发明内容
针对现有技术存在的上述问题,本申请提供了一种高纯度三七总皂苷的提取方法,各步骤间相互协同,使所制备得到的三七总皂苷纯度高,且三七总皂苷提取率高。
本发明的技术方案如下:
一种高纯度三七总皂苷的提取方法,包括以下步骤:
(1)将三七整体置于烘箱中,抽真空的状态下加热至80-90℃,保持8-10min;然后快速放入-18℃的冰箱中保持15-20min;如此循环3-5次;
(2)将经步骤(1)处理所得的三七药材经粉碎后过80-100目筛,得三七粉料;向三七粉料中加入低共熔溶剂和质量浓度为80-90%的乙醇组成的混合溶剂,混合溶剂中低共熔溶剂与乙醇的体积比为1:1-2.5;
然后加入中性纤维素酶和果胶酶,中性纤维素酶的加入量为三七粉料质量的3.5-4.5%,果胶酶的加入量为三七粉料质量的1-1.5%;然后在温度为45-50℃下进行微波提取,微波功率为200-300W,提取时间为10-15min;然后使用pH调节剂调节pH值为4.5-5,继续微波提取,温度为45-50℃,微波功率为200-300W,提取时间为5-8min,得提取液;离心,取上清液,然后经滤膜过滤,得提取液;浓缩提取液,得浓缩液;
(3)向步骤(2)中的浓缩液中加入丙酮,丙酮的加入量为浓缩液体积的5-7倍,并加入pH调节剂调节pH值至7-7.5,搅拌20-30min后,放置5-6h,过滤,使用丙酮洗涤1-2次,得沉淀;然后加入水溶解沉淀物,得溶解液;
(4)将步骤(3)中的溶解液上大孔吸附树脂,使用质量浓度为65-70%的乙醇作为洗脱液进行洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至55℃相对密度1.06-1.09;
将所得浓缩液上聚酰胺树脂进行水洗,水洗后收集水洗液;
(5)步骤(4)所得水洗液加乙醇,使所得溶液中乙醇的质量浓度为50-60%,然后过脱色树脂,收集过柱液;
(6)将脱色后的洗脱液导入膜浓缩装置进行浓缩,将所得浓缩液在55-60℃下进行减压干燥至恒重,即得所述三七总皂苷。
优选地,步骤(2)中,所述低共熔溶剂由氢键供体和氢键受体通过氢键缔合形成;所述氢键供体为乙二醇、丙二醇或丁二木糖醇;所述氢键受体氯化胆碱或硫酸氢四丁基铵。进一步优选地,所述氢键供体和氢键受体的摩尔比为1:1-3。
优选地,步骤(2)中,所述三七粉料与混合溶剂的固液比为1:13-18g/ml。
优选地,步骤(2)中,所述pH调节剂为质量浓度为10-15%的柠檬酸溶液或质量浓度为10-15%的醋酸溶液。
优选地,步骤(3)中,所述pH调节剂为质量浓度为1-3%的氢氧化钾溶液或为质量浓度为1-3%的氢氧化钠溶液。
优选地,步骤(3)中,加入水溶解沉淀物,加水量为三七粉料质量的4-5.5倍。
优选地,步骤(4)中,所述大孔吸附树脂为HPD-100型大孔吸附树脂或D101大孔吸附树脂。
优选地,步骤(5)中所述脱色树脂为D941型弱碱性阴离子脱色树脂或D900型弱碱性阴离子交换树脂。
本发明有益的技术效果在于:
1、本发明在进行提取三七总皂苷前,先循环进行“加热/冷冻”预处理,一方面使三七具有多孔结构,疏松度高,使后续提取时,各种成分易于从细胞中溶出,另一方面可减少三七总皂苷与细胞内物质的结合度,分离程度高,对于提高总皂苷提取率十分有益。
2、在进行完“加热/冷冻”预处理后,进行三七总皂苷的提取,提取时采用低共熔溶剂和乙醇的混合溶剂,结合微波提取,有利于三七总皂苷的渗出,其中低共熔溶剂可以沉淀部分多糖、脂肪、蛋白质等物质,使所得提取液中的三七总皂苷的含量增加。
3、本发明在较低的温度下即可进行有效提取,适宜的微波功率不会使三七总皂苷分解,并可使酶仍然保持在较好活性。而依次采用“酶协同微波提取”、“酸性环境微波提取”,可使提取液中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rd等物质的含量显著增加。本发明中的粉碎目数适宜,加入混合溶剂后,提取过程不会出现糊化,且与酶、混合溶剂等接触面积大,皂苷类物质容易溶出,具有较高的提取速率。
4、本发明中的提取工艺温度较低,可避免一些活性成分的分解,有效提高了皂苷提取率及纯度。再采用丙酮去杂时,先将丙酮采用碱性试剂调节至中性,然后搅拌后静置沉淀,过滤,并采用丙酮洗涤,可有效去除较多量的黄酮类伴生物质、脂质等。之后采用大孔吸附树脂和聚酰胺树脂树脂吸附结合,不仅对三七提取液中的糖类物质进行有效去除,同时对于提取液中富含的黄酮类伴生物质及其脂质进行进一步去除。
5、通过本发明中提取方法提取得到的七总皂苷提取率高,达到l6.2%以上;并且三七总皂苷具有高纯度,按干燥品计算,含三七皂苷R1≥7.9%、人参皂苷Rg1≥35.8%、人参皂苷Re≥4.8%、人参皂苷Rb1≥32.7%、人参皂苷Rd≥11.1%,三七总皂苷总含量可达93.2%以上。
具体实施方式
下面结合实施例,对本发明进行具体描述。显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1:
一种高纯度三七总皂苷的提取方法,包括以下步骤:
(1)将三七整体置于烘箱中,抽真空的状态下加热至85℃,保持10min;然后快速放入-18℃的冰箱中保持20min;如此循环5次;
(2)将经步骤(1)处理所得的三七药材经粉碎后过80目筛,得三七粉料;向三七粉料中加入低共熔溶剂和质量浓度为85%的乙醇组成的混合溶剂,固液比为1:15g/ml;混合溶剂中低共熔溶剂与乙醇的体积比为1:2,低共熔溶剂由丙二醇和氯化胆碱按摩尔比1:2组成;
然后加入中性纤维素酶和果胶酶,中性纤维素酶的加入量为三七粉料质量的4%,果胶酶的加入量为三七粉料质量的1%;然后在温度为50℃下进行微波提取,微波功率为260W,提取时间为15min;然后使用质量浓度为12%的醋酸溶液调节pH值为5,继续微波提取,温度为50℃,微波功率为260W,提取时间为7min,得提取液;浓缩提取液,得浓缩液;
(3)向步骤(2)中的浓缩液中加入丙酮,丙酮的加入量为浓缩液体积的7倍,并加入质量浓度为2%的氢氧化钠溶液调节pH值至7,搅拌30min后,放置6h,过滤,使用丙酮洗涤2次,得沉淀;然后加入水溶解沉淀物,加水量为三七粉料质量的5.5倍;得溶解液;
(4)将步骤(3)中的溶解液上HPD-100型大孔吸附树脂,使用质量浓度为70%的乙醇作为洗脱液进行洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至55℃相对密度1.08;
将所得浓缩液上聚酰胺树脂进行水洗,水洗后收集水洗液;
(5)步骤(4)所得水洗液加乙醇,使所得溶液中乙醇的质量浓度为55%,然后过D900型弱碱性阴离子交换树脂,收集过柱液;
(6)将脱色后的洗脱液导入膜浓缩装置进行浓缩,将所得浓缩液在55℃下进行减压干燥至恒重,即得三七总皂苷。
实施例2:
一种高纯度三七总皂苷的提取方法,包括以下步骤:
(1)将三七整体置于烘箱中,抽真空的状态下加热至80℃,保持10min;然后快速放入-18℃的冰箱中保持18min;如此循环4次;
(2)将经步骤(1)处理所得的三七药材经粉碎后过100目筛,得三七粉料;向三七粉料中加入低共熔溶剂和质量浓度为90%的乙醇组成的混合溶剂,固液比为1:16g/ml;混合溶剂中低共熔溶剂与乙醇的体积比为1:2.5;低共熔溶剂由乙二醇和硫酸氢四丁基铵按摩尔比1:1组成;
然后加入中性纤维素酶和果胶酶,中性纤维素酶的加入量为三七粉料质量的3.5%,果胶酶的加入量为三七粉料质量的1.5%;然后在温度为45℃下进行微波提取,微波功率为300W,提取时间为12min;然后使用质量浓度为10%的柠檬酸溶液调节pH值为4.5,继续微波提取,温度为45℃,微波功率为200W,提取时间为6min,得提取液;浓缩提取液,得浓缩液;
(3)向步骤(2)中的浓缩液中加入丙酮,丙酮的加入量为浓缩液体积的7倍,并加入质量浓度为2%的氢氧化钾溶液调节pH值至7,搅拌25min后,放置6h,过滤,使用丙酮洗涤1次,得沉淀;然后加入水溶解沉淀物,加水量为三七粉料质量的5.5倍;得溶解液;
(4)将步骤(3)中的溶解液上HPD-100型大孔吸附树脂,使用质量浓度为65%的乙醇作为洗脱液进行洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至55℃相对密度1.07;
将所得浓缩液上聚酰胺树脂进行水洗,水洗后收集水洗液;
(5)步骤(4)所得水洗液加乙醇,使所得溶液中乙醇的质量浓度为50%,然后过D900型弱碱性阴离子交换树脂,收集过柱液;
(6)将脱色后的洗脱液导入膜浓缩装置进行浓缩,将所得浓缩液在55℃下进行减压干燥至恒重,即得三七总皂苷。
实施例3:
一种高纯度三七总皂苷的提取方法,包括以下步骤:
(1)将三七整体置于烘箱中,抽真空的状态下加热至85℃,保持10min;然后快速放入-18℃的冰箱中保持15min;如此循环5次;
(2)将经步骤(1)处理所得的三七药材经粉碎后过80目筛,得三七粉料;向三七粉料中加入低共熔溶剂和质量浓度为85%的乙醇组成的混合溶剂,固液比为1:18g/ml;混合溶剂中低共熔溶剂与乙醇的体积比为1:1;低共熔溶剂由丁二木糖醇和氯化胆碱按摩尔比1:1.5组成;
然后加入中性纤维素酶和果胶酶,中性纤维素酶的加入量为三七粉料质量的4%,果胶酶的加入量为三七粉料质量的1.5%;然后在温度为45℃下进行微波提取,微波功率为200W,提取时间为10min;然后使用质量浓度为10-15%的柠檬酸溶液调节pH值为5,继续微波提取,温度为45℃,微波功率为200W,提取时间为8min,得提取液;浓缩提取液,得浓缩液;
(2)向步骤(1)中的浓缩液中加入丙酮,丙酮的加入量为浓缩液体积的7倍,并加入质量浓度为2%的氢氧化钾溶液调节pH值至7,搅拌30min后,放置5h,过滤,使用丙酮洗涤1次,得沉淀;然后加入水溶解沉淀物,加水量为三七粉料质量的5.5倍;得溶解液;
(3)将步骤(2)中的溶解液上HPD-100型大孔吸附树脂,使用质量浓度为65%的乙醇作为洗脱液进行洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至55℃相对密度1.08;
将所得浓缩液上聚酰胺树脂进行水洗,水洗后收集水洗液;
(4)步骤(3)所得水洗液加乙醇,使所得溶液中乙醇的质量浓度为55%,然后过D941型弱碱性阴离子脱色树脂,收集过柱液;
(5)将脱色后的洗脱液导入膜浓缩装置进行浓缩,将所得浓缩液在55℃下进行减压干燥至恒重,即得三七总皂苷。
实施例4:
一种高纯度三七总皂苷的提取方法,包括以下步骤:
(1)将三七整体置于烘箱中,抽真空的状态下加热至85℃,保持10min;然后快速放入-18℃的冰箱中保持15min;如此循环5次;
(2)将经步骤(1)处理所得的三七药材经粉碎后过90目筛,得三七粉料;向三七粉料中加入低共熔溶剂和质量浓度为85%的乙醇组成的混合溶剂,固液比为1:15g/ml;混合溶剂中低共熔溶剂与乙醇的体积比为1:1.5;低共熔溶剂由丙二醇和硫酸氢四丁基铵按摩尔比1:1.5组成;
然后加入中性纤维素酶和果胶酶,中性纤维素酶的加入量为三七粉料质量的4%,果胶酶的加入量为三七粉料质量的1.5%;然后在温度为50℃下进行微波提取,微波功率为300W,提取时间为12min;然后使用质量浓度为10%的柠檬酸溶液调节pH值为5,继续微波提取,温度为50℃,微波功率为200W,提取时间为8min,得提取液;浓缩提取液,得浓缩液;
(3)向步骤(2)中的浓缩液中加入丙酮,丙酮的加入量为浓缩液体积的7倍,并加入质量浓度为1%的氢氧化钾溶液调节pH值至7.5,搅拌30min后,放置6h,过滤,使用丙酮洗涤2次,得沉淀;然后加入水溶解沉淀物,加水量为三七粉料质量的5.5倍;得溶解液;
(4)将步骤(3)中的溶解液上HPD-100型大孔吸附树脂,使用质量浓度为70%的乙醇作为洗脱液进行洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至55℃相对密度1.06;
将所得浓缩液上聚酰胺树脂进行水洗,水洗后收集水洗液;
(5)步骤(4)所得水洗液加乙醇,使所得溶液中乙醇的质量浓度为60%,然后过D900型弱碱性阴离子交换树脂,收集过柱液;
(6)将脱色后的洗脱液导入膜浓缩装置进行浓缩,将所得浓缩液在60℃下进行减压干燥至恒重,即得三七总皂苷。
实施例5:
一种高纯度三七总皂苷的提取方法,包括以下步骤:
(1)将三七整体置于烘箱中,抽真空的状态下加热至90℃,保持8min;然后快速放入-18℃的冰箱中保持20min;如此循环5次;
(2)将经步骤(1)处理所得的三七药材经粉碎后过80目筛,得三七粉料;向三七粉料中加入低共熔溶剂和质量浓度为80%的乙醇组成的混合溶剂,固液比为1:13g/ml;混合溶剂中低共熔溶剂与乙醇的体积比为1:2;低共熔溶剂由丁二木糖醇和氯化胆碱按摩尔比1:3组成;
然后加入中性纤维素酶和果胶酶,中性纤维素酶的加入量为三七粉料质量的4%,果胶酶的加入量为三七粉料质量的1.5%;然后在温度为50℃下进行微波提取,微波功率为260W,提取时间为15min;然后使用质量浓度为15%的柠檬酸溶液调节pH值为5,继续微波提取,温度为45℃,微波功率为300W,提取时间为5min,得提取液;浓缩提取液,得浓缩液;
(3)向步骤(2)中的浓缩液中加入丙酮,丙酮的加入量为浓缩液体积的5倍,并加入质量浓度为3%的氢氧化钾溶液调节pH值至7.5,搅拌20min后,放置5h,过滤,使用丙酮洗涤2次,得沉淀;然后加入水溶解沉淀物,加水量为三七粉料质量的5倍;得溶解液;
(4)将步骤(3)中的溶解液上HPD-100型大孔吸附树脂,使用质量浓度为65%的乙醇作为洗脱液进行洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至55℃相对密度1.09;
将所得浓缩液上聚酰胺树脂进行水洗,水洗后收集水洗液;
(5)步骤(4)所得水洗液加乙醇,使所得溶液中乙醇的质量浓度为60%,然后过D900型弱碱性阴离子交换树脂,收集过柱液;
(6)将脱色后的洗脱液导入膜浓缩装置进行浓缩,将所得浓缩液在60℃下进行减压干燥至恒重,即得三七总皂苷。
实施例6:
一种高纯度三七总皂苷的提取方法,包括以下步骤:
(1)将三七整体置于烘箱中,抽真空的状态下加热至90℃,保持10min;然后快速放入-18℃的冰箱中保持18min;如此循环3次;
(2)将经步骤(1)处理所得的三七药材经粉碎后过100目筛,得三七粉料;向三七粉料中加入低共熔溶剂和质量浓度为90%的乙醇组成的混合溶剂,固液比为1:18g/ml;混合溶剂中低共熔溶剂与乙醇的体积比为1:1;低共熔溶剂由丁二木糖醇和氯化胆碱按摩尔比1:2组成;
然后加入中性纤维素酶和果胶酶,中性纤维素酶的加入量为三七粉料质量的4.5%,果胶酶的加入量为三七粉料质量的1%;然后在温度为45℃下进行微波提取,微波功率为200W,提取时间为12min;然后使用质量浓度为10%的醋酸溶液调节pH值为4.5,继续微波提取,温度为45℃,微波功率为200W,提取时间为6min,得提取液;浓缩提取液,得浓缩液;
(3)向步骤(2)中的浓缩液中加入丙酮,丙酮的加入量为浓缩液体积的7倍,并加入质量浓度为2%的氢氧化钠溶液调节pH值至7,搅拌30min后,放置6h,过滤,使用丙酮洗涤1次,得沉淀;然后加入水溶解沉淀物,加水量为三七粉料质量的5.5倍;得溶解液;
(4)将步骤(3)中的溶解液上D101大孔吸附树脂,使用质量浓度为70%的乙醇作为洗脱液进行洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至55℃相对密度1.06;
将所得浓缩液上聚酰胺树脂进行水洗,水洗后收集水洗液;
(5)步骤(4)所得水洗液加乙醇,使所得溶液中乙醇的质量浓度为55%,然后过D941型弱碱性阴离子脱色树脂,收集过柱液;
(6)将脱色后的洗脱液导入膜浓缩装置进行浓缩,将所得浓缩液在55℃下进行减压干燥至恒重,即得三七总皂苷。
实施例7:
一种高纯度三七总皂苷的提取方法,包括以下步骤:
(1)将三七整体置于烘箱中,抽真空的状态下加热至85℃,保持9min;然后快速放入-18℃的冰箱中保持20min;如此循环3次;
(2)将经步骤(1)处理所得的三七药材经粉碎后过80目筛,得三七粉料;向三七粉料中加入低共熔溶剂和质量浓度为85%的乙醇组成的混合溶剂,固液比为1:15g/ml;混合溶剂中低共熔溶剂与乙醇的体积比为1:2;低共熔溶剂由乙二醇和硫酸氢四丁基铵按摩尔比1:2组成;
然后加入中性纤维素酶和果胶酶,中性纤维素酶的加入量为三七粉料质量的3.5%,果胶酶的加入量为三七粉料质量的1.2%;然后在温度为50℃下进行微波提取,微波功率为300W,提取时间为10min;然后使用质量浓度为12%的柠檬酸溶液调节pH值为4.5,继续微波提取,温度为50℃,微波功率为300W,提取时间为8min,得提取液;浓缩提取液,得浓缩液;
(3)向步骤(2)中的浓缩液中加入丙酮,丙酮的加入量为浓缩液体积的6倍,并加入质量浓度为1%的氢氧化钠溶液调节pH值至7,搅拌25min后,放置6h,过滤,使用丙酮洗涤2次,得沉淀;然后加入水溶解沉淀物,加水量为三七粉料质量的4倍;得溶解液;
(4)将步骤(3)中的溶解液上HPD-100型大孔吸附树脂,使用质量浓度为70%的乙醇作为洗脱液进行洗脱,收集洗脱液,减压浓缩至55℃相对密度1.09;
将所得浓缩液上聚酰胺树脂进行水洗,水洗后收集水洗液;
(5)步骤(4)所得水洗液加乙醇,使所得溶液中乙醇的质量浓度为50%,然后过D900型弱碱性阴离子交换树脂,收集过柱液;
(6)将脱色后的洗脱液导入膜浓缩装置进行浓缩,将所得浓缩液在60℃下进行减压干燥至恒重,即得三七总皂苷。
对比例1:
一种三七总皂苷的提取方法,与实施例7不同的是,不进行步骤(1)中的循环“加热/冷冻”预处理,直接将三七原料进行粉碎,其它步骤均与实施例7一致。
对比例2:
一种三七总皂苷的提取方法,与实施例7不同的是,将步骤(2)中混合溶剂替换为质量浓度为85%的乙醇,其它步骤均与实施例7一致。
对比例3:
一种三七总皂苷的提取方法,与实施例7不同的是,将步骤(2)中混合溶剂替换为相应的低共熔溶剂,其它步骤均与实施例7一致。
对比例4:
一种三七总皂苷的提取方法,与实施例7不同的是,步骤(2)中,微波提取时,只进行“酶协同微波提取”,即在加入中性纤维素酶和果胶酶后,在温度为50℃下进行微波提取,微波功率为300W,提取时间为18min;得提取液;浓缩提取液,得浓缩液。
其它步骤均与实施例7一致。
对比例5:
一种三七总皂苷的提取方法,与实施例7不同的是,步骤(2)中,微波提取时,只进行“酸性环境微波提取”,即在加入中性纤维素酶和果胶酶后,使用质量浓度为12%的柠檬酸溶液调节pH值为4.5,微波提取,温度为50℃,微波功率为300W,提取时间为18min,得提取液;浓缩提取液,得浓缩液;
其它步骤均与实施例7一致。
对比例6:
一种三七总皂苷的提取方法,与实施例7不同的是,步骤(3)为:向步骤(2)中的浓缩液中加入丙酮,丙酮的加入量为浓缩液体积的6倍,搅拌25min后,放置6h,过滤,使用丙酮洗涤2次,得沉淀;然后加入水溶解沉淀物,加水量为三七粉料质量的4倍;得溶解液。
其它步骤均与实施例7一致。
测试例:
七总皂苷中有效成分的鉴别:
(1)取各实施例和对比例中的三七总皂苷0.5mg,加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液。
(2)另取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品及人参皂苷Rd对照品,加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中国药典》四部通则0502)试验,吸取上述两种溶液各lμl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10))10℃以下放置的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以硫酸溶液(1—10),在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点;置紫外光灯(365nm)下检视,显相同的荧光斑点。
总皂苷中有效成分的含量测定:
用液相法按2015版《中国药典》规定方法检测实施例1-7以及对比例1-6中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd的含量。另外计算实施例1-7以及对比例1-6中中对应的总皂苷提取率。具体如表1所示。
表1皂苷含量及总皂苷提取率
由表1可知,通过本发明实施例1-7中的提取方法提取得到的三七总皂苷中,含三七皂苷R1≥7.9%、人参皂苷Rg1≥35.8%、人参皂苷Re≥4.8%、人参皂苷Rb1≥32.7%、人参皂苷Rd≥11.1%,三七总皂苷总含量可达93.2%以上,且总皂苷提取率在16.2%以上。
实施例7与对比例1相比可知。将三七进行“加热-冷冻”循环预处理,然后在进行后续处理,可明显提高总皂苷提取率,且对于总皂苷含量提升明显。实施例7与对比例2-3相比可知,采用低共熔溶剂和乙醇组成的混合溶剂相比于单独使用低共熔溶剂或乙醇作为溶剂时,有利于总皂苷成分含量以及总皂苷提取率的提升。实施例7与对比例4-6相比可知。当依次采用“酶协同微波提取”、“酸性环境微波提取”与单独采用“酶协同微波提取”或“酸性环境微波提取”相比,其可使总皂苷含量有一定的提高,并且可使总皂苷提取率明显上升。而在步骤(3)中的浓缩液中加入丙酮,后加入氢氧化钠溶液调节pH值至7-7.5,也及有利于各皂苷成分含量的提升。
尽管本发明的实施方案已公开如上,但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用,它完全可以被适用于各种适合本发明的领域,对于熟悉本领域的人员而言,对于本领域的普通技术人员而言,在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型,因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下,本发明并不限于特定的细节。