CN1896224A - 发酵冬虫夏草菌丝体微粉、制备方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种粒径为1－75微米的发酵冬虫夏草菌丝体微粉。与原有粉末相比，这种微粉大大地减少了服用量，提高了患者的依从性，同时降低患者的使用成本。本发明还公开了制备发酵冬虫夏草菌丝体微粉的方法，及含有发酵冬虫夏草菌丝体微粉的制剂，及其在预防或治疗慢性支气管炎、咳嗽、白血球减少、肾病的药物中的应用。

Description

发酵冬虫夏草菌丝体微粉、制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及一种发酵冬虫夏草菌丝体微粉、制备方法以及其应用。

背景技术

冬虫夏草是一种天然存在的稀有中药材，除含糖、脂肪、粗纤维等一般成分外，还含有甘露醇、麦角甾醇、腺苷、虫草酸、冬虫夏草素、维生素B₁₂等活性成分。其滋补和治疗功用在人参、鹿茸之上。但天然冬虫夏草生长期长，分布在高海拔的高山草甸地带，资源紧缺，采集不易，价格十分昂贵。多年来，众多的科研人员一直想通过人工培育来弥补这一不足。

在中国专利《中国冬虫夏草真菌的人工培养方法》(CN85101971，1987年3月4日公开)、《中国冬虫夏草真菌的发酵生产方法》(CN1063788C，2001年3月28日公告)中公开了人工培养、生产冬虫夏草方法。鉴于这些技术，杭州中美华东制药有限公司以人工发酵方法获得冬虫夏草得以实现，并已大规模地生产和销售。

发酵冬虫夏草菌丝体粉(以下简称虫草原粉)是冬虫夏草无性阶段真菌经液体发酵培养所得菌丝体经干燥粉碎后的粉末，其粉末粒径控制在140-175um左右。虫草原粉在实际的临床应用中，服用的剂量比较大。市售的虫草原粉制剂-百令胶囊(杭州中美华东制药有限公司出品)的给药剂量为一天3g，即每次为5粒，每日3次。这一给药方式不论是每次服用量还是每日服用总量都较大，一方面给患者造成服用上极大的不便，另一方面因为服用剂量大，虫草原粉的用量也很大，也使患者的经济负担加重。百令胶囊自1991年获得国家药品监督管理局生产批文以来的10多年中，其生产单位及相关的研发机构一直在寻求减少给药剂量的解决方法，以方便患者的服用及减轻患者的经济负担，但一直无法得到较好的解决。

目前，虫草原粉的制剂只有胶囊剂一种，因为虫草原粉很容易吸潮，胶囊剂会发生霉变，在生产过程中只能采用双重铝铂包装来解决吸潮这一问题，这增加了药品的生产工序及药品成本，同时胶囊剂在开封后不宜再作储藏。此外，对于伊斯兰教患者及少数对胶囊壳过敏的患者，胶囊剂有一定的局限性。为了给患者更多的选择，丰富产品的品种以及更方便药品的销售(如药品招标)，非常迫切需要片剂的生产销售。但经发明人的多年来的多次试验，虫草原粉在制成片剂后，很容易开裂，达不到药用的标准。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术中虫草原粉所存在的服用量大、难以制成片剂等缺陷，提供一种服用量少、可以制成片剂，同时也适用于工业化生产及质量控制的发酵冬虫夏草菌丝体粉未。

本发明提供了一种发酵冬虫夏草菌丝体微粉(以下简称虫草微粉)，其微粉粒径为1-75微米。本发明以出粉率及腺苷含量为指标，对粉末粒径进行了优选，结果表明，以粒径在1-75微米。范围内的粉末为佳。如果粒径过小，一方面会增加原料的生产成本，另一方面因为粒径小，休止角增大，流动性较差，给制剂增加工序和/或难度，而粒径过大，则与虫草原粉的性能相近，无法克服现有技术中的缺陷。此外，根据物理学知识可知，粒径在1-75um范围内的粉末，中药所含药效学物质基础与传统中药饮片、中药制剂相比较，将不会发生明显的分子结构上的变化，不会导致中药属性、药效特征和功能主治的改变，这为虫草微粉药效的稳定提供了基本保证。微米级微粉只是粉末大小的超细化，其细化程度尚不涉及原子或分子结构层面上的干预和操作，因此，不会破坏药物的有效成分，更不会对用药安全构成威胁。

经过试验表明，将虫草原粉进行微粉化，能保持虫草原粉固有的药效学物质基础及原有的疗效。同时，虫草微粉达到超细粉末的水平，其比表面积显著增加，虫草微粉所含有效成分的溶解度明显提高。

经测定，结果表明(详见表1)，虫草菌丝体经粉碎后，比表面积增大，有助于药物的溶解；堆密度增加，说明粒径分布更集中，粉末大小更均一。

              表1虫草原粉与虫草微粉的粉末特征

虫草菌丝体	比表面积(m2/g)	堆密度(g/cm3)	休止角(°)
				原粉1号粉末2号粉末3号粉末	0.421.041.262.74	0.43780.48270.50010.5214	40.548.049.651.3

其中，虫草原粉粒径为86--480微米；

微粉粒径为：1号粉35--75微米；2号粉10--35微米；3号粉1--10微米。

本发明以总氨基酸为考查指标，采用高效液相色谱法对不同粒度虫草粉末制剂进行了体外溶出度的比较试验，按下式计算相对累积溶出百分率(结果详见表2)。结果表明，虫草原粉经微粉化后的制剂，溶出速率增快。

式中：C_溶出量：不同时间样品中总氨基酸的溶出量

      C_样品量：样品中总氨基酸的溶出量

本发明还以腺苷为考查指标，对虫草原粉制剂及虫草微粉制剂的溶出度进行了比较试验。采用高效液相色谱法测定体外溶出度，通过考查不同时间的累积释放百分率，计算相对累积溶出百分率(详见表3)。结果表明，虫草原粉经微粉化后的制剂，溶出速率增快。

                     表2总氨基酸累释放百分率(X±SD)(％)

		虫草原粉制剂	1号超微粉制剂	2号超微粉制剂	3号超微粉制剂
						累积时间(min)	102030405060	21.60±1.0625.22±1.9339.88±3.7463.86±2.4179.00±7.1888.99±1.69	26.20±1.3836.83±4.7547.62±1.7067.72±4.3484.27±2.7993.57±0.70	54.03±1.4058.81±4.9968.96±4.1978.99±2.0292.27±9.46100	33.90±3.4238.45±1.0861.64±3.6478.18±1.1190.88±0.7696.62±3.94

              表3腺苷累释放百分率(X±SD)(％)

		虫草原粉制剂	虫草微粉制剂
				累积时间(min)	1020304560	35.96±0.9343.26±1.4961.14±1.9074.02±1.4782.42±1.29	41.73±3.0760.19±3.3474.02±0.6986.84±1.2299.82±0.24

本发明同时还对虫草微粉制剂及虫草原粉制剂的崩解时间、溶出度进行了的试验(详见表4)，结果表明：虫草微粉制剂的崩解时间缩短，溶出度高。

表4虫草原粉与微粉制剂的崩解时间、溶出度比较

	虫草原粉制剂组	虫草微粉制剂组
			崩解时间(min)溶出度％(t60)	1682.42	1299.82

通过药效学试验(详见表5)，虫草微粉的剂量相当于虫草原粉的1/3时，其药理相当于或略好于虫草原粉的等效剂量的药理作用，这提示虫草微粉的用量可以降低至原粉剂量的1/3。从而解决了多年来一直无法解决的服用剂量大这一技术问题，使患者更愿意接受这一药物用以治疗。

                           表5-1虫草微粉胶囊对烟薰肺气虚模型大鼠体重的影响(X±S)

组别	动物数	剂量	不同时间(week)体重(g)
										(只)	(ml/kg)	0	4	5	6	7	8	9
	空白对照组模型组虫草原粉胶囊组虫草微粉胶囊组	101010101010	蒸馏水蒸馏水0.540.120.180.27	193.6±22.3196.3±17.9196.7±14.2197.3±18.8193.6±16.1199.2±18.5	249.8±32.1228.4±28.4232.7±28.8234.6±25.0250.6±24.3251.3±26.4	258.4±28.9233.5±32.1239.0±25.3243.7±16.3259.70±32.6261.1±20.8*	270.2±32.8*237.8±29.7243.5±30.2253.0±27.5270.1±28.3*270.6±27.1*	279.7±27.8*241.6±24.3248.4±27.6262.3±19.0279.5±25.0*279.5±29.3**	285.3±24.9**245.7±27.2252.6±22.7270.6±28.1*289.10±27.8**289.1±33.5**										297.8±30.8**248.5±33.5256.8±33.3279.9±25.1297.0±32.6**297.8±25.5*

与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01

表5-2虫草微粉胶囊对烟薰肺气虚模型大鼠肺组织病理变化的影响

组别(ml/kg)	动物数(只)	病理组织学检查结果(只)
						-	+	++	+++
		空白对照组模型组虫草原粉胶囊组0.54虫草微粉胶囊组0.120.180.27	101010101010	800001	113355					134344	0**6341*0**

经Ridit检验，与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

表5-3虫草微粉胶囊对烟薰肺气虚模型大鼠气管病理变化的影响

组别(ml/kg)	动物数(只)	病理组织学检查结果(只)
						-	+	++	+++
		空白对照组模型组虫草原粉胶囊组0.54虫草微粉胶囊组0.120.180.27	101010101010	900001	012355					126522	0**7223*1**

经Ridit检验，与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

     表5-4虫草微粉胶囊对烟薰肺气虚模型大鼠鼻咽部病理变化的影响

组别(ml/kg)	动物数(只)	病理组织学检查结果(只)
						-	+	++	+++
		空白对照组模型组虫草原粉胶囊组0.54虫草微粉胶囊组0.120.180.27	101010101010	1000002	056577					032321	0**22210*

经Ridit检验，与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

表5-5虫草微粉胶囊对烟薰肺气虚模型大鼠鼻甲病理变化的影响

组别	动物数(只)	病理组织学检查结果(只)
						-	+	++	+++
		空白对照组模型组虫草原粉胶囊组0.54虫草微粉胶囊组0.120.180.27	101010101010	1000013	067887					033210	0**10100*

经Ridit检验，与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

以上表中的病理检查标准：(1)肺组织：肺泡壁、肺泡腔，肺间质正常，记为“-”；肺泡壁血管充血、肺泡腔水肿，肺间质见少量炎性细胞浸润，为“+”；肺泡壁血管充血、肺泡腔水肿，肺间质见较多炎性细胞浸润，记为“++”；肺泡壁血管充血、肺泡腔水肿，肺间质见大量炎性细胞浸润，记为“+++”。(2)气管组织：气管粘膜、粘膜下层、外层正常，记为“-”；气管粘膜水肿，见少量炎性细胞浸润，记为“+”；粘膜水肿、充血，见瘀血和较多炎性细胞浸润，记为“++”；粘膜水肿、糜烂，见大量炎性细胞浸润，记为“+++”。(3)鼻咽部：粘膜上皮清晰正常，记为“-”；见少量炎性细胞浸润，鳞状上皮细胞轻度增生，记为“+”；见炎性细胞浸润，鳞状上皮细胞增生，记为“++”；粘膜充血、水肿，见较多炎性细胞浸润，鳞状上皮细胞增生，记为“+++”。(4)鼻甲：软骨及纤维组织清晰正常，记为“-”；见鼻甲软骨及纤维组织，旁有鼻腔柱状上皮，纤维组织轻度增生，记为“+”；见鼻甲软骨旁有淋巴细胞浸润，纤维组织轻度增生，记为“++”；见鼻甲软骨有较多淋巴细胞浸润，纤维组织增生，记为“+++”。

本发明还提供了一种制备虫草微粉的方法，取干燥虫草原粉，采用超微粉碎技术使其超微细粉化至粒径为1-75微米大小的微粉。其中所述的超微粉碎技术加工可以是气流粉碎或振动粉碎，粉碎时间为2小时左右。

将粉碎后获得的微粉进行测定，结果表明(见下表6)，经气流粉碎分级机粉碎后的虫草微粉，粉末粒度范围较窄，均匀性好，出粉率较高，腺苷含量也较高，所以可优选气流粉碎分级机粉碎干燥虫草原粉。

           表6不同超微粉碎方法所得微粉的出粉率及腺苷含量(％)

粉碎方法	气流粉碎			振动粉碎
							编号	1	2	3	1	2	3
出粉率腺苷含量	20.00.32	62.00.33	11.00.30	48.00.28	30.50.27	16.00.30

本发明还提供了一种药物组合物，由虫草微粉组成，而不含任何赋形剂。如胶囊剂，可含有100％的虫草微粉，不加任何辅料而直接制成胶囊剂；也可直接以铝塑包装制成散剂。考虑到虫草微粉的粉末极细，流动性差，对工业生产的要求较高，而且质量较难控制，所以最好应含有赋形剂。

本发明还提供了一种药物组合物，它含有虫草微粉为活性成分和药学上可接受的赋形剂。

其中，所述的虫草微粉的含量，按重量百分比计，大于20％，小于100％。具体的含量可以视剂型及制剂规格的不同而不同。但考虑到临床的使用剂量及方便服用，活性成分应不低于20％。

其中所说的药学上可接受的赋形剂是指药学领域常规的药物赋形剂，例如：填充剂如蔗糖、淀粉、预胶化淀粉、乳糖、微晶纤维素、甘露醇、山梨醇、聚乙烯吡咯烷酮、磷酸氢钙、磷酸二氢钙、硫酸钙、糊精、磷酸钙等；粘合剂如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、糊精等；崩解剂如低取代羟丙基纤维素、羧甲基淀粉钠和交联聚乙烯吡咯烷酮等；润滑剂、防粘剂如硬脂酸镁、滑石粉等；稀释剂等。必要时，还可以在组合物中加入其它附加剂，如矫味剂如蜂蜜、单糖浆、甘草酸、甜菊糖苷、甜密素、枸橼酸等；防腐剂如山梨酸钾、苯甲酸钠和乳酸等；抗氧化剂、芳香剂、着色剂等。

本发明的药物组合物为适合于口服的剂型。本发明的组合物的给药形式为通过口服给药，可将其制成常规的固体制剂或液体制剂，如片剂、胶囊剂、散剂、口服液、冲剂、悬浮剂、颗粒剂、糖浆等。优选剂型为片剂和胶囊剂。发明人从多方面考虑，优化了片剂的处方，比如：考虑到虫草微粉的纤维性强，在压片时容易开裂，所以要选择粘合性能好的粘合剂；虽然虫草微粉的服用量为虫草原粉的1/3或更少，但相对于其它日服用量只有几百毫克甚至几十毫克的药物而言，虫草微粉的服用剂量还是比较大，所以应选用加入量少的粘合剂，经过试验，发现聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素既具有很强的粘合性能，在制剂过程中又只需加入微量即可，所以优选聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素作为粘合剂。同样的道理，为了尽可能少地使用辅料，本发明选择了一些性能强用量的少的辅料。冬虫夏草发酵菌粉原料本身就比较贵，为了尽可能地降低药品价格，在选择辅料时，本发明选择了一些国产化高，价格低廉的辅料。同时，为了解决制成片剂的吸潮问题，最好进行薄膜包衣。

本发明的药物组合物的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。

本发明的药物组合物的服用量可根据患者的年龄、体重、所治疗的疾病的类型和严重程度不同而不同，其日剂量可以是0.75至1.5克，可以一次或分多次给药。

本发明还提供了一种保健食品，此保健食品含有有效量的虫草微粉。比如药酒，与西洋参、红枣、人参等单独或多个配伍制备成片剂、胶囊剂、口服液等剂型，用于预防或治疗慢性气管炎、支气管哮喘、慢性肾病、慢性肝病、性功能减退、免疫力降低的疾病等。其中虫草微粉的含量视产品及其用途的不同而不同，最高含量可以为100％。

本发明还提供了一种食品，此食品含有虫草微粉。在制作的糕点、饮料、菜肴、休闲食品等食品中添加少量的虫草微粉，起到提高免疫力等多方面的营养作用。

本发明提供的虫草微粉可用于制备预防和治疗慢性支气管炎、肺肾两虚引起的咳嗽、放化疗引起的白血球减少、肾病等疾病的药物。

发明人经过多个动物试验，结果表明：

1.利用烟熏造成肺气虚大鼠模型，观察虫草微粉对大鼠上下呼吸道即鼻咽、鼻甲、气管及肺病变的保护作用，结果表明：虫草微粉能改善大鼠出现咳嗽、呼吸急促，毛发无光泽，精神不振，倦缩少动等症状，改善肺气虚模型动物长期体重减轻的症状，基本消除了大鼠肺泡壁血管充血、肺泡腔水肿，肺间质见炎性细胞浸润，气管粘膜水肿、充血、糜烂，见瘀血和较多炎性细胞浸润，鼻咽部和鼻甲较轻病变的病理症状，经Ridit比较，四个脏器与模型组均有显著性差异。

2.连续12天腹腔注射小剂量氢化可的松，制成肺肾两虚模型，测定虫草微粉对肺肾两虚模型小鼠胸腺系数、红细胞C₃b受体花环率、红细胞免疫复合物花环率的影响，结果表明：虫草微粉能改善造模小鼠普遍消瘦，毛发无光泽，倦怠少动，体重增长缓慢等症状，显著提高模型小鼠胸腺系数、红细胞C₃b受体花环率、红细胞免疫复合物花环率，提高了肺肾两虚模型小鼠的免疫功能。

3.免疫功能试验：利用肌肉注射环磷酰胺造成小鼠免疫低下模型，观察虫草微粉对免疫低下模型小鼠溶血素生成的影响，结果表明：虫草微粉能促进环磷酰胺致免疫功能低下小鼠血清溶血素形成，能够提高免疫低下机体的体液免疫力；利用肌肉注射氢化可的松造成小鼠免疫低下模型，观察虫草微粉对免疫低下模型小鼠碳粒廓清指数的影响，结果表明：虫草微粉低、中、高剂量组小鼠碳粒廓清K及校正指数α有显著性差异，即明显升高，可促进免疫功能低下小鼠网状内皮系统的吞噬能力，具有提高免疫功能低下机体非特异性免疫功能的作用；与模型空白组比较，虫草原粉与虫草微粉低、中、高剂量组小鼠皮肤伊文思兰光密度OD值没有显著性差异，可见虫草原粉与虫草微粉对正常小鼠的迟发型超敏反应没有明显的影响。以上三项免疫试验表明：虫草微粉能提高免疫低下机体的免疫力，对正常机体免疫没有明显影响。

4.补肾试验：切除大鼠肾脏70％左右，造成肾功能不全模型，测定给予虫草微粉治疗后第4、8、12周大鼠的血肌酐、尿素氮和尿蛋白量，结果显示虫草微粉低、中、高剂量组大鼠血清肌酐、尿素氮和尿蛋白量在给药后8-12周有显著性差异，明显减少，表明虫草微粉对肾部分切除大鼠的肾功能降低有明显的提高作用；给予虫草微粉1周后，取大鼠双侧肾上腺，测定维生素C含量，与空白对照组比较，虫草微粉中、高剂量组动物的肾上腺维生素C含量显著性降低，表明虫草微粉能降低肾上腺维生素C含量，活跃肾上腺皮质功能，兴奋垂体-肾上腺皮质轴。以上两项补肾试验表明虫草微粉具有明显的补肾作用。

5.扶正作用试验：小鼠给予虫草微粉囊6天后，将小鼠(小鼠尾部负重为其体重的6％)投入0±1℃水浴中，观察小鼠的游泳时间。与空白对照组比较，虫草微粉高剂量组小鼠在低温中的游泳时间有显著性差异，表明虫草微粉高剂量时能增强小鼠耐寒能力和耐力，具有一定的耐寒、抗疲劳作用；小鼠给予虫草微粉6天，将小鼠投入装有10g钠石灰的密闭广口瓶中，记录小鼠耐缺氧时间。与空白对照组比较，虫草微粉高剂量组小鼠常压耐缺氧时间有显著性差异，表明虫草微粉高剂量能提高小鼠常压耐缺氧能力，具有一定的耐缺氧作用。以上两项试验表明虫草微粉较大剂量时有一定的耐寒、抗疲劳、耐缺氧作用。

6.白细胞研究试验：小鼠腹腔注射高剂量环磷酰胺25mg/kg各一次，造成环磷酰胺致白细胞减少模型，检测小鼠白细胞数量。与白细胞减少模型组比较，虫草微粉低、中、高剂量组动物的血液白细胞数量显著性升高，表明虫草微粉能改善环磷酰胺抑制白细胞、破坏骨髓有核细胞再生的副作用；CGY照射小鼠，造成放射线致白细胞减少模型，检测白细胞数量。与白细胞减少模型组比较，虫草微粉低、中、高剂量组动物的血液白细胞数量显著性升高，表明虫草微粉能改善Co⁶⁰500CGY抑制白细胞、破坏骨髓有核细胞再生的副作用。以上两项试验证明；虫草微粉能升高白细胞减少机体的白细胞数量，可消除放、化疗引起的副作用。

综合以上的动物药理试验，结果表明：虫草微粉具有预防或治疗慢性支气管炎、咳嗽、肾病、白血球减少等作用。

本发明提供的虫草微粉的服用剂量大大减少，提高了患者的依从性。同时也节约了原料，降低了成本，更适合于各种剂型的制备，丰富了各类患者的选择。

具体实施方式

以下给出一些实施例，以使本领域的技术人员更好地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1：虫草微粉及制备

取虫草原粉500g，干燥。用TC-20型流化床气流粉碎机(南京天目超微技术开发有限公司)进行气流粉碎，粉碎时间为2小时。将粉碎所得微粉，取适量，采用激光衍射粒度分析仪测定，粒度测试统计表明，85％以上微粉的粒径分布在5-35um之间，同时称重，出粉率为62.0％，并测定腺苷含量为0.33％。

实施例2：虫草微粉及制备

取虫草原粉500g，干燥。用GKZ-80型振动超微粉碎机振动粉碎，粉碎时间为2小时。将粉碎方法所得微粉，取适量，采用激光衍射粒度分析仪测定，粒度测试统计表明，85％以上微粉的粒径分布在3-65um之间，同时称重，出粉率为48.0％，并测定腺苷含量为0.28％。

实施例3：胶囊剂及制备

虫草微粉200g，按常规工艺制成1000粒1号胶囊，每粒含虫草微粉0.2g。

用于慢性支气管炎，每次2粒，一日2次。

实施例4：片剂及其制备：

每片含有虫草微粉0.5g。

主辅料                         用量

虫草微粉                       500g

微晶纤维素                     200g

聚乙烯吡咯烷酮                 100g

10％HPMC水溶液                 适量

羧甲基淀粉钠                   30g

交联聚乙烯吡咯烷酮             30g

硬脂酸镁                       1％

欧巴代^薄膜包衣              增重3％左右

                               制成1000片

虫草微粉，检测合格后备用。所有辅料在60℃烘干后，除硬脂酸镁外余下辅料分别过80目筛备用。

按处方量称取各原料和辅料混匀后，加入粘合剂制成软材。软材过18目筛制粒，于60℃干燥后，过18目筛整粒。取样，测定颗粒含量。

加入硬脂酸镁，混匀，计算精确片重，压片。

称好所需量的包衣粉，均匀加入所需量的水中，边加边搅拌，配制成固体含量为16％的溶液。待所有的粉末全部加入后，降低搅拌速度，继续搅拌45min。将配制好的包衣液用滚转包衣法进行包衣，包衣增重约3.0％。

用于慢性支气管炎、肺肾两虚引起的咳嗽、放化疗引起的白血球减少、肾病等疾病时，每次1片，一日2次。

实施例5：保健食品

将西洋参300g粉碎成50um左右的微粉，虫草微粉100g，并加入20g蔗糖脂肪酸酯，混匀，制成1000粒胶囊。每次服用2-4粒，每日2-3次用于预防及治疗免疫力低下等症。

实施例6：虫草微粉对肾病的作用

取SD大鼠80只，雌雄各半，体重195.4±13.6g。先收集24小时尿液测定尿蛋白含量，剪尾取血测造模前血清肌酐和尿素氮，称重。按随机数字表取10只作为空白对照组。余下70只大鼠灌胃腺嘌呤250mg/kg，浓度25mg/ml，每天1次，连续21天，造成肾衰模型。造模完成后立即收集24小时尿液测定尿蛋白含量，剪尾取血测血清肌酐和尿素氮，根据尿蛋白含量和初始体重分成5组，为模型对照组(灌胃蒸馏水10ml/kg)14只、阳性药物尿毒清组(灌胃尿毒清1.8g/kg)12只、虫草微粉片低、中、高剂量组(分别灌胃虫草微粉片0.12、0.18、0.27g生药/kg)均为12只。于末次给药后收集24小时尿液测定尿蛋白含量，摘眼球取血测血清肌酐和尿素氮，称重，取肾脏做病理观察。肾脏组织病理改变分四级：(-)正常，肾小球、肾小管清晰，肾间质无炎性细胞浸润；(+)轻度炎症，肾小球、肾小管基本清晰，毛细血管少量扩张充血，间质见少量炎性细胞浸润；(++)中度炎症，肾小球囊扩大，肾近曲小管上皮浊肿；肾间质可见炎细胞浸润，部分肾内静脉扩张和毛细血管充血等。(+++)肾小球增大，肾球囊扩大，血管球萎缩；肾近曲小管上皮浊肿；远端小管上皮变性；管腔扩张，内有沉积物；肾间质可见大量炎细胞浸润，以及肾内静脉扩张和毛细血管充血等。

实验结果

1对大鼠体重的影响：

从下表可见，给药治疗后，各药物均能明显减缓模型动物的体重下降。与模型组比较，虫草微粉片高剂量组动物体重有显著性提高，表明虫草微粉可维持肾衰大鼠的体重增长速度。

            虫草微粉对腺嘌呤肾衰模型大鼠体重的影响( x±S)

组别	剂量(g./kg)	动物数(只)	给药前(g)	造模后(g)	治疗后(g)
						空白对照组模型对照组尿毒清虫草微粉片低虫草微粉片中虫草微粉片高	蒸馏水蒸馏水3.50.120.180.27	101111101111	198.1±14.3194.9±15.8192.0±14.9196.6±18.5192.7±18.2195.1±18.0	228.6±18.7198.3±17.2**201.6±15.8**196.9±20.1**200.1±17.0**199.2±18.5**	305.8±33.8248.3±24.0**265.9±22.7*254.7±24.7**263.8±23.6*278.0±25.8*#

注：与空白对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01，与模型对照组比较：#P＜0.05，##P＜0.01

2对尿蛋白含量的影响

下表可见，造模后，动物出现明显的蛋白尿，24h尿蛋白总量与正常动物比较均有极显著差异。实验期间，模型组持续有大量尿蛋白存在，表明模型制备成功并稳定。与模型组比较，虫草微粉片各剂量组动物尿中蛋白量显著减少；且与空白组比较没有明显差异，表明虫草微粉可降低肾衰模型大鼠的尿蛋白量。

      虫草微粉片对腺嘌呤肾衰模型大鼠24小时尿蛋白含量的影响( x±S)

组别	动物数(只)	造模前	造模后	治疗后
					(mg)	(mg)	(mg)
		空白模型尿毒清虫草微粉片低虫草微粉片中虫草微粉片高	101111101111	33.2±9.628.7±10.331.0±11.429.8±8.732.1±11.830.7±9.0				36.0±12.460.8±22.3**58.4±21.4**63.2±25.9**59.0±20.5**61.8±17.9**	34.7±10.856.2±18.9**40.1±15.9#39.2±16.8#41.0±17.3#38.5±16.6#

注：与空白对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01；与模型对照组比较：#P＜0.05；

虫草微粉片对腺嘌呤肾衰大鼠肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)的影响( x±S)

组别	Cr(umol/L)			BUN(mmol/L)
							给药前	造模后	治疗后	给药前	造模后	治疗后
	空白模型尿毒清虫草微粉片低虫草微粉片中虫草微粉片高	81.4±7.279.0±7.779.9±8.877.8±7.278.5±10.178.7±6.8	78.6±6.391.5±10.5*87.9±8.9*89.8±7.5*90.8±9.2*87.0±7.8*	79.2±9.190.3±9.7*83.2±10.5#85.0±9.483.2±7.6#81.4±8.8#	8.4±2.08.8±1.78.6±2.48.8±1.68.5±1.88.6±1.9	8.2±1.711.5±2.1#12.0±1.9**10.8±1.9**10.6±1.7**11.8±2.3**							7.8±1.311.1±1.8**8.9±2.1#8.5±2.0#8.2±2.3#8.0±2.9##

注：与空白对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01；与模型对照组比较：#P＜0.05，##P＜0.05；

以上试验结果表明：虫草微粉片对大鼠腺嘌呤致大鼠肾衰有较好的治疗作用，使其尿蛋白量、尿素氮、肌酐水平下降，体重增长。造模动物肾脏均有不同程度肾实质损害，可见模型组动物的肾小球增大，肾球囊扩大，血管球萎缩；肾近曲小管上皮浊肿；远端小管上皮变性；管腔扩张，内有沉积物；肾间质可见大量炎细胞浸润，以及肾内静脉扩张和毛细血管充血等。经口服虫草微粉片治疗30天后，肾衰大鼠的病理状况大大改善。

Claims (10)

1.一种发酵冬虫夏草菌丝体微粉，其特征是粉末粒径为1-75微米。

2.一种制备如权利要求1所述的发酵冬虫夏草菌丝体微粉的方法，取干燥发酵冬虫夏草菌丝体粉，采用超微粉碎技术使其超微细粉化至粒径为1--75微米大小的粉末。

3.一种药物组合物，由如权利要求1所述的发酵冬虫夏草菌丝体微粉组成。

4.一种药物组合物，含有如权利要求1所述的发酵冬虫夏草菌丝体微粉和药学上可接受的赋形剂。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征是按重量百分比计，所述的发酵冬虫夏草菌丝体微粉的含量大于20％，小于100％。

6.根据权利要求4、5所述的药物组合物，其中所述的药物组合物为口服剂型。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述的口服剂型为片剂。

8.一种保健食品，含有有效量的发酵冬虫夏草菌丝体微粉。

9.一种食品，含有发酵冬虫夏草菌丝体微粉。

10.根据权利要求1所述的发酵冬虫夏草菌丝体微粉在制备预防或治疗慢性支气管炎、咳嗽、白血球减少、肾病的药物中的应用。