CN101623260B - 盐酸头孢吡肟前体脂质体制剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种盐酸头孢吡肟前体脂质体。所述的盐酸头孢吡肟前体脂质体，以重量份计，由如下组分制成：盐酸头孢吡肟3-20份，二棕榈酰磷脂酰甘油5-40份，胆固醇1-30份和支持剂3-50份，并且所述的支持剂为重量比为1∶4的氯化钠和甘露醇。本发明的盐酸头孢吡肟脂质体稳定性大大提高，药物载体脂质体体内降解、无毒性和无免疫原性，而且可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用；本发明的脂质体采用常规的工艺设备即可制备，并且可工业规模、高效率生产，并且该产品的生产成本低。

Description

盐酸头孢吡肟前体脂质体制剂

发明领域

本发明涉及盐酸头孢吡肟前体脂质体及其制备方法，属于医药领域。

背景技术

盐酸头孢吡肟，其化学名称为：1-[[(6R，7R)-7-[2-(2-氨基-4-噻唑基)-乙醛酰胺基]-2-羧基-8-氧代-5-硫杂-1-氮杂双环[4.2.0]辛-2-烯-3-基]甲基]-1-甲基吡咯烷氯化物，72-(Z)-(O-甲基肟)，盐酸盐的一水化合物，分子式：C₁₉H₂₄N₆O₅S₂·2HCl·H₂O，分子量：571.49结构式如下：

它是广谱第四代头孢菌素，通过抑制细菌细胞壁的生物合成而达到杀菌作用。体外试验表明，本品对革兰氏阳性菌和阴性菌均有作用，特别对链球菌、肺炎链球菌的活性大大增强。目前，临床上主要用于敏感菌所引起的各种感染。

目前上市的盐酸头孢吡肟为无菌粉针剂剂型，稳定性差，对温度和光的不稳定，复溶后出现混浊现象，而且需阴凉处保存。

中国专利CN101332188A公开了一种采用超微粉碎技术制备盐酸头孢吡肟无菌粉末的方法，将盐酸头孢吡肟经超微粉碎机，通过气流粉碎技术，粉碎成粒径为1250-2500目的超微细粉，再进行无菌分装，制得注射用无菌粉末。该方法只是改变了分装过程中的流动性差和复溶慢的缺点，在水溶液中同样会很快水解氧化，并没有改变稳定性差的问题。

中国专利CN101229128A公开了一种盐酸头孢吡肟粉针剂，由原料盐酸头孢吡肟和辅料L-精氨酸组成，所述的辅料L-精氨酸的含量为原料盐酸头孢吡肟的83.5％，在100级洁净区内将盐酸头孢吡肟与L-精氨酸分别粉碎，混合，分装，制得盐酸头孢吡肟粉针。该方法只是加入了pH值调节剂L-精氨酸，使复溶后pH值达到人体注射的范围，并没有对盐酸头孢吡肟采取相应的保护措施，同样没有改变稳定性差的问题。

因此，制备一种稳定的盐酸头孢吡肟的药用剂型，已经成为迫切解决的问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种盐酸头孢吡肟前体脂质体，该脂质体解决了现有盐酸头孢吡肟制剂粉针剂稳定性差，对温度和光的不稳定，复溶后出现混浊现象的问题。

本发明一方面提供了一种盐酸头孢吡肟前体脂质体，以重量份计，所述的盐酸头孢吡肟前体脂质体包含如下组分：盐酸头孢吡肟3-20份，二棕榈酰磷脂酰甘油5-40份，胆固醇1-30份，支持剂3-50份，其中，所述的支持剂为重量比为1∶4的氯化钠和甘露醇。

优选地，以重量份计，所述的盐酸头孢吡肟前体脂质体包含如下组分：盐酸头孢吡肟5-15份，二棕榈酰磷脂酰甘油10-30份，胆固醇3-20份，支持剂5-40份。

优选地，以重量份计，所述的盐酸头孢吡肟前体脂质体包含如下组分：盐酸头孢吡肟10份，二棕榈酰磷脂酰甘油20份，胆固醇8份，支持剂30份。

本发明另一方面还提供了一种制备所述的盐酸头孢吡肟前体脂质体的方法，该方法包括如下步骤：

(1)将二棕榈酰磷脂酰甘油、胆固醇溶于有机溶剂中，混合均匀，除去有机溶剂，制得磷脂膜；

(2)向制得的磷脂膜中加入缓冲盐溶液，使磷脂膜完全水化，制得空白脂质体混悬液；

(3)将盐酸头孢吡肟溶于水，加入到空白脂质体混悬液中，再加入支持剂，制得盐酸头孢吡肟脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥或喷雾干燥，即得盐酸头孢吡肟前体脂质体。

作为优选，本发明制备所述的盐酸头孢吡肟前体脂质体的方法，该方法包括如下步骤：

(1)将二棕榈酰磷脂酰甘油、胆固醇溶于有机溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，制得磷脂膜；

(2)向制得的磷脂膜中加入缓冲溶液，振摇，搅拌使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(3)将盐酸头孢吡肟溶于水，微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，在50-60℃的温度下搅拌30-60分钟，再加入支持剂，搅拌使其溶解，然后冷却到室温，得盐酸头孢吡肟脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥或喷雾干燥，制得盐酸头孢吡肟前体脂质体。在上述制备方法中，步骤(2)搅拌20-40分钟可使磷脂膜完全水化，转速200-600r/min；高速匀质乳化采用组织捣碎机，转速12000r/min；微孔滤膜选用0.45μm孔径。所述的旋转薄膜蒸发器，也称为刮板薄膜蒸发器或机械搅拌薄膜蒸发器，本领域目前已知的这类薄膜蒸发器都可以用于本发明，例如可以采用无锡市雪浪发酵工程设备厂生产的LG2.5型离心式刮板薄膜蒸发器，也可以采用无锡市军嶂制药设备厂生产的LG-4型高效旋转薄膜蒸发器等。

优选地，在所述的步骤(2)中，向制得的磷脂膜中加入缓冲溶液，振摇，搅拌使磷脂膜完全水化，所述搅拌的转速200-600r/min，搅拌20-40分钟，并且采用组织捣碎机在转速12000r/min下高速匀质乳化，用0.45μm孔径微孔的滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

优选地，将制得的盐酸头孢吡肟前体脂质体在无菌条件下分装，单支制剂中含盐酸头孢吡肟以头孢吡肟重量计为0.05-0.2g，得到所述的盐酸头孢吡肟脂质体制剂。

优选地，其中所述的有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醚、苯甲醇、正己烷中的一种或几种。

更优选地，其中所述的有机溶剂为体积比为4∶1的甲醇和正己烷。通过选用一定体积比的混和有机溶剂，相比单一的有机溶剂，溶解性能更好，溶解更快，更容易减压蒸发除去。

优选地，其中所述的缓冲溶液选自pH值范围为5.4-6.0的磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液中的一种或几种。

本发明提供的盐酸头孢吡肟前体脂质体，是具有良好流动性的颗粒或粉末，贮存稳定，应用前与水水合即可分散或溶解成等涨的脂质体，其进行稳定性试验考察，在高温60℃、光照4500Lx条件下放置10天，各项检测指标均无明显变化；在高温40℃、相对湿度75％±5％条件下加速试验6个月，各项检测指标没有明显变化；在高温25℃、相对湿度60％±10％条件下长期试验18个月，各项检测指标没有明显变化。

对本发明提供的盐酸头孢吡肟前体脂质体制剂进行急性毒性试验、异常毒性试验和热源检查，均符合规定，安全性得到证明。

本发明的盐酸头孢吡肟前体脂质体制剂，通过选用一定重量比的支持剂组合物，相比单一的支持剂，骨架性更好，干燥过程中，粉末粒度更好，更容易分装，分装后的脂质体制剂复溶更快。

与现有技术相比，本发明提供的盐酸头孢吡肟前体脂质体制剂，具有意想不到的效果，主要优点如下：

(1)盐酸头孢吡肟被包裹于脂质体内，大大提高了稳定性，干燥过程中脂质体不会因脱水、融合、冰晶生成等发生破裂，水化复溶之后，脂质体的包封率不会降低；

(2)药物载体脂质体体内降解、无毒性和无免疫原性，而且可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用；

(3)采用常规的工艺设备即可制备，并且可工业规模、高效率生产，并且该产品的生产成本低。

具体实施方式

本发明将采用如下具体实施例进行详细描述，应当理解，这些实施例仅仅是用于阐述的目的，而并不以任何方式限制本发明的保护范围。本领域技术人员在本说明书的教导下，可以在不违背本发明的精神和主旨下，对本发明的实施方案作出多种修饰或改变，这些都将包括在本发明的范围内。

实施例1

盐酸头孢吡肟前体脂质体的制备

处方：盐酸头孢吡肟            50g

      二棕榈酰磷脂酰甘油      100g

      胆固醇                  40g

      氯化钠                  30g

      甘露醇                  120g

制备工艺

(1)将100g二棕榈酰磷脂酰甘油、40g胆固醇溶于1000ml甲醇和正己烷体积比为4∶1的混合溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去甲醇和正己烷，制得磷脂膜；

(2)加入pH值5.8磷酸盐缓冲溶液800ml，振摇，搅拌30分钟，转速500r/min，使磷脂膜完全水化，采用组织捣碎机高速匀质乳化，转速12000r/min，用0.45μm微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(3)将50g盐酸头孢吡肟溶于500ml水，微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，加热至55℃并搅拌40分钟，再加入30g氯化钠和120g甘露醇，搅拌溶解，冷却到室温，得盐酸头孢吡肟脂质体溶液；

(4)将上述溶液喷雾干燥，制得盐酸头孢吡肟前体脂质体；

(5)将制备得到的盐酸头孢吡肟前体脂质体在无菌条件下分装，每瓶0.05g(头孢吡肟计)，制得盐酸头孢吡肟脂质体制剂。

实施例2

盐酸头孢吡肟前体脂质体的制备

处方：盐酸头孢吡肟           100g

      二棕榈酰磷脂酰甘油     600g

      胆固醇                 60g

      氯化钠                 100g

      甘露醇                 400g

制备工艺

(1)将600g二棕榈酰磷脂酰甘油、100g胆固醇溶于2000ml甲醇和正己烷体积比为4∶1的混合溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去甲醇和正己烷，制得磷脂膜；

(2)加入pH值5.4枸橼酸盐缓冲溶液2000ml，振摇，搅拌20分钟，转速600r/min，使磷脂膜完全水化，采用组织捣碎机高速匀质乳化，转速12000r/min，用0.45μm微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(3)将100g盐酸头孢吡肟溶于1000ml水，微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，加热至60℃并搅拌30分钟，再加入100g氯化钠和400g甘露醇，搅拌溶解，冷却到室温，得盐酸头孢吡肟脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥，制得盐酸头孢吡肟前体脂质体；

(5)将制备得到的盐酸头孢吡肟前体脂质体在无菌条件下分装，每瓶0.1g(头孢吡肟计)，制得盐酸头孢吡肟脂质体制剂。

实施例3

盐酸头孢吡肟前体脂质体的制备

处方：盐酸头孢吡肟          200g

      二棕榈酰磷脂酰甘油    400g

      胆固醇                260g

氯化钠                    50g

甘露醇                    200g

制备工艺

(1)将400g二棕榈酰磷脂酰甘油、260g胆固醇溶于1500ml甲醇和正己烷体积比为4∶1的混合溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去甲醇和正己烷，制得磷脂膜；

(2)加入pH值6.0醋酸盐缓冲溶液1500ml，振摇，搅拌40分钟，转速200r/min，使磷脂膜完全水化，采用组织捣碎机高速匀质乳化，转速12000r/min，用0.45μm微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(3)将200g盐酸头孢吡肟溶于2000ml水，微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，加热至50℃并搅拌60分钟，再加入50g氯化钠和200g甘露醇，搅拌溶解，冷却到室温，得盐酸头孢吡肟脂质体溶液；

(4)将上述溶液喷雾干燥，制得盐酸头孢吡肟前体脂质体；

(5)将制备得到的盐酸头孢吡肟前体脂质体在无菌条件下分装，每瓶0.2g(头孢吡肟计)，制得盐酸头孢吡肟脂质体制剂。

对比例1

盐酸头孢吡肟前体脂质体的制备

处方：盐酸头孢吡肟              50g

      二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱      100g

      聚山梨酯80                40g

      甘露醇                    150g

制备工艺同实施例1，在无菌条件下分装，每瓶0.05g(头孢吡肟计)，制得盐酸头孢吡肟脂质体制剂。

对比例2

盐酸头孢吡肟前体脂质体的制备

处方：盐酸头孢吡肟            100g

      二棕榈酰磷脂酰甘油      650g

      胆固醇                  18g

      氯化钠                  150g

      甘露醇                  600g

制备工艺同实施例2，在无菌条件下分装，每瓶0.1g(头孢吡肟计)，制得盐酸头孢吡肟脂质体制剂。

试验例1包封率的测定

取实施例和对比例制备的脂质体制剂，高效液相色谱法检测头孢吡肟的总含量为M，选用柱色谱法分离脂质体。

取1.5g葡聚糖凝胶G-50，用pH6.8磷酸盐缓冲液浸泡溶胀12h以上，装入层析柱内(200×10mm)，用上述磷酸盐缓冲液冲洗平衡，分别取实施例1-3和对比例1-2得到的盐酸头孢吡肟脂质体制剂加水溶解，制成每1ml含有头孢吡肟约10mg的溶液，分别取各溶液1.3ml，加入层析住顶部，用磷酸盐缓冲液50ml洗脱，流速1.1ml/min，收集的洗脱液加入破膜剂(乙醇∶苯甲醇＝6∶1)50ml，混匀，高效液相色谱法检测头孢孟多酯钠的含量M₁。包封率％＝M₁/M×100％。

表1包封率测定结果

由以上结果可知，本发明范围内的实施例处方配比制得的脂质体包封率很高，符合实际生产要求；而本发明范围外的对比例处方配比制得的脂质体包封率很低，和实施例相比有明显的差距，不适合生产要求。

试验例2粒径的检测

取实施例1-3和对比例1-2制备的脂质体制剂，采用显微图像分析仪测定脂质体的粒径分布，结果如表2：

表2粒径检测结果

由以上结果可知，实施例1-3制得的脂质体显球状，粒径均匀，范围为100-200nm；对比例1-2制得的脂质体形状不定，杂乱无章，大小不一，粒径不均匀，范围为400-800nm。

试验例3稳定性试验

将以上各实施例制备的样品与上市的盐酸头孢吡肟粉针剂(苏州东瑞制药有限公司生产，批号20071215，规格0.5g/瓶)在高温60℃、光照4500Lx条件下放置10天进行影响因素试验考察，结果见表1；在高温40℃、相对湿度75％±5％条件下6个月，进行加速试验考察，结果见表2；在高温25℃、相对湿度60％±10％条件下18个月，进行长期试验考察，检测各项质量指标的变化，结果见表3。

表1影响因素结果

表2加速试验结果

表3长期试验结果

由以上结果发现加速3月、6月，长期12月、18月时上市的盐酸头孢吡肟粉针澄明度不符合规定，pH值下降较大，含量降低明显，有关物质升高；而本发明制备的样品外观性状没有明显变化，复溶良好，澄明度、酸度、含量和有关物质也没有明显的变化。说明本发明制备的样品长期贮存质量稳定性更好。

而且，通过进一步的常规试验获得，本发明的前体脂质体粉针水化复溶之后，包封率没有发生变化，远远优于现有技术的产品。

试验例4安全性试验

异常毒性检查依据2005年版药典附录XI C异常毒性检查法，将本发明制备的样品用氯化钠溶液稀释成一定浓度的供试品溶液，注入符合试验要求的小鼠体内，结果小鼠在48小时内均没有死亡现象，说明本品异常毒性符合规定。

热源检查依据2005版药典附录XI D热源法进行检查，结果符合规定。

Claims (9)

1.一种盐酸头孢吡肟前体脂质体，以重量份计，所述的盐酸头孢吡肟前体脂质体由如下组分制成：盐酸头孢吡肟3-20份，二棕榈酰磷脂酰甘油5-40份，胆固醇1-30份，支持剂3-50份，并且所述的支持剂为重量比为1∶4的氯化钠和甘露醇，并且是通过包括如下步骤的方法制得：

(1)将二棕榈酰磷脂酰甘油、胆固醇溶于有机溶剂中，混合均匀，除去有机溶剂，制得磷脂膜；

(2)向制得的磷脂膜中加入缓冲盐溶液，使磷脂膜完全水化，制得空白脂质体混悬液；

(3)将盐酸头孢吡肟溶于水，加入到空白脂质体混悬液中，再加入支持剂，制得盐酸头孢吡肟脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥或喷雾干燥，即得盐酸头孢吡肟前体脂质体。

2.根据权利要求1所述的盐酸头孢吡肟前体脂质体，其特征在于所述的组分为：盐酸头孢吡肟5-15份，二棕榈酰磷脂酰甘油10-30份，胆固醇3-20份，支持剂5-40份。

3.根据权利要求2所述的盐酸头孢吡肟前体脂质体，其特征在于所述的组分为：盐酸头孢吡肟10份，二棕榈酰磷脂酰甘油20份，胆固醇8份，支持剂30份。

4.根据权利要求1-3任一项所述的盐酸头孢吡肟前体脂质体，其特征在于单支制剂中盐酸头孢吡肟的量以头孢吡肟计为0.05-0.2g。

5.一种制备权利要求1-4任一项所述的盐酸头孢吡肟前体脂质体的方法，其特征在于通过包括如下步骤：

(1)将二棕榈酰磷脂酰甘油、胆固醇溶于有机溶剂中，混合均匀，除去有机溶剂，制得磷脂膜；

(2)向制得的磷脂膜中加入缓冲盐溶液，使磷脂膜完全水化，制得空白脂质体混悬液；

(3)将盐酸头孢吡肟溶于水，加入到空白脂质体混悬液中，再加入支持剂，制得盐酸头孢吡肟脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥或喷雾干燥，即得盐酸头孢吡肟前体脂质体。

6.根据权利要求5所述的制备盐酸头孢吡肟前体脂质体的方法，其特征在于通过包括如下步骤：

(1)将二棕榈酰磷脂酰甘油、胆固醇溶于有机溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，制得磷脂膜；

(2)向制得的磷脂膜中加入缓冲盐溶液，振摇，搅拌使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液，其中，所述搅拌的转速200-600r/min，搅拌20-40分钟，并且采用组织捣碎机在转速12000r/min下高速匀质乳化，用0.45μm孔径微孔滤膜过滤；

(3)将盐酸头孢吡肟溶于水，微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，在50-60℃的温度下搅拌30-60分钟，再加入支持剂，搅拌使其溶解，然后冷却到室温，得盐酸头孢吡肟脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥或喷雾干燥，制得盐酸头孢吡肟前体脂质体。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其中所述的有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醚、苯甲醇、正己烷中的一种或几种。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其中所述的有机溶剂为体积比为4∶1的甲醇和正己烷。

9.根据权利要求5或6所述的制备方法，其中所述的缓冲盐溶液选自pH值范围为5.4-6.0的磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或者醋酸盐缓冲液中的一种或几种。