CN114034801B - 一种六月还阳药材及制品的含量测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种六月还阳药材及制品的含量测定方法，建立了同时测定苗药六月还阳中没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素‑3‑O‑(2"‑没食子酰基)‑α‑L‑吡喃鼠李糖苷、槲皮素‑3‑O‑(2"‑没子酰基)‑鼠李糖苷7种化学成分的含量测定方法。该方法能同时测定六月还阳中7种化学成分，测定效率高，精密度、重现性、线性关系良好，方法稳定可靠，高效的检测了六月还阳中有效成分的含量，有效的保障了产品的质量。
Description
技术领域
本发明涉及中药材检测技术领域，具体涉及利用HPLC同时测定六月还阳中7种成分含量的方法。
背景技术
苗药六月还阳为景天科植物费菜Sedum aizoon L.的全草，别名景天三七、费菜、救心菜、三百棒、土三七等，为苗族地区常用药材[1]。苗药六月还阳为伤科药中的补漏药，性冷、和，属热、快经，质征甘、苦，走表、里两关，入身、肚架，具有止血、散瘀、安神、解毒之功能，对于跌打损伤或体表伤口等的治疗效果显著，民间常用于各种出血证，所以又被称为苗族“伤科圣药”[2]。目前已有成药景天三七胶囊、景天三七片、景天三七糖浆上市，用于治疗各种出血症。研究表明六月还阳中主要含有黄酮类[3-6]、酚酸类[7]、糖类[8]等成分，具有止血、抗炎、抗癌及安神等多种作用[9-11]。
目前，其含量测定方法主要为大类成分如氨基酸、总黄酮及没食子酸等成分的含量测定方法，不能很好的控制其质量。苗药以“药用生鲜”为特色，苗医认为干药药性平和，而鲜药药性峻猛，对于急症、表症等能发挥独特的疗效，常鲜药榨汁或直接捣敷使用。苗药六月还阳为肉质草本植物，具有肉质多汁的特点，根据调研及文献发现，民间习用鲜药。冷冻干燥在高度真空的环境下，将已冻结了的食品物料的水分不经过冰的融化直接从冰固体升华为蒸汽，对物料的化学成分影响较小，一定程度上保存了药物的鲜药特征。
文献“苗药六月还阳鲜药冻干粉化学成分研究”，吴珊珊，何席呈，张葭，李婷，杜汪洋，谭波，杜江。该技术也是本发明团队研究的，主要公开了采用硅胶、ODS、聚酰胺、制备液相等色谱方法分离纯化，通过波谱数据并结合文献报道鉴定化合物结构。结果：从六月还阳鲜药冻干粉中分离得到13个化合物，提取方法为取六月还阳鲜药冻干粉400g，以10倍量75％甲醇溶液超声提取3次，每次20min，滤过，合并提取液，减压回收溶剂得总浸膏(32g)。将总浸膏用10％乙醇溶液溶解混悬上聚酰胺层析柱，以10％乙醇溶液冲洗10倍柱体积，用95％乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，回收溶剂至干得浸膏(2g)。上述方法从六月还阳鲜药冻干粉中分离得到13个化合物，但并没有明确产品含量检测方法，因此不利于保障产品质量。
本发明团队为了高效检测产品中有效成分的含量，有效的保障产品的质量，在前期苗药六月还阳鲜药中分离出13个成分的基础上[12]，经过了大量的实验研究，建立了同时测定苗药六月还阳中没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷7种化学成分的含量测定方法，该测定方法能同时测定7种化学成分，测定效率高，精密度、重现性、线性关系良好，方法稳定可靠，高效的检测了六月还阳中有效成分的含量，有效的保障了产品的质量。
发明内容
本发明的目的是为了建立一种六月还阳药材及制品的含量测定方法。
所述六月还阳药物的含量测定方法，步骤为：
(1)供试品溶液制备：精密称取六月还阳样品粉末0.5g，置具塞锥形瓶，精密加入25-100％甲醇溶液10-40mL，称定质量，超声提取，放冷，用25-100％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，即得；
(2)混合对照品溶液制备：精密称取适量没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷，用60％甲醇溶解并配制成每1mL含没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷分别为237.3、239.6、39.9、63.4、207.9、419.3、105.1μg的混合对照品溶液，即得；
(3)色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：Atlantis T3 C18柱，规格为4.6mm×150mm，5μm；流动相：以乙腈为流动相A，0.10-0.20％磷酸为流动相B，甲醇为流动相C；梯度洗脱程序为：0min，5％A、90％B、5％ C；8min，14％A、81％B、5％C；12min，14％A、81％B、5％C；27min，20％A、75％B、5％C；37min，30％A、60％B、5％C，38min，5％A、90％B、5％C；42min，5％A、90％B、5％C；柱温30℃，流速1mL·min-1，检测波长254nm；
(4)测定法：精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
优选的，所述供试品溶液制备为：精密称取六月还阳样品粉末0.5g，置具塞锥形瓶，精密加入50-75％甲醇溶液15-30mL，称定质量，超声提取，放冷，用50-75％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，即得。
进一步优选的，所述供试品溶液制备为：精密称取六月还阳样品粉末0.5g，置具塞锥形瓶，精密加入55-70％甲醇溶液20-25mL，称定质量，超声提取，放冷，用55-70％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，即得。
再进一步优选的，所述供试品溶液制备为：精密称取六月还阳样品粉末0.5g，置具塞锥形瓶，精密加入60％甲醇溶液20mL，称定质量，超声提取，放冷，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，即得。
所述供试品溶液制备中的超声，功率为250-350W，频率为30-50kHz。
优选的，所述供试品溶液制备中的超声，功率为300W，频率为40kHz。
所述供试品溶液制备中的超声提取，提取时间为5-30min。
优选的，所述供试品溶液制备中的超声提取，提取时间为10-25min。
进一步优选的，所述供试品溶液制备中的超声提取，提取时间为20min。
有益效果：
1、本发明的测定方法能同时检测苗药六月还阳中食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷七种成分的含量，高效的检测了六月还阳中有效成分的含量，有效的保障了产品的质量。
2、本发明在线性关系考察中，以对照品溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，结果r值均大于0.9995，表明各化合物在相应线性范围内线性关系良好。
3、本发明在精密度试验考察中，结果显示没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷峰面积的RSD(n＝6)分别为0.16％、0.20％、0.27％、0.43％、0.30％、0.19％、0.21％，表明仪器精密度良好。
4、本发明在重复性试验考察中，结果显示没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷峰面积的RSD(n＝6)分别为0.48％、0.25％、0.64％、0.25％、0.40％、0.38％、0.30％，表明重复性良好。
5、本发明在稳定性试验考察中，结果显示没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷峰面积的RSD分别为0.65％、0.54％、0.63％、0.79％、1.31％、0.86％、0.41％，表明供试品溶液在48h内稳定。
6、本发明在加样回收率试验考察中，结果显示7个成分的加样回收率均在95％～105％。
7、该测定方法简单易行，精密度高，重现性好，线性关系良好，加样回收率高，为六月还阳质量控制和综合利用提供参考。
附图说明
图1混合对照品(A)和六月还阳样品(B)HPLC色谱图(注：1.没食子酸；2.杨梅苷；3.异槲皮苷；4.番石榴苷；5.槲皮苷；6.杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷；7.槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷)
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
实施例1
(1)供试品溶液制备：精密称取六月还阳样品粉末0.5g，置具塞锥形瓶，精密加入60％甲醇溶液20mL，称定质量，以功率为300W，频率为40kHz超声提取20min，放冷，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，即得；
(2)混合对照品溶液制备：精密称取适量没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷，用60％甲醇溶解并配制成每1mL含没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷分别为237.3、239.6、39.9、63.4、207.9、419.3、105.1μg的混合对照品溶液，即得；
(3)色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：Atlantis T3 C18柱，规格为4.6mm×150mm，5μm；流动相：以乙腈为流动相A，0.15％
磷酸为流动相B，甲醇为流动相C；梯度洗脱程序为：0min，5％A、90％B、5％C；8min，14％A、81％B、5％C；12min，14％A、81％B、5％C；27min，20％A、75％B、5％C；37min，30％A、60％B、5％C，38min，5％A、90％B、5％C；42min，5％A、90％B、5％C；柱温30℃，流速1mL·min-1，检测波长254nm；
(4)测定法：精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
实施例2
(1)供试品溶液制备：精密称取六月还阳样品粉末0.5g，置具塞锥形瓶，精密加入25％甲醇溶液10mL，称定质量，以功率为250W，频率为30kHz超声提取5min，放冷，用25％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，即得；
(2)混合对照品溶液制备：同实施例1；
(3)色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：Atlantis T3 C18柱，规格为4.6mm×150mm，5μm；流动相：以乙腈为流动相A，0.10％磷酸为流动相B，甲醇为流动相C；梯度洗脱程序为：0min，5％A、90％B、5％ C；8min，14％A、81％B、5％C；12min，14％A、81％B、5％C；27min，20％A、75％B、5％C；37min，30％A、60％B、5％C，38min，5％A、90％B、5％C；42min，5％A、90％B、5％C；柱温30℃，流速1mL·min-1，检测波长254nm；
(4)测定法：同实施例1。
实施例3
(1)供试品溶液制备：精密称取六月还阳样品粉末0.5g，置具塞锥形瓶，精密加入100％甲醇溶液40mL，称定质量，以功率为350W，频率为50kHz超声提取30min，放冷，用100％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，即得；
(2)混合对照品溶液制备：同实施例1；
(3)色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：Atlantis T3 C18柱，规格为4.6mm×150mm，5μm；流动相：以乙腈为流动相A，0.20％磷酸为流动相B，甲醇为流动相C；梯度洗脱程序为：0min，5％A、90％B、5％ C；8min，14％A、81％B、5％C；12min，14％A、81％B、5％C；27min，20％A、75％B、5％C；37min，30％A、60％B、5％C，38min，5％A、90％B、5％C；42min，5％A、90％B、5％C；柱温30℃，流速1mL·min-1，检测波长254nm；
(4)测定法：同实施例1。
实施例4
(1)供试品溶液制备：精密称取六月还阳样品粉末0.5g，置具塞锥形瓶，精密加入50％甲醇溶液15mL，称定质量，以功率为280W，频率为35kHz超声提取10min，放冷，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，即得；
(2)混合对照品溶液制备：同实施例1；
(3)色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：Atlantis T3 C18柱，规格为4.6mm×150mm，5μm；流动相：以乙腈为流动相A，0.12％磷酸为流动相B，甲醇为流动相C；梯度洗脱程序为：0min，5％A、90％B、5％ C；8min，14％A、81％B、5％C；12min，14％A、81％B、5％C；27min，20％A、75％B、5％C；37min，30％A、60％B、5％C，38min，5％A、90％B、5％C；42min，5％A、90％B、5％C；柱温30℃，流速1mL·min-1，检测波长254nm；
(4)测定法：同实施例1。
实施例5
(1)供试品溶液制备：精密称取六月还阳样品粉末0.5g，置具塞锥形瓶，精密加入75％甲醇溶液30mL，称定质量，以功率为290W，频率为38kHz超声提取15min，放冷，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，即得；
(2)混合对照品溶液制备：同实施例1；
(3)色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：Atlantis T3 C18柱，规格为4.6mm×150mm，5μm；流动相：以乙腈为流动相A，0.14％磷酸为流动相B，甲醇为流动相C；梯度洗脱程序为：0min，5％A、90％B、5％ C；8min，14％A、81％B、5％C；12min，14％A、81％B、5％C；27min，20％A、75％B、5％C；37min，30％A、60％B、5％C，38min，5％A、90％B、5％C；42min，5％A、90％B、5％C；柱温30℃，流速1mL·min-1，检测波长254nm；
(4)测定法：同实施例1。
实施例6
(1)供试品溶液制备：精密称取六月还阳样品粉末0.5g，置具塞锥形瓶，精密加入55％甲醇溶液250mL，称定质量，以功率为320W，频率为45kHz超声提取25min，放冷，用55％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，即得；
(2)混合对照品溶液制备：同实施例1。；
(3)色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：Atlantis T3 C18柱，规格为4.6mm×150mm，5μm；流动相：以乙腈为流动相A，0.18％磷酸为流动相B，甲醇为流动相C；梯度洗脱程序为：0min，5％A、90％B、5％ C；8min，14％A、81％B、5％C；12min，14％A、81％B、5％C；27min，20％A、75％B、5％C；37min，30％A、60％B、5％C，38min，5％A、90％B、5％C；42min，5％A、90％B、5％C；柱温30℃，流速1mL·min-1，检测波长254nm；
(4)测定法：同实施例1。
为了进一步验证本发明的有效性，发明进行了一系列的验证试验，具体如下：
1 实验材料
1.1 仪器
Agilent 1100Series高效液相色谱仪(美国安捷伦科技有限公司)；JA5003千分之一电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；ME204万分之一电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；SK8200HP超声器(40kHz)(上海易净超声波仪器有限公司)。
1.2试药
没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷皆为本实验室自制，以1H-NMR、13C-NMR、MS等手段确证了其结构，HPLC(峰面积归一化法)纯度为98％。乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
2测定方法的筛选实验
2.1样品提取方法的筛选
2.1.1料液比考察
取六月还阳样品粉末约0.5g，4份，精密称定，置具塞锥形瓶，精密加入60％甲醇溶液10、20、30、40mL，称定质量，超声(300W，40kHz)提取20min，放冷，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜过去，即得，3次重复。结果加入20ml各成分能提取完全。
2.1.2溶剂选择
取六月还阳样品粉末约0.5g，5份，精密称定，置具塞锥形瓶，精密加入0、25％、50％、75％、100％甲醇溶液20mL，称定质量，超声(300W，40kHz)提取20min，放冷，用0、25％、50％、75％、100％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜过去，即得，3次重复。结果各成分在50％-75％之间提取较完全，选择60％甲醇为溶剂进行提取。
2.1.3提取时间考察
取六月还阳样品粉末约0.5g，5份，精密称定，置具塞锥形瓶，精密加入60％甲醇溶液20mL，称定质量，超声(300W，40kHz)提取5、10、15、20、30min，放冷，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜过去，即得，3次重复。结果20min能提取完全。
根据以上实验结果，最终确定供试品制备方法为：精密称取六月还阳样品粉末0.5g，置具塞锥形瓶，精密加入60％甲醇溶液20mL，称定质量，超声提取，放冷，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，即得。
2.2色谱条件的筛选
2.2.1检测波长的选择
通过对7个成分3D图进行分析，综合各成分最大吸收波长，基于基线、峰形、分离度，选取254nm作为7种成分的检测波长。
2.2.2流动相的选择
考察了乙腈-水，乙腈-0.1％磷酸水溶液、甲醇-0.1％磷酸水溶液、乙腈-0.15％磷酸水溶液等作为流动相对7种化学成分的分离效果及基线等的影响，最终确定了乙腈(A)-0.15％磷酸溶液(B)-甲醇(C)作为流动相，各色谱峰分离效果最佳、峰型较好且基线平稳。
2.3方法与结果
供试品溶液的制备：取六月还阳样品粉末约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶，精密加入60％甲醇溶液20mL，称定质量，超声(300W，40kHz)提取20min，放冷，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜过去，即得。
混合对照品溶液的配制：取各对照品适量，精密称定，用60％甲醇溶解并配制成每1mL含没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷分别为237.3、239.6、39.9、63.4、207.9、419.3、105.1μg的混合对照品溶液，即得。
色谱条件：色谱柱：Atlantis T3 C18柱(4.6mm×150mm，5μm)。流动相为乙腈(A)-0.15％磷酸(B)-甲醇(C)，梯度洗脱程序0min，5％A、90％B、5％C；8min，14％A、81％B、5％C；12min，14％A、81％B、5％C；27min，20％A、75％B、5％C；37min，30％A、60％B、5％C，38min，5％A、90％B、5％C；42min，5％A、90％B、5％C。柱温30℃，流速1mL·min-1，检测波长254nm。
测定法：精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
结果：上述色谱条件下，各组分分离度良好，混合对照品及六月还阳样品HPLC色谱图见图1。
3方法学考察
3.1线性关系考察
取对照品适量，用60％甲醇配置成每1ml含没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷分别为1898.40、1916.86、319.2、507.36、1663.2、3354.14、840.8μg的混合对照品溶液，分别取0.25、0.5、1、2、2.5、5mL，置于10mL量瓶中，加60％甲醇定容，摇匀，即得系列质量浓度混合对照品溶液。按“2.3”项下色谱条件进样测定，以对照品溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，结果见表1。r均大于0.9995，表明各化合物在相应线性范围内线性关系良好。
表1 7种成分线性关系考察结果表
上述结果表明在一定质量浓度范围内，各成分均有良好的线性关系。
3.2精密度考察
精密吸取“2.3”项下的混合对照品溶液10μL，连续进样测定6次。计算没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷峰面积的RSD(n＝6)分别为0.16％、0.20％、0.27％、0.43％、0.30％、0.19％、0.21％，表明仪器精密度良好。
3.3重复性实验
称取六月还阳粉末约0.5g共6份，分别按照按“2.3”项下供试品溶液制备方法制备，依照“2.3”项下的色谱条件进样10μL，记录峰面积，计算各成分含量及RSD。结果没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷峰面积的RSD分别为0.48％、0.25％、0.64％、0.25％、0.40％、0.38％、0.30％，表明重复性良好。
3.4稳定性试验
精密吸取按“2.3”项下制备的同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12、24、48h按“2.3”项下中的色谱条件进样10μL，记录峰面积。结果没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷峰面积的RSD分别为0.65％、0.54％、0.63％、0.79％、1.31％、0.86％、0.41％，均符合要求，表明供试品溶液在48h内稳定性良好。
3.5加样回收率试验
取已知含量的六月还阳粉末6份，每份约0.25g，精密称定，精密加入“2.3”项下混合对照品贮备液1ml，蒸干溶剂，照实施例1中的方法制备供试液，依照实施例1中的色谱条件，分别进样10μL，记录峰面积，计算回收率，结果见表2。
表2加样回收率试验(n＝6)结果
上述结果表明，没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷的平均回收率分别为104.21％、101.30％、101.86％、101.60％、101.29％、98.21％、97.61％；RSD分别为：0.78％、0.92％、0.74％、0.65％、0.99％、0.50％、0.68％，说明该方法准确度良好。
综上，本发明建立了HPLC同时测定六月还阳中7种主要成分没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基)-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-(2"-没食子酰基)-鼠李糖苷的含量测定方法，方法学考察结果表明该方法的精密度、稳定性、重现性、加样回收率均符合要求。而且操作简单、对仪器设备要求不高，重复性好，能够同时进行7种成分的含量测定，为苗药六月还阳质量标准提供参考，有效的控制了产品的质量。
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虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作出一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
Claims (3)
1.一种六月还阳药材及制品的含量测定方法，其特征在于，所述方法是利用HPLC同时测定六月还阳中7种成分含量，具体步骤如下：
(1)供试品溶液制备：精密称取六月还阳样品粉末0.5g，置具塞锥形瓶，精密加入60%甲醇溶液20mL，称定质量，超声提取20分钟，放冷，用60%甲醇补足减失的重量，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，即得；
(2)混合对照品溶液制备：精密称取适量没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基）-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-（2"-没食子酰基）-鼠李糖苷，用60%甲醇溶解并配制成每1mL含没食子酸、杨梅苷、异槲皮苷、番石榴苷、槲皮苷、杨梅素-3-O-(2"-没食子酰基）-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素-3-O-（2"-没食子酰基）-鼠李糖苷分别为237.3、239.6、39.9、63.4、207.9、419.3、105.1μg的混合对照品溶液，即得；
(3)色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：Atlantis T3 C18柱，规格为4.6 mm ×150mm，5 μm；流动相：以乙腈为流动相A，0.15％磷酸为流动相B，甲醇为流动相C；梯度洗脱程序为：0 min，5%A、90%B、5% C；8 min，14%A、81%B、5%C；12 min，14%A、81%B、5%C；27 min，20%A、75%B、5%C；37 min，30%A、60%B、5%C，38 min，5%A、90%B、5%C；42 min，5%A、90%B、5%C；柱温30℃，流速1mL·min-1，检测波长254nm；
(4)测定法：精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)供试品溶液制备中所述的超声，功率为250-350W，频率为30-50kHz。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(1)供试品溶液制备中所述的超声，功率为300W，频率为40kHz。
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