CN108728407A - 一种利用外置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制备方法 - Google Patents

一种利用外置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于再生医学技术领域，公开了一种利用外置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制备方法，包括离心、超声波破碎、离心收集等步骤。本发明所述制备方法利用外置式超声波破碎脂肪组织中成熟脂肪细胞，不加入外源性化学物质从而富集富含ADSC的SVF细胞，并且保留有SVF粘附在ECM上的生理关系，安全高效且无污染，同时提高自体脂肪移植的有效性。本发明所述制备方法快捷、方便，提高了移植材料的细胞活力、降低细胞碎片率，使移植材料在疾病治疗及创伤修复中发挥更大作用，具有广阔的应用前景。

Description

一种利用外置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制 备方法
技术领域
本发明涉及再生医学技术领域，具体地，涉及一种利用外置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制备方法。
背景技术
富含脂肪源性干细胞(Adipose-derived stromal/stem cells，ADSC)的脂肪基质血管部分(Stromal vascular fraction，SVF)在组织工程学中的应用受到越来越多科研工作者的关注。SVF中的ADSC因为来源充足、具有较强的自我更新能力、分离培养较为容易、增殖较快、全能性较高等优点，已经成为干细胞治疗领域的热点，在组织重建与修复中展现出广阔的应用前景。目前制备富含脂肪源性干细胞的基质血管部分的快速、廉价、无酶的技术是干细胞治疗研究的主要目标之一。
目前，分离脂肪干细胞的方法主要是酶解法及推注法。酶解法在富集过程中加入了外源性消化酶，且花费较高需要在特定实验条件下进行，目前国际上不允许在临床上使用。推注法是纯物理方法分离纯化，在临床上具有更广阔的利用价值，但是现有的推注法操作繁琐，且造成移植材料SVF胶(富含SVF细胞的脂肪组织干细胞凝胶)的活细胞比例低、细胞碎片高从而导致炎症反应比较明显。因此，现急需开发一种能有效提高基质血管片段细胞活性、降低细胞凋亡率的制备方法。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种利用外置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制备方法，本发明采用超声波破碎细胞，不需要加入外源性化学物质从而富集SVFs，能有效提高基质血管片段细胞活性、降低细胞凋亡率。
本发明的另一目的在于提供上述制备方法制得的基质血管片段细胞材料在制备皮肤移植材料、软组织填充材料、修复药物或皮肤抗皱产品中的应用。
为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：
一种利用外置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制备方法，包括如下步骤：
S1.将脂肪组织于1000～8000rpm条件下离心1～5min，离心后若分为三层，分别为顶层油脂、中间层混合物和底层肿胀液，则弃去底层肿胀液，过滤去除顶层油脂并取滤液；若不分层或分层不明显，则重复此步骤；
S2.将S1所得滤液置于细胞培养瓶中，先横着置于超声波仪器中，进行超声破碎；再竖着置于超声波仪器中，进行超声破碎；所述超声破碎的功率为总功率的45～95％，时间5～55min，温度20～38℃；
S3.将经S2超声破碎后的脂肪混合物于1000～8000rpm条件下离心3～10min；
S4.经S3离心后，若脂肪混合物分为三层，分别为顶层油脂、中间层混合物和底层肿胀液，且油脂层体积占脂肪混合物总体积60％以上，则弃去顶层油脂，取中间层混合物，即得含有高度浓缩的基质血管片段细胞的自体移植材料；若脂肪混合物不分层或分层不明显，则重复S2～S3。
本发明针对现有的富集脂肪干细胞及制备细胞外基质移植材料的方法的不足提供一种新的富集SVF细胞及细胞外基质的途径，选择用外置式超声波(可空化效应)破碎脂肪组织中成熟脂肪细胞，不加入外源性化学物质从而富集富含ADSC的SVF细胞，并且保留有SVF粘附在ECM上的生理关系，避免了内置式超声波由于探头放置于脂肪组织内、易污染导致SVF细胞感染而无法在临床上使用的缺点。本发明方法安全高效且无污染，同时提高自体脂肪移植的有效性，使无污染的脂肪移植材料的制备更加快捷、方便，提高移植材料的细胞活力、降低细胞碎片率，使移植材料在疾病治疗及创伤修复中发挥更大作用。
其中，S1所述脂肪组织的获取均采用吸脂手术，从患者腹部或者大腿吸取，即最终获得的SVFs来源于自体脂肪。S1中在推出底层肿胀液时应在不损失脂肪的情况下尽可能将肿胀液去除干净，否则最后所得产物会带有血细胞，目的是浓缩脂肪组织。S1中在转移中间层混合物时，尽可能不要将顶层油脂转入离心管中。S2超声破碎完成之后，离心管中的脂肪混合物应当为浅黄色蛋花汤样，目的是破碎成熟的脂肪细胞，使SVF细胞游离出来。
此外，发明人在研究各实验参数对制备得到的活细胞数量、细胞碎片率、细胞活性等方面的影响时，发现超声波破碎条件对SVFs的影响最大。经过发明人大量的创造性摸索和试验，最终得到了最适合的一整套制备工艺。
优选地，S2中所述超声破碎的功率为总功率的50～95％，时间5～50min，温度22～37℃。
更优选地，S2中所述超声破碎的功率为总功率的60～95％，时间6～45min，温度25～37℃。
更优选地，S2中所述超声破碎的功率为总功率的70～90％，时间7～30min，温度32～37℃。
优选地，S1中所述过滤为20～120目数筛网过滤。
优选地，所述筛网的目数为60～80目。
更优选地，所述筛网的目数为60目。
优选地，所述筛网过滤时采用负压吸取残留在过滤器中的脂肪组织。
优选地，S1中所述离心条件为4000～6000rpm离心3～4min。
更优选地，S1中所述离心条件为5000rpm离心3min。
优选地，S3中所述离心条件为3000～5000rpm离心4～6min。
更优选地，S3中所述离心条件为5000rpm离心4min。
本发明还请求保护由上述制备方法制得的基质血管片段细胞材料在制备皮肤移植材料、软组织填充材料、修复药物或皮肤抗皱产品中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明所述制备方法利用超声波破碎脂肪组织中大部分成熟脂肪细胞，同时应用絮状离心沉淀技术，将破碎成熟脂肪细胞产生的油滴汇聚出去，从而达到富集SVFs的效果。整个制备过程中没有加入任何外源性化学生物试剂，保留有SVF粘附在ECM上的生理关系，避免了内置式超声波由于探头放置于脂肪组织内、易污染导致SVF细胞感染而无法在临床上使用的缺点。此外，本发明方法为自体移植，故不存在安全性及伦理性争议。
(2)本发明方法简单易行，在制备成本低的情况下，就能有效避免SVFs细胞数量及活力的损失，由该方法所制备的脂肪自体移植细胞材料中含有丰富的脂肪来源干细胞及基质血管部分；经过超声波处理后，细胞活性大幅度提高、细胞凋亡率大幅度下降，从而使得移植的有效性得到很大提高。由本发明方法制备得到的细胞材料可用于自体移植干细胞疗法，降低了脂肪移植的并发症，提高了移植脂肪的存活率，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
仪器：宁波新芝SB-1200DTY扫频超声波清洗机
实施例1
一种利用外置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制备方法，具体步骤如下：
(1)将获得的脂肪组织以6000rpm离心4min，将离心后的底层血液弃去(推出下层肿胀液时应在不损失脂肪的情况下尽可能将肿胀液推干净，否则最后所得产物会带有血色)，然后过80目筛网(过滤后应负压吸取残留在过滤器中的脂肪组织，避免损失过多脂肪)，将滤液转移至10mL离心管中(转移中上层混合物时候，尽可能不要将上层油脂转入离心管)；
(2)取出中间黄色层脂肪组织，装入细胞培养瓶，先横着放置超声波仪器中，调节功率为总功率的95％，处理时间为10min进行破碎；再竖着放置超声波仪器中，调节功率为总功率的95％，处理时间为10min进行破碎；控制温度为30℃；
(3)将破碎后的脂肪混合物以4000rpm离心5min；
(4)经步骤(3)离心后，若混合物分层，顶层为油脂，底层为肿胀液，玻璃珠沉在离心管底部，且油脂层体积占整个混合物体积60％或者以上，则用枪头将顶层油脂吸弃，随之将中间层混合物转移至灭菌2mL离心管，中间层混合物即为含有高度浓缩的脂肪来源干细胞和基质血管片段细胞的自体移植材料；若离心后，混合物不分层，或分层不明显，则重复步骤(2)～(3)。
实施例2
一种利用外置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制备方法，具体步骤如下：
(1)将获得的脂肪组织以4000rpm离心3min，将离心后的底层血液弃去(推出下层肿胀液时应在不损失脂肪的情况下尽可能将肿胀液推干净，否则最后所得产物会带有血色)，然后过70目筛网(过滤后应负压吸取残留在过滤器中的脂肪组织，避免损失过多脂肪)，将滤液转移至20mL离心管中(转移中上层混合物时候，尽可能不要将上层油脂转入离心管)；
(2)取出中间黄色层脂肪组织，装入细胞培养瓶，先横着放置超声波仪器中，调节功率为总功率的75％，处理时间为15min进行破碎；再竖着放置超声波仪器中，调节功率为总功率的95％，处理时间为10min进行破碎；控制温度为31℃；
(3)将破碎后的脂肪混合物以4000rpm离心5min；
(4)经步骤(3)离心后，若混合物分层，顶层为油脂，底层为肿胀液，玻璃珠沉在离心管底部，且油脂层体积占整个混合物体积68％或者以上，则用枪头将顶层油脂吸弃，随之将中间层混合物转移至灭菌2mL离心管，中间层混合物即为含有高度浓缩的脂肪来源干细胞和基质血管片段细胞的自体移植材料；若离心后，混合物不分层，或分层不明显，则重复步骤(2)～(3)。
实施例3
一种利用外置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制备方法，具体步骤如下：
(1)将获得的脂肪组织以5000rpm离心3min，将离心后的底层血液弃去(推出下层肿胀液时应在不损失脂肪的情况下尽可能将肿胀液推干净，否则最后所得产物会带有血色)，然后过60目筛网(过滤后应负压吸取残留在过滤器中的脂肪组织，避免损失过多脂肪)，将滤液转移至10mL离心管中(转移中上层混合物时候，尽可能不要将上层油脂转入离心管)；
(2)取出中间黄色层脂肪组织，装入细胞培养瓶，先横着放置超声波仪器中，调节功率为总功率的80％，处理时间为10min进行破碎；再竖着放置超声波仪器中，调节功率为总功率的65％，处理时间为6min进行破碎；控制温度为28℃；
(3)将破碎后的脂肪混合物以5000rpm离心4min；
(4)经步骤(3)离心后，若混合物分层，顶层为油脂，底层为肿胀液，玻璃珠沉在离心管底部，且油脂层体积占整个混合物体积70％或者以上，则用枪头将顶层油脂吸弃，随之将中间层混合物转移至灭菌2mL离心管，中间层混合物即为含有高度浓缩的脂肪来源干细胞和基质血管片段细胞的自体移植材料；若离心后，混合物不分层，或分层不明显，则重复步骤(2)～(3)。
实施例4
一种利用外置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制备方法，具体步骤如下：
(1)将获得的脂肪组织以4000rpm离心3min，将离心后的底层血液弃去(推出下层肿胀液时应在不损失脂肪的情况下尽可能将肿胀液推干净，否则最后所得产物会带有血色)，然后过80目筛网(过滤后应负压吸取残留在过滤器中的脂肪组织，避免损失过多脂肪)，将滤液转移至20mL离心管中(转移中上层混合物时候，尽可能不要将上层油脂转入离心管)；
(2)取出中间黄色层脂肪组织，装入细胞培养瓶，先横着放置超声波仪器中，调节功率为总功率的80％，处理时间为8min进行破碎；再竖着放置超声波仪器中，调节功率为总功率的90％，处理时间为8min进行破碎；控制温度为30℃；
(3)将破碎后的脂肪混合物以4000rpm离心6min；
(4)经步骤(3)离心后，若混合物分层，顶层为油脂，底层为肿胀液，玻璃珠沉在离心管底部，且油脂层体积占整个混合物体积65％或者以上，则用枪头将顶层油脂吸弃，随之将中间层混合物转移至灭菌2mL离心管，中间层混合物即为含有高度浓缩的脂肪来源干细胞和基质血管片段细胞的自体移植材料；若离心后，混合物不分层，或分层不明显，则重复步骤(2)～(3)。
实施例5SVF细胞量、活性检测
分别采用本发明实施例1～4所述方法和酶解法进行SVFs细胞的制备，分别采用台盼蓝染色、流式细胞分析技术、LDH细胞活性检测方法测定活细胞含量、细胞碎片率和细胞活性，测定结果见表1(结果是3次实验的平均值)。
表1 SVFs细胞测定结果
由表1可知，经本发明方法制得的SVFs从存活细胞含量、细胞碎片率、细胞活力等方面检测与酶解法测定结果基本相同，但本发明方法中并没有引入外源性消化酶及外源性物质，不存在任何风险，而酶解法在国际上是不允许的且在操作上存在污染的可能性，因此本发明方法具有更好的安全性和可靠性。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种利用外置式超声波高效富集基质血管片段细胞材料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.将脂肪组织于1000～8000rpm条件下离心1～5min，离心后若分为三层，分别为顶层油脂、中间层混合物和底层肿胀液，则弃去底层肿胀液，过滤去除顶层油脂并取滤液；若不分层或分层不明显，则重复此步骤；
S2.将S1所得滤液置于细胞培养瓶中，先横着置于超声波仪器中，进行超声破碎；再竖着置于超声波仪器中，进行超声破碎；所述超声破碎的功率为总功率的45～95%，时间5～55min，温度20～38℃；
S3.将经S2超声破碎后的脂肪混合物于1000～8000rpm条件下离心3～10min；
S4.经S3离心后，若脂肪混合物分为三层，分别为顶层油脂、中间层混合物和底层肿胀液，且油脂层体积占脂肪混合物总体积60%以上，则弃去顶层油脂，取中间层混合物，即得含有高度浓缩的基质血管片段细胞的自体移植材料；若脂肪混合物不分层或分层不明显，则重复S2～S3。
2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S2中所述超声破碎的功率为总功率的50～95%，时间5～50min，温度22～37℃。
3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，S2中所述超声破碎的功率为总功率的60～95%，时间6～45min，温度25～37℃。
4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，S2中所述超声破碎的功率为总功率的70～90%，时间7～30min，温度32～37℃。
5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S1中所述过滤为20～120目数筛网过滤。
6.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述筛网的目数为60～80目。
7.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述筛网过滤时采用负压吸取残留在过滤器中的脂肪组织。
8.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S1中所述离心条件为4000～6000rpm离心3～4min。
9.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S3中所述离心条件为3000～5000rpm离心4～6min。
10.由权利要求1～9任一项所述制备方法制得的基质血管片段细胞材料在制备皮肤移植材料、软组织填充材料、修复药物或皮肤抗皱产品中的应用。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109876189A (zh) * 2018-05-28 2019-06-14 聂云飞 一种利用超声波高效制备脂肪源生物材料的方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109876189A (zh) * 2018-05-28 2019-06-14 聂云飞 一种利用超声波高效制备脂肪源生物材料的方法
CN109876189B (zh) * 2018-05-28 2022-02-18 聂云飞 一种利用超声波高效制备脂肪源生物材料的方法

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