CN107950472A - 一种溃疡性结肠炎动物模型的构建方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种实验动物模型，公开了一种溃疡性结肠炎动物模型的构建方法和应用。本发明的溃疡性结肠炎动物模型以土狗为模型动物，采用醋酸致犬溃疡性结肠炎，实验结果基本能直接推广应用于人体。造模方式易操作，模型稳定，易重复，成本低，为UC治疗药物的研发提供了更多成药性评价、疗效评价的动物模型选择。

Description

一种溃疡性结肠炎动物模型的构建方法和应用
技术领域
本发明涉及实验动物模型领域，具体涉及一种溃疡性结肠炎动物模型的构建方法及其应用。
背景技术
溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis，UC)是一种以溃疡形成和慢性炎症为主要病理特点的慢性非特异性溃疡性结肠炎，其是炎症性肠病(Inflammatory Bowl Disease，IBD)的一种。UC病因不明，以腹泻、腹痛及黏液脓血便等消化道症状为主要临床表现；病变多累及直肠和乙状结肠，也可遍及整个结肠，主要侵犯大肠黏膜与黏膜下层，呈阶段性和弥漫性分布。UC发作期与缓解期反复交替、病程冗长，且治愈难度大，治愈后复发率高，并与结肠癌发病存在一定相关性，愈后较差，因此被世界卫生组织列为现代难治疾病之一，受到医学界的普遍重视。建立与临床症状相似、重复性好、操作简单的适用于UC研究的动物模型，不仅为研究疾病规律提供依据，还为开发研制治疗UC的新药提供合适的条件。
常用的UC疾病研究/药效评价实验动物模型为对健康的实验动物采用化学刺激法、免疫法、复合法等诱导产生肠道溃疡灶和炎症反应。其中采用醋酸化学刺激的方法使实验动物的肠道黏膜屏障结构破坏，继而启动炎症，引起炎症介质，其发病灶的病理变化及炎症病症与人类花生四烯酸代谢异常引起的肠道炎性性质相似，且制备简单、成本低、成功率高、重复性好，短期内即可出现明显症状，UC诱导方法相对简便。
目前UC动物模型中普遍采用的实验动物为大鼠，家兔、豚鼠和小鼠也偶有用之；然而，包括兔形目和啮齿目的啮齿类动物因食性不同，其消化系统的生理、毒理和对疾病的反应与人类迥然不同，因此不能直接推广于人体。
目前以犬建立的UC动物模型其采用的实验犬为成年的德国牧羊犬或比格犬，此类犬在饲养期间易受外界环境因素影响，其成年犬的体型较大导致人工诱导UC的操作程序难以标准化、从而导致与UC相关的混杂因素难以得到有效控制。且其个体抵抗力较差、易在造模过程中诱发其它疾病甚或死亡。再者，未避免德国牧羊犬或比格犬在造模过程中产生其它疾病或死亡，文献方法中公开的诱导UC发生的化学试剂其剂量较低，因此引发的炎症程度与人类临床表现差异较大，无法客观、正确反应疾病过程或评价药物的治疗效果。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种构建更能反映人类溃疡性结肠炎动物模型的方法及其应用。
为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
一种溃疡性结肠炎动物模型的构建方法，包括以下步骤：
土狗灌胃清洗，禁食不禁水24h；
将土狗麻醉，用醋酸灌肠，平躺至自然苏醒，得到溃疡性结肠炎动物模型。
优选的，所述灌肠的方式为：将醋酸溶液灌入土狗结肠内，保留10s以上导出，再用生理盐水冲洗结肠。
更优选的，所述醋酸溶液的质量浓度为5～10％，醋酸溶液的用量为10～20mL。
优选的，所述灌胃用药剂为MgSO4溶液，所述MgSO4溶液的浓度为5～10％，用量为5～10mL/kg。
优选的，所述土狗麻醉的方法为：用舒眠宁对土狗进行肌肉注射。
本发明上述方法构建得到的溃疡性结肠炎动物模型能够用于筛选UC治疗药物，评价UC治疗药物的药效。
本发明还提供了一种筛选UC治疗药物的方法，包括以下步骤：
a、设置待测药物组、生理盐水对照组和正常对照组，其中待测药物组和生理盐水对照组使用上述方法构建的溃疡性结肠炎动物模型，正常对照组为正常饲喂的土狗；观察并记录待测药物组、生理盐水对照组和正常对照组动物的生理基础数据和结肠病理情况；
b、待测药物组灌喂待测药物，生理盐水对照组和正常对照组灌喂生理盐水；观察并记录处理后待测药物组、生理盐水对照组和正常对照组动物的生理基础数据和结肠病理情况；
c、分析步骤a和步骤b记录的数据及结肠病理照片评分，对待测药物的治疗效果进行评价；若待测药物组较生理盐水对照组的生理基础数据更接近于正常对照组的相应测量值，或待测药物组较生理盐水对照组的结肠病理照片评分低，则说明待测药物具有治疗UC的作用。
本发明中，优选所述结肠病理照片的评分标准为：
0级：黏膜苍白，血管网清晰，呈分支状；黏膜下无红肿、充血，其表面黏膜正常；
1级：黏膜尚光滑，但小面积充血、红肿，折光增强；
2级：黏膜充血、水肿，呈颗粒状，黏膜脆性增加，接触易出血；
3级：黏膜明显充血、水肿、粗糙，少量自发性出血点或接触性出血；有较多炎性分泌物，多发性糜烂与小面积溃疡形成；
4级：黏膜大面积充血、水肿、粗糙，明显自发性出血和接触性出血；多发性点状糜烂与大面积溃疡形成；
若待测药物组结肠病理照片的评分低，则说明待测药物治疗UC的效果好。
本发明中，所述动物的生理基础数据包括体温、体重、大便形状、隐血检查、血常规、血液生化指标和C-反应蛋白中的一项或几项。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明采用土狗(中华田园犬Canislupusfamiliaris)作为模型动物，动物来源广，且该犬主要是以杂交犬居多，受外界环境因素影响较小，个体抵抗力较好，由于犬的消化系统与人类较为近似，实验结果基本能直接推广应用于人体。本发明提供的醋酸致犬溃疡性结肠炎模型的造模方式易操作，模型稳定，易重复，成本低，为UC治疗药物的研发提供了更多成药性评价、疗效评价的动物模型选择。
附图说明
图1为7％醋酸10mL造模前后肠镜检查图；
图2为10％醋酸15mL造模前后肠镜检查图；
图3为5％醋酸20mL造模前后肠镜检查图；
图1～3中：A、未造模前肠道；B、造模后第一天肠道；C、造模后第四天肠道；D、造模后第七天肠道。
图4为本发明醋酸致家犬急性溃疡性结肠炎肠镜检查评分等级对应图片。
具体实施方式
本发明采用土狗作为模型动物，用醋酸致犬溃疡性结肠炎构建溃疡性结肠炎动物模型。具体包括以下步骤：
土狗灌胃清洗，禁食不禁水24h；
将土狗麻醉，用醋酸灌肠，平躺至自然苏醒，得到溃疡性结肠炎动物模型。
本发明所用实验土狗优选为成年健康土狗，在本发明具体实施例中优选采用年龄1～2岁的土狗，土狗体重优选为6.0～12.0Kg。
本发明对灌胃及灌肠的具体操作没有特殊限定，可以采用本领域技术人员的常规技术操作。本发明优选灌肠方式为，将醋酸溶液灌入土狗结肠内，保留10s以上导出，再用生理盐水冲洗结肠。具体的，将土狗麻醉后，用导管自土狗肛门处插入至结肠内20cm，缓慢注入醋酸溶液，保留醋酸灌肠10s以上导出，将土狗采用头低尾高的体位用生理盐水冲洗结肠。
本发明中，对土狗的麻醉方式可以采用本领域中的常规动物麻醉方法。在本发明具体实施例中，优选采用舒眠宁对土狗进行肌肉注射。按照说明书记载的麻醉剂量进行操作。
本发明中采用醋酸使动物的肠道溃疡性，继而引发炎症。本发明所用醋酸溶液的质量浓度为5～10％，更优选为7～9％。根据醋酸的浓度适度调整醋酸溶液的用量。本发明中醋酸溶液的用量优选1～2mL/kg土狗，更优选为1.3～1.7mL/kg。
本发明用醋酸灌肠的时间为10s以上，优选为20～40s。灌肠后用生理盐水进行冲洗。本发明对生理盐水的用量没有特殊限定，优选为20～100mL，更优选为50～60mL。
待造模后的动物苏醒后，结合造模后动物的体征情况及肠镜检查，若出现便血、肠粘膜糜烂、充血等症状，则确认造模成功。
本发明得到的上述溃疡性结肠炎动物模型能够用于筛选UC治疗药物，评价UC治疗药物的药效。
本发明还提供了一种筛选UC治疗药物的方法，包括以下步骤：
a、设置待测药物组、生理盐水对照组和正常对照组，其中待测药物组和生理盐水对照组使用本发明所述方法构建的溃疡性结肠炎动物模型，正常对照组为正常饲喂的土狗；观察并记录待测药物组、生理盐水对照组和正常对照组动物的生理基础数据和结肠病理情况；
b、待测药物组灌喂待测药物，生理盐水对照组和正常对照组灌喂生理盐水，根据待测药物的临床用药周期确定处理天数，观察并记录处理后待测药物组、生理盐水对照组和正常对照组动物的生理基础数据和结肠病理情况；
c、分析步骤a和步骤b记录的数据及结肠病理照片，对药物的治疗效果进行评价，若待测药物组较生理盐水对照组的生理基础数据更接近于正常对照组的相应测量值，或待测药物组较生理盐水对照组的结肠病理照片评分低，则说明待测药物具有治疗UC的作用。
本发明中所使用的溃疡性结肠炎动物模型所形成的结肠病理照片，优选按照以下评分标准：
0级：黏膜苍白，血管网清晰，呈分支状；黏膜下无红肿、充血，其表面黏膜正常；
1级：黏膜尚光滑，但小面积充血、红肿，折光增强；
2级：黏膜充血、水肿，呈颗粒状，黏膜脆性增加，接触易出血；
3级：黏膜明显充血、水肿、粗糙，少量自发性出血点或接触性出血；有较多炎性分泌物，多发性糜烂与小面积溃疡形成；
4级：黏膜大面积充血、水肿、粗糙，明显自发性出血和接触性出血；多发性点状糜烂与大面积溃疡形成。
若待测药物组结肠病理照片的评分低，则说明待测药物治疗UC的效果好。
本发明中，所述动物的生理基础数据包括体温、体重、大便形状、隐血检查、血常规、血液生化指标和C-反应蛋白中的一项或几项。
根据生理基础数据及结肠评分的变化，评价UC药物的药效及治疗效果。
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例对本发明进行详细的说明。
如无特殊说明，本发明具体实施例中采用以下试验器材及试验试剂，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
1.试验器材：
医学图像分析系统(重庆澳浦光电技术有限公司；BL-2000)；
高速冷冻离心机(湖南湘立科学仪器有限公司；TLC16M)；
超纯水机(艾柯仪器；DZG-303A型)；
分析天平(赛多利斯科学仪器有限公司；BSA-124S型)；
电子内窥镜(上海澳华光电内窥镜有限公司；VET-8015)；
全自动动物血液细胞分析仪(南京普朗医疗设备有限公司；XFA6030)；
微距相机：尼康DIGITAI CAMERA D7100型，微距镜头：AF-S Micro 60/2.8G ED；
6号导尿管(杭州博菲医疗器械有限公司；批号：A16048)；
隐血试剂盒、20mL、5mL、1mL注射器、直径2mm聚乙烯导管、真空采血器、烧杯、滤纸、称量纸、动物解剖器械、电子台秤、自封袋、垃圾袋、常规手术器械、HH.W21.600型不锈钢电子恒温水箱。
2.试验试剂：
冰醋酸(天津福晨化学试剂有限公司，批号：20151020)；
生理盐水(贵州天地药业责任有限公司，批号：A16021507)；
甲醛(天津福晨化学试剂厂，批号：20150408)；
磷酸氢二钠(天津市风船化学试剂科技有限公司，批号：20131008)；
磷酸二氢钠(天津市风船化学试剂科技有限公司，批号：20140318)；
10％MgSO4溶液；
胃康灵胶囊(四川好医生攀西药业责任有限公司，批号：20170113)；
奥沙拉秦胶囊(天津力生制药股份有限公司，批号：1608005)；
舒眠宁II注射液(南京大学小动物疾病研究室，批号：c20170225)；
淀粉结肠溶胶囊、柳氮磺吡啶结肠溶胶囊。
实施例1
一、试验动物
成年土狗(中华田园犬Canis lupus familiaris)，年龄1～2岁，体重6.0～12.0Kg，由贵州大学动物医院提供，实验前饲喂2周，注射英特威四联苗2次(时间间隔2周)，临床检查健康者用于本试验。
二、建立实验模型
1.试验犬的分组及生理基础数据测定
健康的成年土狗12只，随机分为3组，每组4只，雌雄各半。试验期间所有试验动物，单笼饲养，每日提供同等量的食物和饮用水，造模前一天，测定所有家犬的相关数据。
1.1犬常规体征的观察：每天给予犬适量的食物，并记录体重、体温、呼吸频率(次/分)、以及12h内(9:00至21:00)的大便次数、大便性状、精神状态。
1.2血常规检测及正常血浆样品收集：动物适应性饲养后，清晨进食前对其进行静脉采集抗凝血4mL、2mL各一管，测定造模动物的血液生化指标、C反应蛋白，共取2次，全血管经3500rmp、4℃离心10min后取出血清-80℃保存备用。
2.UC模型的建立
实验动物随机分为3组，分别为10mL7％醋酸组、15mL10％醋酸组和20mL5％醋酸组；造模前一天10％MgSO4溶液5mL/kg灌胃，清洁肠道，禁食不禁水24h后，舒眠宁II注射液0.1mL/kg麻醉家犬，用聚乙烯6号导尿管自肛门处插入至结肠内20cm，缓慢注入相应体积、相应浓度的醋酸溶液，保留灌肠15s，头低尾高，用50mL生理盐水冲洗。造模完成后平躺放回饲养笼中待其自然苏醒，观察并记录造模后的状态变化。
3.模型评价
3.1一般情况观察：造模后每天记录犬体温、呼吸频率(次/分)、大便次数、大便性状、精神状态并记录家犬的便血情况。
3.2肠镜检测：分别于造模后的第1、4、7、10、14天舒眠宁Ⅱ注射液0.1mL/kg麻醉，用生理盐水冲洗犬结肠降结肠段和乙状结肠段(约从肛门至结肠内部20cm处)，使结肠内容物尽可能的冲洗出，在将VET-8015型电子内窥镜插入家犬结肠中，并于插入20cm处依次向肛门端移动拍照保存并以肠镜对模型进行评分。
3.3结肠病理切片：于造模后第10、14天舒眠宁Ⅱ注射液0.1mL/kg麻醉，然后空气栓塞处死，取出结肠，剖开，洗净，平铺拍照；然后沿结肠纵切分为三份，将中间段结肠置于10％福尔马林液中浸泡固定，石蜡包埋，HE染色做病理切片，剩余结肠-80℃冰箱中保存。
4.UC犬模型造模结果
4.1大体观察结果：直肠给予醋酸10分钟左右犬烦躁不安，频频回头观腹，用前肢抓腹敲打腹部，少部分用嘴啃咬狗笼，发出疼痛叫声，80％的犬在10-20分钟左右开始便血，里急后重，弯腰弓背，频频努责，在狗笼里频繁走动，便血量多，大多都为鲜血。
4.2肠镜检查结果：
根据图1～图3的内视镜显示，3组实验犬在造模前结肠部位粘膜表面光滑、完整没有损伤、色泽正常呈粉红色、未显出炎症反应；而造模后的第1天，可见直肠黏膜糜烂、多发性浅表溃疡，伴充血、水肿，呈弥漫性分布；造模后第7天的镜检结果提示，所有实验动物的结肠粘膜仍充血、糜烂，形成伪膜；结果显示所有实验动物的结肠都出现了急性溃疡性炎症，造模成功。
实施例2
醋酸致犬急性UC模型肠镜检查评分标准
UC活动期的结肠病变粘膜成弥散性充血水肿，血管纹理模糊或紊乱；随着病情进展，粘膜变得粗糙，里面弥散分布的细颗粒质脆，有自然出血或接触出血；病变较重时，有多发性浅溃疡，重度溃疡变得大而深，肠腔可有粘液及血液渗出。
目前国内外评判UC的内镜评分方法有多种，不同的评分方法对于粘膜愈合和疾病活动程度各有侧重。其中Baron内镜评分方法主要关注粘膜出血程度，Mayo肠镜评分方法侧重于粘膜的整体特征，具体评分等级如下：
表1 Baron内镜分级
分级 内镜表现
0 血管纹理清晰可见，无自发性或接触性出血
1 粘膜有损害但无出血，介于0～2之间
2 粘膜中度出血；接触性出血，但无自发性出血
3 严重出血；自发性出血。接触性出血
表2 Mayo肠镜UC评分
国内对动物肠镜检查并无标准，并且动物自发性溃疡性结肠炎相对于醋酸诱导的急性溃疡性结肠炎炎症相对较轻，无法直观评价实验动物模型的严重程度及其疾病进程。故结合临床患者溃疡性结肠炎的疾病严重程度及临床分期，着重从粘膜损伤及肠道出血红肿情况，将醋酸致家犬急性溃疡性结肠炎的肠镜评分标准制定如下：
表3醋酸致家犬急性溃疡性结肠炎肠镜检查评分标准
实施例3
实验模型验证
1.试验犬的分组及生理基础数据测定
选取合格的成年土狗16只，随机分为4组，每组4只，雌雄各半。试验期间所有试验动物，单笼饲养，每日提供同等量的食物和饮用水，造模前一天，测定所有家犬的相关数据。
2.醋酸诱导家犬溃疡性结肠炎的模型建立
造模前一天10％MgSO4溶液5mL/kg灌胃，清洁肠道，禁食不禁水24h后，按照0.15mL/kg肌肉注射舒眠宁麻醉，用聚乙烯导管自肛门处插入至结肠内20cm，缓慢注入7％醋酸溶液20mL，保留灌肠1min，头低尾高，用50mL生理盐水冲洗。
3.给药方式
造模后第1d起，按分组空腹灌喂给药，2粒/kg体重，早晚各一次，喂药2h后进食，连续给药7d；其中：A组(模型组)灌喂淀粉结肠溶胶囊、B组灌喂胃康灵胶囊、C组灌喂奥沙拉秦胶囊、D组灌喂柳氮磺吡啶结肠溶胶囊。
4.疗效判定
4.1大体观察
用电子内窥镜分别于造模的前后1d和给药后第3d、7d进行观察，记录结肠粘膜是否出现溃疡、溃烂和出血等；对各组进行疾病活动指数(DAI,DiseaseActivityIndex)评分；并记录实验犬体温、体重以及大便形状。DAI评分方法如表4。
表4疾病活动指数(DAI)评分
分数 体重减轻(％) 粪便性状 隐血情况
0 <1 正常 隐血(－)
1 1～5 介于两者之间 隐血(+)
2 5.01～10 糊状便 隐血(++)
3 10.01～15 介于两者之间 隐血(+++)
4 >15 腹泻 肉眼可见出血
注：正常粪便＝可成形的粪便；糊状＝不与肛门相粘的糊状粪便；腹泻＝黏于肛门的液化粪。
体重减轻(％)＝(某时间点的体重一造模前体重)/造模前体重×100％
DAI＝(体重下降的评分+大便性状的评分+隐血情况的评分)/3。
4.2隐血检查
大便隐血(又称便潜血)是指消化道少量出血，红细胞被消化破坏，粪便外观无异常改变，肉眼和显微镜下均不能证实的出血。采用隐血试剂盒检测，用棉签挑起少许大便于白瓷板上，滴加邻联甲苯胺液，再滴加过氧化氢液，根据显色时间和显色程度进行隐血等级评分。
4.3血常规
血细胞分析仪分析实验动物血液中的白细胞总数(WBC)、淋巴细胞总数(LYM)、单核细胞数(MONO)、中性粒细胞总数(GRAN)、淋巴细胞百分比(LYM％)、单核细胞百分比(MON％)、中性粒细胞百分比(GRA％)、血红蛋白(HGB)、红细胞比容(HCT)、红细胞总数(RBC)、红细胞平均体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCH)、平均血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度(RDW％)、血小板总数(PLT)、平均血小板体积(MPV)。
4.4血液生化指标
用IDEXX生化分析仪分析血清中的胆红素(CHOL)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、尿素氮(BUN)、肌酐(CREA)、葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TBIL)、血钙(CA)、磷酸根(PHOS)、谷丙转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALKP)、淀粉酶(AMYL)、球蛋白(GLOB)含量。
4.5C-反应蛋白(CRP)
用USHIO INC Point-readerV分别检查造模前、造模后1、4、7天血清中C-反应蛋白含量。
4.6光学显微镜病理切片观察(HE)
制作切片观察结肠粘膜上皮：上皮细胞正常形态；杯状细胞、隐窝细胞、炎细胞浸润浸润情况等。
5.以临床用于治疗UC的药物炎症犬UC模型结果
5.1大体观察结果
直肠给予醋酸，10分钟左右犬烦躁不安，频频回头观腹，用前肢抓腹敲打腹部，少部分用嘴啃咬狗笼，发出疼痛叫声，80％的犬在10-20分钟左右开始便血，里急后重，弯腰弓背，频频努责，在狗笼里频繁走动，便血量多，大多都为鲜血。
5.2内窥镜检查：造模前，结肠粘膜呈粉红色，粘膜表面光滑。造模后1d，可见模型组直肠黏膜糜烂、多发性浅表溃疡，伴充血、水肿，呈弥漫性分布。
模型组在造模后4d，A组(模型组)结肠黏膜充血、水肿，黏膜面变粗糙，出现弥漫分布、大小较一致的细颗粒，组织变脆，有自然出血或接触出血，腔内有黏液性分泌物；造模后7d，模型组结肠黏膜仍充血、糜烂，形成伪膜。
药物组内窥镜检查结果：用药后4d，B组(胃康灵胶囊组)结肠黏膜糜烂、水肿，仍有溃疡；C组(奥沙拉秦胶囊组)结肠粘膜水肿减轻，溃疡较小而少；D组(柳氮磺吡啶肠溶胶囊组)结肠粘膜可见许多散在分布的红色小斑，呈针头样或斑片状，形态不规则，排列无规律。
用药后7d，B组结肠黏膜轻微水肿，溃疡愈合；C组渗出物吸收，肠黏膜色泽变得苍白，黏膜正常光泽但未完全恢复；D组结肠内可见浓汁，但结肠粘膜表面光滑，未见溃疡性病灶。
5.3 DAI评分结果
表5 DAI评分结果
注：表中各个数据取的是各组实验动物DAI的平均值。
DAI评分结果：从表5可看出，造模后的第1dDAI值最高，给药后的第4到第7天DAI逐渐下降。同期相比，模型组DAI值最高。
5.4大便隐血结果：
隐血实验结果：造模前1d的犬大便隐血检测为阴性(—)，给药后第1d和第4d隐血实验检测为强阳性(+++)，肉眼可见大便带鲜血，给药后第7d，大便隐血检测虽仍为阳性(++)，但出血情况减轻。
5.5血常规检测结果：
白细胞变化结果见表6。给药后第4d，A组(模型组)和C组白细胞总数高，B组和D组的白细胞总数则恢复到正常范围；给药后第7d，B组和D组白细胞总数维持在正常范围内，C组则持续下降至接近正常范围。
表6 WBC检测结果(均值±标准差,n＝4)
注：白细胞的参考范围为6×109/L-17×109/L。
5.6生化检测结果
生化检测指标只有BUN有变化，在试验期间，BUN在正常范围内或略低于正常范围。其余的生化检测指标在各检测时点无差异。
5.7C-反应蛋白(CRP)检测结果
CRP变化结果见表7。给药后第4d，各用药组CRP下降，其中D组下降最明显；给药后第7d，D组的CRP为7.975±2.425，恢复到正常范围。
表7 CRP检测结果(mg/L)(均值±标准差,n＝4)
注：CRP参考范围为1-10mg/L。
本发明中，采用直肠灌注10～20mL的5～10％醋酸溶液，制作犬的UC模型，内视镜结果显示实验动物被成功诱发急性UC。采用临床一线用药胃康灵、爱沙拉秦、柳氮磺吡啶验证模型用于药效评价的结果显示：用药后4d，胃康灵胶囊组结肠黏膜糜烂、水肿，仍有溃疡；爱沙拉秦胶囊组结肠粘膜水肿减轻，溃疡较小而少；柳氮磺吡啶结肠溶胶囊组结肠粘膜可见许多散在分布的红色小斑，呈针头样或斑片状，形态不规则，排列无规律；用药后7d，胃康灵胶囊组结肠黏膜轻微水肿，溃疡愈合；爱沙拉秦胶囊组渗出物吸收，肠黏膜色泽变得苍白，黏膜正常光泽但未完全恢复；柳氮磺吡啶结肠溶胶囊组结肠内可见浓汁，但结肠粘膜表面光滑，未见溃疡性病灶。模型组的4只犬的大便稀带血、结肠形态、组织学观察均呈现出明显的炎症症状，同时通过造模3d与7d后的组织学观察发现，3d后溃疡灶依然明显，并有明显的炎性细胞浸润等，而7d后可见溃疡灶已减少甚至脱落，炎性细胞浸润也明显减少，大量成纤维细胞增生，说明实验动物正在自愈过程中；而同期给予UC临床用药的试验犬在给药后的3d后溃疡较模型组减少许多，炎性细胞的浸润也大幅度减少，说明结肠的炎症得到改善，结肠粘膜逐渐修复。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种溃疡性结肠炎动物模型的构建方法，包括以下步骤：
土狗灌胃清洗，禁食不禁水24h；
将土狗麻醉，用醋酸灌肠，平躺至自然苏醒，得到溃疡性结肠炎动物模型。
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述灌肠的方式为：将醋酸溶液灌入土狗结肠内，保留10s以上导出，再用生理盐水冲洗结肠。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于，所述醋酸溶液的质量浓度为5～10％，醋酸溶液的用量为每公斤体重1mL～2mL。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述灌胃用药剂为MgSO4溶液，所述MgSO4溶液的浓度为5～10％，用量为5～10mL/kg。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述土狗麻醉的方法为：用舒眠宁对土狗进行肌肉注射。
6.权利要求1～5任意一项所述方法构建得到的溃疡性结肠炎动物模型在筛选UC治疗药物中的应用。
7.一种筛选UC治疗药物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、设置待测药物组、生理盐水对照组和正常对照组，其中待测药物组和生理盐水对照组使用权利要求1～5任意一项所述方法构建的溃疡性结肠炎动物模型，正常对照组为正常饲喂的土狗；观察并记录待测药物组、生理盐水对照组和正常对照组动物的生理基础数据和结肠病理情况；
b、待测药物组灌喂待测药物，生理盐水对照组和正常对照组均灌喂生理盐水；观察并记录处理后待测药物组、生理盐水对照组和正常对照组动物的生理基础数据和结肠病理情况；
c、分析步骤a和步骤b记录的数据及结肠病理照片评分，对待测药物的治疗效果进行评价；若待测药物组较生理盐水对照组的生理基础数据更接近于正常对照组的相应测量值，或待测药物组较生理盐水对照组的结肠病理照片评分低，则说明待测药物具有治疗UC的作用。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述结肠病理照片的评分标准为：
0级：黏膜苍白，血管网清晰，呈分支状；黏膜下无红肿、充血，其表面黏膜正常；
1级：黏膜尚光滑，但小面积充血、红肿，折光增强；
2级：黏膜充血、水肿，呈颗粒状，黏膜脆性增加，接触易出血；
3级：黏膜明显充血、水肿、粗糙，少量自发性出血点或接触性出血；有较多炎性分泌物，多发性糜烂与小面积溃疡形成；
4级：黏膜大面积充血、水肿、粗糙，明显自发性出血和接触性出血；多发性点状糜烂与大面积溃疡形成；
若待测药物组结肠病理照片的评分低，则说明待测药物治疗UC的效果好。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述动物的生理基础数据包括体温、体重、大便形状、隐血检查、血常规、血液生化指标和C-反应蛋白中的一项或几项。
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