CN103524596B - 一种鲨鱼蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途 - Google Patents
一种鲨鱼蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103524596B CN103524596B CN201210230756.6A CN201210230756A CN103524596B CN 103524596 B CN103524596 B CN 103524596B CN 201210230756 A CN201210230756 A CN 201210230756A CN 103524596 B CN103524596 B CN 103524596B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- enzymolysis
- solution
- shark
- desalination
- chromatography
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 39
- 101100421450 Drosophila melanogaster Shark gene Proteins 0.000 title claims abstract description 26
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 title claims abstract description 25
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 21
- MYGQXVYRZMKRDB-SRVKXCTJSA-N Leu-Asp-Lys Chemical group CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN MYGQXVYRZMKRDB-SRVKXCTJSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 claims abstract description 20
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 20
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 18
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 18
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 claims abstract description 14
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 12
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims abstract description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims abstract description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims abstract description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 5
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 48
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 claims description 27
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 claims description 20
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 claims description 19
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 claims description 17
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 claims description 17
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 12
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 claims description 12
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims description 10
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 10
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 9
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 9
- 241000251131 Sphyrna Species 0.000 claims description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims description 6
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 claims description 6
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 6
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 claims description 6
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 5
- 238000005360 mashing Methods 0.000 claims description 5
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 5
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 4
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 4
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 claims description 4
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 claims description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims description 3
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 claims description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 claims description 3
- 238000010792 warming Methods 0.000 claims description 3
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 6
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract description 5
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract description 5
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 abstract description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 abstract description 4
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 abstract description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 abstract description 2
- 229940055729 papain Drugs 0.000 abstract description 2
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 abstract description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 abstract 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 abstract 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 abstract 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 230000009849 deactivation Effects 0.000 abstract 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 abstract 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 abstract 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 10
- 230000002000 scavenging effect Effects 0.000 description 9
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 8
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 8
- -1 hydroxyl radical free radical Chemical class 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 7
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 7
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 239000004322 Butylated hydroxytoluene Substances 0.000 description 3
- NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N Butylhydroxytoluene Chemical compound CC1=CC(C(C)(C)C)=C(O)C(C(C)(C)C)=C1 NLZUEZXRPGMBCV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010028690 Fish Proteins Proteins 0.000 description 3
- BGNXCDMCOKJUMV-UHFFFAOYSA-N Tert-Butylhydroquinone Chemical compound CC(C)(C)C1=CC(O)=CC=C1O BGNXCDMCOKJUMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 3
- 235000010354 butylated hydroxytoluene Nutrition 0.000 description 3
- 229940095259 butylated hydroxytoluene Drugs 0.000 description 3
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 239000004250 tert-Butylhydroquinone Substances 0.000 description 3
- 235000019281 tert-butylhydroquinone Nutrition 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- ITMSHNQLFSIFBN-NIESFGNXSA-N (9Z,12Z)-19-[(1S)-1,3-dimethyl-2-[(1E,3E,5E,7E,9E,11E,13E,15E,17E)-3,7,12,16-tetramethyl-18-(2,6,6-trimethylcyclohexen-1-yl)octadeca-1,3,5,7,9,11,13,15,17-nonaenyl]cyclohex-2-en-1-yl]nonadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C([C@@]1(C)CCCC(C)=C1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C)CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(=O)O ITMSHNQLFSIFBN-NIESFGNXSA-N 0.000 description 2
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 2
- RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N Pyrrolidine Chemical compound C1CCNC1 RWRDLPDLKQPQOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 2
- OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N all-trans beta-carotene Natural products CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 2
- 235000013734 beta-carotene Nutrition 0.000 description 2
- 239000011648 beta-carotene Substances 0.000 description 2
- TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N beta-carotene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=CCCCC2(C)C TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N 0.000 description 2
- 229960002747 betacarotene Drugs 0.000 description 2
- 235000019282 butylated hydroxyanisole Nutrition 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-N hydroperoxyl Chemical compound O[O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 2
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 2
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 2
- 238000005502 peroxidation Methods 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 230000000452 restraining effect Effects 0.000 description 2
- OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N β-Carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N 0.000 description 2
- OTEKOJQFKOIXMU-UHFFFAOYSA-N 1,4-bis(trichloromethyl)benzene Chemical compound ClC(Cl)(Cl)C1=CC=C(C(Cl)(Cl)Cl)C=C1 OTEKOJQFKOIXMU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010002198 Anaphylactic reaction Diseases 0.000 description 1
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 1
- 241000238017 Astacoidea Species 0.000 description 1
- JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N Astaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C(=C/C=C/C1=C(C)C(=O)C(O)CC1(C)C)/C)C=CC=C(/C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)C(=O)C(O)CC2(C)C JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N 0.000 description 1
- 239000004255 Butylated hydroxyanisole Substances 0.000 description 1
- QRYRORQUOLYVBU-VBKZILBWSA-N Carnosic acid Natural products CC([C@@H]1CC2)(C)CCC[C@]1(C(O)=O)C1=C2C=C(C(C)C)C(O)=C1O QRYRORQUOLYVBU-VBKZILBWSA-N 0.000 description 1
- 108010087806 Carnosine Proteins 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 244000241838 Lycium barbarum Species 0.000 description 1
- 235000015459 Lycium barbarum Nutrition 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- CQOVPNPJLQNMDC-UHFFFAOYSA-N N-beta-alanyl-L-histidine Natural products NCCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CN=CN1 CQOVPNPJLQNMDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N Pro-Arg Chemical compound NC(=N)NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 HMNSRTLZAJHSIK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000270666 Testudines Species 0.000 description 1
- 241000276707 Tilapia Species 0.000 description 1
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 description 1
- 210000002821 alveolar epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000036783 anaphylactic response Effects 0.000 description 1
- 208000003455 anaphylaxis Diseases 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000013793 astaxanthin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001168 astaxanthin Substances 0.000 description 1
- MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N astaxanthin Chemical compound C([C@H](O)C(=O)C=1C)C(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C(=O)[C@@H](O)CC1(C)C MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N 0.000 description 1
- 229940022405 astaxanthin Drugs 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019658 bitter taste Nutrition 0.000 description 1
- CZBZUDVBLSSABA-UHFFFAOYSA-N butylated hydroxyanisole Chemical compound COC1=CC=C(O)C(C(C)(C)C)=C1.COC1=CC=C(O)C=C1C(C)(C)C CZBZUDVBLSSABA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940043253 butylated hydroxyanisole Drugs 0.000 description 1
- CQOVPNPJLQNMDC-ZETCQYMHSA-N carnosine Chemical compound [NH3+]CCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CNC=N1 CQOVPNPJLQNMDC-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 229940044199 carnosine Drugs 0.000 description 1
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N hydroxyl Chemical compound [OH] TUJKJAMUKRIRHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- CJWQYWQDLBZGPD-UHFFFAOYSA-N isoflavone Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC(OC)=C1C1=COC2=C(C=CC(C)(C)O3)C3=C(OC)C=C2C1=O CJWQYWQDLBZGPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002515 isoflavone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008696 isoflavones Nutrition 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000013622 meat product Nutrition 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 235000019710 soybean protein Nutrition 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Abstract
本发明公开了一种鲨鱼蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途，该抗氧化肽的氨基酸序列为Leu-Asp-Lys，ESI-MS检测给出分子离子峰分子量m/z 375.30[M+H]+，制备时以脱脂鲨鱼鱼肉作为原料，按固液比1g:15mL~20mL加入缓冲液，用0.05~0.15mol/L HCl或0.05~0.15mol/L NaOH调节pH到5.0~7.0，得混合液；将混合液温度升至50℃~60℃搅拌预热5min~10min，按照脱脂鱼肉质量的0.8%~1.2%加入木瓜蛋白酶，酶解温度为50℃~60℃，酶解时间1h~3h，得酶解产物；将酶解产物先经灭酶处理得酶解液，再将酶解液依次经脱盐、超滤和层析，得到抗氧化肽。本发明制备工艺科学合理，酶解过程易监控，制得的抗氧化肽具有安全无毒副作用、抗氧化活性强和易于消化吸收等优点，可以作为药品、保健食品和食品添加剂等应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种鲨鱼蛋白抗氧化肽，本发明还涉及该鲨鱼蛋白抗氧化肽的制备方法，本发明还涉及该鲨鱼蛋白抗氧化肽的用途。
背景技术
抗氧化剂是一类可以阻止氧气不良影响，帮助捕获并中和自由基，从而祛除自由基对人体损害和保护食物免受氧化损伤变质的一类物质。抗氧化剂主要分为天然和化学合成两种类型，而化学合成抗氧化剂由于价格便宜、活性好，因而被广泛地应用到食品工业中。然而，现有研究表明化学合成抗氧化剂丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）和特丁基对苯二酚（TBHQ），除TBHQ外，在不同程度上对人体的肝脏、肾脏等器官均有不利影响，并容易产生过敏反应。因此，基于食品安全的考虑，化学合成抗氧化剂的应用受到了较大影响，部分发达国家已限量或禁止使用对人体有毒副作用的化学合成抗氧化剂，比如北欧已禁止使用BHA和BHT，美国、日本及西欧国家也已限量使用。因此，寻找高效、低毒的天然食品抗氧化剂成为世界各国科学家的研究热点。
目前，已从多种植物、动物组织中提取得到了抗氧化活性显著的物质，如茶叶中的茶多酚、大豆中的异黄酮、河螯虾外壳中的虾青素，枸杞中的多糖，蔬菜水果中的类胡萝卜素和抗坏血酸等物质。而已有的研究揭示，多肽类物质也具有显著的抗氧化活性，如存在于肌肉组织中的肌肽不仅可以有效抑制脂肪氧化，而且在肉制品贮藏时有护色作用；谷胱甘肽（GSH）亦具有抗氧化作用和整合解毒作用，半具有显著的抗氧化作用；而以生物蛋白为原料，采用酶解技术得到的蛋白酶解物及其组成多肽也具有显著的抗氧化活性，如牛瑞等研究发现鳕鱼皮酶解多肽具有显著的抗氧化活性；刘成梅等研究发现罗非鱼鱼皮多肽多肽对二苯代苦味酰（DPPH）自由基的抑制作用强于对超氧阴离子自由基的抑制作用；吴建中等研究发现大豆蛋白酶解多肽具有抗亚油酸过氧化能力和清除自由基能力；徐怀德等研究发现甲鱼蛋白的木瓜蛋白酶酶解产物可清除羟基自由基和超氧阴离子自由基和DPPH自由基；王勇刚研究发现鱼精多肽中的二肽（Pro-Arg）可显著清除羟自由基，而且还可有效降低MRC-5（胚肺细胞）胞内自由基的含量，从而保护细胞避免氧化损伤。
申请人在实验中发现，以路氏双髻鲨鱼肉蛋白为原料，利用酶解技术制备抗氧化多肽的工艺研究处于空白阶段，而以酶解产物为材料制备高活性抗氧化肽及其应用更是未见报道。
发明内容
本发明所要解决的第一个技术问题是针对上述的技术现状提供一种鲨鱼蛋白抗氧化肽，该抗氧化肽安全无毒副作用，抗氧化活性强和易于消化吸收，可清除自由基和抑制脂质过氧化作用。
本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种鲨鱼鱼肉蛋白抗氧化肽的制备方法，工艺科学合理、易操作。
本发明所要解决的第三个技术问题是提供一种鲨鱼鱼肉蛋白抗氧化肽的应用。
本发明为解决上述第一个技术问题所采取的技术方案为：一种鲨鱼蛋白抗氧化肽，其特征在于该抗氧化肽的氨基酸序列为Leu-Asp-Lys，ESI-MS检测给出分子离子峰分子量m/z 375.30[M+H]+。
本发明为解决上述第二个技术问题所采取的技术方案为：一种鲨鱼蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1）以脱脂鲨鱼鱼肉作为原料，按固液比1g:15mL~20mL加入缓冲液，用HCl或NaOH调节pH到5.0~7.0，得混合液；
2）将混合液温度升至50℃~60℃搅拌预热5min~10min，按照脱脂鱼肉质量的0.8%~1.2%加入木瓜蛋白酶，酶解温度为50℃~60℃，酶解时间1h~3h，得酶解产物；
3）将得到的酶解产物先经灭酶处理得酶解液，再将酶解液依次经脱盐、超滤和层析，得到抗氧化肽。
作为改进，所述步骤1）中的脱脂鲨鱼鱼肉的制备过程为：将洗净、去骨和皮的鲨鱼肉按照固液比1g:1mL~2mL放入缓冲液中，用高速组织捣碎机将其处理成匀浆，然后按照体积比1:2~4放入乙醚中脱脂20~25h，3~5℃、4000~5000rpm，10~15min离心除去乙醚，收集固形物即得到脱脂鲨鱼鱼肉。
作为优选，所述步骤2）中的木瓜蛋白酶的酶活力≥1.5×106U/g。
作为改进，所述步骤3）中的灭酶处理为：将酶解产物升温至90℃~95℃，并于此温度保持10min~15min后，冷却至15℃~20℃，然后离心，得酶解液。
再改进，所述步骤3）的脱盐、超滤和层析的具体过程为：
脱盐：将得到的酶解液制成浓度为15mg/mL~20mg/mL溶液，加入到大孔树脂层析柱进行脱盐，然后用质量浓度45~55%乙醇进行解析，40℃以下低压旋蒸除去乙醇，浓缩液进行冷冻干燥，得脱盐酶解物干粉；
超滤：将脱盐后的酶解物干粉溶于pH5.5~6.5的磷酸盐缓冲液配成8~12mg/mL的溶液，于0.1~0.15MPa的工作压力和20~25℃的工作温度下采用超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于1kDa部分，得超滤酶解液；
层析：将上述超滤酶解液用pH5.5~6.5的磷酸盐缓冲液配成8~12mg/mL的溶液，经过阴离子交换树脂分离，用水、0.09~0.11mol/L、0.45~0.55mol/L和0.9~1.1mol/L NaCl溶液进行洗脱，收集280nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，DPPH自由基清除活性最高组分为离子交换酶解液；将所述离子交换酶解液用pH5.5~6.5磷酸盐缓冲液配成8~12mg/mL的溶液，经过凝胶柱层析分离，用磷酸盐缓冲液进行洗脱，收集280nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，DPPH自由基清除活性最高组分为凝胶制备酶解物，将上述凝胶制备酶解物用pH5.8~6.2磷酸盐缓冲液配成45~55μg/mL的溶液，利用反相高效液相色谱RP-HPLC进行纯化，根据抗氧化活性得1个高活性抗氧化肽Leu-Asp-Lys。
优选，所述大孔树脂为D101.
再优选，所述阴离子交换树脂为DEAE-52纤维素，所述凝胶为葡聚糖凝胶G-25；所述反相高效液相色谱条件为：进样量19~21μg；色谱柱为Zorbax C18；柱温为室温；流动相：A含0.1%三氟乙酸的水和B含0.1%三氟乙酸的乙腈；梯度洗脱：0-55min乙腈浓度从0至50%，每5min增加5%；洗脱速度1.0ml/min；紫外检测波长280nm。
最后，所述鲨鱼为路氏双髻鲨。
本发明为解决上述第三个技术问题所采取的技术方案为：一种鲨鱼蛋白抗氧化肽的应用，其特征在于Leu-Asp-Lys对羟基自由基、ABTS自由基和超氧阴离子自由基具有良好的清除作用，而对DPPH自由基显示出中等的清除活性；同时，Leu-Asp-Lys亦显示出良好的脂质过氧化抑制作用和对β-胡萝卜素亚油酸体系中产生的过氧化氢自由基的良好清除作用；Leu-Asp-Lys具有安全无毒副作用、抗氧化活性强和易于消化吸收等优点，可以作为药品、保健食品和食品添加剂上应用。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明工艺科学合理，选用木瓜蛋白酶作为酶解用酶，通过生物酶解法同时融合大孔树脂脱盐、超滤分级和色谱精制，酶解过程易监控，同时制得的抗氧化肽具有较高的活性；与化学合成的抗氧化剂相比较，本发明制得的抗氧化肽具有安全无毒副作用、抗氧化活性强和易于消化吸收等优点，可以作为药品、保健食品和食品添加剂等。
附图说明
图1是本发明的葡聚糖凝胶G-25制备酶解物的RP-HPLC分析；
图2是本发明的Leu-Asp-Lys的反相高效液相色谱（RP-HPLC）图；
图3是本发明的Leu-Asp-Lys的质谱图；
图4是本发明的Leu-Asp-Lys的DPPH自由基清除活性；
图5是本发明的Leu-Asp-Lys的羟基自由基清除活性；
图6是本发明的Leu-Asp-Lys的ABTS自由基清除活性；
图7是本发明的Leu-Asp-Lys的超氧阴离子自由基清除活性；
图8是本发明的Leu-Asp-Lys在β-胡萝卜素-亚油酸体系中的抗氧化活性；
图9是本发明的Leu-Asp-Lys的脂质过氧化抑制活性。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。
一种鲨鱼蛋白抗氧化肽的制备方法，制备工艺流程如下：路氏双髻鲨鱼肉→脱脂→酶解→酶解物→大孔树脂脱盐→超滤→离子交换层析→凝胶过滤层析→高效液相色谱制备→抗氧化肽。
实施例1：
1）将洗净、去骨和皮的路氏双髻鲨鱼肉按照固液比1g:1mL放入缓冲液中，如磷酸盐缓冲液作为pH调节剂，用高速组织捣碎机将其处理成匀浆，然后按照体积比1:4放入乙醚中脱脂24h，4℃、4500rpm，15min离心除去乙醚，收集固形物；
2）脱脂鱼肉按固液比1g:20mL加入缓冲液，如磷酸盐缓冲液，用0.05~0.15mol/L HCl或0.05~0.15mol/L NaOH调节pH到6.0，得混合液；
3）将混合液温度升至55℃搅拌预热10min，按照脱脂鱼肉质量的1.2%加入木瓜蛋白酶，酶解温度为60℃，酶解时间2h，得酶解产物；
4）将步骤3）所得的酶解产物先经灭酶处理得酶解液，再将酶解液依次经脱盐、超滤和层析，得到抗氧化肽，利用氨基酸序列分析和质谱测定其结构，具体过程为：
①灭酶：酶解产物升温至90℃~95℃，并于此温度保持10min~15min后，冷却至15℃~20℃，然后离心，得酶解液；
②脱盐：将得到的酶解液制成浓度为15mg/mL~20mg/mL溶液，加入到D101大孔树脂层析柱进行脱盐，然后用50%乙醇进行解析，40℃以下低压旋蒸除去乙醇，浓缩液进行冷冻干燥，得脱盐酶解物干粉；
③超滤：将上述脱盐酶解物干粉溶于磷酸盐缓冲液（pH6.0）配成10mg/mL的溶液，于0.1~0.15MPa的工作压力和20~25℃的工作温度下采用超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于1kDa部分，得超滤酶解液；
④阴离子交换层析：将上述超滤酶解液用磷酸盐缓冲液（pH6.0）配成10mg/mL的溶液，经过DEAE-52纤维素阴离子交换树脂分离，用水、0.1mol/L、0.5mol/L和1.0mol/L NaCl溶液进行洗脱，收集280nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，DPPH自由基清除活性最高组分为离子交换酶解液；
⑤凝胶色谱层析：将所述离子交换酶解液用磷酸盐缓冲液（pH6.0）配成10mg/mL的溶液，经过葡聚糖凝胶G-25柱层析分离，用磷酸盐缓冲液进行洗脱，收集280nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，DPPH自由基清除活性最高组分为凝胶制备酶解物。
⑥高效液相色谱精制：将上述凝胶制备酶解物用磷酸盐缓冲液（pH6.0）配成50μg/mL的溶液，利用反相高效液相色谱（RP-HPLC）进行纯化（条件：进样量20μg；色谱柱为Zorbax C18（250mm×4.6mm，5μm）；柱温为室温；流动相：A水（含0.1%三氟乙酸）和B乙腈（含0.1%三氟乙酸）；梯度洗脱：0-55min乙腈浓度从0至50%，每5min增加5%；洗脱速度1.0ml/min；紫外检测波长280nm），根据抗氧化活性得1个高活性抗氧化肽（见图1）。
⑦结构检测：收集活性最高的1个抗氧化肽经检测为单一峰（见图2），利用蛋白/多肽序列分析仪测定氨基酸序列为Leu-Asp-Lys，ESI-MS检测给出分子离子峰m/z[M+H]+375.30（见图3）。
实施例2
1）将洗净、去骨和皮的路氏双髻鲨鱼肉按照固液比1g:2mL放入缓冲液中，用高速组织捣碎机将其处理成匀浆，然后按照体积比1:2放入乙醚中脱脂20h，4℃、5000rpm，10min离心除去乙醚，收集固形物；
2）脱脂鱼肉按固液比1g:15mL加入缓冲液，用0.1mol/L HCl或0.1mol/L NaOH调节pH到6.0，得混合液；
3）将混合液温度升至50℃搅拌预热10min，按照脱脂鱼肉质量的1.0%加入木瓜蛋白酶，酶解温度为50℃，酶解时间3h，得酶解产物。
接下步骤同实施例1。
实施例3
1）将洗净、去骨和皮的路氏双髻鲨鱼肉按照固液比1g:1.5mL放入缓冲液中，用高速组织捣碎机将其处理成匀浆，然后按照体积比1:3放入乙醚中脱脂22h，4℃、4000rpm，13min离心除去乙醚，收集固形物；
2）脱脂鱼肉按固液比1g:17mL加入缓冲液，用0.1mol/L HCl或0.1mol/L NaOH调节pH到6.0，得混合液；
3）将混合液温度升至55℃搅拌预热8min，按照脱脂鱼肉质量的0.8%加入木瓜蛋白酶，酶解温度为55℃，酶解时间2h，得酶解产物。
接下步骤同实施例1。
将上述制得的鲨鱼醇溶蛋白抗氧化肽Leu-Asp-Lys进行DPPH自由基清除实验（见图4）、羟基自由基清除实验（见图5）、ABTS自由基清除实验（见图6）、超氧阴离子自由基清除实验（见图7）、β-胡萝卜素－亚油酸体系实验（见图8）和脂质过氧化抑制实验（见图9）。实验结果表明：Leu-Asp-Lys Leu-Asp-Lys对羟基自由基（EC50 0.17mg/mL）、ABTS(EC50 0.19mg/mL)和超氧阴离子自由基(EC50 0.12mg/mL)具有良好的清除作用，而对DPPH自由基(EC50 3.06mg/mL)显示出中等的清除活性；同时，Leu-Asp-Lys亦显示出良好的脂质过氧化抑制作用和对β-胡萝卜素亚油酸体系中产生的过氧化氢自由基的良好清除作用。
最后，尚需注意的是，以上列举的仅是本发明的一个具体实施例。显然，本发明不限于以上实施例，还可以有许多变形。本领域的普通技术人员能从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应认为是本发明的保护范围。
Claims (1)
1.一种鲨鱼蛋白抗氧化肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)以脱脂鲨鱼鱼肉作为原料，按固液比1g∶15mL～20mL加入缓冲液，用HCl或NaOH调节pH到5.0～7.0，得混合液；所述脱脂鲨鱼鱼肉的制备过程为：将洗净、去骨和皮的鲨鱼肉按照固液比1g∶1mL～2mL放入缓冲液中，用高速组织捣碎机将其处理成匀浆，然后按照体积比1∶2～4放入乙醚中脱脂20～25h，3～5℃、4000～5000rpm，10～15min离心除去乙醚，收集固形物即得到脱脂鲨鱼鱼肉；鲨鱼为路氏双髻鲨；
2)将混合液温度升至50℃～60℃搅拌预热5min～10min，按照脱脂鱼肉质量的0.8％～1.2％加入木瓜蛋白酶，木瓜蛋白酶的酶活力≥1.5×106U/g，酶解温度为50℃～60℃，酶解时间1h～3h，得酶解产物；
3)将得到的酶解产物先经灭酶处理得酶解液，再将酶解液依次经脱盐、超滤和层析，得到抗氧化肽；
所述灭酶处理为：将酶解产物升温至90℃～95℃，并于此温度保持10min～15min后，冷却至15℃～20℃，然后离心，得酶解液；
所述脱盐、超滤和层析的具体过程为：
脱盐：将得到的酶解液制成浓度为15mg/mL～20mg/mL溶液，加入到大孔树脂层析柱进行脱盐，然后用质量浓度45～55％乙醇进行解析，40℃以下低压旋蒸除去乙醇，浓缩液进行冷冻干燥，得脱盐酶解物干粉；
超滤：将脱盐后的酶解物干粉溶于pH 5.5～6.5的磷酸盐缓冲液配成8～12mg/mL的溶液，于0.1～0.15MPa的工作压力和20～25℃的工作温度下采用超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于1kDa部分，得超滤酶解液；
层析：将上述超滤酶解液用pH 5.5～6.5的磷酸盐缓冲液配成8～12mg/mL的溶液，经过阴离子交换树脂分离，用水、0.09～0.11mol/L、0.45～0.55mol/L和0.9～1.1mol/L NaCl溶液进行洗脱，收集280nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，DPPH自由基清除活性最高组分为离子交换酶解液；将所述离子交换酶解液用pH 5.5～6.5磷酸盐缓冲液配成8～12mg/mL的溶液，经过凝胶柱层析分离，用磷酸盐缓冲液进行洗脱，收集280nm下的吸光度曲线收集洗脱组分，其中，DPPH自由基清除活性最高组分为凝胶制备酶解物，将上述凝胶制备酶解物用pH 5.8～6.2磷酸盐缓冲液配成45～55μg/mL的溶液，利用反相高效液相色谱RP-HPLC进行纯化，根据抗氧化活性得1个高活性抗氧化肽Leu-Asp-Lys；
所述大孔树脂为D101；
所述阴离子交换树脂为DEAE-52纤维素，所述凝胶为葡聚糖凝胶G-25；所述反相高效液相色谱条件为：进样量19～21μg；色谱柱为Zorbax C18；柱温为室温；流动相：A含0.1％三氟乙酸的水和B含0.1％三氟乙酸的乙腈；梯度洗脱：0-55min乙腈浓度从0至50％，每5min增加5％；洗脱速度1.0ml/min；紫外检测波长280nm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210230756.6A CN103524596B (zh) | 2012-07-03 | 2012-07-03 | 一种鲨鱼蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201210230756.6A CN103524596B (zh) | 2012-07-03 | 2012-07-03 | 一种鲨鱼蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103524596A CN103524596A (zh) | 2014-01-22 |
| CN103524596B true CN103524596B (zh) | 2015-05-13 |
Family
ID=49926991
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201210230756.6A Active CN103524596B (zh) | 2012-07-03 | 2012-07-03 | 一种鲨鱼蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103524596B (zh) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103849671B (zh) * | 2014-03-25 | 2016-01-06 | 福州大学 | 一种鲭鱼罐头加工副产物酶解制备抗氧化肽的方法 |
| CN103936817A (zh) * | 2014-04-30 | 2014-07-23 | 江南大学 | 一种鱼蛋白抗氧化肽的制备方法 |
| CN104250285B (zh) * | 2014-07-30 | 2017-05-10 | 浙江海洋学院 | 一种大黄鱼鱼肉抗氧化肽及其制备方法和用途 |
| CN104530187A (zh) * | 2014-12-11 | 2015-04-22 | 华南理工大学 | 一种秋刀鱼抗氧化肽及其分离提取方法与应用 |
| CN105175495B (zh) * | 2015-07-09 | 2020-09-18 | 浙江海洋学院 | 脱脂蟹壳抗氧化肽的用途 |
| CN105648005B (zh) * | 2015-12-31 | 2020-08-11 | 浙江海洋学院 | 双髻鲨软骨蛋白抗氧化肽的制备方法 |
| CN105646651B (zh) * | 2015-12-31 | 2020-06-30 | 浙江海洋学院 | 赤魟软骨蛋白抗氧化肽及其用途 |
| CN105622720B (zh) * | 2016-02-23 | 2020-09-08 | 浙江海洋学院 | 一种激活Nrf2-ARE通路的双髻鲨鱼肉抗氧化肽 |
| CN105622719B (zh) * | 2016-02-23 | 2020-08-25 | 浙江海洋学院 | 一种激活Nrf2-ARE通路的双髻鲨鱼肉抗氧化肽的用途 |
| CN105648010B (zh) * | 2016-02-23 | 2020-08-11 | 浙江海洋学院 | 一种激活Nrf2-ARE通路的双髻鲨鱼肉抗氧化肽的制备方法 |
| CN106244657A (zh) * | 2016-08-29 | 2016-12-21 | 岭南师范学院 | 一种鱿鱼抗氧化多肽及其制备方法和应用 |
| CN107177652A (zh) * | 2017-05-11 | 2017-09-19 | 浙江海洋大学 | 带鱼抗氧化肽分离纯化方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101146819A (zh) * | 2005-03-22 | 2008-03-19 | 老笃制药株式会社 | 增加胶原或透明质酸生产的肽 |
-
2012
- 2012-07-03 CN CN201210230756.6A patent/CN103524596B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101146819A (zh) * | 2005-03-22 | 2008-03-19 | 老笃制药株式会社 | 增加胶原或透明质酸生产的肽 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Preparation and evaluation of antioxidant peptides from ethanol-soluble proteins hydrolysate of Sphyrna lewini muscle;Bin Wang et al;《Peptides》;20120528;第36卷;参见摘要、第241页第2.2 -2.4节、表1、表3 * |
| 赤魟鱼肉蛋白酶解产物的制备及抗氧化活性研究;王斌等;《中国食品学报》;20100831;第10卷(第4期);113-118 * |
| 酶解制备金乌贼抗氧化产物的工艺优化及营养评价;徐银锋等;《食品科学》;20111231;第32卷(第12期);第68-72页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103524596A (zh) | 2014-01-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN103524596B (zh) | 一种鲨鱼蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途 | |
| CN103073621B (zh) | 一种金枪鱼碎肉蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途 | |
| Bazinet et al. | Antioxidants, mechanisms, and recovery by membrane processes | |
| CN103992384B (zh) | 一种大黄鱼鱼骨胶原肽及其制备方法和用途 | |
| CN103204906A (zh) | 一种贻贝肉蛋白抗氧化肽及其制备方法 | |
| CN104926925B (zh) | 一种带鱼鱼肉蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途 | |
| Kadam et al. | Extraction of biomolecules from seaweeds | |
| CN103467568B (zh) | 一种金乌贼蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途 | |
| CN103524597A (zh) | 一种用鲨鱼醇溶蛋白制备的抗氧化肽及其制备方法和应用 | |
| CN104250285B (zh) | 一种大黄鱼鱼肉抗氧化肽及其制备方法和用途 | |
| CN103992385A (zh) | 一种大黄鱼鱼鳔抗氧化胶原肽及其制备方法和用途 | |
| CN106967169B (zh) | 一种鱼胶原蛋白的提取方法 | |
| CN103103242B (zh) | 一种抗氧化活性肽及其制备方法 | |
| EP2666779A1 (en) | Method for mass preparation of proteoglycan | |
| de Souza Celente et al. | Seaweed as an alternative protein source: Prospective protein extraction technologies | |
| CN104250286B (zh) | 一种马面鲀鱼皮抗氧化胶原肽及其制备方法和用途 | |
| CN104558115A (zh) | 一种孔鳐鱼肉蛋白抗氧化多肽及其制备方法和用途 | |
| CN103992386A (zh) | 一种大黄鱼鱼鳞抗氧化胶原肽及其制备方法和用途 | |
| CN117965668A (zh) | 一种具有抗氧化和抗衰老功能的牛骨胶原蛋白肽及其制备方法与应用 | |
| CN108497378A (zh) | 一种黑果枸杞速溶粉及其制备方法和用途 | |
| CN113151388A (zh) | 一种具有抗氧化和dpp-iv抑制功能的海参肽及其制备方法 | |
| CN103275180B (zh) | 马面鲀鱼头蛋白抗氧化肽及其制备方法和用途 | |
| KR101647558B1 (ko) | 참치심장으로부터 분리한 항산화 펩타이드의 제조방법 | |
| CN105648004A (zh) | 赤魟软骨抗氧化胶原肽的制备方法 | |
| CN105175495B (zh) | 脱脂蟹壳抗氧化肽的用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20140122 Assignee: ZHEJIANG FENGYU MARINE BIOLOGICAL PRODUCTS CO., LTD. Assignor: Zhejiang Ocean University Contract record no.: 2016330000022 Denomination of invention: A kind of shark protein anti-oxidation peptide and its production and use Granted publication date: 20150513 License type: Common License Record date: 20160310 |
|
| LICC | Enforcement, change and cancellation of record of contracts on the licence for exploitation of a patent or utility model |