CN108095125A - 一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品及其制备方法，该多肽保健食品由以下重量份的原料组成：鮸鱼鱼鳔多肽85‑95份、丹参提取物3‑10份、维生素0.5‑2份、大豆异黄酮0.1‑0.5份。多肽保健食品的制备方法为：取配方量的维生素、丹参提取物和大豆异黄酮溶解于乙醇溶液中，再取配方量鮸鱼鱼鳔多肽于双蒸水中混均，再加入上述乙醇溶液混匀，喷雾干燥，制成胶囊，包装、检验，即得鱼鳔多肽保健食品。有益效果为：本发明鱼鳔多肽保健食品配伍合理，安全、无毒副作用，保肝护肝作用显著，可作为肝病患者的日常保健产品，亦可作为术后肝病病人的医用食品；该保健食品的制备方法科学合理，操作简单，易于工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于保健食品技术领域，具体涉及一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品及其制备方法。
背景技术
肝脏是人体代谢过程的关键器官，发挥合成、分解以及转化等多个方面的作用。在体内外多种因素的刺激下，如机体代谢产生的各种毒素会导致肝脏急性、慢性损伤，在严重的情况下甚至会发生肝脏坏死。肝病临床上分为急性和慢性肝病，病人常表现出四肢乏力、食欲不振、精神萎靡等症状，若不能及时救治，会进一步发展为肝功能衰竭、肝硬化、肝癌等，已成为威胁人类健康的主要疾病之一。目前对于肝病的防治也被全世界所关注，但尚未阐明急性、慢性肝损伤的发病机制。针对肝病治疗的药物繁多，西药有多烯磷脂酰胆碱、硫普罗宁、干扰素等，中药主要有水飞蓟素、氧化苦参碱、丹参等。但多数具有较强的副作用，限制其使用范围。因此，寻找和开发药效持久、低毒安全的保肝护肝药物是目前研究的重要方向。
鮸鱼（Miichthys miiuy），又称米鱼、鳘鱼，属鲈形目石首鱼科。鮸鱼鱼鳔脂肪含量低，主要成分是生物大分子胶原蛋白质等活性物资，易于被人体消化吸收和利用，从而改善组织营养状况和加速新陈代谢，影响某些特定组织生理机能，促进生长发育增强抗病能力，起到延缓衰老和抵御癌症的效能。现在市场上鱼螺的应用主要是烹饪和干制品加工为主，干制生产的鱼螺附加值低，并且有明显的地域化特点，主要集中在沿海地区，而内地少有食用，从一定程度上制约了鱼鳔的销售，经济价值有限，因此研究出一种可行的鱼鳔深加工技术成为当务之急。而以鮸鱼鱼鳔为原料，利用酶解技术制备鮸鱼鱼鳔保肝护肝作用的多肽，并复配以其他功能成分，制备一种鮸鱼鱼鳔多肽保健食品的工艺研究处于空白阶段。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品，该保健食品配伍合理，安全、无毒副作用，并且具有良好的保肝护肝的功效，保健食品的药理活性较强，可作为肝病患者的日常保健产品，亦可作为术后肝病病人的医用食品。
本发明的目的之二在于提供一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品的制备方法，该制备方法科学合理，操作简单，易于工业化生产。
本发明针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品，其由以下重量份的原料组成：鮸鱼鱼鳔多肽85-95份、丹参提取物3-10份、维生素0.5-2份、大豆异黄酮0.1-0.5份。上述鱼鳔多肽保健食品配伍合理，安全、无毒副作用，并且保肝护肝作用显著，可作为肝病患者的日常保健产品，亦可作为术后肝病病人的医用食品。
优选的，一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品，其由以下重量份的原料组成：鮸鱼鱼鳔多肽88-90份、丹参提取物4-6份、维生素1.0-1.5份、大豆异黄酮0.2-0.3份。
进一步优选的，一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品，其由以下重量份的原料组成：鮸鱼鱼鳔多肽90份、丹参提取物5份、维生素1.0份、大豆异黄酮0.3份。
进一步优选的，维生素中维生素B和维生素C的重量比为1:0.83-1.23，维生素C中含有0.036-0.048%的D-抗坏血酸，上述维生素可有效恢复肝硬化患者血液指标，能促进肝功能的恢复，有利于肝细胞恢复正常生理功能，在治疗肝损伤性疾病中具有良好疗效，D-抗坏血酸的加入能协同丹参酮提取物中的其他成分促进隐丹参酮向丹参酮IIA转化，且能增加丹参酮I和丹参酮IIA的蛋白结合点，从而减少游离型的药物，增强保健食品的药理活性。
优选的，鮸鱼鱼鳔多肽的制备方法为：
步骤1：鮸鱼鱼鳔剪成小块儿，按料液比1:10-15（w/v）加入0.08-0.12M的NaOH溶液浸泡，每3-6h更换一次溶液，更换2-3次，过滤，然后用冷蒸馏水洗至中性，接着按照料液比1:10-15（w/v）浸泡于80-90%的乙醇溶液中脱脂10-15h，每3-4h更换一次溶液，最后用冷蒸馏水洗至中性，匀浆，得脱脂鮸鱼鱼鳔，该步骤能彻底除去鱼鳔的脂肪组织脱脂，降低鱼鳔蛋白的提取难度，无试剂残留，还能除去非胶原蛋白的杂蛋白，提高所得鱼鳔多肽的纯度，且该处理方法对斗鱼鳔中的其他成分及功效无任何影响；
步骤2：按料液比1:20-25（w/v）向匀浆鱼鳔中加入pH为9.5-10.5的甘氨酸-NaOH缓冲液，混合均匀，然后在45-50℃水浴中预热10-15min，再按匀浆鱼鳔重量的1.0-1.5%加入酶活力≥1.9×104U/g的碱性蛋白酶，然后在45-50℃下酶解4-6h，接着在10000-15000rmp下离心15-25min，收集上清液，即得碱性蛋白酶酶解液，上述碱性蛋白酶能有效的从鱼鳔中提取出高活性的活性多肽，提高蛋白质的转化率，使得活性多肽的得率高，反应条件温和，成本较低，安全性高，不仅不会破坏活性多肽的成分和活性，而且能改善活性多肽的品质；
步骤3：调节碱性蛋白酶酶解液的pH至6.0-7.5，按原料重量的1.0-1.5%加入酶活力≥1.0×105U/g的中性蛋白酶，然后在45-50℃下酶解3-6h后升温至90-95℃，保持灭酶10-15min，得酶解液，依次采用双酶对鮸鱼鱼鳔进行酶解，能够使酶切作用位点被完全打开后，使具有保肝护肝作用的鮸鱼鱼鳔多肽得到有效释放，提高鮸鱼鱼鳔多肽的得率；
步骤4：酶解液过截留分子量为4-6kDa的超滤膜，收集小于4-6kDa组分，经活性炭色谱柱精制、脱盐、喷雾干燥，即为鮸鱼鱼鳔多肽，该鱼鳔多肽不仅能通过抗氧化作用使脂质过氧化反应受到抑制，减轻了对生物膜的损坏，使肝细胞的变性和坏死程度减轻，从而达到保护肝脏的效果，而且能有效修复肝细胞、促进肝细胞再生，具有保肝护肝的功效，这对于预防和降低肝病具有重大的意义。
作为优选，步骤1中鮸鱼为史氏鲟（Miichthysmiiuy）。
作为优选，步骤4中活性炭色谱柱精制、脱盐的具体过程为：按照活性炭色谱柱体积的1:15-20将小于4-6kDa超滤组分加入到色谱柱中，用双蒸水洗脱2-3个体积后，收集洗脱液，洗脱液按照大孔树脂柱体积的1:15-20加入到大孔树脂柱，用双蒸水洗脱1-2个体积后，然后用70-80%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经喷雾干燥得鮸鱼鱼鳔多肽。
作为优选，鱼鳔多肽的平均分子量为450.0-750.0Da，其支链氨基酸（Leu、Ile和Val，简称BCAA）与芳香族氨基酸（Phe、Ser和Trp，简称AAA）的物质的量比值为25-30:1，支链氨基酸不仅有较好的抗氧化效果，还有良好的保肝功能，鱼鳔多肽中高比例的支链氨基酸在保肝护肝中发挥了重要的作用。
作为优选，丹参提取物的制备方法为：
步骤1：丹参粉碎后按照料液比1:10-15（w/v）加入68-73%乙醇溶液，在超声功率为110-150W的条件下超声提取1.0-1.5h，利用旋转蒸发仪脱除乙醇，得丹参提取液；
步骤2：丹参提取液按照AB-8大孔树脂柱体积的10-15倍加入到色谱柱内，用双蒸水洗脱1-2个体积后，然后用70-80%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪脱除乙醇、干燥得丹参提取物，丹参提取物能抑制肝星状细胞胞内信号转导及其受体蛋白的表达，诱导肝星状细胞的调亡，进而发挥抗肝纤维化作用，同时可降低肝损伤血清中ALT、AST和肝组织匀浆中丙二醛的含量，通过清除氧自由基、发挥抗氧化、减轻脂质过氧化损伤的作用来保护肝脏。
一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品的制备方法，具体包括以下步骤：
取配方量的维生素、丹参提取物和大豆异黄酮溶解于92-98%的乙醇溶液中，备用，再取配方量鮸鱼鱼鳔多肽于双蒸水中混均，再加入上述乙醇溶液混匀，喷雾干燥，粉末上胶囊填充机进行充填，制成0.3-0.8g/粒的胶囊，经包装、成品检验，即得鱼鳔多肽保健食品，该保健食品的制备方法科学合理，操作简单，易于工业化生产，制备的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品可单独制备成药学上可接受的制剂，亦可与药学或食品工业中可接受的辅料制成制剂。
与现有技术相比，本发明的优点在于：1）本发明鱼鳔多肽保健食品安全、无毒副作用，并且保肝护肝作用显著，可作为肝病患者的日常保健产品，亦可作为术后肝病病人的医用食品；2）本发明通过碱性蛋白酶、中性蛋白酶酶解并融合活性炭和大孔树脂等色谱技术制备鮸鱼鱼鳔多肽，酶解过程易监控，使具有保肝护肝作用的鮸鱼鱼鳔多肽有效释放，提高鮸鱼鱼鳔多肽的得率；3）本发明采用鮸鱼鱼鳔为原料生产鱼鳔多肽，弥补了行业空白，为鱼鳔的深加工提供了一种切实可行的工艺技术；4）本发明制备方法科学合理，操作简单，易于工业化生产，制备的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品可单独制备成药学上可接受的制剂，亦可与药学或食品工业中可接受的辅料制成制剂。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明方案作进一步说明：
实施例1：
一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品，其由以下重量份的原料组成：鮸鱼鱼鳔多肽85份、丹参提取物10份、维生素0.5份、大豆异黄酮0.5份。上述维生素中维生素B和维生素C的重量比为1:0.83，维生素C中含有0.036%的D-抗坏血酸。
上述鮸鱼鱼鳔多肽的制备方法为：
步骤1：鮸鱼鱼鳔剪成小块儿，按料液比1:12（w/v）加入0.08M的NaOH溶液浸泡，每4h更换一次溶液，更换3次，过滤，然后用冷蒸馏水洗至中性，接着按照料液比1:12（w/v）浸泡于80%的乙醇溶液中脱脂10h，每4h更换一次溶液，最后用冷蒸馏水洗至中性，匀浆，得脱脂鮸鱼鱼鳔，该步骤能彻底除去鱼鳔的脂肪组织脱脂，降低鱼鳔蛋白的提取难度，无试剂残留，还能除去非胶原蛋白的杂蛋白，提高所得鱼鳔多肽的纯度，且该处理方法对斗鱼鳔中的其他成分及功效无任何影响；
步骤2：按料液比1:25（w/v）向匀浆鱼鳔中加入pH为9.5的甘氨酸-NaOH缓冲液，混合均匀，然后在50℃水浴中预热10min，再按匀浆鱼鳔重量的1.5%加入酶活力≥1.9×104U/g的碱性蛋白酶，然后在50℃下酶解4h，接着在15000rmp下离心15min，收集上清液，即得碱性蛋白酶酶解液，上述碱性蛋白酶能有效的从鱼鳔中提取出高活性的活性多肽，提高蛋白质的转化率，使得活性多肽的得率高，反应条件温和，成本较低，安全性高，不仅不会破坏活性多肽的成分和活性，而且能改善活性多肽的品质；
步骤3：调节碱性蛋白酶酶解液的pH至7.5，按原料重量的1.0%加入酶活力≥1.0×105U/g的中性蛋白酶，然后在50℃下酶解4h后升温至95℃，保持灭酶10min，得酶解液；
步骤4：酶解液过截留分子量为4kDa的超滤膜，收集小于4kDa组分，经活性炭色谱柱精制、脱盐、喷雾干燥，即为鮸鱼鱼鳔多肽。
上述步骤1中鮸鱼为史氏鲟（Miichthysmiiuy）；步骤4中活性炭色谱柱精制、脱盐的具体过程为：按照活性炭色谱柱体积的1:15将小于4kDa超滤组分加入到色谱柱中，用双蒸水洗脱3个体积后，收集洗脱液，洗脱液按照大孔树脂柱体积的1:15加入到大孔树脂柱，用双蒸水洗脱2个体积后，然后用70%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经喷雾干燥得鮸鱼鱼鳔多肽，鱼鳔多肽经SEC-HPLC试验表明：鱼鳔多肽的平均分子量为486.0Da，其支链氨基酸（Leu、Ile和Val，简称BCAA）与芳香族氨基酸（Phe、Ser和Trp，简称AAA）的物质的量比值为28.27:1。
上述丹参提取物的制备方法为：
步骤1：丹参粉碎后按照料液比1:15（w/v）加入68%乙醇溶液，在超声功率为150W的条件下超声提取1.0h，利用旋转蒸发仪脱除乙醇，得丹参提取液；
步骤2：丹参提取液按照AB-8大孔树脂柱体积的15倍加入到色谱柱内，用双蒸水洗脱1个体积后，然后用80%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪脱除乙醇、干燥得丹参提取物。
一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品的制备方法，具体包括以下步骤：
取配方量的维生素、丹参提取物和大豆异黄酮溶解于92%的乙醇溶液中，备用，再取配方量鮸鱼鱼鳔多肽于双蒸水中混均，再加入上述乙醇溶液混匀，喷雾干燥，粉末上胶囊填充机进行充填，制成0.8g/粒的胶囊，经包装、成品检验，即得鱼鳔多肽保健食品。
实施例2：
一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品，其由以下重量份的原料组成：鮸鱼鱼鳔多肽85份、丹参提取物10份、维生素0.5份、大豆异黄酮0.5份。上述维生素中维生素B和维生素C的重量比为1:1.23，维生素C中含有0.048%的D-抗坏血酸。
上述鮸鱼鱼鳔多肽的制备方法为：
步骤1：鮸鱼鱼鳔剪成小块儿，按料液比1:10（w/v）加入0.12M的NaOH溶液浸泡，每3h更换一次溶液，更换3次，过滤，然后用冷蒸馏水洗至中性，接着按照料液比1:10（w/v）浸泡于90%的乙醇溶液中脱脂10h，每4h更换一次溶液，最后用冷蒸馏水洗至中性，匀浆，得脱脂鮸鱼鱼鳔；
步骤2：按料液比1:20（w/v）向匀浆鱼鳔中加入pH为10.5的甘氨酸-NaOH缓冲液，混合均匀，然后在45℃水浴中预热15min，再按匀浆鱼鳔重量的1.0%加入酶活力≥1.9×104U/g的碱性蛋白酶，然后在45℃下酶解6h，接着在10000rmp下离心25min，收集上清液，即得碱性蛋白酶酶解液；
步骤3：调节碱性蛋白酶酶解液的pH至6.0，按原料重量的1.5%加入酶活力≥1.0×105U/g的中性蛋白酶，然后在45℃下酶解6h后升温至90℃，保持灭酶15min，得酶解液；
步骤4：将酶解液过截留分子量为4kDa的超滤膜，收集小于6kDa组分，经活性炭色谱柱精制、脱盐、喷雾干燥，即为鮸鱼鱼鳔多肽。
上述步骤1中鮸鱼为史氏鲟（Miichthysmiiuy）；步骤4中活性炭色谱柱精制、脱盐的具体过程为：按照活性炭色谱柱体积的1:15将小于6kDa超滤组分加入到色谱柱中，用双蒸水洗脱2个体积后，收集洗脱液，洗脱液按照大孔树脂柱体积的1:20加入到大孔树脂柱，用双蒸水洗脱1个体积后，然后用80%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经喷雾干燥得鮸鱼鱼鳔多肽，鱼鳔多肽经SEC-HPLC试验表明：鱼鳔多肽的平均分子量为638.0Da，其支链氨基酸与芳香族氨基酸的物质的量比值为26.83:1。
上述丹参提取物的制备方法为：
步骤1：丹参粉碎后按照料液比1:10（w/v）加入73%乙醇溶液，在超声功率为110W的条件下超声提取1.5h，利用旋转蒸发仪脱除乙醇，得丹参提取液；
步骤2：丹参提取液按照AB-8大孔树脂柱体积的10倍加入到色谱柱内，用双蒸水洗脱2个体积后，然后用70%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪脱除乙醇、干燥得丹参提取物。
一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品的制备方法，具体包括以下步骤：
取配方量的维生素、丹参提取物和大豆异黄酮溶解于98%的乙醇溶液中，备用，再取配方量鮸鱼鱼鳔多肽于双蒸水中混均，再加入上述乙醇溶液混匀，喷雾干燥，粉末上胶囊填充机进行充填，制成0.3g/粒的胶囊，经包装、成品检验，即得鱼鳔多肽保健食品。
实施例3：
一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品，其由以下重量份的原料组成：鮸鱼鱼鳔多肽90份、丹参提取物5份、维生素1.0份、大豆异黄酮0.3份。上述维生素中维生素B和维生素C的重量比为1:1.0，维生素C中含有0.042%的D-抗坏血酸。
上述鮸鱼鱼鳔多肽的制备方法为：
步骤1：鮸鱼（Miichthysmiiuy）鱼鳔剪成小块儿（0.5×0.5cm），按料液比1:12（w/v）加入0.1M的NaOH溶液浸泡，每6h更换一次溶液，更换3次，过滤，然后用冷蒸馏水洗至中性，接着按照料液比1:12（w/v）浸泡于85%的乙醇溶液中脱脂12h，每4h更换一次溶液，最后用冷蒸馏水洗至中性，匀浆，得脱脂鮸鱼鱼鳔；
步骤2：按料液比1:25（w/v）向匀浆鱼鳔中加入pH为10.0的甘氨酸-NaOH缓冲液，混合均匀，然后在48℃水浴中预热15min，再按匀浆鱼鳔重量的1.5%加入酶活力≥1.9×104U/g的碱性蛋白酶，然后在48℃下酶解4h，接着在12000rmp下离心20min，收集上清液，即得碱性蛋白酶酶解液；
步骤3：调节碱性蛋白酶酶解液的pH至7.0，按原料重量的1.5%加入酶活力≥1.0×105U/g的中性蛋白酶，然后在45℃下酶解3h后升温至90℃，保持灭酶15min，得酶解液；
步骤4：酶解液过截留分子量为5kDa的超滤膜，收集小于5kDa组分，按照活性炭色谱柱体积的1:20将小于5kDa超滤组分加入到色谱柱中，用双蒸水洗脱3个体积后，收集洗脱液，洗脱液按照大孔树脂柱体积的1:20加入到大孔树脂柱，用双蒸水洗脱2个体积后，然后用75%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经喷雾干燥得鮸鱼鱼鳔多肽，鱼鳔多肽经SEC-HPLC试验表明：鱼鳔多肽的平均分子量为678.0Da，支链氨基酸（Leu、Ile和Val，简称BCAA）与芳香族氨基酸（Phe、Ser和Trp，简称AAA）的物质的量比值为27.43:1。
上述丹参提取物的制备方法为：
步骤1：丹参粉碎后按照料液比1:15（w/v）加入70%乙醇溶液，在超声功率为150W的条件下超声提取1.5h，利用旋转蒸发仪脱除乙醇，得丹参提取液；
步骤2：丹参提取液按照AB-8大孔树脂柱体积的15倍加入到色谱柱内，用双蒸水洗脱2个体积后，然后用75%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪脱除乙醇、干燥得丹参提取物。
一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品的制备方法，具体包括以下步骤：
取配方量的维生素、丹参提取物和大豆异黄酮溶解于95%的乙醇溶液中，备用，再取配方量鮸鱼鱼鳔多肽于双蒸水中混均，再加入上述乙醇溶液混匀，喷雾干燥，粉末上胶囊填充机进行充填，制成0.5g/粒的胶囊，经包装、成品检验，即得鱼鳔多肽保健食品。
实施例4：
一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品，其由以下重量份的原料组成：鮸鱼鱼鳔多肽90份、丹参提取物5份、维生素1.0份、大豆异黄酮0.3份。上述维生素中维生素B和维生素C的重量比为1:1.0，维生素C中含有0.042%的D-抗坏血酸。
上述鮸鱼鱼鳔多肽的制备方法为：
步骤1：鮸鱼（Miichthysmiiuy）鱼鳔剪成小块儿（0.5×0.5cm），按料液比1:12（w/v）加入0.1M的NaOH溶液浸泡，每6h更换一次溶液，更换3次，过滤，然后用冷蒸馏水洗至中性，接着按照料液比1:12（w/v）浸泡于85%的乙醇溶液中脱脂12h，每4h更换一次溶液，最后用冷蒸馏水洗至中性，匀浆，得脱脂鮸鱼鱼鳔；
步骤2：按料液比1:25（w/v）向匀浆鱼鳔中加入pH为10.0的甘氨酸-NaOH缓冲液，混合均匀，然后在48℃水浴中预热15min，再按匀浆鱼鳔重量的1.5%加入酶活力≥1.9×104U/g的碱性蛋白酶，然后在48℃下酶解4h，接着在12000rmp下离心20min，收集上清液，即得碱性蛋白酶酶解液；
步骤3：用苹果酸调节碱性蛋白酶酶解液的pH至7.0，按原料重量的1.5%加入酶活力≥1.0×105U/g的中性蛋白酶，然后在45℃下酶解2h后升温至90℃，保持灭酶15min，得酶解液，苹果酸中DL-苹果酸和D-苹果酸的重量比为100:0.3，该苹果酸能够有效调节碱性蛋白酶酶解液的pH，对酶解液中产物无不良影响，同时苹果酸中D-苹果酸的加入提高鱼鳔多肽中支链氨基酸与芳香族氨基酸的物质的量比值，最终提高保健食品的保肝护肝效果，且能够使中性蛋白酶保持其活性，使酶解反应能够始终保持初始速率，缩短酶解反应时间，鱼鳔的水解度，最终提高鱼鳔多肽的得率；
步骤4：酶解液过截留分子量为5kDa的超滤膜，收集小于5kDa组分，按照活性炭色谱柱体积的1:20将小于5kDa超滤组分加入到色谱柱中，用双蒸水洗脱3个体积后，收集洗脱液，洗脱液按照大孔树脂柱体积的1:20加入到大孔树脂柱，用双蒸水洗脱2个体积后，然后用75%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经喷雾干燥得鮸鱼鱼鳔多肽，鱼鳔多肽经SEC-HPLC试验表明：鱼鳔多肽的平均分子量为688.0Da，支链氨基酸与芳香族氨基酸的物质的量比值为28.59:1。
上述丹参提取物的制备方法为：
步骤1：丹参粉碎后按照料液比1:15（w/v）加入70%乙醇溶液，在超声功率为150W的条件下超声提取1.5h，利用旋转蒸发仪脱除乙醇，得丹参提取液；
步骤2：丹参提取液按照AB-8大孔树脂柱体积的15倍加入到色谱柱内，用双蒸水洗脱2个体积后，然后用75%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经旋转蒸发仪脱除乙醇、干燥得丹参提取物。
一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品的制备方法，具体包括以下步骤：
取配方量的维生素、丹参提取物和大豆异黄酮溶解于适量95%的乙醇溶液中，备用，再取配方量鮸鱼鱼鳔多肽于双蒸水中混均，再加入上述乙醇溶液混匀，喷雾干燥，粉末上胶囊填充机进行充填，制成0.5g/粒的胶囊，经包装、成品检验，即得鱼鳔多肽保健食品。
实施例5：
鮸鱼鱼鳔多肽保健食品对急性肝损伤的保护作用：
试验动物：SPF级雌性ICR小鼠，体重为19-21g。
试验环境条件：SPF屏障系统。
剂量选择及样品处理：选用实施例3产品，设低、中、高剂量分别为0.5g/kg·bw、1.0g/kg·bw、2.0g/kg·bw，低、中、高剂量受试液配置时，分别取软胶囊内容物1.65g、3.35g、10.0g加生理盐水定容至50mL，正常组予以等体积的生理盐水，每天灌胃一次，灌胃体积为0.1mL/10g·bw，连续30天。
试验方法：通过对小鼠形态、肝重指数、血清中ALT和AST活性、肝组织中GSH-Px和SOD活性及MDA含量的测定实验进行功能评定，具体试验结果数据如下表1、表2和表3所示。
表1 鮸鱼鱼鳔多肽保健食品对小鼠急性肝损伤肝重指数的影响（n=15）
表2 鮸鱼鱼鳔多肽保健食品对对小鼠急性肝损伤血清ALT、AST活性的影响（n=15）
表3 鮸鱼鱼鳔多肽保健食品对小鼠急性肝损伤肝组织中GSH-Px、SOD活性及MDA含量的影响（n=15）
由表1、表2和表可知：模型组小鼠精神状态萎靡，食欲减退，嗜睡象，小鼠血清中AST、ALT活性显著升高，肝组织匀浆中SOD、GSH-Px活性也明显降低，MDA含量大幅升高；服用鮸鱼鱼鳔多肽保健食品的样品组小鼠，神状态良好，体重的增加显著，明显降低肝损伤小鼠血清中AST、ALT活性，升高肝组织匀浆中SOD、GSH-Px活性，显著降低MDA含量。因此，实施例3鮸鱼鱼鳔多肽保健食品具有保肝护肝的功能，可作为肝病患者的日常保健产品，亦可作为术后肝病病人的医用食品。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品，其特征在于：所述多肽保健食品由以下重量份的原料组成：鮸鱼鱼鳔多肽85-95份、丹参提取物3-10份、维生素0.5-2份、大豆异黄酮0.1-0.5份。
2.根据权利要求1所述的一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品，其特征在于：所述多肽保健食品由以下重量份的原料组成：维生素中维生素B和维生素C的重量比为1:0.83-1.23。
3.根据权利要求2所述的一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品，其特征在于：所述维生素C中含有0.036-0.048%的D-抗坏血酸。
4.根据权利要求1所述的一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品，其特征在于：所述鮸鱼鱼鳔多肽的制备方法为：
步骤1：鮸鱼鱼鳔剪成小块儿，按料液比1:10-15（w/v）加入0.08-0.12M的NaOH溶液浸泡，每3-6h更换一次溶液，更换2-3次，过滤，然后用冷蒸馏水洗至中性，接着按照料液比1:10-15（w/v）浸泡于80-90%的乙醇溶液中脱脂10-15h，每3-4h更换一次溶液，最后水洗至中性，匀浆，得脱脂鮸鱼鱼鳔；
步骤2：按料液比1:20-25（w/v）向匀浆鱼鳔中加入pH为9.5-10.5的甘氨酸-NaOH缓冲液，混合均匀，然后在45-50℃水浴中预热10-15min，再按匀浆鱼鳔重量的1.0-1.5%加入碱性蛋白酶，然后在45-50℃下酶解4-6h，离心，收集上清液，即得碱性蛋白酶酶解液；
步骤3：调节碱性蛋白酶酶解液的pH至6.0-7.5，按原料重量的1.0-1.5%加入中性蛋白酶，然后在45-50℃下酶解3-6h后灭酶，得酶解液；
步骤4：酶解液过截留分子量为4-6kDa的超滤膜，收集小于4-6kDa组分，经活性炭色谱柱精制、脱盐、喷雾干燥，即为鮸鱼鱼鳔多肽。
5.根据权利要求4所述的鮸鱼鱼鳔多肽的制备方法，其特征在于：所述步骤1中鮸鱼为史氏鲟（Miichthy smiiuy）。
6.根据权利要求4所述的鮸鱼鱼鳔多肽的制备方法，其特征在于：所述步骤4中活性炭色谱柱精制、脱盐的具体过程为：按照活性炭色谱柱体积的1:15-20将小于4-6kDa超滤组分加入到色谱柱中，用双蒸水洗脱2-3个体积后，收集洗脱液，洗脱液按照大孔树脂柱体积的1:15-20加入到大孔树脂柱，用双蒸水洗脱1-2个体积后，然后用70-80%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，经喷雾干燥得鮸鱼鱼鳔多肽。
7.根据权利要求4所述的鮸鱼鱼鳔多肽的制备方法，其特征在于：所述鱼鳔多肽的平均分子量为450.0-750.0Da，所述鱼鳔多肽的支链氨基酸与芳香族氨基酸的物质的量比值为25-30:1。
8.根据权利要求1所述的一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品，其特征在于：所述丹参提取物的制备方法为：
步骤1：丹参粉碎后按照料液比1:10-15（w/v）加入68-73%乙醇溶液，在超声功率为110-150W的条件下超声提取1.0-1.5h，脱除乙醇，得丹参提取液；
步骤2：丹参提取液按照AB-8大孔树脂柱体积的10-15倍加入到色谱柱内，用双蒸水洗脱1-2个体积后，然后用70-80%乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，脱除乙醇、干燥得丹参提取物。
9.一种保肝护肝的鮸鱼鱼鳔多肽保健食品的制备方法，其特征在于：所述制备方法具体包括以下步骤：取配方量的维生素、丹参提取物和大豆异黄酮溶解于92-98%的乙醇溶液中，备用，再取配方量鮸鱼鱼鳔多肽于双蒸水中混均，再加入上述乙醇溶液混匀，喷雾干燥，将粉末上胶囊填充机进行充填，制成0.3-0.8g/粒的胶囊，经包装、成品检验，即得鱼鳔多肽保健食品。
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