CN108463561A - 用于诊断、预后和治疗监测基于神经性、神经退行性和炎症的疾病的包含基于微rna的小神经胶质细胞微泡的方法 - Google Patents

用于诊断、预后和治疗监测基于神经性、神经退行性和炎症的疾病的包含基于微rna的小神经胶质细胞微泡的方法 Download PDF

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Abstract

本发明描述了用于体外诊断、预后和/或治疗监测基于神经退行性疾病，神经性疾病和炎症疾病的方法，其中所述方法包括以下步骤：a)从获自个体的生物流体中分离出小神经胶质细胞微泡(MV)；b)收集包含于所述MV中的所述微RNA(miRNA)；c)确定预定组miRNA的表达谱；d)将所述表达谱与一个或多个参照表达谱进行比较，其中所述确定的表达谱与所述一个或多个参照表达谱的比较允许诊断、预后和/或治疗监测所述疾病。

Description

用于诊断、预后和治疗监测基于神经性、神经退行性和炎症的 疾病的包含基于微RNA的小神经胶质细胞微泡的方法
技术领域
本发明描述了用于体外诊断、预后和/或治疗监测基于神经退行性疾病，神经性疾病和炎症疾病(neurodegenerative,neurological and inflammation-based diseases)的方法，其中所述方法包括以下步骤：
a)从获自个体的生物流体中分离出小神经胶质细胞微泡(microglialmicrovesicles)(MV)；
b)收集包含于所述MV中的所述微RNA(miRNA)；
c)确定预定组的miRNA的表达谱(expression profile)；
d)将所述表达谱与一个或多个参照表达谱进行比较，
其中所述确定的表达谱与所述一个或多个参照表达谱的比较允许进行所述疾病的诊断、预后和/或治疗监测。
背景技术
新发现的证据表明，炎症代表许多CNS疾病，包括慢性神经退行性疾病如阿尔茨海默氏病(AD)，帕金森氏病(PD)，肌萎缩侧索硬化症(ALS)，多发性硬化症(MS)，神经失调如精神分裂症或癫痫，以及罕见疾病如巴顿氏(Batten)病中的致病因子。已经报道了指示脑肿瘤发展的早期阶段中炎症的作用的证据(Sowers JL et al.The role of inflammationin brain cancer.Adv Exp Med Biol.2014；816:75-105)。
小神经胶质细胞(Microglia)是大脑中的所述常驻免疫细胞，在神经炎症发作中起着至关重要的作用。小神经胶质细胞是所述CNS内部具有免疫功能的所述主要细胞元件，并且对外部攻击(challenge)安排(orchestrate)炎症性大脑反应具有重要作用。
尽管有证据表明慢性炎症可能会影响退行性疾病的发病机制，但小神经胶质细胞和神经元之间的通讯机制尚未明确阐明，并且仍不清楚哪些分子被这些细胞释放，以及所述损伤如何以神经元的水平发生。活化的小神经胶质细胞可以通过生长因子或促炎介体的产生而正向地或负向地影响神经元存活。
一旦细胞活化，小神经胶质细胞会在导致神经退行的炎症过程的非常早期阶段释放质膜衍生的微泡(plasma membrane-derived microvesicles)(MV)(Bianco F etal.Astrocyte-derived ATP induces vesicle shedding and IL-1beta release frommicroglia.J Immunol.2005 174(11):7268-77；Bianco F et al.Acid sphingomyelinaseactivity triggers microparticle release from glial cells.EMBO J.2009 28(8):1043-54)。
在轻度认知损伤患者的脑脊液中已经发现了大量MV(Agosta F et al.Myeloidmicrovesicles in cerebrospinal fluid are associated with myelin damage andneuronal loss in mild cognitive impairment and Alzheimer disease.AnnNeurol.2014 76(6):813-25；US8999655B2)。
微RNA(miRNA，miR)是在动物和植物中表达的小型非编码RNA。它们调节细胞功能，细胞存活，细胞活化和细胞分化(在发育期间)。许多miRNA在较远相关的生物体之间序列保守。
用于基于神经退行性疾病、神经性疾病和炎症疾病的诊断方法，以及用于监测疾病的治疗结果的方法，是强烈需要的，其中治疗方案必须严格定义并根据每个治疗个体中观察到的具体反应进行准时修改(punctually modified)。
发明内容
本发明的所述作者已经令人惊讶地证明了源自小神经胶质细胞的MV的miRNA含量和表达谱(profile)与基于神经退行性疾病、神经性疾病和炎症疾病之间的强且特异性的相关性。令人惊讶的是，所述作者已经证明，在不同的有害条件下衍生的小神经胶质细胞MV中激活了miRNA的特定模式。
本文中首次描述了从生物流体中分离出来的所述小神经胶质细胞MV内的病理学和/或疾病特异性miRNA谱二者都用于早期诊断、预后和/或治疗监测。
“miRNA”是天然存在的小型非编码RNA，其长度为约17～约25个核苷酸(nt)，处于其生物活性形式(其以序列特异性方式负向调节mRNA翻译)。鉴定的miRNA注册登记于所述miRNA数据库miRBase(http://microma.sanger.ac.uk/)中。
正如本文所定义的，“样品(sample)”是受试者的一小部分，代表所述整体并可以由体液样品(body fluid sample)构成。体液样品可以是血液，血浆，血清，尿液，痰液，脑脊液，乳汁或导管液体样品(ductal fluid sample)，并且也可以是新鲜的，冷冻的或固定的。通过提取，即，通过皮下或其他类型的针，通过显微切割或激光捕获，可以以手术移出样品。所述样品应该含有适于检测所需生物标志物(miRNA)的任何生物材料，因此，所述样品应该有利地包含来自所述受试者的细胞材料。
正如本文所用，“参照样品(reference sample)”是指从已知不含任何神经退行性疾病、神经性疾病或神经炎症的个体，优选两个或更多个个体或从一般群体获得的样品。通过测量多个合适个体中的所述miRNA的表达水平，能够确定miRNA的合适参照表达水平，并且可以针对特定群体调节这种参照水平。在一个优选实施方式中，所述参照样品获自健康个体集合。所述参照样品中的所述miRNA的表达谱能够优选由两个或更多个个体的群体产生；例如，所述群体能够包含3、4、5、10、15、20、30、40、50或更多个受试者。
正如本文所用，“个体(individual)”是指观察之下的哺乳动物、人类或非人类，优选人类。所述个体可以是任何个体，易患神经相关疾病的个体，或患有神经相关疾病的个体。
正如本文所用，所述短语“诊断”或“诊断了”涉及技术人员能够估计并甚至确定个体是否患有给定疾病或病症的方法。
连同诊断一起，临床疾病预后也是一个值得关注和感兴趣的领域。了解所述疾病进展的阶段和速度以规划最有效的治疗方法是非常重要。如果能够做出更准确的预后，则就能够选择合适的治疗方法，并在某些情况下可能选择对所述患者不太剧烈的治疗。
此外，本文所用的短语“诊断方法”涉及基本上由以下提到的所述步骤组成的方法，或可以包括其它步骤。然而，必须理解的是，在优选实施方式中，所述方法是体外进行，即并非在人体或动物体内进行实施的方法。
令人惊讶的是发现，本文中据发现，包含于小神经胶质细胞MV中的所述miRNA(能够根据现有技术中已知的步骤分离的小神经胶质细胞MV)，以可重现的方式反映来自所述CNS中的生理状态的任何变化。由神经退行性疾病引起，也与神经性疾病或神经炎症相关的CNS损伤，均与非常特异性的且可再现的miRNA谱相关联。来自小神经胶质细胞MVs miRNA的所述生理miRNA谱的变化对疾病进展非常敏感，因此使得所述miRNA成为不仅是用于早期诊断而且用于治疗监测的非常有用的工具。
所述本文中提出的方法提供了很大的优势，使基于miRNA的分析成为可能，其中miRNA获自单个细胞亚群，即获自小神经胶质细胞MV。这是极度有利的，因为分离小神经胶质细胞MV的所述过程允许仅分离小神经胶质细胞MV，而当前可用的其他方法导致从多种异质细胞群获得囊泡。因此，当从小神经胶质细胞MV获得数据时，其重现性、灵敏度和特异性增加。
在第一实施方式中，本发明描述了用于体外诊断或临床疾病预后基于神经退行性、神经性或炎症疾病的方法，其中所述方法包括以下步骤：
a)从获自个体的生物流体分离出小神经胶质细胞MV；
b)收集包含于所述MV中的miRNA；
c)确定预定组的miRNA的表达谱；
d)将所述表达谱与一个或多个参照样品表达谱进行比较，
其中所述确定的表达谱与所述一个或多个参照样品表达谱的比较允许进行所述疾病的诊断或预后。
在优选的实施方式中，所述疾病选自由AD，PD，ALS，MS，巴顿氏病，精神分裂症，癫痫，神经性疼痛，神经炎症，图雷特综合征(Tourette Syndrome)，HD，自闭症，雷特综合征(Rett Syndrome)，抑郁症，局部缺血，胶质母细胞瘤，脑膜炎，创伤性脑损伤组成的组中。
神经胶质母细胞瘤(Glioblastoma)包括在内，这是因为有证据表明人胶质瘤内的细胞亚群，具体而言是GBM(glioblastoma multiforme，多形性胶质母细胞瘤)是赘生性巨噬细胞/小神经胶质细胞(Leanne C Huysentruyt et al.Hypothesis：are neoplasticmacrophages/microglia present in glioblastoma multiforme？ASN Neuro.2011；3(4))。
在一个优选的实施方式中，所述表达谱由选自由miR-125a-5p(SEQ ID 1)，miR-300-3p(SEQ ID 2)，miR-330-3p(SEQ ID 3)，miR-466n-3p(SEQ ID 4)，miR-501-5p(SEQ ID5)，miR-146a-5p(SEQ ID 6)，miR-24-1-5p(SEQ ID 7)，miR-1306-5p(SEQ ID 8)，miR-744-5p(SEQ ID 9)，miR-671-5p(SEQ ID 10)，miR-134-5p(SEQ ID 11)，miR-877-5p(SEQ ID12)，miR-23b-5p(SEQ ID 13)，miR-669c-5p(SEQ ID 14)，miR-29b-3p(SEQ ID 15)，miR-195a-5p(SEQ ID 16)，miR-151-5p(SEQ ID 17)，miR-374c-3p(SEQ ID 18)，miR-6539(SEQID 19)，miR-16-1-3p(SEQ ID 20)，miR-6399(SEQ ID 21)，miR-6240(SEQ ID 22)，miR-23a-5p(SEQ ID 23)，miR-92a-1-5p(SEQ ID 24)，miR-219a-1-3p(SEQ ID 25)，miR-128-1-5p(SEQ ID 26)，miR-1949(SEQ ID 27)，miR-872-3p(SEQ ID 28)，miR-582-3p(SEQ ID29)，miR-338-5p(SEQ ID 30)，miR-379-5p(SEQ ID 31)，miR-155-5p(SEQ ID 32)，miR-450a-5p(SEQ ID 33)，miR-100-5p(SEQ ID 34)，miR-152-3p(SEQ ID 35)，miR-222-3p(SEQID 36)，let-7e(SEQ ID 37)，miR-18b(SEQ ID 38)，miR-19a(SEQ ID 39)，miR-21b(SEQ ID40)，miR-26b(SEQ ID 41)，miR-29b-1(SEQ ID 42)，miR-30c-1(SEQ ID 43)，miR-100(SEQID 44)，miR-130a(SEQ ID 45)，miR-181c(SEQ ID 46)，miR-297a-1(SEQ ID 47)，miR-330(SEQ ID 48)，miR-342(SEQ ID 49)，miR-484(SEQ ID 50)，miR-669b(SEQ ID 51)，miR-669e(SEQ ID 52)，miR-708(SEQ ID 53)，miR-146b(SEQ ID 54)，miR-188(SEQ ID 55)，miR-346(SEQ ID 56)，miR-466f-3(SEQ ID 57)，miR-541(SEQ ID 58)，miR-706(SEQ ID59)，miR-712(SEQ ID 60)，miR-714(SEQ ID 61)，miR-1224(SEQ ID 62)，miR-10b(SEQ ID63)，mir-22(SEQ ID 64)，mir-23b(SEQ ID 65)，mir-132(SEQ ID 66)，mir-148b(SEQ ID67)，mir-154(SEQ ID 68)，mir-183(SEQ ID 69)，mir-337(SEQ ID 70)，mir-19b-1(SEQ ID71)，mir-30a(SEQ ID 72)，mir-33(SEQ ID 73)，mir-99b(SEQ ID 74)，mir-144(SEQ ID75)，mir-151(SEQ ID 76)，mir-182(SEQ ID 77)，mir-223(SEQ ID 78)，mir-340(SEQ ID79)，mir-374b(SEQ ID 80)，mir-432(SEQ ID 81)，mir-1247(SEQ ID 82)，let-7a-2(SEQID 83)，mir-30b(SEQ ID 84)，mir-103-2(SEQ ID 85)，mir-107(SEQ ID 86)，mir-142a(SEQ ID 87)，mir-146a(SEQ ID 88)，mir-374c(SEQ ID 89)，mir-126b(SEQ ID 90)，mir-134(SEQ ID 91)，mir-320(SEQ ID 92)，let-7a-1(SEQ ID 93)，mir-34a(SEQ ID 94)，mir-92b(SEQ ID 95)，mir-211(SEQ ID 96)，let-7f-1(SEQ ID 97)，mir-19b-2(SEQ ID 98)，mir-137(SEQ ID 99)，mir-155(SEQ ID 100)，mir-219b(SEQ ID 101)，mir-338(SEQ ID102)，mir-376c(SEQ ID 103)，mir-379(SEQ ID 104)，mir-451a(SEQ ID 105)，mir-494(SEQ ID 106)，mir-17(SEQ ID 107)，mir-20a(SEQ ID 108)，let-7c-1(SEQ ID 109)，mir-20b(SEQ ID 110)，mir-145a(SEQ ID 111)，mir-186(SEQ ID 112)，mir-664(SEQ ID 113)，mir-122(SEQ ID 114)，mir-409(SEQ ID 115)，miR-199b(SEQ ID 116)，mir-221(SEQ ID117)，mir-296(SEQ ID 118)，mir-329(SEQ ID 119)，mir-382(SEQ ID 120)，mir-29c(SEQID 121)，mir-128-1(SEQ ID 122)，mir-138-1(SEQ ID 123)，mir-218-1(SEQ ID 124)，mir-222(SEQ ID 125)，mir-344-1(SEQ ID 126)，mir-466b-2(SEQ ID 127)，mir-674(SEQID 128)，mir-207(SEQ ID 129)，mir-18a(SEQ ID 130)，mir-448(SEQ ID 131)，mir-146b-3(SEQ ID 132)，mir-669c(SEQ ID 133)，let-7d(SEQ ID 134)，mir-30e(SEQ ID 135)，mir-34b(SEQ ID 136)，mir-98(SEQ ID 137)，mir-124-1(SEQ ID 138)，mir-181a-1(SEQID 139)，mir-181b-1(SEQ ID 140)，mir-181d(SEQ ID 141)，mir-185(SEQ ID 142)，mir-187(SEQ ID 143)，mir-190a(SEQ ID 144)，mir-191(SEQ ID 145)，mir-301a(SEQ ID146)，mir-325(SEQ ID 147)，mir-331(SEQ ID 148)，mir-345(SEQ ID 149)，mir-361(SEQID 150)，mir-380(SEQ ID 151)，mir-381(SEQ ID 152)，mir-450a-2(SEQ ID 153)，mir-497a(SEQ ID 246)，mir-497b(SEQ ID 155)，mir-505(SEQ ID 156)，mir-551b(SEQ ID157)，mir-742(SEQ ID 158)，mir-875(SEQ ID 159)，mir-935(SEQ ID 160)，mir-21a(SEQID 161)，mir-24-2(SEQ ID 162)，mir-27b(SEQ ID 163)，mir-31(SEQ ID 164)，mir-34c(SEQ ID 165)，mir-129-1(SEQ ID 166)，mir-140(SEQ ID 167)，mir-142b(SEQ ID 168)，mir-148a(SEQ ID 169)，mir-152(SEQ ID170)，mir-184(SEQ ID 171)，mir-199a-1(SEQ ID172)，mir-204(SEQ ID173)，mir-212(SEQ ID 174)，mir-214(SEQ ID 175)，mir-375(SEQID 176)，mir-455(SEQ ID 177)，mir-711(SEQ ID 178)，mir-882(SEQ ID 179)，mir-192(SEQ ID 180)，mir-219a-1(SEQ ID 181)，mir-383(SEQ ID 182)，mir-542(SEQ ID 183)，mir-700(SEQ ID 184)，mir-705(SEQ ID 185)，mir-762(SEQ ID 186)，mir-1901(SEQ ID187)，mir-1928(SEQ ID 188)，mir-3474(SEQ ID 189)，mir-105(SEQ ID 190)，mir-141(SEQ ID 191)，mir-200c(SEQ ID 192)，mir-201(SEQ ID 193)，mir-297b(SEQ ID 194)，mir-302c(SEQ ID 195)，mir-495(SEQ ID 196)，mir-670(SEQ ID 197)，mir-673(SEQ ID198)，mir-1934(SEQ ID 199)，mir-129b(SEQ ID 200)，mir-328(SEQ ID 201)，mir-487b(SEQ ID 202)，let-7b(SEQ ID 203)，mir-292b(SEQ ID 204)，mir-125b-2(SEQ ID 205)，mir-365-1(SEQ ID 206)，mir-32(SEQ ID 207)，mir-125a(SEQ ID 208)，mir-128-2(SEQID 209)，mir-135a-1(SEQ ID 210)，mir-139(SEQ ID 211)，mir-149(SEQ ID 212)，mir-181a-2(SEQ ID 213)，mir-326(SEQ ID 214)，mir-483(SEQ ID 215)，mir-491(SEQ ID216)，let-7c(SEQ ID 217)，mir-9-1(SEQ ID 218)，mir-15b(SEQ ID 219)，mir-16-1(SEQID 220)，mir-21(SEQ ID 221)，mir-23a(SEQ ID 222)，mir-24-1(SEQ ID 223)，mir-25(SEQ ID 224)，mir-27a(SEQ ID 225)，mir-92a-1(SEQ ID 226)，mir-93(SEQ ID 227)，mir-103a-1(SEQ ID 228)，mir-106b(SEQ ID 229)，mir-125b-1(SEQ ID 230)，mir-150(SEQ ID 231)，mir-210(SEQ ID 232)，mir-718(SEQ ID 233)，mir-335(SEQ ID 234)，mir-297(SEQ ID 235)，mir-466(SEQ ID 236)，mir-151a(SEQ ID 237)，mir-126(SEQ ID 238)，mir-320a(SEQ ID 239)，mir-329-5p(SEQ ID 240)，mir-497-5p(SEQ ID 241)，mir-664a-5p(SEQ ID 242)，mir-21-5p(SEQ ID 243)，mir-142-5p(SEQ ID 244)，mir-129-5p(SEQ ID245)，mir-146b(SEQ ID 154)组成的组中的miRNA确定。
在进一步优选的实施方式中，所述方法是用于诊断或预后个体中的PD的方法，其中上文列出的至少11种上调和至少7种下调的特异性miRNA的模式是PD的指标，优选所述模式是表1中列出的所述模式。
表1：PD，小神经胶质细胞MVs miRNA模式(+，上调；-，下调)
miRNA
miR-100-5p(SEQ ID 34) -
miR-128-1-5p(SEQ ID 26) +
miR-152-3p(SEQ ID 35) -
miR-155-5p(SEQ ID 32) -
miR-16-1-3p(SEQ ID 20) +
miR-1949(SEQ ID 27) -
miR-219a-1-3p(SEQ ID 25) +
miR-222-3p(SEQ ID 36) +
miR-23a-5p(SEQ ID 23) +
miR-338-5p(SEQ ID 30) +
miR-379-5p(SEQ ID 31) +
miR-450a-5p(SEQ ID 33) +
miR-501-5p(SEQ ID 5) -
miR-582-3p(SEQ ID 29) +
miR-6240(SEQ ID 22) +
miR-6399(SEQ ID 21) -
miR-872-3p(SEQ ID 28) -
miR-92a-1-5p(SEQ ID 24) +
在优选实施方式中，所述模式是表1a中列出的所述模式。
表1a：PD，小神经胶质细胞MVs miRNA模式(+，上调；-，下调)
miRNA
miR-100-5p(SEQ ID 34) -
miR-128-1-5p(SEQ ID 26) +
miR-152-3p(SEQ ID 35) -
miR-155-5p(SEQ ID 32) -
miR-16-1-3p(SEQ ID 20) +
miR-219a-1-3p(SEQ ID 25) +
miR-222-3p(SEQ ID 36) +
miR-23a-5p(SEQ ID 23) +
miR-338-5p(SEQ ID 30) +
miR-379-5p(SEQ ID 31) +
miR-450a-5p(SEQ ID 33) +
miR-501-5p(SEQ ID 5) -
miR-582-3p(SEQ ID 29) +
miR-92a-1-5p(SEQ ID 24) +
在进一步优选的实施方式中，所述方法是用于诊断或预后个体中AD的方法，其中上文列出的至少12种上调和至少4种下调的特异性miRNA的模式是AD的指标，优选所述模式是表2中列出的所述模式。
表2：AD，小神经胶质细胞MV模式(+，上调；-，下调)
在一个优选实施方式中，所述模式是表2a中列出的所述模式。
表2a：AD，小神经胶质细胞MV模式(+，上调；-，下调)
miRNA
miR-501-5p(SEQ ID 5) +
miR-125a-5p(SEQ ID 1) +
miR-1306-5p(SEQ ID 8) +
miR-134-5p(SEQ ID 11) +
miR-146a-5p(SEQ ID 6) +
miR-151-5p(SEQ ID 17) -
miR-23b-5p(SEQ ID 13) -
miR-24-1-5p(SEQ ID7) +
miR-300-3p(SEQ ID 2) +
miR-330-3p(SEQ ID 3) +
miR-374c-3p(SEQ ID 18) -
miR-671-5p(SEQ ID 10) +
miR-744-5p(SEQ ID 9) +
miR-877-5p(SEQ ID 12) +
在进一步优选的实施方式中，所述方法是用于诊断或预后个体中局部缺血的方法，其中表3中列出的至少16种，更优选至少20种所述miRNA的模式是局部缺血的指标，更加优选所述模式是表3中列出的所述模式。
表3：局部缺血，小神经胶质细胞MV模式(+，上调；-，下调)
在进一步优选的实施方式中，所述方法是用于诊断或预后个体中图雷特综合征(Tourette's Syndrome)的方法，其中表4中列出的至少13种，优选至少16种所述miRNA的模式是图雷特综合征的指标，优选所述模式是表4中列出的所述模式。
表4：图雷特综合征，小神经胶质细胞MV模式(+，上调；-，下调)
在进一步优选的实施方式中，所述方法是用于诊断或预后个体中神经性疼痛的方法，其中表5中列出的至少8种，优选至少10种所述miRNA的模式是神经性疼痛的指标，优选所述模式是表5中列出的所述模式。
表5：神经性疼痛，小神经胶质细胞MV模式(+，上调；-，下调)
miRNA
let-7a-2(SEQ ID 83) -
mir-30b(SEQ ID 84) -
mir-103-2(SEQ ID 85) -
mir-107(SEQ ID 86) -
mir-142a(SEQ ID 87) -
mir-146a(SEQ ID 88) -
mir-151(SEQ ID 76) -
mir-374c(SEQ ID 89) -
mir-126(SEQ ID 238) +
mir-134(SEQ ID 91) +
mir-320a(SEQ ID 239) +
mir-374b(SEQ ID 80) +
在进一步优选的实施方式中，所述方法是用于诊断或预后个体中自闭症的方法，其中表6中列出的至少13种，优选至少16种所述miRNA的模式是自闭症的指标，优选所述模式是表6列出的所述模式。
表6：自闭症，小神经胶质细胞MV模式(+，上调；-，下调)
miRNA
let-7a-1(SEQ ID 93) -
mir-34a(SEQ ID 94) -
mir-92b(SEQ ID 95) -
mir-211(SEQ ID 96) -
let-7f-1(SEQ ID 97) +
mir-19a(SEQ ID 39) +
mir-19b-2(SEQ ID 98) +
mir-21(SEQ ID 221) +
mir-22(SEQ ID 64) +
mir-137(SEQ ID 99) +
mir-142a(SEQ ID 87) +
mir-144(SEQ ID 75) +
mir-146b(SEQ ID 154) +
mir-155(SEQ ID 100) +
mir-219b(SEQ ID 101) +
mir-338(SEQ ID 102) +
mir-376c(SEQ ID 103) +
mir-379(SEQ ID 104) +
mir-451a(SEQ ID 105) +
mir-494(SEQ ID 106) +
在进一步优选的实施方式中，所述方法是用于诊断或预后个体中多发性硬化症的方法，其中表7中列出的至少7种miRNA的模式是多发性硬化症的指标，优选所述模式是表7中列出的所述模式。
表7：多发性硬化症，小神经胶质细胞MV模式(+，上调；-，下调)
在进一步优选的实施方式中，所述方法是用于诊断或预后个体中雷特综合征(Rett Syndrome)的方法，其中表8中列出的至少10种miRNA的模式是雷特综合征的指示，优选所述模式是表8中列出的所述模式。
表8：雷特综合征，小神经胶质细胞MV模式(+，上调；-，下调)
miRNA
mir-122(SEQ ID 114) -
mir-130a(SEQ ID 45) -
mir-146a(SEQ ID 88) -
mir-146b(SEQ ID 54) -
mir-342(SEQ ID 49) -
mir-409(SEQ ID 115) -
mir-29b-1(SEQ ID 42) +
mir-92b(SEQ ID 95) +
mir-199b(SEQ ID 116) +
mir-221(SEQ ID 117) +
mir-296(SEQ ID 118) +
mir-329-5p(SEQ ID 240) +
mir-382(SEQ ID 120) +
在进一步优选的实施方式中，所述方法是用于诊断或预后个体中亨廷顿氏病(Huntington’s Disease)的方法，其中表9中列出的至少12种miRNA的模式是亨廷顿氏病的指示，优选所述模式是表9中列出的所述模式。
表9：亨廷顿氏病，小神经胶质细胞MV模式(+，上调；-，下调)
miRNA
mir-22(SEQ ID 64) -
mir-29c(SEQ ID 121) -
mir-128-1(SEQ ID 122) -
mir-132(SEQ ID 66) -
mir-138-1(SEQ ID 123) -
mir-218-1(SEQ ID 124) -
mir-222(SEQ ID 125) -
mir-344-1(SEQ ID 126) -
mir-466(SEQ ID 236) -
mir-674(SEQ ID 128) -
mir-34a(SEQ ID 94) +
mir-207(SEQ ID 129) +
mir-18a(SEQ ID 130) +
mir-448(SEQ ID 131) +
mir-669c(SEQ ID 133) +
在进一步优选的实施方式中，所述方法是用于诊断或预后个体中癫痫症(epilepsy)的方法，其中表10中列出的至少31种，优选至少42种所述miRNA的模式是癫痫病的指标，优选所述模式是表10中列出的所述模式。
表10：癫痫病，小神经胶质细胞MV模式(+，上调；-，下调)
在进一步优选的实施方式中，所述方法是用于诊断个体中神经胶质母细胞瘤的方法，其中表11中列出的至少33种，优选至少44种所述miRNA的模式是神经胶质母细胞瘤的指标，优选所述模式是表11中列出的所述模式。
表11：神经胶质母细胞瘤，MV模式(+，上调；-，下调)
在进一步优选的实施方式中，所述方法是用于诊断或预后个体中脑膜炎(meningitis)的方法，其中表12中列出的至少16种，优选至少21种miRNA的模式是脑膜炎的指标，优选所述模式是表12中列出的所述模式。
表12：脑膜炎，小神经胶质细胞MV模式(+，上调；-，下调)
miRNA
mir-138-1(SEQ ID 123) -
mir-192(SEQ ID 180) -
mir-219a-1(SEQ ID 181) -
mir-383(SEQ ID 182) -
mir-466(SEQ ID 236) -
mir-542(SEQ ID 183) -
mir-700(SEQ ID 184) -
mir-705(SEQ ID 185) -
mir-762(SEQ ID 186) -
mir-1901(SEQ ID 187) -
mir-1928(SEQ ID 188) -
mir-3474(SEQ ID 189) -
let-7a-1(SEQ ID 93) +
mir-10b(SEQ ID 63) +
mir-105(SEQ ID 190) +
mir-141(SEQ ID 191) +
mir-155(SEQ ID 100) +
mir-191(SEQ ID 145) +
mir-200c(SEQ ID 192) +
mir-201(SEQ ID 193) +
mir-214(SEQ ID 175) +
mir-297b(SEQ ID 194) +
mir-302c(SEQ ID 195) +
mir-495(SEQ ID 196) +
mir-670(SEQ ID 197) +
mir-673(SEQ ID 198) +
mir-1934(SEQ ID 199) +
在进一步优选的实施方式中，所述方法是用于诊断或预后个体中创伤性脑损伤的方法，其中表13中列出的至少12种miRNA的模式是创伤性脑损伤的指标，优选所述模式是表13中列出的所述模式。
表13：创伤性脑损伤，小神经胶质细胞MV模式(+，上调；-，下调)
miRNA
mir-129-5p(SEQ ID 245) -
mir-140(SEQ ID 167) -
mir-185(SEQ ID 142) -
mir-212(SEQ ID 174) -
mir-328(SEQ ID 201) -
mir-361(SEQ ID 150) -
mir-487b(SEQ ID 202) -
let-7a-2(SEQ ID 83) +
let-7b(SEQ ID 203) +
mir-19b-1(SEQ ID 71) +
mir-21-5p(SEQ ID 243) +
mir-126(SEQ ID 238) +
mir-146a(SEQ ID 88) +
mir-155(SEQ ID 100) +
mir-223(SEQ ID 78) +
mir-292b(SEQ ID 204) +
在进一步优选的实施方式中，所述方法是用于诊断或预后个体中ALS的方法，其中表14中列出的至少4种miRNA的模式是ALS的指标，优选所述模式是表14中列出的所述模式。
表14：ALS，小神经胶质细胞MV模式(+，上调)
miRNA
mir-22(SEQ ID 64) +
mir-125b-2(SEQ ID 205) +
mir-146b(SEQ ID 54) +
mir-155(SEQ ID 100) +
mir-214(SEQ ID 175) +
mir-365-1(SEQ ID 206) +
在进一步优选的实施方式中，所述方法是用于诊断或预后个体中抑郁症的方法，其中表15中列出的至少5种miRNA的模式是抑郁症的指标，优选所述模式是表15中列出的所述模式。
表15：抑郁症，小神经胶质细胞MV模式(+，上调)
miRNA
mir-34a(SEQ ID 94) -
mir-451a(SEQ ID 105) -
mir-132(SEQ ID 66) +
mir-134(SEQ ID 91) +
mir-144(SEQ ID 75) +
mir-182(SEQ ID 77) +
mir-221(SEQ ID 117) +
将多种所述miRNA的表达水平确定为表达水平值，并且在进一步优选的实施方式中，所述步骤d)包括通过应用算法在数学上组合所述多种所述miRNA的表达水平值而获得相对于至少一种表达水平的参照模式的标准化的表达水平。
在一个优选的实施方式中，所述步骤c)中的表达谱的确定是通过使用选自由基于测序的方法，基于阵列的方法和基于PCR的方法组成的组中的方法而获得。
另一个方面中，描述了用于诊断和预后基于神经退行性疾病、神经性疾病和炎症疾病的试剂盒，包括：
a)用于确定受试者的小神经胶质细胞微泡的miRNA样品的miRNA表达谱的装置，
b)至少一个参照组的miRNA表达谱(具体病症的特征)。
具体实施方式
实施例
材料和方法
小神经胶质细胞培养
小神经胶质细胞(Microglial cells)获自P2后天CD1小鼠(P2postnatal CD1mice)(Harlan Laboratories)的混合胶质细胞培养物。在无Ca++和Mg++的冰冷平衡盐溶液(HBSS)中分离皮质(Cortices)。收集脑，并在无菌罩之下在解剖显微镜下手动移除脑膜(meninges)。然后用解剖刀将所述组织切碎。所有这些操作都在4℃下进行。
将所述组织碎片在具有2.5mg/mL胰蛋白酶，0.2mg/mL EDTA，1mg/mL葡萄糖和0.1mg/mL牛胰腺DNA酶I的HBSS溶液中37℃在持续轻轻摇动下在水浴培养箱中培养20～30分钟。
培养后，加入含有20％热灭活胎牛血清，100U/mL青霉素-链霉素的新鲜培养基(DMEM/F12(3:1))，并将所述悬浮液在4℃以1500rpm离心5分钟。最后，通过使用无菌巴斯德(Pasteur)吸管手动再悬浮所述球粒而获得单个细胞悬浮液。
将所述解离的细胞铺板于补充有20％热灭活胎牛血清和100U/mL青霉素，10mg/mL链霉素和5.5g/L葡萄糖(胶质培养基)的聚L-赖氨酸涂覆的烧瓶上。通过摇动3周龄混合胶质细胞培养物而收获纯化的小神经胶质细胞培养物。将所述分离的小神经胶质细胞接种于聚-L-赖氨酸涂覆的烧瓶上。
小神经胶质细胞培养物的纯度通过以下特异性细胞标记物的免疫细胞化学分析进行测定：对于星形胶质细胞(astrocyte)为抗胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillaryacidic protein)(GFAP)的抗体(1:400)，对于小神经胶质细胞为IB4(1:100)，对于少突胶质细胞(oligodendrocyte)为olig2。
Aβ淀粉样蛋白制剂
按照数据表和文献中的建议制备β-淀粉样蛋白(amyloid)1-42(美国肽)；简言之将所述冻干的肽以6mg/mL溶解于HPLC级水中，并随后用无钙和镁的PBS 1×稀释至1mg/mL。培养(37℃)48小时后，所述肽以终浓度5μM与所述细胞一起培养。
CSF MVs的分离
约4,500,000个细胞/病症(condition)使用不同的实验刺激进行引发(prime)(24小时的5μM Aβ寡聚体用于模型AD，1小时20μM 6-OHDA用于模型PD，2小时暴露于氧葡萄糖剥夺方案用于模型局部缺血，2小时暴露于GABA-A拮抗剂如100μM荷包牡丹碱(bicuculline)用于模型图雷特氏综合征，攻击(challenge)与背根神经节细胞(dorsal root ganglioncells)微流体关联的所述原生小神经胶质细胞(primary microglia)和用1mM ATP进行攻击用于模型神经性疼痛，2小时暴露于10nM IL6用于模型自闭症，2小时暴露于30ng/mL IL1β和100nM TNFα用于模型多发性硬化症，将用Mecp2siRNA处理的原生小神经胶质细胞2小时暴露于100μM BzATP用于模型雷特综合征，24h暴露于1mM 3-硝基丙酸用于模型HD，2h暴露于500μM红藻氨酸(kainic acid)用于模型癫痫，24h暴露于100ng/mL LPS用于模型脑膜炎，2h原生小神经胶质细胞暴露于氧葡萄糖剥夺方案接着在正常氧条件下再灌注用于模型创伤性脑损伤，用SOD siRNA处理原生小神经胶质细胞采用100μM的BzATP攻击30min用于模型ALS，攻击用100ng/mL LPS处理的原生海马小神经胶质细胞4h和30min用1mM ATP的攻击用于模型抑郁症)。对照细胞(未处理的)保持于培养基中而未触发刺激。在引发(priming)之后，在含有KRH的溶液中在缓慢旋转下用100μM BzATP触发细胞30分钟。取出含有脱落囊泡的上清液，并在温和的周期性旋转下，用预先用生物素化膜联蛋白(Annexin)V涂覆的链亲和素珠粒在4℃培养10分钟。然后通过重力沉降在4℃下从所述上清液中分离出与膜联蛋白涂覆的珠粒结合的脱落囊泡(Shed vesicle)。
从分离的MV中提取RNA
使用Trizol LS试剂从在RNA保存溶液中收集的分离的MV中提取总RNA(一式三份生物样品)。通过在Agilent Bioanalyzer 2100仪上的RNA6000纳米芯片上的毛细管电泳分析总RNA样品，并通过计算RNA完整性数量(RNA Integrity Number)(RIN)而检查其完整性。使用生物分析仪2100仪上的RNA 6000Pico芯片对从MV获得的RNA进行定性控制。
库制备和测序
所述测序活动通过两个主要步骤表征：库制备及其测序。使用TruSeq小RNA样品制备法(TruSeq Small RNA Sample Preparation)，Illumina的专用试剂盒从总RNA作为输入材料开始而制备所述库。该方案利用了多数已知miRNA分子常见(common)的天然结构，并选择性地特异性地富集于miRNA中。每个库添加独特的索引序列(index sequence)，并在Bioanalyzer 2100上进行检查。合并的库(Pooled libraries)在Illumina平台上以单个读取方案进行测序，产生长度36bp的序列。
数据分析
根据原始FASTQ文件处理小RNA测序数据。使用FastX工具包(toolkit)，从每次读取的3'-端剪切(clipped)适配子序列。将具有低复杂度和长度小于16个核苷酸的读数丢弃。通过了此QC步骤的读数与所述hg19人基因组构建体(build)对齐，从而允许在所述种子区域(seed region)中不存在错配，并丢弃具有超过10个多重映射命中(multi-mappinghit)的读数。基于基因组注释，注释并计数残余读数(Remnants reads)。重新对齐于miRBase的读数用于差异表达分析。使用Bioconductor软件包进行标准化和差异表达测试。
结果
已经分析了从用不同神经退行性方案攻击的小神经胶质细胞分离的MVs的微RNA含量。
从啮齿动物模型获得的小神经胶质细胞对所选择的炎症方案进行了引发(prime)。MVs的释放然后用100μM BzATP进行刺激。
处理所分离的MVs，分离出RNA并进行微RNA分析。评价特异性miRNA模式。
原始数据进行背景扣除，Log2-转换，并在每百万碱基(base)的读数上进行标准化。将每种病理学指示的值与对照即未处理的细胞进行比较，其中未处理的细胞未被引发，但仅暴露于100μM BzATP触发。
具有比率/对照(ratio/control)超过2的miRNA被认为是上调的，而比率/对照低于0.5的miRNA被认为是下调的。
表16和17报道了AD小神经胶质细胞MVs模型，即相对于对照的Aβ-攻击的小神经胶质细胞MVs中观察到的所述数据。在表16中报道了所述Aβ上调的miRNA，表17中报道了所述Aβ下调的miRNA。
表16：
表17：
表18和19报告了PD小神经胶质细胞MVs模型，即相对于对照的6-OHDA攻击小神经胶质细胞MVs中观察到的所述数据。在表18中报道了所述6-OHDA上调的miRNA，表19中报道了所述6-OHDA下调的miRNA。
表18：
表19：
表20和21报道了局部缺血小神经胶质细胞MV模型，即相对于对照的氧葡萄糖剥夺小神经胶质细胞MV中观察到的所述数据。所述细胞暴露于根据文献Kichev et al.J BiolChem.2014 289(13):9430-9439的氧葡萄糖剥夺方案。在表20中报道了所述氧葡萄糖剥夺上调的miRNA，表21中报道了所述氧葡萄糖剥夺下调的miRNA。
表20：
表21：
所述以上列出的miRNA是小鼠miRNA，其序列在人类中是保守的。所述唯一的例外是miR-21b，其人同源物是miR-21UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA(SEQ ID 221)；mir-297a-1，其人同源物是mir-297AUGUAUGUGUGCAUGUGCAUG(SEQ ID 235)和mir-466f-3，其人同源物是miR-466AUACACAUACACGCAACACACAU(SEQ ID 236)。
表22和23报道了图雷特氏综合征小神经胶质细胞MV模型，即相对于对照的荷包牡丹碱(bicuculline)暴露的小神经胶质细胞MV中观察到的所述数据。所述细胞根据文献Frick et al.Brain Behav Immun.2016 57:326-37描述的所述方案暴露于100μM荷包牡丹碱2小时。在表22中报道了所述荷包牡丹碱上调的miRNA，表23中报道了所述荷包牡丹碱下调的miRNA。
表22：
表23：
上面列出的miRNA是小鼠miRNA，其序列在人类中是保守的。唯一的例外是miR-151，其人同源物是miR-151aCUAGACUGAAGCUCCUUGAGG(SEQ ID 237)。
表24和25报道了神经性疼痛小神经胶质细胞MV模型中，即从与背根神经节细胞微流体关联的原生小神经胶质细胞中获得并相对于对照用ATP攻击的小神经胶质细胞MV上观察到的所述数据。细胞根据文献Yamashita et al.PLoS One.2016 11:10用1mM ATP攻击30分钟。在表24中报道了所述攻击上调的miRNA，表25中报道了所述攻击下调的miRNA。
表24：
表25：
上面列出的miRNA是小鼠miRNA，其序列在人类中是保守的。唯一的例外是miR-126b，其人同源物是miR-126CAUUAUUACUUUUGGUACGCG(SEQ ID 238)和miR-320，其人同源物是miR-320a AAAAGCUGGGUUGAGAGGGCGA(SEQ ID 239)。
表26和27报告了自闭症小神经胶质细胞MVs模型中，即相对于对照在IL6暴露的小神经胶质细胞MV上观察到的所述数据。根据文献Tsilioni et al.TranslPsychiatry.2015；5，所述细胞2小时暴露于10nM IL6。在表26中报道了所述IL6上调的miRNA，表27中报道了所述IL6下调的miRNA。
表26：
表27：
上面列出的miRNA是小鼠miRNA，其序列在人类中是保守的。唯一的例外是miR-21b，其人同源物是miR-21UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA(SEQ ID 221)。
表28和29报道了MS小神经胶质细胞MVs模型中，即在相对于对照的IL1β和TNFα暴露的小神经胶质细胞MV上观察到的所述数据。根据文献Xie et al.Glia,2016 64:4,583-602，细胞2小时暴露于30ng/mL IL1β和100nM TNFα。在表28中报道了所述IL1β和TNFα上调的miRNA，表29中报道了所述IL1β和TNFα下调的miRNA。
表28：
表29：
上面列出的miRNA是小鼠miRNA，其序列在人类中是保守的。
表30和31报道了雷特综合征小神经胶质细胞MVs模型中，即在来自用Mecp2siRNA处理的BzATP攻击的原生小神经胶质细胞的小神经胶质细胞MV上(相对于对照)观察到的所述数据。所述方案是根据文献Lee Way et al.J.Neurosci.2015,35(6)2516-2529。在表30中报道了所述攻击上调的miRNA，表31中报道了所述攻击下调的miRNA。
表30：
表31：
上面列出的miRNA是小鼠miRNA，其序列在人类中是保守的。唯一的例外是miR-329，其人同源物是miR-329-5pGAGGUUUUCUGGGUUUCUGUUUC(SEQ ID 240)。
表32和33报道了HD小神经胶质细胞MVs模型中，即相对于对照在3NP暴露的小神经胶质细胞MV上观察到的所述数据。根据文献Ruy etal.Neurobiol.Dis.2003:12 121–132，将所述细胞24小时暴露于1mM 3-硝基丙酸。在表32中报道了所述3NP上调的miRNA，表33中报道了所述3NP下调的miRNA。
表32：
表33：
上面列出的miRNA是小鼠miRNA，其序列在人类中是保守的。唯一的例外是miR-466b-2，其人同源物是miR-466AUACACAUACACGCAACACACAU(SEQ ID 236)。
表34和35报道了癫痫小神经胶质细胞MVs模型中，即相对于对照在红藻氨酸(kainic acid)暴露的小神经胶质细胞MV上观察到的所述数据。根据文献Zhang etal.Curr Neuropharmacol.2011 9(2):388-398，将所述细胞2小时暴露于500μM红藻氨酸。在表34中报道了所述红藻氨酸上调的miRNA，表35中报道了所述红藻氨酸下调的miRNA。
表34：
表35：
上面列出的miRNA是小鼠miRNA，其序列在人类中是保守的。唯一的例外是miR-497b，其人同源物是miR-497-5pCAGCAGCACACUGUGGUUUGU(SEQ ID 241)；miR-664，其人同源物是miR-664a-5p ACUGGCUAGGGAAAAUGAUUGGAU(SEQ ID 242)；miR-21a，其人同源物miR-21-5p UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA(SEQ ID 243)，和miR-142b，其人同源物是miR-142-5pCAUAAAGUAGAAAGCACUACU(SEQ ID 244)。
表36和37报道了脑膜炎小神经胶质细胞MVs模型中，即相对于对照在LPS暴露的小神经胶质细胞MV上观察到的所述数据。根据文献Bianco F.et al.J.Immunol.2005 174,11:7268-7277，将所述细胞24小时暴露于100ng/mL的LPS。在表36中报道了所述LPS-上调的miRNA，表37中报道了所述LPS-下调的miRNA。
表36：
表37：
上面列出的miRNA是小鼠miRNA，其序列在人类中是保守的。唯一的例外是miR-466b-3，其人同源物是miR-466(SEQ ID 236)。
表38和39报道了创伤性脑损伤小神经胶质细胞MVs模型中，即相对于对照在来自暴露于氧葡萄糖剥夺方案接着在正常氧条件下再灌注的小神经胶质细胞的小神经胶质细胞MV上观察到的所述数据。根据文献Kichev et al.J.Biol.Chem.2014 289(13):9430-9439，将原生小神经胶质细胞2小时暴露于氧葡萄糖剥夺方案，然后在正常氧条件下再灌注2小时。在表38中报道了所述攻击-上调的miRNA，在表39中报道了所述攻击-下调的miRNA。
表38：
表39：
上面列出的miRNA是小鼠miRNA，其序列在人类中是保守的。唯一的例外是miR-129b，其人同源物(homologue)是miR-129-5pCUUUUUGCGGUCUGGGCUUGC(SEQ ID 245)；miR-21a，其人同源物是miR-21-5p UAGCUUAUCAGACUGAUGUUGA(SEQ ID 243)，和miR-126b，其人同源物是miR-126CAUUAUUACUUUUGGUACGCG(SEQ ID 238)。
表40报道了ALS小神经胶质细胞MVs模型中，即相对于对照在来自用BzATP攻击和用SOD siRNA处理的小神经胶质细胞的小神经胶质细胞MV上观察到的所述数据。根据文献Brites et al.Front.Cell.Neurosci.2014 8:117，用SOD siRNA处理的原生小神经胶质细胞用100μM BzATP攻击30分钟。在表40中报道了所述攻击-下调的miRNA。
表40：
上面列出的miRNA是小鼠miRNA，其序列在人类中是保守的。
表41和42报道了抑郁症小神经胶质细胞MV模型中，即相对于对照在LPS和ATP暴露的小神经胶质细胞MV上观察到的所述数据。根据文献Brites et al.Front.CellNeurosci.2015 8:11，细胞用100mg/mL LPS和1mM ATP处理4小时。在表41中报道了所述LPS和ATP-上调的miRNA，在表42中报道了所述LPS和ATP-下调的miRNA。
表41：
表42：
上面列出的miRNA是小鼠miRNA，其序列在人类中是保守的。
最后，表43和44报告了相对于标准小神经胶质细胞来自U87胶质母细胞瘤人细胞系的MV中观察到的所述数据，其中胶质母细胞瘤细胞被认为是小神经胶质细胞。在表43中报道了所述上调的miRNA，表44中报道了所述下调的miRNA。
表43：
表44：

Claims (21)

1.一种用于体外诊断、预后和/或治疗监测基于神经退行性、神经性或炎症的疾病的方法，其中所述方法包括以下步骤：
a)从获自个体的生物流体中分离小神经胶质细胞微泡(MV)；
b)收集包含于所述MV中的miRNA；
c)确定预定组miRNA的表达谱；
d)将所述表达谱与一个或多个参照表达谱进行比较，
其中确定的所述表达谱与一个或多个所述参照表达谱的比较允许诊断、预后和/或治疗监测所述疾病。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述表达谱是确定选自由以下各项组成的组中的miRNA：
miR-125a-5p(SEQ ID 1)，miR-300-3p(SEQ ID 2)，miR-330-3p(SEQ ID 3)，miR-466n-3p(SEQ ID 4)，miR-501-5p(SEQ ID 5)，miR-146a-5p(SEQ ID 6)，miR-24-1-5p(SEQ ID7)，miR-1306-5p(SEQ ID 8)，miR-744-5p(SEQ ID 9)，miR-671-5p(SEQ ID 10)，miR-134-5p(SEQ ID 11)，miR-877-5p(SEQ ID 12)，miR-23b-5p(SEQ ID 13)，miR-669c-5p(SEQ ID14)，miR-29b-3p(SEQ ID 15)，miR-195a-5p(SEQ ID 16)，miR-151-5p(SEQ ID 17)，miR-374c-3p(SEQ ID 18)，miR-6539(SEQ ID 19)，miR-16-1-3p(SEQ ID 20)，miR-6399(SEQ ID21)，miR-6240(SEQ ID 22)，miR-23a-5p(SEQ ID 23)，miR-92a-1-5p(SEQ ID 24)，miR-219a-1-3p(SEQ ID 25)，miR-128-1-5p(SEQ ID 26)，miR-1949(SEQ ID 27)，miR-872-3p(SEQ ID 28)，miR-582-3p(SEQ ID 29)，miR-338-5p(SEQ ID 30)，miR-379-5p(SEQ ID31)，miR-155-5p(SEQ ID 32)，miR-450a-5p(SEQ ID 33)，miR-100-5p(SEQ ID 34)，miR-152-3p(SEQ ID 35)，miR-222-3p(SEQ ID 36)，let-7e(SEQ ID 37)，miR-18b(SEQ ID 38)，miR-19a(SEQ ID 39)，miR-21b(SEQ ID 40)，miR-26b(SEQ ID 41)，miR-29b-1(SEQ ID42)，miR-30c-1(SEQ ID 43)，miR-100(SEQ ID 44)，miR-130a(SEQ ID 45)，miR-181c(SEQID 46)，miR-297a-1(SEQ ID 47)，miR-330(SEQ ID 48)，miR-342(SEQ ID 49)，miR-484(SEQ ID 50)，miR-669b(SEQ ID 51)，miR-669e(SEQ ID 52)，miR-708(SEQ ID 53)，miR-146b(SEQ ID 54)，miR-188(SEQ ID 55)，miR-346(SEQ ID 56)，miR-466f-3(SEQ ID 57)，miR-541(SEQ ID 58)，miR-706(SEQ ID 59)，miR-712(SEQ ID 60)，miR-714(SEQ ID 61)，miR-1224(SEQ ID 62)，miR-10b(SEQ ID 63)，mir-22(SEQ ID 64)，mir-23b(SEQ ID 65)，mir-132(SEQ ID 66)，mir-148b(SEQ ID 67)，mir-154(SEQ ID 68)，mir-183(SEQ ID 69)，mir-337(SEQ ID 70)，mir-19b-1(SEQ ID 71)，mir-30a(SEQ ID 72)，mir-33(SEQ ID 73)，mir-99b(SEQ ID 74)，mir-144(SEQ ID 75)，mir-151(SEQ ID 76)，mir-182(SEQ ID 77)，mir-223(SEQ ID 78)，mir-340(SEQ ID 79)，mir-374b(SEQ ID 80)，mir-432(SEQ ID 81)，mir-1247(SEQ ID 82)，let-7a-2(SEQ ID 83)，mir-30b(SEQ ID 84)，mir-103-2(SEQ ID85)，mir-107(SEQ ID 86)，mir-142a(SEQ ID 87)，mir-146a(SEQ ID 88)，mir-374c(SEQID 89)，mir-126b(SEQ ID 90)，mir-134(SEQ ID 91)，mir-320(SEQ ID 92)，let-7a-1(SEQID 93)，mir-34a(SEQ ID 94)，mir-92b(SEQ ID 95)，mir-211(SEQ ID 96)，let-7f-1(SEQID 97)，mir-19b-2(SEQ ID 98)，mir-137(SEQ ID 99)，mir-155(SEQ ID 100)，mir-219b(SEQ ID 101)，mir-338(SEQ ID 102)，mir-376c(SEQ ID 103)，mir-379(SEQ ID 104)，mir-451a(SEQ ID 105)，mir-494(SEQ ID 106)，mir-17(SEQ ID 107)，mir-20a(SEQ ID108)，let-7c-1(SEQ ID 109)，mir-20b(SEQ ID 110)，mir-145a(SEQ ID 111)，mir-186(SEQ ID 112)，mir-664(SEQ ID 113)，mir-122(SEQ ID 114)，mir-409(SEQ ID 115)，miR-199b(SEQ ID 116)，mir-221(SEQ ID 117)，mir-296(SEQ ID 118)，mir-329(SEQ ID 119)，mir-382(SEQ ID 120)，mir-29c(SEQ ID 121)，mir-128-1(SEQ ID 122)，mir-138-1(SEQID 123)，mir-218-1(SEQ ID 124)，mir-222(SEQ ID 125)，mir-344-1(SEQ ID 126)，mir-466b-2(SEQ ID 127)，mir-674(SEQ ID 128)，mir-207(SEQ ID 129)，mir-18a(SEQ ID130)，mir-448(SEQ ID 131)，mir-669c(SEQ ID 133)，let-7d(SEQ ID 134)，mir-30e(SEQID 135)，mir-34b(SEQ ID 136)，mir-98(SEQ ID 137)，mir-124-1(SEQ ID 138)，mir-181a-1(SEQ ID 139)，mir-181b-1(SEQ ID 140)，mir-181d(SEQ ID 141)，mir-185(SEQ ID142)，mir-187(SEQ ID 143)，mir-190a(SEQ ID 144)，mir-191(SEQ ID 145)，mir-301a(SEQ ID 146)，mir-325(SEQ ID 147)，mir-331(SEQ ID 148)，mir-345(SEQ ID 149)，mir-361(SEQ ID 150)，mir-380(SEQ ID 151)，mir-381(SEQ ID 152)，mir-450a-2(SEQ ID153)，mir-497a(SEQ ID 246)，mir-497b(SEQ ID 155)，mir-505(SEQ ID 156)，mir-551b(SEQ ID 157)，mir-742(SEQ ID 158)，mir-875(SEQ ID 159)，mir-935(SEQ ID 160)，mir-21a(SEQ ID 161)，mir-24-2(SEQ ID 162)，mir-27b(SEQ ID 163)，mir-31(SEQ ID 164)，mir-34c(SEQ ID 165)，mir-129-1(SEQ ID 166)，mir-140(SEQ ID 167)，mir-142b(SEQ ID168)，mir-148a(SEQ ID 169)，mir-152(SEQ ID 170)，mir-184(SEQ ID 171)，mir-199a-1(SEQ ID 172)，mir-204(SEQ ID 173)，mir-212(SEQ ID 174)，mir-214(SEQ ID 175)，mir-375(SEQ ID 176)，mir-455(SEQ ID 177)，mir-711(SEQ ID 178)，mir-882(SEQ ID 179)，mir-192(SEQ ID 180)，mir-219a-1(SEQ ID 181)，mir-383(SEQ ID 182)，mir-542(SEQ ID183)，mir-700(SEQ ID 184)，mir-705(SEQ ID 185)，mir-762(SEQ ID 186)，mir-1901(SEQID 187)，mir-1928(SEQ ID 188)，mir-3474(SEQ ID 189)，mir-105(SEQ ID 190)，mir-141(SEQ ID 191)，mir-200c(SEQ ID 192)，mir-201(SEQ ID 193)，mir-297b(SEQ ID 194)，mir-302c(SEQ ID 195)，mir-495(SEQ ID 196)，mir-670(SEQ ID 197)，mir-673(SEQ ID198)，mir-1934(SEQ ID 199)，mir-129b(SEQ ID 200)，mir-328(SEQ ID 201)，mir-487b(SEQ ID 202)，let-7b(SEQ ID 203)，mir-292b(SEQ ID 204)，mir-125b-2(SEQ ID 205)，mir-365-1(SEQ ID 206)，mir-32(SEQ ID 207)，mir-125a(SEQ ID 208)，mir-128-2(SEQID 209)，mir-135a-1(SEQ ID 210)，mir-139(SEQ ID 211)，mir-149(SEQ ID 212)，mir-181a-2(SEQ ID 213)，mir-326(SEQ ID 214)，mir-483(SEQ ID 215)，mir-491(SEQ ID216)，let-7c(SEQ ID 217)，mir-9-1(SEQ ID 218)，mir-15b(SEQ ID 219)，mir-16-1(SEQID 220)，mir-21(SEQ ID 221)，mir-23a(SEQ ID 222)，mir-24-1(SEQ ID 223)，mir-25(SEQ ID 224)，mir-27a(SEQ ID 225)，mir-92a-1(SEQ ID 226)，mir-93(SEQ ID 227)，mir-103a-1(SEQ ID 228)，mir-106b(SEQ ID 229)，mir-125b-1(SEQ ID 230)，mir-150(SEQ ID 231)，mir-210(SEQ ID 232)，mir-718(SEQ ID 233)，mir-335(SEQ ID 234)，mir-297(SEQ ID 235)，mir-466(SEQ ID 236)，mir-151a(SEQ ID 237)，mir-126(SEQ ID 238)，mir-320a(SEQ ID 239)，mir-329-5p(SEQ ID 240)，mir-497-5p(SEQ ID 241)，mir-664a-5p(SEQ ID 242)，mir-21-5p(SEQ ID 243)，mir-142-5p(SEQ ID 244)，mir-129-5p(SEQ ID245)，mir-146b(SEQ ID 154)。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述疾病是神经退行性疾病。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中所述疾病是帕金森氏病，以及相对于所述参照模式，所述小神经胶质细胞MV miRNA模式表征如下：
-下调的miRNA：miR-100-5p(SEQ ID 34)，miR-152-3p(SEQ ID 35)，miR-155-5p(SEQID 32)，miR-1949(SEQ ID 27)，miR-501-5p(SEQ ID 5)，miR-6399(SEQ ID 21)，miR-872-3p(SEQ ID 28)；
-上调的miRNA：miR-128-1-5p(SEQ ID 26)，miR-16-1-3p(SEQ ID 20)，miR-219a-1-3p(SEQ ID 25)，miR-222-3p(SEQ ID 36)，miR-23a-5p(SEQ ID 23)，miR-338-5p(SEQ ID30)，miR-379-5p(SEQ ID 31)，miR-450a-5p(SEQ ID 33)，miR-582-3p(SEQ ID 29)，miR-6240(SEQ ID 22)，miR-92a-1-5p(SEQ ID 24)。
5.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中所述疾病是PD，以及相对于所述参照模式，所述小神经胶质细胞MV miRNA模式表征如下：
-下调的miRNA：miR-100-5p(SEQ ID 34)，miR-152-3p(SEQ ID 35)，miR-1949(SEQ ID27)，miR-501-5p(SEQ ID 5)；
-上调的miRNA：miR-128-1-5p(SEQ ID 26)，miR-16-1-3p(SEQ ID 20)，miR-219a-1-3p(SEQ ID 25)，miR-222-3p(SEQ ID 36)，miR-23a-5p(SEQ ID 23)，miR-338-5p(SEQ ID30)，miR-379-5p(SEQ ID 31)，miR-450a-5p(SEQ ID 33)，miR-582-3p(SEQ ID 29)，miR-92a-1-5p(SEQ ID 24)。
6.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中所述疾病是阿尔茨海默病，以及相对于所述参照模式，所述小神经胶质细胞MV miRNA模式表征如下：
-下调的miRNA：miR-151-5p(SEQ ID 17)，miR-23b-5p(SEQ ID 13)，miR-374c-3p(SEQID 18)，miR-669c-5p(SEQ ID 14)；
-上调的miRNA：miR-501-5p(SEQ ID 5)，miR-125a-5p(SEQ ID 1)，miR-1306-5p(SEQID 8)，miR-134-5p(SEQ ID 11)，miR-146a-5p(SEQ ID 6)，miR-24-1-5p(SEQ ID 7)，miR-300-3p(SEQ ID 2)，miR-330-3p(SEQ ID 3)，miR-466n-3p(SEQ ID 4)，miR-671-5p(SEQ ID10)，miR-744-5p(SEQ ID 9)，miR-877-5p(SEQ ID 12)。
7.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中所述疾病是阿尔茨海默氏病，以及相对于所述参照模式，所述小神经胶质细胞MV miRNA模式表征如下：
-下调的miRNA：miR-151-5p(SEQ ID 17)，miR-23b-5p(SEQ ID 13)，miR-374c-3p(SEQID 18)；
-上调的miRNA：miR-501-5p(SEQ ID 5)，miR-125a-5p(SEQ ID 1)，miR-1306-5p(SEQID 8)，miR-134-5p(SEQ ID 11)，miR-146a-5p(SEQ ID 6)，miR-24-1-5p(SEQ ID 7)，miR-300-3p(SEQ ID 2)，miR-330-3p(SEQ ID 3)，miR-671-5p(SEQ ID 10)，miR-744-5p(SEQ ID9)，miR-877-5p(SEQ ID 12)。
8.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中所述疾病是局部缺血，以及表3中列出的至少16种，优选至少20种miRNA的模式是局部缺血的指标(相对于所述参照模式：+，上调；-，下调)；表3
9.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中所述疾病是图雷特综合征，以及表4中列出的至少13种，优选至少16种miRNA的模式是图雷特综合征的指标(相对于所述参照模式：+，上调；-，下调)；表4
10.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中所述疾病是神经性疼痛，以及表5中列出的至少8种，优选至少10种miRNA的模式是神经性疼痛的指标(相对于所述参照模式：+，上调；-，下调)；表5
11.根据权利要求1～2中任一项所述的方法，其中所述疾病是自闭症，以及表6中列出的至少13种，优选至少16种miRNA的模式是自闭症的指标(相对于所述参照模式：+，上调；-，下调)；表6
12.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中所述疾病是多发性硬化症，以及表7中列出的至少7种miRNA的模式是多发性硬化症的指标(相对于所述参照模式：+，上调，-，下调)；表7
13.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中所述疾病是雷特综合征，以及表8中列出的至少10种miRNA的模式是雷特综合征的指标(相对于所述参照模式：+，上调，-，下调)；表8
14.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中所述疾病是亨廷顿氏病，以及表9中列出的至少12种miRNA的模式是自闭症的指标(相对于所述参照模式：+，上调，-，下调)；表9
15.根据权利要求1～2中任一项所述的方法，其中所述疾病是癫痫症，以及表10中列出的至少31种，优选至少42种miRNA的模式是癫痫的指标(相对于所述参照模式：+，上调；-，下调)；表10
16.根据权利要求1～2中任一项所述的方法，其中所述疾病是胶质母细胞瘤，以及表11中列出的至少33种，优选至少44种miRNA的模式是胶质母细胞瘤的指标(相对于所述参照模式：+，上调；-，下调)；表11
17.根据权利要求1～2中任一项所述的方法，其中所述疾病是脑膜炎，以及表12中列出的至少16种，优选至少21种miRNA的模式是脑膜炎的指标(相对于所述参照模式：+，上调；-，下调)；表12
18.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中所述疾病是创伤性脑损伤，以及表13中列出的至少12种miRNA的模式是创伤性脑损伤的指标(相对于所述参照模式：+，上调；-，下调)；表13
19.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其中所述疾病是肌萎缩侧索硬化症(ALS)，以及表14中列出的至少4种miRNA的模式是ALS的指标(相对于所述参照模式：+，上调；-，下调)；表14
20.根据权利要求1～2中任一项所述的方法，其中所述疾病是抑郁症，以及表15中列出的至少5种miRNA的模式是抑郁症的指标(相对于所述参照模式：+，上调；-，下调)；表15
21.一种用于诊断和预后基于神经退行性、神经性和炎症的疾病的试剂盒，包含：
a)用于确定个体的小神经胶质细胞微泡的miRNA样品的miRNA表达谱的装置，
b)至少一个参照组的miRNA谱，其表征基于神经退行性、神经性和炎症的所述疾病。
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