CN108497378A - 一种黑果枸杞速溶粉及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种黑果枸杞速溶粉的制备方法，所述制备方法包括以黑果枸杞碎渣为原料，经过溶剂提取、纯化得到所述黑果枸杞速溶粉；本发明还提供了通过所述方法制备得到的黑果枸杞速溶粉及其用途；本发明提供的黑果枸杞速溶粉的制备方法，营养成分收率高，活性高；相比于目前采用的酶提取法，成本大大降低，提取的速溶粉中降低了原花青素的降解率，保持了原花青素的含量处于较高的水平，可以达到2％‑8％，使得黑果枸杞速溶粉具有显著的抗氧化和抗疲劳的效果，具有较高的应用价值与市场前景。

Description

一种黑果枸杞速溶粉及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于生化工程领域，涉及一种黑果枸杞速溶粉及其制备方法和用途。
背景技术
黑枸杞即黑果枸杞，黑果枸杞果实中含有大量的原花青素、花色苷、多糖、黄酮等营养成分，已有大量的研究报道其具有抗氧化、降血脂、降血糖、抗疲劳及免疫调节的作用。《维吾尔药志》记载，黑果枸杞果实及根皮可治疗尿道结石、癣疥、齿龈出血等症，民间则用作滋补强壮、明目以及降压药。
黑果枸杞多棘刺，采摘困难，果实易破损，成品产率极低，造成其价格昂贵。对次果的充分利用，以及产品食用便利性、有效性是黑果枸杞产业急需解决的问题。目前市场上的黑枸杞相关产品主要是黑枸杞干果，须用开水或温水浸泡一段时间后服用。但该法处理时间长，营养成分摄取不完全，而且温度过高会破坏黑枸杞中的花青素造成活性成分损失。速溶粉是一种良好的深加工产品，开发黑果枸杞速溶粉可以拓宽其应用范围并延长黑果枸杞产业链。索有瑞发明了黑果枸杞抗氧化果粉及制备方法，但其中加入了10％-25％的辅料而影响了黑果枸杞的原始风味。喷雾干燥过程物料受热时间短，干燥迅速；冷冻干燥及超声干燥所得样品产率、花青素保留率相对较高，能较好保留产品营养成分及风味并且便于贮存运输。膜过滤及树脂纯化技术可富集黑果枸杞活性成分，使其能够应用于特定领域。
CN107183464A公开了一种速溶黑枸杞固体饮料，将黑枸杞经过预处理、打浆、一次酶解、二次酶解、澄清处理、冷冻干燥和制备成品7个步骤制备得到黑枸杞饮料，但是此方法两次酶解成本较高，不便于大量生产。
因此如何通过更为简单的方式，降低成本，生产黑果枸杞速溶粉，具有重要的市场价值。
发明内容
本发明的目的在于提供一种黑果枸杞速溶粉及其制备方法和用途。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种黑果枸杞速溶粉的制备方法，所述制备方法包括以黑果枸杞碎渣为原料，经过溶剂提取、纯化得到所述黑果枸杞速溶粉。
本发明提供的黑果枸杞速溶粉的制备方法，营养成分收率高，活性高，相比于目前采用的酶提取黑果枸杞营养成分的方法，使得提取得到的黑果枸杞速溶粉具有显著的抗氧化和抗疲劳的效果，对ABTS+·和DPPH自由基的IC50分别达到了0.077mg/mL、0.061mg/mL，降低了原花青素的降解率，保持了原花青素的含量处于较高的水平，可以达到2％-8％，成本大大降低，并且收率大幅提高。
本发明中，所述黑果枸杞为鲜黑果枸杞或干黑果枸杞；其中，鲜黑果枸杞是黑果枸杞成熟后直接采摘得到的果实；干黑果枸杞是鲜果经晾晒、风干等工艺得到的含水量较低的果实。由于黑果枸杞中天然营养成分较多，如果仅仅通过溶剂的简单提取制备速溶粉，会掺杂较多杂质，并且无法除去不必要的杂质，而影响黑果枸杞速溶粉的营养价值和抗氧化活性，因此在溶剂提取后，还要经过纯化、干燥等操作，才能够得到效果优良的黑果枸杞速溶粉。
优选地，所述黑果枸杞速溶粉的制备方法包括以下步骤：
(1)将黑果枸杞筛选后进行粉碎得到黑果枸杞碎渣；
(2)将步骤(1)中黑果枸杞碎渣用溶剂提取，而后固液分离得到提取液；
(3)将提取液进行浓缩、纯化和干燥得到所述黑果枸杞速溶粉。
本发明提供的制备方法，操作步骤的顺序是特定的，采用提取，膜过滤或树脂纯化后经喷雾干燥、冷冻干燥或超声干燥方式生产黑果枸杞速溶粉，无辅料添加更为安全、环保、健康的方式，这样的制备顺序保证了黑果枸杞营养成分能够充分被提取，保持各主要营养成分的含量处在较高水平，提高了黑果枸杞附加值，保证了制备得到的黑果枸杞速溶粉具有较高抗氧化活性与抗疲劳活性，而如果制备过程中的各操作环节顺序发生改变，则无法提取到营养保健价值较高的黑果枸杞速溶粉。
优选地，步骤(1)中所述黑果枸杞为鲜黑果枸杞或干黑果枸杞。
在本发明中，鲜黑果枸杞是黑果枸杞成熟后直接采摘得到的果实；干黑果枸杞是鲜果经晾晒、风干等工艺得到的含水量较低的果实。
在本发明中，鲜黑果枸杞可以通过机械方式进行打浆，而后进行提取。
优选地，步骤(1)中所述粉碎为将黑果枸杞粉碎至10目-80目，例如可以是10目、20目、30目、40目、50目、60目、70目或80目，优选为30目-50目，进一步优选为40目。
优选地，步骤(2)中所述溶剂为水、甲醇或乙醇中的任意一种或至少两种的组合，其中典型但非限制性的组合为：水和甲醇；水和乙醇；水、甲醇和乙醇。
在本发明中，溶剂的选择对于黑果枸杞的提取是至关重要的，相比于其他的有机溶剂和无机溶剂，水、甲醇和乙醇能够更好的溶解黑果枸杞中的有效成分，尤其是对于原花青素、花色苷等成分的溶解，这样避免了这些天然营养成分的流失，保证了提取出的速溶粉的营养保健价值。
优选地，当黑果枸杞为鲜黑果枸杞时，步骤(2)中所述溶剂与黑果枸杞碎渣的料液比为(1-20):1，例如可以是1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1、11:1、12:1、13:1、14:1、15:1、16:1、17:1、18:1、19:1或20:1，优选为(3-5):1，进一步优选为4:1。
在本发明中，当黑果枸杞为鲜黑果枸杞时，控制在上述的料液比范围内，可以使天然营养成分提取效果最佳，如果溶剂过多，虽然营养成分可以充分溶解，但是也会造成溶解过多的杂质，而影响保健效果；而如果溶剂过少，则不能够使得营养成分充分溶解，后续提取过程中流失严重，保健价值降低。
优选地，当黑果枸杞为干黑果枸杞时，步骤(2)中所述溶剂与黑果枸杞碎渣的料液比为(5-40):1，例如可以是5:1、6:1、10:1、12:1、15:1、18:1、20:1、26:1、27:1、29:1、30:1、35:1、38:1、39:1或40:1，优选为(10-20):1，进一步优选为20:1。
在本发明中，当黑果枸杞为干黑果枸杞时，控制在上述的料液比范围内，可以使天然营养成分提取效果最佳，这是由于干黑果枸杞中水分含量较少，需要比鲜黑果枸杞更多的溶剂进行溶解营养成分；但是如果溶剂过多，虽然营养成分可以充分溶解，但是也会造成溶解过多的杂质，而影响保健效果，且大大增加生产成本；而如果溶剂过少，则也不能够使得营养成分充分溶解，后续提取过程中流失严重，保健价值降低。
在本发明的料液比中，黑果枸杞碎渣的计量单位为千克，液体溶剂的计量单位为升。
优选地，所述溶剂中还包括酸。
在本发明中，在酸性水溶液中，花色苷同时存在酸碱平衡、水合平衡和环-链异构化这三种化学平衡，花色苷在这个平衡反应中呈四种结构，从而使其颜色产生变化。当pH>7时，酸碱平衡成为主要反应，花色苷发生质子转移反应从而更易降解生成其它产物。当pH<7，上述三种化学平衡同时存在，哪种平衡起主导作用是由花色苷结构决定。并且花色苷与有机酸酰基化后能有效地保护花色苷母核阳离子免受水分子的攻击和光-异构化而失色，因此在溶剂中添加酸，保证了花色苷等营养成分更加稳定，防止降解，提升了抗氧化效果和收率，最终提高了营养与保健价值。
优选地，所述酸为盐酸、醋酸、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、磷酸、酒石酸或乳酸中的任意一种或至少两种的组合，其中典型但非限制性的组合为：盐酸和醋酸；抗坏血酸和磷酸；酒石酸和柠檬酸；醋酸、柠檬酸和苹果酸；抗坏血酸、磷酸、酒石酸和乳酸。
优选地，所述溶剂的pH值为1-6.9，例如可以是1、2、3、3.5、4.2、5.6、5.8、6.1、6.5或6.9，优选为2-4，进一步优选为3。
优选地，步骤(2)中所述提取的方式包括加热提取、超声提取、微波提取、逆流提取、渗漉提取或回流提取中的任意一种。
优选地，所述加热提取的温度为40-65℃，例如可以是40℃、42℃、45℃、50℃、52℃、55℃、60℃或60℃，优选为40-55℃，进一步优选为45℃。
优选地，所述超声提取的超声功率为200W/L-900W/L，例如可以是200W/L、300W/L、400W/L、500W/L、600W/L、700W/L、800W/L或900W/L，优选为200W/L-500W/L，进一步优选为400W/L。
优选地，所述超声提取的提取时间为10min-60min，例如可以是10min、20min、30min、40min、50min或60min，优选为40min-60min，进一步优选为50min。
优选地，所述微波提取的功率为200W/L-500W/L，例如可以是200W/L、250W/L、300W/L、350W/L、400W/L、450W/L或500W/L，优选为300W/L。
优选地，所述微波提取的提取时间为0.5h-3h，例如可以是0.5h、1h、1.5h、2h、2.5h或3h，优选为1h-2h，进一步优选为1.2h。
优选地，步骤(3)中所述浓缩的方法为真空减压浓缩或膜浓缩。
优选地，所述真空减压浓缩的温度为50℃-95℃，例如可以是50℃、55℃、60℃、65℃、70℃、75℃、80℃、85℃、90℃或95℃，优选为55℃-70℃，进一步优选为60℃。
优选地，步骤(3)中所述纯化的方法为膜过滤纯化或柱层析纯化。
优选地，当纯化方法为膜过滤纯化，以水为溶剂时，包括以下步骤：将步骤(2)得到的提取液进行微滤，而后进行膜过滤，得到透过液。
优选地，当纯化方法为膜过滤纯化，以甲醇和/或乙醇为溶剂时，包括以下步骤：将步骤(2)得到的提取液进行溶剂回收，而后进行膜过滤，得到透过液。
在本发明中，膜过滤纯化可以进行有机溶剂的回收再利用，节约降低了成本。
优选地，当纯化方法为柱层析纯化时，包括以下步骤：将步骤(2)得到的提取液上样至大孔树脂，经去离子水洗、乙醇水溶液洗，得到洗脱液。
在本发明中，去离子水洗脱，再用乙醇的水溶液进行洗脱。去离子水洗去提取液中的糖、蛋白等水溶性物质，乙醇水溶液洗脱吸附在大孔树脂上的花色苷。
优选地，所述大孔树脂的型号为D101、HPD100A、AB-8、XAD-7、HPD400A、NKA-Ⅱ、DM130、D201、D301、NKA、D4020、HPD100、HPD400、HPD500、HPD600中的任意一种。
优选地，所述乙醇水溶液中乙醇的体积浓度为20％-100％，例如可以是20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％，优选为30％-50％，进一步优选为40％。
优选地，所述乙醇水溶液的洗脱体积为2-50倍床层体积，例如可以是2倍、4倍、5倍、10倍、12倍、15倍、20倍、25倍、30倍、35倍、40倍、45倍或50倍。
在本发明中，洗脱剂特定选择乙醇进行洗脱，如果选择其他溶剂进行洗脱得到的黑果枸杞速溶粉，其抗氧化功效下降。
优选地，步骤(3)中所述干燥的方法包括喷雾干燥、冷冻干燥或超声干燥中的任意一种。
优选地，所述喷雾干燥的进风温度为130℃-210℃，例如可以是130℃、150℃、160℃、170℃、180℃、190℃、200℃或210℃。
优选地，所述喷雾干燥的进样流速为10mL/min-60mL/min，例如可以是10mL/min、15mL/min、20mL/min、25mL/min、30mL/min、35mL/min、40mL/min、45mL/min、50mL/min、55mL/min或60mL/min。
优选地，所述喷雾干燥的料液密度为1.01-1.1，例如可以是1.01、1.02、1.03、1.04、1.05、1.06、1.07、1.08、1.09或1.1。
优选地，所述超声干燥的超声功率为10W/cm2-100W/cm2，例如可以是10W/cm2、20W/cm2、30W/cm2、40W/cm2、50W/cm2、60W/cm2、70W/cm2、80W/cm2或90W/cm2。
优选地，所述超声干燥的温度为20℃-30℃，例如可以是20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃。
第二方面，本发明提供了一种如第一方面所述的方法制备得到的黑果枸杞速溶粉。
本发明提供的方法制备得到的黑果枸杞速溶粉，具有良好的抗氧化效果、抗疲劳效果和防治糖尿病效果，并且黑果枸杞速溶粉能使血浆中TC、TG和LDL-C的含量显著降低(P＜0.05)，HDL-C的含量显著升高(P＜0.05)，具有降血脂的活性，具有较高的药用价值。
优选地，所述黑果枸杞速溶粉中包括质量百分比为2.0％-8.0％的原花青素(例如可以是2％、3％、4％、5％、6％、7％或8％)，5.0％-10.0％的黄酮(例如可以是5％、6％、7％、8％、9％或10％)，5.0％-15％的多糖(例如可以是5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％)，1.0％-5.0％的花色苷(例如可以是1％、2％、3％、4％或5％)。
在本发明中，黑果枸杞速溶粉中还包括各种氨基酸，其中天冬氨酸的质量百分比含量为1.345％，具有增强肝功能的作用，因此拓展了黑果枸杞速溶粉的应用范围。
第三方面，本发明提供了一种如第二方面所述的黑果枸杞速溶粉在生产黑果枸杞速溶颗粒、保健食品、食品添加剂、特殊医学用途配方食品以及黑果枸杞药品中的应用。
优选地，所述黑果枸杞速溶颗粒按重量份计包括以下组分：黑果枸杞速溶粉10-99份(例如可以是10份、20份、30份、40份、50份、60份、70份、80份、90份或99份)；配料1-10份(例如可以是1份、2份、3份、4份、5份、6份、7份、8份、9份或10份)。
优选地，所述配料包括麦芽糊精、羧甲基纤维素钠、阿拉伯胶、硬脂酸镁、柠檬酸、茶多酚或蔗糖中的任意一种或至少两种的组合，其中典型但非限制性的组合为：麦芽糊精和羧甲基纤维素钠；阿拉伯胶和硬脂酸镁；柠檬酸和茶多酚。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
本发明提供的黑果枸杞速溶粉的制备方法，营养成分收率高，活性高，相比于目前采用的酶提取黑果枸杞营养成分的方法，使得提取得到的黑果枸杞速溶粉具有显著的抗氧化和抗疲劳的效果，对ABTS+·和DPPH自由基的IC50分别达到了0.077mg/mL、0.061mg/mL，降低了原花青素的降解率，保持了原花青素的含量处于较高的水平，可以达到2％-8％，成本大大降低，并且收率大幅提高，具有较高的应用价值与市场前景。
附图说明
图1是本发明实施例15制备的黑果枸杞速溶粉测试的花色苷的高效液相色谱图。
图2是本发明实施例15制备的黑果枸杞速溶粉和水溶性维生素E(Trolox)对ABTS+·自由基的清除能力曲线图。
图3是本发明实施例15制备的黑果枸杞速溶粉、2,6-二叔丁基对甲苯酚(BHT)和Trolox对DPPH自由基的清除能力曲线图。
图4是本发明实施例15制备的黑果枸杞速溶粉在模拟胃液环境中抗氧化活性曲线图(采用FRAP法，纵坐标为样品溶液吸光值)。
图5是本发明实施例15制备的黑果枸杞速溶粉在模拟肠液环境中抗氧化活性曲线图(采用FRAP法，纵坐标为样品溶液吸光值)。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
黑果枸杞粉碎过40目筛，溶剂为加入0.1％柠檬酸的水溶液，黑果枸杞粉与加酸水溶液料液比1:20，超声400W下提取50min，经过滤、离心、60℃下减压浓缩得到黑果枸杞浓缩液。
黑果枸杞浓缩液经过大孔树脂进行纯化，大孔树脂型号AB-8。上样完成后，用去离子水洗脱至无糖，再用3倍床层体积的40％乙醇水溶液洗脱吸附在大孔树脂上的花色苷，得到含有花色苷的洗脱液。收集洗脱液经浓缩回收乙醇，然后将浓缩后的洗脱液进行冷冻干燥。
经紫外分光光度计测定其花色苷纯度由1.5％提高到7.4％。
经大孔树脂纯化后的黑果枸杞速溶粉90份，配料(麦芽糊精、硬脂酸镁、茶多酚、蔗糖)10份；将上述成分按照配比混合、造粒、整粒、包装、即成产品。
实施例2
黑果枸杞粉碎过10目筛，溶剂为加入0.01％盐酸的水溶液，黑果枸杞粉与加酸水溶液料液比1:10，超声200W下提取60min，经过滤、离心、50℃下减压浓缩得到黑果枸杞浓缩液。
黑果枸杞浓缩液经过大孔树脂进行纯化，大孔树脂型号AB-8。上样完成后，用去离子水洗脱至无糖，再用3倍床层体积的40％乙醇水溶液洗脱吸附在大孔树脂上的花色苷，得到含有花色苷的洗脱液。收集洗脱液经浓缩回收乙醇，然后将浓缩后的洗脱液进行冷冻干燥。
经紫外分光光度计测定其花色苷纯度由1.5％提高到7.5％。
经大孔树脂纯化后的黑果枸杞速溶粉90份，配料(麦芽糊精、硬脂酸镁、茶多酚、蔗糖)10份；将上述成分按照配比混合、造粒、整粒、包装、即成产品。
实施例3
黑果枸杞粉碎过10目筛，溶剂为加入0.01％盐酸的水溶液，黑果枸杞与加酸水溶液料液比1:15，超声900W下提取10min，经过滤、离心、95℃下减压浓缩得到黑果枸杞浓缩液。
黑果枸杞浓缩液经过大孔树脂进行纯化，大孔树脂型号AB-8。上样完成后，用去离子水洗脱至无糖，再用2倍床层体积的100％乙醇水溶液洗脱吸附在大孔树脂上的花色苷，得到含有花色苷的洗脱液。收集洗脱液经浓缩回收乙醇，然后将浓缩后的洗脱液进行冷冻干燥。
经紫外分光光度计测定其花色苷纯度由1.5％提高到5.1％。
经大孔树脂纯化后的黑果枸杞速溶粉90份，配料(麦芽糊精、硬脂酸镁、茶多酚、蔗糖)10份；将上述成分按照配比混合、造粒、整粒、包装、即成产品。
实施例4
黑果枸杞粉碎过40目筛，溶剂为加入0.1％柠檬酸的水溶液，黑果枸杞与加酸水溶液料液比1:5，超声400W下提取60min，经过滤、离心、60℃下减压浓缩得到黑果枸杞浓缩液。
黑果枸杞浓缩液经过大孔树脂进行纯化，大孔树脂型号AB-8。上样完成后，用去离子水洗脱至无糖，再用50倍床层体积的20％乙醇水溶液洗脱吸附在大孔树脂上的花色苷，得到含有花色苷的洗脱液。收集洗脱液经浓缩回收乙醇，然后将浓缩后的洗脱液进行冷冻干燥。
经紫外分光光度计测定其花色苷纯度由1.5％提高到4.9％。
经大孔树脂纯化后的黑果枸杞速溶粉90份，配料(麦芽糊精、硬脂酸镁、茶多酚、蔗糖)10份；将上述成分按照配比混合、造粒、整粒、包装、即成产品。
实施例5
黑果枸杞粉碎过80目筛，溶剂为加入0.01％盐酸的水溶液，黑果枸杞与加酸水溶液料液比1:40，超声400W下提取50min，经过滤、离心、60℃下减压浓缩得到黑果枸杞浓缩液。
黑果枸杞浓缩液经过大孔树脂进行纯化，大孔树脂型号HPD400A。上样完成后，用去离子水洗脱至无糖，再用3倍床层体积的40％乙醇水溶液洗脱吸附在大孔树脂上的花色苷，得到含有花色苷的洗脱液。收集洗脱液经浓缩回收乙醇，然后将浓缩后的洗脱液进行喷雾干燥。进风温度130℃，进样流速为10mL/min，料液密度为1.1。
经紫外分光光度计测定其花色苷纯度由1.3％提高到7.3％。
经大孔树脂纯化后的黑果枸杞速溶粉90份，配料(麦芽糊精、硬脂酸镁、茶多酚、蔗糖)10份；将上述成分按照配比混合、造粒、整粒、包装、即成产品。
实施例6
黑果枸杞粉碎过40目筛，溶剂为加入0.01％盐酸的水溶液，黑果枸杞与加酸水溶液料液比1:40，超声200W下提取60min，经过滤、离心、60℃下减压浓缩得到黑果枸杞浓缩液。
黑果枸杞浓缩液经过大孔树脂进行纯化，大孔树脂型号D301。上样完成后，用去离子水洗脱至无糖，再用5倍床层体积的30％乙醇水溶液洗脱吸附在大孔树脂上的花色苷，得到含有花色苷的洗脱液。收集洗脱液经浓缩回收乙醇，然后将浓缩后的洗脱液进行喷雾干燥。进风温度210℃，进样流速为60mL/min，料液密度为1.01。
经紫外分光光度计测定其花色苷纯度由1.3％提高到7.0％。
经大孔树脂纯化后的黑果枸杞速溶粉90份，配料(麦芽糊精、硬脂酸镁、茶多酚、蔗糖)10份；将上述成分按照配比混合、造粒、整粒、包装、即成产品。
实施例7
黑果枸杞粉碎过40目筛，溶剂为加入0.01％苹果酸的水溶液，黑果枸杞与加酸水溶液料液比1:20，超声400W下提取50min，经过滤、离心、60℃下减压浓缩得到黑果枸杞浓缩液。
黑果枸杞浓缩液经过大孔树脂进行纯化，大孔树脂型号XAD-7。上样完成后，用去离子水洗脱至无糖，再用3倍床层体积的40％乙醇水溶液洗脱吸附在大孔树脂上的花色苷，得到含有花色苷的洗脱液。收集洗脱液经浓缩回收乙醇，然后将浓缩后的洗脱液进行超声干燥。超声波功率为10W/cm2，干燥温度为30℃。
经紫外分光光度计测定其花色苷纯度由1.3％提高到7.4％。
经大孔树脂纯化后的黑果枸杞速溶粉90份，配料(麦芽糊精、硬脂酸镁、茶多酚、蔗糖)10份；将上述成分按照配比混合、造粒、整粒、包装、即成产品。
实施例8
黑果枸杞粉碎过40目筛，溶剂为加入0.01％盐酸的甲醇溶液，黑果枸杞与加酸水溶液料液比1:20，超声400W下提取50min，经过滤、离心、60℃下减压浓缩得到黑果枸杞浓缩液。
黑果枸杞浓缩液经过大孔树脂进行纯化，大孔树脂型号D101。上样完成后，用去离子水洗脱至无糖，再用3倍床层体积的60％乙醇水溶液洗脱吸附在大孔树脂上的花色苷，得到含有花色苷的洗脱液。收集洗脱液经浓缩回收乙醇，然后将浓缩后的洗脱液进行超声干燥。超声波功率为100W/cm2，干燥温度为20℃。
经紫外分光光度计测定其花色苷纯度由1.3％提高到7.4％。
经大孔树脂纯化后的黑果枸杞速溶粉90份，配料(麦芽糊精、硬脂酸镁、茶多酚、蔗糖)10份；将上述成分按照配比混合、造粒、整粒、包装、即成产品。
实施例9
黑果枸杞粉碎过40目筛，溶剂为加入0.01％盐酸的水溶液，45℃加热提取3h。黑果枸杞与加酸水溶液料液比1:20，经过滤、离心、60℃下减压浓缩得到黑果枸杞浓缩液。
黑果枸杞浓缩液经过大孔树脂进行纯化，大孔树脂型号D101。上样完成后，用去离子水洗脱至无糖，再用3倍床层体积的40％乙醇水溶液洗脱吸附在大孔树脂上的花色苷，得到含有花色苷的洗脱液。收集洗脱液经浓缩回收乙醇，然后将浓缩后的洗脱液进行超声干燥。超声波功率为50W/cm2，干燥温度为20℃。
经紫外分光光度计测定其花色苷纯度由1.3％提高到7.0％。
经大孔树脂纯化后的黑果枸杞速溶粉90份，配料(麦芽糊精、硬脂酸镁、茶多酚、蔗糖)10份；将上述成分按照配比混合、造粒、整粒、包装、即成产品。
实施例10
黑果枸杞粉碎过40目筛，溶剂为加入0.01％酒石酸和乳酸的水溶液，微波提取的功率为200W/L，提取时间3h。干果与加酸水溶液体积比1:20，经过滤、离心、60℃下减压浓缩得到黑果枸杞浓缩液。
黑果枸杞浓缩液经过大孔树脂进行纯化，大孔树脂型号HPD500。上样完成后，用去离子水洗脱至无糖，再用3倍床层体积的40％乙醇水溶液洗脱吸附在大孔树脂上的花色苷，得到含有花色苷的洗脱液。收集洗脱液经浓缩回收乙醇，然后将浓缩后的洗脱液进行冷冻干燥。
经紫外分光光度计测定其花色苷纯度由1.3％提高到8.0％。
经大孔树脂纯化后的黑果枸杞速溶粉90份，配料(麦芽糊精、硬脂酸镁、茶多酚、蔗糖)10份；将上述成分按照配比混合、造粒、整粒、包装、即成产品。
实施例11
黑果枸杞粉碎过40目筛，溶剂为加入0.01％盐酸的水溶液，微波提取的功率为300W/L，提取时间1.5h。黑果枸杞与加酸水溶液体积比1:15，经过滤、离心、60℃下减压浓缩得到黑果枸杞浓缩液。
黑果枸杞浓缩液经过大孔树脂进行纯化，大孔树脂型号DM130。上样完成后，用去离子水洗脱至无糖，再用3倍床层体积的40％乙醇水溶液洗脱吸附在大孔树脂上的花色苷，得到含有花色苷的洗脱液。收集洗脱液经浓缩回收乙醇，然后将浓缩后的洗脱液进行喷雾干燥。进风温度180℃，进样流速为20mL/min，料液密度为1.03。
经紫外分光光度计测定其花色苷纯度由1.3％提高到7.0％。
经大孔树脂纯化后的黑果枸杞速溶粉90份，配料(麦芽糊精、硬脂酸镁、茶多酚、蔗糖)10份；将上述成分按照配比混合、造粒、整粒、包装、即成产品。
实施例12
黑果枸杞粉碎过40目筛，溶剂为加入0.1％柠檬酸的水溶液，黑果枸杞与加酸水溶液体积比1:20，超声400W下提取50min，经过滤、离心、60℃下减压浓缩得到黑果枸杞浓缩液。
黑果枸杞浓缩液经不同分子量规格的膜进行过滤，进行微滤，得透过液得进行冷冻干燥。经膜过滤纯化后的黑果枸杞速溶粉90份，配料(麦芽糊精、硬脂酸镁、茶多酚、蔗糖)10份；将上述成分按照配比混合、造粒、整粒、包装、即成产品。
实施例13
黑果枸杞干果粉碎过40目筛，溶剂为加入0.01％盐酸的40％乙醇水溶液，干果与加酸水溶液体积比1:15超声400W下提取50min，经过滤、离心、60℃下减压浓缩得到黑果枸杞浓缩液。
黑果枸杞浓缩液经过大孔树脂进行纯化，大孔树脂型号NKA。上样完成后，用去离子水洗脱至无糖，再用3倍床层体积的40％乙醇水溶液洗脱吸附在大孔树脂上的花色苷，得到含有花色苷的洗脱液。收集洗脱液经浓缩回收乙醇，然后将浓缩后的洗脱液进行喷雾干燥。进风温度180℃，进样流速为20mL/min，料液密度为1.03。
经紫外分光光度计测定其花色苷纯度由2.1％提高到6.8％。
经大孔树脂纯化后的黑果枸杞速溶粉90份，配料(麦芽糊精、硬脂酸镁、茶多酚、蔗糖)10份；将上述成分按照配比混合、造粒、整粒、包装、即成产品。
实施例14
鲜黑果枸杞通过机械方式进行打浆，溶剂为加入0.01％盐酸的水溶液，打浆后的黑果枸杞与酸水的体积比为1:4，超声400W下提取50min，经过滤、离心、60℃下减压浓缩得到黑果枸杞浓缩液。
黑果枸杞浓缩液经过大孔树脂进行纯化，大孔树脂型号D4020。上样完成后，用去离子水洗脱至无糖，再用3倍床层体积的40％乙醇水溶液洗脱吸附在大孔树脂上的花色苷，得到含有花色苷的洗脱液。收集洗脱液经浓缩回收乙醇，然后将浓缩后的洗脱液进行喷雾干燥。进风温度180℃，进样流速为20mL/min，料液密度为1.03。
经紫外分光光度计测定其花色苷纯度由2.3％提高到7.9％。
经大孔树脂纯化后的黑果枸杞速溶粉90份，配料(麦芽糊精、硬脂酸镁、茶多酚、蔗糖)10份；将上述成分按照配比混合、造粒、整粒、包装、即成产品。
实施例15
黑果枸杞3kg干果粉碎过40目筛，溶剂为加入0.1％柠檬酸的水溶液，干果与加酸水溶液体积比1:10，加热提取温度为45℃，提取时间3h。经过滤、离心、60℃下减压浓缩得到黑果枸杞浓缩液。将黑果枸杞浓缩液密度调至1.01进行喷雾干燥，进风温度为180℃，进样流速为20mL/min。最终黑果枸杞速溶粉得率为31％。
将实施例15制备的黑果枸杞速溶粉采用高效液相色谱(HPLC)柱后衍生的方法测定速溶粉氨基酸的种类与含量，并采用亚硝酸钠-硝酸铝法、香草醛-浓盐酸法、苯酚-硫酸法、pH示差法测定速溶粉中黄酮、原花青素、多糖、花色苷的含量。通过HPLC-DAD分析得出速溶粉中含有多种花色苷，其中有两种主要的花色苷为天竺葵素-3-O-二葡糖苷和天竺葵素-3-O葡萄糖苷。并对速溶粉体外抗氧化活性进行了表征。
测定的具体活性成分如下表1所示：
表1
氨基酸 缩写 绝对含量％
天冬氨酸 ASP 1.345
苏氨酸 THR 0.130
丝氨酸 SER 0.239
谷氨酸 GLU 0.610
甘氨酸 GLY 0.124
丙氨酸 ALA 0.747
半胱氨酸 CYS 0.032
缬氨酸 VAL 0.168
甲硫氨酸 MET 0.039
异亮氨酸 ILE 0.080
亮氨酸 LEU 0.100
酪氨酸 TYR 0.162
苯丙氨酸 PHE 0.083
组氨酸 HIS 0.014
赖氨酸 LYS 0.111
精氨酸 ARG 0.268
脯氨酸 PRO 0.366
黄酮 - 6.02
多糖 - 6.88
花色苷 - 1.40
原花青素 - 2.88
表1为黑果枸杞速溶粉的成分，由表1可以看出黑果枸杞速溶粉中含量最高的氨基酸为天冬氨酸(1.345％)，天冬氨酸参与尿素循环，促进氨和二氧化碳生成尿素，降低血液中氨和二氧化碳的含量，具有增强肝功能的作用，因此广泛用做氨解毒剂，肝机能促进剂，疲劳恢复剂等医药用品和各种清凉饮料的添加剂。原花青素又名缩合鞣质，是一种多酚类化合物，由于其含有大量的羟基而具有强大的抗氧化作用，被广泛应用于食品、药品和化妆品等领域。葡萄籽作为原花青素的重要来源，其原花青素含量为2.48％，而黑果枸杞速溶粉中原花青素含量为2.88％。另外测得的黑果枸杞速溶粉黄酮、多糖、花色苷含量分别为6.02％、6.88％、1.40％。醇沉样品后粗多糖得率为13.99％，然后按照苯酚-硫酸法测得粗多糖纯度为49.19％。黑果枸杞果实多糖能显著降低糖尿病小鼠的血糖含量,增强糖尿病小鼠血清和肝脏超氧化歧化酶活性，降低其血清和肝脏丙二醛含量,并能促进葡萄糖转变为肝糖原，因此黑果枸杞果实多糖有较好的防治糖尿病的作用。并且黑果枸杞中黄酮能使血浆中TC、TG和LDL-C的含量显著降低(P＜0.05)，HDL-C的含量显著升高(P＜0.05)，由此推断黑果枸杞中黄酮具有降血脂活性，可以作为预防高脂血症的新药来源。
将黑果枸杞速溶粉进行HPLC测试，如图1所示。通过图1可以看出黑果枸杞速溶粉中含有多种花色苷，其中有两种主要的花色苷，天竺葵素-3-O-二葡糖苷(1号峰)和天竺葵素-3-O葡萄糖苷(3号峰)，2号峰为花青素-3-O-葡萄糖。天竺葵素能显著抑制细胞的增殖，迁移和侵袭，并使细胞阻滞在S期。
将黑果枸杞速溶粉进行体外抗氧化活性测试，具体测试结果如图2、图3、图4和图5所示。
由图2和图3可以看出，黑果枸杞速溶粉对自由基的清除能力与其浓度基本呈线性关系。Trolox在浓度为0.11mg/mL时对ABTS+·自由基与DPPH自由基的清除率已达90％以上，BHT浓度为0.1mg/mL时对DPPH自由基的清除率达80％以上，相同浓度的速溶粉对ABTS+·自由基和DPPH自由基的清除率超过80％。对黑果枸杞速溶粉的ABTS+·、DPPH自由基清除率与浓度进行线性拟合，其线性拟合方程分别为:Y(ABTS+·)＝631.35X+1.34，R2＝0.996；Y(DPPH自由基)＝831.99X-0.52，R2＝0.997，均呈现较好的线性关系；可以计算出速溶粉对ABTS+·、DPPH自由基的IC50分别为0.077mg/mL、0.061mg/mL。由图4、图5可以看出，不同浓度的黑果枸杞速溶粉在胃液环境2个小时内其还原力基本未发生变化，可能是胃液的强酸性提高了多酚类等抗氧化性物质的稳定性，或者是胃液中无相应的消化酶。在肠液环境2个小时内还原力逐渐降低，可以初步推断出其消化吸收过程发生在小肠中。
对比例1
本对比例与实施例1的区别在于，黑果枸杞与溶剂料液比为1:2，其余组分、制备方法均与实施例1相同，制备得到黑果枸杞速溶粉。
经比较，实施例1超声提取后花色苷得率为1.02g/100g黑果枸杞干果，本对比例中花色苷得率为0.59g/100g黑果枸杞干果，说明本对比例中营养成分损失严重；实施例1中经大孔树脂纯化后花色苷纯度由1.5％提升至7.4％，而本对比例中经大孔树脂纯化后花色苷纯度由1.3％提高到7.1％，说明本对比例纯度有所下降。
对比例2
本对比例与实施例1的区别在于，黑果枸杞与溶剂料液比为1:44，其余组分、制备方法均与实施例1相同，制备得到黑果枸杞速溶粉。
经比较，实施例1超声提取后花色苷得率为1.02g/100g黑果枸杞干果，本对比例下花色苷得率为0.98g/100g黑果枸杞干果，说明本对比例中营养成分有所损失；实施例1中经大孔树脂纯化后花色苷纯度由1.5％提升至7.4％，而本对比例中经大孔树脂纯化后其花色苷纯度由1.1％提高到6.8％，纯度较实施例1有所降低，说明本对比例中料液比造成了速溶粉纯度的下降。
对比例3
本对比例与实施例15的区别在于，制备过程中不包括柠檬酸，其余组分、制备方法均与实施例15相同，制备得到黑果枸杞速溶粉。
将得到的黑果枸杞速溶粉进行测试，经与实施例15比较，实施例15中对ABTS+·的IC50为0.077mg/mL，而本对比例中对ABTS+·的IC50为0.111mg/mL，说明本对比例中速溶粉中原花青素的含量下降，抗氧化效果降低。
对比例4
本对比例与实施例1的区别在于，将黑果枸杞粉溶解于酸的水溶液后，直接进行柱层析纯化，不包括超声提取的步骤，其余组分、制备方法均与实施例1相同，制备得到黑果枸杞速溶粉。
将制备得到的黑果枸杞速溶粉进行测试，经与实施例1进行比较，本对比例中对ABTS+·的IC50为0.135mg/mL，而实施例1中对ABTS+·的IC50为0.081mg/mL，说明本对比例中黑果枸杞速溶粉的抗氧化效果下降。
对比例5
本对比例与实施例1的区别在于，柱层析时，使用的洗脱剂为乙酸乙酯，其余组分、制备方法均与实施例1相同，制备得到黑果枸杞速溶粉。
将制备得到的黑果枸杞速溶粉进行测试，经与实施例1进行比较，本对比例中对ABTS+·的IC50为0.287mg/mL，而实施例1中对ABTS+·的IC50为0.081mg/mL，说明本对比例中黑果枸杞速溶粉的抗氧化效果下降。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的黑果枸杞速溶粉的制备方法及黑果枸杞速溶粉和用途，但本发明并不局限于上述工艺步骤，即不意味着本发明必须依赖上述工艺步骤才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种黑果枸杞速溶粉的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以黑果枸杞碎渣为原料，经过溶剂提取、纯化得到所述黑果枸杞速溶粉。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)将黑果枸杞筛选后进行粉碎得到黑果枸杞碎渣；
(2)将步骤(1)中黑果枸杞碎渣用溶剂提取，而后固液分离得到提取液；
(3)将提取液进行浓缩、纯化和干燥得到所述黑果枸杞速溶粉。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)中所述黑果枸杞为鲜黑果枸杞或干黑果枸杞；
优选地，步骤(1)中所述粉碎为将黑果枸杞粉碎至10目-80目，优选为30目-50目，进一步优选为40目。
4.根据权利要求2或3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述溶剂为水、甲醇或乙醇中的任意一种或至少两种的组合；
优选地，当黑果枸杞为鲜黑果枸杞时，步骤(2)中所述溶剂与黑果枸杞碎渣的料液比为(1-20):1，优选为(3-5):1，进一步优选为4:1；
优选地，当黑果枸杞为干黑果枸杞时，步骤(2)中所述溶剂与黑果枸杞碎渣的料液比为(5-40):1，优选为(10-20):1，进一步优选为20:1；
优选地，所述溶剂中还包括酸；
优选地，所述溶剂的pH值为1-6.9，优选为2-4，进一步优选为3；
优选地，所述酸为盐酸、醋酸、柠檬酸、苹果酸、抗坏血酸、磷酸、酒石酸或乳酸中的任意一种或至少两种的组合。
5.根据权利要求2-4中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述提取的方式包括加热提取、超声提取、微波提取、逆流提取、渗漉提取或回流提取中的任意一种；
优选地，所述加热提取的温度为40-65℃，优选为40-55℃，进一步优选为45℃；
优选地，所述超声提取的超声功率为200W/L-900W/L，优选为200W/L-500W/L，进一步优选为400W/L；
优选地，所述超声提取的提取时间为10min-60min，优选为40min-60min，进一步优选为50min；
优选地，所述微波提取的功率为200W/L-500W/L，优选为300W/L；
优选地，所述微波提取的提取时间为0.5h-3h，优选为1h-2h，进一步优选为1.2h。
6.根据权利要求2-5中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述浓缩的方法为真空减压浓缩或膜浓缩；
优选地，所述真空减压浓缩的温度为50℃-95℃，优选为55℃-70℃，进一步优选为60℃。
7.根据权利要求2-6中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述纯化的方法为膜过滤纯化或柱层析纯化；
优选地，当纯化方法为膜过滤纯化，以水为溶剂时，包括以下步骤：将步骤(2)得到的提取液进行微滤，而后进行膜过滤，得到透过液；
优选地，当纯化方法为膜过滤纯化，以甲醇和/或乙醇为溶剂时，包括以下步骤：将步骤(2)得到的提取液进行溶剂回收，而后进行膜过滤，得到透过液；
优选地，当纯化方法为柱层析纯化时，包括以下步骤：将步骤(2)得到的提取液上样至大孔树脂，经去离子水洗、乙醇水溶液洗，得到洗脱液；
优选地，所述大孔树脂的型号为D101、HPD100A、AB-8、XAD-7、HPD400A、NKA-Ⅱ、DM130、D201、D301、NKA、D4020、HPD100、HPD400、HPD500、HPD600中的任意一种；
优选地，所述乙醇水溶液中乙醇的体积浓度为20％-100％，优选为30％-50％，进一步优选为40％；
优选地，所述乙醇水溶液的洗脱体积为2-50倍床层体积。
8.根据权利要求2-7中任一项所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述干燥的方法包括喷雾干燥、冷冻干燥或超声干燥中的任意一种；
优选地，所述喷雾干燥的进风温度为130℃-210℃；
优选地，所述喷雾干燥的进样流速为10mL/min-60mL/min；
优选地，所述喷雾干燥的料液密度为1.01-1.1；
优选地，所述超声干燥的超声功率为10W/cm2-100W/cm2；
优选地，所述超声干燥的温度为20℃-30℃。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法制备得到的黑果枸杞速溶粉；
优选地，所述黑果枸杞速溶粉中包括质量百分比为2.0％-8.0％的原花青素，5.0％-10.0％的黄酮，5.0％-15％的多糖和1.0％-5.0％的花色苷。
10.根据权利要求9所述的黑果枸杞速溶粉在制备黑果枸杞速溶颗粒、保健食品、食品添加剂、特殊医学用途配方食品以及黑果枸杞药品中的用途；
优选地，所述黑果枸杞速溶颗粒按重量份计包括以下组分：黑果枸杞速溶粉10-99份；配料1-10份；
优选地，所述配料包括麦芽糊精、羧甲基纤维素钠、阿拉伯胶、硬脂酸镁、柠檬酸、茶多酚或蔗糖中的任意一种或至少两种的组合。
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