CN108078912A - 一种可长期保存的外泌体修复凝胶及其制备方法 - Google Patents

一种可长期保存的外泌体修复凝胶及其制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108078912A
CN108078912A CN201711386077.7A CN201711386077A CN108078912A CN 108078912 A CN108078912 A CN 108078912A CN 201711386077 A CN201711386077 A CN 201711386077A CN 108078912 A CN108078912 A CN 108078912A
Authority
CN
China
Prior art keywords
gel
propylene glycol
excretion body
glycol alginate
weight
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201711386077.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108078912B (zh
Inventor
曹毓琳
刘俊江
时兆田
白志惠
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jilin National Health Life Engineering Science And Technology Co Ltd
Original Assignee
Jilin National Health Life Engineering Science And Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jilin National Health Life Engineering Science And Technology Co Ltd filed Critical Jilin National Health Life Engineering Science And Technology Co Ltd
Priority to CN201711386077.7A priority Critical patent/CN108078912B/zh
Publication of CN108078912A publication Critical patent/CN108078912A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108078912B publication Critical patent/CN108078912B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明提供一种可长期保存的外泌体修复凝胶，该修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.2×1012‑0.5×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由去离子水、异丙醇胺、海藻酸丙二醇酯微囊和甘油组成，该修复凝胶在凝胶基质中加入海藻酸丙二醇酯微囊可以提高修复凝胶的稳定性，可以用于长时间保存外泌体，使得外泌体具有很高的存活率。

Description

一种可长期保存的外泌体修复凝胶及其制备方法
技术领域
本发明属于凝胶制剂技术领域，特别涉及一种可长期保存的外泌体修复凝胶及其制备方法。
背景技术
1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome”。现今，其特指直径在40-100nm的盘状囊泡。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体。其主要来源于细胞内内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到胞外基质中。
凝胶制剂是国内近年来兴起的一种药物新剂型，系指药物与适宜的辅料制成均匀或混悬的透明或半透明的半固体制剂。制备凝胶常用的基质包括羟丙甲基纤维素、丙烯酸树脂等，凝胶制剂在制备过程中会使用大量的高分子药用辅料，其严重影响凝胶制剂的质量和各性能。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种可长期保存的外泌体修复凝胶及其制备方法，该冻凝胶制剂具有很好的稳定性及各项其他性能。
本发明具体技术方案如下：
本发明提供一种可长期保存的外泌体修复凝胶，该修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.2×1012-0.5×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量份数的组分组成：
进一步的改进，所述海藻酸丙二醇酯微囊是由如下重量份数成分制备而成：
海藻酸丙二醇酯 3.2-6.5
普鲁兰 0.8-1.5
硬脂酸钠 0.3-0.5。
本发明通过在修复凝胶内加入海藻酸丙二醇酯微囊一方面其可以起到凝胶基质的作用，另一方面可以降低凝胶基质的使用量，并且整个修复凝胶中没有用到羟丙甲基纤维素、丙烯酸树脂等高分子药用辅料就可以制成凝胶制剂，并且该凝胶制剂的稳定性好，可用于长时间保存外泌体，使得保存的外泌体具有很高的存活率。
进一步的改进，该海藻酸丙二醇酯微囊是通过如下方法制备的到的：将普鲁兰置于75℃水浴中加热，趁热加入2/3重量份的海藻酸丙二醇酯和1/2重量份的硬脂酸钠，转速为3000转/min，搅拌8min，加入普鲁兰1.2倍重量份的去离子水，转速为2500转/min，搅拌10min，加入1/3重量份的海藻酸丙二醇酯，转速为1500转/min，搅拌15min，制得混合物，向混合物内加入1/2重量份的硬脂酸钠，继续搅拌，转速为4800转/min，搅拌15min，获得均匀物，向均匀物内加入冷的石油醚，继续搅拌，使均匀物凝固，滤过，自然干燥，制得粒径范围为50-100μm的海藻酸丙二醇酯微囊。
严格控制海藻酸丙二醇酯微囊的制备过程，可以提高海藻酸丙二醇酯微囊的成型率，提高海藻酸丙二醇酯微囊在水中的分散率，进而提高该海藻酸丙二醇酯在水中的溶解性能，保证其能够起到很好地保持外泌体活率的性能。
进一步的改进，所述凝胶基质还包括重量份数为2-3.1份的磷脂酰丝氨酸复合物。
进一步的改进，所述磷脂酰丝氨酸复合物是由如下重量份的成分制备而成：
磷酯酰丝氨酸 1.5-2.2
月桂醇硫酸酯钠 0.5-0.9。
本发明通过在凝胶基质中加入磷脂酰丝氨酸复合物，其可以显著提高修复凝胶的透皮吸收性能，还可以提高外泌体在凝胶基质内的分散性，并且加入的磷脂酰丝氨酸复合物不会对外泌体产生干扰和吸附作用，不会影响外泌体的活性，其可以在外泌体周围形成一夹药膜，进而使得外泌体能够发挥缓释的作用，还可以起到二次稳定性的作用。
进一步的改进，所述凝胶基质还包括重量份数为0.1-0.3份的木糖醇和0.2-0.5份的吐温-80。
本发明通过在凝胶基质加入木糖醇和吐温-80可以显著提高修复凝胶与皮肤的粘结性，可显著降低修复凝胶对皮肤的刺激性。
进一步的改进，所述修复凝胶主要由下列重量份数的组分组成：
去离子水 80
异丙醇胺 0.6
海藻酸丙二醇酯微囊
磷脂酰丝氨酸复合物
本发明另一方面提供一种可长期保存的外泌体修复凝胶的制备方法，该方法包括如下步骤：
S1：制备海藻酸丙二醇酯微囊；
S2：制备磷脂酰丝氨酸复合物；
S3：将海藻酸丙二醇酯微囊溶于去离子水中，静置过液，加入甘油和异丙醇胺，搅拌10min，转速3500转/min，加入磷脂酰丝氨酸复合物、木糖醇和吐温-80，搅拌13min，转速500转/min，配置凝胶基质，以每g所述凝胶基质中含有0.2×1012-0.5×1012个外泌体的量加入外泌体，搅拌均匀即得。
进一步的改进，所述海藻酸丙二醇酯微囊的制备方法为：将普鲁兰置于75℃水浴中加热，趁热加入2/3重量份的海藻酸丙二醇酯和1/2重量份的硬脂酸钠，转速为3000转/min，搅拌8min，加入普鲁兰1.2倍重量份的去离子水，转速为2500转/min，搅拌10min，加入1/3重量份的海藻酸丙二醇酯，转速为1500转/min，搅拌15min，制得混合物，向混合物内加入1/2重量份的硬脂酸钠，继续搅拌，转速为4800转/min，搅拌15min，获得均匀物，向均匀物内加入冷的石油醚，继续搅拌，使均匀物凝固，滤过，自然干燥，制得粒径范围为50-100μm的海藻酸丙二醇酯微囊。
进一步的改进，所述磷脂酰丝氨酸复合物的制备方法为：将磷酯酰丝氨酸溶于乙醇中，磷脂酰丝氨酸和乙醇的重量份比为1:0.8，于旋转蒸发仪上减压蒸发成膜，将月桂醇硫酸酯钠溶于水中，月桂醇硫酸酯钠和水的重量份比为1:1.3，制得水溶液，将成的膜溶于水溶液中，经水化后，过滤，制得磷脂酰丝氨酸复合物。
本发明制备的修复凝胶具有很高的稳定性。
本发明提供的可长期保存的外泌体修复凝胶，在凝胶基质中加入海藻酸丙二醇酯微囊可以提高修复凝胶的稳定性，可以用于长时间保存外泌体，使得外泌体具有很高的存活率。
具体实施方式
实施例1 一种修复凝胶
所述修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.5×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 84g
异丙醇胺 1g
海藻酸丙二醇酯微囊
实施例2 一种修复凝胶
所述修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.3×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 80g
异丙醇胺 0.6g
海藻酸丙二醇酯微囊
海藻酸丙二醇酯微囊是通过如下方法制备得到的:将1g普鲁兰置于75℃水浴中加热，趁热加入2.4g的海藻酸丙二醇酯和0.2g的硬脂酸钠，转速为3000转/min，搅拌8min，加入1.2g去离子水，转速为2500转/min，搅拌10min，加入1.2g海藻酸丙二醇酯，转速为1500转/min，搅拌15min，制得混合物，向混合物内加入0.2g的硬脂酸钠，继续搅拌，转速为4800转/min，搅拌15min，获得均匀物，向均匀物内加入冷的石油醚，继续搅拌，使均匀物凝固，滤过，自然干燥，制得粒径范围为50μm的海藻酸丙二醇酯微囊。
实施例3 一种修复凝胶
所述修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.2×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 75g
异丙醇胺 0.5g
海藻酸丙二醇酯微囊
该修复凝胶的制备方法为：
S1：制备海藻酸丙二醇酯微囊：将0.8g普鲁兰置于75℃水浴中加热，趁热加入2.2g的海藻酸丙二醇酯和0.15g的硬脂酸钠，转速为3000转/min，搅拌8min，加入0.96g去离子水，转速为2500转/min，搅拌10min，加入1.1g海藻酸丙二醇酯，转速为1500转/min，搅拌15min，制得混合物，向混合物内加入0.15g的硬脂酸钠，继续搅拌，转速为4800转/min，搅拌15min，获得均匀物，向均匀物内加入冷的石油醚，继续搅拌，使均匀物凝固，滤过，自然干燥，制得粒径范围为75μm的海藻酸丙二醇酯微囊；
S2：将海藻酸丙二醇酯微囊溶于75g去离子水中，静置过液，加入甘油和异丙醇胺，搅拌10min，转速3500转/min，配置凝胶基质，以每g凝胶基质中含有0.2×1012个外泌体的量向凝胶基质中加入外泌体，搅拌均匀即得修复凝胶。
实施例4 一种修复凝胶
所述修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.2×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 82g
异丙醇胺 0.8g
海藻酸丙二醇酯微囊
该修复凝胶的制备方法同实施例3。
实施例5 一种修复凝胶
该修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.5×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 85g
异丙醇胺 1g
海藻酸丙二醇酯微囊
磷脂酰丝氨酸复合物
磷酯酰丝氨酸 2g
月桂醇硫酸酯钠 0.8g
海藻酸丙二醇酯微囊是通过如下方法制备得到的:将1.5g普鲁兰置于75℃水浴中加热，趁热加入约4.33g的海藻酸丙二醇酯和0.25g的硬脂酸钠，转速为3000转/min，搅拌8min，加入1.8g去离子水，转速为2500转/min，搅拌10min，加入2.17g海藻酸丙二醇酯，转速为1500转/min，搅拌15min，制得混合物，向混合物内加入0.25g的硬脂酸钠，继续搅拌，转速为4800转/min，搅拌15min，获得均匀物，向均匀物内加入冷的石油醚，继续搅拌，使均匀物凝固，滤过，自然干燥，制得粒径范围为100μm的海藻酸丙二醇酯微囊；
磷脂酰丝氨酸复合物是通过如下方法制备得到的：将2g磷酯酰丝氨酸溶于1.6g乙醇中，于旋转蒸发仪上减压蒸发成膜，将0.8g月桂醇硫酸酯钠溶于1.04g水中，制得水溶液，将成的膜溶于水溶液中，经水化后，过滤，制得磷脂酰丝氨酸复合物。
实施例6 一种修复凝胶
该修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.2×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 77g
异丙醇胺 0.7g
海藻酸丙二醇酯微囊
磷脂酰丝氨酸复合物
磷酯酰丝氨酸 1.5g
月桂醇硫酸酯钠 0.5g
该修复凝胶的制备方法为：
S1：制备海藻酸丙二醇酯微囊：同实施例5；
S2：制备磷脂酰丝氨酸复合物：同实施例5；
S3：将海藻酸丙二醇酯微囊溶于77g去离子水中，静置过液，加入4g甘油和0.7g异丙醇胺，搅拌10min，转速3500转/min，加入磷脂酰丝氨酸复合物，搅拌13min，转速500转/min，配置凝胶基质，以每g凝胶基质中含有0.2×1012个外泌体的量加入向凝胶基质中加入外泌体，搅拌均匀即得修复凝胶。
实施例7 一种修复凝胶
该修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.4×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 80g
异丙醇胺 1g
海藻酸丙二醇酯微囊
磷脂酰丝氨酸复合物
磷酯酰丝氨酸 1.9g
月桂醇硫酸酯钠 0.7g
该修复凝胶的制备方法同实施例6。
实施例8 一种修复凝胶
该修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.3×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 80g
异丙醇胺 0.6g
海藻酸丙二醇酯微囊
磷脂酰丝氨酸复合物
该修复凝胶的制备方法为：
S1：制备海藻酸丙二醇酯微囊：同实施例5；
S2：制备磷脂酰丝氨酸复合物：同实施例5；
S3：将海藻酸丙二醇酯微囊溶于77g去离子水中，静置过液，加入4g甘油和0.7g异丙醇胺，搅拌10min，转速3500转/min，加入磷脂酰丝氨酸复合物、0.2g木糖醇和0.4g吐温-80，搅拌13min，转速500转/min，配置凝胶基质，以每g凝胶基质中含有0.3×1012个外泌体的量加入向凝胶基质中加入外泌体，搅拌均匀即得修复凝胶。
实施例9 一种修复凝胶
该修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.3×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 80g
异丙醇胺 0.9g
海藻酸丙二醇酯微囊
磷脂酰丝氨酸复合物
该修复凝胶的制备方法同实施例8。
实施例10 一种修复凝胶
该修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.5×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 79g
异丙醇胺 0.9g
海藻酸丙二醇酯微囊
磷脂酰丝氨酸复合物
该修复凝胶的制备方法同实施例8。
对照例1 一种修复凝胶
所述修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.3×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 80g
异丙醇胺 0.6g
海藻酸丙二醇酯微囊
海藻酸丙二醇酯微囊是通过如下方法制备得到的:将1g普鲁兰置于75℃水浴中加热，趁热加入3.6g的海藻酸丙二醇酯和0.4g的硬脂酸钠，再加入1.2g去离子水，转速为2500转/min，搅拌25min，制得均匀物，向均匀物内加入冷的石油醚，继续搅拌，使均匀物凝固，滤过，自然干燥，制得粒径范围为50μm的海藻酸丙二醇酯微囊。
对照例2 一种修复凝胶
所述修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.3×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 80g
异丙醇胺 0.6g
海藻酸丙二醇酯混合物
海藻酸丙二醇酯混合物是通过如下方法制备得到的：将1g普鲁兰置于75℃水浴中加热，趁热加入2.4g的海藻酸丙二醇酯和0.2g的硬脂酸钠，转速为3000转/min，搅拌8min，加入1.2g去离子水，转速为2500转/min，搅拌10min，加入1.2g海藻酸丙二醇酯，转速为1500转/min，搅拌15min，制得混合物，向混合物内加入0.2g的硬脂酸钠，继续搅拌，转速为4800转/min，搅拌15min，获得均匀物，自然干燥，制得海藻酸丙二醇酯混合物。
对照例3 一种修复凝胶
所述修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.2×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 75g
异丙醇胺 0.5g
海藻酸丙二醇酯微囊
海藻酸丙二醇酯 3.3g
甘露醇 0.8g
甘油 3.5g
该修复凝胶的制备方法为：
S1：制备海藻酸丙二醇酯微囊：将0.8g甘露醇置于75℃水浴中加热，趁热加入2.2g的海藻酸丙二醇酯，转速为3000转/min，搅拌8min，加入0.96g去离子水，转速为2500转/min，搅拌10min，加入1.1g海藻酸丙二醇酯，转速为1500转/min，搅拌15min，制得混合物，向混合物内加入冷的石油醚，继续搅拌，使均匀物凝固，滤过，自然干燥，制得粒径范围为75μm的海藻酸丙二醇酯微囊；
S2：将海藻酸丙二醇酯微囊溶于75g去离子水中，静置过液，加入甘油和异丙醇胺，搅拌10min，转速3500转/min，配置凝胶基质，以每g凝胶基质中含有0.2×1012个外泌体的量向凝胶基质中加入外泌体，搅拌均匀即得修复凝胶。
对照例4 一种修复凝胶
所述修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.2×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 75g
异丙醇胺 0.5g
羧甲基纤维素钠微囊
该修复凝胶的制备方法为：
S1：制备羧甲基纤维素钠微囊：将0.8g普鲁兰置于75℃水浴中加热，趁热加入2.2g的羧甲基纤维素钠和0.15g的十二烷基硫酸钠，转速为3000转/min，搅拌8min，加入0.96g去离子水，转速为2500转/min，搅拌10min，加入1.1g羧甲基纤维素钠，转速为1500转/min，搅拌15min，制得混合物，向混合物内加入0.15g的硬脂酸钠，继续搅拌，转速为4800转/min，搅拌15min，获得均匀物，向均匀物内加入冷的石油醚，继续搅拌，使均匀物凝固，滤过，自然干燥，制得粒径范围为75μm的羧甲基纤维素钠；
S2：将羧甲基纤维素钠微囊溶于75g去离子水中，静置过液，加入甘油和异丙醇胺，搅拌10min，转速3500转/min，配置凝胶基质，以每g凝胶基质中含有0.2×1012个外泌体的量向凝胶基质中加入外泌体，搅拌均匀即得修复凝胶。
对照例5 一种修复凝胶
该修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.2×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 85g
异丙醇胺 1g
海藻酸丙二醇酯微囊
卵磷脂复合物
卵磷脂 2g
月桂醇硫酸酯钠 0.8g
海藻酸丙二醇酯微囊是通过如下方法制备得到的:将1.5g普鲁兰置于75℃水浴中加热，趁热加入约4.33g的海藻酸丙二醇酯和0.25g的硬脂酸钠，转速为3000转/min，搅拌8min，加入1.8g去离子水，转速为2500转/min，搅拌10min，加入2.17g海藻酸丙二醇酯，转速为1500转/min，搅拌15min，制得混合物，向混合物内加入0.25g的硬脂酸钠，继续搅拌，转速为4800转/min，搅拌15min，获得均匀物，向均匀物内加入冷的石油醚，继续搅拌，使均匀物凝固，滤过，自然干燥，制得粒径范围为100μm的海藻酸丙二醇酯微囊；
卵磷脂复合物是通过如下方法制备得到的：将2g卵磷脂溶于1.6g乙醇中，于旋转蒸发仪上减压蒸发成膜，将0.8g月桂醇硫酸酯钠溶于1.04g水中，制得水溶液，将成的膜溶于水溶液中，经水化后，过滤，制得卵磷脂复合物。
对照例6 一种修复凝胶
该修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.2×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 77g
异丙醇胺 0.7g
海藻酸丙二醇酯微囊
该修复凝胶的制备方法为：
S1：制备海藻酸丙二醇酯微囊：同实施例5；
S2：将海藻酸丙二醇酯微囊溶于77g去离子水中，静置过液，加入4g甘油和0.7g异丙醇胺，搅拌10min，转速3500转/min，加入1.5g磷脂酰丝氨酸和0.5g月桂醇硫酸酯钠，搅拌13min，转速500转/min，配置凝胶基质，以每g凝胶基质中含有0.2×1012个外泌体的量加入向凝胶基质中加入外泌体，搅拌均匀即得修复凝胶。
对照例7 一种修复凝胶
该修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.2×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 77g
异丙醇胺 0.7g
海藻酸丙二醇酯微囊
磷脂酰丝氨酸复合物
磷酯酰丝氨酸 1.5g
十二烷基硫酸钠 0.5g
该修复凝胶的制备方法为：
S1：制备海藻酸丙二醇酯微囊：同实施例5；
S2：制备磷脂酰丝氨酸复合物：同实施例5，将月桂醇硫酸酯钠换成十二烷基硫酸钠；
S3：将海藻酸丙二醇酯微囊溶于77g去离子水中，静置过液，加入4g甘油和0.7g异丙醇胺，搅拌10min，转速3500转/min，加入磷脂酰丝氨酸复合物，搅拌13min，转速500转/min，配置凝胶基质，以每g凝胶基质中含有0.2×1012个外泌体的量加入向凝胶基质中加入外泌体，搅拌均匀即得修复凝胶。
对照例8 一种修复凝胶
该修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.3×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 80g
异丙醇胺 0.6g
海藻酸丙二醇酯微囊
磷脂酰丝氨酸复合物
该修复凝胶的制备方法为：制备方法同实施例8，将吐温-80换成司盘-80。
对照例9 一种修复凝胶
该修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.3×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量的组分组成：
去离子水 80g
异丙醇胺 0.6g
海藻酸丙二醇酯微囊
磷脂酰丝氨酸复合物
该修复凝胶的制备方法为：制备方法同实施例8，将木糖醇换成葡萄糖和甘露醇。
实验例1 修复凝胶冻存后外泌体活力的检测
取本发明实施例2-4和对照例1-4的修复凝胶，置于液氮中，分别在的冻存1个月、2个月、3个月、6个月、9个月和12个月从液氮中取出，置于37℃的水浴中，复苏1-2min，用台盼蓝染色法进行细胞计数，计算外泌体存活率，检测结果见表1。
表1 各实施例和对照例修复凝胶外泌体活率的检测结果
从表中可以看出，本发明提供的修复凝胶性质稳定，可以长时间保存外泌体，保存12个月后，细胞存活率均超过90.6％，表明本发明提供的修复凝胶可以用于长时间保存间充质干细胞，从对照例的修复凝胶保存的细胞存活率可以看出，当对修复凝胶中的各成分进行替换、删除或者改变微囊的制备方法均会影响修复凝胶冻存的细胞活力及冻存的时间。
实验例2 体外皮肤吸收试验
实验方法：取成年雄性大鼠，处死，剥离腹部皮肤，在进行脱毛处理，置于生理盐水中备用，采用Franz扩散池，有效渗透面积为0.8cm2，接收介质为生理盐水，接受池体积为5mL。
将处理后的大鼠皮肤均匀分成等面积的5块，分为试验1组、试验2组、对照1-3组，试验1组的皮肤块涂覆本发明实施例4的修复凝胶，试验例2组的皮肤块涂覆本发明实施例6的修复凝胶，对照1-3组的皮肤块分别涂覆对照例5-7的修复凝胶；每块皮肤各涂覆0.2g修复凝胶，将涂覆修复凝胶的皮肤块置于供给池中于37℃、500r/min进行透皮试验，分别于0.5、1、2、4、6、8、10、12h将全部接受液去除(同时补充等量生理盐水)，8000r/min离心10min，取上清液，采用台盼蓝染色法计算外泌体的个数，计算单位面积累积经皮渗透量Qn，以Qn对时间t作图，并对曲线中的直线部分线性回归，所得直线斜率即稳态渗透速率Js(个/cm2·h)，结果见表2。
表2 体外透皮吸收试验结果(n＝3)
从表中可以看出，在凝胶基质中加入磷脂酰丝氨酸复合物可显著提高修复凝胶的皮肤渗透性。
实验例3 体外皮肤刺激性实验
取成年健康家兔8只，雌雄各半，体重2-2.1kg，将家兔背部脊柱两侧毛脱掉，脱毛面积每侧约为10cm2。随机分为4组，完整试验1组、试验2组、对照1组和对照2组，试验1组家兔涂覆实施例4的修复凝胶，试验2组家兔涂覆实施例8的修复凝胶，对照1组涂覆对照例8的修复凝胶，对照2组涂覆对照例9的修复凝胶，连续涂覆7天，于1、24、48、72h结果观察涂覆处有无红斑和水肿等症状，按照表3进行评分，结果见表4。
表3 皮肤刺激反应评分标准
表4 修复凝胶刺激性评分结果
表明本发明在凝胶基质中加入木糖醇和吐温-80的混合物可以降低修复凝胶对皮肤的刺激性。

Claims (10)

1.一种可长期保存的外泌体修复凝胶，其特征在于，所述修复凝胶由外泌体和凝胶基质组成，每g所述凝胶基质中含有0.2×1012-0.5×1012个外泌体，所述凝胶基质主要由下列重量份数的组分组成：
2.如权利要求1所述的可长期保存的外泌体修复凝胶，其特征在于，所述海藻酸丙二醇酯微囊是由如下重量份数成分制备而成：
海藻酸丙二醇酯 3.2-6.5
普鲁兰 0.8-1.5
硬脂酸钠 0.3-0.5。
3.如权利要求2所述的可长期保存的外泌体修复凝胶，其特征在于，所述海藻酸丙二醇酯微囊是通过如下方法制备的到的：将普鲁兰置于75℃水浴中加热，趁热加入2/3重量份的海藻酸丙二醇酯和1/2重量份的硬脂酸钠，转速为3000转/min，搅拌8min，加入去离子水，转速为2500转/min，搅拌10min，加入1/3重量份的海藻酸丙二醇酯，转速为1500转/min，搅拌15min，制得混合物，向混合物内加入1/2重量份的硬脂酸钠，继续搅拌，转速为4800转/min，搅拌15min，获得均匀物，向均匀物内加入冷的石油醚，继续搅拌，使均匀物凝固，滤过，自然干燥，制得粒径范围为50-100μm的海藻酸丙二醇酯微囊。
4.如权利要求1所述的可长期保存的外泌体修复凝胶，其特征在于，所述凝胶基质还包括重量份数为2-3.1份的磷脂酰丝氨酸复合物。
5.如权利要求4所述的可长期保存的外泌体修复凝胶，其特征在于，所述磷脂酰丝氨酸复合物是由如下重量份的成分制备而成：
磷酯酰丝氨酸 1.5-2.2
月桂醇硫酸酯钠 0.5-0.9。
6.如权利要求5所述的可长期保存的外泌体修复凝胶，其特征在于，所述凝胶基质还包括重量份数为0.1-0.3份的木糖醇和0.2-0.5份的吐温-80。
7.如权利要求6所述的可长期保存的外泌体修复凝胶，其特征在于，所述凝胶基质主要由下列重量份数的组分组成：
去离子水 80
异丙醇胺 0.6
海藻酸丙二醇酯微囊
磷脂酰丝氨酸复合物
8.一种权利要求7所述的可长期保存的外泌体修复凝胶的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
S1：制备海藻酸丙二醇酯微囊；
S2：制备磷脂酰丝氨酸复合物；
S3：将海藻酸丙二醇酯微囊溶于去离子水中，静置过液，加入甘油和异丙醇胺，搅拌10min，转速3500转/min，加入磷脂酰丝氨酸复合物、木糖醇和吐温-80，搅拌13min，转速500转/min，配置凝胶基质，以每g凝胶基质中含有0.2×1012-0.5×1012个外泌体的量加入外泌体，搅拌均匀即得。
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述海藻酸丙二醇酯微囊的制备方法为：将普鲁兰置于75℃水浴中加热，趁热加入2/3重量份的海藻酸丙二醇酯和1/2重量份的硬脂酸钠，转速为3000转/min，搅拌8min，加入普鲁兰1.2倍重量份的去离子水，转速为2500转/min，搅拌10min，加入1/3重量份的海藻酸丙二醇酯，转速为1500转/min，搅拌15min，制得混合物，向混合物内加入1/2重量份的硬脂酸钠，继续搅拌，转速为4800转/min，搅拌15min，获得均匀物，向均匀物内加入冷的石油醚，继续搅拌，使均匀物凝固，滤过，自然干燥，制得粒径范围为50-100μm的海藻酸丙二醇酯微囊。
10.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述磷脂酰丝氨酸复合物的制备方法为：将磷酯酰丝氨酸溶于乙醇中，磷脂酰丝氨酸和乙醇的重量份比为1:0.8，于旋转蒸发仪上减压蒸发成膜，将月桂醇硫酸酯钠溶于水中，月桂醇硫酸酯钠和水的重量份比为1:1.3，制得水溶液，将成的膜溶于水溶液中，经水化后，过滤，制得磷脂酰丝氨酸复合物。
CN201711386077.7A 2017-12-20 2017-12-20 一种可长期保存的外泌体修复凝胶及其制备方法 Active CN108078912B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711386077.7A CN108078912B (zh) 2017-12-20 2017-12-20 一种可长期保存的外泌体修复凝胶及其制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711386077.7A CN108078912B (zh) 2017-12-20 2017-12-20 一种可长期保存的外泌体修复凝胶及其制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108078912A true CN108078912A (zh) 2018-05-29
CN108078912B CN108078912B (zh) 2021-01-12

Family

ID=62177556

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711386077.7A Active CN108078912B (zh) 2017-12-20 2017-12-20 一种可长期保存的外泌体修复凝胶及其制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108078912B (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108042411A (zh) * 2018-01-19 2018-05-18 宜春市千年红杉生物科技有限公司 一种红豆杉洗发水及其制备方法和应用
CN108619114A (zh) * 2018-05-02 2018-10-09 东南大学 一种负载地塞米松的巨噬细胞源微囊泡及其制备方法和应用
CN110623920A (zh) * 2019-11-05 2019-12-31 张伟 一种可长期保存的外泌体修复凝胶及其制备方法
CN115997760A (zh) * 2023-03-24 2023-04-25 北京汉氏联合生物技术股份有限公司 一种外泌体凝胶及其制备方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101836949A (zh) * 2010-02-11 2010-09-22 上海现代药物制剂工程研究中心有限公司 含有止吐活性药物的透皮凝胶制剂及制备方法
CN102755328A (zh) * 2011-04-29 2012-10-31 上海医药工业研究院 积雪草酸盐微乳软胶囊及其制备方法
CN104894062A (zh) * 2015-05-19 2015-09-09 暨南大学 一种干细胞外泌体补片及其制备方法与应用
WO2016145330A1 (en) * 2015-03-11 2016-09-15 Atta Behfar Exosome delivery technology
CN106676065A (zh) * 2017-03-10 2017-05-17 四川大学 一种脂肪组织来源外泌体胶及制备方法及应用
CN107158035A (zh) * 2017-05-17 2017-09-15 天津普瑞赛尔生物科技有限公司 含有高浓度人间充质干细胞外泌体提取物的治疗褥疮外用凝胶及其制备方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101836949A (zh) * 2010-02-11 2010-09-22 上海现代药物制剂工程研究中心有限公司 含有止吐活性药物的透皮凝胶制剂及制备方法
CN102755328A (zh) * 2011-04-29 2012-10-31 上海医药工业研究院 积雪草酸盐微乳软胶囊及其制备方法
WO2016145330A1 (en) * 2015-03-11 2016-09-15 Atta Behfar Exosome delivery technology
CN104894062A (zh) * 2015-05-19 2015-09-09 暨南大学 一种干细胞外泌体补片及其制备方法与应用
CN106676065A (zh) * 2017-03-10 2017-05-17 四川大学 一种脂肪组织来源外泌体胶及制备方法及应用
CN107158035A (zh) * 2017-05-17 2017-09-15 天津普瑞赛尔生物科技有限公司 含有高浓度人间充质干细胞外泌体提取物的治疗褥疮外用凝胶及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
V. I. BUTVILOVSKAYA等: "Hydrogel microchip as a tool for studying exosomes in human serum", 《MOLECULAR BIOLOGY》 *
张解元: "基于干细胞外泌体的骨组织工程研究", 《上海交通大学博士学位论文》 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108042411A (zh) * 2018-01-19 2018-05-18 宜春市千年红杉生物科技有限公司 一种红豆杉洗发水及其制备方法和应用
CN108619114A (zh) * 2018-05-02 2018-10-09 东南大学 一种负载地塞米松的巨噬细胞源微囊泡及其制备方法和应用
CN110623920A (zh) * 2019-11-05 2019-12-31 张伟 一种可长期保存的外泌体修复凝胶及其制备方法
CN115997760A (zh) * 2023-03-24 2023-04-25 北京汉氏联合生物技术股份有限公司 一种外泌体凝胶及其制备方法
CN115997760B (zh) * 2023-03-24 2023-06-16 北京汉氏联合生物技术股份有限公司 一种外泌体凝胶及其制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108078912B (zh) 2021-01-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108078912A (zh) 一种可长期保存的外泌体修复凝胶及其制备方法
CN103520006A (zh) 一种柔性纳米脂质体及其制备方法和应用
CN104689337B (zh) 一种利用金属‑有机骨架材料负载5‑氟尿嘧啶的方法
CN111973494B (zh) 长效保湿型保湿面霜及其制备方法
CN107028919A (zh) 一种复方七叶皂苷a、b脂质体水凝胶贴剂
Boateng et al. Composite sodium alginate and chitosan based wafers for buccal delivery of macromolecules.
CN107320716B (zh) 碱性成纤维细胞生长因子囊泡及其制备方法
CN112675154B (zh) 一种双响应药物释放的MOFs@IBU纳米纤维透皮缓释材料及其制备方法与应用
CN102670508B (zh) 一种稳定的脂质体及其制备方法
CN106389336B (zh) 液晶纳米粒前体微粒、自组装液晶纳米粒及其制备方法
CN101658495B (zh) 一种氢溴酸高乌甲素固体脂质纳米粒及其制备方法
CN103565778A (zh) 叶黄素微胶囊及其制备方法
CN107898810A (zh) 一种间充质干细胞修复注射液及其制备方法
CN101732251A (zh) 一种奥拉西坦脂质体注射剂
CN105125419A (zh) 一种聚乙二醇修饰的维生素e脂质体面膜及其制备方法
CN103565756A (zh) 一种米铂冻干制剂的制备方法
CN102652730B (zh) 软膏基质、苦参绿茶软膏及其制备方法
CN106560175B (zh) 一种薄荷脑-樟脑低共熔物纳米乳原位凝胶制剂
CN103720641A (zh) 牛磺酸眼用在体凝胶制剂及其制备方法
CN107961167A (zh) 一种胎盘提取物凝胶制剂及其制备方法
CN108030766A (zh) 可长期保存的胎盘亚全能干细胞凝胶制剂及制备方法
CN101623260B (zh) 盐酸头孢吡肟前体脂质体制剂
CN107970205B (zh) 双硫仑即型凝胶滴眼剂及其制备和应用
CN115093617B (zh) 一种水凝胶基膜及其制备方法和应用
CN107252431A (zh) 一种复方七叶皂苷a脂质体水凝胶贴剂

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant