CN108918236B - 一种烟草主茎徒手切片快速双重染色液 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及植物徒手切片的染色技术，具体涉及为一种烟草主茎徒手切片快速双重染色液及染色方法；发明的目的是提供一种快捷的染色方法，提高烟草主茎徒手切片染色的效率；采用的技术方案为：一种烟草主茎徒手切片快速双重染色方法，包括以下步骤：1)准备快速双重染色液和洗脱液；2)将烟草主茎的徒手切片样品置于载玻片上，用吸管吸去多余蒸馏水；3)在样品表面滴1‑2滴快速双重染色液，等待一分钟左右，至样品的木质部出现肉眼可见的红色；4)用吸管吸去快速双重染色液，在样品表面滴1‑2滴洗脱液，进行脱色至样品变成浅绿色，样品木质部变成紫色，即可进行镜检拍照；按照本发明的方法1分钟左右即可完成烟草主茎徒手切片的双重染色。
Description
技术领域
本发明涉及植物徒手切片的染色技术，具体涉及为一种烟草主茎徒手切片快速双重染色液及染色方法。
背景技术
徒手切片双重染色法是观察植物各解剖结构的常用方法。番红-苯胺蓝及番红-固绿双重染色法染色效果较好，但是这两种双重染色法的两种染料需分步完成染色，洗脱步骤繁琐，耗时长，完成一次染色、脱色，需要约30分钟，乃至更长的时间。其他徒手切片染色液，如间苯三酚染色快速，能染色木质化细胞，但茎中其他结构细胞不被染色；固绿染色快速，茎中细胞结构轮廓清晰，但木质化导管与非木质化导管区别不明显。因此，本领域尚无将该两种染色效果互补的染色液结合进行双重染色的技术。
发明内容
发明的目的是提供一种快速、简便、低成本、成功率高的染色方法，提高烟草主茎切片染色的效率，简化染色步骤，降低染色过程对实验条件的要求。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种烟草主茎徒手切片快速双重染色液，由间苯三酚0.3-0.5g，固绿0.036-0.040g，浓盐酸50mL，蒸馏水50mL配制而成。
作为优选的，所述烟草主茎徒手切片快速双重染色液，由间苯三酚0.375g，固绿0.0375g，浓盐酸50mL，蒸馏水50mL配制而成。
一种烟草主茎徒手切片快速双重染色方法，包括以下步骤：
1)准备快速双重染色液和洗脱液；其中，快速双重染色液由间苯三酚0.3-0.5g、固绿0.036-0.040g、浓盐酸50mL、蒸馏水50mL配制而成；洗脱液为pH值0.25的盐酸溶液；
2)将烟草主茎的徒手切片样品置于载玻片上，用吸管吸去多余蒸馏水；
3)在样品表面滴1-2滴快速双重染色液，等待50-90s，至样品的木质部出现肉眼可见的红色；
4)用吸管吸去快速双重染色液，在样品表面滴1-2滴洗脱液，进行脱色至至样品变成浅绿色，样品木质部变成紫色，即可进行镜检拍照。
进一步的，若步骤4)滴加洗脱液后发现样品木质部的染色变浅，则吸去洗脱液，并重复步骤3)和4)重新进行染色和脱色。
进一步的，若按照步骤4)操作脱色一次后，发现固绿染色较深，则再重复至少一次步骤4)。
本发明中，当按照步骤4)滴加洗脱液操作脱色一次后，是否需要重复染色-脱色过程，或者重复脱色过程，为实验操作员主观判断，目的是能够获得清晰的镜检照片。当操作员认为染色变浅或染色较深时，可以采用相应的方案解决问题。
本发明所述的烟草主茎徒手切片快速双重染色方法，同时适用于烟草主茎徒手横切面切片和纵切面切片的染色。染色后，皮层薄壁细胞、韧皮部细胞(木质化的韧皮纤维除外)、形成层细胞细胞、未木质化的木质部细胞、髓细胞被染成绿色，木质化的韧皮纤维、木质部木质化的细胞被染成紫色。
本发明具有如下有益效果：
1、采用固绿-间苯三酚进行双重染色，首先在强酸条件下实现间苯三酚显色，然后通过脱色液调节pH值，实现固绿显色，两种染色剂同步使用，脱色过程即固绿显色过程，只需一分钟左右即可完成染色过程，只需1步洗脱即可完成双重显色。
2、本发明通过染色液和洗脱液的配合使用，既可以保证间苯三酚着色效果不褪色，又使固绿染色效果显现，实现了两种常规单独染色液的双重染色。
3、染色后，皮层薄壁细胞、韧皮部细胞(木质化的韧皮纤维除外)、形成层细胞细胞、未木质化的木质部细胞、髓细胞被染成绿色，木质化的韧皮纤维、木质部木质化的细胞被染成紫色。
具体实施方式
下面的实施例可以使本领域技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
一种烟草主茎徒手切片快速双重染色方法，包括以下步骤：
1)准备快速双重染色液和洗脱液；其中，快速双重染色液由间苯三酚0.5g、固绿0.0375g、浓盐酸50mL、蒸馏水50mL配制而成；洗脱液为pH值0.25的盐酸溶液；
2)左手握住需要进行切片的烟株主茎，右手持双面刀片，蘸取少量蒸馏水，刀口向内，以均匀的动作做横切面切片；将切好的切片置于装有蒸馏水的平皿内；
3)用镊子或者毛笔将样品从蒸馏水中捞出置于载玻片上，用吸管吸去多余蒸馏水；
3)在样品表面滴1-2滴快速双重染色液，等待约60s，至样品的木质部出现肉眼可见的红色；
4)用吸管吸去快速双重染色液，在样品表面滴1-2滴洗脱液，进行脱色至样品变成浅绿色，样品木质部变成紫色，即可进行镜检拍照。
实施例2
一种烟草主茎徒手切片快速双重染色方法，包括以下步骤：
1)准备快速双重染色液和洗脱液；其中，快速双重染色液由间苯三酚0.37g、固绿0.036g、浓盐酸50mL、蒸馏水50mL配制而成；洗脱液为pH值0.25的盐酸溶液；
2)左手握住需要进行切片的烟株主茎，右手持双面刀片，蘸取少量蒸馏水，刀口向内，以均匀的动作做横切面切片；.将切好的切片置于装有蒸馏水的平皿内；
3)用镊子或者毛笔将样品从蒸馏水中捞出置于载玻片上，用吸管吸去多余蒸馏水；
3)在样品表面滴1-2滴快速双重染色液，等待约90s，至样品的木质部出现肉眼可见的红色；
4)用吸管吸去快速双重染色液，在样品表面滴1-2滴洗脱液，进行脱色至样品变成浅绿色，样品木质部变成紫色，即可进行镜检拍照。
实施例3
一种烟草主茎徒手切片快速双重染色方法，包括以下步骤：
1)准备快速双重染色液和洗脱液；其中，快速双重染色液由间苯三酚0.375g、固绿0.0375g、浓盐酸50mL、蒸馏水50mL配制而成；洗脱液为pH值0.25的盐酸溶液；
2)左手握住需要进行切片的烟株主茎，右手持双面刀片，蘸取少量蒸馏水，刀口向内，以均匀的动作做纵切面切片；.将切好的切片置于装有蒸馏水的平皿内；
3)用镊子或者毛笔将样品从蒸馏水中捞出置于载玻片上，用吸管吸去多余蒸馏水；
3)在样品表面滴1-2滴快速双重染色液，等待约60s，至样品的木质部出现肉眼可见的红色；
4)用吸管吸去快速双重染色液，在样品表面滴1-2滴洗脱液，进行脱色至样品变成浅绿色，样品木质部变成紫色，即可进行镜检拍照。
实施例4
一种烟草主茎徒手切片快速双重染色方法，包括以下步骤：
1)准备快速双重染色液和洗脱液；其中，快速双重染色液由间苯三酚0.5g、固绿0.04g、浓盐酸50mL、蒸馏水50mL配制而成；洗脱液为pH值0.25的盐酸溶液；
2)左手握住需要进行切片的烟株主茎，右手持双面刀片，蘸取少量蒸馏水，刀口向内，以均匀的动作做纵切面切片；.将切好的切片置于装有蒸馏水的平皿内；
3)用镊子或者毛笔将样品从蒸馏水中捞出置于载玻片上，用吸管吸去多余蒸馏水；
3)在样品表面滴1-2滴快速双重染色液，等待约50s，至样品的木质部出现肉眼可见的红色；
4)用吸管吸去快速双重染色液，在样品表面滴1-2滴洗脱液，进行脱色至样品变成浅绿色，样品木质部变成紫色，即可进行镜检拍照。
本领域技术人员应理解，以上实施例仅是示例性实施例，在不背离本发明的精神和范围的情况下，可以进行多种变化、替换以及改变。
Claims (4)
1.一种烟草主茎徒手切片快速双重染色方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)准备快速双重染色液和洗脱液；其中，快速双重染色液由间苯三酚0.3-0.5g、固绿0.036-0.040g、浓盐酸50mL、蒸馏水50mL配制而成；洗脱液为pH值0.25的盐酸溶液；
2)将烟草主茎的徒手切片样品置于载玻片上，用吸管吸去多余蒸馏水；
3)在样品表面滴1-2滴快速双重染色液，等待50-90s，至样品的木质部出现肉眼可见的红色；
4)用吸管吸去快速双重染色液，在样品表面滴1-2滴洗脱液，进行脱色至样品变成浅绿色，样品木质部变成紫色，即可进行镜检拍照。
2.根据权利要求1所述的烟草主茎徒手切片快速双重染色方法，其特征在于，若步骤4)滴加洗脱液后发现样品木质部的染色变浅，则吸去洗脱液，并重复步骤3)和4)重新进行染色和脱色。
3.根据权利要求1所述的烟草主茎徒手切片快速双重染色方法，其特征在于，若按照步骤4)操作脱色一次后，发现固绿染色较深，则再重复至少一次步骤4)。
4.根据权利要求1-3任一所述的烟草主茎徒手切片快速双重染色方法，其特征在于，适用于烟草主茎徒手横切面切片和纵切面切片的染色。
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