CN101851265A - 一种从干罗汉果中提取多种活性成分的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从干罗汉果中提取多种活性成分的方法，属于天然产物有效成分的提取分离技术领域。先将干罗汉果去核，再将果皮和果肉进行加水闪提、离心得沉淀物和上清。上清分别经两次XAD层析，或上聚酰胺-XAD层析，D213柱脱色，得甜苷、多酚；上述沉淀物经酸性溶液提取，D113柱分离得生物碱；废液浓缩，乙醇分级沉淀得多糖、低聚糖；废渣用胃酶水解得多糖、低聚糖、氨基酸。本发明采用先进的提取技术，实现了对罗汉果药材的综合利用，降低了生产成本，提高产品的附加值和经济效益。
Description
技术领域
本发明涉及一种天然产物的分离方法，更特别地说，是指一种采用闪式辅助提取技术，通过树脂分离得到罗汉果中多种活性成分的制备方法。
背景技术
在2005年出版的《中国药典》中收录，罗汉果为葫芦科植物。其成熟果实味甘、性凉，具有清热润肺，滑肠通便等功效。罗汉果是我国传统的药用植物，其营养价值高，富含糖、蛋白质、维生素、脂肪酸及多种氨基酸和微量元素，被誉为“东方神果”。
罗汉果中的主要活性成分是强甜味的三萜类成分——罗汉果甜苷，约占干果重量的4％。它是一类低热量的天然甜味剂，比蔗糖甜300倍，但热量仅为蔗糖的五十分之一。因罗汉果甜苷甜度高，热量低，水溶性及稳定性好，食用安全，我国已批准该产品为食品添加剂，对肥胖症及糖尿病患者可作为甜味剂代替蔗糖。
因目前只重视对罗汉果甜苷的提取，丢弃残渣和其余成分，这样不仅造成资源的浪费，而且给环境带来污染。本发明专利申请采用闪式辅助提取技术，结合树脂层析，分离出多种有效成分，使罗汉果药材得到最大限度的利用，从而降低生产成本，提高产品的附加值。
发明内容
本发明的目的是提出一种从干罗汉果中提取多种活性成分的方法，属于天然产物有效成分的提取分离技术领域。先将干罗汉果的果皮、果肉分开，再将皮或肉分别加水闪提，离心得沉淀物和上清。上清分别经两次XAD层析，或上聚酰胺-XAD层析，D213柱脱色，得甜苷、类黄酮；上述沉淀物经酸性溶液提取，D113柱分离得生物碱；废液浓缩，乙醇分级沉淀得多糖、低聚糖；废渣用胃酶水解得多糖、低聚糖、氨基酸。本发明采用先进的提取技术，实现了对罗汉果药材的综合利用，降低了生产成本，提高产品的附加值和经济效益。
本发明的从干罗汉果中提取多种活性成分包括有下列步骤：
第一步：闪式辅助制第一液态混合物
将去核的干罗汉果和去离子水放入提取容器中，在温度22℃～30℃下浸泡30min～120min后，在转速3500r/min～5500r/min下搅拌破碎，并匀浆30s～60s后制得第一液态混合物；
用量：100ml的去离子水中添加5g～15g的去核干罗汉果；
第二步：离心分离
将第一液态混合物装入离心机的离心管中，在转速4000r/min～5000r/min下离心分离10min～20min后，取下离心管，获得第一上层清液和第一沉淀物；
第三步：制甜苷
(3-A)在第一上层清液中加入质量百分比浓度0.5％～1％的NaCl，再用质量百分比浓度25％的NaOH调节第一上层清液的pH值为8～10，制得第一上柱液；
(3-B)将第一上柱液通过XAD型大孔吸附树脂柱吸附甜苷，未吸附的成分流出柱体制得第一收集液；
(3-C)待第一上柱液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第一收集液中无甜苷；
(3-D)柱体再用质量百分比浓度40％～60％的乙醇洗脱甜苷，乙醇洗脱液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度40℃～50℃下浓缩至浸膏，然后加入50ml～100ml去离子水溶解浸膏制得第二上柱液；
(3-E)将第二上柱液通过D型大孔吸附树脂层析柱，吸附色素，未吸附的成分流出柱体制得第二收集液；
(3-F)将第二收集液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度60℃～80℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第一产物——甜苷；
第四步：制多酚
(4-A)将上述第一收集液用质量百分比浓度18％的HCl调节pH值为3～5，制得第三上柱液；
(4-B)将第三上柱液通过XAD型大孔吸附树脂柱，吸附多酚，未吸附的成分流出柱体制得第三收集液；
(4-C)待第三上柱液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第三收集液中无多酚；
(4-D)柱体再用质量百分比浓度50％～80％的乙醇洗脱多酚，乙醇洗脱液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度40℃～50℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第二产物——多酚；
第五步：制游离多糖和游离低聚糖
(5-A)将上述第三收集液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度50℃～70℃下浓缩至浸膏，然后在浸膏中加入质量百分比浓度70％～80％的乙醇，在0℃～4℃条件下静置20min～40min后制得第一醇沉混合物；
(5-B)将第一醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第二上层清液和第二沉淀物；
(5-D)在第二沉淀物中加入20ml～50ml无水乙醇溶解后，装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第三上层清液和第三沉淀物，弃去第三上层清液；
(5-E)第三沉淀物在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第三产物——游离多糖；
(5-F)在上述第二上层清液中加入1500ml～2000ml乙醇，并在0℃～4℃条件下静置20min～40min后，制得第二醇沉混合物；所述乙醇的质量百分比浓度为70％～80％；
(5-G)将第二醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第四上层清液和第四沉淀物，弃去第四上层清液；
(5-H)第四沉淀物在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第四产物——游离低聚糖；
第六步：制生物碱
(6-A)在上述第一沉淀物中加200ml～400ml的HCl，在转速为100r/min～500r/min、水浴温度40℃～60℃条件下搅拌反应180min～360min后，制得第二液态混合物；所述HCl的质量百分比浓度为1％；
(6-B)将第二液态混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第五上层清液和第五沉淀物；
(6-C)将第五上层清液通过D型离子交换树脂层析柱，吸附生物碱，未吸附的成分流出柱体制得第四收集液；
(6-D)待第五上层清液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第四收集液中无生物碱；
(6-E)柱体再用质量百分比浓度为3％的HCl洗脱生物碱，HCl洗脱液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度50℃～70℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第五产物——生物碱；
第七步：制结合多糖和结合低聚糖
(7-A)在第五沉淀物中加入300ml～600ml去离子水，0.5g～1.0g胃蛋白酶，用HCl调节pH值为2～3，在转速为100r/min～500r/min、水浴温度40℃～60℃条件下搅拌反应300min～600min后，再在水浴温度100℃条件下反应2min～3min，然后冷却至22℃～35℃，制得酶解液；所述HCl的质量百分比浓度为18％；
(7-B)将酶解液装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第六上层清液和第六沉淀物，弃去第六沉淀物；
(7-C)用质量百分比浓度25％的NaOH调节第六上层清液的pH值为6～8，再装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第七上层清液和第七沉淀物，弃去第七沉淀物；
(7-D)将第七上层清液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度60℃～80℃下浓缩至50ml～100ml；再加入150ml～200ml乙醇，并在0℃～4℃条件下静置20min～40min后，制得第三醇沉混合物；所述乙醇的质量百分比浓度为70％～80％；
(7-E)将第三醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第八上层清液和第八沉淀物；
(7-F)将第八沉淀物在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第六产物——结合多糖；
(7-G)在上述第八上层清液中加入1000ml～1500ml乙醇，0℃～4℃条件下静置20min～40min后，制得第四醇沉混合物；所述乙醇的质量百分比浓度为70％～80％；
(7-H)将第四醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第九上层清液和第九沉淀物；
(7-I)第九沉淀物在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第七产物——结合低聚糖；
第八步：制氨基酸
将上述第九上层清液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度40℃～50℃下浓缩至浸膏；该浸膏然后在温度50℃～70℃下干燥5h～10h后制得第八产物——氨基酸。
所述的从干罗汉果中提取多种活性成分的方法，100g的干罗汉果中能够提取出纯度为90.16±3％的3.58g～3.76g的甜苷、8.04g～9.32g的生物碱、纯度为68.63±3％的3.22g～3.36g的多酚、纯度为50.13±3％的12.13g～12.41g的游离多糖、纯度为28.97±3％的11.35g～11.72g的游离低聚糖、纯度为46.88±3％的2.24g～2.61g的结合多糖、纯度为34.29±3％的2.10g～2.47g的结合低聚糖、纯度为60.13±3％的8.09g～8.78g的氨基酸。
本发明制备方法的优点在于：
(1)在本发明中的第一步中采用闪式辅助提取技术，与传统方法相比，在室温下操作，条件温和，不耐热的活性成分免遭破坏，而且提取时间短，溶剂用量少，提取效率高。
(2)聚酰胺树脂层析柱除鞣质等杂质效果好，可减轻XAD-16柱和D213柱的压力，大孔树脂用量可减少50％，获得的甜苷纯度高，收率高，色泽好，且类黄酮纯度高。
(3)本发明采用XAD-16层析，甜苷收率和纯度都高于其它非极性大孔树脂。
(4)本发明首次发现罗汉果含大量生物碱，这对研究罗汉果生物碱的活性和作用机理，找到一个新的途径。
(5)本发明从层析后的废液废渣中提取了生物碱、多糖、低聚糖和氨基酸。这样综合利用罗汉果，既避免资源的浪费，又降低了成本，提高了经济效益。
附图说明
图1是本发明从干罗汉果中提取多种活性成分的工艺流程图。
图2是采用实施例1的方法制得罗汉果中甜苷的高效液相色谱图。
图2A是广西桂林思特新技术公司出售罗汉果中甜苷的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面将结合附图和实施例对本发明做进一步的详细说明。
参见图1所示，本发明是一种从干罗汉果中提取出多种活性成分的方法，该提取方法中包括有下列步骤：
第一步：闪式辅助制第一液态混合物
将去核的干罗汉果和去离子水放入提取容器中，在温度22℃～30℃下浸泡30min～120min后，在转速3500r/min～5500r/min下搅拌破碎，并匀浆30s～60s后制得第一液态混合物；
用量：100ml的去离子水中添加5g～15g的去核干罗汉果；
此步骤中的提取容器选取北京金鼎科技发展有限公司生产的JHBE-50型闪式提取器。
在本发明中，在22℃～30℃低温环境下采用闪式提取方式对浸泡在去离子水中的干罗汉果进行快速匀浆，不破坏罗汉果的活性成分的同时提取效率高。
第二步：离心分离
将第一液态混合物装入离心机的离心管中，在转速4000r/min～5000r/min下离心分离10min～20min后，取下离心管，获得第一上层清液和第一沉淀物；
在本发明中，离心后的第一液态混合物在离心管中分为第一上层清液和第一沉淀物；为了获得多种活性成分(即多个产物，如甜苷、生物碱、多酚、游离多糖、游离低聚糖、结合多糖、结合低聚糖和氨基酸)，本发明将分别对第一上层清液和第一沉淀物进行后续处理进行详细说明。
第三步：制甜苷
(3-A)在第一上层清液中加入0.5％～1％(质量百分比浓度)的NaCl，再用25％(质量百分比浓度)的NaOH调节第一上层清液的pH值为8～10，制得第一上柱液；
(3-B)将第一上柱液通过XAD型大孔吸附树脂柱吸附甜苷，未吸附的成分流出柱体制得第一收集液；
(3-C)待第一上柱液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第一收集液中不含有甜苷；
在本发明中，柱液中是否有甜苷的检测方法为薄层色谱法(色谱条件：硅胶G薄层板，展开剂为正丁醇-乙醇-水，体积比8∶2∶3，甜苷的比移值为0.4)；
(3-D)柱体再用40％～60％(质量百分比浓度)的乙醇洗脱甜苷，乙醇洗脱液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度40℃～50℃下浓缩至浸膏，然后加入50ml～100ml去离子水溶解浸膏制得第二上柱液；
(3-E)将第二上柱液通过D型大孔吸附树脂层析柱，吸附色素，未吸附的成分流出柱体制得第二收集液；
(3-F)将第二收集液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度60℃～80℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第一产物(即甜苷)。
从罗汉果中提取得到的甜苷是一类低热量的天然甜味剂，比蔗糖甜300倍，但热量仅为蔗糖的五十分之一。我国已批准该产品为食品添加剂，对肥胖症及糖尿病患者可作为甜味剂代替蔗糖。
1995年，在《中国中药杂志》上“罗汉果中总皂甙的含量测定”文献中结果得到罗汉果中一般含甜苷3.81％。采用本发明工艺制得的甜苷收率(即甜苷重量占原料重量的百分比)较高，达到3.76％，说明本工艺对甜苷进行了更有效的提取；与市售甜苷样品(广西桂林思特新技术公司，甜苷含量70％左右)相比，本工艺制得的甜苷纯度较好，达到90％以上。
第四步：制多酚
(4-A)将上述第一收集液用18％(质量百分比浓度)的HCl调节pH值为3～5，制得第三上柱液；
(4-B)将第三上柱液通过XAD型大孔吸附树脂柱，吸附多酚，未吸附的成分流出柱体制得第三收集液；
(4-C)待第三上柱液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第三收集液中不含有多酚；
在本发明中，柱液中是否有多酚的检测方法为紫外分光光度法；
(4-D)柱体再用50％～80％(质量百分比浓度)的乙醇洗脱多酚，乙醇洗脱液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度40℃～50℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第二产物(多酚)；
现代医学研究表明，多酚类物质具有降血糖、降血脂、抗氧化、清除机体内自由基，抗衰老，增强机体免疫力的功能。
第五步：制游离多糖和游离低聚糖
(5-A)将上述第三收集液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度50℃～70℃下浓缩至浸膏，然后在浸膏中加入质量百分比浓度为70％～80％的乙醇，在0℃～4℃条件下静置20min～40min后制得第一醇沉混合物；
(5-B)将第一醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第二上层清液和第二沉淀物；
(5-D)在第二沉淀物中加入20ml～50ml无水乙醇溶解后，装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第三上层清液和第三沉淀物，弃去第三上层清液；
(5-E)第三沉淀物在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第三产物(游离多糖)；
(5-F)在上述第二上层清液中加入1500ml～2000ml的乙醇(质量百分比浓度为70％～80％)后，在0℃～4℃条件下静置20min～40min，制得第二醇沉混合物；
(5-G)将第二醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第四上层清液和第四沉淀物，弃去第四上层清液；
(5-H)第四沉淀物在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第四产物(游离低聚糖)；
第六步：制生物碱
(6-A)在上述第一沉淀物中加200ml～400ml的HCl(质量百分比浓度为1％)，在转速为100r/min～500r/min、水浴温度40℃～60℃条件下搅拌反应180min～360min后，制得第二液态混合物；
(6-B)将第二液态混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第五上层清液和第五沉淀物；
(6-C)将第五上层清液通过D型离子交换树脂层析柱，吸附生物碱，未吸附的成分流出柱体制得第四收集液；
(6-D)待第五上层清液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第四收集液中不含有生物碱；
在本发明中，生物碱检测方法为碘化铋钾反应，若出现紫棕色沉淀则判断有生物碱存在；
(6-E)柱体再用质量百分比浓度为3％的HCl洗脱生物碱，HCl洗脱液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度50℃～70℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第五产物(生物碱)；
采用第六步骤的工艺从罗汉果中提取出生物碱。生物碱是一类具有抗菌消炎、抗肿瘤等功能的活性物质。
第七步：制结合多糖和结合低聚糖
(7-A)在第五沉淀物中加入300ml～600ml去离子水，0.5g～1.0g胃蛋白酶，用HCl(质量百分比浓度为18％)调节pH值为2～3，在转速为100r/min～500r/min、水浴温度40℃～60℃条件下搅拌反应300min～600min后，再在水浴温度100℃条件下反应2min～3min，然后冷却至22℃～35℃，制得酶解液；
(7-B)将酶解液装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第六上层清液和第六沉淀物，弃去第六沉淀物；
(7-C)用25％(质量百分比浓度)的NaOH调节第六上层清液的pH值为6～8，再装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第七上层清液和第七沉淀物，弃去第七沉淀物；
(7-D)将第七上层清液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度60℃～80℃下浓缩至50ml～100ml，再加入150ml～200ml的乙醇(质量百分比浓度为70％～80％)后，在0℃～4℃条件下静置20min～40min，制得第三醇沉混合物；
(7-E)将第三醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第八上层清液和第八沉淀物；
(7-F)将第八沉淀物在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第六产物(结合多糖)；
(7-G)在上述第八上层清液中加入1000ml～1500ml的乙醇(质量百分比浓度为70％～80％)后，在0℃～4℃条件下静置20min～40min，制得第四醇沉混合物；
(7-H)将第四醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第九上层清液和第九沉淀物；
(7-I)第九沉淀物在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第七产物(结合低聚糖)；
多糖在抗病毒、抗凝血、抗衰老等方面发挥着重要的生物活性作用；低聚糖具有提高机体免疫力、抗菌消炎、降血脂、防治龋齿和护肝等多种生物活性。
第八步：制氨基酸
将上述第九上层清液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度40℃～50℃下浓缩至浸膏，浸膏再在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第八产物(氨基酸)。
氨基酸是生物体内构成蛋白质分子的基本单位，与生物的生命活动有着密切的关系，它是生物体内不可缺少的营养成分之一。氨基酸在体内具有特殊的生理功能，一些氨基酸还具有治疗作用，例如谷氨酸、精氨酸、天门冬氨酸、胱氨酸等用于治疗肝病疾病、消化道疾病、脑病、心血管病、呼吸道疾病以及用于提高肌肉活力、儿科营养和解毒等。
在本发明中，三个实施例中提取制得的各产物均以100g的干罗汉果进行计量。
实施例1：
本实施从干罗汉果中提取出多种活性成分包括有下列步骤：
第一步：闪式辅助制第一液态混合物
将去核的干罗汉果和去离子水放入闪式提取容器中，在温度25℃下浸泡120min后，在转速3500r/min下搅拌破碎，并匀浆60s后制得第一液态混合物；
用量：100ml的去离子水中添加10g的去核干罗汉果；
第二步：离心分离
将第一液态混合物装入离心机的离心管中，在转速5000r/min下离心分离15min后，取下离心管，获得第一上层清液和第一沉淀物；
第三步：制甜苷
(3-A)在第一上层清液中加入0.65％(质量百分比浓度)的NaCl，再用25％
(质量百分比浓度)的NaOH调节第一上层清液的pH值为9.5，制得第一上柱液；
(3-B)将第一上柱液通过XAD型大孔吸附树脂柱吸附甜苷，未吸附的成分流出柱体制得第一收集液；
(3-C)待第一上柱液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第一收集液中不含有甜苷；
(3-D)柱体再用60％(质量百分比浓度)的乙醇洗脱甜苷，乙醇洗脱液在压力0.09MPa、温度40℃下浓缩至浸膏，然后加入80ml去离子水溶解浸膏制得第二上柱液；
(3-E)将第二上柱液通过D型大孔吸附树脂层析柱，吸附色素，未吸附的成分流出柱体制得第二收集液；
(3-F)将第二收集液在压力0.09MPa、温度70℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为60℃条件下干燥8h后制得第一产物(即甜苷)。
100g的干罗汉果中可以提取出纯度为90.16％的3.76g的甜苷。纯度采用高效液相色谱法测试，如图2、图2A所示，两图相比，本发明方法制得的甜苷纯度略高。色谱条件：Waters Sunfire C18色谱柱(150mm×4.6mm，5μm)；流动相A为水，B为乙腈；梯度洗脱条件为0～40min，5～68％乙腈；流速为1ml/min；检测波长为203nm；进样量为15μl；柱温为22℃。
第四步：制多酚
(4-A)将上述第一收集液用18％(质量百分比浓度)的HCl调节pH值为4.5，制得第三上柱液；
(4-B)将第三上柱液通过XAD型大孔吸附树脂柱，吸附多酚，未吸附的成分流出柱体制得第三收集液；
(4-C)待第三上柱液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第三收集液中不含有多酚；
在本发明中，多酚检测方法为紫外分光光度法；
(4-D)柱体再用75％(质量百分比浓度)的乙醇洗脱多酚，乙醇洗脱液在压力0.09MPa、温度40℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为50℃条件下干燥8h后制得第二产物(多酚)；
100g的干罗汉果中可以提取出纯度为68.63％的3.36g的多酚。纯度测试采用用分光光度计测定在760nm下的吸光度(紫外分光光度法)。
第五步：制游离多糖和游离低聚糖
(5-A)将上述第三收集液在压力0.09MPa、温度60℃下浓缩至浸膏，然后在浸膏中加入质量百分比浓度为75％的乙醇，在4℃条件下静置30min后制得第一醇沉混合物；
(5-B)将第一醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为5000r/min的条件下离心分离15min后，取下离心管，得到第二上层清液和第二沉淀物；
(5-D)在第二沉淀物中加入30ml无水乙醇溶解后，装入离心机的离心管中，在转速为5000r/min的条件下离心分离15min后，取下离心管，得到第三上层清液和第三沉淀物，弃去第三上层清液；
(5-E)第三沉淀物在温度为60℃条件下干燥8h后制得第三产物(游离多糖)；
(5-F)在上述第二上层清液中加入1800ml的乙醇(质量百分比浓度为75％)后，在4℃条件下静置30min，制得第二醇沉混合物；
(5-G)将第二醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为5000r/min的条件下离心分离15min后，取下离心管，得到第四上层清液和第四沉淀物，弃去第四上层清液；
(5-H)第四沉淀物在温度为60℃条件下干燥8h后制得第四产物(游离低聚糖)；
100g的干罗汉果中可以提取出纯度为50.13％的12.41g的游离多糖、纯度为28.97％的11.72g的游离低聚糖。纯度测试采用用分光光度计测定在620nm下的吸光度(紫外分光光度法)。
第六步：制生物碱
(6-A)在上述第一沉淀物中加350ml的HCl(质量百分比浓度为1％)，在转速为300r/min、水浴温度50℃条件下搅拌反应240min后，制得第二液态混合物；
(6-B)将第二液态混合物装入离心机的离心管中，在转速为5000r/min的条件下离心分离15min后，取下离心管，得到第五上层清液和第五沉淀物；
(6-C)将第五上层清液通过D型离子交换树脂层析柱，吸附生物碱，未吸附的成分流出柱体制得第四收集液；
(6-D)待第五上层清液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第四收集液中不含有生物碱；
在本发明中，生物碱检测方法为碘化铋钾反应，若出现紫棕色沉淀则判断有生物碱存在；
(6-E)柱体再用质量百分比浓度为3％的HCl洗脱生物碱，HCl洗脱液在压力0.09MPa、温度70℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为70℃条件下干燥5h后制得第五产物(生物碱)；
100g的干罗汉果中可以提取出8.32g的生物碱。由于生物碱在干罗汉果中为首次发现，并且天然产物中生物碱存在的种类较多，故发明人未对其进行纯度测试。
第七步：制结合多糖和结合低聚糖
(7-A)在第五沉淀物中加入300ml去离子水，0.5g胃蛋白酶，用HCl(质量百分比浓度为18％)调节pH值为2.5，在转速为300r/min、水浴温度50℃条件下搅拌反应600min后，再在水浴温度100℃条件下反应2min，然后冷却至25℃，制得酶解液；
(7-B)将酶解液装入离心机的离心管中，在转速为5000r/min的条件下离心分离15min后，取下离心管，得到第六上层清液和第六沉淀物，弃去第六沉淀物；
(7-C)用25％(质量百分比浓度)的NaOH调节第六上层清液的pH值为7，再装入离心机的离心管中，在转速为5000r/min的条件下离心分离15min后，取下离心管，得到第七上层清液和第七沉淀物，弃去第七沉淀物；
(7-D)将第七上层清液在压力0.09MPa、温度70℃下浓缩至60ml，再加入200ml的乙醇(质量百分比浓度为70％)后，在4℃条件下静置30min，制得第三醇沉混合物；
(7-E)将第三醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为5000r/min的条件下离心分离15min后，取下离心管，得到第八上层清液和第八沉淀物；
(7-F)将第八沉淀物在温度为70℃条件下干燥5h后制得第六产物(结合多糖)；
(7-G)在上述第八上层清液中加入1500ml的乙醇(质量百分比浓度为70％)后，在4℃条件下静置30min，制得第四醇沉混合物；
(7-H)将第四醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为5000r/min的条件下离心分离15min后，取下离心管，得到第九上层清液和第九沉淀物；
(7-I)第九沉淀物在温度为70℃条件下干燥5h后制得第七产物(结合低聚糖)；
100g的干罗汉果中可以提取出纯度为46.88％的2.61g的结合多糖、纯度为34.29％的2.41g的结合低聚糖。纯度测试采用用分光光度计测定在620nm下的吸光度(紫外分光光度法)。
第八步：制氨基酸
将上述第九上层清液在压力0.09MPa、温度45℃下浓缩至浸膏，浸膏再在温度为60℃条件下干燥8h后制得第八产物(氨基酸)。
100g的干罗汉果中可以提取出纯度为60.13％的8.32g的氨基酸。纯度采用氨基酸测定仪测试。
实施例2：
本实施从干罗汉果中提取出多种活性成分包括有下列步骤：
第一步：闪式辅助制第一液态混合物
将去核的干罗汉果和去离子水放入提取容器中，在温度30℃下浸泡30min后，在转速5500r/min下搅拌破碎，并匀浆30s后制得第一液态混合物；
用量：100ml的去离子水中添加5g的去核干罗汉果；
第二步：离心分离
将第一液态混合物装入离心机的离心管中，在转速4000r/min下离心分离20min后，取下离心管，获得第一上层清液和第一沉淀物；
第三步：制甜苷
(3-A)在第一上层清液中加入1％(质量百分比浓度)的NaCl，再用25％(质量百分比浓度)的NaOH调节第一上层清液的pH值为8，制得第一上柱液；
(3-B)将第一上柱液通过XAD型大孔吸附树脂柱吸附甜苷，未吸附的成分流出柱体制得第一收集液；
(3-C)待第一上柱液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第一收集液中不含有甜苷；
在本发明中，甜苷检测方法为薄层色谱法(色谱条件：硅胶G薄层板，展开剂为正丁醇-乙醇-水，体积比8∶2∶3，甜苷的比移值为0.4)；
(3-D)柱体再用40％(质量百分比浓度)的乙醇洗脱甜苷，乙醇洗脱液在压力0.08MPa、温度50℃下浓缩至浸膏，然后加入50ml去离子水溶解浸膏制得第二上柱液；
(3-E)将第二上柱液通过D型大孔吸附树脂层析柱，吸附色素，未吸附的成分流出柱体制得第二收集液；
(3-F)将第二收集液在压力0.08MPa、温度80℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为70℃条件下干燥5h后制得第一产物(即甜苷)。
100g的干罗汉果中可以提取出纯度为89.77％的3.58g的甜苷。
第四步：制多酚
(4-A)将上述第一收集液用18％(质量百分比浓度)的HCl调节pH值为3，制得第三上柱液；
(4-B)将第三上柱液通过XAD型大孔吸附树脂柱，吸附多酚，未吸附的成分流出柱体制得第三收集液；
(4-C)待第三上柱液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第三收集液中不含有多酚；
在本发明中，多酚检测方法为紫外分光光度法；
(4-D)柱体再用50％(质量百分比浓度)的乙醇洗脱多酚，乙醇洗脱液在压力0.08MPa、温度50℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为70℃条件下干燥5h后制得第二产物(多酚)；
100g的干罗汉果中可以提取出纯度为67.03％的3.22g的多酚。
第五步：制游离多糖和游离低聚糖
(5-A)将上述第三收集液在压力0.08MPa、温度70℃下浓缩至浸膏，然后 在浸膏中加入质量百分比浓度为70％的乙醇，在0℃条件下静置20min后制得第一醇沉混合物；
(5-B)将第一醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min的条件下离心分离20min后，取下离心管，得到第二上层清液和第二沉淀物；
(5-D)在第二沉淀物中加入50ml无水乙醇溶解后，装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min的条件下离心分离20min后，取下离心管，得到第三上层清液和第三沉淀物，弃去第三上层清液；
(5-E)第三沉淀物在温度为70℃条件下干燥5h后制得第三产物(游离多糖)；
(5-F)在上述第二上层清液中加入1500ml的乙醇(质量百分比浓度为70％)后，在0℃条件下静置20min，制得第二醇沉混合物；
(5-G)将第二醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min的条件下离心分离20min后，取下离心管，得到第四上层清液和第四沉淀物，弃去第四上层清液；
(5-H)第四沉淀物在温度为70℃条件下干燥5h后制得第四产物(游离低聚糖)；
100g的干罗汉果中可以提取出纯度为49.11％的12.13g的游离多糖、纯度为28.01％的11.35g的游离低聚糖。
第六步：制生物碱
(6-A)在上述第一沉淀物中加200ml的HCl(质量百分比浓度为1％)，在转速为100r/min、水浴温度40℃条件下搅拌反应180min后，制得第二液态混合物；
(6-B)将第二液态混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min的条件下离心分离20min后，取下离心管，得到第五上层清液和第五沉淀物；
(6-C)将第五上层清液通过D型离子交换树脂层析柱，吸附生物碱，未吸附的成分流出柱体制得第四收集液；
(6-D)待第五上层清液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第四收集液中不含有生物碱；
在本发明中，生物碱检测方法为碘化铋钾反应，若出现紫棕色沉淀则判断有生物碱存在；
(6-E)柱体再用质量百分比浓度为3％的HCl洗脱生物碱，HCl洗脱液在压力0.08MPa、温度50℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为50℃条件下干燥10h后制得第五产物(生物碱)；
100g的于罗汉果中可以提取出8.04g的生物碱。
第七步：制结合多糖和结合低聚糖
(7-A)在第五沉淀物中加入600ml去离子水，1.0g胃蛋白酶，用HCl(质量百分比浓度为18％)调节pH值为2，在转速为100r/min、水浴温度60℃条件下搅拌反应300min后，再在水浴温度100℃条件下反应3min，然后冷却至35℃，制得酶解液；
(7-B)将酶解液装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min的条件下离心分离20min后，取下离心管，得到第六上层清液和第六沉淀物，弃去第六沉淀物；
(7-C)用25％(质量百分比浓度)的NaOH调节第六上层清液的pH值为6，再装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min的条件下离心分离20min后，取下离心管，得到第七上层清液和第七沉淀物，弃去第七沉淀物；
(7-D)将第七上层清液在压力0.08MPa、温度60℃下浓缩至100ml，再加入150ml的乙醇(质量百分比浓度为80％)后，在0℃条件下静置20min，制得第三醇沉混合物；
(7-E)将第三醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min的条件下离心分离20min后，取下离心管，得到第八上层清液和第八沉淀物；
(7-F)将第八沉淀物在温度为50℃条件下干燥10h后制得第六产物(结合多糖)；
(7-G)在上述第八上层清液中加入1000ml的乙醇(质量百分比浓度为80％)后，在0℃条件下静置20min，制得第四醇沉混合物；
(7-H)将第四醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min的条件下离心分离20min后，取下离心管，得到第九上层清液和第九沉淀物；
(7-I)第九沉淀物在温度为50℃条件下干燥10h后制得第七产物(结合低聚糖)；
100g的干罗汉果中可以提取出纯度为45.08％的2.24g的结合多糖、纯度为31.49％的2.10g的结合低聚糖。
第八步：制氨基酸
将上述第九上层清液在压力0.08MPa、温度50℃下浓缩至浸膏，浸膏再在温度为70℃条件下干燥5h后制得第八产物(氨基酸)。
100g的干罗汉果中可以提取出纯度为58.73％的8.09g的氨基酸。
实施例3：
本实施从干罗汉果中提取出多种活性成分包括有下列步骤：
第一步：闪式辅助制第一液态混合物
将去核的干罗汉果和去离子水放入提取容器中，浸泡90min后，在转速4500r/min下搅拌破碎，并匀浆45s后制得第一液态混合物；
用量：100ml的去离子水中添加15g的去核干罗汉果；
第二步：离心分离
将第一液态混合物装入离心机的离心管中，在转速4500r/min下离心分离10min后，取下离心管，获得第一上层清液和第一沉淀物；
第三步：制甜苷
(3-A)在第一上层清液中加入0.5％(质量百分比浓度)的NaCl，再用25％(质量百分比浓度)的NaOH调节第一上层清液的pH值为10，制得第一上柱液；
(3-B)将第一上柱液通过XAD型大孔吸附树脂柱吸附甜苷，未吸附的成分流出柱体制得第一收集液；
(3-C)待第一上柱液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第一收集液中不含有甜苷；
在本发明中，甜苷检测方法为薄层色谱法(色谱条件：硅胶G薄层板，展开剂为正丁醇-乙醇-水，体积比8∶2∶3，甜苷的比移值为0.4)；
(3-D)柱体再用50％(质量百分比浓度)的乙醇洗脱甜苷，乙醇洗脱液在压力0.085MPa、温度40℃～50℃下浓缩至浸膏，然后加入50ml～100ml去离子水溶解浸膏制得第二上柱液；
(3-E)将第二上柱液通过D型大孔吸附树脂层析柱，吸附色素，未吸附的成分流出柱体制得第二收集液；
(3-F)将第二收集液在压力0.085MPa、温度60℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为50℃条件下干燥10h后制得第一产物(即甜苷)。
100g的干罗汉果中可以提取出纯度为90.61％的3.66g的甜苷。
第四步：制多酚
(4-A)将上述第一收集液用18％(质量百分比浓度)的HCl调节pH值为5，制得第三上柱液；
(4-B)将第三上柱液通过XAD型大孔吸附树脂柱，吸附多酚，未吸附的成分流出柱体制得第三收集液；
(4-C)待第三上柱液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第三收集液中不含有多酚；
在本发明中，多酚检测方法为紫外分光光度法；
(4-D)柱体再用60％(质量百分比浓度)的乙醇洗脱多酚，乙醇洗脱液在压力0.085MPa、温度45℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为60℃条件下干燥10h后制得第二产物(多酚)；
100g的干罗汉果中可以提取出纯度为66.03％的3.25g的多酚。
第五步：制游离多糖和游离低聚糖
(5-A)将上述第三收集液在压力0.085MPa、温度50℃下浓缩至浸膏，然后在浸膏中加入质量百分比浓度为80％的乙醇，在2℃条件下静置40min后制得第一醇沉混合物；
(5-B)将第一醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4500r/min的条件下离心分离10min后，取下离心管，得到第二上层清液和第二沉淀物；
(5-D)在第二沉淀物中加入20ml无水乙醇溶解后，装入离心机的离心管中，在转速为4500r/min的条件下离心分离10min后，取下离心管，得到第三上层清液和第三沉淀物，弃去第三上层清液；
(5-E)第三沉淀物在温度为50℃条件下干燥10h后制得第三产物(游离多糖)；
(5-F)在上述第二上层清液中加入2000ml的乙醇(质量百分比浓度为80％)后，在2℃条件下静置40min，制得第二醇沉混合物；
(5-G)将第二醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4500r/min的条件下离心分离10min后，取下离心管，得到第四上层清液和第四沉淀物，弃去第四上层清液；
(5-H)第四沉淀物在温度为50℃条件下干燥10h后制得第四产物(游离低聚糖)；
100g的干罗汉果中可以提取出纯度为50.41％的12.38g的游离多糖、纯度为29.07％的11.61g的游离低聚糖。
第六步：制生物碱
(6-A)在上述第一沉淀物中加400ml的HCl(质量百分比浓度为1％)，在转速为500r/min、水浴温度60℃条件下搅拌反应360min后，制得第二液态混合物；
(6-B)将第二液态混合物装入离心机的离心管中，在转速为4500r/min的条件下离心分离10min后，取下离心管，得到第五上层清液和第五沉淀物；
(6-C)将第五上层清液通过D型离子交换树脂层析柱，吸附生物碱，未吸附的成分流出柱体制得第四收集液；
(6-D)待第五上层清液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第四收集液中不含有生物碱；
在本发明中，生物碱检测方法为碘化铋钾反应，若出现紫棕色沉淀则判断有生物碱存在；
(6-E)柱体再用质量百分比浓度为3％的HCl洗脱生物碱，HCl洗脱液在压力0.085MPa、温度60℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为60℃条件下干燥8h后制得第五产物(生物碱)；
100g的干罗汉果中可以提取出8.23g的生物碱。
第七步：制结合多糖和结合低聚糖
(7-A)在第五沉淀物中加入450ml去离子水，0.8g胃蛋白酶，用HCl(质量百分比浓度为18％)调节pH值为3，在转速为500r/min、水浴温度40℃条件下搅拌反应450min后，再在水浴温度100℃条件下反应2.5min，然后冷却至30℃，制得酶解液；
(7-B)将酶解液装入离心机的离心管中，在转速为4500r/min的条件下离心分离10min后，取下离心管，得到第六上层清液和第六沉淀物，弃去第六沉淀物；
(7-C)用25％(质量百分比浓度)的NaOH调节第六上层清液的pH值为8，再装入离心机的离心管中，在转速为4500r/min的条件下离心分离10min后，取下离心管，得到第七上层清液和第七沉淀物，弃去第七沉淀物；
(7-D)将第七上层清液在压力0.085MPa、温度80℃下浓缩至80ml，再加入180ml的乙醇(质量百分比浓度为75％)后，在2℃条件下静置40min，制得第三醇沉混合物；
(7-E)将第三醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4500r/min的条件下离心分离10min后，取下离心管，得到第八上层清液和第八沉淀物；
(7-F)将第八沉淀物在温度为60℃条件下干燥8h后制得第六产物(结合多糖)；
(7-G)在上述第八上层清液中加入1800ml的乙醇(质量百分比浓度为75％)后，在2℃条件下静置40min，制得第四醇沉混合物；
(7-H)将第四醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4500r/min的条件下离心分离10min后，取下离心管，得到第九上层清液和第九沉淀物；
(7-I)第九沉淀物在温度为60℃条件下干燥8h后制得第七产物(结合低聚糖)；
100g的干罗汉果中可以提取出纯度为45.17％的2.57g的结合多糖、纯度为35.02％的2.34g的结合低聚糖。
第八步：制氨基酸
将上述第九上层清液在压力0.085MPa、温度40℃下浓缩至浸膏，浸膏再在温度为50℃条件下干燥10h后制得第八产物(氨基酸)。
100g的干罗汉果中可以提取出纯度为60.41％的8.26g的氨基酸。
Claims (3)
1.一种从干罗汉果中提取多种活性成分的方法，其特征在于该提取方法中包括有下列步骤：
第一步：闪式辅助制第一液态混合物
将去核的干罗汉果和去离子水放入提取容器中，在温度22℃～30℃下浸泡30min～120min后，在转速3500r/min～5500r/min下搅拌破碎，并匀浆30s～60s后制得第一液态混合物；
用量：100ml的去离子水中添加5g～15g的去核干罗汉果；
第二步：离心分离
将第一液态混合物装入离心机的离心管中，在转速4000r/min～5000r/min下离心分离10min～20min后，取下离心管，获得第一上层清液和第一沉淀物；
第三步：制甜苷
(3-A)在第一上层清液中加入质量百分比浓度0.5％～1％的NaCl，再用质量百分比浓度25％的NaOH调节第一上层清液的pH值为8～10，制得第一上柱液；
(3-B)将第一上柱液通过XAD型大孔吸附树脂柱吸附甜苷，未吸附的成分流出柱体制得第一收集液；
(3-C)待第一上柱液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第一收集液中无甜苷；
(3-D)柱体再用质量百分比浓度40％～60％的乙醇洗脱甜苷，乙醇洗脱液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度40℃～50℃下浓缩至浸膏，然后加入50ml～100ml去离子水溶解浸膏制得第二上柱液；
(3-E)将第二上柱液通过D型大孔吸附树脂层析柱，吸附色素，未吸附的成分流出柱体制得第二收集液；
(3-F)将第二收集液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度60℃～80℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第一产物——甜苷；
第四步：制多酚
(4-A)将上述第一收集液用质量百分比浓度18％的HCl调节pH值为3～5，制得第三上柱液；
(4-B)将第三上柱液通过XAD型大孔吸附树脂柱，吸附多酚，未吸附的成分流出柱体制得第三收集液；
(4-C)待第三上柱液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第三收集液中无多酚；
(4-D)柱体再用质量百分比浓度50％～80％的乙醇洗脱多酚，乙醇洗脱液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度40℃～50℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第二产物——多酚；
第五步：制游离多糖和游离低聚糖
(5-A)将上述第三收集液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度50℃～70℃下浓缩至浸膏，然后在浸膏中加入质量百分比浓度70％～80％的乙醇，在0℃～4℃条件下静置20min～40min后制得第一醇沉混合物；
(5-B)将第一醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第二上层清液和第二沉淀物；
(5-D)在第二沉淀物中加入20ml～50ml无水乙醇溶解后，装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第三上层清液和第三沉淀物，弃去第三上层清液；
(5-E)第三沉淀物在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第三产物——游离多糖；
(5-F)在上述第二上层清液中加入1500ml～2000ml乙醇，并在0℃～4℃条件下静置20min～40min后，制得第二醇沉混合物；所述乙醇的质量百分比浓度为70％～80％；
(5-G)将第二醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第四上层清液和第四沉淀物，弃去第四上层清液；
(5-H)第四沉淀物在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第四产物——游离低聚糖；
第六步：制生物碱
(6-A)在上述第一沉淀物中加200ml～400ml的HCl，在转速为100r/min～500r/min、水浴温度40℃～60℃条件下搅拌反应180min～360min后，制得第二液态混合物；所述HCl的质量百分比浓度为1％；
(6-B)将第二液态混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第五上层清液和第五沉淀物；
(6-C)将第五上层清液通过D型离子交换树脂层析柱，吸附生物碱，未吸附的成分流出柱体制得第四收集液；
(6-D)待第五上层清液全部过柱后，用去离子水冲洗柱体，直至第四收集液中无生物碱；
(6-E)柱体再用质量百分比浓度为3％的HCl洗脱生物碱，HCl洗脱液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度50℃～70℃下浓缩至浸膏，浸膏在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第五产物——生物碱；
第七步：制结合多糖和结合低聚糖
(7-A)在第五沉淀物中加入300ml～600ml去离子水，0.5g～1.0g胃蛋白酶，用HCl调节pH值为2～3，在转速为100r/min～500r/min、水浴温度40℃～60℃条件下搅拌反应300min～600min后，再在水浴温度100℃条件下反应2min～3min，然后冷却至22℃～35℃，制得酶解液；所述HCl的质量百分比浓度为18％；
(7-B)将酶解液装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第六上层清液和第六沉淀物，弃去第六沉淀物；
(7-C)用质量百分比浓度25％的NaOH调节第六上层清液的pH值为6～8，再装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第七上层清液和第七沉淀物，弃去第七沉淀物；
(7-D)将第七上层清液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度60℃～80℃下浓缩至50ml～100ml；再加入150ml～200ml乙醇，并在0℃～4℃条件下静置20min～40min后，制得第三醇沉混合物；所述乙醇的质量百分比浓度为70％～80％；
(7-E)将第三醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第八上层清液和第八沉淀物；
(7-F)将第八沉淀物在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第六产物——结合多糖；
(7-G)在上述第八上层清液中加入1000ml～1500ml乙醇，0℃～4℃条件下静置20min～40min后，制得第四醇沉混合物；所述乙醇的质量百分比浓度为70％～80％；
(7-H)将第四醇沉混合物装入离心机的离心管中，在转速为4000r/min～5000r/min的条件下离心分离10min～20min后，取下离心管，得到第九上层清液和第九沉淀物；
(7-I)第九沉淀物在温度为50℃～70℃条件下干燥5h～10h后制得第七产物——结合低聚糖；
第八步：制氨基酸
将上述第九上层清液在压力0.08MPa～0.09MPa、温度40℃～50℃下浓缩至浸膏；该浸膏然后在温度50℃～70℃下干燥5h～10h后制得第八产物——氨基酸。
2.根据权利要求1所述的从干罗汉果中提取多种活性成分的方法，其特征在于：第一步中的提取容器为闪式提取器。
3.根据权利要求1所述的从干罗汉果中提取多种活性成分的方法，其特征在于100g的干罗汉果中能够提取出：
纯度为90.16±3％的3.58g～3.76g的甜苷；
纯度为68.63±3％的3.22g～3.36g的多酚；
纯度为50.13±3％的12.13g～12.41g的游离多糖；
纯度为28.97±3％的11.35g～11.72g的游离低聚糖；
纯度为46.88±3％的2.24g～2.61g的结合多糖；
纯度为34.29±3％的2.10g～2.47g的结合低聚糖；
纯度为60.13±3％的8.09g～8.78g的氨基酸；
8.04g～9.32g的生物碱。
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