CN108300752A - 一种利用阿胶坨制备小分子阿胶肽的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用阿胶坨制备小分子阿胶肽的方法,属于生物技术领域。所述阿胶肽是以干燥阿胶坨为原料,采用复合蛋白酶酶解阿胶蛋白、经活性炭除油脱色、结合超滤的分离纯化方法,通过喷雾干燥获得阿胶肽产品。本发明的阿胶肽制备方法,成本低,酶解度高,酶解时间短,污染少,得率高,所得阿胶肽以其功能形式直接被人体吸收,耗能少吸收率高,不但保持阿胶的功能,还发挥独特的生理功能。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用阿胶坨制备小分子阿胶肽的方法,属于生物技术领域。
背景技术
阿胶的发展历史源远流长,可以说阿胶犹如一棵常青树,虽历千年风雨,却越发显示出其勃勃生机。阿胶始载于《神农本草经》,距离今天已有2000多年,历史悠久,是传统的滋补、补血上品,被称为补血“圣药”。
阿胶为驴皮经煎煮浓缩制得的固体胶,主要成分为胶原蛋白,占80%左右,因其分子量大而难于消化吸收。通过酶解技术获得的小分子阿胶肽能以其功能形式直接被人体吸收,耗能少吸收率高,不但保持阿胶的功能,改善人体体内的贫血症状,使体内的白细胞和血小板数量增加,还发挥独特的生理功能,例如:抗氧化、抗疲劳、能增强机体的免疫力、抑制体内的恶性肿瘤生长以及美容等功能。因此对于研究阿胶肽的制备与开发,具有广阔的发展前景。
国内外对于胶原蛋白水解的研究颇多,Veeruraj A等(Veeruraj A, Arumugam M,Balasubramanian T. Isolation and characterization of thermo-stable collagenfrom the marine eel-fish[J]. Process Biochemistry, 2013, 48(10):1592-1602.)通过胃蛋白酶酶解鳗鱼皮中的胶原蛋白,同时分析了其理化性质。赵胜年(赵胜年. 酶解鲜猪皮提取水解胶原蛋白的研究[J]. 食品工业科技, 1998, 3(5):18-19.)用胰酶对猪皮进行水解,从而得到了胶原蛋白。班玉凤等(班玉凤, 朱海峰, 马君昌. 碱性蛋白酶水解猪皮胶原蛋白的研究[J]. 现代食品科技, 2005, 21(2):59-61.)用Alcalase酶水解猪皮,得到胶原蛋白寡肽,水解度为13.1%。韩凤杰等(韩凤杰, 赵征. 酶法制取比目鱼皮胶原蛋白寡肽[J]. 食品研究与开发, 2012, 127(8):104-107.)研究了碱性蛋白酶水解比目鱼皮制备胶原蛋白寡的工艺,水解度为22.36%。王燕等(王燕, 付万冬, 郑斌. 酶法提取鱿鱼皮胶原蛋白[J]. 食品科技, 2011, 36(6):150-155.)也是用单一酶法,以鱿鱼皮为原料,制备胶原蛋白肽,同时利用正交实验法来优化条件,所得的结果与响应面分析法进行对比。以上资料大多为水解猪皮、牛皮、鱼皮等,而对于阿胶蛋白的水解研究较少。
付英杰(付英杰. 阿胶低肽及其制剂的研究[D]. 山东中医药大学, 2010.)利用胃蛋白酶与胰蛋白酶分步酶解阿胶蛋白制备阿胶低肽,得率(阿胶肽质量W/阿胶蛋白质量W)为26.97%。田景振等(田景振, 付英杰. 阿胶低肽的制备方法:中国, 101294186[P].2008-10-29.)利用胃蛋白酶与胰蛋白酶分步酶解阿胶蛋白,时间较长,胃蛋白酶与胰蛋白酶成本较高。叶传发等(叶传发, 张晓东, 胡承四, 等. 一种阿胶肽的提取方法:中国,102021215A[P].2011-04-20.),公开了100℃煎煮阿胶6-8h,碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶分步酶解,再经活性炭脱色,纳滤脱盐浓缩,喷雾干燥的制备方法,该方法操作流程太长,步骤繁琐,胰蛋白酶成本高,不适合工业化生产。钟虹光等(钟虹光, 易敏之, 卢建中,等. 一种阿胶低聚肽的制备方法:中国, 102321716A[P].2012-01-18.)将阿胶粉碎,过筛,加水用100℃加热,碱性蛋白酶、中性蛋白酶、风味蛋白酶分步酶解,过膜浓缩得到阿胶肽,该法原料处理过程太过繁琐,分步酶解时间较长。张凡等(张凡, 黄艳红, 王莹莹, 等.一种制备阿胶小分子低肽的方法:中国, 106831938A[P].2017-06-13.)水解阿胶蛋白采用加酸高压水解,造成严重酸污染。
上述方法阿胶原料处理繁琐,多酶分步酶解或者加酸高压水解,工艺过程繁琐,成本较高,不适应于规模化生产。
发明内容
本发明的目的是以干燥阿胶坨为原料,提供一种复合酶同步解法活性炭除油结合超滤的分离纯化方法,并经过喷雾干燥,得其产品。该产品保持阿胶原有生理活性,并且使阿胶的功能具体化、放大化,并且克服上述制备阿胶肽的种种问题提供了很好的解决思路。
本发明获得阿胶肽水解度35.5%,得率为32.3%,纯度为91.8%。
本发明的一种利用阿胶坨制备小分子阿胶肽的方法,步骤如下:
①复合酶解法酶解阿胶蛋白
将干燥阿胶块加入到缓冲溶液中,配制成浓度为100-120g(干重)/L溶液,调初始pH为7.0-8.0;按碱性蛋白酶与中性蛋白酶以酶活单位1:3.5-4.5,加入碱性蛋白酶与中性蛋白酶,使每克干燥阿胶块加入12000-14000U,45-55℃恒温酶解100-120 min;得水解液;
所述干燥阿胶坨,为阿胶生产过程中浓缩过程的中间产物,含水量13.1%,阿胶蛋白含量86.8%;
所述缓冲液为pH7.5的磷酸氢二钠-氢氧化钠溶液;
所述复合酶法,为加入的碱性蛋白酶与中性蛋白酶以酶活单位1:3.5-4.5混合后进行同步酶解;
所述碱性蛋白酶、中性蛋白酶均为食品级;
所述恒温酶解,为加入碱性蛋白酶与中性蛋白酶催化阿胶蛋白水解,水解温度为45-55℃,水解时间为100-120min。
②水解液的分离纯化
将①制得的水解液经3000r/min离心10min,经活性炭除油脱色,抽滤除活性炭,所得滤液依次经10000Da(分子量)、3000Da(分子量)超滤膜超滤,所得滤过液浓缩干燥得阿胶肽;
所述除油脱色,为加入活性炭除去阿胶水解液中的油脂与色素;
所述超滤,所用超滤膜为北京旭邦膜设备有限责任公司超滤膜;
所述干燥,为进口温度为220℃、出口温度为88℃条件下进行的喷雾干燥。
当前发明获得的阿胶肽的得率为30.2-31.4%(阿胶肽质量W/阿胶坨干重W),水解度为20.2-36.7%,纯度为91.6%-91.8%(W/ W)。
与现有技术相比较,本发明制备阿胶肽的方法,具有以下显著特点:
(1)所用原料阿胶坨为阿胶煎煮浓缩过程的中间产物,成本较低;
(2)以不同配比碱性蛋白酶与中性蛋白酶对阿胶蛋白水解,得到最佳复合酶配比为碱性蛋白酶与中性蛋白酶以酶活单位1:4的比例,提高酶解度,减少酶解时间;
(3)水解液用活性炭除油脱色,减少污染,提高得率;
(4)本发明获得的阿胶肽相对于Veeruraj A、赵胜年、班玉凤、韩凤杰、王燕、钟虹光、叶传发、田景振、张凡(1. Veeruraj A, Arumugam M, Balasubramanian T. Isolation andcharacterization of thermo-stable collagen from the marine eel-fish[J].Process Biochemistry, 2013, 48(10):1592-1602. 2. 赵胜年. 酶解鲜猪皮提取水解胶原蛋白的研究[J]. 食品工业科技, 1998, 3(5):18-19. 3.班玉凤, 朱海峰, 马君昌.Alcalase水解猪皮胶原蛋白的研究[J]. 现代食品科技, 2005, 21(2): 59-61. 4.韩凤杰, 赵征. 酶法制取比目鱼皮胶原蛋白寡肽[J]. 食品研究与开发, 2012, 127(8):104-107. 5.王燕, 付万冬, 郑斌. 酶法提取鱿鱼皮胶原蛋白[J]. 食品科技, 2011, 36(6):150-155.6. 6. 钟虹光, 易敏之, 卢建中, 等. 一种阿胶低聚肽的制备方法:中国,102321716A[P].2012-01-18. 7. 叶传发, 张晓东, 胡承四, 等. 一种阿胶肽的提取方法:中国, 102021215A[P].2011-04-20. 8. 田景振, 付英杰. 阿胶低肽的制备方法:中国, 101294186[P].2008-10-29. 9. 张凡, 黄艳红, 王莹莹, 等.一种制备阿胶小分子低肽的方法:中国, 106831938A[P].2017-06-13.),本发明以阿胶坨为原料,利用复合酶法同步进行酶解,活性炭除油脱色,降低成本,提高水解度,减少酶解时间,减少污染,提高阿胶肽得率,简化工艺流程,适合工业化生产;
(5)本发明的方法测定阿胶肽含量,其得率为31.4%(阿胶肽质量W/阿胶坨干重W),最大水解度36.7%,纯度为91.8%(W/ W)。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述,但本发明的保护范围不限于实施例。
实施例1:
①复合酶解法酶解阿胶蛋白
将干燥阿胶坨加入到缓冲溶液中,配制成浓度为110g(干燥)/L,调初始pH为7.5;按碱性蛋白酶与中性蛋白酶以酶活单位1:4,加入碱性蛋白酶与中性蛋白酶,使每克干燥阿胶坨加入13000U,50℃恒温酶解110 min;得水解液;
所述干燥阿胶坨,为阿胶生产过程中浓缩过程的中间产物,含水量13.1%,阿胶蛋白含量86.8%;
所述缓冲液为pH7.5的磷酸氢二钠-氢氧化钠溶液;
所述复合酶法,为加入的碱性蛋白酶与中性蛋白酶以酶活单位1:4混合后进行同步酶解;
所述碱性蛋白酶、中性蛋白酶均为食品级;
所述恒温酶解,为加入碱性蛋白酶与中性蛋白酶催化阿胶蛋白水解,水解温度为50℃,水解时间为110min。
②水解液的分离纯化
将①制得的水解液经3000r/min离心10min,经活性炭除油脱色,抽滤除活性炭,所得滤液依次经10000Da(分子量)、3000Da(分子量)超滤膜超滤,所得滤过液浓缩干燥得阿胶肽;
所述除油脱色,为加入活性炭除去阿胶水解液中的油脂与色素;
所述超滤,所用超滤膜为北京旭邦膜设备有限责任公司超滤膜;
所述干燥,为进口温度为220℃、出口温度为88℃条件下进行的喷雾干燥。
当前发明获得的阿胶肽的得率为31.4%(阿胶肽质量W/阿胶坨干重W),水解度36.7%,纯度为91.8%(W/ W)。
实施例2:
①复合酶解法酶解阿胶蛋白
将干燥阿胶坨加入到缓冲溶液中,配制成浓度为110g(干燥)/L,调初始pH为7.0;按碱性蛋白酶与中性蛋白酶以酶活单位1:4,加入碱性蛋白酶与中性蛋白酶,使每克干燥阿胶坨加入13000U,55℃恒温酶解110 min;得水解液;
所述干燥阿胶坨,为阿胶生产过程中浓缩过程的中间产物,含水量13.1%,阿胶蛋白含量86.8%;
所述缓冲液为pH7.5的磷酸氢二钠-氢氧化钠溶液;
所述复合酶法,为加入的碱性蛋白酶与中性蛋白酶以酶活单位1:4混合后进行同步酶解;
所述碱性蛋白酶、中性蛋白酶均为食品级;
所述恒温酶解,为加入碱性蛋白酶与中性蛋白酶催化阿胶蛋白水解,水解温度为55℃,水解时间为110min。
②水解液的分离纯化
将①制得的水解液经3000r/min离心10min,经活性炭除油脱色,抽滤除活性炭,所得滤液依次经10000Da(分子量)、3000Da(分子量)超滤膜超滤,所得滤过液浓缩干燥得阿胶肽;
所述除油脱色,为加入活性炭除去阿胶水解液中的油脂与色素。
所述超滤,所用超滤膜为北京旭邦膜设备有限责任公司超滤膜;
所述干燥,为进口温度为220℃、出口温度为88℃条件下进行的喷雾干燥。
当前发明获得的阿胶肽的得率为30.2%(阿胶肽质量W/阿胶坨干重W),水解度20.2%,纯度为91.7%(W/ W)。
实施例3:
①复合酶解法酶解阿胶蛋白
将干燥阿胶坨加入到缓冲溶液中,配制成浓度为110g(干燥)/L,调初始pH为8.0;按碱性蛋白酶与中性蛋白酶以酶活单位1:4,加入碱性蛋白酶与中性蛋白酶,使每克干燥阿胶坨加入13000U,55℃恒温酶解110 min;得水解液;
所述干燥阿胶坨,为阿胶生产过程中浓缩过程的中间产物,含水量13.1%,阿胶蛋白含量86.8%;
所述缓冲液为pH7.5的磷酸氢二钠-氢氧化钠溶液;
所述复合酶法,为加入的碱性蛋白酶与中性蛋白酶以酶活单位1:4混合后进行同步酶解;
所述碱性蛋白酶、中性蛋白酶均为食品级;
所述恒温酶解,为加入碱性蛋白酶与中性蛋白酶催化阿胶蛋白水解,水解温度为55℃,水解时间为110min。
②水解液的分离纯化
将①制得的水解液经3000r/min离心10min,经活性炭除油脱色,抽滤除活性炭,所得滤液依次经10000Da(分子量)、3000Da(分子量)超滤膜超滤,所得滤过液浓缩干燥得阿胶肽;
所述除油脱色,为加入活性炭除去阿胶水解液中的油脂与色素;
所述超滤,所用超滤膜为北京旭邦膜设备有限责任公司超滤膜;
所述干燥,为进口温度为220℃、出口温度为88℃条件下进行的喷雾干燥。
当前发明获得的阿胶肽的得率为30.6%(阿胶肽质量W/阿胶坨干重W),水解度24.3%,纯度为91.6%(W/ W)。
Claims (8)
1.一种利用阿胶坨制备小分子阿胶肽的方法,步骤如下:
①复合酶法水解阿胶蛋白
将干燥阿胶坨加入到缓冲溶液中,加热溶解配制成浓度为100-120g(干重)/L溶液,调初始pH为7.0-8.0;按碱性蛋白酶与中性蛋白酶以酶活单位1:3.5-4.5,加入碱性蛋白酶与中性蛋白酶,使每克干燥阿胶坨加入12000-14000U,45-55℃恒温酶解100-120 min;得水解液;
②阿胶肽的分离纯化
将①制得的水解液经3000r/min离心10min,经活性炭除油脱色,抽滤除活性炭,所得滤液依次经10000Da(分子量)、3000Da(分子量)超滤膜超滤,所得滤过液浓缩干燥得阿胶肽。
2.如权利要求1所述的利用阿胶坨制备小分子阿胶肽的方法,所述干燥阿胶坨,为阿胶生产过程中浓缩过程的中间产物,含水量13.1%,阿胶蛋白含量86.8%。
3.如权利要求1所述的利用阿胶坨制备小分子阿胶肽的方法,所述缓冲液为pH7.5的磷酸氢二钠-氢氧化钠溶液。
4.如权利要求1所述的利用阿胶坨制备小分子阿胶肽的方法,所述复合酶法,为加入的碱性蛋白酶与中性蛋白酶以酶活单位1:3.5-4.5混合后进行同步酶解。
5.如权利要求1所述的利用阿胶坨制备小分子阿胶肽的方法,所述恒温酶解,为加入碱性蛋白酶与中性蛋白酶催化阿胶蛋白水解,水解温度为45-55℃,水解时间为100-120min。
6.如权利要求1所述的利用阿胶坨制备小分子阿胶肽的方法,所述除油脱色,为加入活性炭除去阿胶水解液中的油脂与色素。
7.如权利要求1所述的利用阿胶坨制备小分子阿胶肽的方法,所述干燥,为进口温度为220℃、出口温度为88℃条件下进行的喷雾干燥。
8.如权利要求1所述的利用阿胶坨制备小分子阿胶肽的方法,所述阿胶肽得率为30.2-31.4%(阿胶肽质量W/阿胶坨干重W),水解度为20.2-36.7%,纯度为91.6%-91.8%(W/ W)。
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