CN107907640A - 发酵冬虫夏菌粉片的药效评价方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中成药的体外药效评价方法，更具体的说是公开了评价发酵冬虫夏菌粉片和胶囊一致性的体外溶出曲线。本发明公开的体外溶出曲线通过将最终时刻的溶出量为100％，计算各个时刻点的溶出度而获得。本发明解决了发酵冬夏草菌粉片无法与腺苷对照品直接比较进行溶出度计算来进行一致性评价的问题。利用本发明的体外溶出曲线，可以方便快捷的判断发酵冬夏草菌粉片和百令胶囊是否具有体外溶出一致性，从而推断药效是否一致，适合于产业应用。

Description

发酵冬虫夏菌粉片的药效评价方法

技术领域

本发明涉及中成药的体外药效评价方法，更具体的说涉及发酵冬虫夏菌粉片的体外溶出检测及评价方法。

背景技术

发酵冬虫夏草菌粉，即蝙蝠蛾被毛孢菌粉，是从青海新鲜冬虫夏草中分离得到的麦角菌科真菌冬虫夏草的无性世代——蝙蝠蛾被毛孢菌种，经液体发酵培养所得菌丝体的干燥粉末。杭州中美华东制药有限公司以人工发酵方法获得冬虫夏草菌丝体及其制剂“百令胶囊”(内含发酵冬虫夏草菌丝体粉末)，并已收载在中华人民共和国药典中。经临床的多年使用证明，“百令胶囊”具有补肺肾，益精气的功效。用于肺肾两虚引起的咳嗽，气喘，咯血，腰背酸痛；在慢性支气管炎、慢性肾功能不全的辅助治疗上均取得非常好的效果。其各方面的疗效已得到广大患者和临床医生的认可。

但“百令胶囊”的服用量较大，患者在服用“百令胶囊”的同时也将服用较大量的胶囊壳；同时“百令胶囊”体积较大，会给吞咽有困难的患者带来不便。为克服胶囊剂存在的大量服用胶囊壳及不适合于老人儿童吞咽等技术缺陷，应运而生了片剂，从而改进患者的依从性。

胶囊的疗效已经认可，为了检测片剂是否与胶囊具有相同的药效，考虑到本品片剂所用辅料均为普通口服固体制剂中常用的辅料，做为赋形剂，且皆在常规用量的范围内，片剂的辅料从本质上基本不影响虫草粉在体内的吸收，片剂和胶囊在胃肠道内崩解起效。所以胶囊和片剂的体内的一致性可以通过体外的一致性来评价。药物经口服，通过胃再经肠道吸收，在体外通过模拟人体的各环境的pH进行溶出曲线的测定来模拟样品体内的溶解吸收情况，胶囊和片体外的溶出比对情况来推测两者体内的溶解吸收情况。

但发酵冬虫夏菌粉制剂的活性成份复杂，不能也无法采用化学药物的溶出试验进行对比，而开展临床试验再验证药效又将耗费大量的人力物力及时间。因此非常急迫的需要有一种既方便又能客观的反映体外药效一致性的方法。

发明内容

本发明为克服现有技术中存在的无法评价中成药体外药效的技术缺陷，提供了一种评价发酵冬虫夏菌粉片和胶囊药效一致性的体外溶出曲线，其中所述的曲线上的点由各个时刻的溶出度组成。更具体的说，各个时刻的溶出度是各个时刻与最终时刻的溶出量的比值。

其中所述的最终时刻为50分钟。在体外溶出试验中，到达50分钟时，检测品已完全溶出。

其中所述的溶出采用腺苷作为检测指标。

具体的说，检测发酵冬夏草菌粉片以腺苷为检测指标，腺苷是中国药典中对百令胶囊的一个重要检测指标。虽然中国药典也规定了总氨基酸为检测指标，但总氨基酸的测定需将样品20mg进行高温水解处理，溶出液中菌粉量仅为0.22～0.37mg/ml，含量太少，不易检测，故此处以腺苷作为片剂溶出项下的主要指标。

本发明还提供了一种获得评价发酵冬虫夏菌粉片和胶囊一致性的体外溶出曲线的方法，包括以下步骤：

1)、测得各个时刻的腺苷的溶出量，

2)、以最终时刻的溶出量为100％，计算各个时刻点的溶出度，

3)、以各个时刻的溶出度得到溶出曲线。

其中所述的最终时刻为50分钟。

本发明通过选择腺苷作为检测指标，对发酵冬夏草菌粉片和百令胶囊在各溶出介质中的溶出情况进行比较。在常规检测的水、pH1.2、4.5、6.8这4种不同介质中，在不同时刻，腺苷的溶出均不同。为了考察发酵冬夏草菌粉片与已上市品种百令胶囊的溶出一致性，考虑到胶囊和片本身的腺苷含量不一致，本发明分别将不同介质中，各个时刻的腺苷溶出量与最终时刻的腺苷溶出量进行对比，将所获得的比值视为各个时刻的溶出比值，再将这些比值绘制为体外溶出曲线。

本发明解决了发酵冬夏草菌粉片中菌粉中本身腺苷含量不一致(中药含量限度范围宽)无法与腺苷对照品直接比较进行溶出度计算来进行一致性评价的问题。利用本发明的体外溶出曲线，可以方便快捷的判断发酵冬夏草菌粉片和百令胶囊是否具有体外溶出一致性，从而推断药效是否一致，适合于产业中应用。

附图说明

图1为水介质中的溶出度曲线

图2为pH4.5介质中的溶出度曲线

图3为pH1.2介质中的溶出度曲线

图4为pH6.8介质中的溶出度曲线

具体实施方式

以下实施例中所述的方法，若无特殊说明均为业内常规方法或药典方法。

实施例1：含量测定

发酵冬虫夏草菌粉片：分别按发明专利201711082791.7《发酵冬虫夏草菌粉片》的实施例1、2、3制备得到样品1、2、3。

百令胶囊：杭州中美华东制药有限公司提供，批号：161203，规格0.2g/粒。

供试品：以上各药品分别取10片(粒)，研成细粉。取处理好的样品，片剂粉末0.7g，胶囊粉末0.5g，精密称定置50ml锥形瓶中，加20ml乙醚，摇匀，浸泡30min，过滤，滤渣挥干乙醚后连同滤纸一起置锥形瓶中，加0.5％磷酸溶液50ml，密塞后称重，超声处理(200W、32kHz)30min，取出放冷后补足重量，取上清液即可液相检测。

对照品：取腺苷对照品，用0.5％磷酸溶液配制成每ml含12μg的对照品溶液。

测得各个样品的腺苷含量如下：

表1各样品的腺苷含量

样品名称	平均含量(mg)/片或粒
		样品1	0.78
样品2	0.78
		样品3	0.79
百令胶囊	0.33

实施例2：水介质的溶出曲线的获得

选用样品1与百令胶囊进行水介质的腺苷进行溶出测定(方法：中国药典桨法，75rpm，900ml，分别在5、10、15、20、30、45、50中取样)，将测得各时间点下的腺苷溶出量与表1的腺苷含量比值作为溶出度，结果见表2。

表2水介质中以腺苷含量计算溶出度

从表2可以看出，以表1中样品的腺苷含量为对照，得出的溶出度可比性较差。

分别以样品1、百令胶囊溶出曲线最后取样点(50分钟)腺苷溶出量结果计为100％，计算各取样点相对应的溶出度，即样品1以50分钟取样点时的0.72视为100％，分别计算各个取样点的溶出度；百令胶囊以50分钟取样点时的0.40的视为100％，分别计算各个取样点的溶出度。经过计算后得出的溶出度如下见表3，从而获得溶出曲线见图1。

表3水介质中以最后取样点(50分钟)腺苷溶出量结果为100％的溶出度

以样品2、3重复以上的试验，可以得到相近似的溶出曲线。

实施例3：pH4.5醋酸钠-醋酸缓冲溶液的溶出曲线的获得

选用样品1与百令胶囊进行pH4.5醋酸钠-醋酸缓冲溶液的腺苷进行溶出测定(方法：中国药典桨法，75rpm，900ml，分别在5、10、15、20、30、45、50中取样)，将测得各时间点下的腺苷溶出量与表1的腺苷含量比值作为溶出度，结果见表4。

表4pH4.5介质中以腺苷含量计算溶出度

从表4可以看出，以表1中样品的腺苷含量为对照，得出的溶出度可比性较差。

分别以样品1、百令胶囊溶出曲线最后取样点(50分钟)腺苷溶出量结果计为100％，计算各取样点相对应的溶出度，即样品1以50分钟取样点时的0.61视为100％，分别计算各个取样点的相对溶出度；百令胶囊以50分钟取样点时的0.35的视为100％，分别计算各个取样点的溶出度。经过计算后得出的溶出度如下见表5，从而获得溶出曲线见图2。

表5pH4.5介质中以最后取样点(50分钟)腺苷溶出量结果为100％的溶出度

以样品2、3重复以上的试验，可以得到相近似的溶出曲线。

实施例4：pH1.2缓冲溶液的溶出曲线的获得

选用样品1与百令胶囊进行pH1.2醋酸钠-醋酸缓冲溶液的腺苷进行溶出测定(方法：中国药典桨法，75rpm，900ml，分别在5、10、15、20、30、45、50中取样)，将测得各时间点下的腺苷溶出量与表1的腺苷含量比值作为溶出度，结果见表6。

表6pH1.2介质中以腺苷含量计算溶出度

从表6可以看出，以表1中样品的腺苷含量为对照，得出的溶出度可比性较差。

分别以样品1、百令胶囊溶出曲线最后取样点(50分钟)腺苷溶出量结果计为100％，计算各取样点相对应的溶出度，即样品1以50分钟取样点时的0.50视为100％，分别计算各个取样点的出度；百令胶囊以50分钟取样点时的0.25的视为100％，分别计算各个取样点的溶出度。经过计算后得出的溶出量如下见表7，从而获得溶出曲线见图3。

表7pH1.2介质中以最后取样点(50分钟)腺苷溶出量结果为100％的溶出度

以样品2、3重复以上的试验，可以得到相近似的溶出曲线。

实施例4：pH6.8缓冲溶液的溶出曲线

选用样品1与百令胶囊161203进行pH4.5醋酸钠-醋酸缓冲溶液的腺苷进行溶出测定(方法：中国药典桨法，75rpm，900ml，分别在5、10、15、20、30、45、50中取样)，将测得各时间点下的腺苷溶出量与表1的腺苷含量比值作为溶出度，结果见表8。

表8pH6.8介质中以腺苷含量计算溶出度

从表8可以看出，以表1中样品的腺苷含量为对照，得出的溶出度可比性较差。

分别以样品1、百令胶囊溶出曲线最后取样点(50分钟)腺苷溶出量结果计为100％，计算各取样点的溶出度，即样品1以50分钟取样点时的0.76视为100％，分别计算各个取样点的溶出度；百令胶囊以50分钟取样点时的0.29的视为100％，分别计算各个取样点的溶出度。经过计算后得出的溶出度如表9，从而获得溶出曲线见图4。

表9pH6.8介质中以最后取样点(50分钟)腺苷溶出量结果为100％的溶出度

以样品2、3重复以上的试验，可以得到相近似的溶出曲线。

以上比对实验分别以各溶出介质中最后取样点(50分钟)腺苷溶出结果为100％，得出溶出曲线，在四种不同的溶出介质中，百令片、百令胶囊15分钟内崩解完全或溶散，并且溶出量均大于85％。二者溶出行为一致。

本发明的体外溶出曲线，可以用以判断发酵冬夏草菌粉片和百令胶囊是否具有体外溶出一致性，从而推断药效是否一致。

Claims (6)

1.一种评价发酵冬虫夏菌粉片和胶囊药效一致性的体外溶出曲线，其特征是曲线上的点由各个时刻的溶出度组成。

2.根据权利要求1所述的溶出曲线，其中所述的各个时刻的溶出度是各个时刻与最终时刻的溶出量的比值。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述的溶出采用腺苷作为检测指标。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述的最终时刻为50分钟。

5.获得评价发酵冬虫夏菌粉片和胶囊药效一致性的体外溶出曲线的方法，包括以下步骤：

1)、测得各个时刻的腺苷的溶出量，

2)、以最终时刻的溶出量为100％，计算各个时刻点的溶出度，

3)、以各个时刻的溶出度得到溶出曲线。

6.根据权利要求5所述的体外溶出曲线，其特征是所述的最终时刻为50分钟。