CN108191947A - 一种藏丹参丹参酮类有效成分及提取方法和应用 - Google Patents
一种藏丹参丹参酮类有效成分及提取方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种藏丹参丹参酮类有效成分及提取方法和应用,提取方法包括以下步骤:将藏丹参干燥、粉碎,然后加水浸泡,向浸泡后的藏丹参中加入6‑8倍量60‑90%乙醇,超声提取60‑90min,提取1‑2次;对超声提取液进行浓缩,然后用乙酸乙酯进行萃取,收集萃取液,减压浓缩,得脂溶性浸膏,然后再将浸膏溶解成相应浓度,通过中压制备色谱法分离纯化,制得。本发明方法操作简单,可有效分离纯化目标成分,大大提高了其纯度和提取效率,可充分发挥其药用价值。
Description
技术领域
本发明属于藏丹参活性成分的提取技术领域,具体涉及一种藏丹参丹参酮类有效成分及提取方法和应用。
背景技术
藏丹参学名为绒毛鼠尾草(Salvia castaneaDiels f.tomentosaStib),是唇形科鼠尾草属植物粟色鼠尾草(Salvia castaneaDiefs)的一个变种,产于西藏林芝地区。2005年12月,绒毛鼠尾草被西藏自治区食品药品监督管理局收录到地方药材标准,并命名为“藏丹参”。研究表明,藏丹参含有脂溶性和水溶性成分,脂溶性成分含有隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA等丹参酮类二萜脂溶性化学成分,并具有抗心肌缺血、改善心肌梗死、抗血栓形成、预防和延缓老年痴呆、减轻高血氨症及肝性脑病等药理活性。但按现有的从藏丹参中提取丹参酮类二萜脂溶性化学成分,其提取出的有效成分纯度低,操作较繁琐,提取时间长。
发明内容
针对现有技术中的上述不足,本发明提供了一种藏丹参丹参酮类有效成分及提取方法和应用,可有效解决现有的提取方法提取的有效成分纯度低,操作繁琐,提取时间长等问题。
为实现上述目的,本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:
一种藏丹参丹参酮类有效成分的提取方法,包括以下步骤:
(1)超声提取:将藏丹参干燥、粉碎,加2-4倍藏丹参重量的去离子水浸泡1.5-2.5h,然后向浸泡后的藏丹参中加入6-8倍浸泡后藏丹参重量且体积分数为60-90%乙醇,超声提取60-90min,提取1-2次;
(2)制备脂溶性浸膏:将步骤(1)所得滤液减压浓缩为1:1-2的浓缩液,加入乙酸乙酯萃取3-5次,收集萃取液,减压浓缩,得脂溶性浸膏,最后干燥,得干浸膏;其中,乙酸乙酯与浓缩液的体积比为1-2:1-2;
(3)中压柱分离纯化:将干浸膏溶于甲醇,经0.22μm滤膜过滤,然后过反向中压柱,用甲醇水溶液进行梯度洗脱,收集并合并洗脱液,然后对其重结晶,制得。
进一步地,丹参酮类有效成分主要为隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA。
进一步地,步骤(1)中将藏丹参干燥、粉碎,加3倍藏丹参重量的去离子水浸泡2h,然后向浸泡后的藏丹参中加入6倍浸泡后藏丹参重量且体积分数为90%的乙醇,超声提取60min,提取2次。
进一步地,步骤(1)中超声提取时超声频率为35kHz,温度为40℃,功率为250W。
进一步地,步骤(2)中将步骤(1)所得滤液减压浓缩为1:1的浓缩液,向浓缩液中加入等体积的乙酸乙酯萃取3次,收集萃取液,减压浓缩,得脂溶性浸膏。
进一步地,步骤(3)中梯度洗脱参数为:0-15min,70%甲醇水溶液;15-25min,70-80%甲醇水溶液;25-35min,80-90%甲醇水溶液;35-45min,90-70%甲醇水溶液;流速为20mL/min。
本发明提供的藏丹参丹参酮类有效成分及提取方法和应用,具有以下
有益效果:
(1)本发明先经正交实验筛选出最佳提取条件,得到提取液,然后再经过乙酸乙酯萃取,浓缩,干燥得到脂溶性浸膏,最后经过中压制备色谱法分离纯化以及重结晶,可高效、快捷、大量的从藏丹参中制备分离纯化高纯度的隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA,本发明方法操作简单,可有效分离纯化目标成分,大大提高了其纯度和提取效率,所得隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA纯度分别为98.5%、98.2%、98.4%。
(2)隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA对光、热敏感,因此在提取时,采用避光条件,且提取温度不高于40℃,提取溶剂选择乙醇,其价格便宜,无毒,更适合工业化大生产。
(3)现有的浸膏纯化方法主要有碳酸钠溶液洗涤、大孔树脂吸附等,这些纯化方法存在很多缺陷,如碳酸钠溶液不易进入浸膏内,使得洗涤的溶剂消耗量增大,洗涤次数增加;大孔树脂吸附易引入树脂残留物等。本发明通过中压制备色谱法分离纯化藏丹参中的脂溶性成分,可大大缩短分离时间,还可以分离更大量的化合物,明显提高了分离制备的效率。
(4)本发明在超声提取前,先测定药材吸水率,确定合适的溶媒量,这样操作可以节约能源,避免由于药材吸水对提取条件的优化造成影响,此外,还可以提高有效成分的收率。
具体实施方式
实施例1
一种藏丹参丹参酮类有效成分的提取方法,包括以下步骤:
(1)超声提取:将藏丹参干燥、粉碎,过50目筛,向粉末中加3倍藏丹参重量的去离子水浸泡2h,然后向浸泡后藏丹参中加入6倍浸泡后藏丹参重量且体积分数为90%的乙醇,超声提取60min,过滤,得第一滤液和第一滤渣,向第一滤渣中加入6倍第一滤渣重量且体积分数为90%的乙醇超声提取60min,过滤,得第二滤液和第二滤渣,合并第一滤液和第二滤液,其中,超声条件为避光,超声频率为35kHz,温度为40℃,功率为250W;
(2)制备脂溶性浸膏:将合并的滤液减压浓缩为1:1的浓缩液,向浓缩液中加入等体积的乙酸乙酯,避光萃取3次,收集萃取液,减压浓缩,得脂溶性浸膏,最后干燥,得干浸膏;
(3)中压柱分离纯化:将干浸膏溶于甲醇,制成浓度为0.2g/mL的溶液,然后经0.22μm滤膜过滤,然后过反向中压柱(Daisogel 60-ODS-BC18,480mm×45mm,5μm),用甲醇水溶液进行梯度洗脱,收集并合并洗脱液,然后对其重结晶,制得;其中梯度洗脱参数为:0-15min,70%甲醇水溶液;15-25min,70-80%甲醇水溶液;25-35min,80-90%甲醇水溶液;35-45min,90-70%甲醇水溶液;流速为20mL/min,上样量为5mL,检测波长为270nm。
实施例2
一种藏丹参丹参酮类有效成分的提取方法,包括以下步骤:
(1)超声提取:将藏丹参干燥、粉碎,过50目筛,向粉末中加3倍藏丹参重量的去离子水浸泡2h,然后向浸泡后藏丹参中加入8倍浸泡后藏丹参重量且体积分数为90%的乙醇,超声提取90min,过滤,得滤液,其中,超声条件为避光,超声频率为35kHz,温度为40℃,功率为250W;
(2)制备脂溶性浸膏:将步骤(1)所得滤液减压浓缩为1:1的浓缩液,向浓缩液中加入等体积的乙酸乙酯,避光萃取3次,收集萃取液,减压浓缩,得脂溶性浸膏,最后干燥,得干浸膏;
(3)中压柱分离纯化:将干浸膏溶于甲醇,制成浓度为0.2g/mL的溶液,然后经0.22μm滤膜过滤,然后过反向中压柱,用甲醇水溶液进行梯度洗脱,收集并合并洗脱液,然后对其重结晶,制得;其中梯度洗脱参数为:0-15min,70%甲醇水溶液;15-25min,70-80%甲醇水溶液;25-35min,80-90%甲醇水溶液;35-45min,90-70%甲醇水溶液;流速为20mL/min,上样量为5mL。
实施例3
一种藏丹参丹参酮类有效成分的提取方法,包括以下步骤:
(1)超声提取:将藏丹参干燥、粉碎,过50目筛,向粉末中加3倍藏丹参重量的去离子水浸泡2h,然后向浸泡后藏丹参中加入7倍浸泡后藏丹参重量且体积分数为60%的乙醇,超声提取80min,过滤,得第一滤液和第一滤渣,向第一滤渣中加入7倍第一滤渣重量且体积分数为60%的乙醇超声提取80min,过滤,得第二滤液和第二滤渣,合并第一滤液和第二滤液,其中,超声条件为避光,超声频率为35kHz,温度为40℃,功率为250W;
(2)制备脂溶性浸膏:将合并的滤液减压浓缩为1:1的浓缩液,向浓缩液中加入等体积的乙酸乙酯,避光萃取3次,收集萃取液,减压浓缩,得脂溶性浸膏,最后干燥,得干浸膏;
(3)中压柱分离纯化:将干浸膏溶于甲醇,制成浓度为0.2g/mL的溶液,然后经0.22μm滤膜过滤,然后过反向中压柱,用甲醇水溶液进行梯度洗脱,收集并合并洗脱液,然后对其重结晶,制得;其中梯度洗脱参数为:0-15min,70%甲醇水溶液;15-25min,70-80%甲醇水溶液;25-35min,80-90%甲醇水溶液;35-45min,90-70%甲醇水溶液;流速为20mL/min,上样量为5mL。
对比例1
一种藏丹参丹参酮类有效成分的提取方法,包括以下步骤:
(1)超声提取:将藏丹参干燥、粉碎,过50目筛,向粉末中加3倍藏丹参重量的去离子水浸泡2h,然后向浸泡后藏丹参中加入10倍浸泡后藏丹参重量且体积分数为90%的乙醇,超声提取30min,提取3次,合并滤液,其中,超声条件为避光,超声频率为35kHz,温度为40℃,功率为250W;
(2)制备脂溶性浸膏:将合并的滤液减压浓缩为1:1的浓缩液,向浓缩液中加入等体积的乙酸乙酯,避光萃取3次,收集萃取液,减压浓缩,得脂溶性浸膏,最后干燥,得干浸膏;
(3)中压柱分离纯化:将干浸膏溶于甲醇,制成浓度为0.2g/mL的溶液,然后经0.22μm滤膜过滤,然后过反向中压柱,用甲醇水溶液进行梯度洗脱,收集并合并洗脱液,然后对其重结晶,制得;其中梯度洗脱参数为:0-15min,70%甲醇水溶液;15-25min,70-80%甲醇水溶液;25-35min,80-90%甲醇水溶液;35-45min,90-70%甲醇水溶液;流速为20mL/min,上样量为5mL。
对比例2
本对比例与实施例1不同的是,在超声提取过程中向浸泡后藏丹参中加入10倍浸泡后藏丹参重量且体积分数为60%的乙醇,超声提取60min,提取1次。
对比例3
本对比例与实施例1不同的是,在超声提取过程中向浸泡后藏丹参中加入6倍浸泡后藏丹参重量且体积分数为60%的乙醇,超声提取90min,提取3次。
对比例4
本对比例与实施例1不同的是,在超声提取过程中向浸泡后藏丹参中加入8倍浸泡后藏丹参重量且体积分数为60%的乙醇,超声提取30min,提取2次。
对比例5
本对比例与实施例1不同的是,在超声提取过程中向浸泡后藏丹参中加入8倍浸泡后藏丹参重量且体积分数为30%的乙醇,超声提取60min,提取3次。
对比例6
本对比例与实施例1不同的是,在超声提取过程中向浸泡后藏丹参中加入10倍浸泡后藏丹参重量且体积分数为30%的乙醇,超声提取90min,提取2次。
对比例7
本对比例与实施例1不同的是,在超声提取过程中向浸泡后藏丹参中加入6倍浸泡后藏丹参重量且体积分数为30%的乙醇,超声提取30min,提取1次。
测定实施例1-3以及对比例1-7步骤(1)超声提取后的物质中隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA的含量,测定结果见表1。
表1各实施例超声提取后有效成分含量
由表1可知,超声提取时,提取时间、提取次数、乙醇浓度和料液比都会影响隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA的收率,实施例1-3要明显优于其他实施例,尤其是实施例1效果最佳,因此最佳的提取工艺为:用6倍量90%乙醇超声提取2次,每次60min,可显著提高隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA的收率。
将实施例1中用中压柱纯化后五段洗脱液合并,经HPLC检测分析,第二、三、五段分别为隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA,含量均在85%以上,经重结晶可得晶体,取适量晶体,经HPLC检测,测得隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA的纯度分别为98.5%、98.2%、98.4%。
综上所述,本发明经过正交试验法得出超声提取的最佳条件为用6倍量90%乙醇超声提取2次,每次60min,然后再用乙酸乙酯萃取,得到脂溶性浸膏,最后通过中压制备色谱法对脂溶性浸膏进行分离纯化,得到丹参酮类有效成分,尤其是高纯度的隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA。因隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA对光、热表现出不稳定特性,因此,全部操作均应采取避光措施,且控制提取温度不超过40℃。
通过本发明方法制得的藏丹参丹参酮类有效成分,其纯度高、药效好,可以用于制备心系疾病药物,有效发挥其药用价值。
Claims (8)
1.一种藏丹参丹参酮类有效成分的提取方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)超声提取:将藏丹参干燥、粉碎,加2-4倍藏丹参重量的去离子水浸泡1.5-2.5h,然后向浸泡后的藏丹参中加入6-8倍浸泡后藏丹参重量且体积分数为60-90%的乙醇,超声提取60-90min,提取1-2次;
(2)制备脂溶性浸膏:将步骤(1)所得滤液减压浓缩为1:1-2的浓缩液,加入乙酸乙酯萃取3-5次,收集萃取液,减压浓缩,得脂溶性浸膏,最后干燥,得干浸膏;其中,乙酸乙酯与浓缩液的体积比为1-2:1-2;
(3)中压柱分离纯化:将干浸膏溶于甲醇,经0.22μm滤膜过滤,然后过反向中压柱,用甲醇水溶液进行梯度洗脱,收集并合并洗脱液,然后对其重结晶,制得。
2.根据权利要求1所述的藏丹参丹参酮类有效成分的提取方法,其特征在于,丹参酮类有效成分主要为隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA。
3.根据权利要求1或2所述的藏丹参丹参酮类有效成分的提取方法,其特征在于,步骤(1)中将藏丹参干燥、粉碎,加3倍藏丹参重量的去离子水浸泡2h,然后向浸泡后的藏丹参中加入6倍浸泡后藏丹参重量且体积分数为90%的乙醇,超声提取60min,提取2次。
4.根据权利要求1-3任一项所述的藏丹参丹参酮类有效成分的提取方法,其特征在于,步骤(1)中超声提取时超声频率为35kHz,温度为40℃,功率为250W。
5.根据权利要求1或2所述的藏丹参丹参酮类有效成分的提取方法,其特征在于,步骤(2)中将步骤(1)所得滤液减压浓缩为1:1的浓缩液,向浓缩液中加入等体积的乙酸乙酯萃取3次,收集萃取液,减压浓缩,得脂溶性浸膏。
6.根据权利要求1或2所述的藏丹参丹参酮类有效成分的提取方法,其特征在于,步骤(3)中梯度洗脱参数为:0-15min,70%甲醇水溶液;15-25min,70-80%甲醇水溶液;25-35min,80-90%甲醇水溶液;35-45min,90-70%甲醇水溶液;流速为20mL/min。
7.采用权利要求1-6任一项所述的方法制备得到的藏丹参丹参酮类有效成分。
8.权利要求7所述的藏丹参丹参酮类有效成分在心系疾病药物制备中的应用。
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