CN105738182A - 一种用于植物显微结构观察的荧光染色方法 - Google Patents
一种用于植物显微结构观察的荧光染色方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及用于植物显微结构观察的荧光染色方法，可有效解决快速制片，对植物显微结构的观察问题，方法是，将植物材料切制成长宽各1?5mm的小块或小段，将植物材料置于由pH8.0的PBS缓冲液配置成的质量浓度4%的多聚甲醛或甲醇中固定20?40min，用pH8.0的PBS缓冲液漂洗10?20min，由DMSO、Triton X?100和荧光增白剂220制成染色液，在室温下染色10?60min，然后用PBS缓冲液漂洗10?15min，滴加DAPI溶液对细胞中核酸进行荧光染色，蒸馏水漂洗，再滴加甘油，加盖玻片，用激光共聚焦显微镜观察照相，本发明方法简单，无需切片机，制片时间短，可以观察到植物的三维构造，适用于各种植物的细胞或组织的观察，清晰、准确，成本低，效果好。
Description
技术领域
本发明涉及植物组织观察，特别是一种用于植物显微结构观察的荧光染色方法。
背景技术
显微技术是研究植物科学的重要手段，目前对植物细胞和组织显微结构的研究仍然以光学显微镜为主，使用的主要是石蜡切片和超薄切片技术，但是制片方法复杂，需要时间长，不能快速制片，并且对实验的操作要求较高，需要相应的切片机和其他设备，最终得到的是二维图像，限制了广泛使用。
激光共聚焦显微镜能够对较厚、半透明甚至不透明的植物材料进行观察，能较为灵敏检测到荧光物质在细胞和组织中的分布，对细胞和组织进行无损伤的系列光学切片，得到各个层面的信息，经过电脑处理后可以得到其三维立体结构图像。植物整体装片和染色法可以在不破坏整体结构的条件下对样品进行处理，经过适当的荧光染料染色，结合激光共聚焦显微技术成为一种对植物材料进行快速制样与观察的手段。它不仅大大缩短样品准备所需时间，而且可以获得三维图象，在植物学研究中得到日益广泛的应用，但荧光染色如何应用于植物显微结构的观察上至今未见有行之有效方法的公开报导。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种用于植物显微结构观察的荧光染色方法，可有效解决快速制片，对植物显微结构的观察问题。
本发明解决的技术方案是，由以下步骤实现：
1.取材
取植物材料，切制成长宽各1-5mm的小块或小段；
所述的植物材料为花粉粒，胚囊、花柱、胚珠、叶片、根或茎；
2.固定
室温下，将植物材料置于由pH8.0的PBS缓冲液配置成的质量浓度4%的多聚甲醛或甲醇中固定20-40min；
3.第一次漂洗
从固定液中取出植物材料，用pH8.0的PBS缓冲液漂洗10-20min；
4.染色
将漂洗后的植物材料滴加由质量浓度1-3%的DMSO 0.02-0.1ml（1-5滴，0.02ml/滴）、质量浓度0.02-0.2%的Triton X-100 0.02-0.1ml（1-5滴，0.02ml/滴），0.05-0.2%的荧光增白剂220 0.02-0.1ml（1-5滴，0.02ml/滴）制成的染色液，在室温下染色10-60min；
5.第二次漂洗
将染色后的植物材料取出，放在载玻片上，用pH8.0的PBS缓冲液漂洗10-15min；
6.核酸染色
二次漂洗后的植物材料滴加质量浓度0.01-0.05%的DAPI溶液0.02-0.06ml，室温下，对细胞中核酸进行荧光染色10-20min；
7.封片
用蒸馏水漂洗，除去表面的染色液，再滴加质量浓度10-20%的甘油，将植物材料表面覆盖，加盖玻片；
8.观察
用激光共聚焦显微镜观察照相，实现对植物显微结构的观察。
本发明方法简单，无需切片机，制片时间短，可以观察到植物的三维构造，适用于各种植物的细胞或组织的观察，清晰、准确，非常有利于对植物显微结构的分析研究，成本低，效果好，有良好的经济和社会效益。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。
本发明在具体实施中，可由以下实施例给出。
实施例1
本发明在具体实施中，由以下步骤实现：
1.取材
取植物的花粉粒、胚囊、花柱或胚珠，或取叶片、根或茎切制成长宽各2-3mm的小块或小段；
2.固定
室温下，将植物材料置于装有由pH8.0的PBS缓冲液配置成的质量浓度4%的多聚甲醛或甲醇制成的固定液的玻璃容器中，固定25-35min，当固定叶片时，需用甲醇除去叶绿素，溶解角质层；
3.第一次漂洗
从固定液中取出植物材料，用pH8.0的PBS缓冲液漂洗12-18min；
4.细胞壁染色
将第一次漂洗后的植物材料放在双凹载玻片的圆凹中，滴加由质量浓度1.5-2.5%的DMSO 0.03-0.05ml、质量浓度0.05-0.15%的Triton X-100 0.03-0.05ml、质量浓度0.1-0.15%的荧光增白剂220 0.03-0.05ml制成的染色液，在室温下染色20-50min；
5.第二次漂洗
将染色后的植物材料取出，放在载玻片上，用pH8.0的PBS缓冲液漂洗12-13min；
6.核酸染色
二次漂洗后的植物材料滴加质量浓度0.02-0.04%的DAPI溶液0.03-0.05ml，室温下，对细胞中核酸进行荧光染色12-18min；
7.封片
用蒸馏水漂洗，除去表面的染色液，再滴加质量浓度12-18%的甘油，将植物材料表面覆盖，加盖玻片；
8.观察
用激光共聚焦显微镜观察照相，实现对植物显微结构的观察。
实施例2
本发明在具体实施中，由以下步骤实现：
1.取材
取植物的花粉粒、胚囊、花柱或胚珠，或取叶片、根或茎切制成长宽各1-5mm的小块或小段；
2.固定
室温下，将植物材料置于装有由pH8.0的PBS缓冲液配置成的质量浓度4%的多聚甲醛或甲醇制成的固定液的玻璃容器中，固定30min，当固定叶片时，需用甲醇除去叶绿素，溶解角质层；
3.第一次漂洗
从固定液中取出植物材料，用pH8.0的PBS缓冲液漂洗15min；
4.细胞壁染色
将第一次漂洗后的植物材料放在双凹载玻片的圆凹中，滴加由质量浓度2%的DMSO 0.06ml、质量浓度0.11%的Triton X-100 0.06ml、质量浓度0.12%的荧光增白剂220 0.06ml制成的染色液，在室温下染色35min；
5.第二次漂洗
将染色后的植物材料取出，放在载玻片上，用pH8.0的PBS缓冲液漂洗10min；
6.核酸染色
二次漂洗后的植物材料滴加质量浓度0.03%的DAPI溶液0.06ml，室温下，对细胞中核酸进行荧光染色15min；
7.封片
用蒸馏水漂洗，除去表面的染色液，再滴加质量浓度15%的甘油，将植物材料表面覆盖，加盖玻片；
8.观察
用激光共聚焦显微镜观察照相，实现对植物显微结构的观察。
本发明方法经多次反复试用和实验表明，经过透明处理和荧光染色后，细胞壁和细胞核经过荧光激后可以显示较强的荧光，在观察胚囊时，胚囊中的各个细胞往往不在一个光学切面上，利用激光共聚焦显微镜的逐层扫描功能，扫描图像经过计算机三维重建后，可以得到样品的三维重建结构，可以清晰观察胚囊内各细胞的结构和空间分布情况，整体感强。
荧光增白剂220能够作用于β-1,4葡聚糖和β-1,3葡聚糖，渗透性好，低浓度下也能对细胞壁和花粉管取得均一的染色效果，染料本身荧光弱，即使漂洗后有残余染料，在材料在染料中也能观察到细胞壁和花粉管的强烈荧光。在对花粉管染色时，由于荧光增白剂220和花粉管结合显示比细胞壁更为明亮的荧光，因此可以很容易识别花粉管。 DNA荧光染色过去多用PI(碘化丙啶）， PI渗透性差，染色均一性差。DAPI为一种非常优秀的荧光染料，无论固定过和没有固定过的活细胞均可以用DAPI染色，渗透性好，染色均一。可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合，产生壁DAPI自身强20多倍的荧光，具有很高的染色灵敏度。
本发明方法技术简单，操作方便，获得清晰的图片。与传统的制片方法相比，具有取材少，节约试剂，成本低，可节约资材和成本50%以上，实验时间由原来的2天以上缩短为1-2.5小时，实验时间大大缩短，工作量小，成功率高，大大提高了工作效率，观察结果比已有的方法的效果都好，并且可以得到三维图像，可有效用于多种植物材料的观察，具有很强的实用性，是植物显微结构研究上的一大创新。
Claims (3)
1.一种用于植物显微结构观察的荧光染色方法，其特征在于，由以下步骤实现：
1）.取材
取植物材料，切制成长宽各1-5mm的小块或小段；
所述的植物材料为花粉粒，胚囊、花柱、胚珠、叶片、根或茎；
2）.固定
室温下，将植物材料置于由pH8.0的PBS缓冲液配置成的质量浓度4%的多聚甲醛或甲醇中固定20-40min；
3）.第一次漂洗
从固定液中取出植物材料，用pH8.0的PBS缓冲液漂洗10-20min；
4）.染色
将漂洗后的植物材料滴加由质量浓度1-3%的DMSO
0.02-0.1ml、质量浓度0.02-0.2%的Triton
X-100 0.02-0.1ml，0.05-0.2%的荧光增白剂220 0.02-0.1ml制成的染色液，在室温下染色10-60min；
5）.第二次漂洗
将染色后的植物材料取出，放在载玻片上，用pH8.0的PBS缓冲液漂洗10-15min；
6）.核酸染色
二次漂洗后的植物材料滴加质量浓度0.01-0.05%的DAPI溶液0.02-0.06ml，室温下，对细胞中核酸进行荧光染色10-20min；
7）.封片
用蒸馏水漂洗，除去表面的染色液，再滴加质量浓度10-20%的甘油，将植物材料表面覆盖，加盖玻片；
8）.观察
用激光共聚焦显微镜观察照相，实现对植物显微结构的观察。
2.根据权利要求1所述的用于植物显微结构观察的荧光染色方法，其特征在于，由以下步骤实现：
1）.取材
取植物的花粉粒、胚囊、花柱或胚珠，或取叶片、根或茎切制成长宽各2-3mm的小块或小段；
2）.固定
室温下，将植物材料置于装有由pH8.0的PBS缓冲液配置成的质量浓度4%的多聚甲醛或甲醇制成的固定液的玻璃容器中，固定25-35min，当固定叶片时，用甲醇除去叶绿素，溶解角质层；
3）.第一次漂洗
从固定液中取出植物材料，用pH8.0的PBS缓冲液漂洗12-18min；
4）.细胞壁染色
将第一次漂洗后的植物材料放在双凹载玻片的圆凹中，滴加由质量浓度1.5-2.5%的DMSO的0.03-0.05ml、质量浓度0.05-0.15%的Triton X-100 0.03-0.05ml、质量浓度0.1-0.15%的荧光增白剂220 0.03-0.05ml制成的染色液，在室温下染色20-50min；
5）.第二次漂洗
将染色后的植物材料取出，放在载玻片上，用pH8.0的PBS缓冲液漂洗12-13min；
6）.核酸染色
二次漂洗后的植物材料滴加质量浓度0.02-0.04%的DAPI溶液0.03-0.05ml，室温下，对细胞中核酸进行荧光染色12-18min；
7）.封片
用蒸馏水漂洗，除去表面的染色液，再滴加质量浓度12-18%的甘油，将植物材料表面覆盖，加盖玻片；
8）.观察
用激光共聚焦显微镜观察照相，实现对植物显微结构的观察。
3.根据权利要求1所述的用于植物显微结构观察的荧光染色方法，其特征在于，由以下步骤实现：
1）.取材
取植物的花粉粒、胚囊、花柱或胚珠，或取叶片、根或茎切制成长宽各1-5mm的小块或小段；
2）.固定
室温下，将植物材料置于装有由pH8.0的PBS缓冲液配置成的质量浓度4%的多聚甲醛或甲醇制成的固定液的玻璃容器中，固定30min，当固定叶片时，用甲醇除去叶绿素，溶解角质层；
3）.第一次漂洗
从固定液中取出植物材料，用pH8.0的PBS缓冲液漂洗15min；
4）.细胞壁染色
将第一次漂洗后的植物材料放在双凹载玻片的圆凹中，滴加由质量浓度2%的DMSO的0.06ml、质量浓度0.11%的Triton X-100 0.06ml、质量浓度0.12%的荧光增白剂220 0.06ml制成的染色液，在室温下染色35min；
5）.第二次漂洗
将染色后的植物材料取出，放在载玻片上，用pH8.0的PBS缓冲液漂洗10min；
6）.核酸染色
二次漂洗后的植物材料滴加质量浓度0.03%的DAPI溶液0.06ml，室温下，对细胞中核酸进行荧光染色15min；
7）.封片
用蒸馏水漂洗，除去表面的染色液，再滴加质量浓度15%的甘油，将植物材料表面覆盖，加盖玻片；
8）.观察
用激光共聚焦显微镜观察照相，实现对植物显微结构的观察。
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|---|---|
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Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106950088A (zh) * | 2017-03-09 | 2017-07-14 | 福建农林大学 | 快速观察拟南芥胚珠形态及统计外珠被细胞数目的方法 |
| CN108680418A (zh) * | 2018-06-01 | 2018-10-19 | 广东金作农业科技有限公司 | 一种十字花科作物花粉的快速荧光染色方法 |
| CN108872166A (zh) * | 2018-04-09 | 2018-11-23 | 华中科技大学 | 双荧光标记实现油菜种子单细胞及油滴三维可视化的方法 |
| CN109444104A (zh) * | 2018-12-19 | 2019-03-08 | 上海市农业科学院 | 一种金针菇菌丝核相的观察方法 |
| CN109856093A (zh) * | 2018-12-20 | 2019-06-07 | 武汉大学 | 一种改良的荧光蛋白转基因小鼠组织荧光成像方法 |
| CN110426264A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-11-08 | 阜阳师范大学 | 一种脂肪细胞的染色方法及其应用 |
| CN111060294A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-04-24 | 茂莱（南京）仪器有限公司 | 一种荧光显微物镜综合测试平台 |
| CN112461733A (zh) * | 2020-11-05 | 2021-03-09 | 闽江学院 | 一种多荧光标记观察纤毛虫细胞立体结构的方法 |
| CN112525876A (zh) * | 2020-12-21 | 2021-03-19 | 河南中医药大学 | 一种利用荧光显微镜观察植物叶表皮毛被的方法 |
| CN112697759A (zh) * | 2020-12-10 | 2021-04-23 | 北京林业大学 | 荧光相关光谱（fcs）在植物细胞核中的应用方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06102158A (ja) * | 1991-11-25 | 1994-04-15 | Iseki & Co Ltd | プロトプラストの二重染色方法、細胞質供与体、核供与体の作出方法および酵素反応容器 |
| WO2001013120A1 (en) * | 1999-08-17 | 2001-02-22 | Luminex Corporation | Microparticles with multiple fluorescent signals and methods of using same |
| CN1340156A (zh) * | 1999-02-19 | 2002-03-13 | 分析科学公司 | 整体染色和包埋法相结合 |
| CN1916609A (zh) * | 2006-09-13 | 2007-02-21 | 代西梅 | 利用核特异荧光染色和子房整体透明技术观察水稻胚囊的方法 |
| CN102095730A (zh) * | 2010-11-18 | 2011-06-15 | 河南中医学院 | 利用透明叶片观察叶表皮和叶内部的显微结构的方法 |
| CN102768209A (zh) * | 2012-08-06 | 2012-11-07 | 河南中医学院 | 一种观察植物根内部显微结构的方法 |
| CN104450859A (zh) * | 2014-12-23 | 2015-03-25 | 扬州大学 | 一种谷物种子胚乳细胞的形态学分析方法 |
-
2016
- 2016-02-25 CN CN201610103217.4A patent/CN105738182A/zh active Pending
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06102158A (ja) * | 1991-11-25 | 1994-04-15 | Iseki & Co Ltd | プロトプラストの二重染色方法、細胞質供与体、核供与体の作出方法および酵素反応容器 |
| CN1340156A (zh) * | 1999-02-19 | 2002-03-13 | 分析科学公司 | 整体染色和包埋法相结合 |
| WO2001013120A1 (en) * | 1999-08-17 | 2001-02-22 | Luminex Corporation | Microparticles with multiple fluorescent signals and methods of using same |
| CN1916609A (zh) * | 2006-09-13 | 2007-02-21 | 代西梅 | 利用核特异荧光染色和子房整体透明技术观察水稻胚囊的方法 |
| CN102095730A (zh) * | 2010-11-18 | 2011-06-15 | 河南中医学院 | 利用透明叶片观察叶表皮和叶内部的显微结构的方法 |
| CN102768209A (zh) * | 2012-08-06 | 2012-11-07 | 河南中医学院 | 一种观察植物根内部显微结构的方法 |
| CN104450859A (zh) * | 2014-12-23 | 2015-03-25 | 扬州大学 | 一种谷物种子胚乳细胞的形态学分析方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| MUSIELAK TOMAS J. ET AL.: "A simple and versatile cell wall staining protocol to study plant reproduction", 《PLANT REPRODUCTION》 * |
| PASTEMAK TARAS ET AL.: "Protocol: an improved and universal procedure for whole-mount immunolocalization in plants", 《PLANT METHODS》 * |
| 李国平等: "黑松花粉体外萌发与花粉管生长的研究", 《林业科学研究》 * |
Cited By (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106950088B (zh) * | 2017-03-09 | 2019-06-04 | 福建农林大学 | 快速观察拟南芥胚珠形态及统计外珠被细胞数目的方法 |
| CN106950088A (zh) * | 2017-03-09 | 2017-07-14 | 福建农林大学 | 快速观察拟南芥胚珠形态及统计外珠被细胞数目的方法 |
| CN108872166A (zh) * | 2018-04-09 | 2018-11-23 | 华中科技大学 | 双荧光标记实现油菜种子单细胞及油滴三维可视化的方法 |
| CN108680418B (zh) * | 2018-06-01 | 2021-03-23 | 广东金作农业科技有限公司 | 一种用于十字花科作物花粉快速染色的染色液及方法 |
| CN108680418A (zh) * | 2018-06-01 | 2018-10-19 | 广东金作农业科技有限公司 | 一种十字花科作物花粉的快速荧光染色方法 |
| CN109444104A (zh) * | 2018-12-19 | 2019-03-08 | 上海市农业科学院 | 一种金针菇菌丝核相的观察方法 |
| CN109856093A (zh) * | 2018-12-20 | 2019-06-07 | 武汉大学 | 一种改良的荧光蛋白转基因小鼠组织荧光成像方法 |
| CN110426264A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-11-08 | 阜阳师范大学 | 一种脂肪细胞的染色方法及其应用 |
| CN110426264B (zh) * | 2019-08-27 | 2022-03-22 | 阜阳师范大学 | 一种脂肪细胞的染色方法及其应用 |
| CN111060294A (zh) * | 2019-12-31 | 2020-04-24 | 茂莱（南京）仪器有限公司 | 一种荧光显微物镜综合测试平台 |
| CN112461733A (zh) * | 2020-11-05 | 2021-03-09 | 闽江学院 | 一种多荧光标记观察纤毛虫细胞立体结构的方法 |
| CN112697759A (zh) * | 2020-12-10 | 2021-04-23 | 北京林业大学 | 荧光相关光谱（fcs）在植物细胞核中的应用方法 |
| CN112525876A (zh) * | 2020-12-21 | 2021-03-19 | 河南中医药大学 | 一种利用荧光显微镜观察植物叶表皮毛被的方法 |
| CN112525876B (zh) * | 2020-12-21 | 2022-11-01 | 河南中医药大学 | 一种利用荧光显微镜观察植物叶表皮毛被的方法 |
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