CN108159297B - 一种疏风解毒胶囊及其制备方法与制药用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及中药领域，具体涉及一种疏风解毒胶囊及其制备方法与制药用途。该疏风解毒胶囊是由以下重量份的药味原料制成：虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份。本发明提供了采用反相高效液相色谱法同时测定疏风解毒胶囊活性成分含量的方法，本发明还提供了疏风解毒胶囊的制药新用途。

Description

一种疏风解毒胶囊及其制备方法与制药用途
技术领域
本发明涉及中药领域，具体涉及一种疏风解毒胶囊及其制备方法与制药用途。
背景技术
疏风解毒胶囊，是本专利申请人安徽济人药业有限公司的独家产品，批准文号为：国药准字Z2009004，规格：每粒装0.52g。该品种是根据我国著名老中医向楚贤的祖传密方，原名“祛毒散”，研制的中药新药，由虎杖、连翘、败酱草、柴胡、马鞭草、板蓝根、芦根、甘草等药味组成。具有疏风清热，解毒利咽之功，用于治疗急性上呼吸道感染属风热证，症见发热，恶风，咽痛，头痛，鼻塞，流浊涕，咳嗽等，临床应用多年，疗效确切。本品被列为卫生部《甲型H1N1流感诊疗方案》(2009年第二版、第三版、2010年版)治疗风热犯卫首选中成药、《流行性感冒诊断与治疗指南(2011年版)》、国家中医药管理局《外感发热(上呼吸道感染)诊疗方案》和《时行感冒(甲型H1N1流感)诊疗方案》推荐用药，并纳入2009年版国家医保目录。本品为本专利申请人安徽济人药业的拳头产品，是年产值、年销售额均过亿的中药大品种。2011年获得国家现代中药高技术产业发展专项支持，先后荣获“国家重点新产品”、“安徽省自主创新产品”、“呼吸系统疾病类中药十强”等一系列荣誉称号。
此外，疏风解毒胶囊在治疗呼吸系统疾病、耳鼻咽喉部疾病、小儿疾病、皮肤科疾病等疾病上还具有显著效果。
经过实验研究证明，疏风解毒胶囊可以将葡萄球菌、溶血性链接球菌、呼吸道合胞病毒进行有效抑制，并且，通过抑制炎性反应，将肺损伤程度减轻。查阅资料中显示，疏风解毒胶囊肠吸收液的表达，可以通过LL-17、LL-α、LL-1β、LL-2、LL-4进行，进而将单核细胞分化进行有效抑制。这样，能够将粒细胞、巨噬细胞集落有效减少，减少NO合成，已经抑制炎性介质分泌、释放，例如TNF-α、IL-1β、LL-6，最终将多靶点抗炎效果的发挥能够更加有效。
疏风解毒胶囊在治疗急性上呼吸道感染疾病中通过临床证明具有显著效果，不仅能够将患者的体温快速降低，将病程有效缩短，并且还能够使患者的血清淀粉蛋白A显著降低，起到显著的止咳作用。
对于甲型、乙型、禽流感等疾病，采用疏风解毒胶囊进行治疗，可以起到治疗和预防的效果。目前，该药物已经成为我国储备的抗甲型、乙型、禽流感等疾病的药物之一。
对于小儿肺炎、小儿急性细菌性支气管炎、社区获得性肺炎、支气管扩张合并肺部感染、糖尿病合并肺部感染等疾病患者采用疏风解毒胶囊联合抗生素进行治疗，不仅能够将病程有效缩短，使不良反应发生率有效减少，同时，还可进行炎症反应控制；对支气管扩张性急性期采用该药物与桔苓汤配合西医常规治疗的效果显著。此外，在治疗慢性阻塞性肺疾病急性加重期进行治疗的效果可以有效提高，使TNF-α降低，从而让肺功能得以回复。
对于轻鼻窦炎、亚急性甲状腺炎、急性咽炎采用疏风解毒胶囊进行使用，能够将临床症状有效改善；而对于急性变态体炎进行治疗，则加入阿莫西林克拉维酸钾，可以将患者的咽喉部疼痛情况进行改善。
有研究表明，采用该药物进行治疗小儿急性上呼吸道感染风热症，能够将患儿的咽喉肿痛、发热症状有效缓解；而在治疗下呼吸道感染联合阿莫西林进行治疗具有显著效果；此外，由于疏风解毒胶囊可以将肠道病毒EV71、柯萨奇病毒有效抑制，广泛应用于治疗小儿口足手病。
在治疗皮肤科疾病上，疏风解毒胶囊不仅能够清肝凉血、疏风解毒、活血消斑的功效，并且其还具有较多的优点，例如清热而非泻热、解毒而顾阴津等。此外，该药物还可将皮炎、湿疹、荨麻疹、银屑病等疾病的病情有效控制，使病程的进程延缓，减轻患者的痛苦，不良反应减少，让复发率能够有效降低；并且，在治疗复发性生殖器疱疹疾病上，联合卡介菌多糖核酸的效果显著。
经过临床研究，疏风解毒胶囊多数是经过中西医辩证后运用中西药物进行结合的治疗方法，能够互补优势，将减毒效果增强。而对于疏风解毒胶囊的作用机制，目前医学上仍处于探索阶段，缺乏大样本、多中心、随机对照等均是多数临床研究上面临的问题，因此，导致药物疗效、机制无法从病因角度进行精确分析；无法通过中医思维辨病辩证结合开展治疗。根据中药多靶点特点，相关研究中对各种中药之间缺乏相互作用所产生的药理反应和对应之间的临床效应。随着不断深入研究疏风解毒胶囊，将其科学内涵进行揭示，并将其作用机制阐明，这样，能够让高药物的治疗领域更加广泛。从以上上述能够明确感觉到疏风解毒胶囊具有极强的效果作用，能够广泛运用在临床治疗上。
作为中药大品种，本专利申请人安徽济人药业有限公司对疏风解毒胶囊进行了系统性的研究，在研究中意外发现，疏风解毒胶囊对非细菌性前列腺炎具有意料不到的突出的治疗效果，在深入研究中发现，山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸治疗非细菌性前列腺炎的主要活性成分，但是，目前没有对疏风解毒胶囊中对山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸进行含量测定的方法，申请人和发明人对此进行了反复的研究，遂得到了本发明的技术方案。
本项目得到了国家科学技术部科技型中小企业技术创新基金的重点支持，项目名称：疏风解毒胶囊，项目类型：重点项目，立项代码：10C26213404286，批准文号：国科发计字[2010]543号。
发明内容
基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种疏风解毒胶囊及其制备方法与检测方法及制药用途。
本发明的目的是提供一种疏风解毒胶囊药物及其制备方法。
本发明的另一目的是提供疏风解毒胶囊的药物检测方法。
本发明还提供了疏风解毒胶囊的新的制药用途。
本发明的目的是通过以下方式实现的：
一种疏风解毒胶囊，该疏风解毒胶囊是由以下重量份的药味原料制成：虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份。
一种疏风解毒胶囊的制备方法，该疏风解毒胶囊是由以下重量份的药味原料制成：虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份，该疏风解毒胶囊是采用如下方法制备的：
S1：取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒，加5倍量70％乙醇加热回流提取2h，滤过；药渣再加3倍量70％乙醇加热回流提取1h，滤过，滤液合并，回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S2：取连翘、柴胡加7倍量的水，加热回流提取挥发油4h，分取分层的挥发油，备用；药渣和药液粗滤，滤液离心分离，上清液和药渣分别保存备用；
S3：取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的药渣合并，加水煎煮提取二次，第一次加18倍量水提取2h，第二次加12倍量水提取1h，粗滤，滤液离心分离，两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并，减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S4：取糊精、微粉硅胶，混匀，加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中，充分搅拌均匀，铺层，真空干燥，粉碎，加入糊精，喷入S2步骤得到的挥发油，过筛，混匀，装入胶囊，即得。
一种疏风解毒胶囊的检测方法，该疏风解毒胶囊是由以下重量份的药味原料制成：虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份，该疏风解毒胶囊是采用如下方法制备的：
S1：取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒，加5倍量70％乙醇加热回流提取2h，滤过；药渣再加3倍量70％乙醇加热回流提取1h，滤过，滤液合并，回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S2：取连翘、柴胡加7倍量的水，加热回流提取挥发油4h，分取分层的挥发油，备用；药渣和药液粗滤，滤液离心分离，上清液和药渣分别保存备用；
S3：取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后药渣合并，加水煎煮提取二次，第一次加18倍量水提取2h，第二次加12倍量水提取1h，粗滤，滤液离心分离，两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并，减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S4：取糊精、微粉硅胶，混匀，加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中，充分搅拌均匀，铺层，真空干燥，粉碎，加入糊精，喷入S2步骤得到的挥发油，过筛，混匀，装入胶囊，即得；
采用反相高效液相色谱法测定疏风解毒胶囊中山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸含量，其步骤如下：
(1)色谱条件：采用C18色谱柱；流动相：乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液，梯度洗脱：梯度洗脱：从0min至5min，乙腈的比例从0％线性上升至10％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从100％线性下降至90％；从6min至20min，乙腈的比例从10％线性上升至25％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从90％线性下降至75％；从21min至25min，乙腈的比例从25％线性上升至40％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从75％线性下降至60％；流速：1.0～1.5mL·min-1，检测波长260～265nm，柱温35～40℃，进样量5～20μL；
(2)混合对照品储备液的制备：精密称取干燥的山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷对照品、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸对照品、邻苯二甲酸二辛酯的对照品，混合，加体积比为20～30:80～70的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液溶解并定容，使成为含山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸、邻苯二甲酸二辛酯的混合溶液，过微孔滤膜，即得混合对照品储备液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取疏风解毒胶囊内容物，置具塞锥形瓶中，精密加入体积比为20～30:80～70的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液，密塞，称量，在超声功率250～350W，超声频率45～55kHz下，超声提取35～45min，放冷，称量，用体积比为20～30:80～70的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液补足损失的量，摇匀，滤过，取滤液过微孔滤膜，即得供试品溶液；
(4)测定：精密吸取混合对照品储备液、供试品溶液各5～20μL，注入高效液相色谱仪，进行测定。
所述的疏风解毒胶囊的检测方法，采用反相高效液相色谱法测定疏风解毒胶囊中山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸含量，其优选的步骤如下：
(1)色谱条件：采用C18色谱柱，规格：4.6mm×150mm，5μm；流动相：乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液，梯度洗脱：梯度洗脱：从0min至5min，乙腈的比例从0％线性上升至10％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从100％线性下降至90％；从6min至20min，乙腈的比例从10％线性上升至25％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从90％线性下降至75％；从21min至25min，乙腈的比例从25％线性上升至40％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从75％线性下降至60％；流速：1.2mL·min-1，检测波长262nm，柱温38℃，进样量10μL；
(2)混合对照品储备液的制备：精密称取干燥的山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷对照品、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸对照品、邻苯二甲酸二辛酯的对照品各20.00mg，混合，加体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液溶解并定容至10mL，使成为含山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸、邻苯二甲酸二辛酯分别为2.000mg·mL-1、2.000mg·mL-1、2.000mg·mL-1的混合溶液，过0.22μm微孔滤膜，即得混合对照品储备液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取疏风解毒胶囊内容物1.00g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液50mL，密塞，称量，在超声功率300W，超声频率50kHz下，超声提取40min，放冷，称量，用体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液补足损失的量，摇匀，滤过，取滤液过0.22μm微孔滤膜，即得供试品溶液；
(4)测定：精密吸取混合对照品储备液、供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行测定。
一种疏风解毒胶囊在制备治疗非细菌性前列腺炎药物中的应用，该疏风解毒胶囊是由以下重量份的药味原料制成：虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份，该疏风解毒胶囊是采用如下方法制备的：
S1：取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒，加5倍量70％乙醇加热回流提取2h，滤过；药渣再加3倍量70％乙醇加热回流提取1h，滤过，滤液合并，回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S2：取连翘、柴胡加7倍量的水，加热回流提取挥发油4h，分取分层的挥发油，备用；药渣和药液粗滤，滤液离心分离，上清液和药渣分别保存备用；
S3：取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后药渣合并，加水煎煮提取二次，第一次加18倍量水提取2h，第二次加12倍量水提取1h，粗滤，滤液离心分离，两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并，减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S4：取糊精、微粉硅胶，混匀，加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中，充分搅拌均匀，铺层，真空干燥，粉碎，加入糊精，喷入S2步骤得到的挥发油，过筛，混匀，装入胶囊，即得；
采用反相高效液相色谱法测定疏风解毒胶囊中山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸含量，其步骤如下：
(1)色谱条件：采用C18色谱柱，规格：4.6mm×150mm，5μm；流动相：乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液，梯度洗脱：梯度洗脱：从0min至5min，乙腈的比例从0％线性上升至10％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从100％线性下降至90％；从6min至20min，乙腈的比例从10％线性上升至25％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从90％线性下降至75％；从21min至25min，乙腈的比例从25％线性上升至40％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从75％线性下降至60％；流速：1.2mL·min-1，检测波长262nm，柱温38℃，进样量10μL；
(2)混合对照品储备液的制备：精密称取干燥的山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷对照品、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸对照品、邻苯二甲酸二辛酯的对照品各20.00mg，混合，加体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液溶解并定容至10mL，使成为含山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸、邻苯二甲酸二辛酯分别为2.000mg·mL-1、2.000mg·mL-1、2.000mg·mL-1的混合溶液，过0.22μm微孔滤膜，即得混合对照品储备液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取疏风解毒胶囊内容物1.00g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液50mL，密塞，称量，在超声功率300W，超声频率50kHz下，超声提取40min，放冷，称量，用体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液补足损失的量，摇匀，滤过，取滤液过0.22μm微孔滤膜，即得供试品溶液；
(4)测定：精密吸取混合对照品储备液、供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行测定。
一种疏风解毒胶囊在制备治疗细菌性前列腺炎药物中的应用，该疏风解毒胶囊是由以下重量份的药味原料制成：虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份，该疏风解毒胶囊是采用如下方法制备的：
S1：取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒，加5倍量70％乙醇加热回流提取2h，滤过；药渣再加3倍量70％乙醇加热回流提取1h，滤过，滤液合并，回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S2：取连翘、柴胡加7倍量的水，加热回流提取挥发油4h，分取分层的挥发油，备用；药渣和药液粗滤，滤液离心分离，上清液和药渣分别保存备用；
S3：取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后药渣合并，加水煎煮提取二次，第一次加18倍量水提取2h，第二次加12倍量水提取1h，粗滤，滤液离心分离，两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并，减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S4：取糊精、微粉硅胶，混匀，加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中，充分搅拌均匀，铺层，真空干燥，粉碎，加入糊精，喷入S2步骤得到的挥发油，过筛，混匀，装入胶囊，即得；
采用反相高效液相色谱法测定疏风解毒胶囊中山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸含量，其步骤如下：
(1)色谱条件：采用C18色谱柱，规格：4.6mm×150mm，5μm；流动相：乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液，梯度洗脱：梯度洗脱：从0min至5min，乙腈的比例从0％线性上升至10％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从100％线性下降至90％；从6min至20min，乙腈的比例从10％线性上升至25％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从90％线性下降至75％；从21min至25min，乙腈的比例从25％线性上升至40％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从75％线性下降至60％；流速：1.2mL·min-1，检测波长262nm，柱温38℃，进样量10μL；
(2)混合对照品储备液的制备：精密称取干燥的山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷对照品、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸对照品、邻苯二甲酸二辛酯的对照品各20.00mg，混合，加体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液溶解并定容至10mL，使成为含山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸、邻苯二甲酸二辛酯分别为2.000mg·mL-1、2.000mg·mL-1、2.000mg·mL-1的混合溶液，过0.22μm微孔滤膜，即得混合对照品储备液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取疏风解毒胶囊内容物1.00g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液50mL，密塞，称量，在超声功率300W，超声频率50kHz下，超声提取40min，放冷，称量，用体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液补足损失的量，摇匀，滤过，取滤液过0.22μm微孔滤膜，即得供试品溶液；
(4)测定：精密吸取混合对照品储备液、供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行测定。
以下实验研究用于验证本发明的技术方案的技术内容和技术效果，但并不限制本发明的保护范围。
实验一：反相高效液相色谱法测定疏风解毒胶囊中山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸含量
1仪器与试药
1.1仪器
Agilent 1200高效液相色谱检测系统；万分之一电子分析天平，由上海赞维衡器有限公司提供；超声提取器由济宁双和超声设备有限公司公司提供。
1.2试药
疏风解毒胶囊采用如下处方和制备方法进行制备：
处方：虎杖450g、连翘360g、板蓝根360g、柴胡360g、败酱草360g、马鞭草360g、芦根270g、甘草180g；
制备方法：S1：取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒，加5倍量70％乙醇加热回流提取2h，滤过；药渣再加3倍量70％乙醇加热回流提取1h，滤过，滤液合并，回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S2：取连翘、柴胡加7倍量的水，加热回流提取挥发油4h，分取分层的挥发油，备用；药渣和药液粗滤，滤液离心分离，上清液和药渣分别保存备用；
S3：取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的药渣合并，加水煎煮提取二次，第一次加18倍量水提取2h，第二次加12倍量水提取1h，粗滤，滤液离心分离，两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并，减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S4：取糊精、微粉硅胶，混匀，加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中，充分搅拌均匀，铺层，真空干燥，粉碎，加入糊精，喷入S2步骤得到的挥发油，过筛，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
按照上述制法，制备缺少败酱草、马鞭草、芦根三种药味原料的阴性对照品。
对照品：山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷对照品(批号1026-201511)，由北京谱析科技有限公司提供；野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸对照品(批号1213-201512)由成都标样生物科技有限公司提供；邻苯二甲酸二辛酯(批号1216-201510)对照品，由北京谱析科技有限公司提供；乙腈，色谱级，由北京京科瑞达科技有限公司提供，其他试剂均为分析纯。
2方法与结果
2.1色谱条件
采用C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)，流动相：乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液，梯度洗脱：梯度洗脱：从0min至5min，乙腈的比例从0％线性上升至10％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从100％线性下降至90％；从6min至20min，乙腈的比例从10％线性上升至25％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从90％线性下降至75％；从21min至25min，乙腈的比例从25％线性上升至40％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从75％线性下降至60％；流速：1.2mL·min-1，检测波长262nm，柱温38℃，进样量10μL。
2.2溶液的配制
2.2.1供试品溶液的制备
精密称取疏风解毒胶囊内容物1.00g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液50mL，密塞，称量，在超声功率300W，超声频率50kHz下，超声提取40min，放冷，称量，用体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液补足损失的量，摇匀，滤过，取滤液过0.22μm微孔滤膜，即得供试品溶液。
2.2.2混合对照品储备液的制备
精密称取干燥的山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷对照品、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸对照品、邻苯二甲酸二辛酯的对照品各20.00mg，混合，加体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液溶解并定容至10mL，使成为含山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸、邻苯二甲酸二辛酯分别为2.000mg·mL-1、2.000mg·mL-1、2.000mg·mL-1的混合溶液，过0.22μm微孔滤膜，即得混合对照品储备液。
2.2.3阴性样品溶液的制备
取阴性样品，按供试品溶液的配制方法配置，得阴性样品溶液。
2.3专属性试验
取供试品溶液、混合对照品储备液、阴性样品溶液各1mL，分别置10mL量瓶中稀释至刻度，摇匀，各取10μL，按上述色谱条件进样分析，实验结果见附图1、附图2、附图3。实验结果显示，阴性溶液无干扰。
精密吸取混合对照品储备液30、60、120、240、480、960μL，分别置10mL量瓶中，加甲醇稀释并定容至刻度。按上述色谱条件进样3次，测定峰面积。以峰面积的平均值Y对对照品的浓度X进行回归，计算山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷的标准曲线、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸的标准曲线、邻苯二甲酸二辛酯的标准曲线，分别如下：
山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷：
Y＝1.241×103X－1.125×103，r＝0.9998，线性范围：1.5μg·mL-1～220.4μg·mL-1；
野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸：
Y＝5.265×103X－0.965×103，r＝0.9985，线性范围：1.8μg·mL-1～215.6μg·mL-1；
邻苯二甲酸二辛酯：
Y＝3.298×103X－0.988×103，r＝0.9997，线性范围：2.2μg·mL-1～204.2μg·mL-1；
由结果可见，山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷质量浓度在：1.5μg·mL-1～220.4μg·mL-1范围内线性关系良好，野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸质量浓度在1.8μg·mL-1～215.6μg·mL-1范围内线性关系良好，邻苯二甲酸二辛酯质量浓度在2.2μg·mL-1～204.2μg·mL-1范围内线性关系良好。
2.5精密度试验
精密吸取混合对照品溶液，按上述色谱条件进样6次，测得的平均峰面积，计算精密度。结果显示，山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸的精密度RSD分别为2.4％、1.8％、1.05％，表明精密度良好。
2.6稳定性试验
精密吸取混合对照品溶液，按上述色谱条件分别于0、3、6、12、24、48h进样1次，每次3针，以测得的峰面积计算稳定性RSD。山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸的RSD分别为1.06％、0.85％、0.64％。结果表明，混合对照品溶液中山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸在48h内稳定性良好。
2.7重复性试验
取疏风解毒胶囊，按上述方法制备6份供试品溶液，按上述色谱条件进样测定山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸的含量，并计算RSD。测得供试品溶液中山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷的平均含量为2.3652mg·g-1，RSD为1.06％；野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸平均含量为2.4685mg·g-1，RSD为0.96％；邻苯二甲酸二辛酯的平均含量为3.3652mg·g-1，RSD为1.12％，表明重复性较好。
2.8加样回收试验
取已测定含量的疏风解毒胶囊内容物6份，每份约0.5g，精密称定，按3份一组加入精密称定的山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸的对照品，按上述方法制备6份供试溶液，按上述色谱条件进样测定，计算回收率，见表1、表2、表3。结果表明，该测定方法检测山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸的含量结果都较准确，可用于这3个成分的同步检测。
表1山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷加样回收实验结果
Figure GDA0002269317470000091
表2野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸加样回收实验结果
Figure GDA0002269317470000092
表3邻苯二甲酸二辛酯加样回收实验结果
2.9样品含量测定
按上述供试品溶液制备方法制备3批次疏风解毒胶囊的供试品溶液，按上述色谱条件进样，测定每批次3份样品中山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸的峰面积，外标法以平均峰面积计算其含量和RSD。结果见表4。
结果表明，不同批次的疏风解毒胶囊中山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸的含量变化不大，相对稳定。
表4不同批次疏风解毒胶囊中山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸含量测定结果
3结论
本研究所建立的RP-HPLC方法可同步检测疏风解毒胶囊中山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸、邻苯二甲酸二辛酯的含量，具有简单、快速、稳定和重复性好的特点，可作为疏风解毒胶囊的质量检测手段之一。
实验二：疏风解毒胶囊治疗慢性非细菌性前列腺炎的实验研究
1实验动物与试剂
1.1实验动物
昆明种大鼠，SPF级，雄性，3月龄，体重180～220g，共60只。由安徽中医药大学实验动物中心提供，动物生产许可证号：SCXK(皖)2012-2013。给予标准食物，自由饮水，保持光照和避光循环饲养(12/12h)；实验开始前保持室内饲养6d。
1.2实验用药品与试剂
肿瘤坏死因子-α试剂盒，购于上海美吉生物医药科技有限公司，批号：S20150613-T；iNOS原位杂交试剂盒，购于博灿生物科技(上海)有限公司，批号：S20160106-E。
前列康舒胶囊，处方：土茯苓、虎杖、鳖甲、莪术、淫羊藿、黄芪、枸杞子；由镇赉宝慷中药制药有限公司生产，批准文号：国药准字B20020078，规格：每粒装0.3g，批号：20160113，取胶囊内容物生理盐水溶解，制成50g·L-1的混悬溶液。
疏风解毒胶囊：采用如下处方和制备方法进行制备：
处方：虎杖450g、连翘360g、板蓝根360g、柴胡360g、败酱草360g、马鞭草360g、芦根270g、甘草180g；
制备方法：S1：取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒，加5倍量70％乙醇加热回流提取2h，滤过；药渣再加3倍量70％乙醇加热回流提取1h，滤过，滤液合并，回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S2：取连翘、柴胡加7倍量的水，加热回流提取挥发油4h，分取分层的挥发油，备用；药渣和药液粗滤，滤液离心分离，上清液和药渣分别保存备用；
S3：取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的药渣合并，加水煎煮提取二次，第一次加18倍量水提取2h，第二次加12倍量水提取1h，粗滤，滤液离心分离，两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并，减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S4：取糊精、微粉硅胶，混匀，加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中，充分搅拌均匀，铺层，真空干燥，粉碎，加入糊精，喷入S2步骤得到的挥发油，过筛，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。取胶囊内容物，用生理盐水溶解，制成50g·L-1的混悬溶液。
2实验方法
2.1制作大鼠前列腺蛋白液
取大鼠，处死，取其前列腺组织，加入0.5％聚乙二醇辛基苯基醚的生理盐水溶液，采用匀浆机制成匀浆，以8000r·min-1的离心速度，离心40min，取离心后的上清液，以牛血清白蛋白溶液为标准蛋白，采用分光光度计，双缩脲法测定蛋白含量。用0.1mol·L-1pH为7.5的磷酸盐缓冲液稀释成为20g·L-1的前列腺蛋白液。
2.2分组、造模
60只大鼠，随机分成4组，其中：生理盐水组15只，模型组15只、前列康舒胶囊组15只、疏风解毒胶囊组15只。模型组、前列康舒胶囊组、疏风解毒胶囊组均腹腔注射百白破疫苗0.6mL，多点皮内注射上述2.1步骤制成的大鼠前列腺蛋白液0.5mL，以及福氏完全佐剂乳剂0.5mL。
生理盐水组采用同样的方法，腹腔注射等量生理盐水0.6mL，多点皮内注射生理盐水1.0mL。40d后，生理盐水组，模型组、前列康舒胶囊组、疏风解毒胶囊组分别取5只，眼眶取血，对血清中的肿瘤坏死因子-α进行含量测定，生理盐水组，模型组、前列康舒胶囊组、疏风解毒胶囊组血清中的肿瘤坏死因子-α分别为：46.43±5.62ng·L-1、75.26±10.64ng·L-1、74.62±11.11ng·L-1、75.14±12.45ng·L-1。与生理盐水组比较，模型组、前列康舒胶囊组、疏风解毒胶囊组大鼠血清中的肿瘤坏死因子-α水平明显升高，有统计学意义，P＜0.05，证明慢性非细菌性前列腺炎大鼠造模成功。
2.3给药
灌胃给药，前列康舒胶囊组，疏风解毒胶囊组分别灌胃相应的50g·L-1的混悬溶液，每次灌胃20mL，每日1次；空白组、模型组每次灌胃20mL的生理盐水，每日1次，所有的组都给药40d。
2.4样本采集与制备
2.4.1血清样本
治疗结束12h后，对各组大鼠腹腔注射15％水合氯醛，将其麻醉，腹主动脉取血3.0mL，静置3h后，以5000r·min-1的离心速度进行离心20min，取血清，置于-10℃冰箱中，备用。
2.4.2前列腺组织样本
取各组大鼠的前列腺组织，称其湿重；用12％中性甲醛溶液固定，无水乙醇脱水、二甲苯透明、浸蜡、包埋、切片。
2.5观测及检测
2.5.1前列腺组织平均湿重、前列腺湿重/体重比
剖取前列腺并称量其质量，用水取代法测定前列腺体积并算出前列腺指数
Figure GDA0002269317470000111
2.5.2大鼠血清肿瘤坏死因子-α含量的测定
采用分光光度计，测定大鼠血液样本反应后的吸光度值(检测波长为495nm)。所有组的吸光度值减除空白值后进行计算。根据吸光度值在该吸光度曲线上位置，计算得出相应血清中的肿瘤坏死因子-α的含量。
2.5.3iNOS原位杂交检测样本
光镜下观察并拍照。在原位杂交检测中，iNOS阳性反应呈现为棕红色的点粒子状。利用数字医学图像分析系统，200倍光镜下测量，计算出iNOS的相对含量。
2.5.4光镜检查
前列腺样本切片，HE染色，200倍光镜下观察前列腺组织中实质与间质的变化，利用数字医学数码成像系统拍照。
2.6统计学方法
SPSS18.0系统进行数据统计，计数用均数±标准差
Figure GDA0002269317470000121
表示，两组计量采用t检验，多组计量比较采用单因素方差分析，计数比较采用χ2检验，P＜0.05为有统计学意义。
3实验结果
3.1各组大鼠前列腺湿重、湿重/体重比
实验结果见表5。
表5各组大鼠前列腺湿重及前列腺湿重/体重比的比较
Figure GDA0002269317470000122
Figure GDA0002269317470000123
注：与空白组比较，#P<0.01；与模型组比较，*P<0.01；与前列康舒胶囊组比较，▲P<0.01。
3.2血清肿瘤坏死因子-α水平
实验结果见表6。
表6各组大鼠血肿瘤坏死因子-α检测统计结果
Figure GDA0002269317470000124
pg·L-1
Figure GDA0002269317470000125
注：与空白组比较，#P<0.05；与模型组比较，*P<0.05；与前列康舒胶囊组比较，▲P<0.05。
3.3前列腺组织iNOS表达情况
实验结果见表7。
表7前列腺组织iNOS的表达情况
Figure GDA0002269317470000126
注：与空白组比较，#P<0.05；与模型组比较，*P<0.05。
3.4光镜观察
实验结果见附图4至附图11。
4结论
疏风解毒胶囊对慢性非细菌性前列腺炎动物模型具有较好的疗效，能够消除炎症、提高机体免疫功能，降低前列腺湿重，降低前列腺湿重/体重比、降低血清中的肿瘤坏死因子-α含量和iNOS在前列腺组织的表达。
实验三：疏风解毒胶囊治疗细菌性前列腺炎的实验研究
1材料和方法
1.1材料
疏风解毒胶囊的处方和制备方法如下：
处方：虎杖450g、连翘360g、板蓝根360g、柴胡360g、败酱草360g、马鞭草360g、芦根270g、甘草180g；
制备方法：
S1：取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒，加5倍量70％乙醇加热回流提取2h，滤过；药渣再加3倍量70％乙醇加热回流提取1h，滤过，滤液合并，回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S2：取连翘、柴胡加7倍量的水，加热回流提取挥发油4h，分取分层的挥发油，备用；药渣和药液粗滤，滤液离心分离，上清液和药渣分别保存备用；
S3：取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的药渣合并，加水煎煮提取二次，第一次加18倍量水提取2h，第二次加12倍量水提取1h，粗滤，滤液离心分离，两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并，减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S4：取糊精、微粉硅胶，混匀，加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中，充分搅拌均匀，铺层，真空干燥，粉碎，加入糊精，喷入S2步骤得到的挥发油，过筛，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
1.2方法与给药
家兔，♂，12只，体重(2.8±0.4)Kg，随机分为两组，分别为：实验组和对照组两组，每组均为6只。
取导尿管，从家兔尿道口缓慢插入，当插到膀胱处时，会有尿液从导尿管流出，前段尿液弃去，取中段尿液，取2mL尿液，对家兔尿液做常规检查。
导尿管向外抽出大约2～3cm的时候，此时无尿液流出，导尿管恰好处于家兔前列腺的部位，按摩家兔的趾骨，同时挤压家兔的睾丸，会有少许前列腺液流出，通过一次性注射液取前列腺液，进行涂片，对家兔前列腺页进行常规检查。
用一次性注射器抽取3mL的大肠杆菌液(100～103Fu·mL-1)，先用手指压迫家兔膀胱的颈部，然后将大肠杆菌液通过导尿管注入，这样可以避免大肠杆菌液进入膀胱而使家兔膀胱感染。48h后，细菌性前列腺炎家兔的造模即完成，采用上述同样的方法，取家兔的尿液和前列腺液，进行常规检查。
随机抽取实验组和对照组家兔各1只，处死，取家兔前列腺组织，包埋切片，HE染色，送检。
细菌性前列腺炎家兔造模成功后，实验组家兔连续给予疏风解毒胶囊，每天三次，每次给药剂量为0.5g·Kg-1；对照组给予等重量的纯净水；连续给药15d后，采用上述同样的方法，取家兔的尿液和前列腺液，进行常规检查。
随机抽取实验组和对照组家兔各1只，处死，取家兔前列腺组织，包埋切片，HE染色，以及酶组织化学观察。
2结果
2.1实验组、对照组两组家兔尿液和前列腺液白细胞比较
实验结果见表8。
表8实验组与对照组两组家兔尿液和前列腺液白细胞比较(WBC/HP)
Figure GDA0002269317470000141
实验结果显示，家兔经大肠杆菌感染后，尿液白细胞指标和前列腺液白细胞指标均超出正常范围，说明造模成功。
实验组家兔的尿液白细胞指标、前列腺液白细胞指标，治疗前后比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，说明疏风解毒胶囊对于治疗家兔的炎症，并没有明显的作用。
对照组家兔的尿液白细胞指标、前列腺液白细胞指标，治疗前后比较，差异无统计学意义(P＜0.05)，说明对照组家兔的炎症情况有所加重。
2.2HE染色观察
实验结果见表9。
表9实验组与对照组两组家兔前列腺液组织HE染色观察结果
Figure GDA0002269317470000142
结果表明，与对照组比较，实验组家兔前列腺组织上皮水肿增生情况、精囊间质内的中性白细胞、单核细胞数量，精囊内的脓细胞数量，并没有明显的改善。
2.3酶组织化学反应情况
治疗后两组家兔前列腺琥珀酸脱氢酶(SDH)、β-羟化甾体脱氢酶(β-SHDH)、酸性磷酸酶(ACP)的活性，见表10。
表10治疗后两组家兔前列腺酶组织化学反应定性比较
组别 SDH β-SHDH ACP
实验组 + － +
对照组 + － +
注：“－”为阴性，“+”为阳性，“++”为中等阳性，“+++”为强阳性。
结果表明，与对照组比较，实验组家兔前列腺组织中含有的SDH、β-SHDH、ACP并没有明显增加，说明疏风解毒胶囊并没有提高家兔前列腺组织的代谢活性。
3结论
疏风解毒胶囊对于治疗家兔细菌性前列腺炎没有特别明显的作用。
附图说明：
图1为混合对照品储备液溶液高效液相色谱图，其中1号峰为山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、2号峰为山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、3号峰为邻苯二甲酸二辛酯。
图2为供试品溶液高效液相色谱图，其中1号峰为山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、2号峰为山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、3号峰为邻苯二甲酸二辛酯。
图3为阴性样品溶液高效液相色谱图。
图4：空白组前列腺切片HE染色显微图(400×)
图5：模型组前列腺切片HE染色显微图(400×)
图6：前列康舒胶囊组前列腺切片HE染色显微图(400×)
图7：疏风解毒胶囊组前列腺切片HE染色显微图(400×)
图8：空白组前列腺免疫组化iNOS表达显微图(400×)
图9：模型组前列腺免疫组化iNOS表达显微图(400×)
图10：前列康舒胶囊组前列腺免疫组化iNOS表达显微图(400×)
图11：疏风解毒胶囊组前列腺免疫组化iNOS表达显微图(400×)
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。
实施例1：疏风解毒胶囊
处方：虎杖450g、连翘360g、板蓝根360g、柴胡360g、败酱草360g、马鞭草360g、芦根270g、甘草180g；
制备方法：
S1：取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒，加5倍量70％乙醇加热回流提取2h，滤过；药渣再加3倍量70％乙醇加热回流提取1h，滤过，滤液合并，回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S2：取连翘、柴胡加7倍量的水，加热回流提取挥发油4h，分取分层的挥发油，备用；药渣和药液粗滤，滤液离心分离，上清液和药渣分别保存备用；
S3：取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的药渣合并，加水煎煮提取二次，第一次加18倍量水提取2h，第二次加12倍量水提取1h，粗滤，滤液离心分离，两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并，减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S4：取糊精、微粉硅胶，混匀，加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中，充分搅拌均匀，铺层，真空干燥，粉碎，加入糊精，喷入S2步骤得到的挥发油，过筛，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。
采用反相高效液相色谱法测定疏风解毒胶囊中山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸含量，其步骤如下：
(1)色谱条件：采用C18色谱柱，规格：4.6mm×150mm，5μm；流动相：乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液，梯度洗脱：梯度洗脱：从0min至5min，乙腈的比例从0％线性上升至10％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从100％线性下降至90％；从6min至20min，乙腈的比例从10％线性上升至25％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从90％线性下降至75％；从21min至25min，乙腈的比例从25％线性上升至40％，0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从75％线性下降至60％；流速：1.2mL·min-1，检测波长262nm，柱温38℃，进样量10μL；
(2)混合对照品储备液的制备：精密称取干燥的山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷对照品、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸对照品、邻苯二甲酸二辛酯的对照品各20.00mg，混合，加体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液溶解并定容至10mL，使成为含山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸、邻苯二甲酸二辛酯分别为2.000mg·mL-1、2.000mg·mL-1、2.000mg·mL-1的混合溶液，过0.22μm微孔滤膜，即得混合对照品储备液；
(3)供试品溶液的制备：精密称取疏风解毒胶囊内容物1.00g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液50mL，密塞，称量，在超声功率300W，超声频率50kHz下，超声提取40min，放冷，称量，用体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液补足损失的量，摇匀，滤过，取滤液过0.22μm微孔滤膜，即得供试品溶液；
(4)测定：精密吸取混合对照品储备液、供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行测定。
(5)测定结果：每克疏风解毒胶囊含山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷2.3359mg、野黄芩素-7-氧-(2-氧-阿魏酸)-二葡萄糖苷酸2.4354mg、邻苯二甲酸二辛酯3.3869mg。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种疏风解毒胶囊的检测方法，该疏风解毒胶囊是由以下重量份的药味原料制成：虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份，该疏风解毒胶囊是采用如下方法制备的：
S1：取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒，加5倍量70%乙醇加热回流提取2h，滤过；药渣再加3倍量70%乙醇加热回流提取1h，滤过，滤液合并，回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S2：取连翘、柴胡加7倍量的水，加热回流提取挥发油4h，分取分层的挥发油，备用；药渣和药液粗滤，滤液离心分离，上清液和药渣分别保存备用；
S3：取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后药渣合并，加水煎煮提取二次，第一次加18倍量水提取2h，第二次加12倍量水提取1h，粗滤，滤液离心分离，两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并，减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S4：取糊精、微粉硅胶，混匀，加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中，充分搅拌均匀，铺层，真空干燥，粉碎，加入糊精，喷入S2步骤得到的挥发油，过筛，混匀，装入胶囊，即得；
其特征在于，采用反相高效液相色谱法测定疏风解毒胶囊中山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-（2-氧-阿魏酸）-二葡萄糖苷酸含量，其步骤如下：
（1）色谱条件：采用C18色谱柱；流动相：乙腈-0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液，梯度洗脱：梯度洗脱：从0 min至5min，乙腈的比例从0%线性上升至10%，0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从100%线性下降至90%；从6 min至20min，乙腈的比例从10%线性上升至25%，0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从90%线性下降至75%；从21 min至25min，乙腈的比例从25%线性上升至40%，0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从75%线性下降至60%；流速：1.0～1.5mL·min-1，检测波长260～265nm，柱温35～40℃，进样量5～20μL；
（2）混合对照品储备液的制备：精密称取干燥的山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷对照品、野黄芩素-7-氧-（2-氧-阿魏酸）-二葡萄糖苷酸对照品、邻苯二甲酸二辛酯的对照品，混合，加体积比为20～30:80～70的乙腈-0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液溶解并定容，使成为含山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、野黄芩素-7-氧-（2-氧-阿魏酸）-二葡萄糖苷酸、邻苯二甲酸二辛酯的混合溶液，过微孔滤膜，即得混合对照品储备液；
（3）供试品溶液的制备：精密称取疏风解毒胶囊内容物，置具塞锥形瓶中，精密加入体积比为20～30:80～70的乙腈-0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液，密塞，称量，在超声功率250～350W，超声频率45～55kHz下，超声提取35～45min，放冷，称量，用体积比为20～30:80～70的乙腈-0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液补足损失的量，摇匀，滤过，取滤液过微孔滤膜，即得供试品溶液；
（4）测定：精密吸取混合对照品储备液、供试品溶液各5～20μL，注入高效液相色谱仪，进行测定。
2.如权利要求1所述的疏风解毒胶囊的检测方法，其特征在于，采用反相高效液相色谱法测定疏风解毒胶囊中山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-（2-氧-阿魏酸）-二葡萄糖苷酸含量，其步骤如下：
（1）色谱条件：采用C18色谱柱，规格：4.6mm×150mm，5μm；流动相：乙腈-0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液，梯度洗脱：从0 min至5min，乙腈的比例从0%线性上升至10%，0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从100%线性下降至90%；从6 min至20min，乙腈的比例从10%线性上升至25%，0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从90%线性下降至75%；从21 min至25min，乙腈的比例从25%线性上升至40%，0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从75%线性下降至60%；流速：1.2mL·min-1，检测波长262nm，柱温38℃，进样量10μL；
（2）混合对照品储备液的制备：精密称取干燥的山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷对照品、野黄芩素-7-氧-（2-氧-阿魏酸）-二葡萄糖苷酸对照品、邻苯二甲酸二辛酯的对照品各20.00mg，混合，加体积比为25:75的乙腈-0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液溶解并定容至10mL，使成为含山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、野黄芩素-7-氧-（2-氧-阿魏酸）-二葡萄糖苷酸、邻苯二甲酸二辛酯分别为2.000mg·mL-1、2.000 mg·mL-1、2.000mg·mL-1的混合溶液，过0.22μm微孔滤膜，即得混合对照品储备液；
（3）供试品溶液的制备：精密称取疏风解毒胶囊内容物1.00g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入体积比为25:75的乙腈-0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液50mL，密塞，称量，在超声功率300W，超声频率50kHz下，超声提取40min，放冷，称量，用体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液补足损失的量，摇匀，滤过，取滤液过0.22μm微孔滤膜，即得供试品溶液；
（4）测定：精密吸取混合对照品储备液、供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行测定。
3.一种疏风解毒胶囊在制备治疗非细菌性前列腺炎药物中的应用，其特征在于，该疏风解毒胶囊是由以下重量份的药味原料制成：虎杖5重量份、连翘4重量份、板蓝根4重量份、柴胡4重量份、败酱草4重量份、马鞭草4重量份、芦根3重量份、甘草2重量份，该疏风解毒胶囊是采用如下方法制备的：
S1：取虎杖、板蓝根粉碎成粗颗粒，加5倍量70%乙醇加热回流提取2h，滤过；药渣再加3倍量70%乙醇加热回流提取1h，滤过，滤液合并，回收乙醇并减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S2：取连翘、柴胡加7倍量的水，加热回流提取挥发油4h，分取分层的挥发油，备用；药渣和药液粗滤，滤液离心分离，上清液和药渣分别保存备用；
S3：取败酱草、马鞭草、芦根、甘草与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后药渣合并，加水煎煮提取二次，第一次加18倍量水提取2h，第二次加12倍量水提取1h，粗滤，滤液离心分离，两次提取的上清液与S2步骤得到的连翘、柴胡提取挥发油后的上清液合并，减压浓缩至60℃下相对密度1.35～1.40的稠膏，备用；
S4：取糊精、微粉硅胶，混匀，加入到上述S1步骤得到的醇提浓缩稠膏与S3步骤得到的水提浓缩稠膏中，充分搅拌均匀，铺层，真空干燥，粉碎，加入糊精，喷入S2步骤得到的挥发油，过筛，混匀，装入胶囊，即得；
采用反相高效液相色谱法测定疏风解毒胶囊中山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、邻苯二甲酸二辛酯、野黄芩素-7-氧-（2-氧-阿魏酸）-二葡萄糖苷酸含量，其步骤如下：
（1）色谱条件：采用C18色谱柱，规格：4.6mm×150mm，5μm；流动相：乙腈-0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液，梯度洗脱：梯度洗脱：从0 min至5min，乙腈的比例从0%线性上升至10%，0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从100%线性下降至90%；从6 min至20min，乙腈的比例从10%线性上升至25%，0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从90%线性下降至75%；从21 min至25min，乙腈的比例从25%线性上升至40%，0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液的比例从75%线性下降至60%；流速：1.2mL·min-1，检测波长262nm，柱温38℃，进样量10μL；
（2）混合对照品储备液的制备：精密称取干燥的山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷对照品、野黄芩素-7-氧-（2-氧-阿魏酸）-二葡萄糖苷酸对照品、邻苯二甲酸二辛酯的对照品各20.00mg，混合，加体积比为25:75的乙腈-0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液溶解并定容至10mL，使成为含山奈素-3-氧-鼠李糖-葡糖基-1-3-阿拉伯糖苷、野黄芩素-7-氧-（2-氧-阿魏酸）-二葡萄糖苷酸、邻苯二甲酸二辛酯分别为2.000mg·mL-1、2.000 mg·mL-1、2.000mg·mL-1的混合溶液，过0.22μm微孔滤膜，即得混合对照品储备液；
（3）供试品溶液的制备：精密称取疏风解毒胶囊内容物1.00g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加入体积比为25:75的乙腈-0.25 moL·L-1磷酸二氢钠水溶液50mL，密塞，称量，在超声功率300W，超声频率50kHz下，超声提取40min，放冷，称量，用体积比为25:75的乙腈-0.25moL·L-1磷酸二氢钠水溶液补足损失的量，摇匀，滤过，取滤液过0.22μm微孔滤膜，即得供试品溶液；
（4）测定：精密吸取混合对照品储备液、供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行测定。
CN201810047427.5A 2018-01-18 2018-01-18 一种疏风解毒胶囊及其制备方法与制药用途 Active CN108159297B (zh)

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疏风解毒胶囊治疗上呼吸道感染480例临床观察;王书臣等;《世界中西医结合杂志》;20091231;第4卷(第12期);第872-875页 *

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