CN108785523A - 一种从黄精中提取纯化多酚类化合物的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从黄精中提取纯化多酚类化合物的方法，包括以下步骤：将黄精粉碎成40目颗粒，置于含柠檬酸钠的水溶液中浸泡10‑15min，干燥；加入25‑30重量倍的乙醇溶液进行闪式提取，得到黄精多酚粗提液；采用大孔树脂对黄精多酚粗提液进行洗脱纯化，得到纯化后的黄精多酚。本发明通过对黄精的预处理，有效减少了黄精中的多酚类物质在闪提过程中的降解，提高了黄精多酚的提取率；并进一步的采用大孔树脂对黄精多酚粗提液进行了洗脱纯化，将黄精多酚的纯度提高到94.2％以上，为多酚类化合物单体的获得奠定了基础，同时，也显著提高了黄精多酚提取物的体外抗氧化活性，有利于黄精多酚类化合物的进一步广泛利用。
Description
技术领域
本发明涉及植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种从黄精中提取纯化多酚类化合物的方法。
背景技术
黄精(Polygonatum sibiricum)为百合科草本类植物，分为黄精、滇黄精、多花黄精和囊丝黄精等。作为我国传统的一味中药，因其具有益气、补肾、益脾、滋阴、润肺等功效，早在2000多年前，就已被发现并作为药物使用，多用于治疗咳嗽、肺部疾病和调节免疫力。大量研究表明，黄精具有多种生理功能，如抗病原微生物、抗病毒、抗疲劳、降血糖、降血脂、延缓衰老、调节免疫力、改善记忆力和较好的抗氧化能力。现代药理学研究表明，黄精具有的这些生理功能主要归功于其含有的多糖、黄酮类物质、皂苷类物质、生物碱、木质素和氨基酸等活性成分。目前，关于黄精的文献报道主要是对其多糖的研究，而对于其他成分，特别是具有重要生理功能多酚类化合物鲜有报道。
多酚是在蔬菜、水果、谷物、豆类等植物性食物中发现的、具有潜在促进健康作用的化合物。多酚是一类广泛存在于植物体内的具有多元酚结构的次生代谢物，主要存在于植物的皮、根、叶、果中。狭义认为植物多酚是单宁(tannins)或鞣质，是多羟基酚类化合物的总称，其相对分子质量在500～3000之间；广义上，还包括小分子酚类化合物，如花青素、儿茶素、栎精、没食子酸、鞣花酸、熊果苷等天然酚类。
由于多酚类化合物不稳定，易被降解，是其应用中的最大问题。因此，快速、高效的提取方法是有效降低牛蒡多酚在生产过程中被降解的关键。闪式提取法(闪提)是一项新的提取技术，其原理是在适当的溶剂下，利用高速机械剪切力和超速动态分子渗透作用，迅速破坏细胞组织，使组织细胞内部的化学成分(或有效成分)迅速达到组织内外平衡，从而达到快速提取的目的。闪式提取法目前已被应用于多种化学物质的提取，但由于闪式提取是依靠转头的高速旋转，将药物磨碎，此过程会产生热量，因此，即使是采用闪提法也有可能会造成多酚类化合物的降解；而且，单纯采用闪式提取法提取出的多酚类物质的杂质较多，影响了其体外抗氧化活性，不利于黄精多酚类化合物的进一步开发利用。
发明内容
针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种从黄精中提取纯化多酚类化合物的方法。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明的第一方面，提供一种从黄精中提取纯化多酚类化合物的方法，包括以下步骤：
(1)样品预处理：将黄精粉碎成40目颗粒，置于含柠檬酸钠的水溶液中浸泡10-15min，干燥，得到预处理后的黄精样品；
(2)闪式提取：向预处理后的黄精样品中加入25-30重量倍的乙醇溶液进行闪式提取，所述乙醇溶液的体积浓度为60-70％，提取电压为120V，提取时间为45-55s，提取次数为2次，收集提取液，将提取液离心，分离除去固体杂质，然后旋转蒸发除去提取液中的乙醇，得到黄精多酚粗提液；
(3)洗脱纯化：采用大孔树脂对黄精多酚粗提液进行洗脱纯化，将黄精多酚粗提液稀释至0.7-0.9mg/ml后上样，上样流速为0.7-0.9mL/min，以体积浓度为65-75％的乙醇溶液作为洗脱液，洗脱流速为1mL/min；洗脱后收集洗脱液，干燥，得到纯化后的黄精多酚。
优选的，步骤(1)中，含柠檬酸钠的水溶液中柠檬酸钠的质量浓度为1-3％。
优选的，步骤(2)中，所述乙醇溶液的浓度为65％。
优选的，步骤(2)中，提取时间为50s。
优选的，步骤(3)中，采用AB-8大孔树脂对黄精多酚粗提液进行洗脱纯化。
优选的，步骤(3)中，还包括对大孔树脂进行预处理的步骤；所述预处理的方法为：将大孔树脂在无水乙醇中浸泡24h，再用5％盐酸溶液浸泡8h，蒸馏水洗至洗出液为中性，最后用5％NaOH溶液浸泡8h，用蒸馏水洗至中性。
优选的，步骤(3)中，将黄精多酚粗提液稀释至0.8mg/ml后上样，上样流速为0.8mL/min。
优选的，步骤(3)中，以体积浓度为70％的乙醇溶液作为洗脱液。
优选的，步骤(3)中，所述干燥采用微波干燥法，控制真空压力为-0.1-0.05MPa，干燥温度为40-50℃，最终产品水分控制＜5％。
本发明的第二方面，提供上述方法制备得到的黄精多酚提取物。所述黄精多酚提取物中黄精多酚的含量≥94.2％。
本发明的有益效果：
采用本发明的方法可以对黄精多酚进行有效的提取，本发明通过对黄精的预处理，有效减少了黄精中的多酚类物质在闪提过程中的降解，提高了黄精多酚的提取率(黄精多酚的提取率达1.4％以上)，黄精多酚粗提液中多酚含量在62.2％以上，可作为药物的有效部位直接使用；本发明进一步的采用大孔树脂对黄精多酚粗提液进行了洗脱纯化，将黄精多酚的纯度提高到94.2％以上，为多酚类化合物单体的获得奠定了基础，同时，也显著提高了黄精多酚提取物的体外抗氧化活性，有利于黄精多酚类化合物的进一步广泛利用。
附图说明
图1：总酚含量测定的标准曲线。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
正如背景技术部分所介绍的，由于多酚类化合物不稳定，易被降解，是其应用中的最大问题，因此如何快速、高效提取多酚类化合物是目前亟需解决的问题。本申请发明人在前期研究中采用闪式提取的方法提取黄精中的多酚类化合物，得到黄精粗多酚。但黄精粗多酚中所含杂质较多，黄精多酚的提取率也有待提高。基于此，本发明的目的是提供一种从黄精中提取纯化多酚类化合物的方法，有效减少了黄精粗提液中的杂质含量，提高了黄精多酚的提取率，并通过大孔树脂法对黄精粗提液进行了进一步的纯化，有效提高了纯化后的黄精多酚提取物的体外抗氧化活性。
在本发明的一种实施方案中，给出的从黄精中提取纯化多酚类化合物的方法包括以下步骤：
(1)样品预处理：将黄精粉碎成40目颗粒，置于含柠檬酸钠的水溶液中浸泡10-15min，干燥，得到预处理后的黄精样品；
(2)闪式提取：向预处理后的黄精样品中加入25-30重量倍的乙醇溶液进行闪式提取，所述乙醇溶液的体积浓度为60-70％，提取电压为120V，提取时间为45-55s，提取次数为2次，收集提取液，将提取液离心，分离除去固体杂质，然后旋转蒸发除去提取液中的乙醇，得到黄精多酚粗提液；
(3)洗脱纯化：采用AB-8大孔树脂对黄精多酚粗提液进行洗脱纯化，将黄精多酚粗提液稀释至0.7-0.9mg/ml后上样，上样流速为0.7-0.9mL/min，以体积浓度为65-75％的乙醇溶液作为洗脱液，洗脱流速为1mL/min；洗脱后收集洗脱液，微波干燥法，控制真空压力为-0.1-0.05MPa，干燥温度为40-50℃，最终产品水分控制＜5％，得到纯化后的黄精多酚。
由于黄精多酚的性质不稳定，极易被降解，而闪式提取是依靠转头的高速旋转，将药物磨碎，此过程会产生热量，因此，即使是采用闪提法也有可能会造成黄精多酚的降解，影响黄精多酚的提取率。本发明意外的发现，在闪式提取之前，将黄精用一定浓度的柠檬酸钠水溶液浸泡一段时间，可以有效提高黄精中多酚类物质的稳定性，减少其在提取过程中出现降解，提高了黄精多酚的提取率。柠檬酸钠水溶液的浓度和浸泡时间对于黄精多酚稳定性的保护效果而言是非常关键的，只有合适的浓度和浸泡时间才会对黄精中多酚类化合物的稳定性起到保护作用。本发明经多次试验发现，柠檬酸钠水溶液中柠檬酸钠的质量浓度为1-3％，浸泡时间为10-15min时，其对黄精中多酚类化合物的稳定性的保护效果最优。
在闪提过程中，提取电压的提高会促进物料细胞壁的破裂，有利于多酚类物质释放到溶液中去；但是，随着提取电压的提高，会导致提取液的温度提高，从而加快多酚的氧化。经综合考虑，本发明将提取电压设定为120V，该提取电压下，一方面可以保证多酚类物质能被充分的释放到溶液中去，另一方面可以尽量避免多酚的氧化。
与别的提取方法不同的是，闪提是需要将刀头浸入溶剂中，需要一定的溶剂高度，另外，物料在高速旋转过程中被粉碎，溶液黏度增加，为了提高成分在溶液中扩散速度，需要增加溶剂用量；当加液量达到一定程度时，提取率增势趋于和缓，但又因为过多的提取溶剂会增加后续的处理的工作量。综合考虑，本发明选择提取溶剂的加入量为预处理后的黄精样品的25-30重量倍，其中，提取溶剂的加入量为预处理后的黄精样品的30重量倍时，其提取效果最佳。
闪式提取中，随着提取时间的增加，黄精多酚的得率呈现增大趋势。在提取时间为20s至40s时，多酚提取率稳步上升，40s至50s范围内提取率有明显大幅上升，大于50s后多酚得率显现下降趋势。得率下降的出现可能是由于提取器的部件经长时间高速摩擦产生的热效应以及溶液中分子高速运动带来的热量使得一部分不稳定的多酚发生分解。综合以上考虑，选择50s的提取时间进行研究最为适宜。
不同种类的大孔树脂对黄精多酚粗提液的吸附与解吸能力不同，本发明发现，AB-8大孔树脂的孔径更适宜吸附多酚类分子，同时AB-8树脂为弱极性，可以更好的将极性黄精多酚从柱子上解吸下来，因此，选择AB-8大孔树脂作为分离纯化黄精多酚的最优树脂。
在多酚浓度较低时，AB-8吸附多酚的能力随着上样浓度的增加而增加，至0.8mg/mL达到最大。当上样浓度超过0.8mg/mL时，AB-8吸附多酚的能力随着上样浓度的增加而降低。分析原因可能是低浓度时，大孔树脂吸附多酚的能力未达到饱和，还有吸附位点剩余，此时上样浓度增加，吸附率也会相应增加；在较高的浓度时，多酚与杂质争夺吸附位点，多酚吸附率降低。此外，溶液粘度随溶液浓度的增加而增大，传质阻力增大，也会导致吸附率的降低。因此，黄精多酚浓度为0.8mg/mL时最佳。
随着乙醇浓度的增加，解吸率也得以提高。当乙醇浓度为70％时，解吸率达到61.8％；当乙醇浓度继续增加时，解吸率随之下降。分析原因可能是由于乙醇浓度较低时，树脂和多酚形成的氢键还未被充分的破坏，导致多酚解吸率低；而当乙醇浓度继续增大时，此时溶液的极性与多酚的极性相差也随之增大，由极性相似相溶可知，黄精多酚在乙醇溶液中的溶解度变低，导致了多酚解吸率下降。因此，乙醇浓度为70％时最适宜。
随着流出液体积的增大，流出液中的多酚物质在逐渐增多，这说明黄精多酚的吸附率在慢慢地降低；在不同的上样流速下，相同流出液体积的多酚吸附率不同，上样流速越大，吸附率越低。分析原因可能是由于当上样流速较大时，黄精多酚粗提液中的多酚物质还没有来得及扩散至树脂内表面，就已经被冲出柱子，从而造成树脂对提取液中多酚物质吸附率的下降；当上样液流速较小时，多酚物质可以充分被树脂吸附，吸附效果就会较好。但如果流速太小，生产效率就会降低，就会延长生产的周期，提高生产的成本。因此，综合考虑，上样流速为0.8mL/min时比较适宜。
洗脱液流速变大，洗脱性能相对差，洗脱带加宽,拖尾现象越来越明显。分析原因可能是由于洗脱液流速加快时，洗脱液与被树脂吸附的多酚没来得及进行充分的解吸作用，因而不能将其从树脂的吸附位点上置换下来，进而造成洗脱效果较差。但如果洗脱液流速过慢，生产周期就会延长，生产成本也就会相应的增加。因此，综合考虑当洗脱液流速为1mL/min时较为适宜。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。
本发明实施例和对比例中所用的试验材料均为本领域常规的试验材料，均可通过商业渠道购买得到。
本发明实施例和对比例中所使用的黄精为购买于亳州千草药业有限公司。
实施例1：黄精多酚的提取纯化
(1)样品预处理：将黄精粉碎成40目颗粒，置于质量浓度为2％的柠檬酸钠的水溶液中浸泡15min，干燥，得到预处理后的黄精样品；
(2)闪式提取：向预处理后的黄精样品中加入30重量倍的乙醇溶液进行闪式提取，所述乙醇溶液的体积浓度为65％，提取电压为120V，提取时间为50s，提取次数为2次，收集提取液，将提取液离心，分离除去固体杂质，然后旋转蒸发除去提取液中的乙醇，得到黄精多酚粗提液；
(3)洗脱纯化：采用AB-8大孔树脂对黄精多酚粗提液进行洗脱纯化，将黄精多酚粗提液稀释至0.8mg/ml后上样，上样流速为0.8mL/min，以体积浓度为70％的乙醇溶液作为洗脱液，洗脱流速为1mL/min；洗脱后收集洗脱液，微波干燥法，控制真空压力为-0.1-0.05MPa，干燥温度为40℃，最终产品水分控制＜5％，得到纯化后的黄精多酚。
实施例2：黄精多酚的提取纯化
(1)样品预处理：将黄精粉碎成40目颗粒，置于质量浓度为1％的柠檬酸钠的水溶液中浸泡15min，干燥，得到预处理后的黄精样品；
(2)闪式提取：向预处理后的黄精样品中加入25重量倍的乙醇溶液进行闪式提取，所述乙醇溶液的体积浓度为60％，提取电压为120V，提取时间为55s，提取次数为2次，收集提取液，将提取液离心，分离除去固体杂质，然后旋转蒸发除去提取液中的乙醇，得到黄精多酚粗提液；
(3)洗脱纯化：采用AB-8大孔树脂对黄精多酚粗提液进行洗脱纯化，将黄精多酚粗提液稀释至0.7mg/ml后上样，上样流速为0.7mL/min，以体积浓度为65％的乙醇溶液作为洗脱液，洗脱流速为1mL/min；洗脱后收集洗脱液，微波干燥法，控制真空压力为-0.1-0.05MPa，干燥温度为40℃，最终产品水分控制＜5％，得到纯化后的黄精多酚。
实施例3：黄精多酚的提取纯化
(1)样品预处理：将黄精粉碎成40目颗粒，置于质量浓度为3％的柠檬酸钠的水溶液中浸泡10min，干燥，得到预处理后的黄精样品；
(2)闪式提取：向预处理后的黄精样品中加入25重量倍的乙醇溶液进行闪式提取，所述乙醇溶液的体积浓度为70％，提取电压为120V，提取时间为50s，提取次数为2次，收集提取液，将提取液离心，分离除去固体杂质，然后旋转蒸发除去提取液中的乙醇，得到黄精多酚粗提液；
(3)洗脱纯化：采用AB-8大孔树脂对黄精多酚粗提液进行洗脱纯化，将黄精多酚粗提液稀释至0.9mg/ml后上样，上样流速为0.9mL/min，以体积浓度为65％的乙醇溶液作为洗脱液，洗脱流速为1mL/min；洗脱后收集洗脱液，微波干燥法，控制真空压力为-0.1-0.05MPa，干燥温度为40℃，最终产品水分控制＜5％，得到纯化后的黄精多酚。
对比例1：
(1)样品预处理：将黄精粉碎成40目颗粒，得到预处理后的牛蒡样品；
(2)闪式提取：向预处理后的黄精样品中加入30重量倍的乙醇溶液进行闪式提取，所述乙醇溶液的体积浓度为65％，提取电压为120V，提取时间为50s，提取次数为2次，收集提取液，将提取液离心，分离除去固体杂质，然后旋转蒸发除去提取液中的乙醇，得到黄精多酚粗提液；
(3)洗脱纯化：采用AB-8大孔树脂对黄精多酚粗提液进行洗脱纯化，将黄精多酚粗提液稀释至0.8mg/ml后上样，上样流速为0.8mL/min，以体积浓度为70％的乙醇溶液作为洗脱液，洗脱流速为1mL/min；洗脱后收集洗脱液，微波干燥法，控制真空压力为-0.1-0.05MPa，干燥温度为40℃，最终产品水分控制＜5％，得到纯化后的黄精多酚。
对比例2：
将对比例1中的大孔树脂的种类替换为XAD-2型大孔树脂，其余同对比例1。
对比例3：
将对比例1中的作为洗脱液的乙醇溶液的浓度调整为80％，其余同对比例1。
试验例1：黄精多酚提取物中总酚含量的测定
一、试验方法：
(1)标准曲线的绘制
精密称取没食子酸标准品0.0100g，用蒸馏水溶解并定容至100mL，得浓度为0.10mg/mL的标准液。准确吸取0、0.5、1.0、1.5、2.0、2、5mL置于25mL的棕色容量瓶中，加蒸馏水10mL，然后分别加入Folin-Ciocalteau试剂1mL，混匀，在0.5～8min内加入10mL 7％的Na2CO3溶液，充分混合后定容，得浓度为0、0.002、0.004、0.006、0.008、0.01mg/mL的没食子酸标准溶液，25℃下避光放置半小时，空白对照为不加标准液的6.0mL蒸馏水，在765nm波长下测定吸光值，以吸光值为纵坐标，没食子酸的浓度为横坐标绘制标准曲线(图1)。
(2)样品中多酚含量的测定
利用上述标准曲线分别对实施例1-3，对比例1-3制备的黄精多酚粗提液和纯化后的黄精多酚中的总酚含量进行测定。
二、试验结果：
不同实施例和对比例制备的黄精多酚粗提液和纯化后的黄精多酚中的总酚含量测定结果见表1。
表1：总酚含量测定结果
| 组别 | 黄精多酚粗提液 | 纯化后的黄精多酚 |
| 实施例1 | 63.8％ | 95.6％ |
| 实施例2 | 62.2％ | 94.2％ |
| 实施例3 | 62.8％ | 94.6％ |
| 对比例1 | 42.5％ | 74.3％ |
| 对比例2 | 35.2％ | 71.2％ |
| 对比例3 | 48.3％ | 73.4％ |
由表1可以看出，采用本发明的方法提取得到的黄精多酚粗提液以及纯化后的黄精多酚中，总酚含量得到显著的提高。
试验例2：黄精多酚提取物体外抗氧化能力的测定
一、试验方法：
1.黄精多酚还原能力的测定：
分别取实施例1和对比例1-3提取得到的黄精多酚粗提液以及纯化后的黄精多酚，制成浓度为30μg/mL的样品溶液，取样品溶液1mL，加入1mL磷酸缓冲溶液(pH 6.6，0.2moL/L)，混合均匀，再加入1mL铁氰化钾溶液(1％)，在50℃下反应20min，反应结束后加入1mL三氯乙酸溶液(10％)，3000r/min离心10min，吸取上清液2.5mL，加入2.5mL蒸馏水稀释，再加入0.5mL氯化亚铁溶液(0.1％)，在700nm下检测吸光度，吸光值越大表示还原力越强，同时以L-抗坏血酸为阳性对照。
2.DPPH自由基清除率测定：
分别取实施例1和对比例1-3提取得到的黄精多酚粗提液以及纯化后的黄精多酚，配制成一定浓度的样品溶液，并分别取2mL于15mL离心管中，加入2.0mL以无水乙醇配制的质量浓度为0.025mg/ml的DPPH溶液，室温、黑暗条件下反应30min后，于4000r/min离心10min，上清液于517nm波长下测定吸光值，以无水乙醇为空白。按下式计算DPPH自由基清除率，同时以L-抗坏血酸作为阳性对照。
DPPH清除率/％＝[1–(A1–A2)/A0]×100％
式中A0——2mL无水乙醇和2mLDPPH混合溶液吸光值；
A1——2mL样品溶液和2mLDPPH混合溶液吸光值；
A2——2mL样品溶液和2mL无水乙醇混合溶液吸光值。
3.清除ABTS自由基能力的测定：
分别取实施例1和对比例1-3提取得到的黄精多酚粗提液以及纯化后的黄精多酚，配制成一定浓度的样品溶液，并分别取0.2mL于15mL离心管中，加入4.8mLABTS溶液，室温、黑暗条件下反应15min后，于波长734nm处测定吸光值。按下式计算ABTS自由基清除率，同时以L-抗坏血酸作为阳性对照。
ABTS清除率/％＝[1–(A4–A5)/A3]×100％
式中A3——0.2mL无水乙醇和4.8mLABTS混合溶液吸光值；
A4——0.2mL样品溶液和4.8mLABTS混合溶液吸光值；
A2——0.2mL样品溶液和4.8mL无水乙醇混合溶液吸光值。
二、试验结果：
实施例1和对比例1-3提取得到的黄精多酚粗提液以及纯化后的黄精多酚的还原能力力测定结果见表2。
表2：还原能力的测定结果(IC50值)
| 组别 | 黄精多酚粗提液 | 纯化后的黄精多酚 |
| 实施例1 | 25.32μg/mL | 12.02μg/mL |
| 对比例1 | 27.56μg/mL | 18.68μg/mL |
| 对比例2 | 28.12μg/mL | 19.24μg/mL |
| 对比例3 | 29.01μg/mL | 20.31μg/mL |
实施例1和对比例1-3提取得到的黄精多酚粗提液以及纯化后的黄精多酚的DPPH自由基清除率测定结果见表3。
表3：DPPH自由基清除率的测定结果(IC50值)
| 组别 | 黄精多酚粗提液 | 纯化后的黄精多酚 |
| 实施例1 | 5.10μg/mL | 2.62μg/mL |
| 对比例1 | 5.36μg/mL | 4.10μg/mL |
| 对比例2 | 5.42μg/mL | 4.22μg/mL |
| 对比例3 | 5.21μg/mL | 4.00μg/mL |
实施例1和对比例1-3提取得到的黄精多酚粗提液以及纯化后的黄精多酚的ABTS自由基清除率测定结果见表4。
表4：ABTS自由基清除率的测定结果(IC50值)
| 组别 | 黄精多酚粗提液 | 纯化后的黄精多酚 |
| 实施例1 | 4.54μg/mL | 2.72μg/mL |
| 对比例1 | 5.02μg/mL | 4.23μg/mL |
| 对比例2 | 4.92μg/mL | 4.04μg/mL |
| 对比例3 | 4.89μg/mL | 4.19μg/mL |
由表2-表4可以看出，与其他提取方法相比，采用本发明的方法提取得到的黄精多酚粗提液以及纯化后的黄精多酚，其还原能力、清除DPPH自由基能力以及清除ABTS自由基能力均得到了极大提高。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种从黄精中提取纯化多酚类化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)样品预处理：将黄精粉碎成40目颗粒，置于含柠檬酸钠的水溶液中浸泡10-15min，干燥，得到预处理后的黄精样品；
(2)闪式提取：向预处理后的黄精样品中加入25-30重量倍的乙醇溶液进行闪式提取，所述乙醇溶液的体积浓度为60-70％，提取电压为120V，提取时间为45-55s，提取次数为2次，收集提取液，将提取液离心，分离除去固体杂质，然后旋转蒸发除去提取液中的乙醇，得到黄精多酚粗提液；
(3)洗脱纯化：采用大孔树脂对黄精多酚粗提液进行洗脱纯化，将黄精多酚粗提液稀释至0.7-0.9mg/ml后上样，上样流速为0.7-0.9mL/min，以体积浓度为65-75％的乙醇溶液作为洗脱液，洗脱流速为1mL/min；洗脱后收集洗脱液，干燥，得到纯化后的黄精多酚。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，含柠檬酸钠的水溶液中柠檬酸钠的质量浓度为1-3％。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述乙醇溶液的浓度为65％。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，提取时间为50s。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，采用AB-8大孔树脂对黄精多酚粗提液进行洗脱纯化。
6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，还包括对大孔树脂进行预处理的步骤；所述预处理的方法为：将大孔树脂在无水乙醇中浸泡24h，再用5％盐酸溶液浸泡8h，蒸馏水洗至洗出液为中性，最后用5％NaOH溶液浸泡8h，用蒸馏水洗至中性。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，将黄精多酚粗提液稀释至0.8mg/ml后上样，上样流速为0.8mL/min。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，以体积浓度为70％的乙醇溶液作为洗脱液。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述干燥采用微波干燥法，控制真空压力为-0.1-0.05MPa，干燥温度为40-50℃，最终产品水分控制＜5％。
10.权利要求1-9任一项所述的方法制备得到的黄精多酚提取物，其特征在于，所述牛蒡多酚提取物中牛蒡多酚的含量≥94.2％。
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