CN107823092A - 一种抗衰老多肽组合物、其制备方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及皮肤保养品技术领域，具体涉及一种抗衰老多肽组合物、其制备方法及应用，以多肽组合物的质量份数为100，多肽组合物由以下重量份的组分组成：1‑10份棕榈酰四肽‑7、1‑10份棕榈酰三肽‑5、1‑10份乙酰基四肽‑5、5‑15份棕榈酰寡肽、5‑20份燕麦肽、5‑20份野大豆肽、2‑15份银耳提取物、0.05‑0.5份干细胞分泌因子，以及余量的水。本发明的多肽组合物可用于制备化妆品，尤其在抗皱修复及抗衰老护肤品领域具有良好的应用前景，能够使肌肤重拾紧致细滑，告别黯哑粗糙，让皮肤恢复年轻般的健康状态。

Description

一种抗衰老多肽组合物、其制备方法及应用
技术领域
本发明涉及皮肤保养品技术领域，具体涉及一种抗衰老多肽组合物、其制备方法及应用。
背景技术
人们特别是女性十分注重保持肌肤健美。然而皮肤状况却总是受到多种因素，例如湿度、紫外线、化妆品组合物、年龄、疾病、紧张以及饮食习惯的影响。其结果是，皮肤出现许多麻烦，例如皮肤的多种功能减退及皮肤衰老。
皮肤衰老是由内源性因素和外源性因素共同作用的结果。其中在机体代谢过程中产生的具有高度化学活性的自由基是衰老的重要启动因素。自由基是一种因失去一个电子而成的不对称、不稳定的原子或分子，具有很大的能量，可攻击细胞组织中的脂质、蛋白质、糖类和DNA等物质，企图夺取一个电子以求得重新平衡，这就造成了脂质和糖类的氧化、蛋白质的变性、酶的失活、DNA结构的切断、碱基变化等等，从而导致细胞膜、遗传因子等的损伤，进而诱发各种疾病、癌变、机体老化等。长期受紫外线照射、环境污染以及香烟烟雾等外源性因素也都会产生大量自由基，导致皮肤衰老。
迄今为止，已经提出许多组合物和方法用于预防或治疗衰老效应，然而，目前市面上的产品仍然无法全面满足人们的需求。生物活性肽是指对生物机体的生命活动有裨益或具有特殊生理活性的一大类肽。由生物体自身的组织或器官产生的，对其本身有生理调节作用的肽类称内源性生物活性肽；而非机体自身产生的，以肽的形式被吸收后具有生物活性的肽类物质则称为外源性生物活性肽。植物蛋白以其不可替代的优点成为人们研究活性肽的主要来源。但是目前并没有关于采用生物活性肽而具有很好的抗衰老性能的产品推出。
发明内容
有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种抗衰老多肽组合物，能够用于制备化妆品。
本发明提供一种抗衰老多肽组合物，以所述多肽组合物的质量份数为100，所述多肽组合物由以下重量份的组分组成：1-10份棕榈酰四肽-7、1-10份棕榈酰三肽-5、1-10份乙酰基四肽-5、5-15份棕榈酰寡肽、5-20份燕麦肽、5-20份野大豆肽、2-15份银耳提取物、0.05-0.5份干细胞分泌因子，以及余量的水。
优选的，所述燕麦肽的分子量为1000～3000Da。
优选的，所述燕麦肽通过从燕麦麸皮中采用酶法降解提取得到。
优选的，所述银耳提取物包括银耳多糖，以所述银耳提取物的质量为100％，所述银耳多糖的质量百分含量不低于80％。
优选的，所述干细胞分泌因子为脐带间充质干细胞的分泌因子。
优选的，所述干细胞分泌因子为0.05-0.1份。
优选的，所述水为去离子水或纯净水。
优选的，所述野大豆肽通过将纯天然野大豆经过发酵或酶工程处理得到。
本发明还提供一种上述多肽组合物的制备方法，所述制备方法包括：分别制备A相和B相，所述A相包括将棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-5、乙酰基四肽-5、棕榈酰寡肽按重量份混合均匀，所述B相包括将所述燕麦肽、所述野大豆肽以及水按重量份混合均匀；将所述A相与所述B相混合，按重量份加入所述银耳提取物和所述干细胞分泌因子，恒温水浴加热搅拌，降至室温后，得到所述多肽组合物。
本发明还提供一种上述多肽组合物的应用，所述多肽组合物用于制备化妆品，所述化妆品选自洗面奶、眼霜、面霜、面膜、精华液或化妆水中的至少一种。
本发明的多肽组合物中，棕榈酰三肽-5属于信号类胜肽，能促进胶原蛋白和其他细胞外基质蛋白(包括弹性蛋白和纤维连接蛋白等)的生成；棕榈酰四肽-7可减少白细胞介素(interleukin-6)的生成，消除炎症；乙酰基四肽-5是有效的血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂，它们可以通过抑制血管紧张素I转换为血管紧张素II，从而改善血液循环。通过与燕麦肽、野大豆肽这种植物蛋白类的生物活性肽，以及银耳提取物和干细胞分泌因子结合作用，相对于普通的肽类物质，能够具有更加优异的抗衰老性能。本发明的多肽组合物能够用于制备化妆品，具体可作为添加成分，按照化妆品工业中已知的方法将其添加入化妆品中制成外用制剂，如膏霜类、乳液类、水类、凝胶类、美容类或护肤类化妆品，达到护肤、养肤、美肤、健肤的效果。尤其在抗皱修复及抗衰老护肤品领域具有良好的应用前景，能够使肌肤重拾紧致细滑，告别黯哑粗糙，让皮肤恢复年轻般的健康状态。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员理解，下面将结合具体实施例对本发明进行进一步描述。
本发明提供一种抗衰老多肽组合物，以所述多肽组合物的质量份数为100，所述多肽组合物由以下重量份的组分组成：1-10份棕榈酰四肽-7、1-10份棕榈酰三肽-5、1-10份乙酰基四肽-5、5-15份棕榈酰寡肽、5-20份燕麦肽、5-20份野大豆肽、2-15份银耳提取物、0.05-0.5份干细胞分泌因子，以及余量的水。
其中，棕榈酰三肽-5属于信号类胜肽，能促进胶原蛋白和其他细胞外基质蛋白(包括弹性蛋白和纤维连接蛋白等)的生成；棕榈酰四肽-7可减少白细胞介素(interleukin-6)的生成，消除炎症；乙酰基四肽-5是有效的血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂，它们可以通过抑制血管紧张素I转换为血管紧张素II，从而改善血液循环。
燕麦，禾本科燕族燕麦属，一年生或多年生草本植物，燕麦营养价值丰富而全面，其蛋白质、脂肪、维生素E、膳食纤维以及钙、镁、铁、磷等矿物元素含量均高于其它谷类作物，具有降血脂、降低胆固醇、降血压、降血糖和抗氧化性等多种生功能；具体实施方式中，多肽组合物中所采用的燕麦肽的分子量为1000～3000Da，燕麦肽具体是从燕麦麸皮中采用酶法降解提取得到，酶法降解提取的具体步骤包括：1)预处理：将燕麦麸皮加水，调节pH到8-10，在45-55℃加热处理；2)酶处理：在经过预处理后的液体中加入碱性蛋白酶，在45-55℃下搅拌处理1-5小时；然后，加入木瓜蛋白酶，在45-55℃下搅拌处理1-5小时；3)过滤与膜处理：将经过酶处理的液体过滤，然后，以截留分子量为30000-50000Da的超滤膜超滤，然后以截留分子量为600-800Da的纳滤膜纳滤去除所含盐并浓缩，得到燕麦肽。
具体实施方式中，多肽组合物中所采用的野大豆肽是通过将纯天然野大豆经过发酵或酶工程处理得到，纯天然的野大豆肽则具有激活表皮基底细胞分裂功效。通过燕麦肽与野大豆肽两种植物蛋白类的生物活性肽结合作用，能够更好的与棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-5、乙酰基四肽-5以及棕榈酰寡肽结合作用，起到抗衰老的作用。
银耳是我国经济价值极高，及珍贵的一种食用菌和药用菌，为传统的食药两用菌。而银耳提取物中所主要含有的银耳多糖则是一种重要的生物活性物质。银耳多糖可明显降低高血脂、血清中游离胆固醇、胆固醇酯的含量，明显增强机体的免疫功能，促进肝细胞糖原合成及抗肿瘤、抗突变、抗辐射和升高白细胞。而且，银耳多糖具有一定的清除羟基自由基的能力，可作为抗衰老成分应用到化妆品中，银耳多糖中的主要活性成分α-甘露聚糖中又含有大量的羟基、羧基等极性基团，可结合大量的水分，使得银耳多糖的保湿效果也明显优于甘油和海藻糖。本发明的多肽组合物中，银耳提取物中银耳多糖的质量百分含量不低于80％，能够更好的与其他肽类结合作用，起到抗衰老和补水的作用。
具体实施方式中，由于目前骨髓间充质干细胞的获得存在一些困难且来源不稳定，细胞增殖没有脐带间充质干细胞速度快；羊膜间充质干细胞虽然获得容易，但细胞体积大，增殖速度慢，获得干细胞分泌因子的成本高；脂肪间充质干细胞大多数供者自身都存在炎症问题，干细胞分泌因子中炎性因子也较多，不利于用于护肤品。本发明的抗冻护手霜中，干细胞分泌因子优选采用脐带间充质干细胞的分泌因子，所添加的干细胞分泌因子含量为0.05-0.1份。
具体的，干细胞分泌因子冻干粉制备过程如下：(1)收集健康人体脐带，对脐带作进一步清洗，再用无菌手术剪将脐带去除外膜、静脉和动脉后切割分为细小组织。(2)剪碎后的细小组织通过加入适当浓度的胰酶、胶原酶等消化脐带组织块0.5小时。以消化出单核细胞，收集消化出的细胞用无血清培养基进行贴壁培养，获得脐带间充质干细胞。(3)间充质干细胞的扩增培养,用干细胞培养基通过常规干细胞培养的方式进行间充质干细胞的培养,根据细胞生长状况进行换液，补液。(4)观察细胞生长情况，取细胞检测细胞表面阳性标志CD90、CD105和细胞表面阴性表面标志CD45、CD34的表达情况。高表达上述检测物质时，取50ml干细胞培养基，分装于培养皿中，液面厚度不高于3mm，盖上保鲜膜，放于-86℃冰箱中冷冻24h。(5)取出冷冻后的培养皿，用细针在保鲜膜上戳出若干小孔，放置于冻干机中，冷冻干燥。(6)冻干成粉末状分装备用。
具体的，本发明采用第3代到第5代的细胞用于制备干细胞分泌因子，用于制备干细胞分泌因子的培养基为不含酚红的RPMI-1640，用于制备干细胞分泌因子的培养上清只收集细胞接种后第72-96h时间区间的培养上清。
具体实施方式中，多肽组合物中所采用的干细胞分泌因子优选为0.05-0.1份，通过结合使用干细胞生物活性分泌因子可有效调控机体细胞信号传导、活化机体干细胞，进而生理性修复或替代机体损伤、病变及衰老的细胞等。
本发明还提供本发明还提供一种上述多肽组合物的制备方法，具体包括：分别制备A相和B相，A相包括将棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-5、乙酰基四肽-5、棕榈酰寡肽按重量份混合均匀，B相包括相将燕麦肽、野大豆肽以及水按重量份混合均匀；将A相与B相混合，按重量份加入银耳提取物和干细胞分泌因子，恒温水浴加热搅拌，降至室温后，得到多肽组合物。通过将由棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-5、乙酰基四肽-5、棕榈酰寡肽组合所得的A相与燕麦肽、野大豆肽这种植物蛋白类的生物活性肽所组成的B相，以及银耳提取物和干细胞分泌因子结合作用，相对于普通的肽类物质，能够具有更加优异的抗衰老性能。
本发明还提供一种上述多肽组合物的应用，具体可将多肽组合物用于制备化妆品，化妆品包括但不限于洗面奶、眼霜、面霜、面膜、精华液或化妆水中的至少一种。具体可作为添加成分，按照化妆品工业中已知的方法将其添加入化妆品中制成外用制剂，如膏霜类、乳液类、水类、凝胶类、美容类或护肤类化妆品，达到护肤、养肤、美肤、健肤的效果。尤其在抗皱修复及抗衰老护肤品领域具有良好的应用前景，能够使肌肤重拾紧致细滑，告别黯哑粗糙，让皮肤恢复年轻般的健康状态。
以下结合具体实施例予以进一步说明。
实施例1
制备A相：包括将5重量份棕榈酰四肽-7、5重量份棕榈酰三肽-5、5重量份乙酰基四肽-5、8重量份棕榈酰寡肽混合均匀；
制备B相：包括将10重量份燕麦肽、10重量份野大豆肽以及水混合均匀；
将A相与B相混合，加入10质量份的银耳提取物和0.1重量份的干细胞分泌因子，恒温水浴加热至50℃搅拌，降至室温后，得到抗衰老的多肽组合物。
实施例2
制备A相：包括将1重量份棕榈酰四肽-7、3重量份棕榈酰三肽-5、10重量份乙酰基四肽-5、15重量份棕榈酰寡肽按重量份混合均匀；
制备B相：包括将5重量份燕麦肽、15重量份野大豆肽以及水混合均匀；
将A相与B相混合，加入5质量份的银耳提取物和0.3重量份的干细胞分泌因子，恒温水浴加热至45℃搅拌，降至室温后，得到抗衰老的多肽组合物。
实施例3
制备A相：包括将10重量份棕榈酰四肽-7、8重量份棕榈酰三肽-5、1重量份乙酰基四肽-5、5重量份棕榈酰寡肽按重量份混合均匀；
制备B相：包括将15重量份燕麦肽、5重量份野大豆肽以及水混合均匀；
将A相与B相混合，加入2质量份的银耳提取物和0.5重量份的干细胞分泌因子，恒温水浴加热至55℃搅拌，降至室温后，得到抗衰老的多肽组合物。
实施例4
制备A相：包括将8重量份棕榈酰四肽-7、1重量份棕榈酰三肽-5、8重量份乙酰基四肽-5、10重量份棕榈酰寡肽按重量份混合均匀；
制备B相：包括将8重量份燕麦肽、8重量份野大豆肽以及水混合均匀；
将A相与B相混合，加入15质量份的银耳提取物和0.05重量份的干细胞分泌因子，恒温水浴加热至50℃搅拌，降至室温后，得到抗衰老的多肽组合物。
实施例5
制备A相：包括将5重量份棕榈酰四肽-7、5重量份棕榈酰三肽-5、5重量份乙酰基四肽-5、1重量份棕榈酰寡肽按重量份混合均匀；
制备B相：包括将12重量份燕麦肽、8重量份野大豆肽以及重量份的水混合均匀；
将A相与B相混合，加入8质量份的银耳提取物和0.1重量份的干细胞分泌因子，恒温水浴加热至50℃搅拌，降至室温后，得到抗衰老的多肽组合物。
实施例6-10
含本发明多肽组合物的洗面奶的制备
将月桂醇聚醚硫酸酯钠、月桂醇硫酸酯钠与去离子水混合，加热至80℃搅拌至完全溶解，保温10min后降温至70℃，加入椰油酰胺MEA、乙二醇二硬脂酸酯，搅拌至全部溶解，继续降温至60℃加入甘油、椰油酰胺丙基甜菜碱、实施例1-5中的多肽组合物、丙烯酸酯类共聚物、柠檬酸，搅拌均匀，再加入氯化钠、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯，搅拌均匀，降温至室温，得到实施例6-实施例10的洗面奶。
实施例11-15
含本发明多肽组合物的水类化妆品的制备
将尿囊素、甘油、丙二醇混合搅拌，加热到80℃，保温10分钟，加入霍霍巴蜡PEG-120酯类、β-葡聚糖、甘草酸二钾、生育酚乙酸酯、实施例1-5中的多肽组合物，搅拌均匀。降温到50℃；加入PEG-40氢化蓖麻油，搅拌均匀后，再加入双(羟甲基)咪唑烷基脲、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯，三乙醇胺，搅拌均匀，降温至室温，得到实施例6-实施例10的化妆水。
实施例16-20
含本发明多肽组合物的膏霜类化妆品的制备
将甘油、发酵组合物、羟苯甲酯加热到80℃，保温10分钟；将甘油硬脂酸酯、矿油、C10-16烷基葡糖苷、异棕榈酸乙基己酯、凡士林、辛酸/癸酸甘油三酯、聚二甲基硅氧烷、鲸蜡硬脂醇、PEG-25鲸蜡硬脂醇、羟苯丙酯依次加入油锅，搅拌加热到80℃，保温10分种；乳化锅预热到40℃，抽真空，先抽水，再抽油，开搅拌，原料抽完，均质3分钟，保温5分钟；加入实施例1-5的多肽组合物，搅拌降温；降温到50℃，加入三乙醇胺；搅拌降温到45℃，加入香精、双(羟甲基)咪唑烷基脲、碘丙炔醇丁基氨甲酸酯，搅拌降温至室温，等到实施例16-20的面霜。
1、抗氧化测试
称取0.5g实施例所得S1-S5对应的多肽组合物，用纯水溶解后转入100mL容量瓶中定容，配制出质量浓度为5.00×10-3g/mL的样品溶液。
分别配制浓度为2×10-4g/mL的DPPH的无水乙醇溶液、浓度为10mmol/L水杨酸的无水乙醇溶液、浓度为10mmol/L的FeSO4水溶液、浓度为8.8mmol/L的H2O2水溶液、pH为8.2的Tris-HCl缓冲溶液、浓度为10mmol/L的HCl溶液、浓度为5mmol/L的邻苯三酚溶液(以浓度为10mmol/L的HCl溶液为溶剂)。
(1)对DPPH·自由基的抑制率测试
移取待测样品溶液3mL于10mL容量瓶中，随后加入3mL浓度为2×10-4g/mL DPPH溶液。盖上塞子，摇匀，反应30min，在517nm处测定吸光度Ai；测定3mL样液与3mL乙醇混合液的吸光度Aj；测定3mL浓度为2×10-4g/mL DPPH溶液与3mL纯水混合后的吸光度A0。根据公式P＝[1－(Ai－Aj)/A0]×100％，将测得的吸光度带入求得待测液对DPPH·自由基的抑制率。
(2)对·OH自由基的抑制率测试
向10mL的容量瓶中加入10mmol/L的水杨酸溶液和10mmol/L的FeSO4溶液各2mL，然后加入待测液2mL，再加入2mL浓度为8.8mmol/L的H2O2溶液，摇匀后于37℃水浴中反应30min。在510nm处测定吸光度Ai；以2mL纯水代替H2O2测定吸光度Aj；用2mL纯水代替待测液来测定吸光度A0。根据公式P＝[1－(Ai－Aj)/A0]×100％，将测得的吸光度带入求得待测液对·OH自由基的抑制率。
(3)对·O2-自由基的抑制率测试
取pH为8.2的Tris-HCl缓冲溶液5mL于10mL容量瓶中，在25℃水浴中预热20min，然后依次加入待测液2mL和5mmol/L的邻苯三酚溶液0.5mL，立即摇匀，于25℃水浴中反应4min，立即在320nm处测定其吸光度Ai；以10mmol/L的HCl溶液0.5mL代替邻苯三酚，测定吸光度Aj；用2mL纯水代替待测液来测定吸光度A0。根据公式P＝[1－(Ai－Aj)/A0]×100％，将测得的吸光度带入求得待测液对·O2-自由基的抑制率。
表1 实施例1-5多肽组合物溶液对3种自由基的抑制率
表1为本发明实施例1-5对应的多肽组合物溶液对三种自由基DPPH·、·OH、·O2-的抑制率，从表中可以看出，本发明的多肽组合物对三种自由基抑制率平均水平都在60％以上，充分说明本发明的多肽组合物具有较强的抗氧化能力，能够有效清除自由基，具有较好的改善皮肤纹理即延缓皮肤衰老的效果。
2、功效测试
选择20人作为测试人员，平均年龄为55周岁，多为干燥缺水性肤质。受试人员每天早晚使用实施例6的洗面奶进行洁面，共使用90天，每隔15天用皮肤测试仪测试一次面部皮肤状况。
表2 使用洗面奶90天前后眼周皮肤各指标变化情况
指标 使用前 使用后
油份/％ 12 9
水分/％ 4 7
弹性/％ 35 40
胶原纤维/％ 55 60
色素/％ 30 28
选择20人作为测试人员，平均年龄为55周岁，多为干燥缺水性肤质。受试人员每天早晚洁面后使用实施例11的化妆水，共使用90天，每隔15天用皮肤测试仪测试一次面部皮肤状况。
表3 使用化妆水90天前后眼周皮肤各指标变化情况
指标 使用前 使用后
油份/％ 12 8
水分/％ 4 8
弹性/％ 35 45
胶原纤维/％ 55 65
色素/％ 30 25
选择20人作为测试人员，平均年龄为55周岁，多为干燥缺水性肤质。受试人员每天早晚洁面后使用实施例16的面霜，共使用90天，每隔15天用皮肤测试仪测试一次面部皮肤状况。
表4 使用面霜90天前后眼周皮肤各指标变化情况
指标 使用前 使用后
油份/％ 12 7
水分/％ 4 9
弹性/％ 35 42
胶原纤维/％ 55 62
色素/％ 30 26
20位平均年龄为55周岁的测试人员，使用本发明洗面奶、化妆水、面霜后，面部皮肤各项指标变化情况的平均水平如表2-4中所示。可以看出，连续使用90天后的面部皮肤纹理明显变浅，面部轮廓变得紧致，充分说明本发明的多肽组合物具有良好的抗衰老性能。
本发明多肽组合物制备所得化妆品的用法和用量，可按照同类化妆品的普通用法和用量使用。对于皱纹较重的部位，可适度增加次数和用量。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种抗衰老多肽组合物，其特征在于，以所述多肽组合物的质量份数为100，所述多肽组合物由以下重量份的组分组成：1-10份棕榈酰四肽-7、1-10份棕榈酰三肽-5、1-10份乙酰基四肽-5、5-15份棕榈酰寡肽、5-20份燕麦肽、5-20份野大豆肽、2-15份银耳提取物、0.05-0.5份干细胞分泌因子，以及余量的水。
2.根据权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于，所述燕麦肽的分子量为1000～3000Da。
3.根据权利要求2所述的多肽组合物，其特征在于，所述燕麦肽通过从燕麦麸皮中采用酶法降解提取得到。
4.根据权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于，所述银耳提取物包括银耳多糖，以所述银耳提取物的质量为100％，所述银耳多糖的质量百分含量不低于80％。
5.根据权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于，所述干细胞分泌因子为脐带间充质干细胞的分泌因子。
6.根据权利要求5所述的多肽组合物，其特征在于，所述干细胞分泌因子为0.05-0.1份。
7.根据权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于，所述水为去离子水或纯净水。
8.根据权利要求1所述的多肽组合物，其特征在于，所述野大豆肽通过将纯天然野大豆经过发酵或酶工程处理得到。
9.一种根据权利要求1所述多肽组合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：分别制备A相和B相，所述A相包括将棕榈酰四肽-7、棕榈酰三肽-5、乙酰基四肽-5、棕榈酰寡肽按重量份混合均匀，所述B相包括将所述燕麦肽、所述野大豆肽以及水按重量份混合均匀；将所述A相与所述B相混合，按重量份加入所述银耳提取物和所述干细胞分泌因子，恒温水浴加热搅拌，降至室温后，得到所述多肽组合物。
10.一种根据权利要求1所述的多肽组合物的应用，其特征在于，所述多肽组合物用于制备化妆品，所述化妆品选自洗面奶、眼霜、面霜、面膜、精华液或化妆水中的至少一种。
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