CN102846967B - 一种治疗头痛的纯组分中药制剂及制备工艺 - Google Patents

Abstract

一种治疗头痛的纯组分中药制剂及制备工艺，以天麻和川芎为基本组方，采用现代闪式提取技术、结合大孔树脂、正反相硅胶层析技术、高速逆流色谱制备技术，提取它们的以丁基苯酞为主的挥发油部分，以川芎嗪为主的生物碱部分，以阿魏酸为主的有机酸部分，以藁本内酯为主的内酯部分，以天麻素为主的酚类部分和以川芎多糖为主的多糖部分等有效组分。本发明提供的中药制剂疗效确切、成分明确、质量可控，操作方法简便。

Description

一种治疗头痛的纯组分中药制剂及制备工艺

技术领域

本发明具体涉及一种治疗头痛的纯组分中药制剂及制备工艺。

背景技术

偏头痛是一种常见的慢性神经血管紊乱性疾病，现代医学称之为原发性血管神经头痛。主要表现为单侧或双侧的额部、颞部或半侧头部的搏动性疼痛，常伴有恶心、呕吐、怕光等症状，属10类(种)严重危害人类健康的重大疾病。在美国，仅因偏头痛发作而造成的经济损失一年高达180亿美元。2010年中国原发性头痛流行病学调查数据显示，在我国18-65岁人口中，偏头痛发病率为9.3％(按第5次全国人口普查统计人口总量超过13亿计，大约有超过1.2亿人)，偏头痛患者人均治疗费用为728元/年(按超过1.2亿偏头痛患者计，治疗费用为873.6亿元/年)，仅我国就有着巨大的用药市场。患者偏头痛发作时工作能力下降，其中85％的患者在发病期间工作能力丧失，严重影响其生活质量。

偏头痛的病因及发病机理十分复杂，为一种多因素疾病。现代医学关于偏头痛的发病机制研究方面尚未完全清楚，主要有以下几种解释：(1)血管和神经因素(即血管源学说、神经源学说、三叉神经-血管源学说)：偏头痛的血管理论是根据早先Wolff的研究即偏头痛是由于脑血管痉挛继发脑血管扩张起始的。偏头痛来源于脑循环中对疼痛敏感的大脑及硬脑膜血管，由动静脉旁路的开闭所引起。在正常情况下通过动静脉旁路的血流量较小，但当偏头痛发作时旁路张开，使血液绕过脑组织，造成脑组织缺血。脑组织局部缺血加上动脉扩张，接着是大量动脉血涌过动静脉旁路，造成病人的剧烈疼痛。另外，由于某种机制，大脑及硬脑膜脉管系统的三叉神经末梢被激活，导致P物质和降钙素基因相关肤(CGRP)两种神经多肽的释放，此类神经递质均为强的血管扩张剂。先由P物质接着又由速激肽和前列腺素引起脑血管肿胀，从而使病人感到偏头痛。(2)体液因素：研究显示，己发现与偏头痛有关的体液生化成份有①5-羟色胺(5-HT)；②一氧化氮(NO)、降钙素基因相关肽(CGRP)及内皮素(ET)；③前列环素2(PGI₂)、血栓烷A₂(TXA₂)；④钙离子(Ca²⁺)及钙通道；⑤镁离子(Mg²⁺)；⑥神经降压素(NT)、心钠素(ANP)。中枢痛调制的相关递质：①阿片肽系统：脑啡肽(NK)和β-内啡肽(β-EP)；②单胺类：5-羟色胺(5-HT)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)等。(3)免疫因素：一些实验资料表明，某些偏头痛与免疫因素有关，主要是与免疫细胞、补体、免疫球蛋白、细胞因子的改变有关。目前，偏头痛急性发作期西药治疗药物有：①5-HT受体激动剂(曲普坦类)；②麦角胺类(酒石酸麦角胺、双氢麦角胺等)；③非甾体抗炎药(布洛芬等)；④阿片类止痛药(可待因、度冷丁等)。偏头痛常用西药预防药物有①β受体阻滞剂：心得安、噻吗心安、氨酰心安和纳多洛尔；②抗抑郁药：三环类抗抑郁药阿米替林、选择性5-HT再摄取抑制剂、单胺氧化酶抑制剂苯乙肼；③钙通道拮抗剂：异搏定、西比灵、尼莫地平；④抗癫痫药：托吡酯(Topira-mate)、加巴喷丁(gabape thin)；⑤其他：血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)类药物利生普利、二氢麦角隐亭、赛庚啶等。对偏头痛的临床治疗，虽在缓解偏头痛急性发作方面取得较大进展，但迄今为止尚未找到令人满意的药物或方法真正治疗及预防发作。

偏头痛属于中医学的“头痛”、“头风”、“脑风”、“首风”、“偏头痛”的范畴，中医药治疗偏头痛已有几千年历史，积累了大量宝贵的临床实践经验，取得良好的临床疗效，并具有独特的优势。中医对偏头痛通过几千年不断认识和完善，治疗偏头痛临床与实验研究也有了很大进展。长期以来，中药治疗偏头痛的有效性和安全性已经得到了广泛地认同。临床研究证实，中药治疗偏头痛有良好的临床疗效，中药治疗偏头痛的动物实验研究也取得了不少成果。治疗偏头痛的常用中成药有：川芎茶调散、大川芎颗粒、复方羊角胶囊、牛黄上清丸、清脑镇痛口服液、舒天宁冲剂、天麻钩藤颗粒、天麻首乌片、天麻头痛片、天舒胶囊、通天口服液、芎菊上清液、血府逐瘀胶囊、养血清脑颗粒、镇脑宁胶囊、正天丸、天芎止痛胶囊、归辛颗粒等。中药复方汤剂有：芎芷地龙汤、芎麻汤、天子饮等。

但是中药是一个具有药效物质多元化、多靶点作用机制的复杂体系，目前，尽管许多中药经典方已被制药企业开发为新药，形成了以传统复方为基础的中成药市场，多数企业也把经典方剂或已上市中成药进行二次开发作为研发重点，但由于其物质基础不太明确、治疗机理尚不清晰等缺陷，导致中药的研究开发没有实质性的突破，因而也不可能开发出符合国际医药标准、有竞争力和自主知识产权、生命周期长的现代中药。实际上目前尚无疗效确切、成分明确、服用方便可控的现代治疗头痛的中药制剂。

发明内容

本发明的目的是提供一种疗效确切、成分明确、质量可控的现代治疗头痛的中药制剂机及其制备方法。

中药是作用机制多靶点，药效物质组成非线性、多变量的复杂体系。必须采用现代科学手段对其物质基础进行探求和表征被研究对象的各个指标的变化和关系，对传统疗效确切和安全性高的中药单复方寻找药效物质基础的复杂性及其作用机制的综合性，以及它们之间的对应性。然后在中医药理论指导下，开展有效部位的药性研究与活性作用机理研究，是中药研究的重点、难点和热点。同时采用的“组合筛选”是借鉴组合化学理论及相关研究方法，应用目前已用于工业生产的多种现代分离技术及其集成，通过客观反映复方临床药效的生物活性筛选模型和多变量数据挖掘系统的实验研究，建立构效关系数据库，从分子水平阐明中药复方治疗作用的物质基础和作用机制，寻找中药复方物质基础研究的新思路、新方法，为创制组分中药提供可靠基础。

具体来说，现代中药的研究开发必须以中药单复方组方药味的重组合分组及多种分离技术代替组合化学合成路线，以多种工业化分离技术的产物为“基本构造单元”，创造“化学多样性”的中药复方药效物质组合库，并通过数据挖掘和知识发现，寻找中药复方“多成分、多靶点”的化学组成与作用机制的内在关联，探索针对中药药效物质复杂体系的“高通量药物筛选”新技术，为建立“最优分离”概念，开展相关精制技术应用体系优化设计提供依据。中药复方是根据中医理论以及各药味的功能主治性味，通过人工组合形成的具有疗效的相对安全的天然组合化学库。千百年来以水煮为主的中药服药方式体现了中药水提取液的安全性与有效性，也提示中药水提取液体系中存在天然、合理的药效物质，其中包括最优的化学成分种类与数量的组合比例关系。这种关系既可通过处方“君、臣、佐、使”的配伍原则而实现的治疗效果得到体现，也可通过其化学组成及药理作用的多元化加以表征。在阐明有效成分、有效部位的基础上，阐明中药复方的作用机制和物质基础的一一对应性，优选给药方案，改进药物剂量，为临床提供高效、速效、长效、低毒作用的药物，加快新药开发速度，让经典方的研究创造出更大的市场价值----即研制出“新、精、优、小”的现代新组分中药。

为达到上述目的本发明采取的技术方案是：

以天麻和川芎为基本组方，采用现代闪式提取技术、结合大孔树脂、正反相硅胶层析技术、高速逆流色谱制备技术，提取它们的以丁基苯酞为主的挥发油部分，以川芎嗪为主的生物碱部分，以阿魏酸为主的有机酸部分，以藁本内酯为主的内酯部分，以天麻素为主的酚类部分和以川芎多糖为主的多糖部分等有效组分。同时采用UV、HPLC、LC-MS、GC-MS和各种光谱手段，进行组分的定性定量分析。采用组合筛选对川芎和天麻的单味、重组合分组及多种分离技术寻找它们的“多成分、多靶点”的化学组成，建立其治疗偏头痛的物质基础的构效关系数据库、库内物质的表征分析及筛选和解析；然后建立偏头痛动物模型的造模方法和筛选出有效部位的指纹图谱；采用血清药理学、分子生物学等建立能反映中药主治病症的药理学检测方法，开展构效库的“高通量药物筛选”新技术，建立“最优分离”模式，开展相关精制技术应用体系优化设计研究；联合组合化学和指纹图谱技术构建组分的谱效关系数据库，研究其治疗偏头痛的物质基础和多靶点的作用机制的内在关联性，探索有效部位的药性，把得到的各有效部分进行配比组合进行现代中药组方研究，研制出既具有严格的君臣佐使配伍规律，又有明确的临床疗效，且质量可控和易控的“新、精、优、小”的现代组分中药治疗头痛的新制剂。

筛选模型：基于各种发病假说进行模拟的，采用以下几种：(1)基于血管源学说的偏头痛模型，主要是皮下注射硝酸甘油(NTG)所致的血管性偏头痛模型。该模型症状表现及病理变化与人类偏头痛发作时的表现及变化有一定的相似性，病理及生化数据稳定，故这种造模方法具有动物易于获得、经济、简便、相似性好、适用性强等特点。(2)基于神经源学说的偏头痛模型，包括KCl诱导的皮层扩散性抑制(CSD)大鼠模型和机械针刺诱导的CSD大鼠模型两种，此模型与神经学说所反映的偏头痛发病机制基本相似，造模方法较硬脑膜神经炎症模型方便，手术创伤小，模型症状表现相似，可重复性好，可用于有先兆偏头痛动物模型的建立。(3)基于三叉神经血管学说的动物模型有电刺激诱发法和物质诱导法两种，前者包括电刺激大鼠三叉神经节或硬脑膜模型和电刺激猫上矢状窦区(SSS)硬脑膜所致的神经炎性偏头痛模型，后者为P物质诱导的偏头痛模型，该造模方法对手术的要求相对较高，但电刺激引起的神经源性炎症明显，且此模型与目前较为完善的偏头痛发病机制学说--三叉神经血管反射学说所反映的病机相似，故得到了国内外学者的一致肯定。(4)基于生化源学说的偏头痛模型造模方法是先采用利血平耗竭动物脑中5-HT后，再在动物皮层注射血凝块造成偏头痛模型，这种造模方法周期较长，操作较繁琐，但造模后动物凝血时间明显缩短，痛阈降低，全血及脑内5-HT含量明显下降，这些基本反映了偏头痛的特点。(5)基于血管舒缩功能异常的偏头痛动物模型主要是借用脑血管痉挛模型，造模方法为于枕大池穿刺，抽取脑脊液，然后缓慢注入自体动脉血。(6)其他模型：主要有Janssens电刺激离体猪基底动脉标本引起对河豚毒素敏感的神经介导的血管舒张模型；Saxena开发的用放射活性微球测量动脉或静脉吻合支血流的脑膜动-静脉分流模型；离体人脑膜动脉模型；脑动脉平滑肌细胞培养模型；c-fos基因表达模型等。

闪式提取器是一种新型的提取设备，广泛适用于中草药根(饮片)，茎(饮片)，叶，花，果实(饮片)，种子等的提取，适宜各种溶剂(乙醚等易挥发和有毒溶剂除外)可以单味中药提取，也可多味中药复方提取。该设备以组织破碎原理为基础，按照提取的目的和工艺特点，技术要求等，充分吸收国外最新技术，科学设计，精心制作，不但达到了快速，高效，充分，完全的提取要求，而且不需加热，节省能源，有效保护了提取物质中的热敏性成分，原来需要数小时的提取工作利用该仪器仅需几分钟即可完成，工作效率提高了几十倍，并且操作简便，与传统提取方法相比具有非常显著的优势，确实是中药科研工作者得心应手的提取设备。关于闪式提取工艺，有许多这方面的文章进行论述过，如：1、刘向前，郑礼胜，翁柳娜，邹方卉，李丽丽。细柱五加叶中抗HMGB1总三萜活性物质的闪式提取工艺。中南大学学报(自然科学版)，2011。7月，Vol 42(7)；2.韩冰，郑礼胜，刘向前，邹亲朋.苦杏仁中苦杏仁酶的闪式提取工艺研究[J].现代药物与临床，2011，26(2)：134-138；3.刘灿荣永海王志滨荣龙.闪式提取法提取罗汉果多酚.《食品科学》2010年22期等都对该提取工艺进行了详细论述，本发明的发明点不在于闪式提取工艺本身，只是利用闪式提取的常规工艺，对闪式提取工艺不再獒述。

具体技术方案是：

一种治疗头痛的纯组分中药制剂，以天麻和川芎为基本组方，包括从川芎和天麻中提取的以丁基苯酞为主的挥发油部分A，以川芎嗪为主的生物碱部分B，以藁本内酯为主的内酯部分C，各部分所含有的重量份为：A为10～30份，B为5～35份，C为15～45份。

还包括以阿魏酸为主的有机酸部分D，所含有的重量份为：3～70份。

还包括以天麻素为主的酚类部分E，所含有的重量份为：9～80份。

还包括以川芎多糖为主的多糖部分F，所含有的重量份为：10～25份。

还包括以阿魏酸为主的有机酸部分D和以天麻素为主的酚类部分E，所含有的重量份为：D为3～70份，E为9～80份。

还包括以阿魏酸为主的有机酸部分D和以川芎多糖为主的多糖部分F，所含有的重量份为：D为3～70份，F为10～25份。

还包括以天麻素为主的酚类部分E和以川芎多糖为主的多糖部分F，所含有的重量份为：E为9～80份。F为10～25份。

还包括以阿魏酸为主的有机酸部分D、以天麻素为主的酚类部分E和以川芎多糖为主的多糖部分F，所含有的重量份为：D为3～70份，E为9～80份、F为10～25份。

所述中药制剂可以为胶囊剂、丸剂、散剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂或注射剂。

制备工艺包括下述步骤：

(1)A部分的制备：将川芎和天麻各称取适量装入闪式提取罐中，加1～10倍体积的石油醚浸泡1～5h后，提取60～300s，滤过，回收溶剂得浸膏；除叶绿素后加水制成混悬液后用正己烷萃取，蒸去溶剂正己烷，制得A，用GC-MS进行分析得到含丁基苯酞为主的挥发油部分；

(2)B和C部分的制备：除去A部分的药材，分别用二氯甲烷进行闪式提取5～60分钟，回收溶剂得到二氯甲烷部分，正反相硅胶层析得到B和C混合部分，然后进行高速逆流色谱，得到以川芎嗪为主的生物碱部分B，以藁本内酯为主的内酯部分C，分别用HPLC检测含量，B和C分别含量都在70％以上；

上述闪式提取时温度为室温，正反相硅胶层析、高速逆流色谱为常规方法。

除(1)和(2)步骤外，还包括下述步骤：

D部分的制备：提取完B和C的药材用乙酸乙酯做溶剂，用闪式提取技术进行3～60分钟，回收溶剂得到乙酸乙酯部分，然后对其进行大孔树脂分离，在60％乙醇部分得到D部分，然后进行正反相硅胶层析得到含阿魏酸70％以上的D；上述闪式提取时温度为室温，大孔树脂、正反相硅胶层析为常规方法。

除(1)和(2)步骤外，还包括下述步骤：

E部分的制备：提取完B和C的药材用乙酸乙酯做溶剂，用闪式提取技术进行3～60分钟，回收溶剂得到乙酸乙酯部分，然后对其进行大孔树脂分离，在30％乙醇部分得到E部分，然后进行正反相硅胶层析得到含天麻素75％以上的E；上述闪式提取时温度为室温，大孔树脂、正反相硅胶层析为常规方法。

除(1)和(2)步骤外，还包括下述步骤：

F部分的分离：除去制取完ABC步骤的药材残渣，用正丁醇为溶剂，闪式提取5～60分钟后，水提取，用95％的乙醇进行醇沉，得到沉淀含川芎多糖为主的多糖部分F；上述闪式提取时温度为室温。

除(1)和(2)步骤外，还包括下述步骤：

E和D部分：提取完B和C的药材用乙酸乙酯做溶剂，用闪式提取技术进行3～60分钟，回收溶剂得到乙酸乙酯部分，然后对其进行大孔树脂分离，在30％乙醇和60％乙醇部分分别得到E和D部分，然后分别进行正反相硅胶层析得到得到含阿魏酸70％以上的D、含天麻素75％以上的E；上述闪式提取时温度为室温，大孔树脂、正反相硅胶层析为常规方法。

除(1)和(2)步骤外，还包括下述步骤：

D部分的制备：提取完B和C的药材用乙酸乙酯做溶剂，用闪式提取技术进行提取3～60分钟，回收溶剂得到乙酸乙酯部分，然后对其进行大孔树脂分离，在60％乙醇部分得到D部分，然后进行正反相硅胶层析得到含阿魏酸70％以上的D；F部分的分离：除去制取完ABCD步骤的药材残渣，用正丁醇为溶剂，闪式提取5～60分钟后，水提取，用95％的乙醇进行醇沉，得到沉淀含川芎多糖为主的多糖部分F；

上述闪式提取技术提取时温度为室温，大孔树脂、正反相硅胶层析为常规方法。

除(1)和(2)步骤外，还包括下述步骤：

E部分的制备：提取完B和C的药材用乙酸乙酯做溶剂，用闪式提取技术进行3～60分钟，回收溶剂得到乙酸乙酯部分，然后对其进行大孔树脂分离，在30％乙醇部分得到E部分，然后进行正反相硅胶层析得到含天麻素75％以上的E；

F部分的分离：除去制取完ABCE步骤的药材残渣，用正丁醇为溶剂，闪式提取5～60分钟后，水提取，用95％的乙醇进行醇沉，得到沉淀含川芎多糖为主的多糖部分F；

上述闪式提取技术提取时温度为室温，大孔树脂、正反相硅胶层析为常规方法。

除(1)和(2)步骤外，包括下述步骤：

E和D部分：提取完B和C的药材用乙酸乙酯做溶剂，用闪式提取技术进行3～60分钟，回收溶剂得到乙酸乙酯部分，然后对其进行大孔树脂分离，在30％乙醇和60％乙醇部分分别得到E和D部分，然后分别进行正反相硅胶层析得到得到含阿魏酸70％以上的D、含天麻素75％以上的E；

F部分的分离：除去制取完ABCDE步骤的药材残渣，用正丁醇为溶剂，闪式提取5～60分钟后，水提取，用95％的乙醇进行醇沉，得到沉淀含川芎多糖为主的多糖部分F；

上述闪式提取技术提取时温度为室温，大孔树脂、正反相硅胶层析、高速逆流色谱为常规方法。

本发明的闪式提取技术中，闪式器的转速为3000～20000转/分钟。

通过以上技术方案，可以得到以下效果和数据进行相关研究：

1)得到了主成分在50％以上的丁基苯酞为主的挥发油部分，以川芎嗪为主的生物碱部分，以阿魏酸为主的有机酸部分，以藁本内酯为主的内酯部分，以天麻素为主的酚类部分；同时分离得到了单一成分如川芎嗪、胆碱、尿嘧啶、阿魏酸、大黄酚、棕榈酸、香荚兰醛、丁基苯酞、丁烯基苯酞、东川芎内酯、蒿本内酯、蛇床内酯、新蛇床内酯、洋川芎内酯、川芎内酯、新川芎内酯、β-谷甾醇、天麻素、对羟基苯甲醇、琥珀酸、L-2焦谷氨酸、柠檬酸双甲酯者、柠檬酸、棕榈酸酸等物质。

2)原药材和制备各组分配比的指纹图谱。

3)按各部分进行组分配比后进行如下效果评价：对利血平所致低5-HT偏头痛小鼠模型血浆中5-HT的影响；对利血平所致低5-HT偏头痛小鼠模型血浆中NO的影响；对偏头痛小鼠模型体重的影响对偏头痛小鼠模型凝血时间的影响对硝酸甘油所致大鼠偏头痛模型血浆中5-HT的影响；对硝酸甘油所致大鼠偏头痛模型血浆中NO的影响。

附图说明

图1为原药材和制备各组分配比的指纹图谱，

其中：S1：组分配方，S2：分煎合并液，S3：川芎，S4：天麻

具体实验例：

分别取天麻和川芎药材各100克，利用石油醚，二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇为溶剂，分别采用闪式提取技术提取10分钟、结合大孔树脂、正反相硅胶层析技术、高速逆流色谱制备技术进行了组分富集，得到了以丁基苯酞为主的挥发油部分A，以川芎嗪为主的生物碱部分B，以阿魏酸为主的有机酸部分C，以藁本内酯为主的内酯部分D，以天麻素为主的酚类部分E和以川芎多糖为主的多糖部分F；利用HPLC方法得到了不同配比的指纹图谱。

(一)实验方法：

1组分配比

(重量份)按A∶B∶C∶D＝1∶1∶2∶1进行配比，作为实验样品。

2指纹图谱的方法学考察

分别对精密度，稳定性，重现性进行检查

3色谱条件：色谱柱：Kromasil(250mm×50mm，5μm)流动相：A相为0.8％的冰醋酸，B相为甲醇。梯度洗脱条件见表1。分析时间：90min。流速：1ml/min，柱温：30℃。进样量：15μl。

表1梯度洗脱条件

4方法学考察：

精密度色谱峰相对保留时间的RSD在0.01％～0.12％之间。色谱峰峰面积的RSD在0.02％～1.28％之间。

稳定性试验：色谱峰的相对保留时间的RSD在0.002％～0.13％之间，主要峰的峰面积的RSD在0.02％～1.21％之间。

重复性试验：色谱峰相对保留时间的RSD在0.03％～0.8％在之间。各共有峰相对峰面积的RSD在0.09％～0.46％之间。

动物模型实验

动物模型效果实验结果如下：实验药物为组分A，B，C，和A+B+C，A+B+C+D，其中重量份比为A∶B∶C∶D＝1∶2∶1∶1

(一)对偏头痛小鼠模型体重的影响

组别	n	第1天体重	第14天体重
				空白组	12	22.37±0.41	28.29±0.62
模型空白组	13	22.52±0.46	20.21±0.90##
				A组	12	22.38±0.45	21.80±0.70
B组	13	22.31±0.44	21.23±0.75

C组	11	22.40±0.35	21.53±0.51
				A+B+C+D组	13	22.30±0.52	25.09±0.66**
芎麻汤组	11	22.38±0.53	26.48±0.61**
				布洛芬组	12	22.40±0.50	26.30±0.65**

与空白组比较，#P＜0.5，##P＜0.01；与模空组比较，*P＜0.5，**P＜0.01。

(二)对偏头痛小鼠模型凝血时间的影响

组别	n	凝血时间(s)	痛阈值(s)
				空白组	12	35.60±0.49
模型空白组	13	28.02±0.85##
				A组	12	28.33±1.11
B组	13	28.07±0.64
				C组	11	29.70±0.88**
A+B+C+D组	13	34.08±0.69**
				芎麻汤组	11	34.33±0.81**
布洛芬组	12	35.47±0.67**

与空白组比较，#P＜0.5，##P＜0.01；与模空组比较，*P＜0.5，**P＜0.01。

(三)对利血平所致低5-HT偏头痛小鼠模型血浆中5-HT的影响

组别	个数	5-HT(pg/ml)
			空白组	10	110.9330±8.04638
模型空白组	10	79.0922±6.21868##
			A组	10	84.2375±5.73817
B组	10	86.4872±7.08801
			C组	10	77.1800±3.32031
A+B+C+D组	10	105.0085±6.39904**
			芎麻汤组	10	110.5105±4.51134**
布洛芬组	10	101.5265±10.78839**

与空白组比较，#P＜0.5，##P＜0.01；与模空组比较，*P＜0.5，**P＜0.01。

(四)对利血平所致低5-HT偏头痛小鼠模型血浆中NO的影响

组别	个数	NO(μmol/1)
			空白组	10	13.1429±2.33778
模型空白组	10	5.1831±1.76352##
			A组	10	6.2562±2.48204
B组	10	6.4720±2.07070
			C组	10	12.3525±1.06809**
A+B+C+D组	10	13.7079±3.03737**
			芎麻汤组	10	14.1969±3.85703**
布洛芬组	10	13.8300±1.95997**

与空白组比较，#P＜0.5，##P＜0.01；与模空组比较，*P＜0.5，**P＜0.01。

(五)对硝酸甘油所致大鼠偏头痛模型血浆中5-HT的影响

与空白组比较，#P＜0.5，##P＜0.01；与模空组比较，*P＜0.5，**P＜0.01。

(六)对硝酸甘油所致大鼠偏头痛模型血浆中NO的影响

与空白组比较，#P＜0.5，##P＜0.01；与模空组比较，*P＜0.5，**P＜0.01。

显然，采用组分A+B+C(A∶B∶C＝1∶2∶1)进行上述动物模型效果中的“**P＜0.01”效果较好。

组分A+B+C，已经能达到较好的治疗效果，实验表明，通过增加D、E、F组分，能更优化治疗效果：

增加D部分可以：通过调节神经递质含量达到治疗偏头痛的作用，下调由硝酸甘油诱导的CGRP异常升高的水平，可以上调由硝酸甘油诱导的β-EP异常减少的水平。

增加E部分可以：能提高大鼠下丘脑5-HT、NE等单胺类递质的含量。

增加DE部分可以：导致大鼠外周血中CGRP含量及脑膜血流量增加，能明显抑制CGRP的表达与减少脑膜血流量，从而有效地治疗偏头痛。

增加F部分可以：明显降低模型动物脑组织NO的含量、血浆CGRP的含量，提示利脑胶囊治疗头痛的作用可能与抑制NO、CGRP的大量产生有关。

增加DF，可以：通过调节偏头痛大鼠血浆中CGRP的水平，改善脑血管舒缩功能障碍，起到减轻偏头痛的作用

增加EF，可以：可以减少由硝酸甘油诱导的致痛物质c-fos的表达，增加抗痛物质β-EP的表达，从而进一步减少三叉神经脊束核神经元的兴奋性，阻止痛觉信息的传递。

增加DEF，可以：通对偏头痛模型大鼠的治疗作用可能与缓解硝酸甘油引起的神经性炎症，调控疼痛相关基因c-fos mRNA表达有关；对NTG偏头痛大鼠脑干组织G蛋白亚基(Gsα和Giα)含量的影响。研究显示偏头痛发作可能与大鼠脑干组织G蛋白信号传导系统功能障碍有关。

临床病例：

男，40心烦易躁，夜晚难以入眠，大便3日未解，舌质红苔黄，脉弦数。血压正常，头部CT正常。患者正当壮年阳旺之体，因忧郁恼怒太过，致肝失调达，肝气郁结，郁而化火，火盛生风，风火相煽，火随气逆，上攻于头而致头痛。诊断：偏头痛。采用组分A+B+C(A∶B∶C＝1∶2∶1)制成的片剂，每日2次，每次一片。并嘱其调畅情志、饮食清淡，药后诸症悉除。

女，37岁。2009年10月2日初诊。自述头痛病复发3天，发作次数每日约5次，头痛剧烈时恶心、呕吐、不自觉流泪、左右侧交替头痛，呈钻痛性质，发作后神疲思睡。整日昏昏沉沉，睡眠后稍轻。诊时正值月经期。经诊证见：患者面色苍白，畏光，体温正常。诊时头颅空痛.摇晃则重，伴有耳鸣、舌红、脉细。证候分析：本证属肾虚头痛，肾主藏精、生髓、充脑，肾精亏耗，而使脑髓空虚而致头痛。服用本组分中药A+B+C+D(A∶B∶C＝1∶2∶1∶1)，1日2次，5日为1疗程。效果：患者经治2日后，自觉症状减轻。2疗程后，症状基本消失。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1：

将川芎和天麻各称取100.0g装入闪式提取技术提取罐中，加500ml石油醚浸泡1h后，在4-5档提取60s，滤过，回收溶剂得浸膏；除叶绿素后加水制成混悬液后用正己烷萃取，蒸去溶剂正己烷，制得A。用GC-MS进行分析得到含丁基苯酞为主的挥发油部分；

B和C部分：除去A的药材，分别用二氯甲烷进行闪式提取技术进行30分钟，回收溶剂得到二氯甲烷部分，正反相硅胶层析得到B C混合部分，然后进行高速逆流色谱，得到以川芎嗪为主的生物碱部分B，以藁本内酯为主的内酯部分C，分别含量在70％以上的部分；

上述闪式提取技术提取时温度为室温，正反相硅胶层析、高速逆流色谱为常规方法。本实施例的闪式提取技术中，闪式器的转速为3000转/分钟。

取A、B、C重量份分别为10份、20份、10份，制成片剂。

实施例2：

将川芎和天麻各称取500.0g装入闪式提取技术提取罐中，加1000ml石油醚浸泡2h后，在4-5档提取120s，滤过，回收溶剂得浸膏；除叶绿素后加水制成混悬液后用正己烷萃取，蒸去溶剂正己烷，制得A。用GC-MS进行分析得到含丁基苯酞为主的挥发油部分；

B和C部分：除去A的药材，分别用二氯甲烷进行闪式提取技术进行20分钟，回收溶剂得到二氯甲烷部分，正反相硅胶层析得到BC混合部分，然后进行高速逆流色谱，得到以川芎嗪为主的生物碱部分B，以藁本内酯为主的内酯部分C，分别含量在70％以上的部分；

D部分的制备：提取完B和C的药材用乙酸乙酯做溶剂，用闪式提取技术进行15分钟，回收溶剂得到乙酸乙酯部分，然后对其进行大孔树脂分离，在60％乙醇部分得到D部分，然后进行正反相硅胶层析得到含阿魏酸70％以上的D；上述闪式提取技术提取时温度为室温，大孔树脂、正反相硅胶层析为常规方法。本实施例的闪式提取技术中，闪式器的转速为5000转/分钟。

取A、B、C、D重量份分别为10份、20份、10份、5份，制成颗粒剂。

实施例3：

将川芎和天麻各称取100.0g装入闪式提取技术提取罐中，加500ml石油醚浸泡1h后，在4-5档提取60s，滤过，回收溶剂得浸膏；除叶绿素后加水制成混悬液后用正己烷萃取，蒸去溶剂正己烷，制得A。用GC-MS进行分析得到含丁基苯酞为主的挥发油部分；

B和C部分：除去A的药材，分别用二氯甲烷进行闪式提取技术进行10分钟，回收溶剂得到二氯甲烷部分，正反相硅胶层析得到BC混合部分，然后进行高速逆流色谱，得到以川芎嗪为主的生物碱部分B，以藁本内酯为主的内酯部分C，分别含量在70％以上的部分；

E部分的制备：提取完B和C的药材用乙酸乙酯做溶剂，用闪式提取技术进行5分钟，回收溶剂得到乙酸乙酯部分，然后对其进行大孔树脂分离，在30％乙醇部分得到E部分，然后进行正反相硅胶层析得到含天麻素75％以上的E；上述闪式提取技术提取时温度为室温，大孔树脂、正反相硅胶层析为常规方法。本实施例的闪式提取技术中，闪式器的转速为10000转/分钟。

取A、B、C、E重量份分别为10份、20份、10份、10份，制成胶囊剂。

实施例4：

将川芎和天麻各称取100.0g装入闪式提取技术提取罐中，加500ml石油醚浸泡1h后，在4-5档提取60s，滤过，回收溶剂得浸膏；除叶绿素后加水制成混悬液后用正己烷萃取，蒸去溶剂正己烷，制得A。用GC-MS进行分析得到含丁基苯酞为主的挥发油部分；

B和C部分：除去A的药材，分别用二氯甲烷进行闪式提取技术进行5分钟，回收溶剂得到二氯甲烷部分，正反相硅胶层析得到BC混合部分，然后进行高速逆流色谱，得到以川芎嗪为主的生物碱部分B，以藁本内酯为主的内酯部分C，分别含量在70％以上的部分；

E和D部分：提取完B和C的药材用乙酸乙酯做溶剂，用闪式提取技术进行5分钟，回收溶剂得到乙酸乙酯部分，然后对其进行大孔树脂分离，在30％乙醇和60％乙醇部分分别得到E和D部分，然后分别进行正反相硅胶层析得到得到含阿魏酸70％以上的D、含天麻素75％以上的E；上述闪式提取技术提取时温度为室温，大孔树脂、正反相硅胶层析为常规方法。本实施例的闪式提取技术中，闪式器的转速为15000转/分钟。

取A、B、C、D、E重量份分别为25份、30份、45份、10份、25份，制成栓剂。

实施例5：

将川芎和天麻各称取100.0g装入闪式提取技术提取罐中，加500ml石油醚浸泡1h后，在4-5档提取60s，滤过，回收溶剂得浸膏；除叶绿素后加水制成混悬液后用正己烷萃取，蒸去溶剂正己烷，制得A。用GC-MS进行分析得到含丁基苯酞为主的挥发油部分；

B和C部分：除去A的药材，分别用二氯甲烷进行闪式提取技术进行5分钟，回收溶剂得到二氯甲烷部分，正反相硅胶层析得到BC混合部分，然后进行高速逆流色谱，得到以川芎嗪为主的生物碱部分B，以藁本内酯为主的内酯部分C，分别含量在70％以上的部分；

E和D部分：提取完B和C的药材用乙酸乙酯做溶剂，用闪式提取技术进行3分钟，回收溶剂得到乙酸乙酯部分，然后对其进行大孔树脂分离，在30％乙醇和60％乙醇部分分别得到E和D部分，然后分别进行正反相硅胶层析得到得到含阿魏酸70％以上的D、含天麻素75％以上的E；

F部分的分离：除去制取完ABCDE步骤的药材残渣，用正丁醇为溶剂，闪式提取5分钟后，水提取，用95％的乙醇进行醇沉，得到沉淀含川芎多糖为主的多糖部分F；

上述闪式提取技术提取时温度为室温，大孔树脂、正反相硅胶层析、高速逆流色谱为常规方法。本实施例的闪式提取技术中，闪式器的转速为30000转/分钟。

取A、B、C、D、E、F重量份分别为25份、30份、45份、10份、40份、25份，制成注射剂。

Claims (3)

1.一种治疗头痛的纯组分中药制剂，其特征在于：以天麻和川芎为基本组方，包括从川芎和天麻中提取的以丁基苯酞为主的挥发油部分A，以川芎嗪为主的生物碱部分B，以藁本内酯为主的内酯部分C，以阿魏酸为主的有机酸部分D，以天麻素为主的酚类部分E，以川芎多糖为主的多糖部分F，各部分所含有的重量份为：A为10～30份，B为5～35份，C为15～45份，D为3～70份、E为9～80份、F为10～25份；

其中，上述组分由以下方法制备得到：

(1)A部分的制备：将川芎和天麻各称取适量装入闪式提取罐中，加1～10倍体积的石油醚浸泡1～5h后，提取60～300s，滤过，回收溶剂得浸膏；除叶绿素后加水制成混悬液后用正己烷萃取，蒸去溶剂正己烷，制得A，用GC-MS进行分析得到含丁基苯酞为主的挥发油部分；

(2)B和C部分的制备：除去A部分的药材，分别用二氯甲烷进行闪式提取5～60分钟，回收溶剂得到二氯甲烷部分，正反相硅胶层析得到B和C混合部分，然后进行高速逆流色谱，得到以川芎嗪为主的生物碱部分B，以藁本内酯为主的内酯部分C，分别用HPLC检测含量，B和C分别含量都在70％以上；

(3)D部分的制备：提取完B和C的药材用乙酸乙酯做溶剂，用闪式提取技术进行3～60分钟，回收溶剂得到乙酸乙酯部分，然后对其进行大孔树脂分离，在60％乙醇部分得到D部分，然后进行正反相硅胶层析得到含阿魏酸70％以上的D；上述闪式提取时温度为室温，大孔树脂、正反相硅胶层析为常规方法；

(4)E部分的制备：提取完B和C的药材用乙酸乙酯做溶剂，用闪式提取技术进行3～60分钟，回收溶剂得到乙酸乙酯部分，然后对其进行大孔树脂分离，在30％乙醇部分得到E部分，然后进行正反相硅胶层析得到含天麻素75％以上的E；上述闪式提取时温度为室温，大孔树脂、正反相硅胶层析为常规方法；

(5)F部分的分离：除去制取完ABC步骤的药材残渣，用正丁醇为溶剂，闪式提取5～60分钟后，水提取，用95％的乙醇进行醇沉，得到沉淀含川芎多糖为主的多糖部分F；上述闪式提取时温度为室温；

上述闪式提取技术提取时温度为室温，大孔树脂、正反相硅胶层析为常规方法。

2.一种如权利要求1所述的中药制剂，其特征在于：所述中药制剂为胶囊剂、丸剂、散剂、糖浆剂、片剂、颗粒剂、贴膏剂、合剂、滴丸剂、栓剂、气雾剂、软膏剂或注射剂。

3.一种如权利要求1所述的中药制剂的制备工艺，其特征在于包括下述步骤：

(1)A部分的制备：将川芎和天麻各称取适量装入闪式提取罐中，加1～10倍体积的石油醚浸泡1～5h后，提取60～300s，滤过，回收溶剂得浸膏；除叶绿素后加水制成混悬液后用正己烷萃取，蒸去溶剂正己烷，制得A，用GC-MS进行分析得到含丁基苯酞为主的挥发油部分；

(2)B和C部分的制备：除去A部分的药材，分别用二氯甲烷进行闪式提取进行5～60分钟，回收溶剂得到二氯甲烷部分，正反相硅胶层析得到得到B和C混合部分，然后进行高速逆流色谱，得到以川芎嗪为主的生物碱部分B，以藁本内酯为主的内酯部分C，B和C，分别用HPLC检测含量都在70％以上；

(3)D部分的制备：提取完B和C的药材用乙酸乙酯做溶剂，用闪式提取技术进行3～60分钟，回收溶剂得到乙酸乙酯部分，然后对其进行大孔树脂分离，在60％乙醇部分得到D部分，然后进行正反相硅胶层析得到含阿魏酸70％以上的D；

(4)E部分的制备：提取完B和C的药材用乙酸乙酯做溶剂，用闪式提取技术进行3～60分钟，回收溶剂得到乙酸乙酯部分，然后对其进行大孔树脂分离，在30％乙醇部分得到E部分，然后进行正反相硅胶层析得到含天麻素75％以上的E；

(5)F部分的分离：除去(1)(2)步骤或(1)(2)(3)步骤或(1)(2)(4)步骤或(1)(2)(3)(4)步骤的药材残渣，用正丁醇为溶剂，闪式提取5～60分钟后，水提取，用95％的乙醇进行醇沉，过滤后得到沉淀含川芎多糖为主的多糖部分F；

上述闪式提取技术提取时温度为室温，正反相硅胶层析、高速逆流色谱为常规方法。