CN115645483A - 组合物在制备治疗干性年龄相关性黄斑变性药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种组合物在制备治疗干性年龄相关性黄斑变性药物中的应用，所述的组合物中包括：女贞子、墨旱莲、山茱萸、山药、丹参、三七、牡丹皮、泽泻、茯苓、红土茯苓和牛膝。所述的组合物可制备成双丹明目胶囊进行应用。双丹明目胶囊处方对干性AMD疾病小鼠模型的视网膜保护具有显著的疗效，其疗效优于纯丹参提取物和临床常用药莱视盯。

Description

组合物在制备治疗干性年龄相关性黄斑变性药物中的应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种组合物在制备治疗干性年龄相关性黄斑变性药物中的应用。

背景技术

年龄相关性黄斑变性(AMD)是一类与年龄密切相关的黄斑区视网膜及脉络膜退行性改变的眼底疾病，是导致全球老年人不可逆性盲最主要的原因之一，多发于50岁以上的人群。

临床上，根据病变性质将AMD分为萎缩型(干性)和渗出型(湿性)两种类型；根据病情进展，AMD分为早期、进展期和晚期，其中早期、进展期患者视力尚好；而到了晚期阶段(地图样萎缩或湿性AMD)，患者视力严重受损。临床上以干性AMD最为多见，其早期、进展期主要表现为黄斑区玻璃疣、视网膜色素上皮异常及Bruch膜增厚，晚期则出现RPE局灶性退行性变和光感受器丢失，又称“地图样萎缩”，甚至发展为脉络膜新生血管，最终引起中心视力的丧失。

由于干性AMD直到晚期才累及黄斑中心凹，所以患者通常视力下降缓慢，不会出现急速的视力下降，且目前尚无有效的治疗方法。吸烟是多研究中心一致证实的AMD危险因素，其主要有害物质氢醌(HQ)是一种促氧化剂，在体内可与DNA以共价结合的方式竞争线粒体中的谷胱甘肽，产生大量过氧化物，引起线粒体内蛋白质及脂质的氧化，导致视网膜细胞凋亡。因此抗氧化治疗是AMD当前主要的治疗路径，如莱视盯等，其主要成分包含叶黄素、β-胡萝卜素、葡萄糖酸锌等。

中国专利CN112294963A中公开了一种治疗年龄相关性黄斑变性的药物组合物，是以包括鳖甲和/或红景天、生地和/或薏仁、白芍、连翘和/或决明子、甘草为原料配制的药物组合物，是采用溶剂浸提法、渗漉法、煎煮法、回流法、超声提取法或超临界流体萃取法进行制备的药物组合物，本发明提供了一种治疗玻璃膜疣、视力下降、视网膜色素上皮萎缩和/或感光细胞萎缩的方法。

中国专利CN1565583A中公开了一种治疗糖尿病及其并发症的药物组合物及其制备方法，是以补阴、补气、活血、凉血、收敛、利水利尿药物和/或它们的提取物为原料，以原药材形式或提取物入药，以此治疗糖尿病及其并发症，主要为糖尿病视网膜病变，该专利即为双丹明目胶囊。糖尿病单纯型视网膜病变主要是糖尿病患者的高血糖水平导致的视网膜微血管渗漏和梗阻的结果，主要表现为微动脉瘤、硬性渗出(血管内脂质或脂蛋白从视网膜血管里渗出，沉积在患者视网膜内)和玻璃膜内出血；而干性年龄相关性黄斑变性主要是增龄导致的黄斑区视网膜上皮细胞退行性变性的结果，主要表现为玻璃膜疣(变性物质沉着于玻璃膜)、视网膜色素上皮(RPE)异常(如色素减少或色素过多)及玻璃膜增厚，据统计，60岁以上的老年人，几乎100％都要发生玻璃膜疣。因此，不管是从病因还是临床表现上，他们均属于完全不同的疾病。

现有技术中尚未公开双丹名目胶囊在治疗干性年龄相关性黄斑变性中的应用。

发明内容

本发明在现有技术的基础上，发现了一种组合物在治疗干性年龄相关性黄斑变性中的应用，为治疗干性年龄相关性黄斑变性提供了新的药物。

本发明提供了一种组合物在制备治疗干性年龄相关性黄斑变性药物中的应用。

所述的组合物包括补阴、补气、活血、清热、利尿药物。

优选地，所述补阴药物选自女贞子、墨旱莲和山茱萸，所述补气药物选自山药，所述活血药物选自丹参、三七和牛膝，所述清热药物选自牡丹皮，所述利尿药物选自泽泻、茯苓和红土茯苓。

优选地，所述的组合物，以原料药计，包括20-50重量份补阴药物、10-30重量份补气药物、10-40重量份活血药物、5-20重量份清热药物和20-50重量份利尿药物。

进一步优选地，其特征在于，所述的组合物，以原料药计，包括25-45重量份补阴药物、10-20重量份补气药物、15-35重量份活血药物、5-10重量份清热药物和20-40重量份利尿药物。

更进一步优选地，所述的组合物，以原料药计，包括女贞子15份、墨旱莲12份、山茱萸12份、山药15份、丹参12份、三七6份、牡丹皮10份、泽泻10份、茯苓10份、红土茯苓15份和牛膝10份。

女贞子：性凉，味甘、苦。具有滋补肝肾、明目乌发的作用。主要活性成分为三萜类化合物，主要有齐墩果酸、乙酰齐墩果酸、β-谷固醇、乙酰熊果酸、槲皮素、洋丁香酚苷、女贞苷、新女贞子苷等成分。

墨旱莲：性凉，味甘、酸。具有滋补肝肾，凉血止血的作用。《新修本草》中记载“洪血不可止者，傅之立已。汁涂发眉，生速而繁”。

山茱萸：性温味酸，山茱萸补益肝肾、收敛固涩，具有固精缩尿、止汗的作用。

山药：《本草正》中记载：山药，能健脾补虚，滋精固肾，治诸虚百损，疗五劳七伤。

丹参：性微寒，味苦。具有祛瘀止痛、活血痛经、清心除烦的功效。丹参中主要含有丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡА、丹参酮ⅡB、隐丹参酮、紫草酸B、丹参隐螺内酯、二氢丹参酮、丹参酸乙、二氢异丹参酮Ⅰ、丹参醇、丹参内酯、替告皂苷元、β-谷固醇、豆固醇、柳杉酚等化学成分。

三七：性温，味甘微苦。具有散瘀止血，消肿定痛的功效。《本草纲目》中记载止血散血定痛，金刃箭伤、跌扑杖疮、血出不止者，嚼烂涂，或为末掺之，其血即止。

牡丹皮：味苦、性寒。主要能入肝经、肾经、肺经，功效主要是清热凉血、消炎止痛、活血化瘀。

泽泻：性寒，味甘。主要功效为利水，渗湿，泄热。泽泻的脂溶性部分能起到降血脂的作用；泽泻的醇A乙酸酯、醇B乙酸酯和醇C乙酸酯对肝脏能起到保护作用；泽泻浸膏、摩醇能对心血管系统有作用；泽泻的醇A乙酸酯、醇B乙酸酯均有利尿作用；泽泻浸膏有轻度降血糖的作用。

茯苓：味甘淡平，入心、肺、脾经。具有渗湿利水，健脾和胃，宁心安神的功效。茯苓可治小便不利，水肿胀满，痰饮咳逆，呕逆，恶阻，泄泻，遗精，淋浊，惊悸，健忘等症。

红土茯苓：性寒，味苦。红土茯苓的功效和作用包括利水消肿、化痰止咳、健脾和胃、清心宁神，有一定的营养神经以及促进神经修复的功效，对于因植物神经功能紊乱所导致的失眠健忘、心慌气短、心神不宁、体虚盗汗、心烦气躁等症状具有一定的改善效果，对于心脏功能不足、肾功能不足、肝功能不足所引起的腹水症状也有一定的改善作用。

牛膝：性平，味苦、酸。归肝、肾二经，它的功效是活血祛瘀、补肝肾、强筋骨。牛膝的药用价值为生用，活血通经，治产后腹痛，月经不调，闭经，鼻衄，虚火牙痛，脚气水肿；熟用，补肝肾，强腰膝，治腰膝酸痛，肝肾亏虚，跌打瘀痛。

优选地，所述的组合物为原药材和/或它们的提取物。

术语“组合物”包括活性成分和组成载体的惰性成分(药学可接受的赋形剂)的产品，以及任何由两种或多种成分的组合、络合或者聚集、或一种或多种成分的分解、或由一种或多种成分的其它类型反应或相互作用直接或间接地得到的产品。

本发明的组合物包含原药材和/或它们的提取物、药学可接受的载体和任选的其它治疗性成分或佐剂。药物组合物包括适合口服、直肠、局部和胃肠外(包括皮下、肌内和静脉内)给药的组合物，虽然在任何特定的情况下最合适的途径取决于特定的主体、对其给予活性成分的病症的性质和严重度。药物组合物可以通过药剂学领域公知的任何方法制备。

进一步优选地，所述的提取物的制备方法选自溶剂提取、水蒸气蒸馏、粉碎、水煎、蒸煮、超声波、低温提取中的至少一种。

具体的，所述溶剂选自甲醇、乙醇、乙二醇、正丙醇、异丙醇、丙二醇、丁醇、叔丁醇、异丁醇、辛醇、异辛醇中的至少一种。

具体的，所述水蒸气蒸馏是指将产物随水蒸气一同蒸出。

具体的，所述粉碎是指将原药材粉碎至粒径10-200μm。

具体的，所述水煎是指向原药材中加入清水，将浸泡后的原药材煮沸，用滤网过滤掉药渣即得。

具体的，所述超声波是指选取干燥粉碎得原药材，加入蒸馏水，超声提取2-3次，合并提取液。

具体的，所述低温提取是指将原药材在20-40℃温度下进行提取。

优选地，所述的组合物可制备成药学可接受的剂型。

活性成分可以以固体剂型或液体剂型口服给药，所述固体剂型例如胶囊、片剂、锭剂、糖锭剂、颗粒和粉剂，所述液体剂型例如酏剂、糖浆剂、乳剂、分散体和混悬液。活性成分还可以以无菌液体剂型例如分散体、混悬液或溶液胃肠外给药。可以用于将活性成分进行给药的其它剂型还有用于局部给药的软膏、乳膏、滴剂、经皮贴剂或粉剂；用于眼睛给药的眼用溶液或混悬液形式，即滴眼液；用于吸入或鼻内给药的喷雾剂或粉末组合物，或用于直肠或阴道给药的乳膏、软膏、喷雾剂或栓剂。明胶胶囊包含活性成分和粉状载体，例如乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。可以使用类似的稀释剂来制备压制片剂。片剂和胶囊都可以被制备成缓释产品以在数小时内提供药物的持续释放。压制片剂可以包糖衣或包膜衣以掩盖任何令人不愉快的味道和保护该片剂不受空气影响，或者可以包肠溶衣用于在胃肠道内选择性崩解。用于口服给药的液体剂型可包含着色剂和矫味剂以增加患者的接受性。一般而言，水、合适的油、盐水、右旋糖(葡萄糖)水溶液、以及相关的糖溶液和二醇类如丙二醇或聚乙二醇是合适的胃肠外溶液的载体。用于胃肠外给药的溶液优选包含活性成分的水溶性盐、合适的稳定剂和根据需要使用的缓冲物质。抗氧化剂例如单独或组合的亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸是合适的稳定剂。还可以使用柠檬酸及其盐和EDTA钠。此外，胃肠外溶液还可以包含防腐剂，例如苯扎氯铵、尼泊金甲酯或尼泊金丙酯和氯丁醇。对于吸入给药而言，本发明的组合物可以方便地从加压包装或喷雾器中以喷雾剂形式递送。该组合物还可以以进行配制的粉末形式递送，该粉末组合物可以在吹入粉末吸入器装置的帮助下吸入。优选的用于吸入的递送系统是定量吸入(MDI)气雾剂。

进一步优选地，所述的组合物的药物剂型选自注射剂、片剂、胶囊剂、口服液体剂型、颗粒剂、软膏剂、栓剂中的任意一种或多种。

进一步优选地，所述的组合物还包括药学可接受的辅料。

更进一步优选地，所述的药学可接受的辅料选自填充剂、润滑剂、崩解剂、助流剂中的至少一种。

更进一步优选地，所述的组合物为双丹明目胶囊。

本发明的有益效果：

1.本发明发现了双丹明目胶囊在治疗干性年龄相关性黄斑变性中的新应用。

2.对于干性AMD疾病小鼠模型，单用双丹明目胶囊对小鼠模型的视网膜保护具有显著的疗效，其疗效优于纯丹参提取物和临床常用药莱视盯。

附图说明

图1是实施例1各组Fas表达量柱状图；

图2是实施例1各组FasL表达量柱状图。

图中，^△、^*、^#和^◆表示显著性差异；

与空白组比较，^△p＜0.05，^△△p＜0.01，^△△△p＜0.001，^△△△△p＜0.0001；

与模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001，^****p＜0.0001；

与丹参低剂量组比较，^#p＜0.05，^##p＜0.01，^###p＜0.001，^####p＜0.0001；

与丹参高剂量组比较，^◆p＜0.05，^◆◆p＜0.01，^◆◆◆p＜0.001，^◆◆◆◆p＜0.0001。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明作进一步详细的阐述，下述实施例不用于限制本发明，仅用于说明本发明。以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

1、组合物1-3和组合物7的制备方法：

(1)三七粉碎成细粉，备用；牡丹皮通水蒸汽蒸馏，收集馏出液约500mL，加入40gβ-环糊精，40℃搅拌1.5小时使包合，冷藏24小时，抽滤，置60℃以下干燥，备用；药渣与药液另置。

(2)取女贞子、山茱萸、丹参、泽泻加90％乙醇加热回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.30-1.40(60-70℃热测)的稠膏，加入三七细粉50份，混匀，60-70℃干燥，粉碎成粗粉，备用。

(3)墨旱莲、山药、茯苓、红土茯苓、牛膝五味加入上述醇提后药渣及牡丹皮蒸馏后药渣药液加水煎煮2次，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.30-1.40(60-70℃热测)的稠膏，加入上述剩余的三七细粉，混匀，60-70℃减压干燥，粉碎成粗粉。加入上述醇提浸膏粉和β-环状糊精包合物，充分混匀。

2、组合物4中茺蔚子、赤芍、夏枯草和生地黄的制备方法包括以下步骤：

(1)将茺蔚子、赤芍、夏枯草和生地黄放入煎药容器内，第一次加水8倍量，浸泡100分钟后，武火煎煮沸腾，再用文火煎煮20分钟，过滤得第一次煎煮液，将第一次煎煮液倒入容器内。

(2)将过滤得药渣加水6倍量，武火煮沸，再用文火煎煮20分钟，过滤得第二次煎煮液；将第一次煎煮液和第二次煎煮液混匀，即得。

组合物中其他成分的制备按照上述1中方法制备。

3、组合物5中生地黄、党参、黄芪、桃仁的制备方法为：

将生地黄、党参、黄芪、桃仁加水煎煮两次，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液减压浓缩至温度为60℃、相对密度为1.35-1.39的稠膏，与制得的其余11种成分混合，粉碎成细粉，加入糊精适量，即得。

组合物中其他成分的制备按照上述1中方法制备。

4、组合物6的制备方法包括以下步骤：

(1)牡丹皮通水蒸汽蒸馏，收集馏出液约500mL，加入40gβ-环糊精，40℃搅拌1.5小时使包合，冷藏24小时，抽滤，置60℃以下干燥，备用；药渣与药液另置。

(2)取山茱萸、丹参加90％乙醇加热回流提取2次，每次2小时，合并提取液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度为1.30-1.40(60-70℃热测)的稠膏60-70℃干燥，粉碎成粗粉，备用。

(3)墨旱莲、山药、茯苓、牛膝加入上述醇提后药渣及牡丹皮蒸馏后药渣药液加水煎煮2次，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.30-1.40(60-70℃热测)的稠膏，60-70℃减压干燥，粉碎成粗粉。加入上述醇提浸膏粉和β-环状糊精包合物，充分混匀。

实施例1

1.干性AMD小鼠模型构建

140只SPF级健康雄性C57BL/6小鼠(6月龄，体质量25-33g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2016-0011)，适应性饲养1周后随机分为14组，分别为：空白对照组、模型对照组、双丹明目胶囊低剂量组、双丹明目胶囊高剂量组、组合物1组、组合物2组、组合物3组、莱视盯组、丹参粉末低剂量组、丹参粉末高剂量组、组合物4组、组合物5组、组合物6组、组合物7组。空白对照组进行普通饲料喂养，其余各组小鼠进行高脂饲料喂养，各组小鼠均给予饮用水喂养。喂养3个月，建立干性AMD小鼠模型。

2.药物配制及每日给药量

各组药物配制情况如下：

(1)空白对照组：生理盐水。

(2)模型对照组：生理盐水。

(3)双丹明目胶囊低剂量组：双丹明目胶囊，购自北京岐黄制药有限公司，批准文号：国药准字Z20080062；规格：0.5g/粒；给药量：0.9g/kg(为临床等效量)，生理盐水溶解。

(4)双丹明目胶囊高剂量组：双丹明目胶囊，购自北京岐黄制药有限公司，批准文号：国药准字Z20080062；规格：0.5g/粒；给药量：1.8g/kg(为临床2倍等效量)，生理盐水溶解。

(5)组合物1组：以重量份计，女贞子15份、墨旱莲12份、山茱萸12份、山药15份、丹参12份、三七6份、牛膝10份、牡丹皮10份、泽泻10份、茯苓10份、红土茯苓15份。给药量：1.8g/kg，生理盐水溶解。

(6)组合物2组：以重量份计，女贞子17份、墨旱莲14份、山茱萸14份、山药10份、丹参15份、三七8份、牛膝12份、牡丹皮5份、泽泻12份、茯苓12份、红土茯苓16份。给药量：1.8g/kg，生理盐水溶解。

(7)组合物3组：以重量份计，女贞子10份、墨旱莲8份、山茱萸7份、山药20份、丹参8份、三七2份、牛膝5份、牡丹皮10份、泽泻5份、茯苓5份、红土茯苓10份。给药量：1.8g/kg，生理盐水溶解。

(8)莱视盯组：莱视盯，购自湖北思维康生物工程有限公司，批准文号：国食健注G20150015；规格：0.35g/粒；给药量：0.1g/kg(为临床2倍等效量)，生理盐水溶解。

(9)丹参粉末低剂量组：取丹参250g，加90％乙醇加热回流提取二次，每次加6倍量，每次2小时，过滤提取液，滤液减压浓缩至相对密度为1.3-1.4(60-70℃热测)的稠膏，60-70℃干燥，粉碎成粉末，制成1000份，即得。每份43mg，为一粒双丹明目胶囊中所含的丹参量。给药量：77mg/kg，生理盐水溶解。

(10)丹参粉末高剂量组：取丹参250g，加90％乙醇加热回流提取二次，每次加6倍量，每次2小时，过滤提取液，滤液减压浓缩至相对密度为1.3-1.4(60-70℃热测)的稠膏，60-70℃干燥，粉碎成粉末，制成1000份，即得。每份43mg，为一粒双丹明目胶囊中所含的丹参量。给药量：154mg/kg，生理盐水溶解。

(11)组合物4组：以重量份计，女贞子15份、墨旱莲12份、山茱萸12份、山药15份、丹参12份、三七6份、牛膝10份、牡丹皮10份、泽泻10份、茯苓10份、红土茯苓15份、茺蔚子10份、生地黄10份、赤芍10份、夏枯草10份。给药量：1.8g/kg，生理盐水溶解。

(12)组合物5组：以重量份计，女贞子15份、墨旱莲12份、山茱萸12份、山药15份、丹参12份、三七6份、牛膝10份、牡丹皮10份、泽泻10份、茯苓10份、红土茯苓15份、生地黄10份、党参10份、黄芪10份、桃仁10份。给药量：1.8g/kg，生理盐水溶解。

(13)组合物6组：以重量份计，墨旱莲12份、山茱萸12份、山药15份、丹参12份、牛膝10份、牡丹皮10份、茯苓10份。给药量：1.8g/kg，生理盐水溶解。

(14)组合物7组：以重量份计，女贞子25份、墨旱莲12份、山茱萸12份、山药8份、丹参20份、三七6份、牛膝10份、牡丹皮2份、泽泻10份、茯苓20份、红土茯苓15份。给药量：1.8g/kg，生理盐水溶解。

3.给药方式

3个月后，空白对照组进行普通饲料喂养+饮用水+生理盐水灌胃，模型对照组进行高脂饲料喂养+0.8％氢醌饮用水+生理盐水灌胃，其余各组行高脂饲料喂养+0.8％氢醌饮用水+含药生理盐水灌胃，各组药物制成溶液后按照10mL/kg灌胃给药，连续给药3个月。

4.检测指标

(1)视网膜电图(ERG)：各组小鼠于检测前暗适应24h，复方托吡卡胺滴眼液点双眼常规散瞳20min，采用戊巴比妥钠麻醉小鼠。检测操作全程均在弱红光灯下，将双侧角膜电极置于小鼠双侧眼睑内，保持各电极间阻抗始终＜5kΩ。根据国际临床视觉电生理协会(ISCEV)制定的最新国际标准，依次选定视杆细胞反应，最大反应，暗适应震荡电位，(自动明适应5min)视锥细胞反应以及10Hz闪烁光反应进行检测。依次记录各组振幅值(μV)。设备选用GT-2000型视觉电生理检测仪(重庆医用设备公司)。

(2)血清SOD、GSH-Px、CAT活性检测：观察期满，取眼静脉血，在3000r/min，4℃下离心10min，获得血清。分别在550nm、405nm、412nm波长下采用试剂盒检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的光密度(OD)值，计算酶活性；超氧化物歧化酶，SOD，购自美国Thermo Scientific Fisher公司，货号A001-1；过氧化氢酶，CAT，购自美国Thermo Scientific Fisher公司，货号A007-1；谷胱甘肽过氧化物酶，GSH-Px，购自美国Thermo Scientific Fisher公司，货号A005，光密度值测定采用Bio-Tek酶标仪(美国Synergy公司)。

(3)组织Fas及FasL mRNA的表达：采用Trizol等试剂提取视网膜组织总RNA，参照逆转录试剂盒Super Script TM III提供的操作步骤进行反转录。采用实时荧光定量PCR仪进行常规扩增反应，检测Fas、FasL的mRNA表达水平；逆转录试剂盒，购自美国ThermoScientific Fisher公司，Super Script TM III，货号12574026；荧光定量PCR试剂盒，购自TAKARA宝生物工程(大连)有限公司，货号DRR820A，荧光定量设备为CFX Real-Time System荧光定量PCR仪(美国Bio-RAD公司)。

4.试验结果

(1)视网膜电图(ERG)

从表1可以看出，与空白对照组比较，模型对照组各ERG指标(视杆细胞反应、最大反应、暗适应震荡反应、视锥细胞反应、10Hz闪烁光反应)振幅值均大幅下降(均P＜0.0001)，表明视网膜光感受器细胞以及内层视网膜细胞发生损伤，与人类视网膜变性类疾病ERG变化趋势类似。与模型对照组比较，丹参粉末低剂量组各ERG指标振幅值显著提高(均P＜0.05)，丹参粉末高剂量组各ERG指标振幅值大幅上升(均P＜0.001)。与丹参粉末低剂量组比较，双丹明目胶囊低剂量组各ERG指标振幅值均显著上升(均P＜0.05)。与丹参粉末高剂量组相比，双丹明目胶囊高剂量组以及组合物1-3组各ERG振幅值均显著改善(均P＜0.05)，且双丹明目胶囊高剂量组与组合物1-3组四组间各ERG振幅值均相当；同时，与丹参粉末高剂量组相比，组合物4-7各ERG振幅值同样有所改善，但组合物4-5的视锥细胞反应值无显著性差异(均P＞0.05)，组合物6仅暗适应震荡反应值有显著差异(P＜0.05)，组合物7仅最大反应和暗适应震荡反应值有显著差异(均P＜0.05)。与莱视盯组比较，双丹明目胶囊高剂量组和组合物1-5组在提高视杆细胞反应、视锥细胞反应和10Hz闪烁光反应三方面的振幅值上效果更佳，且六组之间无显著性差异，在最大反应和暗适应震荡反应方面效果与莱视盯相当；而组合物6-7整体ERG指标改善效果低于莱视盯。

表1各组小鼠ERG结果比较(

n＝10,μV)

注：与空白组比较，^△p＜0.05，^△△p＜0.01，^△△△p＜0.001，^△△△△p＜0.0001；

与模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001，^****p＜0.0001；

与丹参低剂量组比较，^#p＜0.05，^##p＜0.01，^###p＜0.001，^####p＜0.0001；

与丹参高剂量组比较，^◆p＜0.05，^◆◆p＜0.01，^◆◆◆p＜0.001，^◆◆◆◆p＜0.0001。

(2)血清SOD、GSH-Px、CAT活性检测

表2表明，与空白对照组比较，模型对照组各项抗氧化酶指标(SOD、GSH-Px、CAT)活性均大幅下降(P＜0.0001)，表明AMD小鼠视网膜处机体清除自由基能力降低，造成视网膜氧化损伤。与模型组比较，丹参粉末低剂量组各项抗氧化酶指标活性均提高(均P＜0.05)，且丹参粉末高剂量组各项抗氧化酶指标活性提高更为显著(均P＜0.001)。与丹参粉末低剂量组比较，双丹明目胶囊低剂量组各项酶活性显著提高(均P＜0.05)。与丹参粉末高剂量组比较，双丹明目胶囊高剂量组和组合物1-7组各抗氧化酶活性均显著增加(均P＜0.05)，其中双丹明目胶囊高剂量组和组合物1-5组差异尤其显著(均P＜0.001)。与莱视盯组比较，双丹明目胶囊高剂量组及组合物1-5组各抗氧化酶的活性均增加，尤其是双丹明目胶囊高剂量组、组合物1组和组合物4-5组对SOD酶活性的影响，差异具有统计学意义(均P＜0.05)；而组合物6-7组对SOD、GSH-Px及CAT的整体改善效果低于莱视盯。

表2各组小鼠血清SOD、GSH-Px、CAT活性比较(

n＝10,U/mL)

组别	SOD	GSH-Px	CAT
				(1)	55.5±4.8	157.5±14.7	10.3±1.0
(2)	27.9±2.3<sup>△△△△</sup>	77.8±6.0<sup>△△△△</sup>	3.5±0.5<sup>△△△△</sup>
				(3)	48.8±4.8<sup>####</sup>	123.6±10.5<sup>#</sup>	6.5±0.7<sup>####</sup>
(4)	51.3±5.9<sup>◆◆◆◆</sup>	137.7±19.3<sup>◆◆◆◆</sup>	7.2±0.8<sup>◆◆◆◆</sup>
				(5)	51.1±7.6<sup>◆◆◆◆</sup>	133.0±20.8<sup>◆◆◆◆</sup>	7.1±0.8<sup>◆◆◆◆</sup>
(6)	50.6±3.6<sup>◆◆◆◆</sup>	137.3±18.9<sup>◆◆◆◆</sup>	6.9±0.6<sup>◆◆◆◆</sup>
				(7)	49.0±6.1<sup>◆◆◆</sup>	131.5±20.0<sup>◆◆◆◆</sup>	6.7±1.0<sup>◆◆◆</sup>
(8)	44.0±5.8<sup>****</sup>	128.4±17.8<sup>****</sup>	6.6±0.9<sup>****</sup>
				(9)	31.1±4.1<sup>*</sup>	100.4±32.6<sup>*</sup>	4.2±0.8<sup>*</sup>
(10)	37.6±5.8<sup>***</sup>	94.3±11.7<sup>***</sup>	5.2±0.6<sup>****</sup>
				(11)	51.9±5.1<sup>◆◆◆◆</sup>	136.8±17.5<sup>◆◆◆◆</sup>	7.4±0.9<sup>◆◆◆◆</sup>
(12)	52.0±5.8<sup>◆◆◆◆</sup>	136.1±14.0<sup>◆◆◆◆</sup>	7.2±0.9<sup>◆◆◆◆</sup>
				(13)	44.8±7.6<sup>◆</sup>	116.6±23.9<sup>◆</sup>	5.8±0.6<sup>◆</sup>
(14)	45.1±5.8<sup>◆◆</sup>	124.3±31.1<sup>◆</sup>	6.3±0.7<sup>◆◆</sup>

注：与空白组比较，^△p＜0.05，^△△p＜0.01，^△△△p＜0.001，^△△△△p＜0.0001；

与模型组比较，^*p＜0.05，^**p＜0.01，^***p＜0.001，^****p＜0.0001；

与丹参低剂量组比较，^#p＜0.05，^##p＜0.01，^###p＜0.001，^####p＜0.0001；

与丹参高剂量组比较，^◆p＜0.05，^◆◆p＜0.01，^◆◆◆p＜0.001，^◆◆◆◆p＜0.0001。

(3)组织Fas及FasL mRNA的表达

从图1与图2可以看出，与正常对照组比较，模型对照组观察期满后Fas及FasL表达均显著升高(均P＜0.01)。与模型组比较，除丹参粉末低剂量组以外，各给药组观察期满后Fas及FasL表达均显著下调(均P＜0.05)。与丹参粉末低剂量组比较，双丹明目胶囊低剂量组Fas及FasL表达下降，但差异没有显著性(均P＞0.05)。与丹参粉末高剂量组相比，双丹明目胶囊高剂量组、组合物1-2组、组合物4-5组Fas及FasL表达均下降(均P＜0.05)，组合物3组和组合物6-7组Fas及FasL表达虽然都下降，但仅有FasL表达有显著性差异(均P＜0.05)。值得注意的是，莱视盯抑制Fas及FasL表达的效果低于丹参粉末高剂量组，尤其是对FasL表达的影响，差异具有显著性(P＜0.05)。

5.实验结论

本研究成功造模干性AMD小鼠模型，表现为视网膜电图各指标(视杆细胞反应、最大反应、暗适应震荡反应、视锥细胞反应、10Hz闪烁光反应)振幅下降、眼内抗氧化酶(SOD、GSH-Px、CAT)活性下降以及肿瘤坏死因子(FasL)及其受体(Fas)表达增加，提示小鼠视网膜可能受到氧化损伤、视网膜功能衰退以及视网膜细胞受损。

与模型组比较，除丹参粉末低剂量组对肿瘤坏死因子(FasL)及其受体(Fas)表达没有显著抑制外，其他各给药组对模型小鼠的上述各项表现均有不同程度的显著保护作用(均P＜0.05)，提示本研究设计组别对干性AMD疾病均有一定的治疗作用。分别与丹参粉末低剂量组和高剂量组比较，双丹明目胶囊低剂量组和高剂量组的治疗效果更优，除低剂量组Fas表达量指标外，其他各指标实验值均有组间显著性差异(均P＜0.05)，提示双丹明目胶囊较纯丹参提取物具有疗效优势。与丹参粉末高剂量组相比，双丹明目胶囊高剂量组和组合物1-5组实验指标显著改善(均P＜0.05)，但六组间没有显著性差异(P＞0.05)。本实验结果表明，六组对AMD的治疗效果优于莱视盯组，尤其在视杆细胞反应、SOD酶活性以及Fas/FasL表达量上，差异具有显著性(P＜0.05)。同时，值得注意的是，组合物6-7组的整体治疗效果相比莱视盯组较差。

从上述结果可得知，在组合物1-3的配比范围内，其疗效优于同剂量的纯丹参提取物和临床常用药莱视盯。组合物4-5效果虽然与组合物1-3效果相似，但由于组合物不同，说明在组合物1-3的基础上增加几味药材，并不能增加疗效。组合物6在组合物1-3基础上减少了药味，组合物7超出了组合物1-3的配比范围，而两者在整体疗效上均有所下降，再一次证明组合物1-3的配比为最优。

总之，对干性AMD疾病的视网膜保护，双丹明目胶囊处方具有显著的疗效，其疗效优于纯丹参提取物和临床常用药莱视盯，其机制是更佳的抗氧化作用和改善细胞凋亡作用。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种组合物在制备治疗干性年龄相关性黄斑变性药物中的应用，其特征在于，所述的组合物由补阴药物、补气药物、活血药物、清热药物、利尿药物的原药材和/或它们的提取物组成；

所述补阴药物由女贞子、墨旱莲和山茱萸组成；

所述补气药物由山药组成；

所述活血药物由丹参、三七和牛膝组成；

所述清热药物由牡丹皮组成；

所述利尿药物由泽泻、茯苓和红土茯苓组成。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的组合物，以原料药计，包括20-50重量份补阴药物、10-30重量份补气药物、10-40重量份活血药物、5-20重量份清热药物和20-50重量份利尿药物。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的组合物，以原料药计，包括25-45重量份补阴药物、10-20重量份补气药物、15-35重量份活血药物、5-10重量份清热药物和20-40重量份利尿药物。

4.根据权利要求1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述的组合物，以原料药计，包括女贞子15份、墨旱莲12份、山茱萸12份、山药15份、丹参12份、三七6份、牡丹皮10份、泽泻10份、茯苓10份、红土茯苓15份和牛膝10份。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的提取物的制备方法选自溶剂提取、水蒸气蒸馏、粉碎、水煎、蒸煮、超声波、低温提取中的至少一种。

6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的组合物的药物剂型选自注射剂、片剂、胶囊剂、口服液体剂型、颗粒剂、软膏剂、栓剂中的至少一种。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述的组合物还包括药学可接受的辅料，所述的药学可接受的辅料选自填充剂、润滑剂、崩解剂、助流剂中的至少一种。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的组合物为双丹明目胶囊。

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