CN107937331A - 一种桔梗细胞的悬浮培养方法 - Google Patents

一种桔梗细胞的悬浮培养方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107937331A
CN107937331A CN201711491086.2A CN201711491086A CN107937331A CN 107937331 A CN107937331 A CN 107937331A CN 201711491086 A CN201711491086 A CN 201711491086A CN 107937331 A CN107937331 A CN 107937331A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
campanulaceae
culture
preculture
suspension
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN201711491086.2A
Other languages
English (en)
Inventor
刘军
谢丹
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Niu Bei Bio Tech Ltd Hangzhou
Original Assignee
Niu Bei Bio Tech Ltd Hangzhou
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Niu Bei Bio Tech Ltd Hangzhou filed Critical Niu Bei Bio Tech Ltd Hangzhou
Priority to CN201711491086.2A priority Critical patent/CN107937331A/zh
Publication of CN107937331A publication Critical patent/CN107937331A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/04—Plant cells or tissues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • C12N5/0025—Culture media for plant cell or plant tissue culture

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种桔梗细胞的悬浮培养方法，是取桔梗腋芽作为外植体，进行表面消毒；然后将消毒后的外植体置于愈伤组织诱导培养基上，进行培养获得愈伤组织；再进行细胞预培养、细胞悬浮培养和细胞继代培养，获得大量的悬浮培养细胞。本发明通过对桔梗进行细胞的悬浮培养，可实现大规模快速生产出有效成分含量高的桔梗细胞培养物，为桔梗细胞悬浮培养生产次生代谢产物奠定了良好的基础。

Description

一种桔梗细胞的悬浮培养方法
(一)技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种桔梗细胞的悬浮培养方法。
(二)背景技术
桔梗(Platycodon grandiflorus(Jacq.)A.DC.)是桔梗科桔梗属多年生草本植物。在我国南北都有栽培分布。桔梗既是重要的观赏花卉，同时更是一种重要的药用植物，桔梗的叶、花、根均可入药，尤其根具有重要医药价值,其细胞组织内含有多种皂甙，迄今已分得18种三萜皂甙。研究表明，桔梗皂甙不但具有镇静、镇痛及解热等中枢抑制作用,而且具有抗炎及镇咳祛痰、扩张血管、降压、降血糖作用、抗溃疡作用。
目前桔梗主要采用种子繁殖，种子繁殖生长周期长，扦插繁殖又容易传播病毒，最重要的是受季节变化和耕地逐渐减少的影响，导致无法满足桔梗医药的市场需求。由于人工种植桔梗存在上述问题，因此迫切需要找到一种能安全、快速而大量生产桔梗细胞培养物的途径和方法。而采用组织培养技术不仅能解决桔梗品种的繁殖变异问题，还可以通过细胞培养大量生产桔梗次生代谢产物。桔梗的悬浮细胞系的建立目前还未见报道，在工业生产中，通过桔梗细胞培养是获得桔梗细胞次生代谢药物和提取药理活性因子的有效途径之一，而且可研究桔梗生长发育及分化的机制、遗传变异规律，对桔梗的遗传育种具有特殊意义。
(三)发明内容
本发明的目的在于提供一种桔梗细胞的悬浮培养方法。
本发明采用的技术方案是：
一种桔梗细胞的悬浮培养方法，所述方法按如下步骤进行：
(1)无菌外植体的获取：选取生长健康、无病虫害的桔梗腋芽作为外植体，用自来水冲洗30～60min，然后在体积浓度为1％洗洁精的水溶液中振摇2～5min，用无菌水冲净；在超净工作台上用体积浓度70～75％乙醇水溶液浸泡30～60s，然后用质量浓度0.1％HgCl2消毒液浸泡8～12min，再用无菌水冲洗3～5遍，在灭菌的滤纸上吸干水分；
(2)桔梗愈伤组织的诱导培养：将消毒后的腋芽接入愈伤组织诱导培养基中，先在23～28℃下，暗培养10～15天，然后每天光照8～12小时、光照强度为1000～1500lx的条件下进行培养，所述的愈伤组织诱导培养基为添加6-BA(即6-苄氨基腺嘌呤)0.2～1.5mg/L、2，4-D(即2,4-二氯苯氧基乙酸)1.0～3.0mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6.0g/L的MS固体基本培养基,培养基的pH值为5.8；
(3)细胞的预培养：将步骤(2)中获得的无褐化的黄白色愈伤组织转接入预培养液体培养基中进行5～9天的预培养，所述的预培养液体培养基为添加6-BA 0.1～1.0mg/L、2，4-D 1.0～4.0mg/L、蔗糖30g/L的MS液体基本培养基,培养基的pH值为5.8；
(4)细胞的悬浮培养：选取预培养后处于悬浮培养液中部和上部的桔梗单个细胞或疏松细胞小聚集体，以20～50g/L的接种量转接到细胞悬浮培养基中，所述细胞悬浮培养基为添加6-BA 0.1～1.0mg/L、2，4-D 1.0～3.0mg/L、酸水解酪蛋白0.2～0.8g/L、蔗糖30g/L的MS液体培养基,培养基的pH值为5.8；
(5)细胞的继代培养：在细胞悬浮培养了15～25天进行第一次继代培养，以后每隔15～25天继代一次；
(6)细胞增殖生长计算：取继代培养的细胞在4000r/min的离心机上离心10min后，倒掉上清液进行称重，即为鲜重；
细胞增殖倍数＝(收获量鲜重—接种量鲜重)/接种量鲜重；
细胞的生长速率(即每升培养液中每天生长量)＝(收获鲜重—接种量鲜重)/培养天数。
上述(3)、(4)、(5)步骤中桔梗细胞的培养条件均为温度23～28℃，pH值5.8，每天光照6～12小时，光照强度为1000～1500lx，摇床转速为120r/min。
进一步，步骤(2)所述愈伤组织诱导培养基为添加6-BA 1.0mg/L、2，4-D 1.5mg/L的MS固体基本培养基。
进一步，步骤(3)所述桔梗细胞的预培养液体培养基为添加6-BA0.5mg/L、2、4-D2.0mg/L的MS液体基本培养基，预培养时间为7天。
进一步，步骤(4)所述桔梗细胞悬浮培养基为添加6-BA0.5mg/L、2，4-D 2.0mg/L、酸水解酪蛋白0.6g/L的MS液体基本培养基,pH值为5.8、蔗糖30g/L。
进一步，步骤(4)所述桔梗细胞悬浮培养基的细胞团接种量是30g/L。
本发明所述MS基本培养基包含大量元素、微量元素、铁盐、有机物、蔗糖。所述大量元素组成是在配置1升(1000毫升)培养基时，加硝酸铵NH4NO3 1.65克、硝酸钾(KNO3)1.9克、氯化钙(CaCl2·2H2O)0.44克、硫酸镁(MgSO4·7H2O)0.37克、磷酸二氢钾(KH2PO4)0.17克。所述微量元素组成是在配置1升(1000毫升)培养基时，加碘化钾(KI)0.83毫克、硼酸(H3BO3)6.2毫克、硫酸锰(MnSO4·4H2O)22.3毫克、硫酸锌(ZnSO4·7H2O)8.6毫克、钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)0.25毫克、硫酸铜(CuSO4·5H2O)0.025毫克、氯化钴(CoCl2·6H2O)0.025毫克。所述铁盐元素组成是在配置1升(1000毫升)培养基时，加乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA)37.3毫克，硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)27.8毫克。所述有机物组成是在配置1升(1000毫升)培养基时，加肌醇100毫克、甘氨酸2毫克、盐酸硫胺素(VB1)0.1毫克，盐酸吡哆醇(VB6)0.5毫克，烟酸(VB5)0.5毫克。蔗糖浓度是20～40克/升，溶剂为水，pH为5.6～6.0。其中MS固体培养基包含琼脂，MS液体培养基内不含有琼脂。
本发明所述桔梗腋芽选自浙江杭州园艺场的长势良好、无病虫害的桔梗植株。本发明所述酸水解酪蛋白购自青岛海博生物公司。
与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：
(1)本发明能够快速获得大量的桔梗悬浮培养细胞。
(2)本发明通过在桔梗细胞悬浮培养前对其进行预培养、以及在桔梗悬浮培养基中加入酸水解酪蛋白，有效提高了桔梗细胞生长速度，增加了细胞鲜重，实现了工厂化大规模生产桔梗细胞。
(3)本发明获得的桔梗愈伤组织具有较高诱导率、生长旺盛、不褐化等优点，可长期继代保持，通过桔梗愈伤组织进行细胞的悬浮培养，可实现大规模快速生产出有效成分含量高的桔梗细胞培养物，从而可有效解决当前桔梗植物资源和药材资源短缺的问题。
(四)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
实施例1
(1)无菌外植体的获取：选取生长健康、无病虫害的桔梗腋芽作为外植体，用自来水冲洗30min，然后在体积浓度为1％洗洁精的水溶液中振摇2min，用无菌水冲净；在超净工作台上用体积浓度70～75％乙醇水溶液浸泡30s，然后用质量浓度0.1％HgCl2消毒液浸泡8min，再用无菌水冲洗3遍，在灭菌的滤纸上吸干水分；
(2)桔梗愈伤组织的诱导培养：将消毒后的腋芽接入愈伤组织诱导培养基中，先在23℃下，暗培养10天，然后每天光照8小时、光照强度为1000lx的条件下进行培养，所述的愈伤组织诱导培养基为添加6-BA(即6-苄氨基腺嘌呤)0.2mg/L、2，4-D(即2,4-二氯苯氧基乙酸)1.0mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6.0g/L的MS固体基本培养基,培养基的pH值为5.8；
(3)细胞的预培养：将步骤(2)中获得的无褐化的黄白色愈伤组织转接入预培养液体培养基中进行5天的预培养，所述的预培养液体培养基为添加6-BA0.1mg/L、2，4-D1.0mg/L、蔗糖30g/L的MS液体基本培养基,培养基的pH值为5.8；
(4)细胞的悬浮培养：选取预培养后处于悬浮培养液中部和上部的桔梗单个细胞或疏松细胞小聚集体，以20g/L的接种量转接到细胞悬浮培养基中，所述细胞悬浮培养基为添加6-BA 0.1mg/L、2，4-D 1.0mg/L、酸水解酪蛋白0.2g/L、蔗糖30g/L的MS液体培养基,培养基的pH值为5.8；
(5)细胞的继代培养：在细胞悬浮培养了15天进行第一次继代培养，以后每隔15天继代一次；
(6)细胞增殖生长计算：取继代培养的细胞在4000r/min的离心机上离心10min后，倒掉上清液进行称重，计算出桔梗细胞的生物量增殖倍数为1.65倍，细胞的生长速率为2.13g/g/(d·L)；
上述(3)、(4)、(5)步骤中桔梗细胞的培养条件均为温度23℃，pH值5.8，每天光照6小时，光照强度为1000lx，摇床转速为120r/min。
实施例2酸水解酪蛋白对桔梗细胞悬浮培养的影响
选取预培养后处于悬浮培养液中部和上部的桔梗单个细胞或疏松细胞小聚集体转接到添加不同激素的细胞悬浮培养基中，其它操作同实施例1，桔梗细胞悬浮培养结果见表1所示。结果表明，不同激素组合的培养基可以不同程度地诱导桔梗细胞增殖，但是当培养基中添加酸水解酪蛋白之后，细胞褐化率减少，细胞生长倍数增加，细胞生长速率也增加，其中添加0.6g/L酸水解酪蛋白，细胞生长速率最快，达到3.28g/(d·L)，细胞增殖倍数为2.85倍。
表1酸水解酪蛋白对桔梗细胞悬浮培养的影响
实施例3细胞的预培养对桔梗细胞悬浮培养的影响
将实施例1步骤(2)中获得的桔梗无褐化的黄白色愈伤组织转接入预培养液体培养基中进行不同天数的预培养，其它步骤同实施例1，桔梗细胞增殖结果见表2所示。结果表明，预培养7天后，继代培养3代的桔梗细胞生物量增殖最大，细胞增殖倍数为3.04倍,细胞的生长速率为3.35g/(d·L)。
表2预培养对桔梗细胞悬浮培养的影响
实施例4接种量对桔梗细胞悬浮培养的影响
选取预培养后处于悬浮培养液中部和上部的桔梗单个细胞或疏松细胞小聚集体，以不同的接种量转接到细胞悬浮培养基中，其它步骤同实施例1，桔梗细胞悬浮培养结果见表3所示。结果表明，接种量为30g/L时，继代培养3代的桔梗细胞生长数率最大，细胞增殖倍数为3.02倍,细胞的生长速率为3.16g/(d·L)。
表3接种量对桔梗细胞悬浮培养的影响
接种量(g/L) 细胞增殖倍数(倍) 细胞生长速率(g/((d·L)
20 2.68 2.75
30 3.02 3.16
50 2.89 2.45
实施例5
(1)无菌外植体的获取：选取生长健康、无病虫害的桔梗腋芽作为外植体，用自来水冲洗50min，然后在体积浓度为1％洗洁精的水溶液中振摇3min，用无菌水冲净；在超净工作台上用体积浓度70～75％乙醇水溶液浸泡50s，然后用质量浓度0.1％HgCl2消毒液浸泡10min，再用无菌水冲洗4遍，在灭菌的滤纸上吸干水分；
(2)桔梗愈伤组织的诱导培养：将消毒后的腋芽接入愈伤组织诱导培养基中，先在25℃下，暗培养12天，然后每天光照10小时、光照强度为1200lx的条件下进行培养，所述的愈伤组织诱导培养基为添加6-BA(即6-苄氨基腺嘌呤)1.0mg/L、2，4-D(即2,4-二氯苯氧基乙酸)1.5mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6.0g/L的MS固体基本培养基,培养基的pH值为5.8；
(3)细胞的预培养：将步骤(2)中获得的无褐化的黄白色愈伤组织转接入预培养液体培养基中进行7天的预培养，所述的预培养液体培养基为添加6-BA0.5mg/L、2，4-D2.0mg/L、蔗糖30g/L的MS液体基本培养基,培养基的pH值为5.8；
(4)细胞的悬浮培养：选取预培养后处于悬浮培养液中部和上部的桔梗单个细胞或疏松细胞小聚集体，以30g/L的接种量转接到细胞悬浮培养基中，所述细胞悬浮培养基为添加6-BA 0.5mg/L、2，4-D 2.0mg/L、酸水解酪蛋白0.6g/L、蔗糖30g/L的MS液体培养基,培养基的pH值为5.8；
(5)细胞的继代培养：在细胞悬浮培养了20天进行第一次继代培养，以后每隔20天继代一次；
(6)细胞增殖生长计算：取继代培养的细胞在4000r/min的离心机上离心10min后，倒掉上清液进行称重，计算出桔梗细胞的生物量增殖倍数为2.95倍，细胞的生长速率为3.28g/g/(d·L)；
上述(3)、(4)、(5)步骤中桔梗细胞的培养条件均为温度25℃，pH值5.8，每天光照10小时，光照强度为1200lx，摇床转速为120r/min。
实施例6
(1)无菌外植体的获取：选取生长健康、无病虫害的桔梗腋芽作为外植体，用自来水冲洗60min，然后在体积浓度为1％洗洁精的水溶液中振摇5min，用无菌水冲净；在超净工作台上用体积浓度70～75％乙醇水溶液浸泡60s，然后用质量浓度0.1％HgCl2消毒液浸泡12min，再用无菌水冲洗5遍，在灭菌的滤纸上吸干水分；
(2)桔梗愈伤组织的诱导培养：将消毒后的腋芽接入愈伤组织诱导培养基中，先在28℃下，暗培养15天，然后每天光照12小时、光照强度为1500lx的条件下进行培养，所述的愈伤组织诱导培养基为添加6-BA(即6-苄氨基腺嘌呤)1.5mg/L、2，4-D(即2,4-二氯苯氧基乙酸)3.0mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6.0g/L的MS固体基本培养基,培养基的pH值为5.8；
(3)细胞的预培养：将步骤(2)中获得的无褐化的黄白色愈伤组织转接入预培养液体培养基中进行9天的预培养，所述的预培养液体培养基为添加6-BA1.0mg/L、2，4-D4.0mg/L、蔗糖30g/L的MS液体基本培养基,培养基的pH值为5.8；
(4)细胞的悬浮培养：选取预培养后处于悬浮培养液中部和上部的桔梗单个细胞或疏松细胞小聚集体，以50g/L的接种量转接到细胞悬浮培养基中，所述细胞悬浮培养基为添加6-BA 1.0mg/L、2，4-D 3.0mg/L、酸水解酪蛋白0.8g/L、蔗糖30g/L的MS液体培养基,培养基的pH值为5.8；
(5)细胞的继代培养：在细胞悬浮培养了25天进行第一次继代培养，以后每隔25天继代一次；
(6)细胞增殖生长计算：取继代培养的细胞在4000r/min的离心机上离心10min后，倒掉上清液进行称重，计算出桔梗细胞的生物量增殖倍数为2.25倍，细胞的生长速率为2.69g/g/(d·L)；
上述(3)、(4)、(5)步骤中桔梗细胞的培养条件均为温度28℃，pH值5.8，每天光照12小时，光照强度为1500lx，摇床转速为120r/min。

Claims (4)

1.一种桔梗细胞的悬浮培养方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)无菌外植体的获取：选取生长健康、无病虫害的桔梗腋芽作为外植体，用自来水冲洗30～60min，然后在体积浓度为1％洗洁精的水溶液中振摇2～5min，用无菌水冲净，在超净工作台上用体积浓度70～75％乙醇水溶液浸泡30～60s，然后用质量浓度0.1％HgCl2消毒液浸泡8～12min，再用无菌水冲洗3～5遍，在灭菌的滤纸上吸干水分；
(2)桔梗愈伤组织的诱导培养：将消毒后的腋芽接入愈伤组织诱导培养基中，先在23～28℃下，暗培养10～15天，然后每天光照8～12小时、光照强度为1000～1500lx的条件下进行培养，所述的愈伤组织诱导培养基为添加6-BA(即6-苄氨基腺嘌呤)0.2～1.5mg/L、2，4-D(即2,4-二氯苯氧基乙酸)1.0～3.0mg/L、蔗糖30g/L、琼脂6.0g/L的MS固体基本培养基,培养基的pH值为5.8；
(3)细胞的预培养：将步骤(2)中获得的无褐化的黄白色愈伤组织转接入预培养液体培养基中进行5～9天的预培养，所述的预培养液体培养基为添加6-BA 0.1～1.0mg/L、2，4-D1.0～4.0mg/L、蔗糖30g/L的MS液体基本培养基,培养基的pH值为5.8；
(4)细胞的悬浮培养：选取预培养后处于悬浮培养液中部和上部的桔梗单个细胞或疏松细胞小聚集体，以20～50g/L的接种量转接到细胞悬浮培养基中，所述细胞悬浮培养基为添加6-BA 0.1～1.0mg/L、2，4-D 1.0～3.0mg/L、酸水解酪蛋白0.2～0.8g/L、蔗糖30g/L的MS液体培养基,培养基的pH值为5.8；
(5)细胞的继代培养：在细胞悬浮培养了15～25天进行第一次继代培养，以后每隔15～25天继代一次；
上述(3)、(4)、(5)步骤中桔梗细胞的培养条件均为温度23～28℃，pH值5.8，每天光照6～12小时，光照强度为1000～1500lx，摇床转速为120r/min。
2.根据权利要求1所述的桔梗细胞的悬浮培养方法，其特征在于：步骤(2)所述愈伤组织诱导培养基为添加6-BA 1.0mg/L、2，4-D 1.5mg/L的MS固体基本培养基。
3.根据权利要求1所述的桔梗细胞的悬浮培养方法，其特征在于：步骤(3)所述桔梗细胞的预培养液体培养基为添加6-BA0.5mg/L、2、4-D 2.0mg/L的MS液体基本培养基，预培养时间为7天。
4.根据权利要求1所述的桔梗细胞的悬浮培养方法，其特征在于：步骤(4)所述桔梗细胞悬浮培养基为添加6-BA0.5mg/L、2，4-D 2.0mg/L、酸水解酪蛋白0.6g/L的MS液体基本培养基,蔗糖30g/L,pH值为5.8,细胞团接种量是30g/L。
CN201711491086.2A 2017-12-30 2017-12-30 一种桔梗细胞的悬浮培养方法 Withdrawn CN107937331A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711491086.2A CN107937331A (zh) 2017-12-30 2017-12-30 一种桔梗细胞的悬浮培养方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711491086.2A CN107937331A (zh) 2017-12-30 2017-12-30 一种桔梗细胞的悬浮培养方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107937331A true CN107937331A (zh) 2018-04-20

Family

ID=61938155

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711491086.2A Withdrawn CN107937331A (zh) 2017-12-30 2017-12-30 一种桔梗细胞的悬浮培养方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107937331A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109182245A (zh) * 2018-08-09 2019-01-11 中国农业科学院烟草研究所 烟草悬浮细胞的培养方法
CN109652360A (zh) * 2019-01-11 2019-04-19 成都大学 一种获得高生物产量的羌活细胞培养方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1625940A (zh) * 2003-12-12 2005-06-15 中国科学院植物研究所 水母雪莲毛状根培养生产雪莲多糖类有效成分的方法
CN102191214A (zh) * 2010-03-10 2011-09-21 中国科学院植物研究所 一种产白藜芦醇细胞的制备方法及其专用悬浮培养基
KR20140142447A (ko) * 2013-06-04 2014-12-12 우송정보대학 산학협력단 기내배양을 이용한 4배체 도라지의 배양 및 부정근 유도 방법
CN105875406A (zh) * 2016-04-01 2016-08-24 广东工业大学 一种梅片树愈伤组织的诱导与增殖方法
CN108004196A (zh) * 2017-12-30 2018-05-08 杭州纽贝生物科技有限公司 一种合欢细胞的悬浮培养方法
CN108018255A (zh) * 2017-12-30 2018-05-11 杭州纽贝生物科技有限公司 一种石榴细胞的悬浮培养方法
CN108034630A (zh) * 2017-12-30 2018-05-15 杭州纽贝生物科技有限公司 一种木芙蓉细胞的悬浮培养方法

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1625940A (zh) * 2003-12-12 2005-06-15 中国科学院植物研究所 水母雪莲毛状根培养生产雪莲多糖类有效成分的方法
CN102191214A (zh) * 2010-03-10 2011-09-21 中国科学院植物研究所 一种产白藜芦醇细胞的制备方法及其专用悬浮培养基
KR20140142447A (ko) * 2013-06-04 2014-12-12 우송정보대학 산학협력단 기내배양을 이용한 4배체 도라지의 배양 및 부정근 유도 방법
CN105875406A (zh) * 2016-04-01 2016-08-24 广东工业大学 一种梅片树愈伤组织的诱导与增殖方法
CN108004196A (zh) * 2017-12-30 2018-05-08 杭州纽贝生物科技有限公司 一种合欢细胞的悬浮培养方法
CN108018255A (zh) * 2017-12-30 2018-05-11 杭州纽贝生物科技有限公司 一种石榴细胞的悬浮培养方法
CN108034630A (zh) * 2017-12-30 2018-05-15 杭州纽贝生物科技有限公司 一种木芙蓉细胞的悬浮培养方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
叶敏等: "桔梗细胞悬浮培养体系对斑蝥素的生物转化研究", 《中草药》 *
张红梅等: "草麻黄细胞悬浮培养体系的建立", 《生物技术》 *
戴均贵等: "桔梗悬浮培养对细胞天麻素的生物转化", 《药学学报》 *
苏式兵等: "《生命科学前沿技术与中医药研究》", 30 September 2013 *
赵俊云: "棉花植保素与桔梗皂甙的诱导生成研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109182245A (zh) * 2018-08-09 2019-01-11 中国农业科学院烟草研究所 烟草悬浮细胞的培养方法
CN109652360A (zh) * 2019-01-11 2019-04-19 成都大学 一种获得高生物产量的羌活细胞培养方法
CN109652360B (zh) * 2019-01-11 2022-04-15 成都大学 一种获得高生物产量的羌活细胞培养方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103583369B (zh) 一种用于大麦小孢子培养愈伤组织诱导的培养基
CN103004599B (zh) 一种通过花药培养获得百脉根再生植株的方法
CN104082138B (zh) 一种通城虎的组织培养快繁方法
CN102301952B (zh) 一种甘菊繁殖方法
CN101720670B (zh) 旱半夏组织培养快速繁殖方法
CN102119655A (zh) 铁皮石斛自然光快繁育苗方法
WO2021179527A1 (zh) 一种粉葛单芽茎段增殖及一步成苗培养方法
CN109220810A (zh) 一种无菌条件下牡丹胚高效生根的方法
CN101622955B (zh) 一种适宜蕙兰种子无菌萌发培养基组合物及其方法
CN108018255A (zh) 一种石榴细胞的悬浮培养方法
CN1328951C (zh) 石斛原球茎无激素培养方法
CN107937331A (zh) 一种桔梗细胞的悬浮培养方法
CN102994444B (zh) 一种金钱松细胞的悬浮培养方法
CN103548695B (zh) 一种岩黄连组织培养快速繁殖方法
CN102657085A (zh) 一种宽叶羌活组织培养离体快速繁殖方法
CN105494371A (zh) 一种火龙果生根液
CN102630569A (zh) 一种小秦艽组织培养离体快速繁殖方法
CN105766636B (zh) 一种牡丹组织培养再生的方法
CN105601386B (zh) 一种甘蓝型油菜小孢子苗水培培养液及越夏培养的方法
CN103229721A (zh) 白凤菜组织培养繁殖方法
CN103039360A (zh) 韭菜组织培养快繁的方法
CN108004196A (zh) 一种合欢细胞的悬浮培养方法
CN108034630A (zh) 一种木芙蓉细胞的悬浮培养方法
CN106106185B (zh) 一种青钱柳试管苗生根培养基及生根培养方法
CN103155858B (zh) 一种百脉根的快速繁殖方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20180420

WW01 Invention patent application withdrawn after publication