CN108118004A - 一株可有效防治水果采后病害的喜仙人掌毕赤酵母及其制备与使用方法 - Google Patents

一株可有效防治水果采后病害的喜仙人掌毕赤酵母及其制备与使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108118004A
CN108118004A CN201711373888.3A CN201711373888A CN108118004A CN 108118004 A CN108118004 A CN 108118004A CN 201711373888 A CN201711373888 A CN 201711373888A CN 108118004 A CN108118004 A CN 108118004A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cactus
happiness
pichia pastoris
fruit
grape
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201711373888.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108118004B (zh
Inventor
王友升
任向峰
马国为
黄津津
李丽萍
王颖
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong Kaipu fite Biotechnology Co.,Ltd.
Original Assignee
Beijing Technology and Business University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Technology and Business University filed Critical Beijing Technology and Business University
Priority to CN201711373888.3A priority Critical patent/CN108118004B/zh
Publication of CN108118004A publication Critical patent/CN108118004A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108118004B publication Critical patent/CN108118004B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • C12N1/165—Yeast isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/84—Pichia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G13/00—Protecting plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23B—PRESERVING, e.g. BY CANNING, MEAT, FISH, EGGS, FRUIT, VEGETABLES, EDIBLE SEEDS; CHEMICAL RIPENING OF FRUIT OR VEGETABLES; THE PRESERVED, RIPENED, OR CANNED PRODUCTS
    • A23B7/00—Preservation or chemical ripening of fruit or vegetables
    • A23B7/14—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10
    • A23B7/153—Preserving or ripening with chemicals not covered by groups A23B7/08 or A23B7/10 in the form of liquids or solids
    • A23B7/154—Organic compounds; Microorganisms; Enzymes
    • A23B7/155—Microorganisms; Enzymes; Antibiotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一株用于水果采后病害防治的抑菌谱广、效果稳定的喜仙人掌毕赤酵母Pichia cactophila菌株BY35及其使用方法。该菌株在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏菌株编号为CGMCC No.14909。该喜仙人掌毕赤酵母的使用方法：将菌株活化，用YPD发酵培养，离心，菌体用无菌水配成1×108细胞/mL的菌悬液；将苹果、梨、葡萄或柑橘等水果放入菌悬液中，浸泡30秒后取出，风干；放入保鲜盒中，常温贮藏。该喜仙人掌毕赤酵母可同时控制苹果青霉病和灰霉病菌，梨果实青霉病和灰霉病菌，葡萄镰孢霉病和炭疽病，以及柑橘青霉病，减少采后病害造成的损失，具有很好的应用前景。

Description

一株可有效防治水果采后病害的喜仙人掌毕赤酵母及其制备 与使用方法
技术领域
本发明涉及水果采后病害生物防治领域，尤其涉及一株用于水果采后病害生物防治的喜仙人掌毕赤酵母(Pichia cactophila)，该菌株对苹果、梨、葡萄、柑橘的主要采后病害均具有显著的防治效果。
背景技术
新鲜水果产品的品质劣变受诸多因素的影响，但病害尤其是真菌性病害引起的腐烂变质是果实采后损失中最严重的因素。虽然水果采后病害可以通过农业防治、物理防治、化学防治和生物防治等很多途径进行防治，但目前控制水果采后病害的主要措施是化学防治(Eckert&Ogawa，1985，1988)。但长期使用化学农药不但导致病原菌产生耐药性而降低杀菌效果(Prusky et al.，1985；as et al.，1991；Holmes&Eckert，1999)，而且频繁地使用高浓度的化学药剂也增加了果实上的农药残留量，严重威胁人们的健康，并造成环境污染(Gullion&Kuijipers，1994)。因此，开发安全、高效、无毒、低抗性、无公害的控制果实采后病害新技术成为当前世界各国的研究重点(Falik et al.，1995；Tian et al.，2001；Kulakiotuetal.，2004)。其中利用生物拮抗菌防治果实采后病害是目前被证明安全有效的新方法(Wilson&Wisniewski，1989；Janisiewicz&Koersten，2002)。
迄今为止，各国科学家已经筛选出了许多对水果采后病原真菌具有明显抑菌效果的细菌、酵母菌和小型丝状真菌，其中利用拮抗酵母菌防治果实采后病害是当前已被证明的高效、低毒、低抗性的新技术(王友升，2012)。
然而，虽然目前国内外报道的拮抗酵母菌有近百种，但大多数拮抗酵母菌的生防效果仅在少数果实上得到验证。而由于同一酵母菌的不同菌株之间的生防效果有很大差异(Filonowet al.，1996)，因此，大多数拮抗酵母菌的缺乏抑菌谱广、效果稳定的菌株。
发明内容
针对上述技术难题，本发明的目的在于提供一株用于水果采后病害生物防治的抑菌谱广、效果稳定的喜仙人掌毕赤酵母Pichia cactophila BY35及其使用方法和用途。该种用于水果采后病害生物防治的喜仙人掌毕赤酵母BY35，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏菌株编号为CGMCC No.14909。该喜仙人掌毕赤酵母菌株进行水果采后病害防治和贮藏保鲜的方法，按照以下步骤进行：将喜仙人掌毕赤酵母活化，用YPD液体培养基发酵培养，离心得到菌体，将菌体用无菌水配制成浓度为1×108细胞/mL的菌悬液；将苹果、梨、葡萄和柑橘等水果放入菌悬液中，浸泡30秒后取出，风干；放入保鲜盒中，密封后，放入常温贮藏。
该喜仙人掌毕赤酵母BY35的制备方法为，将菌株从-80℃冰箱取出，用YPDA培养基活化，挑取单菌落至YPD液体培养基里，于26℃、200r/min条件下培养24h，4000rpm离心5min收集菌体，用无菌水洗3遍。所述YPDA培养基是：酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂18g，去离子水1000ml，自然pH，121℃灭菌30min。
所述的喜仙人掌毕赤酵母菌株BY35可同时用于控制苹果青霉病和灰霉病菌，梨果实青霉病和灰霉病菌，葡萄镰孢菌病和炭疽病，以及柑橘青霉病。
本发明所提供的菌株是从自然发酵的磨盘柿醪液中筛选分离到的对苹果、梨、葡萄、草莓、柑橘、圣女果采后病害具有显著防治效果的喜仙人掌毕赤酵母BY35，可广泛用于水果采后病害的防治，减少采后病害造成的损失，具有很好的应用前景。
本发明的优点：(1)本发明所使用的喜仙人掌毕赤酵母BY35为本实验室从磨盘柿发酵醪液中筛选得到，其对人体无害，安全性高。(2)本发明所使用的喜仙人掌毕赤酵母BY35抑菌谱广，可以同时控制苹果青霉病和灰霉病菌，梨果实青霉病和灰霉病菌，葡萄镰孢霉病和炭疽病，柑橘青霉病。(3)本发明所使用的喜仙人掌毕赤酵母BY35在YPD培养基中生长良好，易于培养，性状稳定，且单独使用一定浓度该菌悬液就能有效降低多种水果采后真菌病害的发生率，使用成本低，市场前景广阔。(4)本发明使用喜仙人掌毕赤酵母BY35可以代替化学杀菌剂防治水果采后病害，避免使用化学杀菌剂对人的危害，且不污染环境，社会和生态效益显著。
通过以下实施实例更加详细的说明本发明。以下实施实例仅是说明性的，本发明并不受这些实施实例的限制。
附图说明
图1为本发明喜仙人掌毕赤酵母BY35的26S rDNA D1/D2区核酸序列进化关系图。
图2为喜仙人掌毕赤酵母BY35对苹果青霉病和灰霉病的抑制效果。注：Control：无菌水，即对照组；Hv：1×108细胞/mL的喜仙人掌毕赤酵母BY35菌悬液。不同字母代表差异显著(P＜0.05)。
图3为喜仙人掌毕赤酵母BY35对喜仙人掌毕赤酵母对梨果实青霉病和灰霉病的抑制效果。注：Control：
无菌水，即对照组；Hv：1×108细胞/mL的喜仙人掌毕赤酵母BY35菌悬液。不同字母代表差异显著(P＜0.05)。图4为喜仙人掌毕赤酵母BY35对葡萄镰孢霉病和炭疽病的抑制效果。注：Control：无菌水，即对照组；Hv：1×108细胞/mL的喜仙人掌毕赤酵母BY35菌悬液。不同字母代表差异显著(P＜0.05)。
图5为喜仙人掌毕赤酵母BY35对柑橘青霉病的抑制效果。注：Control：无菌水，即对照组；Hv：1×108细胞/mL的喜仙人掌毕赤酵母BY35菌悬液。不同字母代表差异显著(P＜0.05)。
具体实施方式
实施例1：喜仙人掌毕赤酵母BY35的生物学特性
1.形态学特征
(1)YPDA培养基(酵母浸粉1％，蛋白胨2％，葡萄糖2％，琼脂1.8％，121℃灭菌20min)上26℃培养48h，菌落呈圆形、白色，菌落边缘光滑圆润。细胞形态呈椭球型。
(2)在YPDA液体培养基中培养24h后，不形成醭，菌液浑浊，有沉淀，镜检酵母细胞呈椭圆形，芽殖。2.分子生物学鉴定
以通用正向引物NL-1(5’-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3’)和反向引物NL-4(5’-GGTCCGTGTTTCAAGACGG-3’)进行PCR扩增酵母26S rDNA D1/D2区核酸序列，将PCR产物的测序结果输入网站www.NCBI.nlm.nih.gov进行BLAST，从GenBank数据库中下载同源序列，通过MEGA6软件构建进化树如图1，确定筛选到的菌株为喜仙人掌毕赤酵母(Pichiacactophila)。
本发明的喜仙人掌毕赤酵母BY35已保藏于中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号的中国科学院微生物研究所的中国微生物菌株保藏委员会普通微生物中心，保藏时间为2017年11月15日，保藏编号为CGMCC No.14909，建议的分类命名为喜仙人掌毕赤酵母Pichia cactophila。
实施实例2喜仙人掌毕赤酵母BY35对苹果青霉病和灰霉病的抑制效果
1.实验方案
将喜仙人掌毕赤酵母BY35从-80℃冰箱取出，用YPDA培养基(酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂18g，去离子水1000ml，自然pH，121℃灭菌30min)活化，挑取单菌落至YPD液体培养基里，于26℃、200r/min条件下培养24h，4000rpm离心5min，弃上清，收集的菌体用无菌水反复清洗3次，血球计数板计数配成配制成浓度为1×108细胞/mL的喜仙人掌毕赤酵母BY35菌悬液。
将青霉病菌(Penicillium expansum)或灰霉病菌(Botrytis cinerea)在PDA培养基平板上激活，26℃下培养7～14d，刮取适量孢子，用无菌水配制成浓度为5×104细胞/mL的青霉病菌或灰霉病菌孢子悬浮液。将健康无损的苹果果实用2％次氯酸钠消毒5min，用去离子水冲洗，晾干，用无菌打孔器在果实赤道处打5个孔，表面伤口为2mm(直径)×2mm(深)。每个伤口处等量加入20μL以下处理液：(1)1×108细胞/mL的喜仙人掌毕赤酵母BY35菌悬液；(2)无菌蒸馏水。4h后接种20μL青霉病菌或灰霉病菌孢子悬浮液。晾干后，将果实放入塑料箱，保持相对湿度95％，置于室温(25℃)4天后记录果实发病率，以此评价喜仙人掌毕赤酵母BY35的抑菌效果。发病率的计算公式为：发病率(％)＝发病的果实/果实总数×100％。
2.试验结果
按照上述步骤试验，统计苹果的发病率结果如下：
(1)喜仙人掌毕赤酵母BY35对苹果青霉病的抑制效果
如图2所示，对照组苹果青霉病发病率为100％，经过喜仙人掌毕赤酵母BY35处理的苹果青霉病发病率为13％，因此喜仙人掌毕赤酵母BY35能够有效控制苹果青霉病病害。
(2)喜仙人掌毕赤酵母BY35对苹果灰霉病的抑制效果
如图2所示，对照组苹果灰霉病的发病率为100％，经过喜仙人掌毕赤酵母BY35处理的苹果灰霉病发病率为0，因此喜仙人掌毕赤酵母BY35能够有效控制苹果灰霉病病害。
实施实例3喜仙人掌毕赤酵母BY35对梨果实青霉病和灰霉病的抑制效果
1.实验方案
将喜仙人掌毕赤酵母BY35从-80℃冰箱取出，用YPDA培养基(酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂18g，去离子水1000ml，自然pH，121℃灭菌30min)活化，挑取单菌落至YPD液体培养基里，于26℃、200r/min条件下培养24h，4000rpm离心5min，弃上清，收集的菌体用无菌水反复清洗3次，血球计数板计数配成配制成浓度为1×108细胞/mL的喜仙人掌毕赤酵母BY35菌悬液。
将青霉病菌(Penicillium expansum)或灰霉病菌(Botrytis cinerea)在PDA培养基平板上激活，26℃下培养7～14d，刮取适量孢子，用无菌水配制成浓度为5×104细胞/mL的青霉病菌或灰霉病菌孢子悬浮液。将健康无损的梨果实用2％次氯酸钠消毒5min，用去离子水冲洗，晾干，用无菌打孔器在果实赤道处打5个孔，表面伤口为2mm(直径)×2mm(深)。每个伤口处等量加入20μL以下处理液：(1)1×108细胞/mL的喜仙人掌毕赤酵母BY35菌悬液；(2)无菌蒸馏水。4h后接种20μL青霉病菌或灰霉病菌孢子悬浮液。晾干后，将果实放入塑料箱，保持相对湿度95％，置于室温(25℃)4天后记录果实发病率，以此评价喜仙人掌毕赤酵母BY35的抑菌效果。发病率的计算公式为：发病率(％)＝发病的果实/果实总数×100％。
2.试验结果
按照上述步骤试验，统计梨果实的发病率结果如下：
(1)喜仙人掌毕赤酵母BY35对梨果实青霉病的抑制效果
如图3所示，对照组梨果实青霉病发病率为100％，经过喜仙人掌毕赤酵母BY35处理的梨果实青霉病发病率为0，因此喜仙人掌毕赤酵母BY35能够有效控制梨果实青霉病病害。
(2)喜仙人掌毕赤酵母BY35对梨果实灰霉病的抑制效果
如图3所示，对照组梨果实灰霉病的发病率为100％，经过喜仙人掌毕赤酵母BY35处理的梨果实灰霉病发病率为20％，因此喜仙人掌毕赤酵母BY35能够有效控制梨果实灰霉病病害。
实施实例4喜仙人掌毕赤酵母BY35对葡萄采后病害的抑制效果
1.实验方案
将喜仙人掌毕赤酵母BY35从-80℃冰箱取出，用YPDA培养基(酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂18g，去离子水1000ml，自然pH，121℃灭菌30min)活化，挑取单菌落至YPD液体培养基里，于26℃、200r/min条件下培养24h，4000rpm离心5min，弃上清，收集的菌体用无菌水反复清洗3次，血球计数板计数配成配制成浓度为1×108细胞/mL的喜仙人掌毕赤酵母BY35菌悬液。
将芬芳镰孢菌(Fusarium redolens)或果生炭疽菌(Colletotrichumfructicola)在PDA培养基平板上激活，26℃下培养7～14d，刮取适量孢子，用无菌水配制成浓度为5×104细胞/mL的芬芳镰孢菌或果生炭疽菌孢子悬浮液。
将健康无损的梨果实用2％次氯酸钠消毒5min，用去离子水冲洗，晾干，用无菌打孔器在果实赤道处打1个孔，表面伤口为2mm(直径)×2mm(深)。每个伤口处等量加入20μL以下处理液：(1)1×108细胞/mL的喜仙人掌毕赤酵母BY35菌悬液；(2)无菌蒸馏水。4h后接种20μL芬芳镰孢菌或果生炭疽菌孢子悬浮液。晾干后，将果实放入塑料箱，保持相对湿度95％，置于室温(25℃)4天后记录果实发病率，以此评价喜仙人掌毕赤酵母BY35的抑菌效果。发病率的计算公式为：发病率(％)＝发病的果实/果实总数×100％。
2.试验结果
按照上述步骤试验，统计葡萄果实的发病率结果如下：
(1)喜仙人掌毕赤酵母BY35对葡萄果实镰孢霉病的抑制效果
如图4所示，对照组葡萄果实镰孢霉病的发病率为100％，经过喜仙人掌毕赤酵母BY35处理的葡萄果实镰孢霉病发病率为47％，因此喜仙人掌毕赤酵母BY35能够有效控制葡萄果实镰孢霉病病害。
(2)喜仙人掌毕赤酵母BY35对葡萄果实炭疽病的抑制效果
如图4所示，对照组葡萄果实炭疽病的发病率为100％，经过喜仙人掌毕赤酵母BY35处理的葡萄果实炭疽病发病率为60％，因此喜仙人掌毕赤酵母BY35能够有效控制葡萄果实炭疽病害。
实施实例5喜仙人掌毕赤酵母BY35对柑橘青霉病的抑制效果
1.实验方案
将喜仙人掌毕赤酵母BY35从-80℃冰箱取出，用YPDA培养基(酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂18g，去离子水1000ml，自然pH，121℃灭菌30min)活化，挑取单菌落至YPD液体培养基里，于26℃、200r/min条件下培养24h，4000rpm离心5min，弃上清，收集的菌体用无菌水反复清洗3次，血球计数板计数配成配制成浓度为1×108细胞/mL的喜仙人掌毕赤酵母BY35菌悬液。
将青霉病菌(Penicillium italicum)在PDA培养基平板上激活，26℃下培养7～14d，刮取适量孢子，用无菌水配制成浓度为5×104细胞/mL的青霉病菌孢子悬浮液。
将健康无损的草莓果实用2％次氯酸钠消毒5min，用去离子水冲洗，晾干，用无菌打孔器在果实赤道处打1个孔，表面伤口为2mm(直径)×2mm(深)。每个伤口处等量加入20μL以下处理液：(1)1×108细胞/mL的喜仙人掌毕赤酵母BY35菌悬液；(2)无菌蒸馏水。4h后接种20μL青霉病菌孢子悬浮液。晾干后，将果实放入塑料箱，保持相对湿度95％，置于室温(25℃)4天后记录果实发病率，以此评价喜仙人掌毕赤酵母BY35的抑菌效果。发病率的计算公式为：发病率(％)＝发病的果实/果实总数×100％。
2.试验结果
按照上述步骤试验，统计柑橘果实的发病率结果如图5所示，对照组柑橘果实青霉病发病率为73％，经过喜仙人掌毕赤酵母BY35处理的柑橘果实青霉病发病率为15.3％，因此喜仙人掌毕赤酵母BY35能够有效控制柑橘果实青霉病病害。

Claims (6)

1.一株用于水果采后病害生物防治的喜仙人掌毕赤酵母Pichia cactophila菌株BY35及其使用方法，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏菌株编号为CGMCC No.14909。
2.权利要求1所述的喜仙人掌毕赤酵母BY35菌株进行水果采后病害防治和贮藏保鲜的方法，其特征在于按照以下步骤进行：将葡萄酒有孢汉生酵母活化，用YPD液体培养基发酵培养，离心得到菌体，将菌体用无菌水配制成浓度为1×108细胞/mL的菌悬液；将水果放入菌悬液中，浸泡30秒后取出，风干；放入保鲜盒中，密封后，放入常温贮藏。
3.根据权利要求2所述的水果采后病害防治和贮藏保鲜的方法，其特征在于，其中所述水果为苹果、梨、葡萄和柑橘。
4.根据权利要求1所述的喜仙人掌毕赤酵母BY35的制备方法，其特征在于，将菌株从-80℃冰箱取出，用YPDA培养基活化，挑取单菌落至YPD液体培养基里，于26℃、200r/min条件下培养24h，4000rpm离心5min收集菌体，用无菌水洗3遍。
5.根据权利要求4所述的喜仙人掌毕赤酵母BY35的制备方法，其特征在于所述YPDA培养基是：酵母浸粉10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，琼脂18g，去离子水1000ml，自然pH，121℃灭菌30min。
6.一种如权利要求1所述的喜仙人掌毕赤酵母BY35的用途，其特征在于：它用于同时控制苹果青霉病和灰霉病菌，梨果实青霉病和灰霉病菌，葡萄镰孢霉病和炭疽病，以及柑橘青霉病。
CN201711373888.3A 2017-12-15 2017-12-15 一株喜仙人掌毕赤酵母在水果采后病害防治中的应用 Active CN108118004B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711373888.3A CN108118004B (zh) 2017-12-15 2017-12-15 一株喜仙人掌毕赤酵母在水果采后病害防治中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711373888.3A CN108118004B (zh) 2017-12-15 2017-12-15 一株喜仙人掌毕赤酵母在水果采后病害防治中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108118004A true CN108118004A (zh) 2018-06-05
CN108118004B CN108118004B (zh) 2021-06-25

Family

ID=62230274

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711373888.3A Active CN108118004B (zh) 2017-12-15 2017-12-15 一株喜仙人掌毕赤酵母在水果采后病害防治中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108118004B (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107881122A (zh) * 2017-12-15 2018-04-06 北京工商大学 一株用于果蔬采后病害防治的葡萄酒酿酒酵母及其制备与使用方法
CN112111416A (zh) * 2020-06-10 2020-12-22 南京万拓生物科技有限公司 一株用于果酒全过程绿色生产的东方伊萨酵母及其应用
CN112143659A (zh) * 2020-06-10 2020-12-29 南京万拓生物科技有限公司 一株用于果酒全过程绿色生产的克鲁维毕赤酵母及其应用

Citations (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1302546A (zh) * 2001-03-01 2001-07-11 中国科学院植物研究所 一种防治果蔬采后软腐病的生物防治拮抗菌(bay－1)及技术使用方法
US20060148043A1 (en) * 2005-01-03 2006-07-06 Johannes Platzek Novel optically active, heteroaromatic beta-hydroxy esters and processes for their preparation from beta-keto esters and processes for the preparation of these beta-keto esters
CN1902322A (zh) * 2003-12-31 2007-01-24 舍林股份公司 旋光芳香杂环β－羟基酯、由β－酮基酯制备其的方法以及这些β－酮基酯的制备方法
CN1950508A (zh) * 2004-02-04 2007-04-18 株式会社Api 具有光学活性的醇和羧酸的制备方法
CN101153057A (zh) * 2006-09-27 2008-04-02 中国农业科学院植物保护研究所 一种提高植物抗性促进植物生长的蛋白质及其编码基因
CN101319195A (zh) * 2007-06-05 2008-12-10 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 一种炭疽杆菌γ噬菌体裂解酶的表达方法
CN101401597A (zh) * 2008-11-12 2009-04-08 北京工商大学 一种树莓的保鲜方法及采前保鲜剂
CN101412972A (zh) * 2006-12-07 2009-04-22 浙江大学 用于果蔬采后病害生物防治的海洋酵母及其制备方法和用途
CN101697750A (zh) * 2009-10-28 2010-04-28 江苏大学 一种用于防治水果采后病害的方法
CN101899400A (zh) * 2010-06-10 2010-12-01 江苏大学 卡利比克毕赤酵母、在水果贮藏保鲜中的应用及使用方法
CN102283281A (zh) * 2011-06-21 2011-12-21 江苏大学 一种提高毕赤酵母对水果采后病害生物防治效力的方法
WO2012076725A1 (de) * 2010-12-10 2012-06-14 Süd-Chemie AG Granulierte zeolithe mit hoher adsorptionskapazität zur adsorption von organischen molekülen
CN103340237A (zh) * 2013-06-25 2013-10-09 北京工商大学 一种蓝莓的减压贮藏保鲜方法
CN103340240A (zh) * 2013-07-08 2013-10-09 北京工商大学 一种鲜切胡萝卜的保鲜方法
CN103370419A (zh) * 2010-12-23 2013-10-23 科莱恩产品（德国）有限公司 通过发酵生物质和沸石催化用于制备有机化合物的方法
CN104489063A (zh) * 2015-01-09 2015-04-08 北京工商大学 一种延长欧洲李贮藏期的方法
CN105861340A (zh) * 2016-04-12 2016-08-17 江苏大学 一株控制柑橘和葡萄采后病害的盔形毕赤酵母
CN106231920A (zh) * 2014-02-21 2016-12-14 科莱恩产品 (德国) 公司 用于使油酶促脱胶的组合物
EP2510101B1 (de) * 2009-12-08 2017-09-27 Süd-Chemie IP GmbH & Co. KG Verfahren zur gewinnung von ethanol während einer fermentation
CN107460134A (zh) * 2017-06-29 2017-12-12 江苏大学 一株控制梨果采后病害的季也蒙毕赤酵母
EP3550007A1 (de) * 2018-04-03 2019-10-09 Versuchs- und Lehranstalt für Brauerei in Berlin e.V. Verfahren zur entfernung von ethanol aus einem alkoholhaltigen gärprodukt
US10704064B2 (en) * 2014-08-29 2020-07-07 Sk Innovation Co., Ltd. Recombinant yeast producing 3-hydroxypropionic acid and method for producing 3-hydroxypropionic acid using the same

Patent Citations (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1302546A (zh) * 2001-03-01 2001-07-11 中国科学院植物研究所 一种防治果蔬采后软腐病的生物防治拮抗菌(bay－1)及技术使用方法
CN1902322A (zh) * 2003-12-31 2007-01-24 舍林股份公司 旋光芳香杂环β－羟基酯、由β－酮基酯制备其的方法以及这些β－酮基酯的制备方法
CN1950508A (zh) * 2004-02-04 2007-04-18 株式会社Api 具有光学活性的醇和羧酸的制备方法
US20060148043A1 (en) * 2005-01-03 2006-07-06 Johannes Platzek Novel optically active, heteroaromatic beta-hydroxy esters and processes for their preparation from beta-keto esters and processes for the preparation of these beta-keto esters
CN101153057A (zh) * 2006-09-27 2008-04-02 中国农业科学院植物保护研究所 一种提高植物抗性促进植物生长的蛋白质及其编码基因
CN101412972A (zh) * 2006-12-07 2009-04-22 浙江大学 用于果蔬采后病害生物防治的海洋酵母及其制备方法和用途
CN101319195A (zh) * 2007-06-05 2008-12-10 中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所 一种炭疽杆菌γ噬菌体裂解酶的表达方法
CN101401597A (zh) * 2008-11-12 2009-04-08 北京工商大学 一种树莓的保鲜方法及采前保鲜剂
CN101697750A (zh) * 2009-10-28 2010-04-28 江苏大学 一种用于防治水果采后病害的方法
EP2510101B1 (de) * 2009-12-08 2017-09-27 Süd-Chemie IP GmbH & Co. KG Verfahren zur gewinnung von ethanol während einer fermentation
CN101899400A (zh) * 2010-06-10 2010-12-01 江苏大学 卡利比克毕赤酵母、在水果贮藏保鲜中的应用及使用方法
WO2012076725A1 (de) * 2010-12-10 2012-06-14 Süd-Chemie AG Granulierte zeolithe mit hoher adsorptionskapazität zur adsorption von organischen molekülen
CN103370419A (zh) * 2010-12-23 2013-10-23 科莱恩产品（德国）有限公司 通过发酵生物质和沸石催化用于制备有机化合物的方法
CN102283281A (zh) * 2011-06-21 2011-12-21 江苏大学 一种提高毕赤酵母对水果采后病害生物防治效力的方法
CN103340237A (zh) * 2013-06-25 2013-10-09 北京工商大学 一种蓝莓的减压贮藏保鲜方法
CN103340240A (zh) * 2013-07-08 2013-10-09 北京工商大学 一种鲜切胡萝卜的保鲜方法
CN106231920A (zh) * 2014-02-21 2016-12-14 科莱恩产品 (德国) 公司 用于使油酶促脱胶的组合物
US10704064B2 (en) * 2014-08-29 2020-07-07 Sk Innovation Co., Ltd. Recombinant yeast producing 3-hydroxypropionic acid and method for producing 3-hydroxypropionic acid using the same
CN104489063A (zh) * 2015-01-09 2015-04-08 北京工商大学 一种延长欧洲李贮藏期的方法
CN105861340A (zh) * 2016-04-12 2016-08-17 江苏大学 一株控制柑橘和葡萄采后病害的盔形毕赤酵母
CN107460134A (zh) * 2017-06-29 2017-12-12 江苏大学 一株控制梨果采后病害的季也蒙毕赤酵母
EP3550007A1 (de) * 2018-04-03 2019-10-09 Versuchs- und Lehranstalt für Brauerei in Berlin e.V. Verfahren zur entfernung von ethanol aus einem alkoholhaltigen gärprodukt

Non-Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BAITIAN XU等: ""Biocontrol of Postharvest Rhizopus Decay of Peaches with Pichia"", 《CURR MICROBIOL》 *
D. DE CLERCQ等: ""Development of a SCAR marker and a semi-selective medium for specific quantification of Pichia anomala strain K on apple fruit surfaces"", 《POSTHARVEST BIOLOGY AND TECHNOLOGY》 *
丁金凤等主编: "《基因分析和生物芯片技术》", 31 January 2004, 湖北科学技术出版社 *
李慧玲等: ""毕赤酵母Pichia anomala SRF对苹果采后青霉病的生防机制研究"", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库农业科技辑》 *
王友升著: "《拮抗酵母菌与果蔬采后病害防治》", 31 August 2012, 知识产权出版社 *
王晓峰等主编: "《园艺植物生物技术实验指导》", 30 September 2018, 西北农林科技大学出版社 *
郭普主编: "《植保大典》", 31 October 2006, 中国三峡出版社农业科教出版中心 *
黄雪梅等: ""拮抗酵母菌对沙糖桔采后绿霉病的抑制作用"", 《中国南方果树》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107881122A (zh) * 2017-12-15 2018-04-06 北京工商大学 一株用于果蔬采后病害防治的葡萄酒酿酒酵母及其制备与使用方法
CN112111416A (zh) * 2020-06-10 2020-12-22 南京万拓生物科技有限公司 一株用于果酒全过程绿色生产的东方伊萨酵母及其应用
CN112143659A (zh) * 2020-06-10 2020-12-29 南京万拓生物科技有限公司 一株用于果酒全过程绿色生产的克鲁维毕赤酵母及其应用
CN112143659B (zh) * 2020-06-10 2022-11-04 南京万拓生物科技有限公司 一株用于果酒全过程绿色生产的克鲁维毕赤酵母及其应用
CN112111416B (zh) * 2020-06-10 2022-11-04 南京万拓生物科技有限公司 一株用于果酒全过程绿色生产的东方伊萨酵母及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN108118004B (zh) 2021-06-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105505834B (zh) 一株防治梨轮纹病和软腐病的暹罗芽孢杆菌及其应用
CN107868759A (zh) 一株可有效防治果蔬采后病害的葡萄酒有孢汉生酵母及其制备与使用方法
CN107881121A (zh) 一株控制水果采后病害的酿酒酵母by23及其制备与使用方法
CN105936886B (zh) 一株防治梨轮纹病和软腐病的甲基营养型芽孢杆菌及其应用
CN107881122A (zh) 一株用于果蔬采后病害防治的葡萄酒酿酒酵母及其制备与使用方法
CN107904181B (zh) 一株用于果蔬采后病害防治的酿酒酵母by21及其制备与使用方法
CN105176831B (zh) 一种草酸青霉菌及其应用
CN108118004A (zh) 一株可有效防治水果采后病害的喜仙人掌毕赤酵母及其制备与使用方法
CN106929447A (zh) 地衣芽孢杆菌bl06及其应用
CN104988082A (zh) 一株汉逊德巴利酵母菌株及其应用
CN104946548A (zh) 一株酿酒酵母菌株及其应用
CN103614306A (zh) 一株酵母菌株及其应用
CN107904180A (zh) 一株用于果蔬采后病害防治的核果梅奇酵母及其制备与使用方法
CN107937290A (zh) 一株用于果蔬采后病害防治的拜耳接合酵母及其制备与使用方法
CN110591932B (zh) 一株控制果蔬采后病害的酵母菌ma及其使用方法
CN107828697A (zh) 一种多粘类芽孢杆菌af01及其应用
CN110628655B (zh) 一株控制果蔬采后病害的酵母菌Lg-3及其使用方法
CN112481141A (zh) 一株汉逊德巴利酵母菌株及其在制备水果保鲜剂中的应用
CN103952327B (zh) 防治果蔬采后病害的生物拮抗菌菌株、其制备方法及其应用
CN108913618B (zh) 一种解淀粉芽孢杆菌jspb14及其应用
CN110184194A (zh) 一株生防菌Simplicillium lamellicola JC-1及其应用
CN107937287A (zh) 一株拮抗酵母菌Candida anatomiae及其制备与使用方法
CN107988088A (zh) 一株拮抗酵母菌Pichia deserticola及其制备与使用方法
CN107937289A (zh) 一株拮抗酵母菌Pichia galeiformis及其制备与使用方法
CN104928198A (zh) 一株热带假丝酵母菌株及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB03 Change of inventor or designer information
CB03 Change of inventor or designer information

Inventor after: Wang Yousheng

Inventor after: Ren Xiangfeng

Inventor after: Ma Guowei

Inventor after: Huang Jinjin

Inventor after: Li Liping

Inventor before: Wang Yousheng

Inventor before: Ren Xiangfeng

Inventor before: Ma Guowei

Inventor before: Huang Jinjin

Inventor before: Li Liping

Inventor before: Wang Ying

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20210809

Address after: 276800 1st floor, building 2, new generation information technology industrial park, Rizhao hi tech Zone, Rizhao City, Shandong Province

Patentee after: Rizhao Huada Health Industry Research Institute

Address before: 100048, Fu Cheng Road, Beijing, Haidian District, No. 33

Patentee before: BEIJING TECHNOLOGY AND BUSINESS University

TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20210826

Address after: Room 1401, building D, 606 ningliu Road, Changlu street, Jiangbei new district, Nanjing, Jiangsu Province 210000

Patentee after: Nanjing Wantuo Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: 276800 1st floor, building 2, new generation information technology industrial park, Rizhao hi tech Zone, Rizhao City, Shandong Province

Patentee before: Rizhao Huada Health Industry Research Institute

TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20210929

Address after: 276800 1st floor, building 2, new generation information technology industrial park, Rizhao hi tech Zone, Rizhao City, Shandong Province

Patentee after: Shandong Kaipu fite Biotechnology Co.,Ltd.

Address before: Room 1401, building D, 606 ningliu Road, Changlu street, Jiangbei new district, Nanjing, Jiangsu Province 210000

Patentee before: Nanjing Wantuo Biotechnology Co.,Ltd.