CN108096453A - 一种复合菌种发酵黄精的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种复合菌种发酵黄精的制备方法,该方法采用复合菌种固态发酵菌种发酵,采用的复合菌种固态发酵菌种为:黄精变性青霉菌、黄精芽孢杆菌、产阮假丝酵母、植物乳杆菌、嗜热链球菌和双歧杆菌,原菌液的接种量为4%,本发明的有益效果:用复合菌发酵黄精,是一种全新中药炮制方法,它节约了大量的人力物力,而且极大提高了黄精的药效。由于黄精和复合菌的协同作用,因此复合菌发酵黄精其抗菌抗病毒以及抗肿瘤能力远远超过普通炮制品。
Description
技术领域
本发明涉及一种微生物繁殖过程中添加中药的发酵技术,具体是利用复合菌种发酵黄精生产发酵中药的一种生物技术。
背景技术
黄精是百合科黄精属多种植物的根茎,中国药典收载了黄精、囊丝黄精(多花黄精)或滇黄精的干燥根茎入药,黄精为临床常用药之一,传统医学认为黄精性平、味甘,入脾、肾、肺经,具有补肾益精、滋阴润燥等功效。生黄精具有麻味,生品服用时,口舌麻木,刺激咽喉。接触过生黄精或其汁液的皮肤会产生瘙痒的感觉,久闻其生味,有刺目之感。经过炮制后,消除其刺激性及副作用,糖性变浓裂,口感好,利于服用。黄精经炮制后转变药性,利于有效成分积累,其黏液质被破坏并去掉,使其滋而不腻,同时使黄精药效增强。自古就有黄精炮制入药的记载,明・《本草蒙筌》、《本草原始》及《景岳全书》中有“黄精去须,九蒸九晒用,每蒸一次,必半日方透的记载。 经对黄精历代炮制文献的研究可以看出,至清末,黄精的炮制方法多达十余种,但以蒸煮法为主,如有单蒸、重蒸、九蒸九曝、加辅料蒸制等。黄精蒸制的原始意图就是去除“刺人咽喉”的不良反应,蒸晒干还可使黄精“不尔朽坏”,增强“补养滋肾”的作用。现代的炮制方法中又增加了加辅料蒸等不同的工艺方法,临床多用酒蒸品或清蒸品,以酒蒸制居多,且用黄酒。这些炮制方法对黄精的成分和药效均产生了一定的影响。如由吕侠卿主编的《中药炮制大全》上收载熟黄精的炮制方法是将黄精蒸制内外黑色滋润、味甜无麻 味为度。酒黄精则是将黄精和黄酒以5∶1的比例拌匀,置炖药罐内,密闭,隔水加热,至酒吸尽,蒸至色黑,内滋润为度。传统的炮制方法不但浪费人力物力,而且也将黄精的部分有效成分消耗掉了。本发明创新的将复合菌发酵引入了黄精的加工炮制中,使用复合菌发酵将黄精中黏液质彻底消除掉,不仅最大限度的保留了黄精的有效成分,而且复合菌种中包含了从黄精中分离出来两种植物内生菌(变性青霉菌,芽孢杆菌)在繁殖过程中产生的很多具有类似黄精药物活性的产物,极大地提高了黄精的药效,使用这种复合菌发酵黄精节约了大量能源和时间,而且更加高效的利用了有限的黄精资源,实为黄精一种极佳的加工炮制方法。这一种发酵黄精工艺的推广能够带来很好的经济效益和社会效益。
发明内容
本发明提供一种微生物发酵黄精的技术,利用复合菌种发酵黄精生产微生物中药制剂,用微生物发酵黄精,生产出一种完全取代传统炮制黄精的发酵黄精制品,极大地提高了黄精的利用率和药效。
为了实现上述目的,本发明所采取的技术方案是:
一种用复合菌种发酵黄精生产微生物中药制剂,该发酵制剂的培养基中含有药用植物黄精的根茎。
一种复合菌种发酵黄精的制备方法,包括如下步骤:
(1)选料,采用复合菌种固态发酵菌种发酵,采用的复合菌种固态发酵菌种为:黄精变性青霉菌、黄精芽孢杆菌、产阮假丝酵母、植物乳杆菌、嗜热链球菌和双歧杆菌,原菌液的接种量为4%;
(2)发酵,将提纯后的黄精芽孢杆菌的原菌液,从斜面接入三角瓶中,振荡培养24小时;将提纯后黄精变性青霉菌和产阮假丝酵母的原菌液,从斜面接入三角瓶中,振荡培养48小时;将提纯后的植物乳杆菌、嗜热链球菌和双歧杆菌的原菌液,从斜面接入克氏瓶中,各三角瓶和克氏瓶中均设有培养基,温度控制30℃,培养24小时;发酵条件的控制采用厌氧发酵,温度30℃,发酵时间48~72小时,当PH值达到5.0时,即为发酵终点,在阳光房中晒干即可。
发酵中药培养基采用红糖、中药组分,各成分重量份数及加入比例是:红糖2~4%,磷酸二氢钾0.2~0.5%,酵母膏0.5~1%,黄精50~70%,余量为水,PH值自然,加热至30℃时接种,接种量为1~2% 。
各菌种的接种比例是:黄精变性青霉菌10~25%,黄精芽孢杆菌10~25%,产阮假丝酵母 10~25%,植物乳杆菌 10~25%,嗜热链球菌10~25%,双歧杆菌10~25%。
本发明,所述的各种菌的原菌种(除了两株黄精内生菌系在自己实验室分离的),均从中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)引进,确保了各菌种的存活和质量。
本发明的有益效果:用复合菌发酵黄精,是一种全新中药炮制方法,它节约了大量的人力物力,而且极大提高了黄精的药效。由于黄精和复合菌的协同作用,因此复合菌发酵黄精其抗菌抗病毒以及抗肿瘤能力远远超过普通炮制品。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步说明。
实施例一
选取中药黄精,将其切片备用。
发酵黄精的微生物原种的培养及种子液的培养:将提纯后的黄精变性青霉菌和产阮假丝酵母的原菌液,从斜面接入三角瓶中振荡培养48小时,将提纯后的黄精芽孢杆菌的原菌液,从斜面接入三角瓶中,振荡培养24小时,将提纯后的植物乳杆菌、嗜热链球菌和双歧杆菌的原菌液,从斜面接入克氏瓶中,温度控制在30℃,培养24小时,原菌液接种量为4%,按下述比例接种:
黄精变性青霉菌 25%
产阮假丝酵母 10%
黄精芽孢杆菌 25%
植物乳杆菌 10%
嗜热链球菌 20%
双歧杆菌 10%
发酵中药培养基的制备方法:
红糖2%,磷酸二氢钾0.2%,酵母膏0.5%,黄精60%,余量为水,PH值自然,加热至30℃时接种,接种量为1%。
发酵条件的控制
采用厌氧发酵,温度30℃,发酵时间48~72小时,当PH值达到5.0时,即为发酵终点。在阳光房中晒干即可。
实施例二
选取中药黄精,将其切片备用。
发酵黄精的微生物原种的培养及种子液的培养:将提纯后的黄精变性青霉菌和产阮假丝酵母的原菌液,从斜面接入三角瓶中振荡培养48小时,将提纯后的黄精芽孢杆菌的原菌液,从斜面接入三角瓶中,振荡培养24小时,将提纯后的植物乳杆菌、嗜热链球菌和双歧杆菌的原菌液,从斜面接入克氏瓶中,温度控制在30℃,培养24小时,原菌液接种量为4%,按下述比例接种:
黄精变性青霉菌 20%
产阮假丝酵母 20%
黄精芽孢杆菌 20%
植物乳杆菌 20%
嗜热链球菌 10%
双歧杆菌 10%
发酵中药培养基的制备方法:
红糖3%,磷酸二氢钾0.3%,酵母膏0.7%,黄精50%,余量为水,PH值自然,加热至30℃时接种,接种量为2%。
发酵条件的控制
采用厌氧发酵,温度30℃,发酵时间48~72小时,当PH值达到5.0时,即为发酵终点。在阳光房中晒干即可。
实施例三
选取中药黄精,将其切片备用。
发酵黄精的微生物原种的培养及种子液的培养:将提纯后的黄精变性青霉菌和产阮假丝酵母的原菌液,从斜面接入三角瓶中振荡培养48小时,将提纯后的黄精芽孢杆菌的原菌液,从斜面接入三角瓶中,振荡培养24小时,将提纯后的植物乳杆菌、嗜热链球菌和双歧杆菌的原菌液,从斜面接入克氏瓶中,温度控制在30℃,培养24小时,原菌液接种量为4%,按下述比例接种:
黄精变性青霉菌 25%
产阮假丝酵母 25%
黄精芽孢杆菌 20%
植物乳杆菌 10%
嗜热链球菌 10%
双歧杆菌 10%
发酵中药培养基的制备方法:
红糖4%,磷酸二氢钾0.5%,酵母膏1%,黄精70%,余量为水,PH值自然,加热至30℃时接种,接种量为2%。
发酵条件的控制
采用厌氧发酵,温度30℃,发酵时间48~72小时,当PH值达到5.0时,即为发酵终点。在阳光房中晒干即可。
黄精、普通炮制黄精、发酵法炮制黄精中黄精多糖含量测定
1材料与方法
1.1原辅材料及设备
原料:生黄精 (四川产,购于绵阳医药公司)
普通黄精炮制品 (四川产,购于绵阳医药公司)
发酵黄精(四川长重宝生物工程微生物实验室试制)
试剂:蒸馏水、乙醇(95%)、无水乙醇、丙酮、石油醚、无水乙醚、葡萄糖、苯酚、浓硫酸、氯仿(均为AR级)。
仪器设备:电子天平、DHG202型电热干燥箱、数显恒温水浴锅、TDL-5-A型离心机、721型分光光度计、植物组织粉碎机、索氏抽提器。
1.2实验方法
1.2.1黄精多糖提取工艺路线
样品→烘干→粉碎→乙醇脱单糖、低聚糖→药渣→水浸提→滤液→黄精多糖提取物。
1.2.2黄精多糖分析检测的标准曲线绘制
选择葡萄糖作为对照品,在波长400~650nm之间 分别测定5.0μg/ml和10.0μg/ml两种葡萄糖标准溶液的吸光度值。结果表明,两种标准溶液在波长490nm处均有最大吸收峰,故黄精多糖的检测可选取490nm波长作为测定波长。
葡萄糖标准曲线由苯酚—硫酸测定法确定。分别精密吸取1.0mg/ml葡萄糖标准溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml,并定容至100ml。各取配制的标准溶液2.0ml,分别精确加入5%的苯酚溶液1.0ml,摇匀;然后迅速加入浓硫酸5.0ml摇匀;再放置5min后置于沸水浴中加热15min,取出冷却15min后,在490nm处测定其吸光度值。另以2.0ml蒸馏水替代上述葡萄糖标准溶液作为空白对照,所得标准曲线的回归方程为:
Y=0.0136X-0.0258 (R2=0.9994)
1.2.3黄精多糖的精制及其换算因子的测定
用石油醚于80~90℃下回流脱去黄精粉末中的脂肪,直至石油醚溶剂液滴在滤纸上不出现油痕为止。蒸干溶剂后的药渣用80%的乙醇浸渍过夜,于80~90℃回流提取两次,过滤,将药渣用500ml蒸馏水90℃浸提1h,再用等量蒸馏水重复浸提30min,过滤后合并滤液,减压浓缩至150ml。用氯仿-正丁醇萃取多次,除去浓缩液中的蛋白质,并用1%的活性炭脱色2次,抽滤后的滤液加入95%乙醇使含醇量达80%,静置过夜后过滤,所得滤饼依次用95%乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤(约4次),真空干燥,得精制的黄精多糖。 黄精多糖换算因子的测定参照杨文远方法确定,所得换算因子F=1.946。
1.2.4黄精多糖提取率的测定
精密吸取一定量黄精多糖浸提液,加蒸馏水至2.0ml,按1.2.2的方法测其吸光度值,由下式计算黄精多糖提取率:
多糖提取率(%)=(C×D×1.946)/W×100%
式中C为由取样的黄精多糖浸提液的吸光度根据上述标准曲线回归方程求得的糖浓度(μg/ml),D为取样量(ml)与样品稀释倍数的乘积(ml),W为黄精原料的重量(μg)。
2结果与分析
各取3个样品100克, 按固液比1∶25,浸提温度90℃,浸提4个小时,然后测量计算黄精多糖含量。
由此实验结果可以看到,普通的炮制方法降低了黄精多糖的含量,使用复合菌发酵工艺炮制的黄精中所含黄精多糖含量比生品还高出了10.37%,可能是复合菌种所含黄精内生菌繁殖过程产生黄精多糖所致,运用此方法制备的黄精多糖含量更高,同时能够节约大量人力物力,值得推广。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解,本发明不受上述实施例的限制,上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理,在不脱离本发明精神和范围的前提下,本领域内普通的技术人员的简单更改和替换都是本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种用复合菌种发酵黄精生产微生物中药制剂,其特征在于,该发酵制剂的培养基中含有药用植物黄精的根茎。
2.一种复合菌种发酵黄精的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)选料,采用复合菌种固态发酵菌种发酵,采用的复合菌种固态发酵菌种为:黄精变性青霉菌、黄精芽孢杆菌、产阮假丝酵母、植物乳杆菌、嗜热链球菌和双歧杆菌,原菌液的接种量为4%;
(2)发酵,将提纯后的黄精芽孢杆菌的原菌液,从斜面接入三角瓶中,振荡培养24小时;将提纯后黄精变性青霉菌和产阮假丝酵母的原菌液,从斜面接入三角瓶中,振荡培养48小时;将提纯后的植物乳杆菌、嗜热链球菌和双歧杆菌的原菌液,从斜面接入克氏瓶中,各三角瓶和克氏瓶中均设有培养基,温度控制30℃,培养24小时;发酵条件的控制采用厌氧发酵,温度30℃,发酵时间48~72小时,当PH值达到5.0时,即为发酵终点,在阳光房中晒干即可。
3.根据权利要求2所述的一种复合菌种发酵黄精的制备方法,其特征在于,发酵中药培养基采用红糖、中药组分,各成分重量份数及加入比例是:红糖2~4%,磷酸二氢钾0.2~0.5%,酵母膏0.5~1%,黄精50~70%,余量为水,PH值自然,加热至30℃时接种,接种量为1~2% 。
4.根据权利要求2所述的一种复合菌种发酵黄精的制备方法,其特征在于,各菌种的接种比例是:黄精变性青霉菌10~25%,黄精芽孢杆菌10~25%,产阮假丝酵母 10~25%,植物乳杆菌 10~25%,嗜热链球菌10~25%,双歧杆菌10~25%。
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PB01 | Publication | ||
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CB02 | Change of applicant information | ||
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Address after: 621000 No. 8, Dalong village three, Qingyi Town, Fucheng District, Mianyang, Sichuan. Applicant after: Sichuan aibang Weiye Bioengineering Co., Ltd Address before: 621000 No. 8, Dalong village three, Qingyi Town, Fucheng District, Mianyang, Sichuan. Applicant before: SICHUAN CHANGZHONGBAO BIOLOGICAL ENGINEERING Co.,Ltd. |
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RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20180601 |