CN108938696A - 一种三七总皂苷的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种三七总皂苷的提取方法,通包括酶解处理、水提、大孔树脂吸附、活性炭吸附和阳离子交换树脂吸附。其中在水提中加入柠檬酸抗氧化,提高产品品质和得率。该方法以水作为溶剂对三七进行浸提,并且有利于减少产品中有机溶剂残留。
Description
技术领域
本发明属于化学药物提取领域,具体涉及一种三七总皂苷的提取方法。
背景技术
三七具有“生打熟补”功效,即服生三七,能活血化瘀,消肿止痛,参治跌打劳伤有效;服熟三七(用鸡油或其他油将生三七炸黄即成熟三七),能补血强身。经科学研究并通过临床试验证明:三七与人参一样,含有四环三萜等补养成份,而且比人参含量还高,三七所含的酮类化合物,能促进血液循环,扩张冠状动脉,降低心脏耗氧量,减轻心肌工作负担。
三七中的主要活性物质为三七总皂苷(其主要成份为:人参皂苷Rb1,人参皂苷Rg1,人参皂苷R1)。三七总皂苷是根据提取、分离技术从优质三七中提取有效的药用成分包括20多种皂苷活性物质、 17种微量元素、蛋白、丰富的维生素、多糖等。三七总皂苷主治活血祛瘀,通脉活络,具有抑制血小板聚集和增加脑血流量的作用,可以广泛应用于脑血管后遗症,视网膜中央静脉阻塞,眼前房出血等多种疾病。迄今,已发现三七总皂苷及其一些单体化合物在心血管系统、神经系统、物质代谢以及抗炎、抗肿瘤等方面具有较好的药理活性,尤其是在神经系统方面的活性报道得越来越多。如三七总皂苷及单体皂苷Rb1、Rg1能显著增强小鼠的学习和记忆能力;三七总皂苷具有降低机体的耗氧量,提高机体对缺氧的耐受力,抑制由ADP引起的家兔血小板聚集,扩张脑血管,使脑血流量增加,抗血栓和抗凝血作用。
现有的三七皂苷提取方法主要是通过醇提等方法进行提取,提取过程中有机溶剂消耗较大,且存在提取工艺复杂、提取率低、溶剂残留等问题,影响三七总皂苷的。因此,研究三七总皂苷的提取和纯化新方法具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种三七总皂苷的提取方法,避免溶剂残留问题,提高提取率和三七总皂苷品质。
本发明提供的三七总皂苷的提取方法,包括以下步骤:
(1)酶解处理:将新鲜三七粉碎粒状,拌入三七质量0.05-0.2%的黑曲霉、三七质量0.05-0.1%的草酸青霉胞外糖苷酶,微波加热至温度55-65℃,微波功率400-500W下进行酶解处理2-4h;
(2)将酶解处理后的三七用水浸泡,并加入三七质量0.5-3%的柠檬酸浸提8-24h,过滤得提取液;
(3)将所得三七提取液浓缩后,浓缩液过大孔树脂层析柱后,用 4-5倍柱体积水洗,70-80%乙醇洗脱,薄层检测收集目标化合物段液体,浓缩得到浓缩液;
(4)用浓缩液用4-6倍体积的水溶解,加入活性炭,在45-55℃吸附0.5-1h,过滤得滤液;
(5)将步骤(4)所得滤液过阳离子交换树脂,收集吸附液,用氢氧化钠溶液调节Ph=7~8,减压浓缩吸附液,得浓缩浆料;
(6)将浓缩浆料真空冷冻干燥,得三七总皂苷,含量>98%。
进一步地,步骤(1)将新鲜三七粉碎至10-20目。
进一步地,步骤(1)中黑曲霉与草酸青霉胞外糖苷酶的质量比为(1.5-2):1。
进一步地,步骤(1)中酶解处理还添加有三七质量0.05-0.1%的蛋白酶、三七质量0.05-0.1%的果胶酶。
进一步地,步骤(2)过滤后,将滤渣再次加水和柠檬酸浸提,过滤得到滤液,将二次滤液合并,得到三七提取液。
进一步地,步骤(2)在温度55-65℃下加热浸提。
进一步地,步骤(4)中活性炭的加入量为溶液体积的0.1-0.4%。
进一步地,步骤(3)所述大孔吸附树脂的型号选自HPD-100、 HPD-400、D101、D3520、D4020中的一种。
进一步地,步骤(6)在-50℃下冷冻干燥至少24h。
进一步地,步骤(1)中微波加热至温度60-65℃。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
1、本发明所述方法中,采用大孔树脂吸附mm,既富集样品,又除去三七中残留的农药,采用活性炭吸附,进一步完全去除农药残留,采用阳离子交换树脂吸附,除去重金属盐类物质,最终所出产品能保证含量合格,农药残留合格、重金属合格、残留溶剂安全合格。
2、本发明方法将以水作为溶剂对三七进行浸提,并在浸提过程中加入保护剂柠檬酸,从而能够降低三七总皂苷在提取过程中被氧化的几率,提高产品中三七总皂苷的品质,并且有利于减少产品中有机溶剂残留。
3、本发明所述方法,采用二次浸提的方式进行提取,并且在加热条件下浸提,提高了提取率,最大程度利用三七,有利于节约恒本。
4、本发明所述方法将酶解提取和水提取结合,避免是使用有机溶剂,酶解将三七中的三七皂苷有效成分充分提取,并结合微波处理,有利于提高提取率。
5.本发明方法工艺简单工意见单,提取效率高,无有机溶剂和金属残留,成本低廉,利于工业化生产。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明所述一种三七总皂苷的提取方法做进一步说明。以下所述仅为本发明的实施例,并非因此限制本发明的专利范围,凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换,或直接或间接运用在其他相关的技术领域,均同理包括在本发明的专利保护范围内。
实施例1
三七总皂苷的提取方法,包括以下步骤:
(1)酶解处理:将新鲜三七粉碎10-20目粒状,拌入三七质量 0.2%的黑曲霉、三七质量0.1%的草酸青霉胞外糖苷酶,微波加热至温度65℃,微波功率500W下进行酶解处理2h;
(2)将酶解处理后的三七用水浸泡,并加入三七质量3%的柠檬酸,在温度65℃下加热浸提12h,将滤渣再次加水和柠檬酸浸提,过滤得到滤液,将二次滤液合并,得到三七提取液;
(3)将所得三七提取液浓缩后,浓缩液过D101大孔树脂层析柱后,用5倍柱体积水洗,80%乙醇洗脱,薄层检测,收集样品段液体,浓缩得到浓缩液;
(4)用浓缩液用5倍体积的水溶解,加入活性炭,在55℃吸附 0.5h,活性炭的加入量为溶液体积的0.4%,过滤得滤液;
(5)将步骤(4)所得滤液过阳离子交换树脂,收集吸附液,用氢氧化钠调节Ph=7~8,减压浓缩吸附液,得浓缩浆料;
(6)将浓缩浆料在-50℃下真空冷冻干燥至少24h,得三七总皂苷,含量>98%。
实施例2
三七总皂苷的提取方法,包括以下步骤:
(1)酶解处理:将新鲜三七粉碎10-20目粒状,拌入三七质量 0.1%的黑曲霉、三七质量0.05%的草酸青霉胞外糖苷酶,微波加热至温度55℃,微波功率400W下进行酶解处理4h;
(2)将酶解处理后的三七用水浸泡,并加入三七质量1.5%的柠檬酸,在温度65℃下加热浸提8h,将滤渣再次加水和柠檬酸浸提,过滤得到滤液,将二次滤液合并,得到三七提取液;
(3)将所得三七提取液浓缩后,浓缩液过D101大孔树脂层析柱后,用5倍柱体积水洗,80%乙醇洗脱,薄层检测,收集样品段液体,浓缩得到浓缩液;
(4)用浓缩液用5倍体积的水溶解,加入活性炭,在55℃吸附1h,活性炭的加入量为溶液体积的0.1%,过滤得滤液;
(5)将步骤(4)所得滤液过阳离子交换树脂,收集吸附液,用氢氧化钠调节Ph=7~8,减压浓缩吸附液,得浓缩浆料;
(6)将浓缩浆料在-50℃下真空冷冻干燥至少24h,得三七总皂苷,含量>98%。
实施例3
三七总皂苷的提取方法,包括以下步骤:
(1)酶解处理:将新鲜三七粉碎10-20目粒状,拌入三七质量 0.15%的黑曲霉、三七质量0.05%的草酸青霉胞外糖苷酶,微波加热至温度60℃,微波功率500W下进行酶解处理3h;
(2)将酶解处理后的三七用水浸泡,并加入三七质量2.5%的柠檬酸,在温度65℃下加热浸提8h,将滤渣再次加水和柠檬酸浸提,过滤得到滤液,将二次滤液合并,得到三七提取液;
(3)将所得三七提取液浓缩后,浓缩液过D101大孔树脂层析柱后,用5倍柱体积水洗,80%乙醇洗脱,薄层检测,收集样品段液体,浓缩得到浓缩液;
(4)用浓缩液用5倍体积的水溶解,加入活性炭,在45℃吸附 1h,活性炭的加入量为溶液体积的0.4%,过滤得滤液;
(5)将步骤(4)所得滤液过阳离子交换树脂,收集吸附液,用氢氧化钠调节Ph=7~8,减压浓缩吸附液,得浓缩浆料;
(6)将浓缩浆料在-50℃下真空冷冻干燥至少24h,得三七总皂苷,含量>98%。
实施例4
三七总皂苷的提取方法,包括以下步骤:
(1)酶解处理:将新鲜三七粉碎10-20目粒状,拌入三七质量 0.15%的黑曲霉、三七质量0.1%的草酸青霉胞外糖苷酶,微波加热至温度62℃,微波功率400W下进行酶解处理4h;
(2)将酶解处理后的三七用水浸泡,并加入三七质量2%的柠檬酸,在温度55℃下加热浸提8h,将滤渣再次加水和柠檬酸浸提,过滤得到滤液,将二次滤液合并,得到三七提取液;
(3)将所得三七提取液浓缩后,浓缩液过D101大孔树脂层析柱后,用5倍柱体积水洗,80%乙醇洗脱,薄层检测,收集样品段液体,浓缩得到浓缩液;
(4)用浓缩液用5倍体积的水溶解,加入活性炭,在55℃吸附 1h,活性炭的加入量为溶液体积的0.1%,过滤得滤液;
(5)将步骤(4)所得滤液过阳离子交换树脂,收集吸附液,用氢氧化钠调节Ph=7~8,减压浓缩吸附液,得浓缩浆料;
(6)将浓缩浆料在-50℃下真空冷冻干燥至少24h,得三七总皂苷,含量>98%。
实施例5
三七总皂苷的提取方法,包括以下步骤:
(1)酶解处理:将新鲜三七粉碎10-20目粒状,拌入三七质量 0.05%的黑曲霉、三七质量0.08%的草酸青霉胞外糖苷酶、三七质量 0.1%的蛋白酶、三七质量0.1%的果胶酶,微波加热至温度65℃,微波功率400W下进行酶解处理3h;
(2)将酶解处理后的三七用水浸泡,并加入三七质量1%的柠檬酸,在温度60℃下加热浸提20h,将滤渣再次加水和柠檬酸浸提,过滤得到滤液,将二次滤液合并,得到三七提取液;
(3)将所得三七提取液浓缩后,浓缩液过D101大孔树脂层析柱后,用5倍柱体积水洗,80%乙醇洗脱,薄层检测,收集样品段液体,浓缩得到浓缩液;
(4)用浓缩液用5倍体积的水溶解,加入活性炭,在50℃吸附 0.5h,活性炭的加入量为溶液体积的0.2%,过滤得滤液;
(5)将步骤(4)所得滤液过阳离子交换树脂,收集吸附液,用氢氧化钠调节Ph=7~8,减压浓缩吸附液,得浓缩浆料;
(6)将浓缩浆料在-50℃下真空冷冻干燥至少24h,得三七总皂苷,含量>98%。
实施例6
三七总皂苷的提取方法,包括以下步骤:
(1)酶解处理:将新鲜三七粉碎10-20目粒状,拌入三七质量 0.2%的黑曲霉、三七质量0.08%的草酸青霉胞外糖苷酶、三七质量 0.08%的蛋白酶、三七质量0.05%的果胶酶,微波加热至温度65℃,微波功率400W下进行酶解处理3h;
(2)将酶解处理后的三七用水浸泡,并加入三七质量3%的柠檬酸,在温度55℃下加热浸提24h,将滤渣再次加水和柠檬酸浸提,过滤得到滤液,将二次滤液合并,得到三七提取液;
(3)将所得三七提取液浓缩后,浓缩液过D101大孔树脂层析柱后,用5倍柱体积水洗,80%乙醇洗脱,薄层检测,收集样品段液体,浓缩得到浓缩液;
(4)用浓缩液用5倍体积的水溶解,加入活性炭,在55℃吸附 0.5h,活性炭的加入量为溶液体积的0.1%,过滤得滤液;
(5)将步骤(4)所得滤液过阳离子交换树脂,收集吸附液,用氢氧化钠调节Ph=7~8,减压浓缩吸附液,得浓缩浆料;
(6)将浓缩浆料在-50℃下真空冷冻干燥至少24h,得三七总皂苷,含量>98%。
实施例7
三七总皂苷的提取方法,包括以下步骤:
(1)酶解处理:将新鲜三七粉碎10-20目粒状,拌入三七质量 0.12%的黑曲霉、三七质量0.08%的草酸青霉胞外糖苷酶、三七质量 0.05%的蛋白酶、三七质量0.1%的果胶酶,微波加热至温度60℃,微波功率400W下进行酶解处理2h;
(2)将酶解处理后的三七用水浸泡,并加入三七质量0.5%的柠檬酸,在温度65℃下加热浸提12h,将滤渣再次加水和柠檬酸浸提,过滤得到滤液,将二次滤液合并,得到三七提取液;
(3)将所得三七提取液浓缩后,浓缩液过D101大孔树脂层析柱后,用5倍柱体积水洗,80%乙醇洗脱,薄层检测,收集样品段液体,浓缩得到浓缩液;
(4)用浓缩液用5倍体积的水溶解,加入活性炭,在55℃吸附0.5h,活性炭的加入量为溶液体积的0.4%,过滤得滤液;
(5)将步骤(4)所得滤液过阳离子交换树脂,收集吸附液,用氢氧化钠调节Ph=7~8,减压浓缩吸附液,得浓缩浆料;
(6)将浓缩浆料在-50℃下真空冷冻干燥至少24h,得三七总皂苷,含量>98%。
Claims (10)
1.一种三七总皂苷的提取方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)酶解处理:将新鲜三七粉碎粒状,拌入三七质量0.05-0.2%的黑曲霉、三七质量0.05-0.1%的草酸青霉胞外糖苷酶,微波加热至温度55-65℃,微波功率400-500W下进行酶解处理2-4h;
(2)将酶解处理后的三七用水浸泡,并加入三七质量0.5-3%的柠檬酸浸提8-24h,过滤得提取液;
(3)将所得三七提取液浓缩后,浓缩液过大孔树脂层析柱后,用4-5倍柱体积水洗,70-80%乙醇洗脱,薄层检测收集目标化合物段液体,浓缩得到浓缩液;
(4)用浓缩液用4-6倍体积的水溶解,加入活性炭,在45-55℃吸附0.5-1h,过滤得滤液;
(5)将步骤(4)所得滤液过阳离子交换树脂,收集吸附液,用氢氧化钠溶液调节Ph=7~8,减压浓缩吸附液,得浓缩浆料;
(6)将浓缩浆料真空冷冻干燥,得三七总皂苷。
2.根据权利要求1所述三七总皂苷的提取方法,其特征在于,步骤(1)将新鲜三七粉碎至10-20目。
3.根据权利要求1所述三七总皂苷的提取方法,其特征在于,步骤(1)中黑曲霉与草酸青霉胞外糖苷酶的质量比为(1.5-2):1。
4.根据权利要求1所述三七总皂苷的提取方法,其特征在于,步骤(1)中酶解处理还添加有三七质量0.05-0.1%的蛋白酶、三七质量0.05-0.1%的果胶酶。
5.根据权利要求1所述三七总皂苷的提取方法,其特征在于,步骤(2)过滤后,将滤渣再次加水和柠檬酸浸提,过滤得到滤液,将二次滤液合并,得到三七提取液。
6.根据权利要求1所述三七总皂苷的提取方法,其特征在于,步骤(2)在温度55-65℃下加热浸提。
7.根据权利要求1所述三七总皂苷的提取方法,其特征在于,步骤(4)中活性炭的加入量为溶液体积的0.1-0.4%。
8.根据权利要求1所述三七总皂苷的提取方法,其特征在于,步骤(3)所述大孔吸附树脂的型号选自HPD-100、HPD-400、D101、D3520、D4020中的一种。
9.根据权利要求1所述三七总皂苷的提取方法,其特征在于,步骤(6)在-50℃下冷冻干燥至少24h。
10.根据权利要求1所述三七总皂苷的提取方法,其特征在于,步骤(1)中微波加热至温度60-65℃。
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