CN108925985A - 一种酒香蓝莓口服制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物工程或生物发酵等技术领域，具体涉及一种酒香蓝莓口服制剂及其制备方法，以茅台酒微生物菌液和蓝莓为原料，制备成一种新的含有蓝莓中有效成分的口服制剂，该口服制剂是以蓝莓与茅台微生物菌液经过发酵制备而成，研究表明本发明蓝莓口服制剂具有很好的调节视力的作用。以茅台酒致香微生物发酵后蓝莓中的花青素活性更强，同时具有茅台酒沁人心脾的空杯香。
Description
技术领域
本发明属于生物工程或生物发酵等技术领域，具体涉及酒香蓝莓口服制剂及其制备方法。
背景技术
智能手机普及的移动互联网时代，工作离不开，休闲娱乐更少不了它们，到处都是手握手机、Pad埋头苦“看”的低头族。平板电脑甚至成了“懒惰父母”陪伴神器；在享受现代科技带来便利的同时，长时间面对电子荧幕，眼干、眼涩、眼疲劳等多种眼部问题可能会让人们的双眸失去神采！
最佳眼保健食品原料—蓝莓，蓝莓含丰富的花青素，具有活化视网膜的功效，可以强化视力，防止眼球疲劳，蓝莓已被联合国粮农组织推荐为“五大健康水果”之首，蓝莓平均含量高达每百克鲜果含168～198mg的花青素，它对人体的生物有效性是百分之百，服用后二十分钟就能在血液中检测到。与其它的抗氧化剂不同的是，花青素能通过血脑屏障，直接保护大脑和神经系统。蓝莓中含有一种叫紫檀芪的自然化合物，是一种抗氧化剂和抗炎剂。美国教育部从2000年开始，就将蓝莓列为中小学生保护眼睛的营养配餐食品，美国人类营养中心建议公民每天要补充花青素6mg。
据了解，我国目前有3亿多中小学生以及上亿“网民”和电脑使用者。从理论上分析，护目保健产品在国内应有巨大的市场增长空间。目前，世界蓝莓的种植生产已向我国转移，但对于蓝莓的加工能力和加工质量都还落后于世界先进水平，主要还以鲜果销售为主，不能体现蓝莓的高附加值，难以实现较为可观的经济效益。
茅台的空杯香让人唇齿留香，一直以来，香味都是人类的一种高档追求和享用。好比女士用的香水，高级的会让人感到淡雅微妙、幽香迷人，若有若无。“风来隔壁千家醉，雨后开瓶十里香”的酱香酒，即使酒尽杯空，举杯闻吸，仍能鲜明地体会到一股类似兰香素等复合的丝丝幽香飘逸其间，并可长达数天。空杯香比酒液香更幽雅迷人，给人一种无法言喻的愉悦感，堪称国色天香。空杯香是一类沸点较高或挥发性较小的组分，以酸性物质为主，其中以十六酸乙酯、油酸乙酯、亚油酸乙酯为主。
酱香来源于耐高温细菌的酶催化反应，通过实验，发现茅台致香微生物是茅台香气如此诱人的“中坚力量”，其代谢的醇类和酯类物质例如3-羟基丁酮、苯乙醇、13-甲基-十四酸乙酯、十六酸乙酯是茅台中重要的风味物质；将其应用于生产, 能明显赋予白酒典型特征香-空杯留香,且更突出和持久,取得了较好的应用效果, 具有很好的推广应用前景。
发明内容
基于上述原因，申请人经过多年的研究，以茅台酒微生物菌液和蓝莓为原料，制备成一种新的含有蓝莓中有效成分的口服制剂，该口服制剂是以蓝莓与茅台微生物菌液经过发酵制备而成，研究表明本发明蓝莓口服制剂具有很好的调节视力的作用。
以茅台酒致香微生物发酵后蓝莓中的花青素活性更强，同时具有茅台酒沁入心脾的空杯香。
蓝莓直接采集就食用，并没有发挥花青素最重要的效果，发酵过的蓝莓花青素更容易被吸收，易于跟人体内的自由基集合，加快了新陈代谢从而排出体外，具有明显的改善视疲劳作用；
而且使发酵的蓝莓又充盈着国酒馥郁香味，令人迷醉，细品有酒香，慢慢到最后转化成蓝莓果香，当人们长时间看电视或长期面对电脑、荧屏时，一片酒香蓝莓片入口，既是享受，又能改善眼睛干涩、疲劳等症状，是互联网时代人们的护眼佳品。
本发明的口服制剂的制备方法：将蓝莓在密闭条件下粉碎后，采用果胶酶酶解提取，提取液与一定比例茅台微生物菌液混合发酵，发酵后加入β-葡萄糖苷酶，超声提取浓缩后得到制备口服制剂的原料。
本发明茅台微生物菌液的制备方法为：取茅台酒高温大曲曲粉培养基培养得到菌株，菌株培养后得到种子液，最为重要是将种子液装有已灭菌的麸皮和蓝莓混合浸出液体培养基中得到茅台酒致香微生物，茅台微生物继续发酵得到茅台酒致香微生物菌液。
本发明通过下述技术方案实现的。
一种酒香蓝莓的口服制剂，该酒香蓝莓口服制剂是由原料茅台酒微生物菌液和蓝莓制备而成。
该口服制剂的制备方法为：
(1)将蓝莓清洗后，在密封条件下将蓝莓用组织捣碎机打浆并经高压均质机均质后，调整料液比为1：5-12g/mL；
(2)加入0.067％-0.250％果胶酶，在温度37℃-60℃酶解20min--60min；
(3)将蓝莓酶解液过滤，得到蓝莓提取液；
(4)将茅台酒致香微生物菌液与蓝莓提取液按照1:1-5比例混合，于37℃-55℃、50-150r/min条件下，发酵6-24h；
(5)将发酵液添加8-24U/Lβ-葡萄糖苷酶水溶液，于20-45℃、超声波功率 90W-250W条件下超声逆流提取30-60min，过滤、浓缩，得到酒香蓝莓浓缩液；
(6)将酒香蓝莓浓缩液干燥，制粒；颗粒直接包装为口服颗粒剂；或者颗粒装入胶囊，为口服胶囊剂；颗粒直接压片，得到片剂。
茅台酒致香微生物菌液由以下方法制备：
(1)取茅台酒高温大曲曲粉加入装有玻璃珠的无菌水或无菌生理盐水中，在 37℃、200rpm摇床上振荡2小时；梯度稀释涂布平板，于37℃培养48小时；从平板上挑选生长较好、性状不同菌落分别接种于肉汤琼脂斜面培养基，作为筛选用菌株；其中：肉汤琼脂斜面培养基：葡萄糖5g，蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，琼脂20g，水1000mL，pH7.0；
(2)将上面得到的菌株分别接种营养肉汤培养基中，37℃培养24小时，得到种子液；
营养肉汤液态培养基：葡萄糖5g，蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，水 1000mL，pH7.0；
(3)将种子液以体积百分比为3-5％的接种量接种到装有已灭菌的麸皮和蓝莓混合浸出液体培养基的250mL摇瓶中，37℃静置培养2-6d，得到茅台酒致香微生物；麸皮和蓝莓混合浸出液体培养基：麸皮和蓝莓分别100g，捣碎加水 800mL，于100℃蒸煮10min，过滤取上清液，121℃灭菌20min；
(4)将茅台酒致香微生物活化后按照5-10％的接种量接入发酵培养基中，在 37℃-55℃、100-150rpm发酵1-6d，得到茅台酒致香微生物菌液；其中发酵培养基为：麸皮浸出汁和/或黑豆提取液700-950ml/L、蔗糖和/或金樱子提取物100-200g/L、氨基酸0.1-0.5g/L，121℃灭菌20min；氨基酸指苯丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸中的一种或几种。
具体实施例
以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此。
本说明书实施例所述的内容仅仅是对发明构思的实现形式的列举，本发明的保护范围不应当被视为仅限于实施例所陈述的具体形式，本发明的保护范围也及于本领域技术人员根据本发明构思所能够想到的等同技术手段。尽管以下本发明的实施方案进行了描述，但本发明并不局限于上述的具体实施方案和应用领域，下述的具体实施方案仅仅是示意性的、指导性的，而不是限制性的。本领域的普通技术人员在本说明书的启示下和在不脱离本发明权利要求所保护的范围的情况下，还可以做出很多种的形式，这些均属于本发明保护之列。
本发明下述试验，是在多次创造性试验的基础上，以本发明所要保护的技术方案为基础，总结的研发人员的结论性试验。
制备实施例
实施例1
茅台酒致香微生物菌液由以下方法制备：
(1)取茅台酒高温大曲曲粉加入装有玻璃珠的无菌水中，在37℃、200rpm摇床上振荡2小时；梯度稀释涂布平板，于37℃培养48小时；从平板上挑选生长较好、性状不同菌落分别接种于肉汤琼脂斜面培养基，作为筛选用菌株；其中：肉汤琼脂斜面培养基：葡萄糖5g，蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，琼脂20g，水1000mL，pH7.0；
(2)将上面得到的菌株分别接种营养肉汤培养基中，37℃培养24小时，得到种子液；
营养肉汤液态培养基：葡萄糖5g，蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，水1000mL，pH7.0；
(3)将种子液以体积百分比为3％的接种量接种到装有已灭菌的麸皮和蓝莓混合浸出液体培养基的250mL摇瓶中，37℃静置培养6d，得到茅台酒致香微生物；麸皮和蓝莓混合浸出液体培养基：麸皮和蓝莓分别100g，捣碎加水800mL，于100℃蒸煮10min，过滤取上清液，121℃灭菌20min；
(4)将茅台酒致香微生物活化后按照5％的接种量接入发酵培养基中，在37℃、100rpm发酵6d，得到茅台酒致香微生物菌液；其中发酵培养基为：麸皮浸出汁 700ml/L、蔗糖100g/L、苯丙氨酸水溶液0.1g/L，121℃灭菌20min；
实施例2
茅台酒致香微生物菌液由以下方法制备：
(1)取茅台酒高温大曲曲粉加入装有玻璃珠的无菌生理盐水中，在37℃、 200rpm摇床上振荡2小时；梯度稀释涂布平板，于37℃培养48小时；从平板上挑选生长较好、性状不同菌落分别接种于肉汤琼脂斜面培养基，作为筛选用菌株；其中：肉汤琼脂斜面培养基：葡萄糖5g，蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠 5g，琼脂20g，水1000mL，pH7.0；
(2)将上面得到的筛选用菌株分别接种营养肉汤培养基中，37℃培养24小时，得到种子液；
营养肉汤液态培养基：葡萄糖5g，蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，水 1000mL，pH7.0；
(3)将种子液以体积百分比为5％的接种量接种到装有已灭菌的麸皮和蓝莓混合浸出液体培养基的250mL摇瓶中，37℃静置培养2d，得到茅台酒致香微生物；麸皮和蓝莓混合浸出液体培养基：麸皮和蓝莓分别100g，捣碎加水800mL，于100℃蒸煮10min，过滤取上清液，121℃灭菌20min；
(4)将茅台酒致香微生物活化后按照10％的接种量接入发酵培养基中，在 55℃、150rpm发酵1d，得到茅台酒致香微生物菌液；其中发酵培养基为：黑豆提取液950ml/L、金樱子提取物200g/L、缬氨酸水溶液0.25g/L、甘氨酸水溶液0.25g/L， 121℃灭菌20min。
实施例3
(1)取茅台酒高温大曲曲粉加入装有玻璃珠的无菌生理盐水中，在37℃、 200rpm摇床上振荡2小时；梯度稀释涂布平板，于37℃培养48小时；从平板上挑选生长较好、性状不同菌落分别接种于肉汤琼脂斜面培养基，作为筛选用菌株；其中：肉汤琼脂斜面培养基：葡萄糖5g，蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠 5g，琼脂20g，水1000mL，pH7.0；
(2)将上面得到的菌株分别接种营养肉汤培养基中，37℃培养24小时，得到种子液；
营养肉汤液态培养基：葡萄糖5g，蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，水1000mL，pH7.0；
(3)将种子液以体积百分比为4％的接种量接种到装有已灭菌的麸皮和蓝莓混合浸出液体培养基的250mL摇瓶中，37℃静置培养4d，得到茅台酒致香微生物；麸皮和蓝莓混合浸出液体培养基：麸皮和蓝莓分别100g，捣碎加水800mL，于100℃蒸煮10min，过滤取上清液，121℃灭菌20min；
(4)将茅台酒致香微生物活化后按照7.5％的接种量接入发酵培养基中，在 345℃、120rpm发酵3d，得到茅台酒致香微生物菌液；其中发酵培养基为：麸皮浸出汁850ml/L、蔗糖150g/L、苯丙氨酸水溶液0.1g/L、缬氨酸水溶液0.1g/L、甘氨酸水溶液0.1g/L，121℃灭菌20min；
实施例4
(1)将蓝莓清洗后，在密封条件下将蓝莓用组织捣碎机打浆并经高压均质机均质后，调整料液比为1：5g/mL；
(2)加入0.067％％果胶酶，在温度37℃酶解60min；
(3)将蓝莓酶解液过滤，得到蓝莓提取液；
(4)将实施例3的茅台酒致香微生物菌液与蓝莓提取液按照重量比1:1比例混合，于37℃、50r/min条件下，发酵24h；
(5)将发酵液添加8U/L的β-葡萄糖苷酶水溶液，于45℃、超声波功率90W 条件下超声逆流提取60min，过滤、浓缩，得到酒香蓝莓浓缩液；
(6)将酒香蓝莓浓缩液干燥，制粒；颗粒直接包装为口服颗粒剂；或者颗粒装入胶囊，为口服胶囊剂；颗粒直接压片，得到片剂。
实施例5
((1)将蓝莓清洗后，在密封条件下将蓝莓用组织捣碎机打浆并经高压均质机均质后，调整料液比为1：12g/mL；
(2)加入0.250％果胶酶，在温度60℃酶解20minmin；
(3)将蓝莓酶解液过滤，得到蓝莓提取液；
(4)将实施例3茅台酒致香微生物菌液与蓝莓提取液按照重量比1:5比例混合，于55℃、150r/min条件下，发酵6h；
(5)将发酵液添加24U/L的β-葡萄糖苷酶水溶液，于45℃、超声波功率250W 条件下超声逆流提取30min，过滤、浓缩，得到酒香蓝莓浓缩液；
(6)将酒香蓝莓浓缩液干燥，制粒；颗粒直接包装为口服颗粒剂；或者颗粒装入胶囊，为口服胶囊剂；颗粒直接压片，得到片剂。
实施例6
(1)将蓝莓清洗后，在密封条件下将蓝莓用组织捣碎机打浆并经高压均质机均质后，调整料液比为1：9g/mL；
(2)加入0.15％果胶酶，在温度45℃酶解45min；
(3)将蓝莓酶解液过滤，得到蓝莓提取液；
(4)将实施例3茅台酒致香微生物菌液与蓝莓提取液按照重量比1:2.5比例混合，于45℃、100r/min条件下，发酵16h；
(5)将发酵液添加16U/L的β-葡萄糖苷酶水溶液，于35℃、超声波功率200W 条件下超声逆流提取40min，过滤、浓缩，得到酒香蓝莓浓缩液；
(6)将酒香蓝莓浓缩液干燥，制粒；颗粒直接包装为口服颗粒剂；或者颗粒装入胶囊，为口服胶囊剂；颗粒直接压片，得到片剂。
对比例1：
蓝莓提取物：
(1)将蓝莓清洗后，在密封条件下将蓝莓用组织捣碎机打浆并经高压均质机均质后，调整料液比为1：9g/mL；
(2)加入15％果胶酶，在温度45℃酶解45min；
(3)将蓝莓酶解液过滤，得到蓝莓提取液；
(4)40℃真空浓缩，40℃真空干燥，得到蓝莓提取物。
对比例2
(1)将蓝莓清洗后，在密封条件下将蓝莓用组织捣碎机打浆并经高压均质机均质后，调整料液比为1：9g/mL；
(2)加入0.15％果胶酶，在温度45℃酶解45min；
(3)将蓝莓酶解液过滤，得到蓝莓提取液；
(4)将市售茅台酒致香微生物与蓝莓提取液按照重量比1:2.5比例混合，于 45℃、100r/min条件下，发酵16h；
(4)将发酵液添加16U/L的β-葡萄糖苷酶水溶液，于35℃、超声波功率200W 条件下超声逆流提取40min，过滤、浓缩，得到酒香蓝莓浓缩液；
(5)将酒香蓝莓浓缩液干燥，制粒；颗粒直接包装为口服颗粒剂；或者颗粒装入胶囊，为口服胶囊剂；颗粒直接压片，得到片剂。
市售茅台酒致香微生物购自贵州农业科学信息研究所，购买日期2018年3月 23日。
调节近视试验
试验方法：wistar大鼠，22天大鼠提前断乳后，腹腔注射3mo/L半乳糖溶液 20mg/kg，注射3天后，大鼠成为近视模型，随机分组，分为模型组、实施例4-6 组、对比例组，灌胃给药，每天2次，不同试验组给药量为1g蓝莓/kg，模型组给予等量的生理盐水，给药1个月，测定不同大鼠晶状休Ca2+含量。
试验结果：见表1。
表1不同组别Ca2+含量比较
注：与模型组比较**P<0.01，*P<0.05；与对比例2组比较#P<0.05。
试验结论：在给药量相同的前提下，采用不同茅台酒致香微生物制备蓝莓制剂，从数据上分析本发明的酒香蓝莓制剂具有更好的保护视力作用(P<0.05)，进一步说明，本发明茅台酒致香微生物与蓝莓组合后，能够更进一步促进蓝莓有效成分的产生以及发挥药效作用。
Claims (3)
1.一种酒香蓝莓的口服制剂，其特征在于：该酒香蓝莓口服制剂是由原料茅台酒微生物菌液和蓝莓制备而成。
2.根据权利要求1所述的一种酒香蓝莓口服制剂，其特征在于：该口服制剂的制备方法为：
(1)将蓝莓清洗后，在密封条件下将蓝莓用组织捣碎机打浆并经高压均质机均质后，调整料液比为1：5-12g/mL；
(2)加入0.067％-0.250％果胶酶，在温度37℃-60℃酶解20min--60min；
(3)将蓝莓酶解液过滤，得到蓝莓提取液；
(4)将茅台酒致香微生物菌液与蓝莓提取液按照1:1-5比例混合，于37℃-55℃、50-150r/min条件下，发酵6-24h；
(5)将发酵液添加8-24U/Lβ-葡萄糖苷酶水溶液，于20-45℃、超声波功率90W-250W条件下超声逆流提取30-60min，过滤、浓缩，得到酒香蓝莓浓缩液；
(6)将酒香蓝莓浓缩液干燥，制粒；颗粒直接包装为口服颗粒剂；或者颗粒装入胶囊，为口服胶囊剂；颗粒直接压片，得到片剂。
3.根据权利要求1或2所述的一种酒香蓝莓的口服制剂的制备方法，其特征在于茅台酒致香微生物菌液由以下方法制备：
(1)取茅台酒高温大曲曲粉加入装有玻璃珠的无菌水或无菌生理盐水中，在37℃、200rpm摇床上振荡2小时；梯度稀释涂布平板，于37℃培养48小时；从平板上挑选生长较好、性状不同菌落分别接种于肉汤琼脂斜面培养基，作为筛选用菌株；其中：肉汤琼脂斜面培养基：葡萄糖5g，蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，琼脂20g，水1000mL，pH7.0；
(2)将上面得到的菌株分别接种营养肉汤培养基中，37℃培养24小时，得到种子液；
营养肉汤液态培养基：葡萄糖5g，蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠5g，水1000mL，pH7.0；
(3)将种子液以体积百分比为3-5％的接种量接种到装有已灭菌的麸皮和蓝莓混合浸出液体培养基的250mL摇瓶中，37℃静置培养2-6d，得到茅台酒致香微生物；麸皮和蓝莓混合浸出液体培养基：麸皮和蓝莓分别100g，捣碎加水800mL，于100℃蒸煮10min，过滤取上清液，121℃灭菌20min；
(4)将茅台酒致香微生物活化后按照5-10％的接种量接入发酵培养基中，在37℃-55℃、100-150rpm发酵1-6d，得到茅台酒致香微生物菌液；其中发酵培养基为：麸皮浸出汁和/或黑豆提取液700-950ml/L、蔗糖和/或金樱子提取物100-200g/L、氨基酸0.1-0.5g/L，121℃灭菌20min；氨基酸指苯丙氨酸、缬氨酸、甘氨酸中的一种或几种。
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