CN108079055B - 一种中药组合物和索拉菲尼的组合及其在制备用于治疗肝癌的药物中的应用 - Google Patents

一种中药组合物和索拉菲尼的组合及其在制备用于治疗肝癌的药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种包含叶下珠、云芝、丹参和紫草的中药组合物和索拉菲尼的组合在制备用于治疗肝癌的药物中的应用。所述中药组合物可制备用于如下用途的药物，包括治疗对索拉菲尼耐药的肝癌、逆转索拉菲尼治疗肝癌的耐药性、增强索拉菲尼治疗肝癌的效果、以及降低索拉菲尼治疗肝癌的毒副作用。本发明还提供包含所述中药组合物与索拉菲尼的抗肝癌药物。

Description

一种中药组合物和索拉菲尼的组合及其在制备用于治疗肝癌 的药物中的应用
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一种包含叶下珠、云芝、丹参和紫草的中药组合物的新用途。
背景技术
原发性肝细胞癌是临床上最常见的恶性肿瘤之一，位于全球癌症死亡率第三位，中国癌症死亡率第二位，具有发病初期无症状、恶性程度高、病情转变快、生存期短、病死率高等特点，是严重威胁我国人民健康和生命的重大疾病。根治性手术是肝癌的首选治疗手段。但是因其起病隐袭、潜伏期长、高度恶性、进展快、侵袭性强、易转移、预后差等特征，大多数患者确诊时，已到疾病的中晚期，很多都丧失了手术机会。据统计，可以进行外科手术的肝癌病人仅为20％，根治性切除术后5年转移复发率为61.5％，即使小肝癌也达43.5％。
索拉菲尼是在NCCN中唯一提及的，也是唯一经证实能带来生存获益并且在全球被批准用于治疗不可切除的肝细胞癌的全身治疗一线用药。索拉菲尼应用过程中最大的问题是常常出现耐药现象，一般会在患者服用索拉菲尼6个月左右显现出来。一旦索拉菲尼耐药产生，患者只能停止使用索拉菲尼，严重影响了其长期疗效。
原发性肝细胞癌对索拉菲尼耐药存在多种机制：肝癌细胞本身表皮生长因子受体的表达上调及其下游信号通路的异常改变，沉默信息调节因子1的过表达，肝癌细胞的自噬能力增强及间充质转变均可能导致其对索拉菲尼耐药；肝癌血管内皮细胞出现耐药，肿瘤微环境中缺氧诱导因子-1α、趋化因子及其受体上调等也可能影响肿瘤对索拉菲尼的敏感性。
目前研究显示，对肿瘤多药耐药逆转的手段主要有联合化学增敏剂、中药逆转、基因治疗等。其中中药逆转肿瘤多药耐药的主要机制包括：1.抑制P-gp的功能，如人参皂苷Rh2能明显抑制阿霉素对细胞P-gp水平的上调而有效逆转乳腺癌细胞耐药细胞系MCF-7/ADM的耐药性；2.抑制mdr-1的翻译与表达，如去甲斑蝥酸钠与顺铂联合用药可降低A549/DDP的耐药性，逆转倍数为1.97，其作用机制可能与下调耐药相关基因mdr1，MRP1的表达，影响膜蛋白外排泵功能有关；3.提高DNA拓扑异构酶Ⅱ的活性，如盐酸千金藤碱具有逆转MCF-7/ADR细胞耐药性的作用，逆转倍数为13.5倍，其作用机制与提高了TopoⅡ的活性及降低了GST-π的表达有关。4.抑制谷胱甘肽S-转移酶-π的表达，如复方五味子素B具有逆转奥沙利铂人结肠癌细胞(THC-8307/OXA)多药耐药性的作用，其作用机制与下调GSTs-π表达有关。
CN1194736C公开了以叶下珠、丹参、云芝和紫草组方而成的中药组合物，用于慢性乙型病毒性肝炎的治疗。叶下珠，甘苦、凉，入肝、肺经，“平肝清热，利水解毒”，为君药。云芝，甘、平，益气养阴，扶正祛邪，调和阴阳，为臣药。君药解毒以祛邪，臣药补阴以扶正，君臣共奏祛邪扶正之功。丹参，苦、微寒，入心、肝经，清营凉血，活血通经。此处用之活血化瘀、消肿止痛，是为佐使药。紫草，苦、咸、寒，入心、肝经，凉血、活血，解毒。此处用之，与叶下珠配伍，既发挥清热凉血解毒之效，又增活血化瘀之功，也是佐使药。
目前搜索到的文献报道中，有逆转索拉菲尼耐药作用的中药仅有20(S)-人参皂苷Rg3一种，而有逆转索拉菲尼耐药作用的中药专利并未检索到，尤其是未发现叶下珠或以其为君药的中药复方具有上述作用。
索拉菲尼在使用中还可能发生多种副作用，然后在现有技术中并未检索到有对索拉菲尼副作用有改善的中药组合物。
发明内容
为逆转索拉菲尼治疗肝癌的耐药性,增强索拉菲尼治疗肝癌的效果,以及降低索拉菲尼治疗肝癌时产生的毒副作用，本发明提供了包含叶下珠、云芝、丹参和紫草的中药组合物的新用途以及所述中药组合物与索拉菲尼的组合。该中药组合物与索拉菲尼组合使用对治疗肝癌，特别是治疗对索拉菲尼部分或全部耐药的肝癌效果良好。
具体而言，本发明提供一种中药组合物和索拉菲尼的组合在制备用于治疗肝癌的药物中的应用，所述中药组合物由如下重量份的药材制成：叶下珠5-20份，云芝2-8份，丹参1-5份，紫草1-5份。
本发明进一步提供一种中药组合物在制备用于治疗对索拉菲尼耐药的肝癌的药物中的应用，所述中药组合物由如下重量份的药材制成：叶下珠5-20份，云芝2-8份，丹参1-5份，紫草1-5份。
本发明进一步提供一种中药组合物在制备用于逆转索拉菲尼治疗肝癌的耐药性的药物中的应用，所述中药组合物由如下重量份的药材制成：叶下珠5-20份，云芝2-8份，丹参1-5份，紫草1-5份。
本发明进一步提供一种中药组合物在制备用于增强索拉菲尼治疗肝癌的效果的药物中的应用，所述中药组合物由如下重量份的药材制成：叶下珠5-20份，云芝2-8份，丹参1-5份，紫草1-5份。
本发明进一步提供一种中药组合物在制备用于降低索拉菲尼治疗肝癌的毒副作用的药物中的应用，所述中药组合物由如下重量份的药材制成：叶下珠5-20份，云芝2-8份，丹参1-5份，紫草1-5份。
本发明进一步提供一种抗肝癌药物，该药物包含一种中药组合物与索拉菲尼的组合，所述中药组合物由如下重量份的药材制成：叶下珠5-20份，云芝2-8份，丹参1-5份，紫草1-5份。优选的，所述抗肝癌药物为包含两个制剂的医药形式，其中一个制剂为所述中药组合物的制剂，另一个制剂包含索拉菲尼作为活性成分；或者该抗肝癌药物为一个药剂，所述一个药剂含有所述中药组合物中的活性成分及索拉菲尼。进一步优选的，所述抗肝癌药物为药盒，所述药盒包含所述中药组合物的制剂和包含索拉菲尼的制剂。
优选的，本发明所述中药组合物由如下重量份的药材制成：叶下珠10份，云芝4份，丹参1份，紫草1份。
优选的，本发明所述中药组合物通过如下方法制备：叶下珠用水提取，所得提取液上大孔吸附树脂吸附，用30-75％的乙醇洗脱完全，合并洗脱液，浓缩得浸膏I；叶下珠水煎煮后的药渣用乙醇提取，得醇提取液；丹参与紫草共同用乙醇提取，得醇提液，与叶下珠的醇提液合并，回收溶剂，得浸膏II；云芝与丹参、紫草的药渣合并，水提取，得水提取液，回收溶剂，得浸膏III；将浸膏I、II、III混匀。
优选的，本发明所述中药组合物中还包括药学上可以接受的辅料。所述药学上可以接受的辅料，包括(1)稀释剂，例如淀粉、糖粉、糊精、乳糖、预胶化淀粉、微晶纤维、无机钙盐(如：硫酸钙、磷酸氢钙、药用碳酸钙等)、甘露醇等、植物油、聚乙二醇等；(2)粘合剂，例如：蒸馏水、乙醇、淀粉浆、羧甲基纤维素钠、羟丙基纤维素、甲基纤维素和乙基纤维素、羟丙甲纤维素等；(3)崩解剂，例如：干淀粉、羧甲基淀粉钠、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠等；(4)润滑剂，例如：硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉、氢化植物油、聚乙二醇类、月桂醇硫酸镁等；(5)矫味剂，如：蔗糖、甜菊素等；(6)溶剂，例如：水、酒精等。
优选的，本发明所述中药组合物为临床上可以接受的制剂，包括经胃肠道给药制剂和非经胃肠道给药制剂；进一步优选的，所述经胃肠道给药制剂选自散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸、乳剂或混悬剂；进一步优选的，所述非经胃肠道给药制剂选自注射剂、喷雾剂、栓剂、灌注剂、贴剂或软膏剂。
本发明的中药组合物制剂采用本领域常规方法制备，例如在将浸膏I、II、III混匀之后，制粒，烘干，制成胶囊剂或颗粒剂，或制粒后压片制成片剂；如有必要，在制粒、成型过程中加入所述药学上可以接受的辅料。
优选的，本发明所述肝癌为对索拉菲尼完全耐药或部分耐药的肝癌。
优选的，本发明所述肝癌包括原发性肝癌和继发性肝癌，进一步优选的，所述原发性肝癌包括肝细胞癌、肝胚细胞癌、胆管性细胞癌、肝内胆囊腺癌、肝-胆管混合细胞癌、肝肉瘤、肝血管内皮细胞肉瘤、肝上皮样血管内皮细胞瘤和肝纤维板层癌。
传统的肿瘤药效研究模型是将鼠源或人源细胞在体外筛选，经过传代培养，建立稳定细胞株，然后移植到小鼠体内建立肿瘤模型，这种模型的建立在肿瘤研究中的应用已有半个世纪，但是这种模型存在一定的缺陷，因为连续传代的肿瘤细胞株适应了外界培养皿的环境，丢失了肿瘤异质性，因此不能客观反应原代肿瘤的情况。人源肿瘤移植模型(patient derived xenograft model，PDX模型)是指将病人的新鲜肿瘤组织移植到免疫缺陷小鼠上，依靠小鼠提供的环境生长的一种异种移植模型。其最重要的优势就是可以高度保留患者肿瘤的组织学特性，遗传学特征以及肿瘤特异性，同时也包含了原代肿瘤的微环境，包括细胞外基质，免疫细胞以及肿瘤微环境因子。本发明采用的PDX模型是目前为止最接近临床研究的相关肿瘤模型，是目前唯一的能体现索拉菲尼耐药的活体动物模型，较传统药效学实验相比定位更加精准。同时，肝癌PDX模型可体现对索拉菲尼的敏感性，用该模型可以充分体现本发明的包含叶下珠、云芝、丹参和紫草的中药组合物对索拉菲尼部分耐药和完全耐药时的作用效果。
本发明实验结果显示，本发明的包含叶下珠、云芝、丹参和紫草的中药组合物与索拉菲尼联用于索拉菲尼完全耐药的肝癌PDX模型上，抑瘤效果明显优于单用索拉菲尼，说明有明显的耐药逆转作用，且随时间延长效果更加明显。同时，本发明的包含叶下珠、云芝、丹参和紫草的中药组合物，与索拉菲尼联用于索拉菲尼部分耐药的肝癌PDX模型上，毒副作用明显小于单用索拉菲尼，说明有明显的降低索拉菲尼毒副作用的作用。
附图说明
以下，结合附图来详细说明本发明的实施方案，其中：
图1：
Figure BDA0001514429840000051
肝癌肿瘤异种移植模型LI0334荷瘤鼠在紫叶丹胶囊和索拉菲尼治疗中的体重改变百分比曲线；
图2：
Figure BDA0001514429840000052
肝癌肿瘤异种移植模型LI0334荷瘤鼠在紫叶丹胶囊和索拉菲尼治疗中的肿瘤体积变化曲线；
图3：
Figure BDA0001514429840000061
肝癌肿瘤异种移植模型LI0050荷瘤鼠在紫叶丹胶囊和索拉菲尼治疗中的体重改变百分比曲线；
图4：
Figure BDA0001514429840000062
肝癌肿瘤异种移植模型LI0050荷瘤鼠在紫叶丹胶囊和索拉菲尼治疗中的肿瘤体积变化曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。
下述实施例中的试验方法，如无特殊说明，均为常规方法；下述实施例中所用的原料、试剂材料等，如无特殊说明，均为市售购买产品。
本申请说明书中，如果没有特殊说明，各受试药物的制备过程中溶剂(如水、乙醇等)的用量都是以药材重量为基准的体积倍数。
缩略词表
表1和表2是实验描述中使用的缩写词说明
表1.给药相关缩写词
Figure BDA0001514429840000063
Figure BDA0001514429840000071
表2.其他常用缩写词
Figure BDA0001514429840000072
Figure BDA0001514429840000081
实施例1：紫叶丹胶囊联合索拉菲尼在
Figure BDA00015144298400000812
异体移植肝癌模型LI0334中的 药效学研究
1.1材料
1.1.1动物
Figure BDA0001514429840000082
品系：BALB/c裸小鼠
Figure BDA0001514429840000083
供应商：安凯毅博(动物合格证编号：11402400001605)
Figure BDA0001514429840000084
年龄：7-8周(肿瘤瘤块接种时的小鼠周龄)；10-11周(开始给药时的小鼠周龄)
Figure BDA0001514429840000085
性别：雌性
Figure BDA0001514429840000086
动物数量：9只小鼠
1.1.2动物饲养条件
动物饲养在独立送风笼具中，每笼≤5只。饲养条件如下：
Figure BDA0001514429840000087
饲养环境：SPF级
Figure BDA0001514429840000088
温度：20-26℃
Figure BDA0001514429840000089
湿度：30-70％
Figure BDA00015144298400000810
光照：12小时照明，12小时黑暗
Figure BDA00015144298400000811
玉米芯垫料，每周更换一次
Figure BDA0001514429840000091
饮食：自由取食，干燥颗粒饲料经由辐射灭菌
Figure BDA0001514429840000092
饮水：自由饮水，饮用水经过高压蒸汽灭菌
Figure BDA0001514429840000093
笼卡标记：动物数量、性别、品系、接收时间、处理方式、项目号、组号、鼠号、开始给药时间
Figure BDA0001514429840000094
动物标记：动物用耳签标记
1.1.3模型信息
Figure BDA0001514429840000095
肝癌异体移植模型LI0334(中美冠科生物技术(北京)有限公司)来自于46岁亚洲男性病人,病理类型属于肝细胞癌，其对索拉菲尼完全耐药。
1.1.4受试药
受试药名称：紫叶丹胶囊
提供者：北京汉典制药有限公司
批号：160401
包装和保存条件：60粒胶囊/瓶,每粒0.5g,阴凉保存
紫叶丹胶囊通过如下处方、工艺制备：
处方：叶下珠2000g，云芝800g，丹参200g，紫草200g。
叶下珠用水提取，第一次加12倍量水，煎煮1.5小时，第二次加10倍量水，煎煮1小时。合并煎液，离心，上清液用H103大孔吸附树脂吸附，分别用30和60％的乙醇洗脱完全，合并洗脱液，浓缩得浸膏I；叶下珠水煎煮后的药渣用12倍量95％乙醇提取，得叶下珠醇提取液；丹参与紫草共同用95％乙醇提取两次，第一次加醇10倍量，回流1.5小时，第二次加醇6倍量，回流1小时，得丹参-紫草醇提液，与叶下珠醇提液合并，回收溶剂，得浸膏II；云芝与丹参、紫草的药渣合并，加水煎煮两次，每次12倍量水，第一次1.5小时，第二次1小时，得水提取液，回收溶剂，得浸膏III；将浸膏I、II、III混匀，加入药学上可以接受的辅料至500g，制粒，烘干，装胶囊，0.5g/胶囊。
受试药名称：索拉菲尼
提供者：大连美仑生物技术有限公司
批号：MB1226
包装和保存条件：无菌，瓶装粉末,室温,避光防潮保存
1.2实验方法
1.2.1实验设计
表3.药效学实验设计
Figure BDA0001514429840000101
备注：分组当天开始给药，并将这天定义为第1天(day 1)。
1.2.2肿瘤接种与分组
从
Figure BDA0001514429840000102
肝癌异体移植模型LI0334荷瘤小鼠收取肿瘤组织，切成[2-4mm]直径的瘤块接种于BALB/c裸小鼠右前部皮下。
当荷瘤鼠平均肿瘤体积到达148mm3时,将小鼠随机分为3组，每组3只。各组间的肿瘤体积的变异系数(CV)用公式CV＝SD/MTV×100％计算，应小于40％。分组当天设为实验第1天(day 1)，并于分组当天开始给药。
1.2.3受试药和对照药配制方法
给药类型:
根据体重调整给药量(给药体积＝10μL/g)
表4受试药、对照药配制方法
Figure BDA0001514429840000111
备注：*浓度及剂量均以化合物盐分子计算
1.2.4观察
本实验设计及其附件和相关实验方法，以及实验中涉及的动物饲养和使用将接受中美冠科动物伦理委员会(IACUC)的监督和审批。在实验过程中，动物饲养与使用将严格遵循国际实验动物评估认证管理委员会的规则进行。常规观察时，动物的肿瘤生长情况，体重增减，眼、毛发和其他异常状况，死亡等均按照鼠号进行记录。
1.2.5量瘤
肿瘤体积通过卡尺测量，每周两次，计算公式为TV＝0.5a×b2，其中a是肿瘤的长径，b是肿瘤的短径。
1.2.6组织收集和肝脏系数
本实验在最后一次给药后(Day 50)结束。实验期间，没有小鼠被安乐死。实验结束时,收集肝脏称重,并分成两份,一份保存在RNA保护液中,一份保存在液氮中。根据肝脏重量计算肝脏系数，即肝脏重量(g)/体重(100g)。
1.2.7数据分析
所有实验结果以“平均值±标准误差”表示。对照组与治疗组之间用利用单因素方差分析(One-Way ANOVA)方法比较，P﹤0.05被认为具有显著性差异。所有数据均采用SPSS16.0进行分析。
1.3结果
1.3.1体重改变百分比
Day 5-day 29、day43、day47模型组的体重改变百分比高于索拉菲尼和紫叶丹胶囊联合治疗组(p﹤0.05)，Day 8-day 29、day43、day47模型组高于索拉菲尼组(P﹤0.05)，而索拉菲尼组与索拉菲尼和紫叶丹胶囊联合治疗组之间始终无统计学差异(P﹥0.05)(图1)。
1.3.2肿瘤体积
Day 12-day 50，模型组的肿瘤体积显著大于索拉菲尼和紫叶丹胶囊联合治疗组(P﹤0.05)，day 15-day 33，索拉菲尼和紫叶丹胶囊联合治疗组的肿瘤体积显著小于索拉菲尼治疗组(P﹤0.05)，说明紫叶丹胶囊有逆转索拉菲尼耐药的作用(图2)。
1.4结论
本实验评价了紫叶丹胶囊联合索拉菲尼在
Figure BDA0001514429840000121
异体移植肝癌模型LI0334中的药效，通过与模型组和索拉菲尼组相比较，得出结论如下：紫叶丹胶囊有逆转
Figure BDA0001514429840000131
肝癌异体移植模型LI0334荷瘤小鼠对索拉菲尼耐药的作用。
实施例2：紫叶丹胶囊联合索拉菲尼在
Figure BDA0001514429840000132
异体移植肝癌模型LI0050中的药效学研究
2.1材料
2.1.1动物
Figure BDA0001514429840000133
品系：BALB/c裸小鼠
Figure BDA0001514429840000134
供应商：安凯毅博(动物合格证编号：11402400001605)
Figure BDA0001514429840000135
年龄：7-8周(肿瘤瘤块接种时的小鼠周龄)；10-11周(开始给药时的小鼠周龄)
Figure BDA0001514429840000136
性别：雌性
Figure BDA0001514429840000137
动物数量：9只小鼠
2.1.2动物饲养条件
动物饲养在独立送风笼具中，每笼≤5只。饲养条件如下：
Figure BDA0001514429840000138
饲养环境：SPF级
Figure BDA0001514429840000139
温度：20-26℃
Figure BDA00015144298400001310
湿度：30-70％
Figure BDA00015144298400001311
光照：12小时照明，12小时黑暗
Figure BDA00015144298400001312
玉米芯垫料，每周更换一次
Figure BDA00015144298400001313
饮食：自由取食，干燥颗粒饲料经由辐射灭菌
Figure BDA00015144298400001314
饮水：自由饮水，饮用水经过高压蒸汽灭菌
Figure BDA00015144298400001315
笼卡标记：动物数量、性别、品系、接收时间、处理方式、项目号、组号、鼠号、开始给药时间
Figure BDA00015144298400001316
动物标记：动物用耳签标记
2.1.3模型信息
Figure BDA0001514429840000141
肝癌异体移植模型LI0050(中美冠科生物技术(北京)有限公司)来自于49岁亚洲女性病人，病理类型属于肝细胞癌，其对索拉菲尼部分耐药。该实验用模型肿瘤代数为第4代。
2.1.4受试药
受试药名称：紫叶丹胶囊
提供者：北京汉典制药有限公司
批号：160401
包装和保存条件：60粒胶囊/瓶,每粒0.5g,阴凉保存
紫叶丹胶囊通过如下处方、工艺制备：
处方：叶下珠2000g，云芝800g，丹参200g，紫草200g。
叶下珠用水提取，第一次加12倍量水，煎煮1.5小时，第二次加10倍量水，煎煮1小时。合并煎液，离心，上清液用H103大孔吸附树脂吸附，分别用30和60％的乙醇洗脱完全，合并洗脱液，浓缩得浸膏I；叶下珠水煎煮后的药渣用12倍量95％乙醇提取，得叶下珠醇提取液；丹参与紫草共同用95％乙醇提取两次，第一次加醇10倍量，回流1.5小时，第二次加醇6倍量，回流1小时，得丹参-紫草醇提液，与叶下珠醇提液合并，回收溶剂，得浸膏II；云芝与丹参、紫草的药渣合并，加水煎煮两次，每次12倍量水，第一次1.5小时，第二次1小时，得水提取液，回收溶剂，得浸膏III；将浸膏I、II、III混匀，加入药学上可以接受的辅料至500g，制粒，烘干，装胶囊，0.5g/胶囊。
受试药名称：索拉菲尼
提供者：大连美仑生物技术有限公司
批号：MB1226
包装和保存条件：无菌，瓶装粉末,室温,避光防潮保存
2.2实验方法
2.2.1实验设计
表5药效学实验设计
Figure BDA0001514429840000151
备注：分组当天开始给药，并将这天定义为day 1
2.2.2肿瘤接种与分组
从
Figure BDA0001514429840000152
肝癌异体移植模型LI0050荷瘤小鼠收取肿瘤组织，切成[2-4mm]直径的瘤块接种于BALB/c裸小鼠右前部皮下。
当荷瘤鼠平均肿瘤体积到达148mm3时,将小鼠随机分为3组，每组3只。各组间的肿瘤体积的变异系数(CV)用公式CV＝SD/MTV×100％计算，应小于40％。分组当天设为实验第1天(day 1)，并于分组当天开始给药。
2.2.3受试药和对照药配制方法
给药类型:
根据体重调整给药量(给药体积＝10μL/g)
表6受试药、对照药配制方法
Figure BDA0001514429840000161
备注：*浓度及剂量均以化合物盐分子计算
2.2.4观察
本实验设计及其附件和相关实验方法，以及实验中涉及的动物饲养和使用将接受中美冠科动物伦理委员会(IACUC)的监督和审批。在实验过程中，动物饲养与使用将严格遵循国际实验动物评估认证管理委员会的规则进行。常规观察时，动物的肿瘤生长情况，体重增减，眼、毛发和其他异常状况，死亡等均按照鼠号进行记录。
2.2.5量瘤
肿瘤体积通过卡尺测量，每周两次，计算公式为TV＝0.5a×b2，其中a是肿瘤的长径，b是肿瘤的短径。
2.2.6组织收集和肝脏系数
本实验在最后一次给药后(Day 31)结束。实验期间，没有小鼠被安乐死。实验结束时,收集肝脏称重,并分成两份,一份保存在RNA保护液中,一份保存在液氮中。根据肝脏重量计算肝脏系数，即肝脏重量(g)/体重(100g)。
2.2.7数据分析
所有实验结果以“平均值±标准误差”表示。对照组与治疗组之间用利用单因素方差分析(One-Way ANOVA)方法比较，P﹥0.05被认为具有显著性差异。所有数据均采用SPSS16.0进行分析。
2.3结果
2.3.1体重改变百分比
模型LI0050的恶病指描述为轻度体重下降，即随着肿瘤长大，荷瘤鼠体重会下降。结束实验时(day 31)，除第1组有1只小鼠体重和分组时(day1)相同外，其他小鼠体重都比分组时轻。第2组有1只小鼠因为体重下降超过15％，有停药记录(day 24-day 26，day 28–day 31)。Day 22、Day 29第2组体重改变百分比显著低于第3组(P﹤0.05)，Day 25、Day 29第2组的体重改变百分比显著低于第1组(P﹤0.05)。结合第2组有因体重下降超过15％而不得不停药的情况，说明索拉菲尼能引起
Figure BDA0001514429840000171
肝癌异体移植模型LI0050荷瘤小鼠体重的下降，而紫叶丹胶囊有降低索拉菲尼这一毒性的作用(图3)。
2.3.2肿瘤体积
Day 25-day 31，第1组的肿瘤体积显著大于第2组(P﹤0.05)，而第2组与第3组之间无统计学差异(P﹥0.05)(图4)。
2.4结论
本实验评价了紫叶丹胶囊联合索拉菲尼在
Figure BDA0001514429840000172
异体移植肝癌模型LI0050中的作用，并通过与模型组和索拉菲尼组相比较，得出结论如下：索拉菲尼能引起
Figure BDA0001514429840000173
肝癌异体移植模型LI0050荷瘤小鼠体重的下降，而紫叶丹胶囊有降低索拉菲尼这一毒性的作用。

Claims (19)

1.一种中药组合物和索拉菲尼的组合在制备用于治疗肝癌的药物中的应用，所述中药组合物由如下重量份的药材制成：叶下珠10份，云芝4份，丹参1份，紫草1份；所述肝癌为对索拉菲尼完全耐药或部分耐药的肝癌。
2.一种中药组合物在制备用于逆转索拉菲尼治疗肝癌的耐药性的药物中的应用，所述中药组合物由如下重量份的药材制成：叶下珠10份，云芝4份，丹参1份，紫草1份；所述肝癌为对索拉菲尼完全耐药或部分耐药的肝癌。
3.一种中药组合物在制备用于增强索拉菲尼治疗肝癌的效果的药物中的应用，所述中药组合物由如下重量份的药材制成：叶下珠10份，云芝4份，丹参1份，紫草1份；所述肝癌为对索拉菲尼完全耐药或部分耐药的肝癌。
4.一种中药组合物在制备用于降低索拉菲尼治疗肝癌的毒副作用的药物中的应用，所述中药组合物由如下重量份的药材制成：叶下珠10份，云芝4份，丹参1份，紫草1份；所述肝癌为对索拉菲尼完全耐药或部分耐药的肝癌。
5.抗肝癌药物，该药物包含一种中药组合物与索拉菲尼的组合，所述中药组合物由如下重量份的药材制成：叶下珠10份，云芝4份，丹参1份，紫草1份；所述肝癌为对索拉菲尼完全耐药或部分耐药的肝癌。
6.根据权利要求5所述的抗肝癌药物，该药物为包含两个制剂的医药形式，其中一个制剂为所述中药组合物的制剂，另一个制剂包含索拉菲尼作为活性成分；或者该抗肝癌药物为一个药剂，所述一个药剂含有所述中药组合物及索拉菲尼。
7.根据权利要求6所述的抗肝癌药物，其特征在于，所述抗肝癌药物采用药盒包装，所述药盒包含所述中药组合物的制剂和包含索拉菲尼的制剂。
8.根据权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述中药组合物通过如下方法制备：叶下珠用水提取，所得提取液上大孔吸附树脂吸附，用30-75%的乙醇洗脱完全，合并洗脱液，浓缩得浸膏I；叶下珠水煎煮后的药渣用乙醇提取，得醇提取液；丹参与紫草共同用乙醇提取，得醇提液，与叶下珠的醇提液合并，回收溶剂，得浸膏II；云芝与丹参、紫草的药渣合并，水提取，得水提取液，回收溶剂，得浸膏III；将浸膏I、II、III混匀。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述中药组合物中还包括药学上可以接受的辅料。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述中药组合物为临床上可以接受的制剂，包括经胃肠道给药制剂和非经胃肠道给药制剂。
11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述经胃肠道给药制剂选自散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸、乳剂或混悬剂；
所述非经胃肠道给药制剂选自喷雾剂、栓剂、灌注剂、贴剂或软膏剂。
12.根据权利要求5-7中任一项所述的抗肝癌药物，其特征在于，所述中药组合物通过如下方法制备：叶下珠用水提取，所得提取液上大孔吸附树脂吸附，用30-75%的乙醇洗脱完全，合并洗脱液，浓缩得浸膏I；叶下珠水煎煮后的药渣用乙醇提取，得醇提取液；丹参与紫草共同用乙醇提取，得醇提液，与叶下珠的醇提液合并，回收溶剂，得浸膏II；云芝与丹参、紫草的药渣合并，水提取，得水提取液，回收溶剂，得浸膏III；将浸膏I、II、III混匀。
13.根据权利要求12中所述的抗肝癌药物，其特征在于，所述中药组合物中还包括药学上可以接受的辅料。
14.根据权利要求13所述的抗肝癌药物，其特征在于，所述中药组合物为临床上可以接受的制剂，包括经胃肠道给药制剂和非经胃肠道给药制剂。
15.根据权利要求14所述的抗肝癌药物，其特征在于，所述经胃肠道给药制剂选自散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、滴丸、乳剂或混悬剂；
所述非经胃肠道给药制剂选自喷雾剂、栓剂、灌注剂、贴剂或软膏剂。
16.根据权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述肝癌包括原发性肝癌和继发性肝癌。
17.根据权利要求16所述的应用，其特征在于，所述原发性肝癌包括肝细胞癌、肝胚细胞癌、胆管性细胞癌、肝内胆囊腺癌、肝-胆管混合细胞癌、肝肉瘤、肝血管内皮细胞肉瘤、肝上皮样血管内皮细胞瘤和肝纤维板层癌。
18.根据权利要求5-7中任一项所述的抗肝癌药物，其特征在于，所述肝癌包括原发性肝癌和继发性肝癌。
19.根据权利要求18所述的抗肝癌药物，其特征在于，所述原发性肝癌包括肝细胞癌、肝胚细胞癌、胆管性细胞癌、肝内胆囊腺癌、肝-胆管混合细胞癌、肝肉瘤、肝血管内皮细胞肉瘤、肝上皮样血管内皮细胞瘤和肝纤维板层癌。
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