CN108033984A - 一种咖啡酸糖苷类化合物、其制备方法及应用 - Google Patents

一种咖啡酸糖苷类化合物、其制备方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108033984A
CN108033984A CN201810050338.6A CN201810050338A CN108033984A CN 108033984 A CN108033984 A CN 108033984A CN 201810050338 A CN201810050338 A CN 201810050338A CN 108033984 A CN108033984 A CN 108033984A
Authority
CN
China
Prior art keywords
methanol
caffeic acid
solvent
acid glucoside
glucoside compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810050338.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108033984B (zh
Inventor
李振杰
朱瑞芝
刘志华
司晓喜
杨光宇
王昆淼
张凤梅
王文元
王凯
唐石云
申钦鹏
刘春波
蒋薇
尤俊衡
何沛
张玲
苏钟璧
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
China Tobacco Yunnan Industrial Co Ltd
Original Assignee
China Tobacco Yunnan Industrial Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by China Tobacco Yunnan Industrial Co Ltd filed Critical China Tobacco Yunnan Industrial Co Ltd
Priority to CN201810050338.6A priority Critical patent/CN108033984B/zh
Publication of CN108033984A publication Critical patent/CN108033984A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108033984B publication Critical patent/CN108033984B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06—Separation; Purification
    • C07H1/08—Separation; Purification from natural products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A24—TOBACCO; CIGARS; CIGARETTES; SIMULATED SMOKING DEVICES; SMOKERS' REQUISITES
    • A24B—MANUFACTURE OR PREPARATION OF TOBACCO FOR SMOKING OR CHEWING; TOBACCO; SNUFF
    • A24B15/00—Chemical features or treatment of tobacco; Tobacco substitutes, e.g. in liquid form
    • A24B15/18—Treatment of tobacco products or tobacco substitutes
    • A24B15/24—Treatment of tobacco products or tobacco substitutes by extraction; Tobacco extracts
    • A24B15/26—Use of organic solvents for extraction
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A24—TOBACCO; CIGARS; CIGARETTES; SIMULATED SMOKING DEVICES; SMOKERS' REQUISITES
    • A24B—MANUFACTURE OR PREPARATION OF TOBACCO FOR SMOKING OR CHEWING; TOBACCO; SNUFF
    • A24B15/00—Chemical features or treatment of tobacco; Tobacco substitutes, e.g. in liquid form
    • A24B15/18—Treatment of tobacco products or tobacco substitutes
    • A24B15/28—Treatment of tobacco products or tobacco substitutes by chemical substances
    • A24B15/30—Treatment of tobacco products or tobacco substitutes by chemical substances by organic substances
    • A24B15/36—Treatment of tobacco products or tobacco substitutes by chemical substances by organic substances containing a heterocyclic ring
    • A24B15/40—Treatment of tobacco products or tobacco substitutes by chemical substances by organic substances containing a heterocyclic ring having only oxygen or sulfur as hetero atoms
    • A24B15/403—Treatment of tobacco products or tobacco substitutes by chemical substances by organic substances containing a heterocyclic ring having only oxygen or sulfur as hetero atoms having only oxygen as hetero atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
    • C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了一种咖啡酸糖苷类化合物，其具有如下结构：其命名为：顺式‑1‑O‑甲基‑6‑O‑咖啡基‑β‑D‑葡萄糖，分子式为C16H20O9。本发明还公开了所述咖啡酸糖苷类化合物的制备方法及其抗氧化和清除卷烟烟气中自由基的用途。

Description

一种咖啡酸糖苷类化合物、其制备方法及应用
技术领域
本发明属于植物化学技术领域，具体涉及一种咖啡酸糖苷类化合物、其制备方法及应用。
背景技术
三叶悬钩子(Rubus delavayi Franch)又名倒钩刺、小乌泡、刺茶、小鸡脚锁梅，为蔷薇科悬钩子属植物，也是云南省特有的植物。三叶悬钩子是傈僳族、怒族的常用药，也常用来泡茶。三叶悬钩子具有清热解毒，除湿止痢，祛风解表，驱蛔虫的功效；用于治疗扁桃体炎，感冒，急性结膜炎，痢疾，疮疡，风湿性关节炎。
目前，国内外对三叶悬钩子的研究较少。段泽虎在多年的中兽医临床工作中，通过对数百例畜病，如乳腺炎、无名肿毒、肝癀、肝热传眼、肝毒、黄疸、湿毒、肚底黄、外伤炎肿、术后炎肿、血吸虫病，弓形虫病、驱蝇蛆等病的应用观察和验证，认为三叶悬钩子在清热解毒、除湿止痢及杀虫方面有独到的功效，对消炎消肿功能好而不伤元气，是一剂难得的高效低毒的中草药。郑玲等从三叶悬钩子的甲醇提取物中分离、鉴定出委陵菜酸、山奈酚等12个化学成分。
本发明从民族药三叶悬钩子中分离得到了一种咖啡酸糖苷类化合物，活性研究表明该化合物具有较好的抗氧化活性，尤其是将其用作民族药三叶悬钩子添加剂，具有很好的清除自由基抗氧化活性的效果，对提高卷烟品质具有积极意义。目前民族药三叶悬钩子中发现咖啡酸糖苷类化合物的清除卷烟烟气自由基效果还未见相关文献报道过。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种咖啡酸糖苷类化合物；第二目的在于提供所述咖啡酸糖苷类化合物的制备方法；第三目的在于提供所述咖啡酸糖苷类化合物的应用，主要用于清除卷烟主流烟气中的自由基。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明的第方面涉及一种咖啡酸糖苷类化合物是从民族药三叶悬钩子中分离得到，其分子式为C16H20O9，结构如下所示：
该化合物为浅黄色粉末，命名为：顺式-1-O-甲基-6-O-咖啡基-β-D-葡萄糖，英文名为：cis-1-O-methyl-6-O-caffeoyl-β-D-glucopyranose。
本发明的第二方面涉及上述的咖啡酸糖苷类化合物的制备方法，所述咖啡酸糖苷类化合物是以民族药三叶悬钩子为原料，依次经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析和高效液相色谱分离步骤制得，具体步骤为：
(1)浸膏提取：将三叶悬钩子茎和叶粉碎后用第一溶剂提取，然后除去第一溶剂得到粗提取物；
(2)有机溶剂萃取：将步骤(1)得到的粗提物悬浮于水中，用第二溶剂萃取，然后除去第二溶剂，得到黑色浸膏；将黑色浸膏进行树脂柱层析，依次用水、甲醇和丙酮低速洗脱，取甲醇洗脱液，除去甲醇得到甲醇浸膏；
(3)柱层析：以氯仿与甲醇体积比1:1的混合溶剂溶解步骤(2)得到甲醇浸膏，然后吸附在200～300目的硅胶上，干法装柱；以氯仿与甲醇的体积比为1:0,50:1,20:1,10:1,1:1的混合溶剂进行梯度洗脱；取10:1的洗脱液，除去溶剂得到洗脱样品A；用甲醇溶解洗脱样品A，将其吸附在RP-18上，干法柱层析，依次以5v/v％甲醇、70v/v％甲醇、85v/v％甲醇、100v/v％甲醇洗脱；取5v/v％甲醇洗脱液，除去溶剂得到洗脱样品B；将洗脱样品B用氯仿与甲醇体积比13:1的混合溶剂经硅胶柱反复柱层析，再用氯仿与甲醇体积比1:2的混合溶剂经Sephadex LH-20柱层析，得到所述的咖啡酸糖苷类化合物及其反式异构体的混合物；
(4)高效液相色谱分离：经高效液相色谱分离纯化步骤(3)得到混合物，即得到所述的咖啡酸糖苷类化合物。
优选地，步骤(1)所述的第一溶剂为体积浓度为70～100％的甲醇水溶液或体积浓度为90～100％的乙醇水溶液，所述提取为索氏回流提取。所述第一溶剂为甲醇体积浓度为70％以上，纯甲醇也可以作为第一溶剂；乙醇体积浓度为90％以上或纯乙醇也可以作为第一溶剂使用。
优选地，步骤(2)所述的第二溶剂为石油醚。
优选地，步骤(4)所述的高效液相色谱是以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为278nm，流动相为体积浓度为22％的甲醇水溶液，流速为15～25ml/min，每次进样10～100μL，收集20min的色谱峰，多次累加后蒸干得到所述的咖啡酸糖苷类化合物。
本发明的第三方面涉及所述的咖啡酸糖苷类化合物用于具有抗氧化活性的用途。
所述的咖啡酸糖苷类化合物具体用于清除卷烟烟气中自由基中的用途。
本发明的所述咖啡酸糖苷类化合物的制备方法的一个具体实施例如下：
(1)浸膏提取：干燥的三叶悬钩子(R.delavayi Franch)茎和叶25.0kg，粉碎后用90％MeOH加热回流索氏提取3次(70℃，每次提取时间为4小时)，减压蒸馏除去溶剂合并浸膏，得甲醇粗提取物；
(2)有机溶剂萃取：将粗提物悬浮于15.5L的水中，以石油醚萃取(15L×3)，减压蒸馏除去石油醚，得到黑色浸膏193.2g，进行D101大孔树脂柱层析，依次以水(100L)、甲醇(100L)和丙酮(20L)低速洗脱，分别减压蒸馏除去甲醇和丙酮，得到甲醇浸膏690.9g和丙酮浸膏3.9g；
(3)柱层析：以氯仿:甲醇(体积比1:1)的混合溶剂(4.0L)溶解甲醇浸膏690.9g，将样品吸附在200～300目的硅胶(2.0kg)上。干法装柱，以体积比氯仿:甲醇(1:0；50:1；20:1；10:1；1:1，体积分别是50L、50L、50L、50L、20L)进行梯度洗脱，减压蒸馏除去溶剂后，得到相对应洗脱样品Fr.1(13.0g)、Fr.2(33.5g)、Fr.3(14.2g)、Fr.4(66.0g)和Fr.5(276.5g)。以甲醇溶解样品Fr.4(66.0g)，将其吸附在RP-18上，干法柱层析，依次以体积比为5％甲醇(1.0L)、70％甲醇(4.0L)、70％甲醇(2.0L)、85％甲醇(2.0L)、100％甲醇(2.0L)洗脱，减压蒸馏除去溶剂后，得到相对应洗脱样品Fr.4a(9.6g)、Fr.4b-1(43.0g)、Fr.4b-2(3.3g)、Fr.4c(1.2g)、Fr.4d(1.5g)。脱样品样品Fr.4a(9.6g)经硅胶柱反复柱层析(氯仿:甲醇，体积比13:1)和Sephadex LH-20柱层析(氯仿:甲醇，体积比1:2)得到咖啡酸糖苷类化合物及其反式异构体的混合物(19.5mg)。
(4)高效液相色谱分离纯化，以体积浓度为22％的甲醇水溶液为流动相，流速为20ml/min，以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为278nm，每次进样500μL，收集20min的色谱峰，多次累加后蒸干即得所述的咖啡酸糖苷类化合物。
以上述方法制备得到的咖啡酸糖苷类化合物的结构通过以下方法进行测定：
本发明化合物为浅黄色粉末；
HR-ESI-MS显示其准分子离子峰为355.1043[M-H]+(计算值355.1034)，结合1H NMR和DEPT谱确定其分子式为C16H20O9，不饱和度为6。
13C-NMR和DEPT谱中的一组信号δC 105.3(d),75.0(d),71.8(d),77.9(d),75.3(d),64.5(t)和1H-NMR谱中，δH 4.29(d,J＝7.8Hz)和4.60(d,J＝11.1Hz),4.37(dd,J＝12.0,6.1Hz)提示该化合物拥有一个β-D-吡喃葡萄糖基。13C-NMR和DEPT谱中的另一组信号δC 128.1(s),116.4(d),145.2(s),148.3(s),118.6(d),125.0(d),115.8(d),145.7(d),168.2(d)提示该化合物含有咖啡酸片段。1H-NMR谱中一对信号：δH 5.77(d,12.6)和δH 6.80(d,12.6)提示该化合物是一个顺式结构。
在HMBC谱中，δH 4.60(d,J＝11.1Hz,H-6),4.37(dd,J＝12.0,6.12Hz,H-6)和δC168.2(s,C-9')的相关性提示β-D-吡喃葡萄糖基的6位通过一个酯键与苯丙烯酸结构单元相连。δH 3.51(s)和δC 105.3(d,C-1)的相关性提示甲基通过一个醚键与β-D-吡喃葡萄糖基的1位相连(见图4)。在NOESY谱中，δH 4.29(d,J＝7.8Hz,H-1)和δH 3.30(t,J＝8.1Hz,H-2)未表现出相关性，这个信息提示D-吡喃葡萄糖基的1位氢为-α构型。
至此，化合物的结构得到确定，并命名为：顺式-1-O-甲基-6-O-咖啡基-β-D-葡萄糖。
表1：化合物的(1H:600MHz；13C:150MHz)NMR数据(CD3OD)
本发明咖啡酸糖苷类化合物具有抗氧化活性的应用。
对本发明化合物进行了抗氧化活性测试，抗氧化活性以清除DPPH自由基能力的大小表示；以50μg/mL的乙醇溶液为初筛浓度，测定其清除脂性自由基DPPH的活性。取一块costar 96孔板，加入新鲜配制的DPPH乙醇溶液(浓度为6.0×105mol/L)190μL/孔，加入本发明化合物样品l0μL/孔，空白孔加l0μL生理盐水，充分混匀，用封板膜封板后室温下避光静置30分钟，于UV2401分光光度计上测定仪上测定各孔吸光度值，测定波长为517nm；样品对脂性自由基DPPH清除率按下式计算:
DPPH清除率(％)＝(A空白-A样品)/A空白×100％
A空白：空白对照组吸光度值；A样品：加样品组吸光度值。
样品平行5次检测，计算半数清除浓度IC50测定结果为3.43μg/L，表明本发明化合物具有良好的抗氧化活性和清除自由基活性。
同时提供本发明咖啡酸糖苷类化合物在清除卷烟烟气中的自由基中的应用。
对本发明化合物进行了清除卷烟烟气自由基效果的测试：
卷烟的叶组为：上部烟叶为15％，中部烟叶为48％，下部烟叶为23％，膨胀梗丝8％，民族药三叶悬钩子薄片6％；采用醋酸纤维嘴棒，嘴棒成型纸透气度为4500CU；卷烟纸克重为50g/m2、透气度为80CU，水松纸透气度为200CU。成品卷烟烟支的重量为0.93±0.02g，圆周为24.5mm，长度为84mm(其中嘴棒长度为25mm)。
试验化合物(本发明咖啡酸糖苷类化合物)用香精注射机均匀添加到卷烟过滤嘴丝束中，每支卷烟添加量为0.5～5.0mg，并以未添加试验化合物的卷烟为对照。
卷烟用RM200型20孔道自动吸烟机在标准条件下吸烟，主流烟气粒相物用44mm剑桥滤片捕集，气相部分用采样管捕集；粒相自由基用0.05mol/L的N-特丁基-α-苯基氮硐的苯溶液为萃取剂从剑桥滤片溶出，并洗涤剑桥滤片，定容得粒相自由基测试液。气相自由基用自由基采样管，以0.05mol/L N-特丁基-α-苯基氮硐的苯溶液为吸收剂采集，卷烟抽吸完后取出气相自由基采样管，同时用少量吸收剂分3次冲洗通气内管外部和采样管内壁，合并吸收液和洗涤液，得气相自由基样品液。
用顺磁共振仪测定自由基，ESR分析实验条件：中心磁场＝3.385T，扫宽＝0.500T，微波频率＝1.5GHz，扫描时间＝2min，扫描次数＝5，放大倍数＝103～105(根据峰高进行调整)，样品用量20μL；根据ESR图谱中峰面积计算气相及粒相自由基数量的变化。
实验结果表明：进行5次实验，和对照样相比，添加本发明化合物的卷烟气相自由基降低率为11～20％，粒相自由基降低率在20～26％之间，该化合物对卷烟主流烟气中的自由基具有确切的清除效果。
本发明与现有技术相比，其有益效果为：
本发明的咖啡酸糖苷类化合物是首次从民族药三叶悬钩子中被分离出来的，通过核磁共振和质谱测定方法确定了为咖啡酸糖苷类化合物，并表征了其具体结构。试验证明本发明化合物具有良好的抗氧化活性和清除自由基活性，对卷烟主流烟气中的自由基具有确切的清除效果。
附图说明
图1为本发明咖啡酸糖苷类化合物的核磁共振碳谱(13C NMR和DEPT谱)；
图2为为本发明咖啡酸糖苷类化合物的核磁共振氢谱(1H NMR谱)；
图3为本发明咖啡酸糖苷类化合物的HMBC图；
图4为本发明咖啡酸糖苷类化合物的关键HMBC和1H-1H COSY相关图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。
本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
除非另有说明，本发明的比例为体积比，浓度为体积百分比浓度。
实施例1
干燥的三叶悬钩子(R.delavayi Franch)茎和叶25.0kg，粉碎后用80％MeOH加热回流提取3次(70℃；每次提取时间为4小时)，减压蒸馏除去溶剂合并浸膏，得甲醇粗提取物a(1.31kg)。将粗提物悬浮于水(15.5L)中，以石油醚萃取(15L×3)，减压蒸馏除去石油醚，得到黑色浸膏193.2g，水层进行D101大孔树脂柱层析，依次以水(100L)、甲醇(100L)和丙酮(20L)低速洗脱，分别减压蒸馏除去甲醇和丙酮，得到浸膏b(690.9g)和浸膏c(3.9g)。以氯仿：甲醇(1：1)的混合溶剂(4.0L)溶解浸膏b(690.9g)，将样品吸附在200～300目的硅胶(2.0kg)上。干法装柱，以氯仿：甲醇(1：0；50：1；20：1；10：1；1：1，体积分别是50L、50L、50L、50L、20L)进行梯度洗脱，减压蒸馏除去溶剂后，得到相对应的浸膏Fr.1(13.0g)、Fr.2(33.5g)、Fr.3(14.2g)、Fr.4(66.0g)和Fr.5(276.5g)。以甲醇溶解样品Fr.4(66.0g)，将其吸附在RP-18上，干法柱层析，依次以5％甲醇(1.0L)、70％甲醇(4.0L)、70％甲醇(2.0L)、85％甲醇(2.0L)、100％甲醇(2.0L)洗脱，减压蒸馏除去溶剂后，得到Fr.4a(9.6g)、Fr.4b-1(43.0g)、Fr.4b-2(3.3g)、Fr.4c(1.2g)、Fr.4d(1.5g)。取样品Fr.4a(9.6g)经硅胶柱反复柱层析(氯仿：甲醇，13：1)和Sephadex LH-20柱层析(氯仿：甲醇，1：2)，得到该化合物及其反式异构体的混合物(19.5mg)。将混合物(19.5mg)经高效液相色谱分离纯化，以体积浓度为22％的甲醇水溶液为流动相，流速为20ml/min，以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为278nm，每次进样500μL，收集20min的色谱峰，多次累加后蒸干得到浅黄色粉末。
实施例2
实施例1制备得到的浅黄色粉末的结构通过以下方法进行测定；HR-ESI-MS显示其准分子离子峰为355.1043[M-H]+(计算值355.1034)，结合1H NMR和DEPT谱确定其分子式为C16H20O9，不饱和度为6。13C-NMR和DEPT谱中的一组信号δC 105.3(d),75.0(d),71.8(d),77.9(d),75.3(d),64.5(t)和1H-NMR谱中，δH 4.29(d,J＝7.8Hz)和4.60(d,J＝11.1Hz),4.37(dd,J＝12.0,6.1Hz)提示该化合物拥有一个β-D-吡喃葡萄糖基。13C-NMR和DEPT谱中的另一组信号δC 128.1(s),116.4(d),145.2(s),148.3(s),118.6(d),125.0(d),115.8(d),145.7(d),168.2(d)提示该化合物含有咖啡酸片段。1H-NMR谱中一对信号：δH 5.77(d,12.6)和δH6.80(d,12.6)提示该化合物是一个顺式结构。在HMB C谱中，δH 4.60(d,J＝11.1Hz,H-6),4.37(dd,J＝12.0,6.12Hz,H-6)和δC 168.2(s,C-9')的相关性提示β-D-吡喃葡萄糖基的6位通过一个酯键与苯丙烯酸结构单元相连。δH 3.51(s)和δC 105.3(d,C-1)的相关性提示甲基通过一个醚键与β-D-吡喃葡萄糖基的1位相连。在NOESY谱中，δH 4.29(d,J＝7.8Hz,H-1)和δH 3.30(t,J＝8.1Hz,H-2)未表现出相关性，这个信息提示D-吡喃葡萄糖基的1位氢为-α构型。至此，化合物的结构得到确定，并命名为：顺式-1-O-甲基-6-O-咖啡基-β-D-葡萄糖。
实施例3
对实施例1得到的化合物进行了抗氧化活性测试，抗氧化活性以清除DPPH自由基能力的大小表示；以50μg/mL为初筛浓度，测定其清除脂性自由基DPPH的活性。取一块costar 96孔板，加入新鲜配制的DPPH乙醇溶液(6.0×105mol/L)190μL/孔，加入待测样品l0μL/孔，空白孔加l0μL生理盐水，充分混匀，用封板膜封板后室温下避光静置30分钟，于UV2401分光光度计上测定仪上测定各孔吸光度值，测定波长为517nm；样品对脂性自由基DPPH清除率按下式计算:
DPPH清除率(％)＝(A空白-A样品)/A空白×100％
A空白：空白对照组吸光度值；A样品：加样品组吸光度值。
样品平行5次检测，计算半数清除浓度IC50测定结果为4.22μg/L。结果表明化合物具有良好的抗氧化活性和清除自由基活性。
实施例4
化合物的清除卷烟烟气自由基效果测试：
(1)卷烟的叶组为：上部烟叶为15％，中部烟叶为48％，下部烟叶为23％，膨胀梗丝8％，民族药三叶悬钩子薄片6％；采用醋酸纤维嘴棒，嘴棒成型纸透气度为4500CU；卷烟纸克重为50g/m2、透气度为80CU的，水松纸透气度为200CU。成品卷烟烟支的重量为0.93+0.02g，圆周为24.5mm，长度为84mm(其中嘴棒长度为25mm)。
试验化合物用添加到卷烟过滤嘴丝束中，每支卷烟添加量为0.5～5.0mg，并以未添加试验化合物的卷烟为对照。
(2)卷烟用RM200型20孔道自动吸烟机在标准条件下吸烟，主流烟气粒相物用44mm剑桥滤片捕集，气相部分用采样管捕集；粒相自由基用含0.05mol/L N-特丁基-α-苯基氮硐的苯溶液为萃取剂从剑桥滤片溶出，并洗涤剑桥滤片，定容得粒相自由基测试液。气相自由基用自由基采样管，以0.05mol/L N-特丁基-α-苯基氮硐的苯溶液为吸收剂采集，卷烟抽吸完后取出气相自由基采样管，同时用少量吸收剂分3次冲洗通气内管外部和采样管内壁，合并吸收液和洗涤液，得气相自由基样品液。
(3)用顺磁共振仪测定自由基，ESR分析实验条件：中心磁场＝3.385T，扫宽＝0.500T，微波频率＝1.5GHz，扫描时间＝2min，扫描次数＝5，放大倍数＝103～105(根据峰高进行调整)，样品用量20μL；根据ESR图谱中峰面积计算气相及粒相自由基数量的变化。
实验结果表明：进行5次实验，和对照样相比，添加该化合物的卷烟气相自由基降低率为16～24％，粒相自由基降低率在18～25％之间。结果表明该化合物对卷烟主流烟气中的自由基具有明显的清除效果。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。

Claims (7)

1.一种咖啡酸糖苷类化合物，其特征在于，其具有如下结构：
其分子式为C16H20O9，命名为：顺式-1-O-甲基-6-O-咖啡基-β-D-葡萄糖。
2.一种根据权利要求1所述的咖啡酸糖苷类化合物的制备方法，其特征在于，所述咖啡酸糖苷类化合物以三叶悬钩子为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、柱层析和高效液相色谱分离步骤制得，具体步骤为：
(1)浸膏提取：将三叶悬钩子的茎和叶粉碎后用第一溶剂提取，然后除去第一溶剂得到粗提取物；
(2)有机溶剂萃取：将步骤(1)得到的粗提物悬浮于水中，用第二溶剂萃取，然后除去第二溶剂，得到黑色浸膏；将黑色浸膏进行树脂柱层析，依次用水、甲醇和丙酮洗脱，收集甲醇洗脱液，除去甲醇得到甲醇浸膏；
(3)柱层析：以氯仿与甲醇体积比1:1的混合溶剂溶解步骤(2)得到的甲醇浸膏，然后吸附在200～300目的硅胶上，干法装柱；以氯仿与甲醇的体积比为1:0,50:1,20:1,10:1,1:1的混合溶剂进行梯度洗脱；收集10:1的洗脱液，除去溶剂得到洗脱样品A；用甲醇溶解洗脱样品A，将其吸附在RP-18上，干法柱层析，依次以5v/v％甲醇、70v/v％甲醇、85v/v％甲醇、100v/v％甲醇洗脱，收集5v/v％甲醇洗脱液，除去溶剂得到洗脱样品B；将洗脱样品B用氯仿与甲醇体积比13:1的混合溶剂经硅胶柱反复柱层析，再用氯仿与甲醇体积比1:2的混合溶剂经Sephadex LH-20柱层析，得到所述的咖啡酸糖苷类化合物及其反式异构体的混合物；
(4)高效液相色谱分离：经高效液相色谱分离纯化步骤(3)得到混合物，即得到所述的咖啡酸糖苷类化合物。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述的第一溶剂为体积浓度为70～100％的甲醇水溶液或体积浓度为90～100％的乙醇水溶液，所述提取为索氏回流提取。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述的第二溶剂为石油醚。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述的高效液相色谱是以21.2×250mm，5μm的Zorbax PrepHT GF反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为278nm；流动相为体积浓度为22％的甲醇水溶液，流速为15～25ml/min，每次进样10～100μL，收集20min的色谱峰，多次累加后蒸干，即得到所述的咖啡酸糖苷类化合物。
6.根据权利要求1所述的咖啡酸糖苷类化合物用于抗氧化活性的用途。
7.根据权利要求6所述的用途，其特征在于用于清除卷烟烟气中自由基的用途。
CN201810050338.6A 2018-01-18 2018-01-18 一种咖啡酸糖苷类化合物、其制备方法及应用 Active CN108033984B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810050338.6A CN108033984B (zh) 2018-01-18 2018-01-18 一种咖啡酸糖苷类化合物、其制备方法及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810050338.6A CN108033984B (zh) 2018-01-18 2018-01-18 一种咖啡酸糖苷类化合物、其制备方法及应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108033984A true CN108033984A (zh) 2018-05-15
CN108033984B CN108033984B (zh) 2020-10-20

Family

ID=62096407

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810050338.6A Active CN108033984B (zh) 2018-01-18 2018-01-18 一种咖啡酸糖苷类化合物、其制备方法及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108033984B (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112979723A (zh) * 2021-02-23 2021-06-18 江苏科本药业有限公司 一种吉西他滨中间体的纯化方法
CN112979724B (zh) * 2021-02-23 2022-04-22 浙江外国语学院 一种吉西他滨中间体的母液回收方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20120135448A (ko) * 2011-06-01 2012-12-14 중앙대학교 산학협력단 먼나무 잎으로부터 분리된 신규 화합물 및 이의 항산화 용도
CN103304606A (zh) * 2013-06-25 2013-09-18 山东大学 咖啡酸糖苷衍生物及其制备方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20120135448A (ko) * 2011-06-01 2012-12-14 중앙대학교 산학협력단 먼나무 잎으로부터 분리된 신규 화합물 및 이의 항산화 용도
CN103304606A (zh) * 2013-06-25 2013-09-18 山东大学 咖啡酸糖苷衍生物及其制备方法

Non-Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANDREJ CHYBA,ET AL.: "Effective enzymatic caffeoylation of natural glucopyranosides", 《BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY LETTERS》 *
DONG-SHENG MING，ET AL.: "A new compound from Geum rivale L.", 《JOURNAL OF ASIAN NATURAL PRODUCTS RESEARCH》 *
KARLA MARIA PEREIRA PIRES,ET AL.: "Grape skin extract reduced pulmonary oxidative response in mice exposed to cigarette smoke", 《MED SCI MONIT》 *
MARGARETH B.C. GALLO，ET AL.: "Compounds from Vitex polygama active against kidney diseases", 《JOURNAL OF ETHNOPHARMACOLOGY》 *
RITA AQUINO，ET AL.: "An Extract of Tagetes lucida and Its Phenolic Constituents as Antioxidants", 《J. NAT. PROD.》 *
ZHOU YAN-LIN，ET AL.: "Chemical onstituents from Herba Lygodii and evaluation of antioxidant activity by TLC-DPPH", 《中华中医药杂志》 *
王瑛，等: "关木通中的苯丙素成分研究", 《兰州大学学报(自然科学版)》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112979723A (zh) * 2021-02-23 2021-06-18 江苏科本药业有限公司 一种吉西他滨中间体的纯化方法
CN112979724B (zh) * 2021-02-23 2022-04-22 浙江外国语学院 一种吉西他滨中间体的母液回收方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108033984B (zh) 2020-10-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105152880B (zh) 一种用超临界流体色谱制备的烟草倍半萜-f及其用途
CN106858710B (zh) 一种能改善卷烟抽吸效果的苯并异呋喃类化合物及其制备方法与应用
CN104387402B (zh) 一种异香豆素类化合物及其制备方法和用途
CN109725080A (zh) 大麻二酚、大麻二酚酸、四氢大麻酚中一种或几种物质的定性定量检测方法
CN106883245B (zh) 一种具有清除自由基效果的苯并异呋喃类化合物及其制备方法与应用
CN108892606A (zh) 一种具有抗菌功能的稠环芳烃类化合物及其制备方法与应用
CN109730359A (zh) 一种猪鬃草中的三萜类化合物及其制备方法与在电子烟中的应用
Helmlin et al. Determination of psychotropic phenylalkylamine derivatives in biological matrices by high-performance liquid chromatography with photodiode-array detection
CN110272334A (zh) 一种天然抗菌多酚类化合物及其制备方法与在电子烟中的应用
CN105481818B (zh) 一种增香保润异香豆素类化合物及其制备方法和用途
CN108033984A (zh) 一种咖啡酸糖苷类化合物、其制备方法及应用
CN106883243B (zh) 葛根中一种具有清除自由基效果的异苯并呋喃类化合物及其烟草用途
CN103191041A (zh) 一种具有抗氧化作用的红豆杉枝叶提取物、其提取方法及应用
CN109503696A (zh) 一种具有抗菌功能的三萜类化合物及其制备方法与在电子烟中的应用
CN107118195B (zh) 一种能延长烟草净油保质期的异黄酮类化合物及其制备方法与应用
CN106957322B (zh) 一种能改善卷烟抽吸喉部舒适性的异苯并呋喃类化合物及其制备方法与应用
CN106146383B (zh) 烟草中一种异吲哚生物碱化合物、其制备方法和应用
CN109438545A (zh) 一种天然抗菌化合物及其制备方法与在电子烟中的应用
CN102786530B (zh) 一种植物黄酮类化合物及其制备方法与应用
CN107468731A (zh) 一种白簕叶片中总多酚分离纯化工艺
CN102590431B (zh) 一种治疗咳嗽的中药药物组合物检测方法
CN106442843A (zh) 小清咽颗粒质量检查方法
CN106986850B (zh) 抗氧化活性的异黄酮类化合物及其制备方法和应用
CN106565654B (zh) 一种从白云参中提取的新型黄酮类化合物、其制备方法及其用途
CN105175233B (zh) 一种倍半萜类化合物及其制备方法与应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant