CN108059646A - 一种生地黄中降糖活性成分的制备方法 - Google Patents

一种生地黄中降糖活性成分的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种生地黄中降糖活性成分的制备方法，具体涉及一种同时制备生地黄中两个活性成分式I和式II的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)取生地黄，粉碎至20‑80目后，经超临界CO2萃取得粗提物；(2)将步骤(1)得到的粗提物用2‑3倍质量的乙醇溶解后，通过大孔树脂吸附，用体积分数为50‑70％的乙醇洗脱，收集3‑5倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，再经Sephadex LH‑20凝胶柱层析，洗脱剂为体积比为1：1的CHCl3/MeOH混合溶剂，收集2‑3倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，经高效液相色谱HPLC制备，得式I和式II两个活性成分。

Description

一种生地黄中降糖活性成分的制备方法
技术领域
本发明属于中药活性成分提取领域，具体涉及一种生地黄中降糖活性成分的制备方法。
背景技术
地黄为玄参科植物地黄(Rehmannia glutinosa Libosch.)的新鲜或干燥块根，在《神农本草经》中被列为上品。依照炮制方法在药材上分为：鲜地黄、干地黄与熟地黄，同时其药性和功效也有较大的差异，按照《中华本草》功效分类：鲜地黄为清热凉血药；熟地黄则为补益药。地黄中化学成分主要有低聚糖、多糖、环烯醚萜苷、氨基酸等，它们是地黄药理作用的物质基础。本发明从生地黄中分离得到两个新的糖苷类化合物，其显示出较强的葡萄糖激酶活化作用，并具有一定的降血糖作用。
发明内容
本发明提供一种同时制备生地黄中两个活性成分式I和式II的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)取生地黄，粉碎至20-80目后，经超临界CO2萃取得粗提物；
(2)将步骤(1)得到的粗提物用2-3倍质量的乙醇溶解后，通过大孔树脂吸附，用体积分数为50-70％的乙醇洗脱，收集3-5倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为体积比为1：1的CHCl3/MeOH混合溶剂，收集2-3倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，经高效液相色谱HPLC制备，得式I和式II两个活性成分；
其中式I和式II两个活性成分的结构如下：
步骤(1)所述的超临界CO2萃取，其萃取压力为20-30MPa，萃取温度为45-50℃，CO2流量为50-55L/h，萃取时间为3-5h，分离釜I温度为35-40℃，压力为7-10MPa，分离釜II温度为30-35℃，压力为5-6MPa。
步骤(2)所述大孔树脂的型号选自AB-8、D101、HZ818、HPD100中的一种。
步骤(2)所述高效液相色谱HPLC制备的色谱条件为：色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝55∶45。
本发明的另一实施方案提供一种降血糖药物，其特征在于所述降血糖药物以上述式I、式II化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分。该药物组合物还任选包括其他预防和/或治疗II型糖尿病的药物。该药物组合物还可包括药学上可接受的辅料。所述药物组合物的剂型可以是固体制剂、液体制剂或半固体制剂。
本发明的另一实施方案提供上述式I、式II化合物或其药学上可接受的盐在制备降血糖药物中的应用。
本发明的另一实施方案提供上述式I、式II化合物或其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗由葡萄糖激酶介导的疾病的药物中的应用。
具体实施方式
为了便于对本发明的进一步理解，下面提供的实施例对其做了更详细的说明。但是这些实施例仅供更好的理解发明而并非用来限定本发明的范围或实施原则，本发明的实施方式不限于以下内容。
实施例1
(1)取生地黄1.0kg，粉碎至20-80目后，经超临界CO2萃取得粗提物45g；其中，萃取压力为20MPa，萃取温度为50℃，CO2流量为50L/h，萃取时间为5h，分离釜I温度为35-40℃，压力为10MPa，分离釜II温度为30-35℃，压力为6MPa。
(2)将步骤(1)得到的粗提物用2倍质量的乙醇溶解后，通过AB-8型大孔树脂吸附，用体积分数为50％的乙醇洗脱，收集5倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为体积比为1：1的CHCl3/MeOH混合溶剂，收集2倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，经高效液相色谱HPLC制备(色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝55∶45)，依次得到式I(19mg)、式II化合物(36mg)。结构确证数据：
式I化合物：(c 0.1,MeOH),ESI-MS(m/z)：723.2[M+H]+；式II化合物：(c 0.1,MeOH),ESI-MS(m/z)：765.2[M+H]+；
表1 式I、式II化合物的NMR数据(1H/13C NMR 400/100MHz,CD3OD)
实施例2
(1)取生地黄1.5kg，粉碎至20-80目后，经超临界CO2萃取得粗提物73g；其中，萃取压力为30MPa，萃取温度为45℃，CO2流量为55L/h，萃取时间为3h，分离釜I温度为35-40℃，压力为7MPa，分离釜II温度为30-35℃，压力为5MPa。(2)将步骤(1)得到的粗提物用3倍质量的乙醇溶解后，通过D101型大孔树脂吸附，用体积分数为70％的乙醇洗脱，收集3倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为体积比为1：1的CHCl3/MeOH混合溶剂，收集3倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，经高效液相色谱HPLC制备(色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝55∶45)，依次得到式I(33mg)、式II化合物(59mg)。结构确证数据与实施例1一致。
实施例3
体外测试本发明式I、式II化合物的葡萄糖激酶(GK)活化效力及EC50
按照专利CN102482267A(WO2011/013141)中记载的方法，测试本发明式I、式II化合物的葡萄糖激酶(GK)活化效力及EC50，结果显示，在1μM浓度下，式I和式II化合物在DMSO中的GK活性分别为281.5％和292.2％，其EC50均小于0.1μM。
实施例4
体内测试本发明式I、式II化合物的降血糖作用
按照中国专利(申请号：201410759327.7)中记载的方法，测试本发明式I、式II化合物对糖尿病小鼠模型的降糖效果，结果表明给药2小时后，式I、式II化合物(剂量为250mg/kg)能使模型小鼠血糖下降63％。

Claims (8)

1.一种同时制备生地黄中两个活性成分式I和式II的方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)取生地黄，粉碎至20-80目后，经超临界CO2萃取得粗提物；
(2)将步骤(1)得到的粗提物用2-3倍质量的乙醇溶解后，通过大孔树脂吸附，用体积分数为50-70％的乙醇洗脱，收集3-5倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂为体积比为1：1的CHCl3/MeOH混合溶剂，收集2-3倍柱体积洗脱液，减压浓缩后，经高效液相色谱HPLC制备，得式I和式II两个活性成分；
其中式I和式II两个活性成分的结构如下：
2.权利要求1所述的方法，其特征在于步骤(1)所述的超临界CO2萃取，其萃取压力为20-30MPa，萃取温度为45-50℃，CO2流量为50-55L/h，萃取时间为3-5h，分离釜I温度为35-40℃，压力为7-10MPa，分离釜II温度为30-35℃，压力为5-6MPa。
3.权利要求1-2任一项所述的方法，其特征在于步骤(2)所述大孔树脂的型号选自AB-8、D101、HZ818、HPD100中的一种。
4.权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于步骤(2)所述高效液相色谱HPLC制备的色谱条件为：色谱柱为Agilent C18,9.4×250mm，7μm，流速为2mL/min，流动相为MeOH∶H2O＝55∶45。
5.一种降血糖药物，其特征在于包含权利要求1制备的式I、式II化合物或其药学上可接受的盐作为有效成分。
6.权利要求5所述的药物，其特征在于该药物还任选包括其他预防和/或治疗II型糖尿病的药物。
7.权利要求5-6任一项所述的药物，其特征在于该药物还可包括药学上可接受的辅料。
8.权利要求5-7任一项所述的药物，其特征在于所述药物的剂型为固体制剂、液体制剂或半固体制剂。
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