CN108245561A - 一种广山楂炭及其炮制方法与质量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药领域,具体涉及一种广山楂炭及其炮制方法与质量检测方法。所述炮制方法包括如下操作步骤:取广山楂净药材,置于蒸笼内清蒸20分钟,取出,然后放入40℃的烘箱中烘干至含水量≤10%,再置于预热的电炒锅内,2100w连续加热,炒至13分钟,取出,晾凉,即得广山楂炭。本发明所述炮制方法工艺简单可控,保证了广山楂炭中5‑HMF含量在4.45mg/g以上,儿茶素含量在7.23mg/g以上;所述广山楂炭止血效果显著;所述质量检测方法简单、准确、重现性好,可为全面评价和控制广山楂药材质量提供依据。
Description
【技术领域】
本发明涉及中药领域,具体涉及一种广山楂炭及其炮制方法与质量检测方法。
【背景技术】
广山楂为蔷薇科苹果属植物台湾林檎Malusdoumeri(Bois.)Chev.或光萼林檎Malusleiocalyca S.Z.Hunag的干燥成熟果实,其性味酸、甘、涩,微温,归脾、胃、肝经,具有消食健胃,行气散瘀的功效,可用于肉食积滞,胃脘胀满,泻痢腹痛,瘀血经闭,产后瘀阻,心腹刺痛,疝气疼痛,高脂血症等。广山楂作山楂使用已有90多年历史,作为其中炮制品之一的广山楂炭也一直沿用至今。
目前现有技术中对广山楂的研究存在两个问题:
(1)炮制工艺导致有效成分流失严重,饮片质量不可控,影响了饮片的临床疗效。
中药的炮制对其相关产品的品质具有重大影响,是其工业化生产的关键步骤,也关系到产品后续的加工。目前,现行的广西壮族自治区中药饮片炮制规范(2007)中收载了广山楂炒炭的炮制方法为:取生山楂片置锅内用武火炒至起烟,立即盖上盖,继续加热至喷出黄白色烟气,取出、放凉。
其炒炭的程度只能依据经验,在规模化生产中尺度往往很难掌握,致使目前各地广山楂的炮制工艺并不统一,而药材中的活性成分极易受炮制方法和温度的影响,因而造成药用广山楂炭的品质参差不齐。
因此,建立一种能够显著提高广山楂药材品质、有效保留广山楂中活性成分的炮制方法,对于广山楂药材炮制工艺的规范化发展具有重要意义。
(2)尚未建立其饮片指标性成分含量测定方法与标准,不利于其饮片质量控制。
没有定量质控指标,就不能对广山楂炭内在质量进行监控,也不能反映出广山楂炭质量的优劣,不利于其饮片质量控制。
据报道,广山楂中含有黄酮、有机酸、萜类、甾醇类等多种成分。现代药理研究表明,儿茶素具有抗氧化、抗病毒、抗肿瘤等作用,柚皮苷则具有促进骨细胞增殖和分化、抑制骨关节炎软骨细胞凋亡作用等作用。根皮苷具有抗癌、抗病毒、抗氧化等多方面生物活性。5-羟甲基糠醛具有抗氧化性、抑制肝细胞凋亡等活性。上述四种活性成分极易受炮制方法和温度的影响,文献检索发现,国内学者比较了不同产地的广山楂中的芦丁与金丝桃苷含量,但对于广山楂炒炭前后四种活性成分的变化,发明人却未见有文献报道。
因此,若能建立广山楂炭的质量测定方法,同时测定广山楂炭中5-HMF、儿茶素、柚皮苷、根皮苷4种活性成分的含量,就能更全面、准确的评价广山楂炭的品质,从而确保其临床疗效。
【发明内容】
为了解决上述技术问题,本发明提供了一种广山楂炭及其炮制方法与质量检测方法,所述炮制方法工艺简单可控,保证了广山楂炭中5-HMF含量在4.45mg/g以上,儿茶素含量在7.23mg/g以上;所述广山楂炭止血效果显著;所述质量检测方法利用高效液相色谱(HPLC),同时测定广山楂炭中5-HMF、儿茶素、柚皮苷、根皮苷4种活性成分的含量,检测方法简单、准确、重现性好,可为全面评价和控制广山楂药材质量提供依据。
为了实现上述目的,本发明采用的技术方案如下:
一种广山楂炭的炮制方法,包括如下操作步骤:
取广山楂净药材,置于蒸笼内清蒸20分钟,取出,然后放入40℃的烘箱中烘干至含水量≤10%,再置于预热的电炒锅内,2100w连续加热,炒至13分钟,取出,晾凉,即得广山楂炭。
本发明包括所述的炮制方法制得的广山楂炭。
本发明所述广山楂炭中,5-HMF含量在4.45mg/g以上,儿茶素含量在7.23mg/g以上。
本发明还包括所述广山楂炭的质量检测方法,所述方法在同一色谱条件下,同时对广山楂炭所含的5-HMF、儿茶素、柚皮苷、根皮苷4种化学成分进行液相色谱含量测定。
进一步地,所述质量检测方法按下述步骤进行:
(1)色谱条件:色谱柱为C18柱,流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱程序为:0~20min,6%~15%乙腈;20.1~60min,15%~45%乙腈;流速为0.8ml/min;紫外检测波长为285nm;柱温为30℃;进样量为10μl;
(2)对照品溶液的制备:取5-HMF、儿茶素、柚皮苷、根皮苷对照品适量,精密称定,置于同一量瓶中,加甲醇溶解,得对照品溶液;
(3)供试品溶液的制备:取广山楂炭粉末,加甲醇,回流提取,过滤,取滤液,得供试品溶液;
(4)测定法:按照步骤(1)所述色谱条件测定,即得。
进一步地,所述步骤(1)色谱条件为:仪器为安捷伦LC-1260AT高效液相色谱分析仪;色谱柱为SHIMADZU,VP-ODSC18柱,色谱柱规格为250mm×4.6mm,5μm。
进一步地,所述的步骤(2)对照品溶液的制备为:取5-HMF对照品、儿茶素对照品、柚皮苷对照品、根皮苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含5-HMF0.048mg、儿茶素2.42mg、柚皮苷0.80mg、根皮苷0.133mg的混合溶液,即得。
进一步地,所述的步骤(3)供试品溶液的制备为:精密称取广山楂炭粉末1.0g,精密加入甲醇20ml,称重,回流提取2h,放冷,补足重量,过滤,取滤液适量,离心冷藏备用。
综上所述,由于采用了上述技术方案,本发明的有益效果是:
(1)本发明炮制方法工艺简单可控,保证了广山楂炭中5-HMF含量在4.45mg/g以上,儿茶素含量在7.23mg/g以上,获得的广山楂炭与生广山楂相比,广山楂炭中儿茶素含量约为生广山楂的2倍。
(2)本发明的广山楂炭止血效果显著。
(3)本发明的测定方法实现了一次进样,同时测定广山楂炭中5-HMF、儿茶素、柚皮苷、根皮苷4种活性成分的含量,色谱峰峰形好,分离度较高,缩短了检测时间,提高了工作效率。本方法操作简单、准确,精密度、重现性和稳定性良好,可为全面评价和控制广山楂药材质量提供依据。
【附图说明】
图1:5-HMF、儿茶素、柚皮苷、根皮苷对照品混合溶液高效液相色谱图(285nm)。
图2:实施例1制备得到的广山楂炭(170201批)的含量测定色谱图(285nm)。
图3:广山楂生品的含量测定色谱图(285nm)。
色谱峰分别对应:A是5-羟甲基糠醛(5-HMF);B是儿茶素;C是柚皮苷;D是根皮苷。
【具体实施方式】
实施例1:本发明广山楂炭的制备
取广山楂净药材,置于蒸笼内清蒸20分钟,取出,然后放入40℃的烘箱中烘干至含水量≤10%,再置于预热的电炒锅内,2100w连续加热,炒至13分钟,取出,晾凉,即得本发明广山楂炭。收率为75%。
对比例1:对比例1广山楂炭的制备
取广山楂片置锅内用武火(2100w)炒至起烟,立即盖上盖,继续加热至喷出黄白色烟气,取出、放凉,即得对比例1广山楂炭。
对比例2:对比例2广山楂炭的制备
取广山楂净药材,放入40℃的烘箱中烘干至含水量≤10%,再置于预热的电炒锅内,2100w连续加热,炒至13分钟,取出,晾凉,即得对比例2广山楂炭。
以下通过实验研究验证本发明的技术效果:
实验一:广山楂炭的止血实验
1.试药
1.1本发明广山楂炭粉:制法为取实施例1的广山楂炭,粉碎,过100目筛,备用。
1.2对比例1广山楂炭粉:制法为取对比例1广山楂炭,粉碎,过100目筛,备用。
1.3对比例2广山楂炭粉:制法为取对比例2广山楂炭,粉碎,过100目筛,备用。
2.实验动物
健康成年SD大鼠24只,雌雄各半,体重250g左右,由广西中医药大学实验中心提供。
3.实验条件
实验室室温(22±2)℃(空调),湿度(70±5)%。
4.实验方法
健康成年SD大鼠24只,分为四组,分别为本发明广山楂炭粉组、对比例1广山楂炭粉组、对比例2广山楂炭粉组、空白对照组,每组6只,雌雄各半。每只大鼠腹腔注射10%水合氯醛溶液(30mg/100g)进行麻醉,麻醉成功后,将大鼠平放在实验台上,在大鼠尾部距末端2cm处,用剪刀一次性剪断大鼠尾部,立即在大鼠尾巴创口洒上试药,给药后,用夹子夹住大鼠尾根部,1min后,观察止血效果(如未止血,继续用夹子夹住1min,再进行观察),空白对照组不予给药。本实验以止血效果和止血时间为指标进行评价。用滤纸轻轻接触创口,若滤纸上没有留下血迹,说明止血有效;从剪断大鼠尾巴到止血成功所用的时间为止血时间。
5.实验结果
本发明广山楂炭粉组给予广山楂炭粉,夹住尾部1min后能有效止血,而对比例1广山楂炭粉组(给予对比例1广山楂炭粉)、对比例2广山楂炭粉组(给予对比例2广山楂炭粉)和空白对照组夹住尾部1min后有出血迹象,继续夹住1min后仍然不能得到止血,反复测试发现10min内止血失败。
结果表明,本发明的广山楂炭具有较好的止血效果。
实验二:广山楂炭中所含的5-HMF、儿茶素、柚皮苷、根皮苷4种有效成分的高效液相色谱含量测定。
1.仪器与试药
1.1仪器美国安捷伦LC-1260AT高效液相色谱分析仪(G1315D DAD检测器,G1311C四元泵,G1329B自动进样器,G1316A柱温箱,Agilent ChemStation色谱工作站);色谱柱SHIMADZU,VP-ODSC18柱(250mm×4.6mm,5μm),SQP型号电子天平(德国赛多利斯科学仪器有限公司)。
1.2药材广山楂采集于桂林市平乐县,经广西中医药大学梁子宁副教授鉴定,为蔷薇科苹果属植物台湾林檎Malusdoumeri(Bois.)Chev.的干燥成熟果实。
1.3试剂5-HMF、儿茶素、柚皮苷、根皮苷对照品(纯度质量分数>98%,成都艾特姆生物科技有限公司提供)。甲醇、乙腈为色谱纯;实验用纯净水,其他试剂均为分析纯。
2.色谱条件与系统适应性试验
色谱柱:SHIMADZU,VP-ODS C18柱(250mm×4.6mm,5μm);
流动相:乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B);
梯度洗脱程序:(0~20min,6%~15%A;20.1~60min,15%~45%A);
流速:0.8ml/min;
紫外检测波长为285nm;
柱温30℃;
进样量10μl。
在上述条件下,5-HMF、儿茶素、柚皮苷、根皮苷得到了较好的分离,相邻峰间分离度均大于1.5,计算理论塔板数不低于5000。结果如图1所示。
3.试液的制备
3.1对照品溶液的制备
取5-HMF对照品、儿茶素对照品、柚皮苷对照品、根皮苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含5-HMF0.048mg、儿茶素2.42mg、柚皮苷0.80mg、根皮苷0.133mg的混合溶液,即得。
3.2供试品溶液的制备
分别精密称取广山楂炭粉末(65目)1.0g,精密加入甲醇20ml,称重,回流提取2h,放冷,补足重量,过滤,取滤液适量,离心冷藏备用。
4.线性关系考察
分别精密吸取5-羟甲基糠醛(5-HMF)、儿茶素、柚皮苷、根皮苷混合对照品溶液1,3,5,10,15,20μl注入高效液相色谱仪,依法测定,以对照品的进样量(μg)为横坐标,峰面积积分值为纵坐标,绘制标准曲线,结果见表1。结果表明,各成分在各自浓度范围内呈良好线性关系。
表1广山楂炭中4种有效成分线性关系考察
5.精密度试验
精密吸取“3.1”对照品溶液10μl,在“2”项色谱条件下,连续进样6次,计算各峰峰面积RSD,结果5-HMF、儿茶素、柚皮苷、根皮苷分别为2.07%、1.66%、1.34%、和3.05%,表明仪器精密度良好。
6.重复性试验
精密称取同一样品(本发明实施例1的广山楂炭)粉末(65目)1.0g,平行6份,按“3.2”项下的制备方法制备溶液,依法测定,结果5-HMF含量为4.48mg/g,RSD为1.63%;儿茶素含量为7.29mg/g,RSD为0.36%;柚皮苷含量为1.86mg/g,RSD为1.43%;根皮苷含量0.27mg/g,RSD为2.54%,表明本研究建立方法重复性良好。
7.稳定性试验
精密吸取与重复性试验一致的同一样品的供试品溶液10μl,分别在0,1,4,8,12,24h进样,考察四种成分的稳定性,结果5-HMF、儿茶素、柚皮苷、根皮苷峰面积分别RSD为2.05%、1.57%、1.89%和2.63%,表明供试品溶液在24h内稳定。
8.加样回收试验
称取已知含量的本发明的广山楂炭粉末6份,每份约0.5g,精密称定。采用加样回收试验,分别精密加入适量5-HMF、儿茶素、柚皮苷、根皮苷对照品,精密称定。依“3.2”项下方法制备供试品溶液,按“2”项下条件测定,平行6份,计算加样回收率,结果见表2~3。
表2 5-HMF、儿茶素加样回收率试验(n=6)
表3柚皮苷、根皮苷加样回收率试验(n=6)
注:各样品加入对照品的量依次为5-HMF 2.0mg、儿茶素3.60mg、柚皮苷0.90mg、根皮苷0.13mg。
9.样品含量测定
分别取实施例1制备得到的三批(170201批、170202批、170203批)广山楂炭粉(65目)、对比例1广山楂炭粉(65目)、对比例2广山楂炭粉(65目)及广山楂生品(65目)1.0g,平行3份,按“3.2”项下制备各供试品溶液,分别吸取各样品10μl,依法注入液相色谱仪中进行测定,结果见表4,色谱图如图2和图3所示。
表4广山楂炒炭前后5-HMF、儿茶素、柚皮苷、根皮苷的含量测定结果(n=3)
由表4实验结果可以看出,本发明广山楂炭中5-羟甲基糠醛(5-HMF)含量达到了4.45mg/g以上,而生品中却未检测出,儿茶素含量经本发明炒炭后,其含量达到7.23mg/g以上,约为生品的2倍;同时还发现炒炭前先清蒸20分钟,得到的5-羟甲基糠醛(5-HMF)和儿茶素的含量更高,其转化机理有待进一步研究。
上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明,但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围,凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更,均应属于本发明所涵盖专利范围。
Claims (8)
1.一种广山楂炭的炮制方法,其特征在于,包括如下操作步骤:
取广山楂净药材,置于蒸笼内清蒸20分钟,取出,然后放入40℃的烘箱中烘干至含水量≤10%,再置于预热的电炒锅内,2100w连续加热,炒至13分钟,取出,晾凉,即得广山楂炭。
2.权利要求1所述的炮制方法制得的广山楂炭。
3.根据权利要求2所述的广山楂炭,其特征在于:所述广山楂炭中,5-HMF含量在4.45mg/g以上,儿茶素含量在7.23mg/g以上。
4.权利要求2所述广山楂炭的质量检测方法,其特征在于:在同一色谱条件下,同时对广山楂炭所含的5-HMF、儿茶素、柚皮苷、根皮苷4种化学成分进行液相色谱含量测定。
5.根据权利要求4所述广山楂炭的质量检测方法,其特征在于:所述质量检测方法按下述步骤进行:
(1)色谱条件:色谱柱为C18柱,流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液,梯度洗脱程序为:0~20min,6%~15%乙腈;20.1~60min,15%~45%乙腈;流速为0.8ml/min;紫外检测波长为285nm;柱温为30℃;进样量为10μl;
(2)对照品溶液的制备:取5-HMF、儿茶素、柚皮苷、根皮苷对照品适量,精密称定,置于同一量瓶中,加甲醇溶解,得对照品溶液;
(3)供试品溶液的制备:取广山楂炭粉末,加甲醇,回流提取,过滤,取滤液,得供试品溶液;
(4)测定法:按照步骤(1)所述色谱条件测定,即得。
6.根据权利要求5所述广山楂炭的质量检测方法,其特征在于,所述步骤(1)色谱条件为:仪器为安捷伦LC-1260AT高效液相色谱分析仪;色谱柱为SHIMADZU,VP-ODSC18柱,色谱柱规格为250mm×4.6mm,5μm。
7.根据权利要求5所述广山楂炭的质量检测方法,其特征在于,所述的步骤(2)对照品溶液的制备为:取5-HMF对照品、儿茶素对照品、柚皮苷对照品、根皮苷对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含5-HMF0.048mg、儿茶素2.42mg、柚皮苷0.80mg、根皮苷0.133mg的混合溶液,即得。
8.根据权利要求5所述广山楂炭的质量检测方法,其特征在于,所述的步骤(3)供试品溶液的制备为:精密称取广山楂炭粉末1.0g,精密加入甲醇20ml,称重,回流提取2h,放冷,补足重量,过滤,取滤液适量,离心冷藏备用。
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CN110302259A (zh) * | 2019-06-26 | 2019-10-08 | 康美药业股份有限公司 | 一种山楂炭的制备方法 |
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2018
- 2018-01-10 CN CN201810033858.6A patent/CN108245561B/zh active Active
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