CN112656829A - 一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及植物天然产物制备技术领域，具体涉及一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法及其应用。提取方法包括以下依次进行的步骤：使用体积分数为70‑90％的乙醇溶液对药粉进行热浸提取；接下来使用蜡样芽胞杆菌发酵处理药渣，获得发酵终体系；再使用微波辅助对发酵体系中的功效成分进行提取，获得提取液Ⅱ和药渣Ⅱ；最后使用微波辅助对药渣Ⅱ进行提取，获得提取液Ⅲ。其中，提取液Ⅰ、提取液Ⅱ和提取液Ⅲ中分别含有三七总皂苷、三七总黄酮和三七总多糖，上述活性成分均具有较好的抗氧化活性。本方案的制备方法可以应用于抗氧化剂的制备的实践操作用，为相关药品和化妆品等的制备和研发提供性质优良的原材料。

Description

一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法及其 应用

技术领域

本发明涉及植物天然产物制备技术领域，具体涉及一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法及其应用。

背景技术

药材三七为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根，具有良好的止血功效，促进各类血细胞分裂生长，能明显提高失血性贫血病理模型的血红细胞数量，对失血性贫血具有较好的治疗作用。三七总皂苷是三七中最主要的功效成分，得到了广泛的研究和临床应用。但是，三七药材中，值得进一步利用的功效成分远不止三七总皂苷，三七中还富含多糖和黄酮等物质，三七总多糖和三七总黄酮具有抗炎和抗氧化等功能。所以，在充分利用和提取三七总皂苷的同时，如何将三七总多糖和三七总黄酮也同时提取和利用。如何对三七药材资源实现综合利用，是近年来相关领域的从业人员和研究者一直想要解决的关键问题。

发明内容

本发明意在提供一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法，以解决三七药材未得到充分利用的技术问题。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法，包括以下依次进行的步骤：

三七总皂苷提取步骤：将三七药材粉碎后获得药粉，使用体积分数为70-90％的乙醇溶液对药粉进行热浸提取，经过滤获得提取液Ⅰ和药渣Ⅰ；

发酵步骤：使用蜡样芽胞杆菌发酵处理药渣Ⅰ，获得发酵终体系；

三七总黄酮提取步骤：在发酵终体系中加入乙醇，获得第二提取体系，乙醇在第二提取体系中的体积分数为20-30％；采用微波辅助提取的方法处理第二提取体系，然后过滤获得提取液Ⅱ和药渣Ⅱ；

三七总多糖提取步骤：使用体积分数为5-10％的乙醇溶液作为提取溶剂，采用微波辅助提取的方法处理药渣Ⅱ，然后过滤获得提取液Ⅲ。

本方案的原理及优点是：本方案使用三七的入药部位作为原材料，即三七的根部(Notoginseng Radix)，进行三七总皂苷、三七总黄酮和三七总多糖的提取。为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根。先使用高浓度的乙醇溶液将极性较强的三七总皂苷提取出来(存在于提取液Ⅰ)，然后利用微生物发酵的手段处理药渣Ⅰ使得药渣Ⅰ的细胞壁等成分一定程度上瓦解的同时，对药渣Ⅰ中黄酮和多糖进行生物转化，将其转化成为生物活性更强的形式。接下来使用微波辅助提取的方式，在中等浓度的乙醇溶液中，黄酮类物质被提取至提取液Ⅱ中。最后对药渣Ⅱ进行微波辅助提取，提取溶剂选用低浓度的乙醇溶液作为提取溶剂，最后获得富含三七总多糖的提取液Ⅲ。

在本方案中，利用三七总皂苷、三七总黄酮和三七总多糖的剂型不同，使用不同浓度的乙醇溶液依次进行目的成分的提取，可分别获取三七总皂苷提取物、三七总黄酮提取物和三七总多糖提取物。本方案可以实现对三七药材的充分利用，将三种药效物质有效地从三七药材中提取。

本方案采用了微生物发酵的手段，提升了提取效率和功效成分的生物活性。微生物能分泌活性较强的胞外酶，例如蛋白酶、淀粉酶、果胶酶、纤维素、糖苷酶等。三七的主要入药的部位是根，其组织细胞壁致密，含有纤维素及果胶等物质。利用微生物发酵产生的酶可以降解植物组织致密结构的大分子，提高细胞壁通透性，提高功效成分的提取率。当功效成分被提取并从包裹物中释放后，微生物以黄酮、多糖类物质为碳源，产生出相应的水解酶，达到生物转化作用，从而提升了总黄酮和总多糖的生物活性。

不同微生物的发酵处理，会对三七总黄酮和三七总多糖的活性造成一定影响。发明人研究发现，使用蜡样芽胞杆菌发酵药渣，获得的三七总黄酮和三七总多糖的活性均较为理想，但是，如果选用其他微生物对药渣进行发酵，获得的三七总黄酮和三七总多糖的生物活性不能够同时到达理想水平。

进一步，在三七总皂苷提取步骤中，热浸提取的温度为60-80℃，时长为3h；每1kg三七药材使用5-8L体积分数为70-90％的乙醇溶液；提取液Ⅰ经浓缩和干燥处理，获得三七总皂苷提取物。

采用上述技术方案，通过高浓度乙醇热浸提取，可以充分提取获得富含三七总皂苷的提取液，再进一步干燥浓缩处理，形成干粉状的三七总皂苷提取物，以便保存、运输和利用。

进一步，在发酵步骤中，在药渣Ⅰ中加入培养液和蜡样芽胞杆菌，获得发酵体系；所述发酵体系经培养后获得发酵终体系。

采用上述技术方案，通过发酵增加提取效率，并对功效成分进行生物转化。

进一步，所述培养液的成分为柠檬酸氢二铵1.50g/L、硫酸镁0.30g/L、磷酸氢二钾1.50g/L和乙酸钠4.00g/L；所述培养液的用量为每1kg三七药材使用3L培养液。

采用上述技术方案，上述培养液的成分和用量可较好地维持蜡样芽胞杆菌的活性。

进一步，蜡样芽胞杆菌在发酵体系中的质量百分数为8-12％。

采用上述技术方案，8-12％的微生物的用量可以对三七药材进行充分的发酵和生物转化。

进一步，在三七总黄酮提取步骤和三七总多糖提取步骤中，微波辅助提取的参数均为：功率200W、时长10-20min。

采用上述技术方案，上述微波提取条件可以对药材中的功效成分实现充分提取。

进一步，在三七总黄酮提取步骤中，所述提取液Ⅱ经离心、浓缩和干燥处理，获得三七总黄酮提取物。

采用上述技术方案，通过离心除去不能通过过滤除去的成分(例如菌体)，经浓缩和干燥获得干粉状的物质，以便保存、运输和利用。

进一步，在三七总多糖提取步骤中，体积分数为5-10％的乙醇溶液的用量为每1kg三七药材使用5-8L。

采用上述技术方案，上述用量的和浓度的乙醇溶液可实现对功效成分多糖的有效提取。

进一步，在三七总多糖提取步骤中，所述提取液Ⅲ经离心、浓缩和干燥处理，获得三七总多糖提取物。

采用上述技术方案，通过离心除去不能通过过滤除去的成分(例如菌体)，经浓缩和干燥获得干粉状的物质，以便保存、运输和利用。

进一步，一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法在制备抗氧化剂中的应用。

采用上述技术方案，本方案制备的三七总黄酮和三七总多糖具有良好的抗氧化活性，可以应用于制备相关药品、保健品和化妆品等的实践操作中。

具体实施方式

下面通过具体实施方式进一步详细说明：

实施例1

取三七药材1kg(三七干燥的根，水分含量控制在10％以下)粉碎后过40目，获得药粉。在药粉中加入体积分数为80％的乙醇溶液(在本方案中所有醇溶液的百分数都是指的体积百分数)，获得第一提取体系，70℃热浸提取3h。80％的乙醇溶液和三七药材的用量比为6L:1kg。然后过滤获得提取液Ⅰ和药渣Ⅰ。将提取液Ⅰ减压蒸发浓缩，然后冷冻干燥获得干粉状的三七总皂苷提取物。取药渣Ⅰ，并在药渣Ⅰ中加入培养液和蜡样芽胞杆菌，获得发酵体系。培养液的加入量为每1kg三七药材对应3L的培养液，蜡样芽胞杆菌的接种量(质量)为发酵体系的质量的10％(加入发酵体系的蜡样芽胞杆菌是经过扩大培养后过滤除去细菌扩大培养液的菌体干物质)。培养液的成分为柠檬酸氢二铵1.50g/L、硫酸镁0.30g/L、磷酸氢二钾1.50g/L和乙酸钠4.00g/L。将发酵体系放置于37℃恒温摇床(100rpm)中培养72h。结束上述发酵过程后，在发酵终体系中加入乙醇，获得第二提取体系。在第二提取体系中，乙醇的体积分数为20％。将第二提取体系加入微波提取罐中，微波辅助提取15min，参数为：功率200W、频率915MHz。然后过滤获得提取液Ⅱ和药渣Ⅱ。将提取液Ⅱ离心处理(8000rpm，30min)，取上清，并将上清减压蒸发浓缩至原体积的三分之一，然后冷冻干燥获得干粉状的三七总黄酮提取物。在药渣Ⅱ中加入体积分数为5％的乙醇溶液，5％的乙醇溶液的用量为每1kg三七药材使用6L体积分数为5％的乙醇溶液，获得第三提取体系。然后将第三提取体系加入微波提取罐中，微波辅助提取15min，参数为：功率200W、频率915MHz。然后过滤获得提取液Ⅲ，将提取液Ⅲ离心处理(8000rpm，30min)，取上清，并将上清减压蒸发浓缩至原体积的三分之一，然后冷冻干燥获得干粉状的三七总多糖提取物。

实施例2

取三七药材2kg(干燥的根，水分含量控制在10％以下)粉碎后过40目，获得药粉。在药粉中加入体积分数为70％的乙醇溶液，获得第一提取体系，60℃热浸提取3h。70％的乙醇溶液和三七药材的用量比为5L:1kg。然后过滤获得提取液Ⅰ和药渣Ⅰ。将提取液Ⅰ减压蒸发浓缩，然后冷冻干燥获得干粉状的三七总皂苷提取物。取药渣Ⅰ，并在药渣Ⅰ中加入培养液和蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus

14579)，获得发酵体系。培养液的加入量为每1kg三七药材对应3L的培养液，蜡样芽胞杆菌的接种量(质量)为发酵体系的质量的8％(加入发酵体系的蜡样芽胞杆菌是经过扩大培养后过滤除去细菌扩大培养液的菌体干物质)。培养液的成分为柠檬酸氢二铵1.50g/L、硫酸镁0.30g/L、磷酸氢二钾1.50g/L和乙酸钠4.00g/L。将发酵体系放置于37℃恒温摇床(100rpm)中培养72h。结束上述发酵过程后，获得发酵终体系，在发酵终体系中加入乙醇，获得第二提取体系。在第二提取体系中，乙醇的体积分数为20％。将第二提取体系加入微波提取罐中，微波辅助提取10min，参数为：功率200W、频率915MHz。然后过滤获得提取液Ⅱ和药渣Ⅱ。将提取液Ⅱ离心处理(8000rpm，30min)，取上清，并将上清减压蒸发浓缩至原体积的三分之一，然后冷冻干燥获得干粉状的三七总黄酮提取物。在药渣Ⅱ中加入体积分数为5％的乙醇溶液，5％的乙醇溶液的用量为每1kg三七药材使用5L体积分数为5％的乙醇溶液，获得第三提取体系。然后将第三提取体系加入微波提取罐中，微波辅助提取10min，参数为：功率200W、频率915MHz。然后过滤获得提取液Ⅲ，将提取液Ⅲ离心处理(8000rpm，30min)，取上清，并将上清减压蒸发浓缩至原体积的三分之一，然后冷冻干燥获得干粉状的三七总多糖提取物。

实施例3

取三七药材5kg(干燥的根，水分含量控制在10％以下)粉碎后过40目，获得药粉。在药粉中加入体积分数为90％的乙醇溶液，获得第一提取体系，80℃热浸提取2h。90％的乙醇溶液和三七药材的用量比为8L:1kg。然后过滤获得提取液Ⅰ和药渣Ⅰ。将提取液Ⅰ减压蒸发浓缩，然后冷冻干燥获得干粉状的三七总皂苷提取物。取药渣Ⅰ，并在药渣Ⅰ中加入培养液和蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus

14579)，获得发酵体系。培养液的加入量为每1kg三七药材对应3L的培养液，蜡样芽胞杆菌的接种量(质量)为发酵体系的质量的12％(加入发酵体系的蜡样芽胞杆菌是经过扩大培养后过滤除去细菌扩大培养液的菌体干物质)。培养液的成分为柠檬酸氢二铵1.50g/L、硫酸镁0.30g/L、磷酸氢二钾1.50g/L和乙酸钠4.00g/L。将发酵体系放置于37℃恒温摇床(100rpm)中培养72h。结束上述发酵过程后，获得发酵终体系，在发酵终体系中加入乙醇，获得第二提取体系。在第二提取体系中，乙醇的体积分数为30％。将第二提取体系加入微波提取罐中，微波辅助提取20min，参数为：功率200W、频率915MHz。然后过滤获得提取液Ⅱ和药渣Ⅱ。将提取液Ⅱ离心处理(8000rpm，30min)，取上清，并将上清减压蒸发浓缩至原体积的三分之一，然后冷冻干燥获得干粉状的三七总黄酮提取物。在药渣Ⅱ中加入体积分数为10％的乙醇溶液，10％的乙醇溶液的用量为每1kg三七药材使用8L体积分数为10％的乙醇溶液，获得第三提取体系。然后将第三提取体系加入微波提取罐中，微波辅助提取20min，参数为：功率200W、频率915MHz。然后过滤获得提取液Ⅲ，将提取液Ⅲ离心处理(8000rpm，30min)，取上清，并将上清减压蒸发浓缩至原体积的三分之一，然后冷冻干燥获得干粉状的三七总多糖提取物。

对比例1

本对比例基本同实施例1，不同点在于，本对比例使用等量的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis，

6051)替换蜡样芽胞杆菌。

对比例2

本对比例基本同实施例1，不同点在于，本对比例使用等量的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae，

18824)替换蜡样芽胞杆菌。

对比例3

本对比例基本同实施例1，不同点在于，本对比例不使用微生物发酵的方法，具体为：

取三七药材(干燥的根，水分含量控制在10％以下)粉碎后过40目，获得药粉。在药粉中加入体积分数为80％的乙醇溶液，获得第一提取体系，70℃热浸提取3h。80％的乙醇溶液和三七药材的用量比为6L:1kg。然后过滤获得提取液Ⅰ和药渣Ⅰ。将提取液Ⅰ减压蒸发浓缩，然后冷冻干燥获得干粉状的三七总皂苷提取物。取药渣Ⅰ，在药渣Ⅰ中加入体积分数为20％的乙醇，20％的乙醇溶液的用量为每1kg三七药材使用6L体积分数为20％的乙醇溶液，获得第二提取体系。将第二提取体系加入微波提取罐中，微波辅助提取15min，参数为：功率200W、频率915MHz。然后过滤获得提取液Ⅱ和药渣Ⅱ。将提取液Ⅱ离心处理(8000rpm，30min)，取上清，并将上清减压蒸发浓缩至原体积的三分之一，然后冷冻干燥获得干粉状的三七总黄酮提取物。在药渣Ⅱ中加入体积分数为5％的乙醇溶液，5％的乙醇溶液的用量为每1kg三七药材使用6L体积分数为5％的乙醇溶液，获得第三提取体系。然后将第三提取体系加入微波提取罐中，微波辅助提取15min，参数为：功率200W、频率915MHz。然后过滤获得提取液Ⅲ，将提取液Ⅲ离心处理(8000rpm，30min)，取上清，并将上清减压蒸发浓缩至原体积的三分之一，然后冷冻干燥获得干粉状的三七总多糖提取物。

实验例1：功效成分含量测定

选用人参皂苷Rb1标准品、芦丁标准品、D(+)葡萄糖标准品制备标准曲线，采用现有技术的常规的分光光度法，检测和计算三七总皂苷、三七总黄酮和三七总多糖在三七总皂苷提取物、三七总黄酮提取物和三七总多糖提取物中的含量，以及三七总皂苷、三七总黄酮和三七总多糖的提取率。

三七总皂苷的检测

精密称取干燥至恒重的人参皂苷Rgl标准品5mg，加甲醇定容至5mL，作为对照品溶液。分别精密量取对照溶液40、60、80、100、120、140μL于具塞试管中，水浴挥干溶剂后，加入新配制的5％香草醛冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，于60℃恒温水浴15min后立即置于冷水中冷却，加入冰醋酸5mL，摇匀，放置10min，在波长545nm处测定吸光度值，以甲醇为试剂空白作参比。测定后，以皂苷质量浓度为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制标准曲线。将1mg三七总皂苷提取物溶于5ml甲醇中，获得待测样品。将1ml待测样品加入5％香草醛冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，于60℃恒温水浴15min后立即置于冷水中冷却，加入冰醋酸5mL，摇匀，放置10min，在波长545nm处测定吸光度值。根据待测样品的吸光光度值代入标准曲线，计算待测样品中三七总皂苷的浓度，进而换算得出三七总皂苷提取物中的三七总皂苷的质量。三七总皂苷的提取率＝三七总皂苷提取物中的三七总皂苷的质量/三七药材的质量×100％。三七总皂苷的纯度＝三七总皂苷提取物中的三七总皂苷的质量/三七总皂苷提取物的质量×100％。

三七总黄酮的检测

称量13.2mg芦丁标准品，用60％乙醇定容到25ml容量瓶作为标准溶液。准确吸取0，0.4，0.8，1.2，1.6，2.0ml芦丁标准溶液，放入10ml容量瓶内，分别加入2.0、1.6、1.2、0.8、0.4、0ml的60％乙醇溶液；再加入5％亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10％硝酸铝溶液0.5ml，放置6min后；加入4％氢氧化钠溶液4.0ml，加60％乙醇定容，摇匀后，放置15min；在510nm处测定吸光度。用60％乙醇溶液作为空白，用芦丁浓度作为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，制作标准曲线。将1mg三七总黄酮提取物溶于5ml60％乙醇中，获得待测样品。吸取待测样品1ml，放入10ml容量瓶内，用60％乙醇加到2.0ml；加入5％亚硝酸钠溶液0.5ml摇匀，放置6min；加入10％硝酸铝，溶液0.5ml，放置6min后；加入4％氢氧化钠溶液4.0ml，摇匀后，加60％乙醇定容，放置15min；在510nm处测定吸光度。根据标准曲线计算三七总黄酮提取物中三七总黄酮的质量。三七总黄酮的提取率＝三七总黄酮提取物中的三七总黄酮的质量/三七药材的质量×100％。三七总黄酮的纯度＝三七总黄酮提取物中的三七总黄酮的质量/三七总黄酮提取物的质量×100％。

三七总多糖的检测

精密称取105℃干燥至恒重的D(+)葡萄糖标准品0.2508g，置于250ml容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，配成1.003mg/ml的标准溶液，然后分别提取2.5ml、5ml、10ml、15ml、20ml标准溶液，置于100ml容量瓶中稀释至刻度，摇匀，配成系列标准溶液。分别准确移取lml系列标准溶液于具塞试管中，以lml蒸馏水作空白，每管再加入4ml蒽酮—硫酸试液，立即摇匀，置于冰水浴中，然后一起置于沸水浴中加热7min.之后用流动自来水迅速冷至室温，放置10min后，于620nm处测定吸光度。用葡萄糖浓度作为横坐标，纵坐标作为一定浓度下所对应的吸光度，制作标准曲线。将1mg三七总多糖提取物溶于5ml蒸馏水中，获得待测样品。准确移取lml待测样品于具塞试管中，每管再加入4ml蒽酮—硫酸试液，立即摇匀，置于冰水浴中，然后一起置于沸水浴中加热7min.之后用流动自来水迅速冷至室温，放置10min后，于620nm处测定吸光度。根据标准曲线计算三七总多糖提取物中三七总多糖的质量。三七总多糖的提取率＝三七总多糖提取物中的三七总多糖的质量/三七药材的质量×100％。三七总多糖的纯度＝三七总多糖提取物中的三七总多糖的质量/三七总多糖提取物的质量×100％。

按照上述方法对实施例1-3以及对比例1-3进行检测，结果如表1所示。

实验例2：自由基清除率实验

本实验例对实施例1-3和对比例1-3制备的三七总皂苷提取物、三七总黄酮提取物和三七总多糖提取物进行自由基清除实验。采用ABTS自由基清除法来测试上述物质的生物活性。该法是常见的评价药物的抗氧化活性的方法，原理为：含ABTS自由基的甲醇溶液呈深紫红色，并在734nm有最大吸收峰。向含ABTS自由基的甲醇溶液中加入待测样品，自由基被清除后，含ABTS自由基的甲醇溶液在734nm波长处的吸收值降低，从而计算该待测药物的自由基清除率，计算公式为：清除率(％)＝[1-A/A₀]×100％，其中，A₀表示含ABTS自由基的甲醇溶液的吸光光度值，A表示含ABTS自由基的甲醇溶液中加入待测样品后的吸光光度值。ABTS自由基用K₂S₂O₈与ABTS(2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)直接反应生成。具体的操作流程为：将7.4mmol/L的ABTS溶液2ml和2.6mmol/L的K₂S₂O₈溶液0.2ml混合，室温条件下在暗室中放置12h，然后用甲醇稀释50倍获得工作液。取0.8ml工作液，加入0.2ml甲醇，混合均匀后静置10min，测734nm吸光光度，获得A₀。取0.8ml工作液，加入0.2ml待测样品(三七总皂苷待测样品、三七总黄酮待测样品和三七总多糖待测样品)，混合均匀后静置10min，测734nm吸光光度，获得A。三七总皂苷待测样品的配置方法为：将实施例1-3和对比例1-3制备的三七总皂苷提取物0.2mg溶于1ml的甲醇中。三七总黄酮待测样品的配置方法为：将实施例1-3和对比例1-3制备的三七总黄酮提取物0.2mg溶于1ml的60％乙醇中。三七总多糖待测样品的配置方法为：将实施例1-3和对比例1-3制备的三七总多糖提取物0.2mg溶于1ml的蒸馏水中。待测样品进行自由基清除率检测，每个待测样品重复3次，实验结果如表1所示。

表1：提取物含量测定以及功效测定结果

对比例3没有使用微生物辅助提取，三七总黄酮和三七总多糖各自的提取率和抗氧化活性均不理想。对比例1和2使用了其他种类的微生物来发酵药渣，虽然三七总黄酮和三七总多糖的提取率和实施例1-3没有很大的区别，但是，获得的黄酮或者多糖的抗氧化活性出现了下降的现象。这说明了使用不同微生物的发酵处理，会对三七总黄酮和三七总多糖的活性造成一定影响。使用微生物发酵提取药材功效成分的原理包括：微生物能分泌活性较强的胞外酶，例如蛋白酶、淀粉酶、果胶酶、纤维素、糖苷酶等。三七的主要入药的部位是根，其组织细胞壁致密，含有纤维素及果胶等物质。利用微生物发酵产生的酶可以降解植物组织致密结构的大分子，提高细胞壁通透性，提高功效成分的提取率。当功效成分被提取并从包裹物中释放后，微生物以黄酮、多糖类物质为碳源，产生出相应的水解酶，达到生物转化作用，从而促进总黄酮和总多糖的生物活性。在本方案中，发明人对大量发酵菌进行研究，发现蜡样芽胞杆菌、枯草芽孢杆菌和酿酒酵母都可以有效地降解植物细胞壁，并同时提高功效成分的提取率。但是，只有在使用蜡样芽胞杆菌的时候，其对总黄酮和总多糖的生物转化效果最好。枯草芽孢杆菌对总多糖的生物转化效果较好，酿酒酵母对总黄酮的生物转化效果较好。

以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体技术方案和/或特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明技术方案的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法，其特征在于，包括以下依次进行的步骤：

三七总皂苷提取步骤：将三七药材粉碎后获得药粉，使用体积分数为70-90％的乙醇溶液对药粉进行热浸提取，经过滤获得提取液Ⅰ和药渣Ⅰ；

发酵步骤：使用蜡样芽胞杆菌发酵处理药渣Ⅰ，获得发酵终体系；

三七总黄酮提取步骤：在发酵终体系中加入乙醇，获得第二提取体系，乙醇在第二提取体系中的体积分数为20-30％；采用微波辅助提取的方法处理第二提取体系，然后过滤获得提取液Ⅱ和药渣Ⅱ；

三七总多糖提取步骤：使用体积分数为5-10％的乙醇溶液作为提取溶剂，采用微波辅助提取的方法处理药渣Ⅱ，然后过滤获得提取液Ⅲ。

2.根据权利要求1所述的一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法，其特征在于，在三七总皂苷提取步骤中，热浸提取的温度为60-80℃，时长为3h；每1kg三七药材使用5-8L体积分数为70-90％的乙醇溶液；提取液Ⅰ经浓缩和干燥处理，获得三七总皂苷提取物。

3.根据权利要求2所述的一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法，其特征在于，在发酵步骤中，在药渣Ⅰ中加入培养液和蜡样芽胞杆菌，获得发酵体系；所述发酵体系经培养后获得发酵终体系。

4.根据权利要求3所述的一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法，其特征在于，所述培养液的成分包括柠檬酸氢二铵1.50g/L、硫酸镁0.30g/L、磷酸氢二钾1.50g/L和乙酸钠4.00g/L；所述培养液的用量为每1kg三七药材使用3L培养液。

5.根据权利要求4所述的一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法，其特征在于，蜡样芽胞杆菌在发酵体系中的质量百分数为8-12％。

6.根据权利要求5所述的一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法，其特征在于，在三七总黄酮提取步骤和三七总多糖提取步骤中，微波辅助提取的参数均为：功率200W、时长10-20min。

7.根据权利要求6所述的一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法，其特征在于，在三七总黄酮提取步骤中，所述提取液Ⅱ经离心、浓缩和干燥处理，获得三七总黄酮提取物。

8.根据权利要求7所述的一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法，其特征在于，在三七总多糖提取步骤中，体积分数为5-10％的乙醇溶液的用量为每1kg三七药材使用5-8L。

9.根据权利要求8所述的一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法，其特征在于，在三七总多糖提取步骤中，所述提取液Ⅲ经离心、浓缩和干燥处理，获得三七总多糖提取物。

10.根据权利要求9所述的一种同时提取三七皂苷、三七黄酮和三七多糖的方法在制备抗氧化剂中的应用。