CN103720722B - 水溶性粒毛盘菌黑色素在制备抑制肝癌药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种水溶性粒毛盘菌黑色素在制备抑制肝癌药物中的用途,特征是将菌种保藏编号为CCTCC No:M2011054的粒毛盘菌所产胞内黑色素,经组氨酸分子修饰后,得到水溶性粒毛盘菌黑色素;药效学实验证明该水溶性粒毛盘菌黑色素不仅具有显著的抑制肝癌功能,且无毒副作用,其制备方法简单经济,故可将菌种保藏编号为CCTCC No:M2011054的粒毛盘菌胞内黑色素及其水溶性黑色素,按药剂学的常规制备方法,将有效量的水溶性粒毛盘菌黑色素与适量的药用辅料混合加工制备成口服片剂或胶囊剂型的抑制肝癌药物。
Description
技术领域
本发明属于粒毛盘菌黑色素在医药领域中的应用技术领域,具体涉及菌种保藏编号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌的水溶性黑色素作为制备抑制肝癌药物的用途。
背景技术
恶性肿瘤是临床上常见的疾病之一,亦是导致人类死亡的主要病因之一。目前,恶性肿瘤的治疗主要采用放、化疗等方法,通常使用的化疗药物多为化学合成物质而非天然产物,因此在杀死肿瘤细胞的同时,对正常细胞也有一定程度的杀伤作用;且单纯化疗会使患者食欲不振,体重降低,导致机体衰弱,并引起一定程度的免疫抑制,毒副作用较大。因此,挖掘与开发天然、无毒副作用的抗肿瘤药物对维护人类健康具有重要的意义。
黑色素是通过多羟基酚氧化而成的构造不规则的类多酚聚合体,来源于动物、植物及微生物,一般只溶于碱液,不溶(或微溶)于水。据英国《细胞微生物学》(CellularMirobiology,2003,5,167-223)介绍,黑色素常与蛋白质牢固结合,且不溶于水。
粒毛盘菌属是一类腐生性真菌,近几年来本发明人课题组研究发现粒毛盘菌具有重要的经济价值。如中国《食品科学》(2009,30:185-189)及荷兰《国际生物大分子杂志》(International Journal of Biological Macromolecules,2014,63:170-176)介绍了粒毛盘菌一些菌株深层发酵后可产生大量黑色素,具有较强的抗氧化、抗辐射等活性。中国专利号ZL201110072469.2公开了一株保藏编号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌YM-292(本发明人课题组自定的编号代码)液态发酵制备胞内黑色素的方法。所制备的胞内黑色素具有较强的光保护作用,且经过毒理性试验证实其安全无毒,同时该粒毛盘菌黑色素在pH≥7时稳定,pH≤6时沉淀,室温下其在水中溶解度仅为0.11g/100g。由于该粒毛盘菌黑色素在水中的难溶性使其在医疗、食品等领域的应用受到限制。若能将碱溶性黑色素改性成水溶性黑色素,以便于人体吸收,可充分发挥其保健功能,具有重大意义。目前,国内外对黑色素进行改性的研究很少。中国专利号ZL201210218401.5公开了一种将粒毛盘菌胞外黑色素改性为水溶性黑色素的方法,即将黑色素与精氨酸或组氨酸或赖氨酸,和水,按质量比为1:0.5~1.5:4.5~50混合,震荡至黑色素固体溶解后,将溶液干燥得到水溶性粒毛盘菌黑色素。目前国内外未见有公开文献提及以粒毛盘菌黑色素作为制备抗肿瘤药物的应用方面的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种菌种保藏编号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌水溶性黑色素在制备抑制肝癌药物中的用途,确立菌种保藏编号为CCTCC No:M2011054的粒毛盘菌水溶性黑色素抑制肝癌的药理作用。
本发明水溶性粒毛盘菌黑色素在制备抑制肝癌药物中的用途,将菌种保藏编号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌发酵后提取纯化制备得到的胞内黑色素,按如下条件采用组氨酸(His)对该胞内黑色素(LIM)进行修饰:将胞内黑色素、组氨酸、水,按摩尔比为1:2~5:50~100混合,震荡至黑色素固体溶解,离心后将该溶液于截留分子量为200Da的透析袋透析24~48h,冷冻干燥,改性后得到水溶性粒毛盘菌黑色素(HLIM);其特征在于:通过其对小鼠抑制肝癌的作用药理实验,确立水溶性粒毛盘菌黑色素(HLIM)的抑制肝癌作用;该水溶性粒毛盘菌黑色素(HLIM)在制备抑制肝癌药物中的用途:按药剂学的常规制备方法,将有效量的水溶性粒毛盘菌黑色素(HLIM)与药用辅料混合加工制备成口服片剂或胶囊。
本发明中参考专利号ZL201210218401.5中公开的改性方法,并可以略作改进,即:将原公开专利改性方法中的黑色素、组氨酸和水的混合方式由按质量比改为按摩尔比,具体修改方法如下:将菌种保藏编号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌的胞内黑色素与组氨酸,和水,按摩尔比为1:2~5:50~100混合,震荡至黑色素固体溶解后,将溶液干燥亦获得水溶性粒毛盘菌黑色素。采用本发明上述方法得到的改性粒毛盘菌胞内黑色素,室温下在水中的溶解度由原来改性前的0.11g/100g提高到了改性后的4.77g/100g,优于采取原来专利号ZL201210218401.5中已公开的现有改性方法中的条件进行改性后得到的改性粒毛盘菌胞内黑色素的溶解度(4.69g/100g)。采用本发明方法可以克服原保藏号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌(Lachnum singerianum)胞内黑色素由于难溶于水而不适合用于制成口服制剂或食品添加剂用于医疗、食品等领域的问题,对于扩展黑色素的应用领域和适用范围具有积极意义。经药效学实验表明,该水溶性粒毛盘菌黑色素具有显著的抑制肝癌功能,且无毒副作用,克服了现有化疗药物在杀死肿瘤细胞的同时,对正常细胞也有一定程度杀伤作用,且单纯化疗会使患者食欲不振,体重降低,导致机体衰弱,并引起一定程度的免疫抑制,毒副作用较大等缺点。本发明方法简单经济,可将水溶性粒毛盘菌黑色素应用于制备片剂或胶囊剂型的抑制肝癌药物。
附图说明
图1为改性前的原粒毛盘菌(Lachnum)CCTCC No:M 2011054胞内黑色素的红外光谱图;
图2为采用本发明中所述的方法对粒毛盘菌(Lachnum)CCTCC No:M 2011054胞内黑色素采用组氨酸进行改性修饰后的水溶性黑色素的红外光谱图。
具体实施方式
实施例1:
一、粒毛盘菌胞内黑色素(LIM)的制备:
将菌种保藏编号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌接种于5L发酵罐,培养基配方为按质量百分比由马铃薯汁20%,葡萄糖2%,蛋白胨1%,酪氨酸0.03%,K2HPO40.05%,MgSO4·7H2O 0.05%组成;装料系数体积比为0.7,接种量为8%(体积比),培养温度为27℃,通气量为1.0L/min,搅拌转速为180r/min,发酵时间为8天;将发酵液抽滤,收集菌丝体,60℃烘干,按菌丝体的质量(g)与浓度为0.4mol/L的氢氧化钠(mL)比为1:200(g/mL)混匀,80℃水浴浸提2h,抽滤得浸提液;用1mol/LHCl调节上述浸提液pH值为2,静置12h,得到黑色素悬浮液;然后将上述黑色素悬浮液离心,弃上清,所得到的沉淀经去离子水洗涤至pH值为7后真空冷冻干燥,即得黑色素粗品;将该黑色素粗品经7mol/L HCl于100℃酸解2h,以除去与黑色素结合的蛋白质及碳水化合物。然后将酸解后得到的沉淀经双蒸水洗涤至上清液pH值为7时重新溶于1mol/LNH3·H2O溶液,旋转蒸发仪蒸去NH3至溶液pH为7.5后,依次经乙酸乙酯、氯仿、无水乙醇萃取,以除去脂类物质,萃取后除去有机相,水相调pH值为2,5000r/min离心10min,沉淀经去离子水反复洗涤至上清液Cl–定性检测为阴性后,真空冷冻干燥,即得菌种保藏编号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌胞内黑色素(LIM)。
二、水溶性粒毛盘菌黑色素(HLIM)的制备:
按黑色素与组氨酸摩尔比分别为1:0.5,1:1,1:1.5,1:2,1:2.5,1:3,1:3.5,1:4,1:4.5,1:5,分别取一定量的粒毛盘菌胞内黑色素(1g)和组氨酸,溶于100mL蒸馏水中,室温下振荡溶解,离心、稀释后测定溶液的吸光度值,以溶液的最大吸光度值确定组氨酸的添加量。结果表明黑色素与组氨酸摩尔比在1:0.5~1:5时,溶液的吸光度值随组氨酸量的增大而增大,其中当黑色素与组氨酸摩尔比为1:2时,溶液的吸光度值达到最大(0.394±0.005),黑色素与组氨酸摩尔比小于0.5时,溶液的吸光度值基本保持在0.394-0.395范围内。可此可知,1:2为组氨酸与黑色素的最佳摩尔比。然后将溶液于截留分子量为200Da的透析袋透析36h,冷冻干燥后获得水溶性粒毛盘菌黑色素(HLIM)。对其进行复溶实验,结果表明该组氨酸-黑色素复溶效果较好,室温下在蒸馏水中的溶解度为4.77g/100g。
三、水溶性粒毛盘菌黑色素(HLIM)的结构验证:
分别取前面制备的粒毛盘菌胞内黑色素(LIM)及上述制备的水溶性粒毛盘菌黑色素(HLIM)各2mg,分别与400mg干燥的KBr研磨后压片,采用傅里叶变换红外光谱仪(Nexus 670)进行IR光谱分析,扫描范围是4000-400cm-1。图1为改性前的原粒毛盘菌(Lachnum)CCTCC No:M 2011054胞内黑色素的红外光谱图;图2为采用上述方法对粒毛盘菌(Lachnum)CCTCC No:M 2011054胞内黑色素采用组氨酸进行改性修饰后的水溶性黑色素的红外光谱图。对比分析这两个红外光谱图的结果表明,改性前后的粒毛盘菌CCTCC No:M 209193胞外黑色素均具有真菌黑色素的特征吸收峰,即3388cm-1和1629cm-1处的C=O和-O(N)H基团特征吸收峰,此外水溶性黑色素在1659.67cm-1和1636.01cm-1处具有黑色素的羰基与组氨酸的氨基结合形成的特征吸收峰,在3000cm-1-3200cm-1处具有组氨酸咪唑环上C-H的伸缩振动吸收峰;在1463.33cm-1-1576.63cm-1处具有组氨酸咪唑环上C=N伸缩振动吸收峰,在1171.06cm-1处具有组氨酸咪唑环上C-H面内弯曲振动吸收峰。该结果表明组氨酸对粒毛盘菌胞内黑色素改性成功。
四、粒毛盘菌胞内黑色素(LIM)及水溶性粒毛盘菌黑色素(HLIM)的抑制肝癌作用药理实验:
(1)粒毛盘菌胞内黑色素及其水溶性黑色素生理盐水溶液的制备:将上述粒毛盘菌胞内黑色素及其通过组氨酸对粒毛盘菌胞内黑色素改性后的水溶性黑色素粉末用质量百分浓度为0.9%的生理盐水分别配置成50mg/mL、100mg/mL和200mg/mL的水溶液,采取的给药体积为0.25mL/每只小鼠。
(2)动物:昆明小鼠100只,雌雄各半,体重22±2g,随机分组。
(3)试剂盒:采用的超氧化物歧化酶(SOD)测试盒、过氧化氢酶(CAT)测试盒、丙二醛(MDA)试剂盒、小鼠白细胞介素-2(IL-2)ELISA试剂盒和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)ELISA试剂盒,为南京建成生物工程研究所生产的产品;阳性药物:环磷酰胺,为上海华联制药有限公司生产的产品。
(4)方法:将小鼠H22肝癌细胞常规培养后,调整浓度为2×106个/ml。取昆明小鼠10只,每只腹腔注射0.5ml细胞悬液进行瘤细胞体内增值。常规饲养7d后,选择生长状态良好的小鼠取腹水瘤细胞,离心后弃上清,用无菌生理盐水稀释至细胞浓度为107个/ml。另取健康小鼠80只(雌雄各半),每只小鼠右侧腋部皮下接种0.2ml上述细胞悬液,常规饲养4d后,得到肿瘤直径达到0.5cm左右的H22荷瘤模型小鼠,表明建模成功。
将上述建模成功的H22荷瘤模型小鼠随机分为8组(每组10只),分别为模型对照组(0.9%的生理盐水)、阳性对照组(环磷酰胺,25mg·kg-1)、黑色素低剂量组(50mg·kg-1)、黑色素中剂量组(100mg·kg-1)、黑色素高剂量组(200mg·kg-1)、水溶性黑色素低剂量组(50mg·kg-1)、水溶性黑色素中剂量组(100mg·kg-1)、水溶性黑色素高剂量组(200mg·kg-1),取10只健康小鼠作为空白对照组,分别称体重并记录。灌胃给药0.2ml/只,1次/d,连续给药12d。期间,每日观察小鼠的一般活动、皮毛、反应能力等情况,测定摄食量,计算平均值。末次给药后第2d,小鼠称体重,脱颈椎处死。
(5)相关指标测定:
抑瘤率及免疫器官指数测定:分离瘤块,称瘤质量,计算抑瘤率:
抑瘤率=(模型组瘤质量-给药组瘤质量)/模型组瘤质量×100%;
取脾脏和胸腺,称质量,计算脏器指数:
脏器指数=脏器质量/体质量×100%;
SOD酶活力、C AT酶活、MDA酶活、IL-2和TNF-α水平的测定:
从小鼠眼球取血,以5000r/min离心3min,取血清放于-20℃备用;临用前恢复至室温,按照试剂盒说明书步骤进行操作,测定SOD酶活力、C AT酶活力、MDA酶活力、IL-2和TNF-α的水平。
(6)药理实验结果:
表1给出了上述粒毛盘菌胞内黑色素及其水溶性黑色素对H22荷瘤小鼠摄食量、体重增长率、抑瘤率及脏器指数的影响。
表1 粒毛盘菌胞内黑色素及其水溶性黑色素对H22荷瘤小鼠摄食量、体重增长率、抑瘤率及脏器指数的影响
注:与模型对照组相比,aP﹤0.05,bP﹤0.01。
对表1中的各组指标参数进行比较分析,可以看出粒毛盘菌胞内黑色素及其水溶性黑色素对各处理组小鼠相关指标的影响。
与模型对照组相比,黑色素、水溶性黑色素组小鼠的摄食量均有不同程度的增加,而阳性对照组小鼠的摄食量显著降低了23.02%(P﹤0.01)。黑色素、水溶性黑色素组小鼠的体重增长率均低于模型对照组小鼠(其中高剂量组差异显著),但与正常组小鼠相比无显著差异,表明粒毛盘菌胞内黑色素及其水溶性黑色素可抑制小鼠肿瘤的生长,而对小鼠自身体重的增长无抑制作用。阳性对照组小鼠的体重增长率显著降低,表明环磷酰胺在抑制小鼠肿瘤生长的同时也抑制了小鼠自身体重的增长。与黑色素组相比,阳性对照组小鼠精神萎靡,皮毛疏松杂乱无光泽,反应迟钝,活动明显减少,此现象可能与环磷酰胺严重的毒副作用有关,表明粒毛盘菌胞内黑色素及其水溶性黑色素对H22荷瘤小鼠小鼠无明显的毒副作用。
黑色素各剂量组均表现出了显著的抑瘤作用,且呈剂量效应关系。相同剂量的水溶性黑色素对小鼠的抑瘤率均高于黑色素,表明水溶性粒毛盘菌黑色素对H22荷瘤小鼠的抑瘤作用较黑色素显著。
表2给出了上述粒毛盘菌胞内黑色素及其水溶性黑色素对H22荷瘤小鼠SOD酶活、CAT酶活、MDA酶活、IL-2及TNF-α的影响。
表2 粒毛盘菌胞内黑色素及其水溶性黑色素对H22荷瘤小鼠SOD酶活CAT酶活MDA酶活IL-2和TNF-α的影响
注:与模型对照组相比,a P﹤0.05,b P﹤0.01。
与模型对照组相比,黑色素各剂量组胸腺指数、脾脏指数均有不同程度提高,且相同剂量水溶性粒毛盘菌黑色素组小鼠的胸腺指数和脾脏指数均较黑色素组高,其中高剂量组具有显著性差异(P<0.01),表明黑色素对于这两大免疫器官具有良好的保护作用,通过促进细胞免疫和体液免疫,增强机体自身抗肿瘤的作用。阳性对照组小鼠胸腺指数、脾脏指数显著减小(P<0.01),表明环磷酰胺对荷瘤小鼠的脾脏和胸腺具有较强的毒副作用导致脾脏和胸腺萎缩。
与正常对照组相比,模型对照组小鼠血清中SOD酶活、CAT酶活、IL-2和TNF-α的水平显著降低,MDA含量明显升高。与模型对照组相比,黑色素、水溶性黑色素组及阳性对照组小鼠的SOD酶活、CAT酶活、IL-2和TNF-α均有不同程度的增加,MDA含量有所降低,且均接近正常组小鼠水平。相同浓度的水溶性黑色素对H22荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用较黑色素显著,表明组氨酸改性修饰提高了该黑色素的抗肿瘤活性。
上述药理学实验分析测定了小鼠肝癌病症最具代表性的指标,从以上结果可以看出,在给药剂量为50-200mg/kg时,菌种保藏编号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌胞内黑色素具有显著的抗肿瘤作用,可显著显著提高H22荷瘤小鼠的摄食量、体重、抑瘤率、胸腺指数及脾脏指数,有效增加有效增加SOD、CAT、IL-2和TNF-α的水平,降低MDA含量,具有明显的抗肿瘤活性。相同浓度水溶性粒毛盘菌黑色素的抗肿瘤活性明显增强。阳性药物也具有显著的抗肿瘤活性,但阳性药物组小鼠的摄食量、体重、胸腺指数和脾指数均明显降低,表明阳性药物在一定程度上影响了小鼠的免疫功能,具有毒副作用,而上述粒毛盘菌黑色素及其水溶性黑色素均无明显的毒副作用。
五、水溶性粒毛盘菌胞内黑色素制剂的加工:
1、片剂加工:
将300-600g的水溶性粒毛盘菌黑色素与药用辅料稀释剂150-250g、助流剂20-50g混匀后,与250-500mL乙醇混合均匀制得软材,软材过筛得到湿颗粒,干燥后整粒,最后加入润滑剂5-10g混匀后压片,制成1000片片剂。所述药用辅料稀释剂选用糊精或干淀粉;所述助流剂采用滑石粉或微粉硅胶或微晶纤维素;所述润滑剂采用硬脂酸镁或硬脂酸锌。
本实施例推荐的片剂加工的优选例为:取过80-100目筛的上述粒水溶性粒毛盘菌黑色素500g、稀释剂糊精250g、助流剂滑石粉60g,混合均匀后加500mL乙醇混合均匀制得软材,软材过筛得到湿颗粒,干燥后整粒,最后加入润滑剂硬脂酸镁15g混匀后压片,制成1000片,片重0.8g,黑色素含量0.5g/片。
2、胶囊剂加工:
将药用辅料稀释剂200-300g、助流剂50-70g、润湿剂2-6g混匀后与300-600g的上述水溶性粒毛盘菌黑色素混合均匀,装1#空心胶囊,制得胶囊剂1000粒。所述药用辅料稀释剂选用糊精或干淀粉;所述助流剂采用滑石粉或微粉硅胶或微晶纤维素;所述润湿剂采用十二烷基硫酸钠或者磺基丁二酸二辛酯。
本实施例推荐的胶囊剂加工优选例为:取稀释剂干淀粉250g,助流剂滑石粉50g,润湿剂十二烷基硫酸钠5g混合均匀与500g上述水溶性粒毛盘菌黑色素混合均匀后装1#空心胶囊1000粒,黑色素含量0.5g/粒。
本发明使用菌种保藏编号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌水溶性黑色素,并以上述水溶性黑色素为原料作为制备抑制肝癌药物的应用,所制备的药物克服了现有化疗药物在杀死肿瘤细胞的同时,对正常细胞也有一定程度杀伤作用,且单纯化疗会使患者食欲不振,体重降低,导致机体衰弱,并引起一定程度的免疫抑制,毒副作用较大等缺点,且制备方法简单经济。
实施例2:
先按如下条件和方式制备获得粒毛盘菌胞内黑色素:将菌种保藏编号为CCTCC No:M 2011054的辛格粒毛盘菌接种于5L发酵罐,培养基配方为(按质量百分比):马铃薯汁20%,葡萄糖3%,蛋白胨1.5%,酪氨酸0.05%,K2HPO40.06%,MgSO4·7H2O 0.04%;装料系数体积比为0.8,接种量为9%(体积比),培养温度为26℃,通气量为1.5L/min,搅拌转速为160r/min,发酵时间为10天;将发酵液抽滤,收集菌丝体,60℃烘干,按菌丝体的质量(g)与浓度为0.5mol/L的氢氧化钠(mL)比为1:180(g/mL)混匀,80℃水浴浸提3h,抽滤得浸提液;用1mol/LHCl调节上述浸提液pH值为2,静置15h,得到黑色素悬浮液;然后将上述黑色素悬浮液离心,弃上清,所得到的沉淀经去离子水洗涤至pH值为7后真空冷冻干燥即得黑色素粗品;将黑色素粗品经7mol/L HCl于100℃酸解3h,以除去与黑色素结合的蛋白质及碳水化合物。然后将酸解后得到的沉淀经双蒸水洗涤至上清液pH值为7时重新溶于1mol/LNH3·H2O溶液,旋转蒸发仪蒸去NH3至溶液pH为7.5后,依次经乙酸乙酯、氯仿、无水乙醇萃取,以除去脂类物质,萃取后除去有机相,水相调pH值为2,5000r/min离心8min,所得沉淀经去离子水反复洗涤至上清液Cl–定性检测为阴性后,真空冷冻干燥,即得到菌种保藏编号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌胞内黑色素。
再采用如下条件和方式制备获得水溶性粒毛盘菌黑色素:参考专利号ZL201210218401.5公开的将粒毛盘菌胞外黑色素改性为水溶性黑色素的方法,将上述制得的粒毛盘菌胞内黑色素与组氨酸,和水,按质量比为1:1:10混合,震荡至黑色素固体溶解后,将溶液于截留分子量为200Da的透析袋透析48h,冷冻干燥后获得水溶性粒毛盘菌黑色素。对其进行复溶实验,室温下其在蒸馏水中的溶解度为4.69g/100g,与实施例1中水溶性黑色素溶解度相当。
然后将上述粒毛盘菌胞内黑色素及其水溶性黑色素用质量百分浓度为0.9%的生理盐水配置成50mg/mL、100mg/mL、200mg/mL的水溶液,给药体积为0.25mL/只。
将上述各剂量的粒毛盘菌胞内黑色素及其水溶性黑色素进行小鼠抗肿瘤的作用药理实验,所采用的方式步骤和其他条件均与实施例1中相同,也都得到了与实施例1中类似的结果。
上述实施例的实验说明,菌种保藏编号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌胞内黑色素及其水溶性黑色素不仅具有显著的抑制肝癌功能,且无毒副作用,其制备方法简单经济,故可将菌种保藏编号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌胞内黑色素及其水溶性黑色素,按药剂学的常规制备方法,将有效量的水溶性粒毛盘菌黑色素与适量的药用辅料混合加工制备成口服片剂或胶囊剂型的抑制肝癌药物。
Claims (2)
1.一种水溶性粒毛盘菌黑色素在制备抑制肝癌药物中的用途,将菌种保藏编号为CCTCC No:M 2011054的粒毛盘菌发酵后提取纯化制备得到的胞内黑色素,按如下条件采用组氨酸对该胞内黑色素进行修饰:将胞内黑色素、组氨酸、水,按摩尔比为1:2~5:50~100混合,震荡至黑色素固体溶解,离心后将该溶液于截留分子量为200Da的透析袋透析24~48h,冷冻干燥,得到水溶性粒毛盘菌黑色素;其特征在于:将该水溶性粒毛盘菌黑色素应用在制备抑制肝癌药物中的用途。
2.如权利要求1所述水溶性粒毛盘菌黑色素在制备抑制肝癌药物中的用途,特征在于按药剂学的常规制备方法将有效量的水溶性粒毛盘菌黑色素与药用辅料混合加工制备成片剂或胶囊。
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