CN108721356A - 一种牛蒡多酚的高效提取方法 - Google Patents

一种牛蒡多酚的高效提取方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108721356A
CN108721356A CN201810751903.1A CN201810751903A CN108721356A CN 108721356 A CN108721356 A CN 108721356A CN 201810751903 A CN201810751903 A CN 201810751903A CN 108721356 A CN108721356 A CN 108721356A
Authority
CN
China
Prior art keywords
burdock
polyphenol
extraction
sample
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810751903.1A
Other languages
English (en)
Inventor
王长凯
江润生
巫永华
刘恩岐
李超
易香羽
陈旭
王嘉宇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xuzhou University of Technology
Original Assignee
Xuzhou University of Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Xuzhou University of Technology filed Critical Xuzhou University of Technology
Priority to CN201810751903.1A priority Critical patent/CN108721356A/zh
Publication of CN108721356A publication Critical patent/CN108721356A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/28—Asteraceae or Compositae (Aster or Sunflower family), e.g. chamomile, feverfew, yarrow or echinacea
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
    • A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种牛蒡多酚的高效提取方法，包括以下步骤：(1)将牛蒡切成薄片，置于含柠檬酸钠的水溶液中浸泡10‑15min，干燥，得到预处理后的牛蒡样品；(2)向预处理后的牛蒡样品中加入25‑35重量倍的乙醇溶液进行闪式提取，所述乙醇溶液的体积浓度为70‑80％，提取电压为100V，提取时间为45‑55s，提取次数为2‑3次，得到牛蒡多酚提取液；(3)将牛蒡多酚提取液进行微波干燥，得到牛蒡总多酚粉。本发明通过对牛蒡的预处理，有效减少了牛蒡中的多酚类物质在闪提过程中的降解，提高了牛蒡多酚的提取率，牛蒡多酚提取物中多酚含量在78.9％以上，可作为药物的有效部位直接使用，同时为进一步的纯化得到多酚类物质单体奠定了基础。

Description

一种牛蒡多酚的高效提取方法
技术领域
本发明涉及植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种牛蒡多酚的高效提取方法。
背景技术
牛蒡(Arctium lappa L.)，原产于北欧、西伯利亚和我国北部，在我国种植历史较久。又名大力子(《本草纲目》)、白肌人参，亦称“东洋萝卜”、“黑萝卜”，别称“恶实”，是菊科(composite)牛蒡属直根系二年生大型草本植物。牛蒡具有非常丰富的营养价值，富含酚类、糖类、蛋白质、钙、铁、磷、生物碱、纤维素、维生素B及人体必需的17种氨基酸等，其中的胡萝卜素含量在各蔬菜中居于第二，蛋白质和钙的含量居根茎类之首。牛蒡的价值更体现在其药用及保健功能，具有疏散风热、利咽消肿、化痰止咳、解毒透疹等功效，是民间普遍食用的降血糖、抗衰老、补肾壮阳的特种保健食材。
多酚是在蔬菜、水果、谷物、豆类等植物性食物中发现的、具有潜在促进健康作用的化合物。多酚是一类广泛存在于植物体内的具有多元酚结构的次生代谢物，主要存在于植物的皮、根、叶、果中。狭义认为植物多酚是单宁(tannins)或鞣质，是多羟基酚类化合物的总称，其相对分子质量在500～3000之间；广义上，还包括小分子酚类化合物，如花青素、儿茶素、栎精、没食子酸、鞣花酸、熊果苷等天然酚类。
随着社会的进步和科技的发展，牛蒡越来越多的被消费者了解，也被越来越多的科研人员开发研究，并广泛应用于日常饮食、健康调理、保健等方面。我国是世界上人口最多的国家，伴随着人民生活水平的提高，养生和保健日益受到人们重视，市场需求量不断扩大。人体的细胞和组织在受到紫外线辐射、烟酒和环境污染等不良因素的影响时，会产生大量的自由基，打破平衡，产生机体的氧化损伤，因而安全健康的抗氧化类产品就显得尤为重要。牛蒡多酚的抗氧化功效十分显著，同时具有延缓衰老、抗病毒和细菌、增强人体免疫力、抗癌抗肿瘤等优势，因此目前市场上对牛蒡多酚类的产品需求与日俱增。
但由于多酚类化合物不稳定，易被降解，是其应用中的最大问题。因此，快速、高效的提取方法是有效降低牛蒡多酚在生产过程中被降解的关键。闪式提取法(闪提)是一项新的提取技术，其原理是在适当的溶剂下，利用高速机械剪切力和超速动态分子渗透作用，迅速破坏细胞组织，使组织细胞内部的化学成分(或有效成分)迅速达到组织内外平衡，从而达到快速提取的目的。但目前还未有利用闪式提取法提取牛蒡多酚的相关报道。
发明内容
针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种牛蒡多酚的高效提取方法。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明的第一方面，提供一种牛蒡多酚的高效提取方法，包括以下步骤：
(1)样品预处理：将牛蒡切成薄片，置于含柠檬酸钠的水溶液中浸泡10-15min，干燥，得到预处理后的牛蒡样品；
(2)闪式提取：向预处理后的牛蒡样品中加入25-35重量倍的乙醇溶液进行闪式提取，所述乙醇溶液的体积浓度为70-80％，提取电压为100V，提取时间为45-55s，提取次数为2-3次，得到牛蒡多酚提取液；
(3)微波干燥：将牛蒡多酚提取液进行微波干燥，得到牛蒡总多酚粉。
优选的，步骤(1)中，将牛蒡切成厚度为0.3-0.5cm的薄片。
优选的，步骤(1)中，含柠檬酸钠的水溶液中柠檬酸钠的质量浓度为2-4％。
优选的，步骤(2)中，所述乙醇溶液的加入量为预处理后的牛蒡样品的30重量倍。
优选的，步骤(2)中，所述乙醇溶液的浓度为75％。
优选的，步骤(2)中，提取时间为50s，提取次数为2次。
优选的，步骤(3)中，所述微波干燥控制真空压力为-0.1-0.05MPa，干燥温度为40-50℃，最终产品水分控制＜5％。
本发明的第二方面，提供上述方法制备得到的牛蒡多酚提取物。所述牛蒡多酚提取物中牛蒡多酚的含量≥78.9％。
本发明的有益效果：
采用本发明的方法可以对牛蒡多酚进行有效的提取，本发明通过对牛蒡的预处理，有效减少了牛蒡中的多酚类物质在闪提过程中的降解，提高了牛蒡多酚的提取率(牛蒡多酚的提取率达5.6％以上)，牛蒡多酚提取物中多酚含量在78.9％以上，可作为药物的有效部位直接使用，同时为进一步的纯化得到多酚类物质单体奠定了基础。体外抗氧化活性测试表明，本发明制备的牛蒡多酚提取物具有非常好的体外抗氧化活性。
附图说明
图1：多酚含量测定的标准曲线；
图2：蛋白质含量测定的标准曲线；
图3：多糖含量测定的标准曲线；
图4：黄酮含量测定的标准曲线。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
正如背景技术部分所介绍的，由于多酚类化合物不稳定，易被降解，是其应用中的最大问题，因此如何快速、高效提取多酚类化合物是目前亟需解决的问题。基于此，本发明的目的是提供一种牛蒡多酚的高效提取方法。
在本发明的一种实施方案中，给出的牛蒡多酚的提取方法包括以下步骤：
(1)样品预处理：将牛蒡切成厚度为0.3-0.5cm的薄片，置于质量浓度为2-4％的柠檬酸钠的水溶液中浸泡10-15min，干燥，得到预处理后的牛蒡样品；
(2)闪式提取：向预处理后的牛蒡样品中加入25-35重量倍的乙醇溶液进行闪式提取，所述乙醇溶液的体积浓度为70-80％，提取电压为100V，提取时间为45-55s，提取次数为2-3次，得到牛蒡多酚提取液；
(3)微波干燥：将牛蒡多酚提取液进行微波干燥，所述微波干燥控制真空压力为-0.1-0.05MPa，干燥温度为40-50℃，最终得到牛蒡总多酚粉，牛蒡总多酚粉中水分控制＜5％。
闪式提取法作为一种有发展潜力的新型提取技术，目前已被应用于多种有效成分的提取。但是，新鲜的牛蒡多酚中含水量较高，化学成分复杂，不适合直接通过闪式提取的方法提取多酚类物质。因此，本发明在闪式提取前对牛蒡样品进行了预处理。本发明首先将牛蒡切成厚度为0.3-0.5cm的薄片，然后置于质量浓度为2-4％的柠檬酸钠的水溶液中浸泡10-15min，干燥。将牛蒡进行切片，一方面可以使牛蒡样品能够与含柠檬酸钠的水溶液有更大的接触面，另一方面有利于后续的干燥、闪式提取。切片的厚度比较关键，若切片太厚，与柠檬酸钠水溶液的接触面积有限，后续干燥过程较慢；若切片太薄，容易造成营养成分的流失。经多次试验发现，牛蒡的切片厚度以0.3-0.5cm为宜。
由于牛蒡多酚的性质不稳定，极易被降解，而闪式提取是依靠转头的高速旋转，将药物磨碎，此过程会产生热量，因此，即使是采用闪提法也有可能会造成牛蒡多酚的降解，影响牛蒡多酚的提取率。本发明意外的发现，在闪式提取之前，将牛蒡用一定浓度的柠檬酸钠水溶液浸泡一段时间，可以有效提高牛蒡中多酚类物质的稳定性，减少其在提取过程中出现降解，提高了牛蒡多酚的提取率。柠檬酸钠水溶液的浓度和浸泡时间对于牛蒡多酚稳定性的保护效果而言是非常关键的，只有合适的浓度和浸泡时间才会对牛蒡中多酚类化合物的稳定性起到保护作用。本发明经多次试验发现，柠檬酸钠水溶液中柠檬酸钠的质量浓度为2-4％，浸泡时间为10-15min时，其对牛蒡中多酚类化合物的稳定性的保护效果最优。
在闪提过程中，提取电压的提高会促进物料细胞壁的破裂，有利于多酚类物质释放到溶液中去；但是，随着提取电压的提高，会导致提取液的温度提高，从而加快多酚的氧化。经综合考虑，本发明将提取电压设定为100V，该提取电压下，一方面可以保证多酚类物质能被充分的释放到溶液中去，另一方面可以尽量避免多酚的氧化。
与别的提取方法不同的是，闪提是需要将刀头浸入溶剂中，需要一定的溶剂高度，另外，物料在高速旋转过程中被粉碎，溶液黏度增加，为了提高成分在溶液中扩散速度，需要增加溶剂用量；当加液量达到一定程度时，提取率增势趋于和缓，但又因为过多的提取溶剂会增加后续的处理的工作量。综合考虑，本发明选择提取溶剂的加入量为预处理后的牛蒡样品的25-35重量倍，其中，提取溶剂的加入量为预处理后的牛蒡样品的30重量倍时，其提取效果最佳。
闪式提取中，随着提取时间的增加，牛蒡多酚的得率呈现增大趋势。在提取时间为20s至40s时，多酚提取率稳步上升，40s至50s范围内提取率有明显大幅上升，大于50s后多酚得率显现下降趋势。得率下降的出现可能是由于提取器的部件经长时间高速摩擦产生的热效应以及溶液中分子高速运动带来的热量使得一部分不稳定的多酚发生分解。综合以上考虑，选择50s的提取时间进行研究最为适宜。
为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例详细说明本申请的技术方案。
本发明实施例和对比例中所用的试验材料均为本领域常规的试验材料，均可通过商业渠道购买得到。
本发明实施例和对比例中所使用的牛蒡为购买于徐州市泉山区农副产品中心批发市场的新鲜牛蒡。
实施例1：牛蒡多酚的提取
(1)样品预处理：将牛蒡切成厚度为0.3-0.5cm的薄片，置于质量浓度为3％的柠檬酸钠的水溶液中浸泡15min，干燥，得到预处理后的牛蒡样品；
(2)闪式提取：向预处理后的牛蒡样品中加入30重量倍的乙醇溶液进行闪式提取，所述乙醇溶液的体积浓度为75％，提取电压为100V，提取时间为50s，提取次数为2次，得到牛蒡多酚提取液；
(3)微波干燥：将牛蒡多酚提取液进行微波干燥，所述微波干燥控制真空压力为-0.1-0.05MPa，干燥温度为45℃，最终得到牛蒡总多酚粉，牛蒡总多酚粉中水分控制＜5％。
实施例2：牛蒡多酚的提取
(1)样品预处理：将牛蒡切成厚度为0.3-0.5cm的薄片，置于质量浓度为2％的柠檬酸钠的水溶液中浸泡15min，干燥，得到预处理后的牛蒡样品；
(2)闪式提取：向预处理后的牛蒡样品中加入25重量倍的乙醇溶液进行闪式提取，所述乙醇溶液的体积浓度为80％，提取电压为100V，提取时间为45s，提取次数为3次，得到牛蒡多酚提取液；
(3)微波干燥：将牛蒡多酚提取液进行微波干燥，所述微波干燥控制真空压力为-0.1-0.05MPa，干燥温度为50℃，最终得到牛蒡总多酚粉，牛蒡总多酚粉中水分控制＜5％。
实施例3：牛蒡多酚的提取
(1)样品预处理：将牛蒡切成厚度为0.3-0.5cm的薄片，置于质量浓度为4％的柠檬酸钠的水溶液中浸泡10min，干燥，得到预处理后的牛蒡样品；
(2)闪式提取：向预处理后的牛蒡样品中加入35重量倍的乙醇溶液进行闪式提取，所述乙醇溶液的体积浓度为70％，提取电压为100V，提取时间为55s，提取次数为2次，得到牛蒡多酚提取液；
(3)微波干燥：将牛蒡多酚提取液进行微波干燥，所述微波干燥控制真空压力为-0.1-0.05MPa，干燥温度为40℃，最终得到牛蒡总多酚粉，牛蒡总多酚粉中水分控制＜5％。
对比例1：
(1)样品预处理：将牛蒡切成厚度为0.3-0.5cm的薄片，干燥，得到预处理后的牛蒡样品；
(2)闪式提取：向预处理后的牛蒡样品中加入30重量倍的乙醇溶液进行闪式提取，所述乙醇溶液的体积浓度为75％，提取电压为100V，提取时间为50s，提取次数为2次，得到牛蒡多酚提取液；
(3)微波干燥：将牛蒡多酚提取液进行微波干燥，所述微波干燥控制真空压力为-0.1-0.05MPa，干燥温度为45℃，最终得到牛蒡总多酚粉，牛蒡总多酚粉中水分控制＜5％。
对比例2：
牛蒡多酚提取液的制备方法同对比例1，区别在于：采用鼓风干燥法对牛蒡多酚提取液进行干燥，最终得到牛蒡总多酚粉，牛蒡总多酚粉中水分控制＜5％。
对比例3：
牛蒡多酚提取液的制备方法同对比例1，区别在于：采用冷冻干燥法对牛蒡多酚提取液进行干燥，最终得到牛蒡总多酚粉，牛蒡总多酚粉中水分控制＜5％。
对比例4：
牛蒡多酚提取液的制备方法同对比例1，区别在于：采用远红干燥法对牛蒡多酚提取液进行干燥，最终得到牛蒡总多酚粉，牛蒡总多酚粉中水分控制＜5％。
试验例1：牛蒡多酚提取物中主要成分测定
一、试验方法：
1.多酚含量的测定：
多酚含量的测定采用Folin-Ciocalteu比色法进行测定。
(1)标准曲线的绘制
标准溶液：准确称取没食子酸标准品0.0100g，用蒸馏水定容至100mL，得到浓度为0.10mg/mL的没食子酸标准液。在容量25mL的棕色容量瓶中分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL的标准液，加入10mL的蒸馏水，再分别加入Folin-Ciocalteau试剂1mL，摇晃均匀，在7min内加入10mL7％的Na2CO3溶液，充分混合后定容至25mL，室温，避光放置半小时以上，依次测出各溶液在765nm下的吸光值，以没食子酚标准液的浓度作为横坐标，其分别对应的吸光值为纵坐标，绘制出标准曲线(图1)。
(2)样品中多酚含量的测定
分别称取实施例1-实施例3，对比例1-对比例4制备的牛蒡多酚粉末0.1g，用蒸馏水定容至100mL，得到浓度均为1mg/mL的不同样品溶液。分别取0.5mL的样品溶液于25mL棕色容量瓶中，依照上述步骤分别测得不同溶液吸光度，带入标准曲线，计算出不同样品中牛蒡多酚含量。多酚含量按下式计算：
多酚含量/％＝(C×稀释倍数×V)/M×100％
式中，C——多酚提取液的质量浓度(μg/mL)；
V——提取液的体积(mL)；
M——牛蒡多酚粉末质量(g)。
2.蛋白质含量测定：
蛋白质含量的测定采用Bradford(考马斯亮蓝法)进行测定。
(1)标准曲线的绘制
称取20mg的牛血清白蛋白，用去离子水定容至100mL，即得到0.2mg/mL标准液，准确称考马斯亮蓝(G-250)10mg于烧杯中，然后加入5mL 90％乙醇，待其充分溶解后，再继续加入85％的磷酸溶液10mL，加入纯水，定容至100mL，混匀后即得到考马斯亮蓝溶液。
将二者按照一定量混合后，静置15min，在595nm下测其出其吸光度A595。以牛血清白蛋白溶液的浓度为横坐标，其对应的吸光值为纵坐标，绘制出蛋白质的标准曲线(图2)。
(2)样品中蛋白质含量的测定
分别称取实施例1-实施例3，对比例1-对比例4制备的牛蒡多酚粉末0.02g，用蒸馏水定容至100mL，混匀后即为0.2mg/mL的样品溶液。取0.2mL样品溶液加去离子水直至1mL，加入5mL考马斯亮蓝溶液混合均匀，静置15min，测出A595nm。将测得的吸光度值代入标准曲线公式，计算出牛蒡多酚中蛋白含量。
3.多糖含量测定：
多糖含量的测定采用苯酚硫酸-分光光度计法进行测定，以葡萄糖为标准品。
(1)标准曲线的绘制
配置葡萄糖标准溶液：用电子天平称取葡萄糖(在105℃干燥至恒重)0.1g于烧杯中加蒸馏水溶解，用玻璃棒准入100ml容量瓶中并定容至刻度，摇匀备用。再吸取该液10ml于100ml容量瓶中定容摇匀，此液即为100μg/mL的葡萄糖标准溶液。
配置苯酚溶液：将盛有苯酚的试剂瓶放入水浴锅进行1至2小时的恒温75℃水浴加热，待其充分溶解后吸取5ml苯酚溶液于100ml棕色容量瓶中用蒸馏水定容并摇晃均匀，即是浓度5％的苯酚溶液。由于苯酚的特殊性，其经光线照射或长期与空气接触会呈现粉色，所以要避光配置、保存且现配现用。
将配置好的各溶液摇晃均匀并静置15min以上，在490nm的波长下测量吸光度。绘制出多糖的标准曲线(图3)。
(2)样品中多糖含量的测定
分别称取实施例1-实施例3，对比例1-对比例4制备的牛蒡多酚粉末0.05g于100ml容量瓶进行定容，即得到0.5mg/ml样品溶液。取上述各样液1ml于试管中，按以上步骤进行吸光度测定，带入葡萄糖标准曲线进行计算，得出多糖含量。
4.黄酮含量测定：
黄酮含量的测定采用A.Hosu方法进行测定。
(1)标准曲线的绘制
准确称取芦丁标准品3.75mg，加去离子水直至25mL，摇晃均匀，留作备用。移0mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL放入试管当中，每个试管用30％的无水乙醇定容至5mL的体积，再加入0.3mL的5％NaNO2溶液，混合均匀，过6min以后，再加入0.3mL的10％Al(NO3)3溶液，过7min以后，继续往其中加入2mL浓度为1mol/L的NaOH溶液，震匀，静置15min，测得吸光度A510nm，把芦丁的浓度作为横坐标，把吸光度作为纵坐标，作标准曲线(图4)。
(2)样品中黄酮含量的测定
分别称取实施例1-实施例3，对比例1-对比例4制备的牛蒡多酚粉末0.1g，用蒸馏水定容至100mL，得到浓度均为1mg/mL的不同样品溶液。取4mL样品溶液于25mL棕色容量瓶当中并定容摇匀，取1ml样品溶液依照上述步骤分别测得不同溶液吸光度，带入标准曲线，便可以计算出牛蒡多酚中黄酮的含量大小。
二、试验结果：
不同实施例和对比例制备的牛蒡多酚提取物中多酚、蛋白质、多糖和黄酮的含量测定结果见表1。
表1：牛蒡多酚提取物中各成分的含量
组别 多酚 蛋白质 多糖 黄酮
实施例1 82.4％ 2.66％ 0.84％ 11.42％
实施例2 78.9％ 3.16％ 1.24％ 9.35％
实施例3 80.2％ 2.78％ 0.98％ 10.02％
对比例1 56.8％ 4.12％ 1.51％ 11.54％
对比例2 45.2％ 3.61％ 1.37％ 10.21％
对比例3 48.8％ 3.83％ 1.25％ 12.68％
对比例4 40.9％ 3.08％ 1.30％ 4.69％
由表1可以看出，采用本发明的方法提取得到的牛蒡多酚提取物中，其多酚含量高，最高可达82.4％，其他杂质成分含量少，为进一步的提纯获得多酚单体奠定了基础。
试验例2：牛蒡多酚提取物体外抗氧化能力的测定
一、试验方法：
1.DPPH自由基清除率：
称取实施例1、对比例1-4制备的牛蒡多酚样品0.1g，稀释于到100mL容量瓶中，得到1mg/mL的样品溶液。每种样品各取出0.50mL，加蒸馏水稀释至10mL。准确称取DPPH粉末0.004g，用95％乙醇进行定容直至100mL，即为浓度为0.04mg/mL的DPPH乙醇溶液。取2mL上述配置的样品溶液置于以4mL为规格的小塑料试管中，再加入2mLDPPH乙醇溶液，混匀过后，避光条件下放置至少30min，然后将其离心10min，测出A517nm，此值记为A1。取2mL上述配置的经不同干燥预处理的样品溶液，然后再向其中加入2mL浓度为95％乙醇，测得A517nm，此值记为A2，取2mLDPPH乙醇溶液，然后再向其中加2mL95％乙醇溶液，测得A517nm，此值记为A0。本实验需要用95％乙醇作为空白试剂。DPPH自由基清除率按下式计算：
清除率/％＝[1–(A1–A2)/A0]×100％
式中A0——2mL95％乙醇和2mLDPPH混合溶液吸光值；
A1——2mL样品溶液和2mLDPPH混合溶液吸光值；
A2——2mL样品溶液和2mL95％乙醇混合溶液吸光值。
2.羟自由基消除率：
称取实施例1、对比例1-4制备的牛蒡多酚样品0.1g，稀释于到100mL容量瓶中，得到1mg/mL的样品溶液。用移液枪分别移取1.0mL至容量瓶中，用纯水定容至10mL，得到浓度为0.1mg/mL的样品溶液。取上述各样品溶液1mL，依顺序分别加入到试管中，然后加2mL10mmol/LH2O2溶液，再加6mmol/L水杨酸-乙醇溶液0.5m，然后迅速加0.5mL现配的浓度为8mmol/L的FeSO4溶液，充分摇晃均匀，将它们放到37℃水浴锅中加热至少半小时，测得A510nm，将此值记为A1；将0.5mL的8mmol/LFeSO4溶液换成0.5mL蒸馏水，测其吸光度，此值记为A2；再将1mL各样品溶液换成1mL蒸馏水，测其吸光度，此值记为A3。牛蒡多酚对于羟自由基的消除率按下式计算：
消除率/％＝[1﹣(A1﹣A2)/A3]×100％
式中A1——(1mL样品溶液+2mL H2O2+0.5mL水杨酸-乙醇+0.5mLFeSO4)的吸光度；
A2——(1mL样品溶液+2mL H2O2+0.5mL水杨酸-乙醇+0.5mL蒸馏水)的吸光度；A3——(1mL蒸馏水+2mL H2O2+0.5mL水杨酸-乙醇+0.5mLFeSO4)的吸光度。
3.金属离子螯合能力测定：
准确称取实施例1、对比例1-4制备的牛蒡多酚样品0.1g，稀释于到100mL容量瓶中，得到1mg/mL的样品溶液。用移液枪分别移取各样品0.1mL于各个试管，并分别加适量纯水至2.7mL的体积，再在各试管中加入0.1mL现配的2mmol/mL的氯化亚铁溶液，随后加入0.2mL相同浓度的啡咯嗪溶液。充分混合均匀，静置10min左右让其反应完全，测得A562nm，此值记为A1，初始吸光值用去离子水代替样品溶液进入反应体系进行吸光值测定，此值记为A0。牛蒡多酚的金属离子螯合能力用以下公式得出：
清除率/％＝(1﹣A1/A0)×100％
式中：A1——样品溶液+0.1mL氯化亚铁+0.2mL啡咯嗪吸光值；
A0——蒸馏水+0.1mL氯化亚铁+0.2mL啡咯嗪吸光值。
二、试验结果：
实施例1和对比例1-4制备的牛蒡多酚提取物体外抗氧化能力的测定结果见表2。
表2：牛蒡多酚提取物体外抗氧化能力的测定结果
组别 DPPH自由基清除率 羟自由基消除率 金属离子螯合能力
实施例1 78％ 72％ 74％
对比例1 42％ 43％ 45％
对比例2 51％ 48％ 50％
对比例3 54％ 52％ 47％
对比例4 38％ 35％ 39％
由表2可以看出，与其他提取方法相比，采用本发明的方法提取得到的牛蒡多酚提取物具有更好的体外抗氧化能力。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种牛蒡多酚的高效提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)样品预处理：将牛蒡切成薄片，置于含柠檬酸钠的水溶液中浸泡10-15min，干燥，得到预处理后的牛蒡样品；
(2)闪式提取：向预处理后的牛蒡样品中加入25-35重量倍的乙醇溶液进行闪式提取，所述乙醇溶液的体积浓度为70-80％，提取电压为100V，提取时间为45-55s，提取次数为2-3次，得到牛蒡多酚提取液；
(3)微波干燥：将牛蒡多酚提取液进行微波干燥，得到牛蒡总多酚粉。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，将牛蒡切成厚度为0.3-0.5cm的薄片。
3.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(1)中，含柠檬酸钠的水溶液中柠檬酸钠的质量浓度为2-4％。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中，所述乙醇溶液的加入量为预处理后的牛蒡样品的30重量倍。
5.根据权利要求1或4所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中，所述乙醇溶液的浓度为75％。
6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(2)中，提取时间为50s，提取次数为2次。
7.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，步骤(3)中，所述微波干燥控制真空压力为-0.1-0.05MPa，干燥温度为40-50℃，最终产品水分控制＜5％。
8.权利要求1-7任一项所述的提取方法制备得到的牛蒡多酚提取物。
9.根据权利要求8所述的牛蒡多酚提取物，其特征在于，所述牛蒡多酚提取物中牛蒡多酚的含量≥78.9％。
CN201810751903.1A 2018-07-10 2018-07-10 一种牛蒡多酚的高效提取方法 Pending CN108721356A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810751903.1A CN108721356A (zh) 2018-07-10 2018-07-10 一种牛蒡多酚的高效提取方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810751903.1A CN108721356A (zh) 2018-07-10 2018-07-10 一种牛蒡多酚的高效提取方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108721356A true CN108721356A (zh) 2018-11-02

Family

ID=63926586

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810751903.1A Pending CN108721356A (zh) 2018-07-10 2018-07-10 一种牛蒡多酚的高效提取方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108721356A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111990452A (zh) * 2020-07-29 2020-11-27 江苏省农业科学院 一种搭载牛蒡多酚的水产品涂膜保鲜液及制备和使用方法

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
任媛媛 等: "牛蒡多酚提取护色和提取工艺条件的优化研究", 《食品工业科技》 *
孟庆举 等: "闪式提取技术的研究进展", 《中国实验方剂学杂志》 *
巫永华 等: "黄精多酚的闪式提取及抗氧化活性研究", 《食品科技》 *
张钟元 等: "不同干燥方式对牛蒡片多酚含量及抗氧化能力的影响", 《江苏农业学报》 *
李华: "《葡萄与葡萄酒研究进展-葡萄酒学院年报 2002》", 3 April 2002, 陕西人民出版社 *
李斌: "《食品酶学与酶工程》", 30 September 2017, 中国农业大学出版社 *
王长凯 等: "牛蒡多酚的闪式提取工艺优化", 《农产品加工》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111990452A (zh) * 2020-07-29 2020-11-27 江苏省农业科学院 一种搭载牛蒡多酚的水产品涂膜保鲜液及制备和使用方法
CN111990452B (zh) * 2020-07-29 2023-08-11 江苏省农业科学院 一种搭载牛蒡多酚的水产品涂膜保鲜液及制备和使用方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Farhadi et al. Determination of phenolic compounds content and antioxidant activity in skin, pulp, seed, cane and leaf of five native grape cultivars in West Azerbaijan province, Iran
Vamanu et al. Antioxidant capacity and the correlation with major phenolic compounds, anthocyanin, and tocopherol content in various extracts from the wild edible Boletus edulis mushroom
Serafini et al. Effect of acute ingestion of fresh and stored lettuce (Lactuca sativa) on plasma total antioxidant capacity and antioxidant levels in human subjects
Zhao et al. Different thermal drying methods affect the phenolic profiles, their bioaccessibility and antioxidant activity in Rhodomyrtus tomentosa (Ait.) Hassk berries
De Sá et al. Extraction yields and anti‐oxidant activity of proanthocyanidins from different parts of grape pomace: effect of mechanical treatments
CN101284022B (zh) 植物多酚类物质的络合萃取方法
AU2020103864A4 (en) A method for preparing Arctium lappa L Polyphenol by compound enzyme treatment combined with ultrasonic flash extraction
Liu et al. Antioxidant activities of extracts from sarcocarp of Cotoneaster multiflorus
CN106266390B (zh) 一种乌拉草提取物及其应用
Singh et al. Extraction of antioxidant phytoconstituents from onion waste
Nath et al. Phytochemical and proximate analysis of papaya (Carica papaya) leaves
CN104983915B (zh) 一种黑果枸杞天然复合抗氧化剂的制备方法
CN106344429A (zh) 一种金针菇精华液及其制备方法
CN107788325A (zh) 一种安全环保食品保鲜剂及其制备方法
CN108721356A (zh) 一种牛蒡多酚的高效提取方法
CN109744540A (zh) 一种黑蒜中类黑精的提取方法
CN112168873B (zh) 一种响应面法优化平枝栒子总黄酮的提取工艺
Amadou et al. Effect of boiling on the cytotoxic and antioxidant properties of aqueous fruit extract of desert date, Balanites aegyptiaca (L) Delile
CN109200082A (zh) 一种从余甘子中提取具有抗氧化活性同时具有抑菌活性物质的方法
Bazarnova et al. Isolation and analysis of extractives from white cinquefoil (Potentilla alba L.) grown under different conditions
CN102018731B (zh) 一种从色钉菇中提取抗氧化活性物质的方法及其应用
CN107648109A (zh) 一种美白补水专效精华液及其制备方法
Wanna et al. The Effect of Coconut Water and Boiling on Antioxidant Activity and Total Phenolic Contents in Schizophyllum commune Fr.
CN110037953B (zh) 一种仙人掌果提取物保湿水及其制备方法
Sinha et al. Antioxidant potential of the ripe fruits of Flacourtia jungomas (Lour.) Raeus.

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20181102