CN108744043A - 一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于再生医学技术领域，公开了一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法，包括离心、超声波破碎、离心收集等步骤。本发明所述制备方法利用超声波破碎脂肪组织中大部分成熟脂肪细胞，去除成熟脂肪细胞和SVF细胞，制备得到ECM，有效避免了操作繁琐导致的ECM含量过低和细胞因子损失。本发明方法不加入外源性化学物质制备富含细胞因子的ECM，且制得的ECM中不含有外源性物质，能提高自体脂肪移植和直接作为生物填充材料的有效性。由本发明方法制备得到的脂肪源ECM材料可用于自体移植疗法，降低了脂肪移植的并发症，提高了移植脂肪的存活率，具有广阔的应用前景。

Description

一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法
技术领域
本发明涉及再生医学技术领域，具体地，涉及一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法。
背景技术
脂肪移植通常被整形外科用来解决轮廓异常和软组织缺损，然而脂肪细胞的存留率和体积填充的作用是不可预知的，因此需要寻求一种新的生物材料。对人类脂肪组织的细胞外基质利用的初步研究显示其在脂肪移植中具有独特的作用。通常情况下，大量的脂肪组织在腹壁成形术、吸脂、塑身和乳房缩小手术过程中作为医疗废弃物被丢弃。至今，研究的热点集中在脂肪移植物获取和处理的优化方面，或者其细胞组分如基质血管片段(SVF)上。然而，非细胞组分的细胞外基质(ECM)同样重要。Young等人研究了使用市售的软组织填充剂，分别采用合成的和天然的聚合物，使用和不使用细胞外基质(ECM)的材料进行脂肪组织工程试验，发现ECM的产品最有可能促进新生脂肪形成，从而促进长期保留。
目前分离ECM的方法，主要是Flynn提出的反复冻融+多次酶解+极性溶剂萃取的方法，该方法不仅耗时长，费用高，操作繁琐，其中细胞因子因多次反复处理丢失殆尽，且需要在特定实验条件下进行，所以在临床方面并无很大的利用价值。因此，现急需开发一种能高效富集ECM且减少细胞因子损失的方法。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法，本发明采用超声波破碎细胞，不需要加入外源性化学物质从而富集ECM，能有效提高ECM含量、降低细胞因子的损失。
本发明的另一目的在于提供所述方法制得的脂肪来源细胞外基质在制备皮肤移植材料、软组织填充材料、修复药物或皮肤抗皱产品中的应用。
为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：
一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法，包括如下步骤：
S1.将脂肪组织于1000～10000rpm条件下离心1～5min，离心后若分为三层，分别为顶层油脂、中间层混合物和底层肿胀液，则弃去底层肿胀液，过滤去除顶层油脂并取滤液；若不分层或分层不明显，则重复此步骤；
S2.将S1所得滤液超声破碎，超声破碎条件为30～200W、1～100s；再继续超声破碎，超声破碎条件为10～100W、1～60s；温度25～38℃；
S3.将经S2超声破碎后的脂肪混合物于1000～10000rpm条件下离心3～10min；
S4.经S3离心后，若脂肪混合物分为三层，分别为顶层油脂、中间层混合物和底层肿胀液，且油脂层体积占脂肪混合物总体积60％以上，则弃去顶层油脂，取中间层混合物，加等体积生理盐水混匀，于4000～10000rpm条件下离心3～8min；弃去离心沉淀，收集上层浅黄色絮状物，即得富含细胞因子的细胞外基质材料；若脂肪混合物不分层或分层不明显，则重复S2～S3。
本发明所述制备方法利用超声波破碎脂肪组织中大部分成熟脂肪细胞，去除成熟脂肪细胞和SVF细胞，制备得到ECM，有效避免了操作繁琐导致的ECM含量过低和细胞因子损失。本发明方法不加入外源性化学物质制备富含细胞因子的ECM，且制得的ECM中不含有外源性物质，能提高自体脂肪移植和直接作为生物填充材料的有效性。由本发明方法制备得到的脂肪源ECM材料可用于自体移植疗法，降低了脂肪移植的并发症，提高了移植脂肪的存活率，具有广阔的应用前景。
其中，S1所述脂肪组织的获取均采用吸脂手术，从患者腹部或者大腿吸取，即最终获得的ECM来源于自体脂肪。S1中在推出底层肿胀液时应在不损失脂肪的情况下尽可能将肿胀液去除干净，否则最后所得产物会带有血细胞，目的是浓缩脂肪组织。S1中在转移中间层混合物时，尽可能不要将顶层油脂转入离心管中。S2超声破碎完成之后，离心管中的脂肪混合物应当为浅黄色蛋花汤样，目的是破碎成熟的脂肪细胞，使ECM游离出来。
此外，发明人在研究各实验参数对层粘连蛋白、胶原蛋白IV、SDF-1、VEGF等细胞因子的影响时，发现超声波破碎条件的影响最大。经过发明人大量的创造性摸索和试验，最终得到了最适合的一整套制备工艺。
优选地，S2中所述超声破碎的条件为30～150W、10～80s，再继续超声破碎，超声破碎条件为10～80W、1～50s、26～37℃。
更优选地，S2中所述超声破碎的条件为30～100W、10～60s，再继续超声破碎，超声破碎条件为10～60W、1～40、27～37℃s。
更优选地，S2中所述超声破碎的条件为30～80W、10～50s，再继续超声破碎，超声破碎条件为10～50W、1～35s、28～36℃。
优选地，S1中所述过滤为20～120目数筛网过滤。
优选地，所述筛网的目数为60～80目。
更优选地，所述筛网的目数为80目。
优选地，所述筛网过滤时采用负压吸取残留在过滤器中的脂肪组织。
优选地，S1中所述离心条件为4000～5000rpm离心2～5min。
更优选地，S1中所述离心条件为4000rpm离心5min。
优选地，S3中所述离心条件为3000～5000rpm离心3～5min。
更优选地，S3中所述离心条件为5000rpm离心3min。
本发明还请求保护由上述制备方法制得的脂肪来源细胞外基质在制备皮肤移植材料、软组织填充材料、修复药物或皮肤抗皱产品中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明所述制备方法利用超声波破碎脂肪组织中大部分成熟脂肪细胞，同时应用絮状离心沉淀技术，将破碎成熟脂肪细胞产生的油滴汇聚出去，从而达到富集ECM的效果。整个制备过程中没有加入任何外源性化学生物试剂，并且为自体移植，故不存在安全性及伦理性争议。
(2)本发明方法操作简单，制备成本低，能有效避免操作繁琐导致的ECM含量过低和细胞因子损失，由该方法所制备的脂肪源ECM材料中含有丰富的细胞因子，从而使得移植的有效性得到很大提高。由该方法制备得到的脂肪源ECM材料可用于自体移植干细胞疗法，降低了脂肪移植的并发症，提高了移植脂肪的存活率，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
仪器：宁波新芝JY92-IIN超声波细胞粉碎仪。
实施例1
一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法，具体步骤如下：
(1)将获得的脂肪组织以5000rpm离心2min，将离心后的底层血液弃去(推出下层肿胀液时应在不损失脂肪的情况下尽可能将肿胀液推干净，否则最后所得产物会带有血色)，然后过70目筛网(过滤后应负压吸取残留在过滤器中的脂肪组织，避免损失过多脂肪)，将滤液转移至无菌离心管中(转移中上层混合物时候，尽可能不要将上层油脂转入离心管)；
(2)将脂肪组织放入超声波细胞破碎仪，调节功率为45W，时间为25s进行超声破碎；再继续超声破碎，超声破碎条件为50W、15s；温度28℃；
(3)将震荡破碎后的脂肪混合物以3000rpm离心5min；
(4)经步骤(3)离心后，若混合物分层，顶层为油脂，底层为肿胀液，且油脂层体积占整个混合物体积75％或者以上，则用枪头将顶层油脂吸弃，随之将中间层混合物转移至灭菌5mL离心管，加等体积生理盐水混匀，于5000rpm条件下离心3min；弃去离心沉淀，收集上层浅黄色絮状物，即得富含细胞因子的细胞外基质材料；若离心后，混合物不分层，或分层不明显，则重复步骤(2)～(3)。
实施例2
一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法，具体步骤如下：
(1)将获得的脂肪组织以4000rpm离心5min，将离心后的底层血液弃去(推出下层肿胀液时应在不损失脂肪的情况下尽可能将肿胀液推干净，否则最后所得产物会带有血色)，然后过60目筛网(过滤后应负压吸取残留在过滤器中的脂肪组织，避免损失过多脂肪)，将滤液转移至无菌离心管中(转移中上层混合物时候，尽可能不要将上层油脂转入离心管)；
(2)将脂肪组织放入超声波细胞破碎仪，调节功率为50W，时间为15s进行超声破碎；再继续超声破碎，超声破碎条件为45W、25s；温度30℃；
(3)将震荡破碎后的脂肪混合物以5000rpm离心3min；
(4)经步骤(3)离心后，若混合物分层，顶层为油脂，底层为肿胀液，且油脂层体积占整个混合物体积75％或者以上，则用枪头将顶层油脂吸弃，随之将中间层混合物转移至灭菌5mL离心管，加等体积生理盐水混匀，于6000rpm条件下离心3min；弃去离心沉淀，收集上层浅黄色絮状物，即得富含细胞因子的细胞外基质材料；若离心后，混合物不分层，或分层不明显，则重复步骤(2)～(3)。
实施例3
一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法，具体步骤如下：
(1)将获得的脂肪组织以4000rpm离心5min，将离心后的底层血液弃去(推出下层肿胀液时应在不损失脂肪的情况下尽可能将肿胀液推干净，否则最后所得产物会带有血色)，然后过80目筛网(过滤后应负压吸取残留在过滤器中的脂肪组织，避免损失过多脂肪)，将滤液转移至无菌离心管中(转移中上层混合物时候，尽可能不要将上层油脂转入离心管)；
(2)将脂肪组织放入超声波细胞破碎仪，调节功率为65W，时间为10s进行超声破碎；再继续超声破碎，超声破碎条件为35W、20s；温度32℃；
(3)将震荡破碎后的脂肪混合物以5000rpm离心3min；
(4)经步骤(3)离心后，若混合物分层，顶层为油脂，底层为肿胀液，且油脂层体积占整个混合物体积70％或者以上，则用枪头将顶层油脂吸弃，随之将中间层混合物转移至灭菌5mL离心管，加等体积生理盐水混匀，于6000rpm条件下离心3min；弃去离心沉淀，收集上层浅黄色絮状物，即得富含细胞因子的细胞外基质材料；若离心后，混合物不分层，或分层不明显，则重复步骤(2)～(3)。
实施例4
一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法，具体步骤如下：
(1)将获得的脂肪组织以5000rpm离心3min，将离心后的底层血液弃去(推出下层肿胀液时应在不损失脂肪的情况下尽可能将肿胀液推干净，否则最后所得产物会带有血色)，然后过70目筛网(过滤后应负压吸取残留在过滤器中的脂肪组织，避免损失过多脂肪)，将滤液转移至无菌离心管中(转移中上层混合物时候，尽可能不要将上层油脂转入离心管)；
(2)将脂肪组织放入超声波细胞破碎仪，调节功率为55W，时间为20s进行超声破碎；再继续超声破碎，超声破碎条件为35W、15s；温度35℃；
(3)将震荡破碎后的脂肪混合物以3000rpm离心5min；
(4)经步骤(3)离心后，若混合物分层，顶层为油脂，底层为肿胀液，且油脂层体积占整个混合物体积60％或者以上，则用枪头将顶层油脂吸弃，随之将中间层混合物转移至灭菌5mL离心管，加等体积生理盐水混匀，于6000rpm条件下离心3min；弃去离心沉淀，收集上层浅黄色絮状物，即得富含细胞因子的细胞外基质材料；若离心后，混合物不分层，或分层不明显，则重复步骤(2)～(3)。
对比例1
一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法，具体步骤如下：
(1)将获得的脂肪组织以15000rpm离心2min，将离心后的底层血液弃去，然后过80目筛网，将滤液转移至无菌离心管中；
(2)将脂肪组织放入超声波细胞破碎仪，调节功率为300W，时间为30s进行超声破碎；温度40℃；
(3)将震荡破碎后的脂肪混合物以15000rpm离心5min；
(4)经步骤(3)离心后，若混合物分层，顶层为油脂，底层为肿胀液，且油脂层体积占整个混合物体积70％或者以上，则用枪头将顶层油脂吸弃，随之将中间层混合物转移至灭菌5mL离心管，加等体积生理盐水混匀，于3000rpm条件下离心5min；弃去离心沉淀，收集上层浅黄色絮状物，即得细胞外基质材料；若离心后，混合物不分层，或分层不明显，则重复步骤(2)～(3)。
实施例5
分别采用本发明实施例1～4、对比例1所述方法和Flynn法制备ECM，其中层粘连蛋白、胶原蛋白IV、SDF-1、VEGF等细胞因子均采用ELISA检测。检测结果见表1(结果是3次实验的平均值)。
表1 ECM的成分测定
由表1可知，经本发明方法超声波处理得到的ECM富含多种细胞因子，这些细胞因子对创面修复和移植物存活有极大的辅助功能。而Flynn法则因多次反复酶解和萃取导致细胞因子基本丢失。而对比例1因超声波能量过强，导致大部分生物活性物质丢失。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种利用内置式超声制备脂肪来源细胞外基质的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1.将脂肪组织于1000～10000rpm条件下离心1～5min，离心后若分为三层，分别为顶层油脂、中间层混合物和底层肿胀液，则弃去底层肿胀液，过滤去除顶层油脂并取滤液；若不分层或分层不明显，则重复此步骤；
S2.将S1所得滤液超声破碎，超声破碎条件为30～200W、1～100s；再继续超声破碎，超声破碎条件为10～100W、1～60s；温度25～38℃；
S3.将经S2超声破碎后的脂肪混合物于1000～10000rpm条件下离心3～10min；
S4.经S3离心后，若脂肪混合物分为三层，分别为顶层油脂、中间层混合物和底层肿胀液，且油脂层体积占脂肪混合物总体积60%以上，则弃去顶层油脂，取中间层混合物，加等体积生理盐水混匀，于4000～10000rpm条件下离心3～8min；弃去离心沉淀，收集上层浅黄色絮状物，即得富含细胞因子的细胞外基质材料；若脂肪混合物不分层或分层不明显，则重复S2～S3。
2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S2中所述超声破碎的条件为30～150W、10～80s，再继续超声破碎，超声破碎条件为10～80W、1～50s、26～37℃。
3.根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，S2中所述超声破碎的条件为30～100W、10～60s，再继续超声破碎，超声破碎条件为10～60W、1～40s、27～37℃。
4.根据权利要求3所述制备方法，其特征在于，S2中所述超声破碎的条件为30～80W、10～50s，再继续超声破碎，超声破碎条件为10～50W、1～35s、28～36℃。
5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S1中所述过滤为20～120目数筛网过滤。
6.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述筛网的目数为60～80目。
7.根据权利要求5所述制备方法，其特征在于，所述筛网过滤时采用负压吸取残留在过滤器中的脂肪组织。
8.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S1中所述离心条件为4000～5000rpm离心2～5min。
9.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，S3中所述离心条件为3000～5000rpm离心3～5min。
10.由权利要求1～9任一项所述制备方法制得的脂肪来源细胞外基质在制备皮肤移植材料、软组织填充材料、修复药物或皮肤抗皱产品中的应用。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109876189A (zh) * 2018-05-28 2019-06-14 聂云飞 一种利用超声波高效制备脂肪源生物材料的方法
CN112813022A (zh) * 2021-02-24 2021-05-18 中南大学湘雅医院 一种超声处理脂肪提取物的制备方法、提取物及应用

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109876189A (zh) * 2018-05-28 2019-06-14 聂云飞 一种利用超声波高效制备脂肪源生物材料的方法
CN109876189B (zh) * 2018-05-28 2022-02-18 聂云飞 一种利用超声波高效制备脂肪源生物材料的方法
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