CN105106276A - 一种紫鸭跖草提取物，该提取物的制备方法及医药用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种紫鸭跖草提取物，该提取物的制备方法及医药用途，提取物制备方法包括：(a)以重量计，每100份药材包含干燥的紫鸭跖草80～90份和干燥的党参10～20份，混合粉碎，用55％乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；(b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用大孔树脂富集活性成分，先用8％乙醇冲洗8个柱体积除去大极性成分，再用75％乙醇洗脱10个柱体积，收集75％洗脱液，减压浓缩即得。该提取物可以应用于制备降血糖药物。

Description

一种紫鸭跖草提取物，该提取物的制备方法及医药用途

技术领域

本发明涉及中药提取物领域，具体涉及一种紫鸭跖草提取物，该提取物的制备方法及医药用途，该提取物可以应用于制备降血糖的药物。

背景技术

紫鸭跖草为为鸭跖草科植物紫露草的全草。夏、秋采收，晒干或鲜用。又名血见愁(《广西中药志》)、鸭舌草、本山金线连、鸭舌黄(《泉州本草》)。

紫鸭跖草原形态紫露草为一年生草本，高20～50厘米。茎多分枝，带肉质，紫红色，下部匍匐状，节上常生须根，上部近于直立。叶互生，披针形，长6～13厘米，宽6～10毫米，先端渐尖，全缘，基部抱茎而成鞘，鞘口有白色长睫毛，上面暗绿色，边缘绿紫色，下面紫红色。花密生在二叉状的花序柄上，下具线状披针形苞片，长约7厘米；萼片3，绿色，卵圆形，宿存；花瓣3，蓝紫色，广卵形；雄蕊6，2枚发商，3枚退化，另有1枚花丝短而纤细，无花药；雌蕊1，子房卵形，3室，花柱丝状而长，柱头头状。蒴果椭圆形，有3条隆起棱线。种子呈三棱状半圆形，汉棕色。花期夏秋。

发明内容

本发明的目的在于提供一种紫鸭跖草提取物，其制备方法和液相分析方法，含有该提取物的药物制剂及利用该提取物制备降血糖药物的用途。

本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：

一种紫鸭跖草提取物，该提取物由以下方法制备：

(a)以重量计，每100份药材包含干燥的紫鸭跖草80～90份和干燥的党参10～20份，混合粉碎，用75％乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；(b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用大孔树脂富集活性成分，先用8％乙醇冲洗8个柱体积除去大极性成分，再用75％乙醇洗脱10个柱体积，收集75％洗脱液，减压浓缩即得。

为了能够通过建立HPLC指纹图谱的方法控制不同批次制备的提取物的批间差异，所述提取物的液相分析方法为：

色谱柱：AgilentZorbaxExtent-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相：A为乙腈，B为0.5％磷酸溶液；

梯度洗脱程序：0～5min，A10％→15％；5～10min，A15％→48％；10～25min，A48％→78％；25～30min，A78％→10％；

流动相流速：1.0mL·min^-1；检测波长：275nm；柱温：35℃；进样量：10μL。

药物制剂，含有治疗有效量的所述提取物和药学上可接受的载体。

所述的提取物在制备降血糖药物中的应用。

所述的药物制剂在制备降血糖药物中的应用。

本发明提取物用作药物时，可以直接使用，或者以药物制剂的形式使用。

所述药物制剂含有治疗有效量的本发明紫鸭跖草提取物，其余为药物学上可接受的、对人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。

所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物制剂以单位体重服用量的形式使用。本发明提取物可通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等；用于注射时，可制成灭菌的水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。

本发明的优点：本发明通过对干燥的紫鸭跖草和党参进行提取、除杂、富集处理，能得到具有降血糖作用的提取物；本发明提供的液相分析方法可以用于建立该提取物的指纹图谱，用于控制不同批次制备的提取物的批间差异。

附图说明

图1为紫鸭跖草提取物HPLC液相图谱。

具体实施方式

下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

实施例1：紫鸭跖草提取物①制备(85份紫鸭跖草，15份党参)

药材来源：紫鸭跖草和党参购自安徽亳州中药材市场。

主要试剂：食品级乙醇购自上海凌峰化学试剂有限公司；医药级AB-8大孔树脂购自天津波鸿树脂有限公司；乙腈为HPLC级，购于TEDIA；85％磷酸为HPLC级，购于TEDIA；色谱用纯净水为哇哈哈纯净水。

制备方法：将8.5kg干燥紫鸭跖草根茎和1.5kg干燥党参混合粉碎，用75％乙醇溶液热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液(2L)；将所得乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水饱和的正丁醇(3L×3次)萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物232g；(c)正丁醇萃取物用1.5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂(2kg，柱体积1.5L)富集活性成分，先用8％乙醇冲洗8个柱体积(12L)除去大极性成分，再用75％乙醇洗脱10个柱体积(15L)，收集75％洗脱液，减压浓缩，即得紫鸭跖草提取物约150g。

实施例2：紫鸭跖草提取物②制备(80份紫鸭跖草，20份党参)

制备方法：将8.0kg干燥紫鸭跖草根茎和2.0kg干燥党参混合粉碎，用75％乙醇溶液热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液(2L)；将所得乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水饱和的正丁醇(3L×3次)萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物232g；(c)正丁醇萃取物用1.5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂(2kg，柱体积1.5L)富集活性成分，先用8％乙醇冲洗8个柱体积(12L)除去大极性成分，再用75％乙醇洗脱10个柱体积(15L)，收集75％洗脱液，减压浓缩，即得紫鸭跖草提取物约150g。

实施例3：紫鸭跖草提取物③制备(90份紫鸭跖草，10份党参)

制备方法：将9.0kg干燥紫鸭跖草根茎和1.0kg干燥党参混合粉碎，用75％乙醇溶液热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液(2L)；将所得乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水饱和的正丁醇(3L×3次)萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物232g；(c)正丁醇萃取物用1.5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂(2kg，柱体积1.5L)富集活性成分，先用8％乙醇冲洗8个柱体积(12L)除去大极性成分，再用75％乙醇洗脱10个柱体积(15L)，收集75％洗脱液，减压浓缩，即得紫鸭跖草提取物约150g。

实施例4：紫鸭跖草提取物④制备(75份紫鸭跖草，25份党参)

制备方法：将7.5kg干燥紫鸭跖草根茎和2.5kg干燥党参混合粉碎，用75％乙醇溶液热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液(2L)；将所得乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水饱和的正丁醇(3L×3次)萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物232g；(c)正丁醇萃取物用1.5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂(2kg，柱体积1.5L)富集活性成分，先用8％乙醇冲洗8个柱体积(12L)除去大极性成分，再用75％乙醇洗脱10个柱体积(15L)，收集75％洗脱液，减压浓缩，即得紫鸭跖草提取物约150g。

实施例5：紫鸭跖草提取物⑤制备(95份紫鸭跖草，5份党参)

制备方法：将9.5kg干燥紫鸭跖草根茎和0.5kg干燥党参混合粉碎，用75％乙醇溶液热回流提取(25L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液(2L)；将所得乙醇提取浓缩液用水稀释至3L，依次用石油醚(3L×3次)、乙酸乙酯(3L×3次)和水饱和的正丁醇(3L×3次)萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物232g；(c)正丁醇萃取物用1.5L水溶解，医用脱脂棉过滤，用AB-8大孔树脂(2kg，柱体积1.5L)富集活性成分，先用8％乙醇冲洗8个柱体积(12L)除去大极性成分，再用75％乙醇洗脱10个柱体积(15L)，收集75％洗脱液，减压浓缩，即得紫鸭跖草提取物约150g。

实施例6：液相色谱分析

供试品溶液配制：取实施例1方法制得的提取物5mg至50mL棕色容量瓶中，加30mL10％乙腈水溶液超声溶解，冷却至室温后，继续加10％乙腈水溶液定容。分析方法如下：

高效液相色谱仪：Agilent1260，二元泵；

色谱柱：AgilentZorbaxExtent-C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；

流动相：A为乙腈，B为0.5％磷酸溶液；

梯度洗脱程序：0～5min，A10％→15％；5～10min，A15％→48％；10～25min，A48％→78％；25～30min，A78％→10％；

流动相流速：1.0mL·min^-1；检测波长：275nm；柱温：35℃；进样量：10μL。

用制备的10批次的紫鸭跖草提取物进行分析，进行色谱峰匹配，结果1～7号峰在10批样品色谱图中均出现。因此标定7个峰为共有色谱峰，据此建立该提取物的HPLC质量控制图谱，结果见图1。该10批次的紫鸭跖草提取物药理活性相似。

实施例7：提取物药理试验

一、材料与方法

1.1药品与试剂：阳性药盐酸二甲双胍为江苏苏中制药厂生产；四氧嘧啶(Al10Xan)为英国BHO公司生产，批号42012；葡萄糖为广州新化工厂生产，批号021124：葡萄糖氧化酶法测定试剂盒为北京化工厂生产，批号030612：优降糖为天津力生药厂生产，批号0306270。

1.2试验动物：昆明种小鼠，雌雄不拘，体重22-28g，购于中山大学实验动物中心。

1.3方法

1.3.1紫鸭跖草提取物的制备：按照实施例1～5分别制备紫鸭跖草提取物①～⑤。

1.3.2用四氧嘧啶诱发的高血糖模型小鼠：取正常小鼠，取正常小鼠尾静脉注射四氧嘧啶(5％水溶液，60mg/kg)，注射72h后对小鼠进行眼眶静脉采血，测定血清葡萄糖水平，采血前先禁食8h(不禁水)，选择血糖值在9.99mmo1/L，以上的小鼠作为供试动物，将供试小鼠随机分组，分组及给药剂量见表1.每天灌胃给药1次，空白对照组和四氧嘧啶组(模型组)分别给予等体积的蒸馏水，连续10d于末次给药后1h，从小鼠眼眶静脉取血，用试剂盒测定血糖值。

1.3.3用葡萄糖引致的小鼠血糖升高模型：取正常小鼠随机分组，分组及给药剂量见表2，每天灌胃给药1次，空白对照组和葡萄糖组分别给予等体积的蒸馏水，连续10d.于末次给药后1h，空白对照组腹腔注射等体积生理盐水，其余各组腹腔注射葡萄糖2g/kg溶液，分别在腹腔注射葡萄糖溶液后0.5，1.0，2.0h时，从小鼠眼眶静脉取血，用试剂盒测定血糖值。

1.3.4对正常小鼠血糖水平的影响的观察：取正常小鼠随机分组，分组及给药剂量见表3.每天灌胃给药1次，空白对照组给予等体积的蒸馏水，连续10d于末次给药后1h，从小鼠眼眶静脉取血，用试剂盒测定血糖水平。

1.4数据处理：实验数据以(x±s)表示，用SPSS11.0软件处理，各组间比较用t检验。

二、结果

2.1对四氧嘧啶诱发的高血糖模型小鼠的血精水平的影响

由表1可知，紫鸭跖草提取物①～③的3个剂量组均能显著降低四氧嘧啶诱发的高血糖模型小鼠的血糖，大、中剂量组的降血糖效果更加明显，3个剂量组与四氧嘧啶组比较，差异均有统计学意义(P<0.05，P<0.01)，降糖效果与剂量正相关。与二甲双胍组比较，中剂量组的降血糖作用与二甲双胍组差异无统计学意义(P>0.05)；但大剂量组的降血糖作用明显比二甲双胍组强(P<0.05)；紫鸭跖草提取物④～⑤各剂量组与四氧嘧啶组(模型组)相比较则不具有显著性差异。结果见表1(注：与空白对照组比较，△△P<0.01；与四氧嘧啶组比较，**P<0.01；与二甲双胍组比较，*P<0.05)。

表1紫鸭跖草提取物对四氧嘧啶诱发的高血糖小鼠血溏水平的影响(x±s)

2.2对葡萄糖引致的小鼠血糖升高的影响

由表2可知，紫鸭跖草提取物①～③的3个剂量组在给药后0.5，1.0h时，均能非常显著地抑制葡萄糖引起小鼠血糖的升高(与葡萄糖组比较，P<0.01)。在2h时，大剂量组仍对血糖的升高有极显著的抑制作用：与葡萄糖组比较，差异有统计学意义(P<0.01).。但中小剂量抑制血糖升高的作用明显减小，与葡萄糖组比较，其差异无统计学意义(P>0.05)。与二甲双胍组比较，大剂量组抑制小鼠血糖升高的作用在给药后2.0h内与二甲双胍组差异无统计学意义(P>0.05)，中小剂量组抑制小鼠血糖升高的作用在给药后1.0h内与二甲双呱组差异无统计学意义(P>0.05)，但在2.0h时抑制小鼠血糖升高的作用明显不如二甲双胍组(P<0.05)。紫鸭跖草提取物④～⑤各剂量组与四氧嘧啶组(模型组)相比较则均不具有显著性差异。结果见表2(注：与空白对照组比较，△△P<0.01；与葡萄糖组比较**P<0.01；与二甲双胍组比较，**P<0.01)。

表2紫鸭跖草提取物对葡萄糖引致的高血糖模型小鼠血糖水平的影响(x±s)

2.3对正常小鼠血糖水平的影响

由表3可知，紫鸭跖草提取物①～⑤的3个剂量组对正常小鼠血糖均无明显影响。结果见表3(注：与空白对照组比较，△△p<0.01)。

表3紫鸭跖草提取物对正常小鼠血糖水平的影响(x±s)

结果表明，紫鸭跖草提取物在实验剂量下，能显著降低四氧嘧啶诱发的高血糖模型小鼠的血糖水平，且大剂量组明显优于小剂量组。结果表明，紫鸭跖草提取物对正常小鼠的血糖水平无明显影响，安全性高。实验还表明，紫鸭跖草提取物的3个实验剂量组在1小时内对外源性葡萄糖引起小鼠血糖的升高有明显的抑制作用，大剂量组尤为明显。党参含量对本发明紫鸭跖草提取物的活性至关重要。

实施例8：片剂的制备

按实施例1方法制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:10的比例加入赋形剂，制粒压片。

实施例9：口服液的制备

按实施例1方法先制得提取物，按常规口服液制法制成口服液。

实施例10：胶囊剂或颗粒剂的制备

按实施例1方法先制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:9的比例加入赋形剂，制成胶囊或颗粒剂。

实施例11：注射液的制备

按实施例1方法制得提取物，加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。

实施例12：无菌粉针的制备

按实施例1方法先制得提取物，溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗过滤，再无菌精滤，分装于安瓿，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。

Claims (6)

1.一种紫鸭跖草提取物，其特征在于所述提取物由以下方法制备：（a）以重量计，每100份药材包含干燥的紫鸭跖草80~90份和干燥的党参10~20份，混合粉碎，用75%乙醇溶

液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；（b）将步骤（a）所得乙

醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别

得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c）正丁醇萃取物用水溶解，过滤，

用大孔树脂富集活性成分，先用8%乙醇冲洗8个柱体积除去大极性成分，再用75%乙醇洗脱10个柱体积，收集75%洗脱液，减压浓缩即得。

2.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：步骤（c）中所述大孔树脂为AB-8型大孔树脂。

3.根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：所述提取物的液相分析方法为：

色谱柱：AgilentZorbaxExtent-C18柱（4.6mm×250mm，5μm）；

流动相：A为乙腈，B为0.5%磷酸溶液；

梯度洗脱程序：0~5min，A10%→15%；5~10min，A15%→48%；10~25min，A48%→78%；25~30min，A78%→10%；

流动相流速：1.0mL·min-1；

检测波长：265nm；

柱温：35℃；

进样量：10μL。

4.药物制剂，其特征在于：含有治疗有效量的权利要求1所述的提取物和药学上可接受的载体。

5.权利要求1所述的提取物在制备降血糖药物中的应用。

6.权利要求4所述的药物制剂在制备降血糖药物中的应用。