CN108441450B - 一种兼具溶磷和降解dehp作用的复合菌剂及其应用 - Google Patents

一种兼具溶磷和降解dehp作用的复合菌剂及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108441450B
CN108441450B CN201810317599.XA CN201810317599A CN108441450B CN 108441450 B CN108441450 B CN 108441450B CN 201810317599 A CN201810317599 A CN 201810317599A CN 108441450 B CN108441450 B CN 108441450B
Authority
CN
China
Prior art keywords
microbial inoculum
soil
dehp
phosphorus
degrading
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810317599.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN108441450A (zh
Inventor
莫测辉
冯乃宪
李彦文
蔡全英
喻乐意
李慧
赵海明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jinan University
Original Assignee
Jinan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jinan University filed Critical Jinan University
Priority to CN201810317599.XA priority Critical patent/CN108441450B/zh
Publication of CN108441450A publication Critical patent/CN108441450A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108441450B publication Critical patent/CN108441450B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K17/00—Soil-conditioning materials or soil-stabilising materials
    • C09K17/14—Soil-conditioning materials or soil-stabilising materials containing organic compounds only
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
    • C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
    • C09K2101/00—Agricultural use

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • General Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Processing Of Solid Wastes (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Purification Treatments By Anaerobic Or Anaerobic And Aerobic Bacteria Or Animals (AREA)

Abstract

本发明公开一种兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂及其应用，属于微生物技术领域。该复合菌剂包括Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB。本发明的复合菌剂协同性较好，兼具溶磷和降解DEHP功能，既能提高溶磷能力又能促进DEHP降解，对于改良磷素缺乏以及PAEs污染土壤的质量具有重要作用；且所述复合菌剂繁殖迅速，适应能力强，培养方法简便易行，具有改善土壤营养状况，和去除土壤中PAEs有机污染物的应用潜力，对培育和提升土壤生态肥力，修复污染土壤，降低农作物PAEs含量，保障农产品质量安全，实现农田土壤边生产边修复具有重要意义。

Description

一种兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂及其应用。
背景技术
由于单一微生物菌剂的性能单一，适应能力较弱，效果不甚稳定，微生物菌剂所应用的土壤、水体等环境的复杂性等，以及对多功能菌剂需求日益迫切，所以急需通过菌剂组合，培养生产出功能稳定、适应能力强且价格低廉的多功能复合菌剂。复合菌剂是基于微生态学理论，利用微生物菌群的联合作用，由两种或两种以上有益的且互不拮抗的微生物菌种制备的活菌制剂，具有种类全、配伍合理、功能性强、经济效益高等优点。目前我国微生物菌剂发展迅速，用可以做复合肥、有机肥、控释肥等功能菌，可以有效提高肥料利用率，防治细菌真菌病害感染，见效快、收益高。目前，我国微生物菌剂发展迅速，复合菌剂已在工业、农业、医疗、水产养殖和畜牧业等领域得到了广泛的应用。与单一菌种微生物制剂相比，复合菌剂不仅集合了单一菌的功能，而且增加了不同菌种之间协同共用，更适用于复杂多变的生态环境。对于改良磷素缺乏和修复邻苯二甲酸酯(PAEs)污染的土壤，需要兼具溶磷和PAEs降解功能的多功能复合菌剂。
发明内容
为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的目的在于提供一种兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂。该复合菌剂满足了农业生产对多功能菌剂的迫切需求。复合菌剂的溶磷能力和降解DEHP能力均显著提高。
本发明的另一目的在于提供上述兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂在改良土壤质量中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂，包括Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB。
所述的Pseudomonas prosekii YLYP6的保藏信息：保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏日期：2017年06月28日，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M 2017390。
本课题组前期分离筛选的Rhodococcus pyridinivorans XB能够有效降低土壤中邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)，并降低玉米对DEHP的吸收累积。该菌种的保藏信息：保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏日期：2016年09月28日，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏编号：GDMCC NO：60054。
所述的Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB制成浓度为108～1010cfu/mL的菌悬液；
所述的Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB按照体积比1～3：2～5进行混合；优选按照体积比1：2进行混合。
所述的兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)将Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB分别接种于LB液体培养基中，在28～30℃活化12～18h；
(2)挑取活化好的2种单菌分别接种于LB液体培养基中，分别培养至细菌数为108～1010cfu/mL；
(3)将2种单菌按照1～3：2～5的体积比均匀混合，得多功能复合菌剂，即兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂。
所述的兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂在溶磷和/或降解DEHP中的应用。
所述的Pseudomonas prosekii YLYP6在NBRIP培养基中可溶性磷含量为685.5mg/L～705.3mg/L，Rhodococcus pyridinivorans XB在NBRIP培养基中可溶性磷含量15.7mg/L～20.2mg/L。所述的复合菌剂在NBRIP培养基中，可溶性磷含量达713.8～752.6mg/L。复合菌剂溶磷能力得到显著提升，达到1+1>2菌剂复配效果。
Pseudomonas prosekii YLYP6在含有DEHP的MSM培养基中DEHP不发生降解，Rhodococcus pyridinivorans XB在含有DEHP的MSM培养基中，对DEHP的降解率为80.5％～91.9％，复合菌剂在含有DEHP的MSM培养基中，对DEHP的降解率为92.3％～100％。复合菌剂能够基本将DEHP完全降解，复合菌剂对DEHP的降解能力得到显著提高。
所述的兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂在改良土壤质量中的应用。
优选的，将复合菌剂接加入土壤中，并搅拌均匀，可以使土壤中有效磷含量增加，并降解土壤中的DEHP。
将600g土壤加入500mL的烧杯中，并用锡箔纸遮光处理，向土壤中分别添加菌株YLYP6、XB和复配菌剂60mL，均充分混匀。将土壤含水量调整至田间持水量30％，30℃恒温避光培养10d，以不接种任何菌剂的土壤为对照，每个处理设置三个重复。测定不同处理土壤中有效磷含量。结果显示，对照土壤中有效磷含量39.8mg/kg，接种单菌Pseudomonasprosekii YLYP6土壤中有效磷含量69.5～80.4mg/kg，接种单菌Rhodococcuspyridinivorans XB土壤中有效磷含量41.7～45.2mg/kg，接种复配菌剂土壤中有效磷含量为76.2～102.5mg/kg。
设置DEHP污染浓度为20mg/kg。将600g土壤加入500mL的烧杯中，分别加入DEHP，搅拌均匀，并用锡箔纸遮光处理，老化一周后，向土壤中分别添加菌株YLYP6、XB、复合菌剂60mL，均充分混匀。将土壤含水量调整至田间持水量30％，于30℃恒温培养10d后，以不添加任何菌剂的土壤为空白对照，测定土壤中DEHP的残留量。上述每个处理设置3个重复。结果显示：空白对照中两种浓度梯度DHEP降解率分别为27.1％，添加Pseudomonas prosekiiYLYP6土壤中DHEP降解率为34.9％～41.3％；添加Rhodococcus pyridinivorans XB土壤中DEHP降解率为53.9％～65.3％。添加复合菌剂土壤中两种浓度梯度DEHP降解率分别为78.5％～91.7％。
本发明的机理是：
本课题组前期分离筛选的Rhodococcus pyridinivorans XB能够有效降低土壤中邻苯二甲酸二异辛酯(DEHP)，并降低玉米对DEHP的吸收累积。然而对于受PAEs污染的磷素缺乏的土壤则迫切需要具有配伍合理、功能性强、经济效益高、兼具溶磷和PAEs降解功能等特点的多功能菌剂。因此，本发明的复合菌剂由高效溶磷菌Pseudomonas prosekii YLYP6和DEHP降解菌Rhodococcus pyridinivorans XB配伍构成，既可以有效改善土壤营养状况，又能去除土壤中PAEs有机污染物，对培育和提升土壤生态肥力，修复污染土壤，降低农作物PAEs含量，保障农产品质量安全，实现农田土壤边生产边修复具有重要意义。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
本发明的复合菌剂协同性较好，兼具溶磷和降解DEHP功能，既能提高溶磷能力又能促进DEHP降解，对于改良磷素缺乏以及PAEs污染土壤的质量具有重要作用；并且所述复合菌剂繁殖迅速，适应能力强，培养方法简便易行，具有改善土壤营养状况，和去除土壤中PAEs有机污染物的应用潜力，对培育和提升土壤生态肥力，修复污染土壤，降低农作物PAEs含量，保障农产品质量安全，实现农田土壤边生产边修复具有重要意义。
附图说明
图1是菌株YLYP6和XB在LB固体培养基上的生长形态。
图2是菌株YLYP6和XB在LB液体培养基混合培养生长状态。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例中所用的菌株Pseudomonas prosekii YLYP6，从活性污泥中分离纯化得到；其保藏信息：保藏单位：中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏日期2017年06月28日，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，保藏编号：CCTCC NO：M 2017390。
实施例中所用的菌株Rhodococcus pyridinivorans XB的保藏信息：保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏日期：2016年09月28日，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏编号：GDMCC NO：60054。
本发明所用的培养基：
LB培养基：酵母粉5.0g，蛋白胨10.0g，氯化钠10.0g，蒸馏水1000mL，pH 7.0。LB固体培养基添加15g琼脂。
磷酸盐生长(NBRIP)培养基(g·L-1)：葡糖糖10.0，Ca3(PO4)2 5.0，MgCl2·6H2O5.0，MgSO4·7H2O 0.25，KCl 0.2，(NH4)2SO4 0.1，pH 7.0。
无机盐培养基(MSM，g·L-1)：K2HPO4 5.8，KH2PO4,4.5，(NH4)2SO4 2.0，MgCl2 0.16，CaCl2 0.02，Na2MoO4·2H2O 0.0024，FeCl3 0.0018，MnCl2·2H2O0.0015，pH 7.5。在MSM培养基中添加DEHP初始浓度为400mg L-1，作为唯一碳源。
实施例1
所述的Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB拮抗实验：
采用平板划线法分别将和Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcuspyridinivorans XB在LB固体培养基上交叉划线，于30℃培养3d。结果表明，两种菌体生长状况互不影响(图1)。采用扫描电子显微镜观察到两株菌在LB液体培养基中能够共存(图2)，适于配伍构成复合菌剂。
实施例2
复合菌剂溶磷能力分析：
(1)将Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB分别接种于LB液体培养基中，在28℃活化12h；
(2)挑取活化好的2种单菌分别接种于LB液体培养基中，分别培养至细菌数为108cfu/mL；
(3)将2种单菌按照1：2的体积比均匀混合，得多功能复合菌剂，即兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂。
(4)将等菌体数量的复合菌剂、Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcuspyridinivorans XB分别接种到NBRIP培养基中，于30℃，130rpm培养7天，每个处理设置3个重复。
(5)可溶性磷酸盐的测定：培养7天后取培养液2mL于离心管，4℃，5000rpm离心10min，取0.2mL上清液稀释至10mL，用钼锑抗分光光度法测定可溶性磷酸盐的含量(HJ704-2014土壤有效磷的测定碳酸氢钠浸提-钼锑抗分光光度法)。结果显示，Pseudomonasprosekii YLYP6培养液中可溶性磷含量为685.5mg/L，Rhodococcus pyridinivorans XB培养液中可溶性磷含量15.7mg/L，而复合菌剂培养液中可溶性磷含量713.8mg/L，复合菌剂溶磷能力得到显著提升，达到1+1>2菌剂复配效果。
实施例3
复合菌剂溶磷能力分析：
(1)将Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB分别接种于LB液体培养基中，在30℃活化18h；
(2)挑取活化好的2种单菌分别接种于LB液体培养基中，分别培养至细菌数为1010cfu/mL；
(3)将2种单菌按照3：3的体积比均匀混合，得多功能复合菌剂，即兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂。
(4)将等菌体数量的复合菌剂、Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcuspyridinivorans XB分别接种到NBRIP培养基中，于30℃，130rpm的无菌摇床中培养7天，每个处理设置3个重复。
(5)可溶性磷酸盐的测定：培养7天后取培养液2mL于离心管，4℃，5000rpm离心10min，取0.2mL上清液稀释至10mL，用钼锑抗分光光度法测定可溶性磷酸盐的含量。结果显示，Pseudomonas prosekii YLYP6培养液中可溶性磷含量为705.3mg/L，Rhodococcuspyridinivorans XB培养液中可溶性磷含量20.2mg/L，而复合菌剂培养液中可溶性磷含量752.6mg/L，复合菌剂溶磷能力得到显著提升，达到1+1>2菌剂复配效果。
实施例4
复合菌剂溶磷能力分析：
(1)将Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB分别接种于LB液体培养基中，在30℃活化14h；
(2)挑取活化好的2种单菌分别接种于LB液体培养基中，分别培养至细菌数为109cfu/mL；
(3)将2种单菌按照3：5的体积比均匀混合，得多功能复合菌剂，即兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂。
(4)将等菌体数量的复合菌剂、Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcuspyridinivorans XB分别接种到NBRIP培养基中，于30℃，130rpm培养7天，每个处理设置3个重复。
(5)可溶性磷酸盐的测定：培养7天后取培养液2mL于离心管，4℃，5000rpm离心10min，取0.2mL上清液稀释至10mL，用钼锑抗分光光度法测定可溶性磷酸盐的含量。结果显示，Pseudomonas prosekii YLYP6培养液中可溶性磷含量为695.2mg/L，Rhodococcuspyridinivorans XB培养液中可溶性磷含量19.6mg/L，而复合菌剂培养液中可溶性磷含量728.3mg/L，复合菌剂溶磷能力得到显著提升，达到1+1>2菌剂复配效果。
实施例5
复合菌剂降解DEHP的能力分析：
(1)将Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB分别接种于LB液体培养基中，在28℃活化12h；
(2)挑取活化好的2种单菌分别接种于LB液体培养基中，分别培养至细菌数为108cfu/mL；
(3)将2种单菌按照1：2的体积比均匀混合，得多功能复合菌剂，即兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂。
(4)将等菌体数量的单菌Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcuspyridinivorans XB以及复合菌剂分别接入以DEHP为唯一碳源的MSM培养基内，于30℃，130rpm的无菌摇床中培养3天，同时以未接菌培养基为空白对照，每个处理设置3个重复。
(5)Pseudomonas prosekii YLYP6培养液中DEHP不发生降解，Rhodococcuspyridinivorans XB对DEHP的降解率为80.5％，而复合菌剂对DEHP降解率为92.3％，复合菌剂对DEHP的降解能力得到显著提高。
实施例6
复合菌剂降解DEHP的能力分析：
(1)将Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB分别接种于LB液体培养基中，在30℃活化18h；
(2)挑取活化好的2种单菌分别接种于LB液体培养基中，分别培养至细菌数为1010cfu/mL；
(3)将2种单菌按照1：5的体积比均匀混合，得多功能复合菌剂，即兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂。
(4)将等菌体数量的Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcuspyridinivorans XB以及复合菌剂分别接入以DEHP为唯一碳源的MSM培养基内，于30℃，130rpm的无菌摇床中培养3天，同时以未接菌培养基为空白对照，每个处理设置3个重复。
(5)Pseudomonas prosekii YLYP6培养液中DEHP不发生降解，Rhodococcuspyridinivorans XB对DEHP的降解率为91.9％，而复合菌剂将DEHP降解率完全降解，复合菌剂对DEHP的降解能力得到显著提高。
实施例7
复合菌剂降解DEHP的能力分析：
(1)将Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB分别接种于LB液体培养基中，在28℃活化12h；
(2)挑取活化好的2种单菌分别接种于LB液体培养基中，分别培养至细菌数为109cfu/mL；
(3)将2种单菌按照3：3的体积比均匀混合，得多功能复合菌剂，即兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂。
(4)将等菌体数量的单菌Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcuspyridinivorans XB以及复合菌剂分别接入以DEHP为唯一碳源的MSM培养基内，于30℃，130rpm的无菌摇床中培养3天，同时以未接菌培养基为空白对照，每个处理设置3个重复。
(5)Pseudomonas prosekii YLYP6培养液中DEHP不发生降解，Rhodococcuspyridinivorans XB对DEHP的降解率为90.5％，而复合菌剂对DEHP降解率98.4％，复合菌剂对DEHP的降解能力得到显著提高。
实施例8
复合菌剂应用于磷素缺乏土壤改良：
(1)供试土壤：农田水稻土，pH 5.62，有机质17.40g/kg，总氮0.79g/kg，总磷0.66g/kg，风干后过60目。
(2)将Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB分别接种于LB液体培养基中，28℃活化12h；
(3)挑取活化好的2种单菌分别接种于LB液体培养基中，分别培养至细菌数为108cfu/mL；
(4)将2种单菌按照1：5的体积比均匀混合，得多功能复合菌剂，即兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂。
(5)土壤中有效磷含量测定：
将600g土壤加入500mL的烧杯中，并用锡箔纸遮光处理，向土壤中分别添加菌株YLYP6、XB、复合菌剂60mL，均充分混匀。将土壤含水量调整至田间持水量的30％，30℃恒温培养10d，以不接种任何菌剂的土壤为对照，每个处理设置三个重复。测定不同处理土壤中有效磷含量，结果显示，对照中有效磷含量39.8mg/kg，添加Pseudomonas prosekii YLYP6土壤中有效磷含量69.5mg/kg，添加Rhodococcus pyridinivorans XB土壤中有效磷含量41.7mg/kg，添加复合菌剂土壤中有效磷含量76.2mg/kg。
实施例9
复合菌剂应用于磷素缺乏土壤改良：
(1)供试土壤：农田水稻土，pH 5.62，有机质17.40g/kg，总氮0.79g/kg，总磷0.66g/kg，风干后过60目。
(2)将Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB分别接种于LB液体培养基中，30℃活化18h；
(3)挑取活化好的2种单菌分别接种于LB液体培养基中，分别培养至细菌数为1010cfu/mL；
(4)将2种单菌按照3：2的体积比均匀混合，即得多功能复合菌剂。
(5)土壤中有效磷含量测定：
将600g土壤加入500mL的烧杯中，并用锡箔纸遮光处理，向土壤中分别添加菌株YLYP6、XB、复合菌剂60mL，均充分混匀。将土壤含水量调整至田间持水量的30％，30℃恒温培养10d，以不接种任何菌剂的土壤为对照，每个处理设置三个重复。测定不同处理土壤中有效磷含量，结果显示，对照中有效磷含量39.8mg/kg，添加Pseudomonas prosekii YLYP6土壤中有效磷含量80.4mg/kg，添加Rhodococcus pyridinivorans XB土壤中有效磷含量45.2mg/kg，添加复合菌剂土壤中有效磷含量102.5mg/kg。
实施例10
复合菌剂对DEHP污染土壤修复应用：
(1)供试土壤：农田水稻土，pH 5.62，有机质17.40g/kg，总氮0.79g/kg，总磷0.66g/kg，风干后过60目。
(2)将Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB分别接种于LB液体培养基中，28℃活化12h；
(3)挑取活化好的2种单菌分别接种于LB液体培养基中，分别培养至细菌数为108cfu/mL；
(4)将2种单菌按照1：5的体积比均匀混合，得多功能复合菌剂，即兼具溶磷和降解DEHP作用的复合菌剂。
(5)复合菌剂修复DEHP污染土壤
设置DEHP污染浓度为20mg/kg。将600g土壤加入500mL的烧杯中，分别加入DEHP，搅拌均匀，并用锡箔纸遮光处理，老化一周后，向土壤中分别添加菌株YLYP6、XB、复合菌剂60mL，搅拌均匀。将土壤含水量调整至田间持水量30％，30℃恒温培养10d，以不添加任何菌剂的土壤为空白对照，上述每个处理设置3个重复。测定土壤中DEHP的残留量，结果显示，空白对照土壤中DHEP的降解率为27.1％，添加Pseudomonas prosekii YLYP6土壤中DHEP的降解率为34.9％；添加Rhodococcus pyridinivorans XB土壤中DEHP的降解率为53.9％。添加复合菌剂土壤中DEHP的降解率为78.5％。
实施例11
复合菌剂对DEHP污染土壤修复应用：
(1)供试土壤：农田水稻土，pH 5.62，有机质17.40g/kg，总氮0.79g/kg，总磷0.66g/kg，风干后过60目。
(2)将Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB分别接种于LB液体培养基中，30℃活化18h；
(3)挑取活化好的2种单菌分别接种于LB液体培养基中，分别培养至细菌数为109cfu/mL；
(4)将2种单菌按照3：2的体积比均匀混合，即得多功能复合菌剂。
(5)复合菌剂DEHP污染土壤修复
设置DEHP污染浓度为20mg/kg。将600g土壤加入500mL的烧杯中，分别加入DEHP，搅拌均匀，并用锡箔纸遮光处理，老化一周后，向土壤中分别添加菌株YLYP6、XB、复合菌剂60mL，搅拌均匀。将土壤含水量调整至田间持水量的30％，30℃恒温培养10d，以不添加任何菌剂的土壤为空白对照，上述每个处理设置3个重复。测定土壤中DEHP的残留量，结果显示，空白对照土壤中DHEP降解率为27.1％，添加Pseudomonas prosekii YLYP6土壤中DHEP的降解率分别为40.2％；添加Rhodococcus pyridinivorans XB土壤中DEHP的降解率为62.3％。添加复合菌剂土壤中DEHP的降解率为83.5％。
实施例12
复合菌剂对DEHP污染土壤修复应用：
(1)供试土壤：农田水稻土，pH 5.62，有机质17.40g/kg，总氮0.79g/kg，总磷0.66g/kg，风干后过60目。
(2)将Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB分别接种于LB液体培养基中，30℃活化18h；
(3)挑取活化好的2种单菌分别接种于LB液体培养基中，分别培养至细菌数为1010cfu/mL；
(4)将2种单菌按照3：3的体积比均匀混合，即得多功能复合菌剂。
(5)复合菌剂DEHP污染土壤修复
设置DEHP污染浓度为20mg/kg。将600g土壤加入500mL的烧杯中，分别加入DEHP，搅拌均匀，并用锡箔纸遮光处理，老化一周后，向土壤中分别添加菌株YLYP6、XB、复合菌剂60mL，搅拌均匀。将土壤含水量调整至田间持水量的30％，30℃恒温培养10d，以不添加任何菌剂的土壤为空白对照，上述每个处理设置3个重复。测定土壤中DEHP的残留量，结果显示，空白对照中DHEP的降解率为27.1％，添加Pseudomonas prosekii YLYP6土壤中DHEP的降解率分别为41.3％；添加Rhodococcus pyridinivorans XB土壤中DEHP的降解率为65.3％。添加复合菌剂土壤中DEHP降解率为91.7％。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种兼具溶磷和降解邻苯二甲酸二异辛酯作用的复合菌剂，其特征在于：包括Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB；
所述的Pseudomonas prosekii YLYP6，于2017年06月28日保藏于中国武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO：M 2017390；
所述的Rhodococcus pyridinivorans XB，于2016年09月28日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCCNO：60054；
所述的Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB按照菌悬液的体积比1～3：2～5进行混合；
所述的Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB分别制成浓度为108～1010 cfu/mL的菌悬液。
2.权利要求1所述的兼具溶磷和降解邻苯二甲酸二异辛酯作用的复合菌剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）将Pseudomonas prosekii YLYP6和Rhodococcus pyridinivorans XB分别接种于LB液体培养基中，在28～30 ℃活化12～18 h；
（2）挑取活化好的2种单菌分别接种于LB液体培养基中，分别培养至细菌数为108～1010 cfu/mL；
（3）将2种单菌按照1～3：2～5的体积比均匀混合，得多功能复合菌剂，即兼具溶磷和降解邻苯二甲酸二异辛酯作用的复合菌剂。
3.权利要求1所述的兼具溶磷和降解邻苯二甲酸二异辛酯作用的复合菌剂在溶磷和/或降解邻苯二甲酸二异辛酯中的应用。
4.权利要求1所述的兼具溶磷和降解邻苯二甲酸二异辛酯作用的复合菌剂在改良土壤质量中的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：
将所述的复合菌剂直接加入土壤中，并搅拌均匀。
CN201810317599.XA 2018-04-10 2018-04-10 一种兼具溶磷和降解dehp作用的复合菌剂及其应用 Active CN108441450B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810317599.XA CN108441450B (zh) 2018-04-10 2018-04-10 一种兼具溶磷和降解dehp作用的复合菌剂及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810317599.XA CN108441450B (zh) 2018-04-10 2018-04-10 一种兼具溶磷和降解dehp作用的复合菌剂及其应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108441450A CN108441450A (zh) 2018-08-24
CN108441450B true CN108441450B (zh) 2020-05-08

Family

ID=63199083

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810317599.XA Active CN108441450B (zh) 2018-04-10 2018-04-10 一种兼具溶磷和降解dehp作用的复合菌剂及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108441450B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109207400B (zh) * 2018-09-26 2021-09-28 东北农业大学 一种高效降解黑土中邻苯二甲酸酯的复合菌剂及降解方法
CN110669704B (zh) * 2019-11-19 2023-06-27 河南工业大学 一种高效复合溶磷菌剂及其制备方法和应用
CN112063567B (zh) * 2020-09-24 2022-01-04 自然资源部第三海洋研究所 一株嗜吡啶红球菌及其在生产phbv中的应用
CN116004448B (zh) * 2022-12-06 2023-09-26 浙江大学 一株嗜吡啶红球菌及微生物菌剂和应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104845891A (zh) * 2015-02-09 2015-08-19 暨南大学 一种降解多种邻苯二甲酸酯的壤霉菌菌悬液及其应用
WO2017015321A1 (en) * 2015-07-20 2017-01-26 North Carolina State University Synthetic pathway for biological carbon dioxide sequestration
CN107629976A (zh) * 2016-07-18 2018-01-26 中国石油天然气集团公司 一种微生物及其菌剂和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104845891A (zh) * 2015-02-09 2015-08-19 暨南大学 一种降解多种邻苯二甲酸酯的壤霉菌菌悬液及其应用
WO2017015321A1 (en) * 2015-07-20 2017-01-26 North Carolina State University Synthetic pathway for biological carbon dioxide sequestration
CN107629976A (zh) * 2016-07-18 2018-01-26 中国石油天然气集团公司 一种微生物及其菌剂和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN108441450A (zh) 2018-08-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108441450B (zh) 一种兼具溶磷和降解dehp作用的复合菌剂及其应用
CN108587947B (zh) 一株溶磷菌及其与dehp降解菌复合菌剂与在土壤改良中的应用
CN108546658B (zh) 一株溶磷菌及其与dehp降解菌复配菌剂和应用
CN112646753B (zh) 一株产气克雷伯氏菌及其应用
CN107058156B (zh) 四环素类抗生素降解菌株、含有该菌株的菌剂及其应用
CN110734333A (zh) 一种微生物土壤修复剂及其制备方法
CN110184225B (zh) 一株具有PAHs降解能力的根际促生细菌PHE-2及其应用
CN108893421A (zh) 一种纺锤形赖氨酸芽孢杆菌及其在矿区复垦生态重建中的应用
CN109022324B (zh) 一种荧光假单胞菌及其应用
CN114480183A (zh) 阿氏芽孢杆菌hz18-3及其用途
CN113583898B (zh) 一株葡萄牙柠檬酸杆菌及其在去除氯霉素和溶磷解钾中的应用
CN109576181A (zh) 一种改性伊利石粉微生物菌剂及其制备方法与应用
CN113881599A (zh) 一株枯草芽孢杆菌、番茄用复合微生物肥料、制备方法及其应用
CN108672490A (zh) 一种用于修复重金属铅污染土壤的微生物钝化方法
CN115044500B (zh) 一种高效降解草甘膦及其代谢产物的白色芽孢杆菌及其应用
Burd Plastic not fantastic
CN104498408B (zh) 一株产拟除虫菊酯水解酶的地衣芽孢杆菌utm104 及其应用
KR20140077645A (ko) 수질 및 저질 개선용 미생물제제 제형
CN115340966A (zh) 一种戈登氏菌及其应用
CN112522248B (zh) 一种包裹型阴沟肠杆菌y16固体菌剂的制备方法及其应用
CN110846048B (zh) 一种基于菌株1jn2的微生物修复剂及其制备使用方法
CN107090422B (zh) 一种含可溶性二硫化钼的微生物菌剂及其应用
CN109207400B (zh) 一种高效降解黑土中邻苯二甲酸酯的复合菌剂及降解方法
CN108373982B (zh) 一株indicus不动杆菌及其解磷方法
CN116410870B (zh) 一株草酸青霉、复合菌剂、联合修复剂及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant