLを含有するCM-Dex寒天培地に塗布し、31.5℃にて培養する。生育してきた株について、相同組換えによってゲノム上にpBS4SP3::NCgl0719が組み込まれた1回組換え株であることをPCRで確認する。
次いで、Corynebacterium glutamicum Ep2_0055株を親株として、L−セリンデアミナーゼをコードするNCgl1583遺伝子(sdaA)を欠損したEp2_0055ΔsdaA株を構築した。
C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号148および149の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、sdaA遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物を得た。一方、C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号150および151の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、sdaA遺伝子のC末端側コード領域を含むPCR産物を得た。配列番号149および150は一部が相補的な配列となっている。次に、sdaA遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物およびsdaA遺伝子のC末端側コード領域を含むPCR産物をそれぞれほぼ等モルとなるように混合し、In Fusion HD cloning kit(Clontech)を用いて、BamHIとPstIで処理をしたpBS4Sベクターに挿入した。このDNAを用いてEscherichia coli JM109のコンピテントセル(タカラバイオ)を形質転換し、IPTG 100μM、X-Gal 40μg/mL、およびカナマイシン40μg/mLを含有するLB寒天培地に塗布し、一晩培養した。その後、出現した白色のコロニーを釣り上げ、単コロニー分離し、形質転換体を得た。得られた形質転換体よりプラスミドを抽出し、目的のPCR産物が挿入されていたものをpBS4SΔ2256sdaAと命名した。
上記で得られたpBS4SΔ2256sdaAはコリネ型細菌の細胞内で自律複製可能とする領域を含まないため、本プラスミドでコリネ型細菌を形質転換した場合、極めて低頻度であるが本プラスミドが相同組換えによりゲノムに組み込まれた株が形質転換体として出現する。
そこで、pBS4SΔ2256sdaAを電気パルス法にてC. glutamicum Ep2_0055株に導入した。菌体を、カナマイシン25μg/mLを含有するCM-Dex寒天培地に塗布し、31.5℃にて培養した。生育してきた株について、相同組換えによってゲノム上にpBS4SΔ2256sdaAが組み込まれた1回組換え株であることをPCRで確認した。該1回組換え株は、野生型のsdaA遺伝子と欠損型のsdaA遺伝子の両方を有する。
Corynebacterium glutamicum FKFC14ΔpcaGH株を親株として、UV照射による突然変異誘発によりFKFC14ΔpcaGH purH(S37F)株を構築した。次いで、Corynebacterium glutamicum Ep2_0055ΔsdaA株を親株として、FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)のゲノムDNAを利用した遺伝子組み換えにより、Ep2_0055ΔsdaA purH(S37F)株を構築した。FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)株およびEp2_0055ΔsdaA purH(S37F)株は、野生型purH遺伝子に代えて、変異型purH遺伝子であるpurH(S37F)遺伝子を保持する。purH(S37F)遺伝子は、37位のセリン残基がフェニルアラニン残基に置換される変異を有するPurH(S37F)タンパク質をコードする。対応する野生型purH遺伝子の塩基配列を配列番号134に、対応する野生型PurHタンパク質のアミノ酸配列を配列番号135に示す。purH(S37F)遺伝子の塩基配列を配列番号136に、PurH(S37F)タンパク質のアミノ酸配列を配列番号137に示す。FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)株およびEp2_0055ΔsdaA purH(S37F)株は、以下の手順でも構築することができる。
C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号154および155の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、purH遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物を得る。一方、C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号156および157の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、purH遺伝子のC末端側コード領域を含むPCR産物を得る。また、配列番号158のDNA断片を人工遺伝子合成により得る。配列番号155および158は一部が相補的な配列となっている。配列番号156および158は一部が相補的な配列となっている。次に、purH遺伝子のN末端側コード領域を含むPCR産物、配列番号158のDNA断片、およびpurH遺伝子のC末端側コード領域を含むPCR産物をそれぞれほぼ等モルとなるように混合し、In Fusion HD cloning kit(Clontech)を用いて、BamHIとPstIで処理をしたpBS4Sベクターに挿入する。このDNAを用いてEscherichia coli JM109のコンピテントセル(タカラバイオ)を形質転換し、IPTG 100μM、X-Gal 40μg/mL、およびカナマイシン40μg/mLを含有するLB寒天培地に塗布し、一晩培養する。その後、出現した白色のコロニーを釣り上げ、単コロニー分離し、形質転換体を得る。得られた形質転換体よりプラスミドを抽出し、目的のPCR産物が挿入されていたものをpBS4SΔ2256purH(S37F)と命名する。
上記で得られたpBS4SΔ2256purH(S37F)はコリネ型細菌の細胞内で自律複製可能とする領域を含まないため、本プラスミドでコリネ型細菌を形質転換した場合、極めて低頻度であるが本プラスミドが相同組換えによりゲノムに組み込まれた株が形質転換体として出現
する。そこで、pBS4SΔ2256purH(S37F)を電気パルス法にてC. glutamicum FKFC14ΔpcaGH株およびEp2_0055ΔsdaA株に導入する。菌体を、カナマイシン25μg/mLを含有するCM-Dex寒天培地に塗布し、31.5℃にて培養する。生育してきた株について、相同組換えによってゲノム上にpBS4SΔ2256purH(S37F)が組み込まれた1回組換え株であることをPCRで確認する。該1回組換え株は、野生型のpurH遺伝子とS37F型のpurH遺伝子の両方を有する。
<5−1>Homo sapiensのOMT遺伝子の発現プラスミドpVK9::PcspB-hsomtの構築
<5−1−1>プラスミドpEPlac-COMT2の構築
Homo sapiensのOMT遺伝子には4つの転写バリアントおよび2種のOMTアイソフォームが知られている。それら4つの転写バリアント(transcript variant 1-4;GenBank Accession No. NM_000754.3, NM_001135161.1, NM_001135162.1, NM_007310.2)の塩基配列を配列番号11〜14に、長いOMTアイソフォーム(MB-COMT;GenBank Accession No. NP_000745.1)のアミノ酸配列を配列番号15に、短いOMTアイソフォーム(S-COMT;GenBank Accession No. NP_009294.1)のアミノ酸配列を配列番号16に、それぞれ示す。S-COMTをコードする野生型cDNAの塩基配列を配列番号161に示す。S-COMTの野生型cDNAをEscherichia coli(E. coli)での発現用にコドン最適化し、ATG Service Gen(Russian Federation, Saint-Petersburg)のサービスを利用して化学合成した。後のクローニングを容易にするため、遺伝子のDNA断片は、3'末端および5'末端にそれぞれNdeIおよびSacIの制限酵素サイトを付加して合成した。このコドン最適化されたS-COMTのcDNAを「COMT2遺伝子」ともいう。COMT2遺伝子を含む合成されたDNA断片の塩基配列を配列番号162に示す。COMT2遺伝子を含む合成されたDNA断片は、pUC57ベクター(GenScript)に挿入された状態で得た。
S. V. et al., Appl. Microbiol. Biotechnol., 2010, 88(3):719-726)のNdeI−SacI制限サイトに再クローニングした。pELACベクターは、pET22b(+)(Novagen)のBglII−XbaI断片を、PlacUV5プロモーターを含む合成BglII−XbaI断片で置換することにより構築した。COMT2遺伝子をpELACベクターに挿入するため、T4 DNA ligase(Fermentas, Lithuania)によるライゲーション反応を供給元の推奨する通りに実施した。ライゲーション反応物をエタノールで処理し、得られた沈殿を水に溶解してから、エレクトロポレーション(Micro Pulser, BioRad)により供給元の推奨する条件でE. coli TG1の菌体に導入した。菌体を、アンピシリン(200 mg/L)を添加したLAプレート(Sambrook J. and Russell D. W
., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3rd ed.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001)に塗布し、37℃で一晩培養した。得られたコロニーをPCR解析により試験し、要求されるクローンを選択した。COMT2遺伝子を含むコロニーの選択には、プライマーP1およびP2(配列番号164および165)を利用した。ベクター特異的プライマーP1とCOMT2遺伝子の末端用のリバースプライマーP2を用いることにより、713 bpのDNA断片が得られた。こうして、ベクターpEPlac-COMT2を構築した。クローニングされたCOMT2遺伝子の配列は、プライマーP1およびP3(配列番号164および166)を利用して決定した。
C. glutamicum 2256株のゲノムDNAを鋳型として、配列番号167および168の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、cspB遺伝子のプロモーター領域とSD配列を含むPCR産物を得た。一方、プラスミドpEPlac-COMT2を鋳型として、配列番号169および170の合成DNAをプライマーとしてPCRを行い、COMT2遺伝子を含むPCR産物を得た。次に、これらの断片をIn Fusion HD cloning kit(Clontech)を用いて、BamHIとPstIで処理をしたpVK9ベクター(WO2007/046389)に挿入した。なお、pVK9はコリネ型細菌とE. coliのシャトルベクターである。このDNAを用いてEscherichia coli JM109のコンピテントセル(タカラバイオ)を形質転換し、IPTG 100μM、X-Gal 40μg/mL、およびカナマイシン25μg/mLを含有するLB寒天培地に塗布し、一晩培養した。その後、出現した白色のコロニーを釣り上げ、単コロニー分離し、形質転換体を得た。得られた形質転換体よりプラスミドを抽出し、目的のPCR産物が挿入されていたものをpVK9::PcspB-hsomtと命名した。
プラスミドpVK9::PcspB-omt35を外注により得た。プラスミドpVK9::PcspB-omt35は、C.
glutamicumのコドン使用にコドン最適化されたNiastella koreensisの野生型OMT遺伝子を保有する。この遺伝子を「omt35遺伝子」、この遺伝子にコードされるOMTを「OMT35」ともいう。omt35遺伝子の塩基配列を配列番号174に、OMT35のアミノ酸配列を配列番号131に示す。プラスミドpVK9::PcspB-omt35は、以下の手順でも構築することができる。
100μM、X-Gal 40μg/mL、およびカナマイシン25μg/mLを含有するLB寒天培地に塗布し、一晩培養する。その後、出現した白色のコロニーを釣り上げ、単コロニー分離し、形質転換体を得る。得られた形質転換体よりプラスミドを抽出し、目的の構造が挿入されていたものをpVK9::PcspB-omt35と命名する。
プラスミドpVK9::PcspB-omt202を外注により得た。プラスミドpVK9::PcspB-omt202は、C. glutamicumのコドン使用にコドン最適化されたNiastella koreensisの変異型OMT遺伝子を保有する。この変異型OMT遺伝子は、OMT35の36位のメチオニン残基(M)がコドン変化(ATG→AAG)によりリジン残基(K)に置換された変異型OMTをコードする。この変異型OMT遺伝子を「omt202遺伝子」、この変異型OMTを「OMT202」ともいう。プラスミドpVK9::PcspB-omt202は、以下の手順でも構築することができる。
プラスミドpVK9::PcspB-omt312を外注により得た。プラスミドpVK9::PcspB-omt312は、C. glutamicumのコドン使用にコドン最適化されたNiastella koreensisの変異型OMT遺伝子を保有する。この変異型OMT遺伝子は、OMT35に二重変異M36K/L67Fが導入された(具体的には、36位のメチオニン残基(M)がコドン変化(ATG→AAG)によりリジン残基(K)に置換され、且つ67位のロイシン残基(L)がコドン変化(TTG→TTT)によりフェニルアラニン残基(F)に置換された)変異型OMTをコードする。この変異型OMT遺伝子を「omt312遺伝子」、この変異型OMTを「OMT312」ともいう。プラスミドpVK9::PcspB-omt312は、以下の手順でも構築することができる。pVK9::PcspB-omt312の塩基配列を配列番号132(4880-5545位がomt312遺伝子に相当)に示す。OMT312のアミノ酸配列を配列番号133に示す。pVK9::PcspB-omt312は、人工遺伝子合成によっても構築できる。
プラスミドpVS7::Plac-serA*は、変異型3-PGDH遺伝子であるB. flavum AJ13327株のserA*遺伝子を保有する。serA*遺伝子は、SerA*タンパク質(325位のグルタミン酸残基がリジン残基に置換される変異を有することによりL−セリンによるフィードバック阻害に耐性である変異型3-PGDH)をコードする(US2003175912A1)。対応する野生型serA遺伝子の塩基配列を配列番号177に、対応する野生型SerAタンパク質のアミノ酸配列を配列番号178に示す。serA*遺伝子の塩基配列を配列番号179に、SerA*タンパク質のアミノ酸配列を配列番号180に示す。プラスミドpVS7::Plac-serA*は、以下の手順でも構築することができる。
プラスミドpVK9::PcspB-hsomtを、電気パルス法にてC. glutamicum FKFC14ΔpcaGH株およびFKFC14ΔpcaGH purH(S37F)株に導入した。プラスミドpVK9::PcspB-omt312を、電気パルス法にてC. glutamicum Ep2_0055ΔsdaA株およびEp2_0055ΔsdaA purH(S37F)株に導入した。菌体を、カナマイシン25μg/mLを含有するCM-Dex寒天培地に塗布し、31.5℃にて培養した。生育してきた株を同寒天培地にて純化し、それぞれ、FKFC14ΔpcaGH/pVK9::Pcsp
B-hsomt株、FKFC14ΔpcaGH purH(S37F)/pVK9::PcspB-hsomt株、Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt312株、Ep2_0055ΔsdaA purH(S37F)/pVK9::PcspB-omt312株と命名した。
FKFC14ΔpcaGH/pVK9::PcspB-hsomt株およびFKFC14ΔpcaGH purH(S37F)/pVK9::PcspB-hsomt株のグリセロールストック5μLを、それぞれ、カナマイシン25μg/mLを含有するCM-Dex w/o mameno培地4 mLを含む試験管に接種し、前培養として31.5℃で20時間振とう培養を行った。得られた前培養液0.5 mLを、カナマイシン25μg/mLを含有するCM-Dex w/o mameno培地50 mLを含むバッフル付き三角フラスコに接種し、31.5℃で20時間振とう培養を行った。得られた培養液を8000 rpmで5分間遠心し、上清を除去し、菌体を滅菌生理食塩水に懸濁した。菌体懸濁液の光学密度(OD)を測定し、600 nmでのODが50になるように生理食塩水で菌体懸濁液を希釈した。希釈した菌体懸濁液5 mLを、カナマイシン25μg/mLを含有するバニリン酸生産培地(グルコース 75 g/L、MgSO4・7H2O 0.6 g/L、(NH4)2SO4 6.3 g/L、KH2PO4 2.5 g/L、FeSO4・7H2O 12.5 mg/L、MnSO4・4-5H2O 12.5 mg/L、Yeast Extract
2.5 g/L、Vitamin B1 150μg/L、Biotin 150μg/L、プロトカテク酸 6.9 g/L、KOHでpH7に調整後、CaCO3 37.5 g/L(180℃で3時間乾熱滅菌したもの)と混合)20 mLを含むバッフル付き三角フラスコに接種し、31.5℃で24時間振とう培養を行った。
カラム:KINETEX 2.6μm XB-C18 150 x 30 mm (Phenomenex)
オーブン温度: 40 ℃
移動相(A):0.1% トリフルオロ酢酸
移動相(B):0.1% トリフルオロ酢酸/80% アセトニトリル
グラジエントプログラム (time, A %, B %):(0, 90, 10)→(3, 80, 20)
流速:1.5 mL/min
Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt312株およびEp2_0055ΔsdaA purH(S37F)/pVK9::PcspB-omt312株のグリセロールストック5μLを、それぞれ、カナマイシン25μg/mLを含有するCM-Dex w/o mameno培地4 mLを含む試験管に接種し、前培養として31.5℃で20時間振とう培養を行った。得られた前培養液1 mLをカナマイシン25μg/mLを含有するCM-Dex w/o mameno培地100 mLを含む3本の坂口フラスコに接種し、31.5℃で20時間振とう培養を行った。得られた培養液を7000 rpmで10分間遠心し、上清を除去し、菌体を滅菌生理食塩水に懸濁した。菌体懸濁液の光学密度(OD)を測定し、600 nmでのODが50になるように生理食塩水で菌体懸濁液を希釈した。希釈した菌体懸濁液60 mLを、カナマイシン25μg/mLを含有するバニリン酸生産培地(グルコース 125 g/L、MgSO4・7H2O 0.6 g/L、(NH4)2SO4 6.3 g/L、KH2PO4 2.5 g/L、FeSO4・7H2O 12.5 mg/L、MnSO4・4-5H2O 12.5 mg/L、Yeast Extract 2.5 g/L、Vitamin B1 150μg/L、Biotin 150μg/L、Serine 5.3 g/L、ZnSO4・7H2O 9.0 mg/L、Vitamin B12 6.3 mg/L、プロトカテク酸 6.9 g/L、KOHでpH7.0に調整)240 mLを含むS型Jarに接種し、31.5℃、pH7.0、通気4/3 vvm、PL>5に制御して5時間培養した。
実施例<8>でEp2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt312株およびEp2_0055ΔsdaA purH(S37F)/pVK9::PcspB-omt312株のそれぞれについて培養開始から5時間後に得られた菌体を含有する培養液2 mLを、予め-80℃に冷却した70%メタノール30 mLと混合した。混合物を8000 rpmで1分間遠心し、上清を除去し、菌体を15%メタノール15 mLで懸濁した。懸濁液を8000
rpmで1分間遠心し、上清を除去し、菌体を75%メタノール400μLで懸濁した。懸濁液をクロロホルム2 mLと混合し、内部標準を含有する超純水(Methionine sulfone 5μM、D-camphor-10-sulfonic acid 5μM)2 mLとさらに混合し、混合物を遠心し、水層2 mLを回収した。回収した水層を0.45μmフィルターで濾過し、Ultrafree MC-PLHCC 250/pk for Metab
olome Analysisでさらに濾過し、遠心エバポレーターにて乾固させた。
カラム:Shodex Asahipak GS-220 HQ 7.5 x 300 mm (昭和電工)
オーブン温度:55°C
移動相:0.2 M NaH2PO4 (pH3.98)
流速:0.6 mL/min
プラスミドpVK9::PcspB-omt202とpVS7ベクターの混合物、およびプラスミドpVK9::PcspB-omt202とプラスミドpVS7::Plac-serA*の混合物を、それぞれ、電気パルス法にてC. glutamicum Ep2_0055ΔsdaA株に導入した。菌体を、カナマイシン25μg/mLおよびスペクチノマイシン50μg/mLを含有するCM-Dex寒天培地に塗布し、31.5℃にて培養した。生育してきた株を、それぞれ、Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7株およびEp2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7::Plac-serA*株と命名した。
Ep2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7株およびEp2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7::Plac-serA*株のグリセロールストック5μLを、それぞれ、カナマイシン25μg/mLおよびスペクチノマイシン50μg/mLを含有するCM-Dex w/o mameno培地(グルコース 5 g/L、Polypeptone 10 g/L、Yeast Extract 10 g/L、KH2PO4 1 g/L、MgSO4・7H2O 0.4 g/L、FeSO4・7H2O 0.01 g/L、MnSO4・7H2O 0.01 g/L、尿素 3 g/L、biotin 10μg/L、KOHでpH7.5に調整)0.5 mLを含む2.0 mL DEEP WELL PLATEに接種し、前培養として31.5℃で16時間振とう培養を行った。得られた前培養液0.1 mLを、カナマイシン25μg/mLおよびスペクチノマイシン50μg/mLを含有するバニリン酸生産培地(グルコース 75 g/L、MgSO4・7H2O 0.6 g/L、(NH4)2SO4 6.3 g/L、KH2PO4 2.5 g/L、FeSO4・7H2O 12.5 mg/L、MnSO4・4-5H2O 12.5 mg/L、Yeast Extract 2.5 g/L、Vitamin B1 150μg/L、Biotin 150μg/L、プロトカテク酸 6.9 g/L、KOHでpH7に調整後、CaCO3 30 g/L(180℃で3時間乾熱滅菌したもの)と混合)0.4 mLを含む2.0 mL DEEP WELL PLATEに接種し、31.5℃で24時間振とう培養を行った。
カラム:KINETEX 2.6μm XB-C18 150 x 30 mm (Phenomenex)
オーブン温度: 40 ℃
移動相(A):0.1% トリフルオロ酢酸
移動相(B):0.1% トリフルオロ酢酸/80% アセトニトリル
グラジエントプログラム (time, A %, B %):(0, 90, 10)→(3, 80, 20)
流速:1.5 mL/min
プラスミドpVK9::PcspB-omt202およびpVS7ベクター(WO2013/069634)を、電気パルス法にてEp2_0055株およびEp2_0055ΔsdaA株に導入した。菌体を、カナマイシン25μg/mLおよびスペクチノマイシン50μg/mLを含有するCM-Dex寒天培地に塗布し、31.5℃にて培養した。生育してきた株を同寒天培地にて純化し、それぞれ、Ep2_0055/pVK9::PcspB-omt202+pVS7株およびEp2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7株と命名した。
Ep2_0055/pVK9::PcspB-omt202+pVS7株およびEp2_0055ΔsdaA/pVK9::PcspB-omt202+pVS7株のグリセロールストック5μLを、それぞれ、カナマイシン25μg/mLおよびスペクチノマイシン50μg/mLを含有するCM-Dex w/o mameno培地0.5 mLを含む2.0 mL DEEP WELL PLATEに接種し、前培養として31.5℃で16時間振とう培養を行った。得られた前培養液0.1 mLを、カナマイシン25μg/mLおよびスペクチノマイシン50μg/mLを含有するバニリン酸生産培
地(グルコース 75 g/L、MgSO4・7H2O 0.6 g/L、(NH4)2SO4 6.3 g/L、KH2PO4 2.5 g/L、FeSO4・7H2O 12.5 mg/L、MnSO4・4-5H2O 12.5 mg/L、Yeast Extract 2.5 g/L、Vitamin B1
150μg/L、Biotin 150μg/L、プロトカテク酸 6.9 g/L、KOHでpH7に調整後、CaCO3 30 g/L(180℃で3時間乾熱滅菌したもの)と混合)0.4 mLを含む2.0 mL DEEP WELL PLATEに接種し、31.5℃で24時間振とう培養を行った。
カラム:KINETEX 2.6μm XB-C18 150 x 30 mm (Phenomenex)
オーブン温度: 40 ℃
移動相(A):0.1% トリフルオロ酢酸
移動相(B):0.1% トリフルオロ酢酸/80% アセトニトリル
グラジエントプログラム (time, A %, B %):(0, 90, 10)→(3, 80, 20)
流速:1.5 mL/min
配列番号1:Escherichia coli MG1655のaroG遺伝子の塩基配列
配列番号2:Escherichia coli MG1655のAroGタンパク質のアミノ酸配列
配列番号3:Escherichia coli MG1655のaroB遺伝子の塩基配列
配列番号4:Escherichia coli MG1655のAroBタンパク質のアミノ酸配列
配列番号5:Escherichia coli MG1655のaroD遺伝子の塩基配列
配列番号6:Escherichia coli MG1655のAroDタンパク質のアミノ酸配列
配列番号7:Bacillus thuringiensis BMB171のasbF遺伝子の塩基配列
配列番号8:Bacillus thuringiensis BMB171のAsbFタンパク質のアミノ酸配列
配列番号9:Escherichia coli MG1655のtyrR遺伝子の塩基配列
配列番号10:Escherichia coli MG1655のTyrRタンパク質のアミノ酸配列
配列番号11〜14:Homo sapiensのOMT遺伝子の転写バリアント1〜4の塩基配列
配列番号15:Homo sapiensのOMTアイソフォーム(MB-COMT)のアミノ酸配列
配列番号16:Homo sapiensのOMTアイソフォーム(S-COMT)のアミノ酸配列
配列番号17:Nocardia brasiliensisのACAR遺伝子の塩基配列
配列番号18:Nocardia brasiliensisのACARタンパク質のアミノ酸配列
配列番号19:Nocardia brasiliensisのACAR遺伝子の塩基配列
配列番号20:Nocardia brasiliensisのACARタンパク質のアミノ酸配列
配列番号21:Escherichia coli MG1655のentD遺伝子の塩基配列
配列番号22:Escherichia coli MG1655のEntDタンパク質のアミノ酸配列
配列番号23:Corynebacterium glutamicum ATCC 13032のPPT遺伝子の塩基配列
配列番号24:Corynebacterium glutamicum ATCC 13032のPPTタンパク質のアミノ酸配列配列番号25:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のvanK遺伝子の塩基配列配列番号26:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のVanKタンパク質のアミノ酸配列
配列番号27:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のpcaK遺伝子の塩基配列配列番号28:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のPcaKタンパク質のアミノ酸配列
配列番号29:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のvanA遺伝子の塩基配列配列番号30:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のVanAタンパク質のアミノ酸配列
配列番号31:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のvanB遺伝子の塩基配列配列番号32:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のVanBタンパク質のアミノ酸配列
配列番号33:Corynebacterium glutamicum ATCC 13032のpcaG遺伝子の塩基配列
配列番号34:Corynebacterium glutamicum ATCC 13032のPcaGタンパク質のアミノ酸配列
配列番号35:Corynebacterium glutamicum ATCC 13032のpcaH遺伝子の塩基配列
配列番号36:Corynebacterium glutamicum ATCC 13032のPcaHタンパク質のアミノ酸配列
配列番号37:Escherichia coli MG1655のyqhD遺伝子の塩基配列
配列番号38:Escherichia coli MG1655のYqhDタンパク質のアミノ酸配列
配列番号39:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のNCgl0324遺伝子の塩基配列
配列番号40:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のNCgl0324タンパク質のアミノ酸配列
配列番号41:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のNCgl0313遺伝子の塩基配列
配列番号42:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のNCgl0313タンパク質のアミノ酸配列
配列番号43:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のNCgl2709遺伝子の塩基配列
配列番号44:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のNCgl2709タンパク質のアミノ酸配列
配列番号45:Corynebacterium glutamicum ATCC 13032のNCgl0219遺伝子の塩基配列
配列番号46:Corynebacterium glutamicum ATCC 13032のNCgl0219タンパク質のアミノ酸配列
配列番号47:Corynebacterium glutamicum ATCC 13032のNCgl2382遺伝子の塩基配列
配列番号48:Corynebacterium glutamicum ATCC 13032のNCgl2382タンパク質のアミノ
酸配列
配列番号49:Escherichia coli MG1655のaroE遺伝子の塩基配列
配列番号50:Escherichia coli MG1655のAroEタンパク質のアミノ酸配列
配列番号51〜84:プライマー
配列番号85:P2プロモーター領域を含むDNA断片の塩基配列
配列番号86および87:プライマー
配列番号88:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のcysI遺伝子の塩基配列配列番号89:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のCysIタンパク質のアミノ酸配列
配列番号90:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のcysX遺伝子の塩基配列配列番号91:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のCysXタンパク質のアミノ酸配列
配列番号92:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のcysH遺伝子の塩基配列配列番号93:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のCysHタンパク質のアミノ酸配列
配列番号94:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のcysD遺伝子の塩基配列配列番号95:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のCysDタンパク質のアミノ酸配列
配列番号96:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のcysN遺伝子の塩基配列配列番号97:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のCysNタンパク質のアミノ酸配列
配列番号98:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のcysY遺伝子の塩基配列配列番号99:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のCysYタンパク質のアミノ酸配列
配列番号100:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のcysZ遺伝子の塩基配列
配列番号101:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のCysZタンパク質のアミノ酸配列
配列番号102:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のfpr2遺伝子の塩基配列
配列番号103:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のFpr2タンパク質のアミノ酸配列
配列番号104:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のcysR遺伝子の塩基配列
配列番号105:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のCysRタンパク質のアミノ酸配列
配列番号106:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のssuR遺伝子の塩基配列
配列番号107:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のSsuRタンパク質のアミノ酸配列
配列番号108:P2プロモーターの塩基配列
配列番号109:P4プロモーターの塩基配列
配列番号110:P8プロモーターの塩基配列
配列番号111:P3プロモーターの塩基配列
配列番号112〜115:プライマー
配列番号116:P8プロモーター領域を含むDNA断片の塩基配列
配列番号117および118:プライマー
配列番号119:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のNCgl2048遺伝子の塩基配列
配列番号120:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のNCgl2048タンパク質
のアミノ酸配列
配列番号121〜124:プライマー
配列番号125:P4プロモーター領域を含むDNA断片の塩基配列
配列番号126および127:プライマー
配列番号128:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のeno遺伝子の塩基配列
配列番号129:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のEnoタンパク質のアミノ酸配列
配列番号130:Niastella koreensisのOMT遺伝子の塩基配列
配列番号131:Niastella koreensisのOMTのアミノ酸配列
配列番号132:pVK9::PcspB-omt312の塩基配列
配列番号133:OMT312のアミノ酸配列
配列番号134:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のpurH遺伝子の塩基配列
配列番号135:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のPurHタンパク質のアミノ酸配列
配列番号136:purH(S37F)遺伝子(変異型purH遺伝子)の塩基配列
配列番号137:purH(S37F)タンパク質(変異型purHタンパク質)のアミノ酸配列
配列番号138〜143:プライマー
配列番号144:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のsahH遺伝子の塩基配列
配列番号145:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のSahHタンパク質のアミノ酸配列
配列番号146:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のsdaA遺伝子の塩基配列
配列番号147:Corynebacterium glutamicum 2256 (ATCC 13869)のSdaAタンパク質のアミノ酸配列
配列番号148〜157:プライマー
配列番号158:DNA断片の塩基配列
配列番号159および160:プライマー
配列番号161:Homo sapiensのS-COMTをコードするcDNAの塩基配列
配列番号162:COMT2遺伝子を含む合成されたDNA断片の塩基配列
配列番号163:pELACベクターの塩基配列
配列番号164〜172:プライマー
配列番号173:omt35遺伝子を含むDNA断片の塩基配列
配列番号174:omt35遺伝子(コドン最適化されたNiastella koreensisのOMT遺伝子)の塩基配列
配列番号175および176:プライマー
配列番号177:Brevibacterium flavum ATCC 14067のserA遺伝子の塩基配列
配列番号178:Brevibacterium flavum ATCC 14067のSerAタンパク質のアミノ酸配列
配列番号179:Brevibacterium flavum AJ13327のserA*遺伝子(変異型3-PGDH遺伝子)の塩基配列
配列番号180:Brevibacterium flavum AJ13327のSerA*タンパク質(変異型3-PGDH)のアミノ酸配列
配列番号181および182:プライマー
Claims (36)
- 目的物質の製造方法であって、
目的物質を生産する能力を有する微生物を利用して目的物質を製造すること
を含み、
前記微生物が、下記からなる群より選択される性質:
(A−i)AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼの活性が非改変株と比較して低下するように改変されている;
(A−ii)AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼをコードする遺伝子が前記微生物の目的物質を生産する能力を向上させる変異を有するように改変されている;および
(A−iii)それらの組み合わせ
を有し、
前記目的物質が、バニリン酸であり、
前記微生物が、コリネバクテリウム(Corynebacterium)属細菌である、方法。 - 前記製造が、炭素源を含有する培地で前記微生物を培養し、前記目的物質を該培地中に生成蓄積させることを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記製造が、前記微生物を利用して前記目的物質の前駆体を該目的物質に変換することを含む、請求項1に記載の方法。
- 前記利用が、前記前駆体を含有する培地で前記微生物を培養し、前記目的物質を該培地中に生成蓄積させることを含む、請求項3に記載の方法。
- 前記変換が、前記微生物の菌体を反応液中の前記前駆体に作用させ、前記目的物質を該反応液中に生成蓄積させることを含む、請求項3に記載の方法。
- 前記菌体が、前記微生物の培養液に含まれる菌体、該培養液から回収された菌体、該培養液の処理物に含まれる菌体、該回収された菌体の処理物に含まれる菌体、またはそれらの組み合わせである、請求項5に記載の方法。
- 前記前駆体が、プロトカテク酸である、請求項3〜6のいずれか1項に記載の方法。
- さらに、前記目的物質を回収することを含む、請求項1〜7のいずれか1項に記載の方法。
- 前記AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼが、purH遺伝子にコードされ、
前記purH遺伝子が、下記からなる群より選択されるタンパク質をコードする、請求項1〜8のいずれか1項に記載の方法:
(a)配列番号135に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(b)配列番号135に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼ活性を有するタンパク質;および
(c)配列番号135に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼ活性を有するタンパク質。 - 前記AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼの活性が、下記からなる群より選択される手段により低下した、請求項1〜9のいずれか1項に記載の方法:
(A)AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼをコードする遺伝子の発現を弱化させること;
(B)AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼをコードする遺伝子を破壊すること;
(C)AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼをコードする遺伝子を、前記微生物の目的物質を生産する能力を向上させる変異を有するように改変すること;および
(D)それらの組み合わせ。 - 前記弱化または破壊が、AICARホルミルトランスフェラーゼ/IMPシクロヒドロラーゼをコードする遺伝子の欠損を含む、請求項10に記載の方法。
- 前記微生物が、コリネバクテリウム・グルタミカム(Corynebacterium glutamicum)である、請求項1〜11のいずれか1項に記載の方法。
- 前記微生物が、さらに、前記目的物質の生合成に関与する酵素の活性が非改変株と比較して増大するように改変されている、請求項1〜12のいずれか1項に記載の方法。
- 前記酵素が、3−デオキシ−D−アラビノ−ヘプツロソン酸−7−リン酸シンターゼ、3−デヒドロキナ酸シンターゼ、3−デヒドロキナ酸デヒドラターゼ、3−デヒドロシキミ酸デヒドラターゼ、O−メチルトランスフェラーゼ、芳香族アルデヒドオキシドレダクターゼ、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項13に記載の方法。
- 前記微生物が、さらに、ホスホパンテテイニルトランスフェラーゼの活性が非改変株と比較して増大するように改変されている、請求項1〜14のいずれか1項に記載の方法。
- 前記微生物が、さらに、前記目的物質以外の物質の副生に関与する酵素の活性が非改変株と比較して低下するように改変されている、請求項1〜15のいずれか1項に記載の方法。
- 前記酵素が、バニリン酸デメチラーゼ、プロトカテク酸3,4−ジオキシゲナーゼ、アルコールデヒドロゲナーゼ、シキミ酸デヒドロゲナーゼ、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される、請求項16に記載の方法。
- 前記微生物が、さらに、L−システイン生合成酵素の活性が非改変株と比較して増大するように改変されている、請求項1〜17のいずれか1項に記載の方法。
- 前記L−システイン生合成酵素が、cysI遺伝子、cysX遺伝子、cysH遺伝子、cysD遺伝子、cysN遺伝子、cysY遺伝子、cysZ遺伝子、fpr2遺伝子、およびそれらの組み合わせからなる群より選択される遺伝子にコードされ、
これらの遺伝子が、以下の通りである、請求項18に記載の方法:
前記cysI遺伝子が、下記からなる群より選択されるタンパク質をコードする:
(1a)配列番号89に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(1b)配列番号89に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、硫黄の利用に関与する機能を有するタンパク質;および
(1c)配列番号89に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、硫黄の利用に関与する機能を有するタンパク質;
前記cysX遺伝子が、下記からなる群より選択されるタンパク質をコードする:
(2a)配列番号91に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(2b)配列番号91に示すアミノ酸配列において、1〜5個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、硫黄の利用に関与する機能を有するタンパク質;および
(2c)配列番号91に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、硫黄の利用に関与する機能を有するタンパク質;
前記cysH遺伝子が、下記からなる群より選択されるタンパク質をコードする:
(3a)配列番号93に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(3b)配列番号93に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、硫黄の利用に関与する機能を有するタンパク質;および
(3c)配列番号93に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、硫黄の利用に関与する機能を有するタンパク質;
前記cysD遺伝子が、下記からなる群より選択されるタンパク質をコードする:
(4a)配列番号95に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(4b)配列番号95に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、硫黄の利用に関与する機能を有するタンパク質;および
(4c)配列番号95に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、硫黄の利用に関与する機能を有するタンパク質;
前記cysN遺伝子が、下記からなる群より選択されるタンパク質をコードする:
(5a)配列番号97に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(5b)配列番号97に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、硫黄の利用に関与する機能を有するタンパク質;および
(5c)配列番号97に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、硫黄の利用に関与する機能を有するタンパク質;
前記cysY遺伝子が、下記からなる群より選択されるタンパク質をコードする:
(6a)配列番号99に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(6b)配列番号99に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、硫黄の利用に関与す
る機能を有するタンパク質;および
(6c)配列番号99に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、硫黄の利用に関与する機能を有するタンパク質;
前記cysZ遺伝子が、下記からなる群より選択されるタンパク質をコードする:
(7a)配列番号101に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(7b)配列番号101に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、硫黄の利用に関与する機能を有するタンパク質;および
(7c)配列番号101に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、硫黄の利用に関与する機能を有するタンパク質;
前記fpr2遺伝子が、下記からなる群より選択されるタンパク質をコードする:
(8a)配列番号103に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(8b)配列番号103に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、硫黄の利用に関与する機能を有するタンパク質;および
(8c)配列番号103に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、硫黄の利用に関与する機能を有するタンパク質。 - 前記L−システイン生合成酵素の活性が、cysR遺伝子にコードされるタンパク質の活性を増大させることにより、増大し、
前記cysR遺伝子が、下記からなる群より選択されるタンパク質をコードする、請求項18または19に記載の方法:
(9a)配列番号105に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(9b)配列番号105に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、L−システイン生合成酵素をコードする遺伝子の発現を正に制御する機能を有するタンパク質;および
(9c)配列番号105に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、L−システイン生合成酵素をコードする遺伝子の発現を正に制御する機能を有するタンパク質。 - 前記微生物が、さらに、NCgl2048遺伝子にコードされるタンパク質の活性が非改変株と比較して低下するように改変されており、
前記NCgl2048遺伝子が、下記からなる群より選択されるタンパク質をコードする、請求項1〜20のいずれか1項に記載の方法:
(a)配列番号120に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(b)配列番号120に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、微生物において活性を低下させることにより目的物質の生産が増大する性質を有するタンパク質;および
(c)配列番号120に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、微生物において活性を低下させることにより目的物質の生産が増大する性質を有するタンパク質。 - 前記微生物が、さらに、エノラーゼの活性が非改変株と比較して低下するように改変されている、請求項1〜21のいずれか1項に記載の方法。
- 前記微生物が、さらに、S−アデノシル−L−ホモシステインヒドロラーゼの活性が非改変株と比較して増大するように改変されている、請求項1〜22のいずれか1項に記載の方法。
- 前記変異が、配列番号135に示すアミノ酸配列の37位のセリン残基に相当するアミノ
酸残基が他のアミノ酸残基に置換される変異である、請求項1〜23のいずれか1項に記載の方法。 - 前記他のアミノ酸残基が、フェニルアラニン残基である、請求項24に記載の方法。
- 前記微生物が、さらに、下記からなる群より選択される性質を有し:
(B−i)D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼの活性が非改変株と比較して増大するように改変されている;
(B−ii)L−セリンによるフィードバック阻害に耐性のD−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を有するように改変されている;および
(B−iii)それらの組み合わせ;
前記L−セリンによるフィードバック阻害に耐性のD−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼが、配列番号178に示すアミノ酸配列の325位のグルタミン酸残基に相当するアミノ酸残基が他のアミノ酸残基に置換される変異を有する、請求項1〜25のいずれか1項に記載の方法。 - 前記D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼが、serA遺伝子にコードされ、
前記serA遺伝子が、下記からなる群より選択されるタンパク質をコードする、請求項26に記載の方法:
(a)配列番号178に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(b)配列番号178に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼ活性を有するタンパク質;および
(c)配列番号178に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼ活性を有するタンパク質。 - 前記D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼの活性が、下記からなる群より選択される手段により増大した、請求項26または27に記載の方法:
(A)D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼをコードする遺伝子の発現を増大させること;
(B)前記L−セリンによるフィードバック阻害に耐性のD−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を有するように前記微生物を改変すること;および
(C)それらの組み合わせ。 - 前記D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼをコードする遺伝子の発現が、該遺伝子のコピー数を増大させること、および/または該遺伝子の発現調節配列を改変することによって増大した、請求項28に記載の方法。
- 前記他のアミノ酸残基が、リジン残基である、請求項26〜29のいずれか1項に記載の方法。
- 前記L−セリンによるフィードバック阻害に耐性のD−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼが、下記からなる群より選択されるタンパク質である、請求項26〜30のいずれか1項に記載の方法:
(a)配列番号180に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(b)配列番号180に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼ活性を有し、L−セリンによるフィードバック阻害に耐性であるタンパク質;および
(c)配列番号180に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、D−3−ホスホグリセリン酸デヒドロゲナーゼ活性を有し、L−セリンによるフィードバック阻害に耐性であるタンパク質。 - 前記微生物が、さらに、L−セリンデアミナーゼの活性が非改変株と比較して低下するように改変されている、請求項1〜31のいずれか1項に記載の方法。
- 前記L−セリンデアミナーゼが、sdaA遺伝子にコードされ、
前記sdaA遺伝子が、下記からなる群より選択されるタンパク質をコードする、請求項32に記載の方法:
(a)配列番号147に示すアミノ酸配列を含むタンパク質;
(b)配列番号147に示すアミノ酸配列において、1〜10個のアミノ酸残基の置換、欠失、挿入、および/または付加を含むアミノ酸配列を含み、且つ、L−セリンデアミナーゼ活性を有するタンパク質;および
(c)配列番号147に示すアミノ酸配列に対して90%以上の同一性を有するアミノ酸配列を含み、且つ、L−セリンデアミナーゼ活性を有するタンパク質。 - 前記L−セリンデアミナーゼの活性が、L−セリンデアミナーゼをコードする遺伝子の発現を弱化させること、またはL−セリンデアミナーゼをコードする遺伝子を破壊することにより低下した、請求項32または33に記載の方法。
- 前記弱化または破壊が、L−セリンデアミナーゼをコードする遺伝子の欠損を含む、請求項34に記載の方法。
- バニリンの製造方法であって、
請求項1〜35のいずれか1項に記載の方法によりバニリン酸を製造すること;および
前記バニリン酸をバニリンに変換すること
を含む、方法。
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CN111676251A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-09-18 | 上海仁酶生物科技有限公司 | 一种咖啡酸和香兰素的制备方法及其反应催化剂的制备方法 |
WO2021177392A1 (ja) | 2020-03-04 | 2021-09-10 | 味の素株式会社 | 変異型トランスグルタミナーゼ |
CN111471630B (zh) * | 2020-06-11 | 2021-11-02 | 鲁东大学 | 一株棒杆菌Ytld-phe09及其应用 |
KR102377058B1 (ko) * | 2020-11-04 | 2022-03-22 | 경북대학교 산학협력단 | 니아스텔라 코리엔시스에서 유래한 카테콜 o-메틸 트렌스퍼라제 및 이의 변이체 |
KR20240086804A (ko) * | 2022-12-08 | 2024-06-19 | 씨제이제일제당 (주) | 퓨린 뉴클레오티드를 생산하는 미생물 및 이를 이용한 퓨린 뉴클레오티드의 생산방법 |
CN116463306B (zh) * | 2023-06-16 | 2023-08-22 | 北京量维生物科技研究院有限公司 | 莽草酸脱氢酶突变体及利用其生产莽草酸的方法 |
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JPS58192900A (ja) | 1982-05-04 | 1983-11-10 | Ajinomoto Co Inc | 複合プラスミド |
JPH01191686A (ja) | 1988-01-26 | 1989-08-01 | Mitsubishi Petrochem Co Ltd | 複合プラスミド |
FR2627508B1 (fr) | 1988-02-22 | 1990-10-05 | Eurolysine | Procede pour l'integration d'un gene choisi sur le chromosome d'une bacterie et bacterie obtenue par ledit procede |
JP2678995B2 (ja) | 1988-09-08 | 1997-11-19 | 三菱化学株式会社 | トリプトフアンシンターゼの製造法 |
US5185262A (en) | 1988-07-27 | 1993-02-09 | Mitsubishi Petrochemical Co., Ltd. | DNA fragment containing gene which encodes the function of stabilizing plasmid in host microorganism |
JPH02207791A (ja) | 1989-02-07 | 1990-08-17 | Ajinomoto Co Inc | 微生物の形質転換法 |
JP2973446B2 (ja) | 1990-01-11 | 1999-11-08 | 三菱化学株式会社 | 新規プラスミドベクター |
JPH07108228B2 (ja) | 1990-10-15 | 1995-11-22 | 味の素株式会社 | 温度感受性プラスミド |
JPH05244941A (ja) | 1992-03-03 | 1993-09-24 | Toyo Ink Mfg Co Ltd | Nadh依存性パラヒドロキシ安息香酸ヒドロキシラーゼ及びその製造方法 |
US5272073A (en) | 1992-06-30 | 1993-12-21 | Purdue Research Foundation | Biocatalytic synthesis of catechol from glucose |
DE4232468A1 (de) | 1992-09-28 | 1994-03-31 | Consortium Elektrochem Ind | Mikroorganismen für die Produktion von Tryptophan und Verfahren zu ihrer Herstellung |
JPH0775589A (ja) | 1993-09-08 | 1995-03-20 | Kawasaki Steel Corp | プロトカテキュ酸の製造方法 |
DE69631118T2 (de) | 1995-01-23 | 2004-07-01 | Novozymes A/S | Dna-integration durch transposition |
JPH0970291A (ja) | 1995-06-30 | 1997-03-18 | Ajinomoto Co Inc | 人工トランスポゾンを用いた遺伝子増幅方法 |
JP4168463B2 (ja) | 1996-12-05 | 2008-10-22 | 味の素株式会社 | L−リジンの製造法 |
JP4066543B2 (ja) | 1998-01-12 | 2008-03-26 | 味の素株式会社 | 発酵法によるl−セリンの製造法 |
AU756507B2 (en) | 1998-03-18 | 2003-01-16 | Ajinomoto Co., Inc. | L-glutamic acid-producing bacterium and method for producing L-glutamic acid |
AU6043399A (en) | 1998-09-18 | 2000-04-10 | Board Of Trustees Of Michigan State University | Synthesis of vanillin from a carbon source |
JP2000262288A (ja) | 1999-03-16 | 2000-09-26 | Ajinomoto Co Inc | コリネ型細菌の温度感受性プラスミド |
EP2388333A3 (en) | 2003-06-19 | 2012-04-04 | Evolva SA | A method of producing a low molecular weight organic compound in a cell |
KR101073370B1 (ko) | 2003-07-29 | 2011-10-17 | 아지노모토 가부시키가이샤 | 물질 생산에 영향을 미치는 대사 흐름을 결정하는 방법 |
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RU2418069C2 (ru) | 2006-09-29 | 2011-05-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) | Способ конструирования рекомбинантных бактерий, принадлежащих к роду pantoea, и способ продукции l-аминокислот с использованием бактерий, принадлежащих к роду pantoea |
JP2010207094A (ja) | 2009-03-06 | 2010-09-24 | Genaris Inc | プロトカテク酸の製造法 |
ES2719304T3 (es) | 2011-08-08 | 2019-07-09 | Int Flavors & Fragrances Inc | Composiciones y métodos para la biosíntesis de vainillina o beta-D-glucósido de vainillina |
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EP2628792A1 (de) * | 2012-02-17 | 2013-08-21 | Evonik Industries AG | Zelle mit verringerter ppGppase-Aktivität |
CA2888636C (en) | 2012-11-05 | 2022-11-29 | Evolva Sa | Vanillin synthase |
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WO2018079683A1 (en) | 2016-10-26 | 2018-05-03 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing objective substance |
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